CN110790805A - 一种从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了一种从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的方法，此方法包括了皂化、络合析晶、萃取酯化、乙酰化等步骤，达到了一次性分离猪胆膏中猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸的目的。本申请得到的三种产物纯度高，试剂均为廉价易得，且大部分溶剂均可以回收套用，产生的废水较少。
Description
技术领域
本发明属于分离提纯领域，具体涉及一种从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸方法。
背景技术
鹅去氧胆酸（chenodeoxycholic acid，CDCA），化学名为3α,7α-二羟基-5β-胆烷酸，CAS号：474-25-9，分子式为C24H40O4，分子量为392.57，结构式如下所示：
鹅去氧胆酸是一种主要由胆汁中提取而来的物质，其主要用于降低胆汁内胆固醇的饱和度，临床上主要用于胆结石治疗，同时其也是目前合成熊去氧胆酸(UDCA)的主要原料，1972年由英国正式开辟了溶解胆固醇类结石的治疗，鹅去氧胆酸作为第一个纠正 饱和胆汁和溶解胆石的药物被应用。现在已知在很多动物和人的胆 汁、肝、肾等组织中都含有鹅去氧胆酸。鹅去氧胆酸还可作为合成熊去氧胆酸（3α,7β-二羟基-5β-胆烷酸）和其他甾体化合物的中间体。
鹅去氧胆酸是鸡、鸭与鹅等家禽胆汁的主要成份，可以直接从家禽胆汁中提取得到。但受技术限制，目前市场上的鹅去氧胆酸产品基本是从鸡胆汁中提取得到的，但是，鸡胆原料供应有限，且价格较高，因此以鸡胆膏为原料提取鹅去氧胆酸利润较低，且产量有限；鹅的饲养数量较少，难以应用其胆汁作提取鹅去氧胆酸的原料。鸭的饲养量巨大，但与鸡胆汁的组成成分相比，鸭胆汁的成分较复杂，不能应用从鸡胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法到鸭胆汁上去提取鹅去氧胆酸。猪胆在我国则有丰富的供应，且价格便宜，在提取胆红素后的下脚料猪胆膏中鹅去氧胆酸含量可达20%以上。
中国专利CN201710153404.8公开了一种鹅去氧胆酸的制备方法。此法依次包括以下步骤：猪去氧胆酸的精制，猪去氧胆酸甲酯化物的制备，6位羟基的消去和鹅去氧胆酸的制备。本发明的鹅去氧胆酸的制备方法步骤简单，使用的原料来源广泛、充足。并且利用本发明制备得到鹅去氧胆酸收率高。但是其发明只是针对已有的猪去氧胆酸进行进一步精制和合成，与我方技术方案完全不同。
中国专利CN201710753687.X公开了一种联合提取猪去氧胆酸与鹅去氧胆酸的方法，其涉及以提取胆红素后的猪胆膏为原料生产猪去氧胆酸与鹅去氧胆酸方法。用丙酮提取猪胆膏中猪去氧胆酸并结晶，结晶母液经浓缩、制备钙盐、酸化等步骤得到粗品鹅去氧胆酸，再应用重结晶方法纯化，得到高纯度鹅去氧胆酸产品。
猪胆膏是猪产品加工企业的废弃物，其数量巨大，原料容易获得，其中的主要有机成分是猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、猪胆酸。对于从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的技术来说，主要难点在于鹅去氧胆酸（CDCA）与猪胆酸（HCA）及猪去氧胆酸（HDCA）的分离，猪去氧胆酸（HDCA）和猪胆酸的结构如下式所示：
