CN110859787B - 一种抗糖化的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种抗糖化的中药组合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种抗糖化的中药组合物及其制备方法和应用。所述抗糖化的中药组合物的制备原料包括葛根、肉桂、柴胡、忍冬藤和丹参。本发明所述的抗糖化的中药组合物以葛根为君药，肉桂为臣药，柴胡和忍冬藤为佐药，丹参为使药，各中药组分配伍合理，协同增效，不仅可以清除自由基，起到抗氧化作用，还可以抑制糖与蛋白质反应过程，由此达到改善因皮肤糖化造成的肌肤老化、暗黄等问题，从而达到淡化细纹和祛黄提亮的护肤效果。

Description

一种抗糖化的中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于化妆品领域，涉及一种中药组合物及其制备方法和应用，尤其涉及一种抗糖化的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
抗糖化是几年来最热的话题之一。“糖化”是指体内中多余的糖分与胶原蛋白产生化学反应，生成AGEs(晚期糖基化终末产物)。该反应使得胶原蛋白发生变质，从而使肌肤失去弹性、暗黄、松弛。其最终生成物AGEs是导致老化以及跟老化有关的健康问题之主要原因。所以皮肤“糖化”也是造成皮肤衰老的原因之一。
衰老是人类生命过程必然规律，也是不可抗拒的自然现象。对于内源性衰老我们无法避免，但对于外源性衰老，可以通过减少、避免外来原因加速皮肤老化。市面上较火的抗糖产品价格昂贵，抗糖效果不理想，其活性成分难以发挥作用。所以开发具有抗糖化，且安全、无刺激化妆品植物添加剂，成为了行业潮流。绿色、天然的植物来源是主要研究方向。基于中医理论按君、臣、佐、使组方原则，同时应用现代提取分离技术，提高活性成分纯度，成为了植物功效原料开发的新潮流。
CN103961276A公开了一种抗糖化化妆品组合物及含其的抗糖化化妆品。所述的抗糖化化妆品组合物包括0.001-15份的抗糖化剂和0.1-15份的抗氧化剂；所述的抗糖化剂包括抗糖化剂A和抗糖化剂B；所述的抗氧化剂包括自由基网络清除剂和抗氧化剂A。所述糖化剂A包括葛根素，所述的抗氧化剂A包括柴胡提取物。但存在着抗糖化效果不理想，抗糖化活性成分难以发挥其作用的缺陷。
CN109568161A公开了一种具有抗糖化与抗皮肤衰老的组合物制备方法，该具有抗糖化与抗皮肤衰老的组合物包括A相和B相；其中A相包括：小核菌胶、1.3丁二醇、甘油、水；B相包括：苹果果实细胞培养物提取物、甘油葡糖甘、水、烟酰胺、甘油、辛甘醇、黄原胶、丹参提取物。该组合物虽然有一定的抗糖化效果，但是长期使用后淡化细纹和祛黄提亮的护肤效果不再明显。
因此，开发一种能够抑制皮肤糖化，并改善肌肤老化暗黄的中药组合物是目前研究的重点。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种抗糖化的中药组合物及其制备方法和应用。所述中药组合物各中药组分各中药组分配伍合理，协同增效，不仅可以清除自由基，起到抗氧化和抗衰老的功效，还可以抑制糖与蛋白质反应过程，由此达到改善因皮肤糖化造成的肌肤老化、暗黄等问题，从而达到淡化细纹和祛黄提亮的护肤效果。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种抗糖化的中药组合物，所述中药组合物的制备原料包括葛根、肉桂、柴胡、忍冬藤和丹参。
本发明各中药的性味和功效如下：
葛根：性凉，味甘、辛。具有生津、通经活络功效，能够促进人体新陈代谢，清除超氧离子和羟基自由基的作用。
肉桂：味辛、甘。具有引火归元、温通经脉功效。可以抑菌、抗氧化、镇静、解热作用。
柴胡：味苦、辛，微寒。具有疏散退热、升举阳气功效，能解体热、抗炎、促进免疫功能等作用。
忍冬藤：味甘，寒。具有清热解毒，疏风通络功效，可抑菌、抗炎，提高免疫机能等作用。
丹参：味苦，微寒。具有活血化瘀、痛经止痛、凉血消痈功效，能抗氧化、抗菌、消炎等。
本发明的该中药组合物是根据君臣佐使的原则进行用药。中医学认为脏腑功能和精气神的作用对衰老有着重要的意义，同时强调阴阳协调的作用。组方中以葛根为君药，归脾、胃经，具有解肌退热、生津、通经活络功效；臣药为肉桂，归胃、脾、心、肝经，具有补火助阳、引火归元、温通经脉功效，可辅助君药达到靶点，又能使机体阴阳协调；佐药为柴胡和忍冬藤，具有清热退热、疏风解郁、升举阳气、止气下澼功效，可配合君、臣药以加强治疗作用。使药为丹参，其具有活血化瘀、通经、凉血消痈功效，起到了调和方中诸药的作用。
本发明以中医理论为基础，中药配伍合理，适于脏腑虚衰、精气衰竭、阴阳失调造成的肌肤失去弹性、暗黄、松弛等问题。所述的中药组合物以葛根为君药，肉桂为臣药，柴胡和忍冬藤为佐药，丹参为使药，各中药组分之间相互配合、协同增效，可以抑制糖与蛋白质反应过程，由此达到抑制或改善因皮肤糖化造成的肌肤老化、暗黄等问题，从而使皮肤光泽、平滑、淡化细纹、祛黄提亮护肤效果。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根1-40％、肉桂1-40％、柴胡1-40％、忍冬藤1-40％和丹参1-40％。
本发明中，所述葛根的重量百分比为1-40％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％、40％。
本发明中，所述肉桂的重量百分比为1-40％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％、40％。
本发明中，所述柴胡的重量百分比为1-40％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％、40％。
本发明中，所述忍冬藤的重量百分比为1-40％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％、40％。