从结构上对比可知，猪去氧胆酸（HDCA）与目标提取物鹅去氧胆酸（CDCA）的结构区别只有一个羟基取代的位置不同，而猪胆酸（HCA）则比鹅去氧胆酸（CDCA）多了一个羟基，结构上的相似使得将三种物质的分离开来较为困难。
现有提取方法主要是钡盐法和钙盐沉淀法，结晶提取法、离子交换树脂法，钡盐会带来严重的环境问题，用钙盐时则会使用极大量的水，极大的浪费了水资源，结晶提取法需要使用大量有机溶剂，母液需要反复分离结晶，生产周期长，不能大规模生产，这些方法提取收率低，得到的产品纯度一般低于 90 %，而且未见有工艺能一次性将猪胆汁中的几个成分分离。
因此，在现今技术存在上述问题的情况下，研发出一种能够从猪胆膏中一次性有效提取猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸的方法并有效果好、效率高、成本低、纯度高等优点的提取技术非常有意义。
发明内容
本申请的主要目的是提供一种从猪胆膏中一次性提取猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸的方法。
我方技术方案是基于在猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的目的，进一步优化改进现有技术而成的。为了实现上述目的及解决现有技术中存在的问题，本申请采用了以下技术方案：
一种从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的方法，其步骤可以归纳为皂化、络合析晶、萃取酯化、乙酰化、硅胶过滤、回流水解等步骤，其中硅胶过滤步骤的过滤方式为在过滤漏斗中铺硅胶进行过滤。
优选的，硅胶的厚度为2～5cm或8～12cm，分别应用于小试和中试。
优选的，还包括了母液回收的步骤，母液回收：结晶母液浓缩除去烷类溶剂后套用至下一批甲酯化之前的调酸萃取步骤。
我方实验人员经过多次实验，找出了从猪胆膏中一次性提取猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸的较优实验方案，如下：
一种从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的方法，包括以下步骤：
（1）皂化：将猪胆膏中加入氢氧化钠、水，升温回流进行皂化，原始的猪胆膏中含有大量的氨基酸，进行皂化的目的是将猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸三种物质从猪胆膏中分离出来。
（2）络合析晶：将皂化后的反应液冷却至30～50℃，加入酸调节pH，加入无机镁盐成盐析晶，搅拌4小时，后过滤得到滤饼和滤液，猪去氧胆酸镁盐加水加酸解离即可得到猪去氧胆酸粗品。这里利用了鹅去氧胆酸镁盐和猪去氧胆酸镁盐在水中的溶解度差异使鹅去氧胆酸镁盐和猪去氧胆酸镁盐进行了分离，猪去氧胆酸镁盐为固态，其他两种镁盐为液态，可简单过滤分离，加入的酸选自盐酸、硫酸、磷酸、硝酸当中的一种或多种的混合，优选盐酸。
（3）萃取酯化：将步骤（2）中得到的滤液滴加盐酸调节pH，再加入乙酸乙酯，调酸性萃取，萃取液进行浓缩，至反应体系变为油状物，加入甲醇、浓硫酸进行回流搅拌，进行酯化，酯化完成后加入固体碳酸氢钠调节pH，过滤得到胆汁酸甲酯甲醇溶液，进行浓缩得到油状物，经过萃取将鹅去氧胆酸和猪胆酸从水相中萃取到有机相中，进一步消去了杂质，并酯化将猪胆酸和鹅去氧胆酸中的羧基变成了甲酯基，改变了二者的极性。
（4）乙酰化：向步骤（3）中得到的油状物中加入乙酰化试剂进行升温回流反应，反应结束后冷却至室温并过滤，滤液浓缩得到油状物，此步骤将猪胆酸和鹅去氧胆酸中的羟基乙酰化，进一步改变了二者的极性。