本发明中，所述丹参的重量百分比为1-40％，例如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％、40％。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根10-40％、肉桂10-30％、柴胡10-30％、忍冬藤5-20％、丹参5-20％。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根20-40％、肉桂15-30％、柴胡15-30％、忍冬藤5-20％、丹参5-20％。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根30％、肉桂20％、柴胡20％、忍冬藤20％和丹参10％。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根20％、肉桂20％、柴胡20％、忍冬藤20％和丹参20％。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根30％、肉桂30％、柴胡30％、忍冬藤5％和丹参5％。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根40％、肉桂15％、柴胡15％、忍冬藤15％和丹参15％。
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述抗糖化的中药组合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入溶剂进行提取，得到提取液；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤，滤液浓缩，得到所述中药组合物。
优选地，步骤(1)所述的混合粉末的目数为100-200目，例如可以是100目、110目、120目、130目、140目、150目、160目、170目、180目、190目、200目。
优选地，步骤(2)所述混合粉末与溶剂的质量比为1:(1-30)，例如可以是1:1、1:2、1:4、1:6、1:8、1:10、1:12、1:14、1:16、1:18、1:20、1:22、1:24、1:26、1:28、1:30。
优选地，步骤(2)所述溶剂包括水和/或乙醇。
优选地，步骤(2)所述提取的温度为40-85℃，例如可以是40℃、42℃、44℃、46℃、48℃、50℃、52℃、54℃、56℃、58℃、60℃、62℃、64℃、66℃、68℃、70℃、72℃、74℃、76℃、78℃、80℃、81℃、83℃、85℃。
优选地，步骤(2)所述提取的次数为1-3次，例如可以是1次、2次、3次。
优选地，步骤(2)每次提取的时间为1-3h，例如可以是1h、1.5h、2h、2.5h、3h。
优选地，步骤(3)后还包括步骤(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物进行洗脱和二次浓缩，得到二次浓缩液，再向二次浓缩液中加入溶剂溶解、过滤。
优选地，步骤(4)所述洗脱步骤具体为：将浓缩液上大孔树脂进行吸附，再用乙醇洗脱，收集洗脱液。
优选地，所述大孔树脂型号为D101或AB-8中任意的一种。
优选地，所述乙醇的体积比浓度为30-95％，例如可以是30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％。
优选地，步骤(4)所述二次浓缩为减压浓缩；
优选地，步骤(4)所述溶剂为丁二醇。
优选地，所述丁二醇的体积比浓度为30-50％，例如可以是30％、32％、34％、36％、38％、40％、42％、44％、46％、48％、50％。
优选地，步骤(4)所述溶剂与二次浓缩液的质量比为(0.5-10):1，例如可以是0.5:1、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1。
优选地，所述制备方法具体包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到100-200目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入溶剂在40-85℃下提取1-3次，每次提取1-3h，得到提取液，所述混合粉末和溶剂的质量比为1:(1-30)；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤，滤液浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上大孔树脂进行吸附，再用30-95％的乙醇洗脱，收集洗脱液，再进行二次浓缩，得到二次浓缩液；最后加入溶剂溶解、过滤，所述溶剂与二次浓缩液的质量比为(0.5-10):1。
第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的抗糖化的中药组合物在制备化妆品中的应用。
通过将本发明所述的中药组合物作为添加剂用于化妆品中，其能够起到有效抑制或改善皮肤糖化造成的肌肤失去弹性、暗黄、松弛等衰老问题。
第四方面，本发明提供一种化妆品，所述化妆品包括如第一方面所述抗糖化的中药组合物。
优选地，所述抗糖化的中药组合物的添加量为化妆品总重量的0.05-20％，例如0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％、5％、8％、10％、12％、15％、18％或20％，优选用量为0.05-10％。
优选地，所述化妆品包括面膜、乳液、护肤霜、柔肤水、精华液、补水霜、或化妆水。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明所述抗糖化中药组合物以葛根为君药，肉桂为臣药，柴胡和忍冬藤为佐药，丹参为使药，各中药组分配伍合理，协同增效，不仅可以清除自由基，起到抗氧化作用，还可以抑制糖与蛋白质反应过程，由此达到改善因皮肤糖化造成的肌肤老化、暗黄等问题，从而达到淡化细纹和祛黄提亮的护肤效果。
(2)本发明所述抗糖化中药组合物各组分纯天然、无刺激，且安全无毒副作用，本发明所述抗糖化的中药组合物对DPPH自由基清除率达到62％以上，对羟自由基清除率达到69.5％以上，对非酶糖基化的抑制率IE达到33％以上。
附图说明
图1为实施例1-8和对比例1-13制备的中药组合物对DPPH自由基的清除率柱状图。
图2为实施例1-8和对比例1-13制备的中药组合物对羟自由基的清除率的柱状图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供一种抗糖化的中药组合物，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根30％、肉桂20％、柴胡20％、忍冬藤20％和丹参10％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将葛根30g、肉桂20g、柴胡20g、忍冬藤20g、丹参10g粉碎，过筛后混合均匀得到100目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入体积分数为50％的乙醇溶液80℃下提取3次，每次2h，得到提取液，所述混合粉末和乙醇溶液的质量比为1:15；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤，滤液浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上AB-8型大孔树脂吸附，再用85％的乙醇洗脱3次，收集洗脱液，再进行减压浓缩，至所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述的中药组合物各组分原料的总质量的质量比为1:1；最后加入丁二醇溶解，所述丁二醇与二次浓缩液的质量比为1:1，过滤。
实施例2
本实施例提供一种抗糖化的中药组合物，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根20％、肉桂20％、柴胡20％、忍冬藤20％和丹参20％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将葛根20g、肉桂20g、柴胡20g、忍冬藤20g、丹参20g粉碎，过筛后混合均匀得到150目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入体积分数为70％的乙醇溶液75℃下提取3次，每次1h，得到提取液，所述混合粉末和乙醇溶液的质量比为1:8；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤，滤液浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上D101型大孔树脂吸附，再用75％的乙醇洗脱5次，收集洗脱液，再进行减压浓缩，至所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述的中药组合物各组分原料的总质量的质量比为1:1；最后加入丁二醇溶解，所述丁二醇与二次浓缩液的质量比为1:1，过滤。
实施例3
本实施例提供一种抗糖化的中药组合物，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根30％、肉桂30％、柴胡30％、忍冬藤5％和丹参5％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将葛根30g、肉桂30g、柴胡30g、忍冬藤5g、丹参5g粉碎，过筛后混合均匀得到150目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入纯水，在85℃下提取3次，每次1.5h，得到提取液，所述混合粉末和纯水的质量比为1:20；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤，滤液浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上AB-8型大孔树脂吸附，再用65％的乙醇洗脱4次，收集洗脱液，再进行减压浓缩，至所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述的中药组合物各组分原料的总质量的质量比为1:1；最后加入丁二醇溶解，所述丁二醇与二次浓缩液的质量比为1:1，过滤。
实施例4
本实施例提供一种抗糖化的中药组合物，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根40％、肉桂15％、柴胡15％、忍冬藤15％和丹参15％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将葛根40g、肉桂15g、柴胡15g、忍冬藤15g、丹参15g粉碎，过筛后混合均匀得到200目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入体积分数为40％的乙醇溶液80℃下提取3次，每次1.5h，得到提取液，所述混合粉末和乙醇溶液的质量比为1:30；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤，滤液浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上AB-8型大孔树脂吸附，再用55％的乙醇洗脱3次，收集洗脱液，再进行减压浓缩，至所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述的中药组合物各组分原料的总质量的质量比为1:1；最后加入丁二醇溶解，所述丁二醇与二次浓缩液的质量比为1:1，过滤。
实施例5
同实施例1，区别在于：所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根15％、肉桂30％、柴胡30％、忍冬藤15％、丹参10％，所述中药组合物制备方法同实施例1。
实施例6
同实施例1，区别在于：所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根30％、肉桂10％、柴胡30％、忍冬藤15％、丹参15％，所述中药组合物制备方法同实施例1。
实施例7
同实施例1，区别在于：所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根30％、肉桂30％、柴胡5％、忍冬藤20％、丹参15％，所述中药组合物制备方法同实施例1。