（5）硅胶过滤：向步骤（4）中得到的油状物中加入烷类溶剂，加热将步骤（4）中得到的油状物完全溶解，再加入硅胶粉，后降温，在过滤漏斗中铺一层硅胶进行过滤，再用烷类溶剂冲洗得到滤液，滤饼即为三乙酰猪胆酸甲酯，将滤饼回收的三乙酰猪胆酸甲酯进行水解，即得到猪胆酸，这里利用了三乙酰猪胆酸甲酯和二乙酰鹅去氧胆酸甲酯的极性差异，利用了硅胶吸附的差异，极性较大的三乙酰猪胆酸甲酯被吸附住，二乙酰鹅去氧胆酸则被洗脱下来。
（6）回流水解：将步骤（5）中得到的滤液浓缩回收溶剂，再加入氢氧化钠水溶液进行升温回流水解，再降温调酸性，加入乙酸乙酯萃取，继续加酸调节pH，后升温搅拌待静置分层，弃去水层，再降温析晶，滴加烷类溶剂逼出晶体，得到鹅去氧胆酸。
（7）母液回收：结晶母液浓缩除去烷类溶剂后套用至下一批的镁盐滤液，进行调酸萃取步骤。
优选的，步骤（1）中升温回流进行皂化的温度为95～105℃，皂化持续时间为8～15小时。
优选的，步骤（2）中所述的无机镁盐选自氯化镁、硫酸镁当中的一种或多种的混合。
优选的，步骤（2）中搅拌的温度为35～50℃。
优选的，步骤（2）中滤饼加酸调节pH至2～3。
优选的，步骤（2）中加入酸调节pH至pH为9～11，步骤（3）中加入步骤（3）中滴加盐酸调节pH至6～7，加入固体碳酸氢钠调节pH至7～8。
优选的，步骤（4）中的乙酰化试剂选自乙酸酐、乙酸钠组合或者乙酰氯、三乙胺组合当中的一种，升温达到的温度为120～140℃，回流时间为3～4小时。
优选的，步骤（5）中硅胶的规格选自100～200目、200～300目、300～400目、400～500目当中的一种或多种的混合。硅胶的厚度根据物料的重量而定，一般来说，在实验室小试为2～5cm厚的硅胶，在工厂进行中试为8～12cm厚硅胶。
优选的，步骤（5）中加热将油状物溶解的温度为60～70℃。
优选的，步骤（5）中加入硅胶粉后降温的温度为20～40℃。
优选的，步骤（5）中加入硅胶粉的质量为猪胆膏质量的0.1～1倍。
优选的，步骤（5）中加入烷类溶剂溶解油状物的加热温度为40～70℃。
优选的，步骤（6）中升温回流的温度为80～120℃，回流时间为8～15小试。
优选的，步骤（6）中降温的温度为40～50℃，调酸性的pH为7～8，继续加酸调节pH至2～4，升温搅拌的温度为40～60℃，降温析晶的温度为-15～5℃。
优选的，步骤（5）和步骤（6）中所述的烷类溶剂为己烷、庚烷、二氯甲烷、环己烷、石油醚当中的一种或多种的混合。
本申请还包括了通过上述方法制备得到的猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸。
本申请也包括了此方法在鹅去氧胆酸提纯当中的应用。
对于从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的技术来说，主要难点在于猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸三种物质的分离。对于猪去氧胆酸来说，它是目标产物鹅去氧胆酸的同分异构体，结构上和化学性质都很相似，我方通过加入了无机镁盐，利用了鹅去氧胆酸镁盐和猪去氧胆酸镁盐在水中的溶解度差异使鹅去氧胆酸镁盐和猪去氧胆酸镁盐成功分离，解决了这个问题。猪胆酸的结构和鹅去氧胆酸也极为类似，我方通过实验惊奇的发现，猪胆酸的甲酯乙酰化产物三乙酰猪胆酸甲酯和鹅去氧胆酸的甲酯乙酰化产物二乙酰鹅去氧胆酸甲酯在通过硅胶过滤时能很好的进行分离，极性较大的三乙酰猪胆酸甲酯可以被硅胶所吸附，极性较小的二乙酰鹅去氧胆酸甲酯则被洗脱出来，从而达成分离。再将被硅胶吸附的三乙酰猪胆酸甲酯进行水解，可以得到猪胆酸。剩余的滤液为二乙酰鹅去氧胆酸甲酯，通过回流水解，萃取，降温析晶可得到鹅去氧胆酸。从而使得整个方案可以一次性的分离提取出猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸三种物质，既有效得到了目标产物鹅去氧胆酸，又可以将分离出的猪胆酸和猪去氧胆酸另做他用，不造成物料的浪费，且通过硅胶分离效果极佳。