实施例8
同实施例1，区别在于：所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根20％、肉桂20％、柴胡15％、忍冬藤15％、丹参30％，所述中药组合物制备方法同实施例1。
对比例1
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料仅为100g葛根，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例2
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料仅为100g肉桂，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例3
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料仅为100g柴胡，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例4
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料仅为100g忍冬藤，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例5
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料仅为100g丹参，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例6
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料为50g葛根和50g肉桂，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例7
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料为40g葛根、30g肉桂、30g柴胡，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例8
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料为40g葛根、30g肉桂、30g忍冬藤，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例9
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料为40g葛根、30g肉桂、20g忍冬藤和10g丹参，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例10
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料为30g肉桂、30g柴胡、30g忍冬藤、10g丹参，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例11
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料为葛根35g、柴胡25g、忍冬藤25g、丹参15g，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例12
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料为葛根35g、肉桂25g、柴胡25g、丹参15g，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
对比例13
同实施例1，区别仅在于：所述中药组合物的制备原料为葛根32.5g、肉桂22.5g、柴胡22.5g、忍冬藤22.5g，不含其它中药组份，其它制备方法相同。
试验例1
清除DPPH自由基能力的研究
清除DPPH自由基能力在一定程度上反应物质的抗氧化能力。自由基清除率越大，表明抗氧化能力越强。因此，可以通过中药组合物对清除DPPH自由基能力的研究来判断其抗氧化效果。
向试管中加入质量浓度为47.7mg/L的DPPH测试液2mL和一定量的实施例1-8制得的中药组合物和对比例1-13制备的中药组合物，总体积用无水乙醇补充至5mL，摇匀，避光反应一段时间后，用1cm比色皿在517nm波长处测吸光度，记为As；向试管中加入DPPH测试液2mL和无水乙醇3mL，测得的吸光度记为Ao；向试管中加入无水乙醇2mL和相应体积的中药组合物，总体积用无水乙醇补充至5mL，测得的吸光度记为Ar。DPPH自由基清除率(Y)的计算公式为：Y(％)＝1－(As－Ar)/A0×100％，具体测试结果如表1和图1所示：
表1
Figure GDA0003397655230000131
Figure GDA0003397655230000141
由上述测试结果表明，本发明实施例1-8制备的所述抗糖化的中药组合物对DPPH自由基均具有良好的抑制作用，DPPH自由基清除率达到62％以上，其中实施例1-4为本发明最优技术方案，DPPH自由基清除率高达93％以上。这充分说明本发明所所述的中药组合物以葛根为君药，肉桂为臣药，柴胡和忍冬藤为佐药，丹参为使药，各中药组分之间相互配合、协同增效，对于DPPH自由基具有很好地清除作用，抗氧化能力强。
试验例2
羟自由基(·OH)抑制能力研究
羟自由基(·OH)是人体内重要的氧自由基之一，是最活泼，毒性最大的自由基，可对活细胞中任何分子反应造成损伤。故可以通过对羟自由基(·OH)活性抑制，减少其对人机体损伤。其抑制率越大，表明抗氧化能力越强。
取1.0mL浓度为1.865mmol/L邻二氮菲的无水乙醇溶液于带塞试管中，分别加入浓度为0.2M的pH 7.4磷酸盐缓冲液2mL和1mL不同浓度的样品，充分混匀后加入1.0mL浓度为1.865mmol/L的FeSO4·7H2O溶液，再次混匀后加入1.0mL 0.03％(V/V)的H2O2，于37℃恒温水浴，60min后，在536nm下分别测量各组混合溶液的吸光度值得AS，以蒸馏水代替样品作为空白组测吸光度值得Ab，以蒸馏水替代H2O2作为损伤组，测其吸光度值An，抗氧化剂的羟自由基清除率按以下公式计算：羟自由基清除率(％)＝[(AS-An)/(Ab-An)]×100％。具体测试结果如表2和图2所示：
表2
Figure GDA0003397655230000151
Figure GDA0003397655230000161
由上述测试结果表明，本发明实施例1-8制备的抗糖化的中药组合物对羟自由基均具有良好的抑制作用，羟自由基清除率达到69.5％以上，其中实施例1-4为本发明最优技术方案，羟自由基清除率高达99％以上。这充分说明本发明所所述的中药组合物以葛根为君药，肉桂为臣药，柴胡和忍冬藤为佐药，丹参为使药，各中药组分之间相互配合、协同增效，对于羟自由基具有很好地清除作用，抗氧化能力强。
试验例3
抑制非酶糖基化反应研究
酶糖基化是一系列复杂的非酶促反应，蛋白质和葡萄糖在体内发生非酶促反应，最终形成皮肤糖化的“凶手”AGEs。通过对非酶糖基化反应研究，可反应出中药组合物对抗糖化的能力。在无菌条件下，向无菌细胞培养瓶中加人用0.2μm除菌膜除菌后的20.00g/L牛血清白蛋白溶液和0.50mol/L葡萄糖溶液各5.00mL，加人含1％NaN3的0.20mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲液10.00mL，建立完整糖基化体系对照组a；同时设立不加中药组合物不加葡萄糖溶液的对照组b；加中药组合物不含蛋白的对照组c；加中药组合物不加葡萄糖溶液的对照组d。设置溶液中中药组合物实施例1-8及对比例1-13的干预组，37℃恒温培养28天。分别于0、2、4、8、12、16、20、24、26、28天进行试验。
取出0.5mL培养液，稀释至10mL，测定糖基化终产物在激发波长370nm发射波长440nm处的荧光值F，计算对非酶糖基化的抑制率IE。非酶糖基化的抑制率IE的计算公式：IE(％)＝[1-(药物F-对照cF-对照dF)/(对照aF-对照bF)]×100％。其中，药物F为待测样的荧光值，对照cF为对照组c的荧光值，对照dF为对照组d的荧光值，对照aF为对照组a的荧光值，对照bF为对照组b的荧光值。糖基化产物孵育结束后，在370nm/440nm出检测荧光强度，并计算其抑制率，具体测试结果如表3所示：
表3
Figure GDA0003397655230000171
Figure GDA0003397655230000181
由上述测试结果表明，本发明实施例1-8制备的中药组合物对抗糖化的能力强，能够很好地抑制非酶糖基化，对非酶糖基化的抑制率IE达到33％以上，其中实施例1-4为本发明最优技术方案，对非酶糖基化的抑制率IE高达50％以上。这充分说明本发明所所述的中药组合物以葛根为君药，肉桂为臣药，柴胡和忍冬藤为佐药，丹参为使药，各中药组分之间相互配合、协同增效，对于羟自由基具有很好地清除作用，抗氧化能力强。
试验例4
红细胞溶血实验
红细胞溶血实验是兔眼刺激性实验(Draize test)替代方法之一，基本原理是通过测定血红蛋白溶出量及变性程度来评价化学品对眼组织细胞的损伤。国际上主要将RBC实验用于评价化妆品及原料等化学品的眼刺激性研究。
将实施例1-8制得的中药组合物以及对比例1-13制备的中药组合物进行红细胞溶血实验，本实验依照欧洲替代方法验证中心(ECVAM)的RBC实验测试方法及分级标准。[ECVAM.ECVAM DB-ALM:INVITOX Protoco,Red blood cells test system.INVITOXNo.37.Ispra.Italy:ECVAM,1994.]。具体测试方法如表4所示：
表4
L/D 分级
﹥100 无刺激性
10﹤L/D≤100 微刺激性
1﹤L/D≤10 轻度刺激性
0.1﹤L/D≤1 中度刺激性
L/D≤0.1 重度刺激性
实施例1-8所制备的中药组合物以及对比例1-13制得的中药组合物的红细胞溶血实验结果如表5所示，其中HD50为50％红细胞发生溶血时的样品浓度，DI为蛋白质变性指数，L/D为HD50与DI的比值。
表5
Figure GDA0003397655230000201
Figure GDA0003397655230000211
由表5的红细胞溶血实验结果可知，本发明实施例1-8所制备的中药组合物所得L/D均大于100，刺激性分级为无刺激，说明本发明所述的中药组合物均具有温和无刺激的特点，且实施例1-8所制备的中药组合物的50％红细胞发生溶血时的样品浓度HD50远远大于对比例1-12制得的中药提取物的HD50，同时蛋白质变性指数DI亦明显小于对比例1-12制得的中药提取物，说明本发明所述的五种中药组合配伍科学合理，协同增效后能够显著降低各中药的毒副作用和刺激性，以达到减弱细胞溶血程度和蛋白质变性的目的。
应用实施例1
本应用实施例提供一种含有实施例1制备的中药组合物的精华液配方，由表6所示质量分数的组分制成(即表中数字代表质量分数，例如5代表5％)：
表6
Figure GDA0003397655230000212
精华液的制备方法：
(1)称取少量去离子水，将卡波姆均匀洒在水表面，待浸泡完全，备用；
(2)向剩余水中缓慢加入由步骤(1)得到的完全溶解的丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物及其它物质，搅拌至完全溶解；
(3)将步骤(2)得到的混合物完全溶解后进行真空脱气处理。
应用实施例2
本应用实施例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为实施例2制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用实施例3
本应用实施例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为实施例3制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用实施例4
本应用实施例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为实施例4制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用实施例5