我方的提取方法还解决了鹅去氧胆酸在过去的生产过程中的许多技术难题。比如在萃取酯化的步骤中，我方将鹅去氧胆酸和猪胆酸的羧基进行了修饰变成了甲基，解决了鹅去氧胆酸和猪胆酸较难被溶解的问题。还比如在鹅去氧胆酸的实际生产过程中，步骤（5）中油状物的析出是一个影响实验结果的问题，在过往的生产过程中，如果直接将步骤（5）中的油状物用烷类溶剂溶解加热后直接降温，在这个过程中，非常容易重新析出油状物，进而使得鹅去氧胆酸的物料有损失并影响了后续的硅胶过滤。我方从而改进了技术方案，加入了硅胶粉，使得在降温的过程中油状物不会析出，解决了降温过程中油状物容易析出的问题。我方步骤中的萃取酯化和乙酰化都是对要分离的产物进行基团的修饰，改变了相关的极性和理化性质，从而方便最后的硅胶过滤步骤。
由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：
1. 本申请利用三乙酰猪胆酸甲酯和二乙酰鹅去氧胆酸甲酯在硅胶中的吸附程度差异而实现了这两种组分的分离，分离效果非常好，得到的鹅去氧胆酸粗品中猪胆酸含量低于5%，通过精制后低于1%。
2. 本申请利用鹅去氧胆酸镁盐和猪去氧胆酸镁盐在水中的溶解度差异使鹅去氧胆酸镁盐和猪去氧胆酸镁盐进行了分离，分离后猪去氧胆酸含量降低至3%以下，通过精制后低于1%。
3. 本申请在提取鹅去氧胆酸过程中分离出的猪去氧胆酸和猪胆酸纯度较高，可做他用。
4. 本申请在提取鹅去氧胆酸过程中所用到的试剂均为廉价易得，且大部分溶剂均可以回收套用，产生的废水较少。
5. 本申请鹅去氧胆酸提取过程中的母液能够通过萃取循环利用，提高鹅去氧胆酸的提取收率。
附图说明
图1我方技术方案的流程图；
图2是我方实施例1制备得到的成品检测图谱；
图3是我方实施例1皂化后的滤液检测图谱;
图4是我方实施例1除去猪去氧胆酸后的滤液检测图谱;
图5是我方实施例1硅胶过滤后的滤液经浓缩皂化后的检测图谱；
图6是我方实施例2制备得到的成品检测图谱；
图7是我方实施例3制备得到的成品检测图谱。
具体实施方式
下面通过具体实施例和附图对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。
实施例1
一种从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的方法，此为实验室进行小试的实施例，包括了以下步骤：
（1）皂化：取3公斤猪胆膏（HPLC含量22.1%），猪胆膏呈深棕色，为块状固体。投入30L反应釜中，加入水9公斤，氢氧化钠1.2公斤，加热至100℃回流进行皂化，皂化持续时间12小时。
（2）络合析晶：将皂化后的反应液回流保温8小时冷却至48℃，加入盐酸调节pH至10，再加入氯化镁水溶液（1.5公斤六水合氯化镁溶于3.3公斤水中），50℃搅拌4小时，然后过滤，用0.6公斤水淋洗，得到滤液和滤饼。滤饼为猪去氧胆酸镁盐,将滤得的猪去氧胆酸镁盐加水加酸解离即可得到猪去氧胆酸粗品。
（3）萃取酯化：将上步骤中得到滤液滴加盐酸调节pH至7，加入乙酸乙酯12.5L，继续滴加盐酸调节pH至3，升温至50℃，充分搅拌1小时后静置分层，水层弃去得乙酸乙酯溶液。将乙酸乙酯溶液浓缩至油状物，加入甲醇6L，滴入浓硫酸0.1kg，升温至68℃回流3h，进行酯化，使用TLC检测反应完全后降温至室温，加入碳酸氢钠固体调节pH至8，过滤，0.6L甲醇洗涤滤饼，滤液浓缩至油状物。