本应用实施例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为实施例5制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用实施例6
本应用实施例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为实施例6制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用实施例7
本应用实施例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为实施例7制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用实施例8
本应用实施例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为实施例8制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例1
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例1制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例2
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例2制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例3
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例3制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例4
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例制4备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例5
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例5制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例6
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例6制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例7
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例7制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例8
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例8制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例9
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例9制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例10
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例10制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例11
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例11制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例12
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例12制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
应用对比例13
本应用对比例提供一种精华液配方，与应用实施例1的区别仅在于：将B组分中的实施例1制备的中药组合物替换为对比例13制备的中药组合物，其他组分含量及制备方法同应用实施例1。
试验例5
人体试用评价实验
取应用中实施例1-8制备的精华液与对比例1-13制备的精华液，分别进行人体试用评价，选取220名肤色深的志愿者，随机分成22组，分别使用本实施例1-8制备的精华液，本对比例1-13制备的精华液。使用方法为每天早晚各涂抹一次，持续使用28天，根据感官评价填写试用评价表。使用7天、14天、28天各统计一次。志愿者在使用过程中对样品进行肤感、抗糖效果评价，其中最高分为5，表示效果显著，最低分为1表示没有效果。具体测试结果如表7所示：
表7
Figure GDA0003397655230000251
Figure GDA0003397655230000261
由上述评价结果可知，人体试用评价的结果显示应用实施例1-8制备的中药组合物精华液具有较好的抗糖效果。说明添加本发明的中药组合物的精华液具有提亮肤色、祛黄等抗糖功效，能使粗糙晦暗的肌肤恢复弹性、光泽的健康状态。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明所述的抗糖化的中药组合物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (27)

1.一种抗糖化的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根1-40％、肉桂1-40％、柴胡1-40％、忍冬藤1-40％和丹参1-40％；