（4）乙酰化：向步骤（3）中得到的油状物加入乙醋酐3L、乙酸钠0.15kg，再升温至120℃至回流3小时，TLC检测反应完全，降至室温，过滤，滤液浓缩至油状物。
（5）硅胶过滤：向步骤（4）中的油状物中加入庚烷12L，升温至70℃将油状物完全溶解，再加入500g硅胶粉防止其在降温的过程中重新析出油状物，后降温至20℃，通过硅胶过滤（过滤漏斗中铺约3cm厚硅胶），再用6L庚烷淋洗，得到滤液和滤饼，将滤饼回收的三乙酰猪胆酸甲酯加入水进行水解，即得到猪胆酸。
（6）回流水解：将步骤（5）得到的滤液浓缩至油状物，加入氢氧化钠0.3kg、水3kg，升温至103℃回流12小时，TLC检测反应完全，降温至50℃，加入盐酸调节pH至7，再加入乙酸乙酯3L，继续滴加盐酸调节pH至3，升温至60℃，充分搅拌1小时后静置分层，弃去水层，再降温至3℃析出固体，滴加庚烷6L，搅拌2小时，过滤得鹅去氧胆酸湿品0.9公斤，干燥后得到鹅去氧胆酸成品0.52公斤。
（7）母液回收：结晶母液浓缩除去烷类溶剂后套用至下一批的镁盐滤液，进行调酸萃取步骤。
将成品送检，检验结果如下表所示：
| 品种 | 鹅去氧胆酸 | 猪胆酸 | 猪去氧胆酸 |
| 纯度 | 97.824% | 0.319% | 0.831% |
检测图谱如图2所示，具体参数如下表所示：
| 峰号 | 保留时间 | 高度 | 面积 | 面积% | 分离度（USP） | 理论塔板数（USP） | 拖尾因子 |
| 1 | 14.880 | 421 | 9196 | 0.219 | -- | 10949 | 0.924 |
| 2 | 18.760 | 498 | 13389 | 0.319 | 6.051 | 11056 | -- |
| 3 | 19.468 | 574 | 14821 | 0.353 | 1.009 | 12703 | -- |
| 4 | 24.206 | 1082 | 34923 | 0.831 | 6.269 | 13923 | 0.813 |
| 5 | 31.440 | 474 | 19051 | 0.454 | 7.812 | 14867 | 0.861 |
| 6 | 55.942 | 25614 | 4108632 | 97.824 | 8.271 | 2091 | 2.469 |
| 总计 | 28663 | 4200012 | 100.000 |
由此可知，通过此法制备得到的鹅去氧胆酸的纯度很高，达到97%以上的水平。猪胆酸和猪去氧胆酸的含量也很低，在1%以下，杂质的含量控制的很好。
我方还取了制备过程中的关键节点进行检测，分别为皂化完成后，除去猪去氧胆酸后以及经过硅胶过滤水解后，分别对应图3～图5，检测结果如下所示：
皂化后
| 品种 | 鹅去氧胆酸 | 猪胆酸 | 猪去氧胆酸 |
| 纯度 | 43.864% | 18.739% | 28.526% |
除去猪去氧胆酸后
| 品种 | 鹅去氧胆酸 | 猪胆酸 | 猪去氧胆酸 |
| 纯度 | 73.939% | 21.379% | 1.800% |
硅胶过滤水解后
| 品种 | 鹅去氧胆酸 | 猪胆酸 | 猪去氧胆酸 |
| 纯度 | 91.080% | 4.280% | 1.448% |
由上述表可知，我方去除猪去氧胆酸和猪胆酸的效果显著。
实施例2
一种从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的方法，此为实验室进行小试的第二个实施例，包括了以下步骤：
（1）皂化：取3公斤猪胆膏（HPLC含量22.1%），猪胆膏呈深棕色，为块状固体。投入30L反应釜中，加入水9公斤，氢氧化钠1.2公斤，加热至100℃回流进行皂化，皂化持续时间12小时。
（2）络合析晶：将皂化后的反应液回流保温8小时冷却至40℃，加入盐酸调节pH至11，再加入氯化镁水溶液（1.8公斤七水硫酸镁溶于3.3公斤水中），35℃搅拌4小时，然后过滤，用0.6公斤水淋洗，得到滤液和滤饼。滤饼为猪去氧胆酸镁盐,将滤得的猪去氧胆酸镁盐加水加酸解离即可得到猪去氧胆酸粗品。
（3）萃取酯化：将上步骤中得到滤液滴加盐酸调节pH至7，加入乙酸乙酯12.5L，继续滴加盐酸调节pH至2，升温至50℃，充分搅拌1小时后静置分层，水层弃去得乙酸乙酯溶液。将乙酸乙酯溶液浓缩至油状物，加入甲醇6L，滴入浓硫酸0.1kg，升温至68℃回流3h，进行酯化，使用TLC检测反应完全后降温至室温，加入碳酸氢钠固体调节pH至8，过滤，0.6L甲醇洗涤滤饼，滤液浓缩至油状物。
（4）乙酰化：向步骤（3）中得到的油状物加入乙醋酐3L、乙酸钠0.15kg，再升温至140℃至回流3小时，TLC检测反应完全，降至室温，过滤，滤液浓缩至油状物。
（5）硅胶过滤：向步骤（4）中的油状物中加入庚烷12L，升温至70℃将油状物完全溶解，再加入600g硅胶粉防止其在降温的过程中重新析出油状物，后降温至20℃，通过硅胶过滤（过滤漏斗中铺约3cm厚硅胶），再用6L庚烷淋洗，得到滤液和滤饼，将滤饼回收的三乙酰猪胆酸甲酯加入水进行水解，即得到猪胆酸。
（6）回流水解：将步骤（5）得到的滤液浓缩至油状物，加入氢氧化钠0.3kg、水3kg，升温至100℃回流12小时，TLC检测反应完全，降温至50℃，加入盐酸调节pH至7，再加入乙酸乙酯3L，继续滴加盐酸调节pH至3，升温至60℃，充分搅拌1小时后静置分层，弃去水层，再降温至3℃析出固体，滴加庚烷6L，搅拌2小时，过滤得鹅去氧胆酸湿品1.0公斤，干燥后得到鹅去氧胆酸成品0.55公斤。
（7）母液回收：结晶母液浓缩除去烷类溶剂后套用至下一批的镁盐滤液，进行调酸萃取步骤。
将成品送检，检验结果如下表所示：
| 品种 | 鹅去氧胆酸 | 猪胆酸 | 猪去氧胆酸 |
| 纯度 | 97.919% | 0.833% | 0.827% |
检测图谱如图6所示，具体参数如下表所示：
| 峰号 | 保留时间 | 高度 | 面积 | 面积% | 分离度（USP） | 理论塔板数（USP） | 拖尾因子 |
| 1 | 14.943 | 154 | 3696 | 0.081 | -- | 9959 | -- |
| 2 | 19.550 | 1104 | 37892 | 0.833 | 6.616 | 9711 | 0.727 |
| 3 | 24.320 | 1021 | 37631 | 0.827 | 5.487 | 10593 | 0.810 |
| 4 | 25.849 | 39 | 1017 | 0.022 | 1.821 | 19839 | 1.103 |
| 5 | 28.038 | 57 | 1757 | 0.039 | 2.802 | 18320 | 0.825 |
| 6 | 29.025 | 54 | 1684 | 0.037 | 1.184 | 19177 | 1.161 |
| 7 | 31.603 | 240 | 11020 | 0.242 | 2.518 | 10922 | 0.867 |
| 8 | 56.026 | 26726 | 4455678 | 97.919 | 7.714 | 1914 | 2.446 |