所述抗糖化的中药组合物由包括如下步骤的制备方法制备得到：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入溶剂进行提取，得到提取液，所述溶剂包括水和/或乙醇；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤，滤液浓缩，得到所述中药组合物。
2.根据权利要求1所述的抗糖化的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根10-40％、肉桂10-30％、柴胡10-30％、忍冬藤5-20％、丹参5-20％。
3.根据权利要求2所述的抗糖化的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根20-40％、肉桂15-30％、柴胡15-30％、忍冬藤5-20％、丹参5-20％。
4.根据权利要求3所述抗糖化的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根30％、肉桂20％、柴胡20％、忍冬藤20％和丹参10％。
5.根据权利要求3所述的抗糖化的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根20％、肉桂20％、柴胡20％、忍冬藤20％和丹参20％。
6.根据权利要求3所述的抗糖化的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根30％、肉桂30％、柴胡30％、忍冬藤5％和丹参5％。
7.根据权利要求3所述的抗糖化的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：葛根40％、肉桂15％、柴胡15％、忍冬藤15％和丹参15％。
8.根据权利要求1-7中任一项所述抗糖化的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入溶剂进行提取，得到提取液；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤，滤液浓缩，得到所述中药组合物。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的混合粉末的目数为100-200目。
10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述混合粉末与溶剂的质量比为1:(1-30)。
11.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述提取的温度为40-85℃。
12.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述提取的次数为1-3次。
13.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)每次提取的时间为1-3h。
14.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)后还包括步骤(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物进行洗脱和二次浓缩，得到二次浓缩液，再向二次浓缩液中加入溶剂溶解、过滤。
15.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述洗脱步骤具体为：将浓缩液上大孔树脂进行吸附，再用乙醇洗脱，收集洗脱液。
16.根据权利要求15所述的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂型号为D101或AB-8中任意的一种。
17.根据权利要求15所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇的体积比浓度为30-95％。
18.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述二次浓缩为减压浓缩。
19.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述溶剂为丁二醇。
20.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于，所述丁二醇的体积比浓度为30-50％。
21.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述溶剂与二次浓缩液的质量比为(0.5-10):1。
22.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到100-200目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入溶剂在40-85℃下提取1-3次，每次提取1-3h，得到提取液，所述混合粉末和溶剂的质量比为1:(1-30)；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤，滤液浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上大孔树脂水洗，再用30-95％的乙醇洗脱，收集洗脱液，再进行二次浓缩，得到二次浓缩液；最后加入溶剂溶解、过滤，所述溶剂与二次浓缩液的质量比为(0.5-10):1。
23.一种如权利要求1-7中任一项所述的抗糖化的中药组合物在制备化妆品中的应用。
24.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品包括如权利要求1-7中任一项所述的抗糖化的中药组合物。
25.根据权利要求24所述的化妆品，其特征在于，所述抗糖化的中药组合物的添加量为化妆品总重量的0.05-20％。
26.根据权利要求25所述的化妆品，其特征在于，所述抗糖化的中药组合物的添加量为化妆品总重量的0.05-10％。
27.根据权利要求24所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品包括面膜、乳液、护肤霜、精华液或化妆水。
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