| 总计 | 29396 | 100.000 |
由此可知，通过此法制备得到的鹅去氧胆酸的纯度很高，达到97%以上的水平。猪胆酸和猪去氧胆酸的含量也很低，在1%以下，杂质的含量控制的很好。
实施例3
一种从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的方法，此为工厂中进行中试的实施例，包括了以下步骤：
（1）皂化：取90公斤猪胆膏（HPLC含量22.1%），猪胆膏呈深棕色，为块状固体。投入1000L反应釜中，加入水270公斤，氢氧化钠36公斤，加热至98℃回流进行皂化，皂化持续时间12小时。
（2）络合析晶：将皂化后的反应液回流保温8小时冷却至44℃，加入盐酸调节pH至9，再加入氯化镁水溶液（45公斤六水合氯化镁溶于100公斤水中），在42℃搅拌4小时，然后过滤，用18公斤水淋洗，得到滤液和滤饼。滤饼为猪去氧胆酸镁盐,将滤得的猪去氧胆酸镁盐加水加酸解离即可得到猪去氧胆酸粗品。
（3）萃取酯化：将上步骤中得到滤液放入搪瓷釜，添加盐酸调节pH至7，加入乙酸乙酯375L，继续滴加盐酸调节pH至3，升温至48℃，充分搅拌1小时后静置分层，水层弃去得乙酸乙酯溶液。将乙酸乙酯溶液浓缩至油状物，加入甲醇180L，滴入浓硫酸3kg，升温至69℃回流3h，进行酯化，使用TLC检测反应完全后加入碳酸氢钠固体调节pH至8，过滤，18L甲醇洗涤滤饼，滤液浓缩至油状物。
（4）乙酰化：向步骤（3）中得到的油状物加入乙醋酐90L、乙酸钠4.5kg，再升温至130℃至回流3小时，TLC检测反应完全，降至室温，过滤，滤液浓缩至油状物。
（5）硅胶过滤：向步骤（4）中的油状物中加入庚烷360L，升温至70℃将油状物完全溶解，再加入54kg的硅胶粉防止其在降温的过程中重新析出油状物，后降温至20℃，通过硅胶过滤（过滤器中铺约8cm厚硅胶），再用180L庚烷淋洗，得到滤液和滤饼，将滤饼回收的三乙酰猪胆酸甲酯加入水进行水解，即得到猪胆酸。
（6）回流水解：将步骤（5）得到的滤液浓缩至油状物，加入氢氧化钠9kg、水90kg，升温至96℃回流12小时，TLC检测反应完全，降温至50℃，加入盐酸调节pH至7，再加入乙酸乙酯90L，继续滴加盐酸调节pH至3，升温至58℃，充分搅拌1小时后静置分层，弃去水层，再降温至0℃析出固体，加庚烷180L，搅拌2小时，离心得鹅去氧胆酸湿品22公斤，干燥后得到鹅去氧胆酸成品17公斤。
（7）母液回收：结晶母液浓缩除去烷类溶剂后套用至下一批的镁盐滤液，进行调酸萃取步骤。
将成品送检，检验结果如下表所示：
| 品种 | 鹅去氧胆酸 | 猪胆酸 | 猪去氧胆酸 |
| 纯度 | 97.423% | 0.759% | 0.684% |
检测图谱如图7所示，具体参数如下表所示：
| 峰号 | 保留时间 | 高度 | 面积 | 面积% | 分离度（USP） | 理论塔板数（USP） | 拖尾因子 |
| 1 | 14.121 | 103 | 2344 | 0.207 | -- | 9681 | 0.900 |
| 2 | 17.692 | 184 | 4780 | 0.423 | 5.191 | 7795 | -- |
| 3 | 18.290 | 345 | 8581 | 0.759 | 0.810 | 11776 | -- |
| 4 | 22.573 | 250 | 7742 | 0.684 | 5.857 | 13119 | 0.798 |
| 5 | 29.054 | 152 | 5710 | 0.505 | 7.348 | 14185 | -- |
| 6 | 52.665 | 12302 | 1102069 | 97.423 | 13.543 | 7038 | 1.451 |
| 总计 | 13335 | 1131225 | 100.000 |
由此可知，通过此法制备得到的鹅去氧胆酸的纯度很高，达到97%以上的水平。猪胆酸和猪去氧胆酸的含量也很低，在1%以下，杂质的含量控制的很好。
以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本申请的保护范围。
Claims (10)
1.一种从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的方法，包括了对猪胆膏进行皂化、络合析晶、萃取酯化、乙酰化、回流水解步骤，其特征在于，所述方法还包括了硅胶过滤的步骤，其硅胶过滤方式为在过滤漏斗中铺硅胶进行过滤。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硅胶的厚度为2～5cm或8～12cm。
3.一种从猪胆膏中提取鹅去氧胆酸的方法，包括了以下步骤：
（1）皂化：将猪胆膏中加入氢氧化钠、水，升温回流进行皂化；
（2）络合析晶：将皂化后的反应液冷却至30～50℃，调节pH至碱性，加入无机镁盐成盐析晶，后过滤得到滤液和滤饼，将滤饼加酸调节pH，搅拌后过滤得到猪去氧胆酸；
（3）萃取酯化：将步骤（2）中得到的滤液加入乙酸乙酯，调酸性萃取，萃取液进行浓缩，至反应体系变为油状物，加入甲醇、浓硫酸进行回流搅拌，进行酯化，酯化完成后加入固体碳酸氢钠调节pH，过滤得到胆汁酸甲酯甲醇溶液，进行浓缩得到油状物；
（4）乙酰化：向步骤（3）中得到的油状物中加入乙酰化试剂进行回流反应，待反应结束后冷却至室温并过滤，滤液浓缩得到油状物；
（5）硅胶过滤：向步骤（4）中得到的油状物中加入烷类溶剂，加热将步骤（4）中得到的油状物完全溶解，再加入硅胶粉，后降温，在过滤漏斗中铺一层硅胶进行过滤，再用烷类溶剂冲洗得到滤液，滤饼即为三乙酰猪胆酸甲酯，将滤饼回收的三乙酰猪胆酸甲酯进行水解，即得到猪胆酸；
（6）回流水解：将步骤（5）中得到的滤液浓缩回收，再加入氢氧化钠水溶液进行回流水解，再降温调酸性，加入乙酸乙酯萃取，降温析晶，滴加烷类溶剂逼出晶体，得到鹅去氧胆酸。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的无机镁盐选自氯化镁、硫酸镁当中的一种或多种的混合。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（2）中调节pH至碱性的pH为9～11，步骤（3）中加入固体碳酸氢钠调节pH至7～8。
6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（4）中乙酰化试剂选自乙酸酐、乙酸钠组合或者乙酰氯、三乙胺组合当中的一种。
7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（5）中加入硅胶粉的质量为猪胆膏质量的0.1～1倍。
8.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（5）和步骤（6）中所述的烷类溶剂为己烷、庚烷、二氯甲烷、环乙烷、石油醚当中的一种或多种的混合。
9.如权利要求1～8任一项所述的方法制备得到的猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸。
10.如权利要求1～8任一项所述的方法在鹅去氧胆酸提纯当中的应用。
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