CN110787070A - ***花叶提取物的制备方法、***花叶提取物、微胶囊的制备方法、微胶囊和化妆品 - Google Patents

Abstract

本发明涉及天然物质技术领域，具体而言，涉及***花叶提取物的制备方法、***花叶提取物、微胶囊的制备方法、微胶囊和化妆品。本发明的***花叶提取物的制备方法包括：将粉碎的、未干燥的***花叶和醇溶液混合，在温度小于或等于60℃的条件下，超声提取，得到原提取物。该制备方法能够制备出含有较多萜烯类和***二酚的提取物。本发明的微胶囊的制备方法包括将β‑环状糊精、***胶、单甘脂和***花叶提取物混合制成水溶液，均质后，喷雾干燥。该制备方法制备的微胶囊能够保护萜烯类和***二酚活性成分。本发明提供的化妆品含有萜烯类和***二酚，具有良好的皮肤修复效果。

Description

***花叶提取物的制备方法、***花叶提取物、微胶囊的制备 方法、微胶囊和化妆品

技术领域

本发明涉及天然物质技术领域，具体而言，涉及***花叶提取物的制备方法、***花叶提取物、微胶囊的制备方法、微胶囊和化妆品。

背景技术

工业***，是指四氢***酚含量低于0.3％(干物质重量百分比)的***属原植物及其提取产品。工业***可以称为汉麻(hemp)，是***科(Cannabinaceae)***属(Cannabis)1年生草本植物，现在广泛应用的***为工业***。

相关技术领域在制备***花叶的提取物时，难以保留其中的有益成分。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种***花叶提取物的制备方法，其能够提升提取物中的萜烯类和***二酚的保留量。

本发明的第二个目的在于提供一种***花叶提取物，其含有较多的萜烯类和***二酚。

本发明的第三个目的在于提供一种微胶囊的制备方法，其能够保护萜烯类和***二酚活性成分。

本发明的第四个目的在于提供一种微胶囊，其含有较多的萜烯类和***二酚活性成分。

本发明的第五个目的在于提供一种化妆品，其含有萜烯类和***二酚，具有良好的皮肤修复效果。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明实施例提供一种***花叶提取物的制备方法，包括：

将粉碎的、未干燥的***花叶和醇溶液混合，在温度小于或等于60℃的条件下，超声提取，得到原提取物。

在可选的实施方式中，还包括浓缩原提取物，再添加辛酸/癸酸甘油三酯，混合溶解后，待混合物油水分离，得到上层油状提取物。

在可选的实施方式中，在浓缩后的原提取物溶解于辛酸/癸酸甘油三酯后，添加盐水稀释，再静置，待油水分离，得到上层油状提取物。

第二方面，本发明实施例提供一种***花叶提取物，其是由前述实施方式任一项的***花叶提取物的制备方法制备的。

第三方面，本发明实施例提供一种微胶囊的制备方法，包括：将β-环状糊精、***胶、单甘脂和前述实施方式的***花叶提取物混合制成水溶液，均质后，喷雾干燥。

在可选的实施方式中，将β-环状糊精、***胶、单甘脂和的***花叶提取物混合制成水溶液，具体包括：

将β-环状糊精溶液和***胶溶液混合，制得胶液；再将胶液于含有单甘脂的***花叶提取物混合。

第四方面，本发明实施例提供一种微胶囊，其是由前述实施方式的微胶囊的制备方法制备的。

第五方面，本发明实施例提供一种化妆品，包括前述实施方式的***花叶提取物或前述实施方式的微胶囊。

在可选的实施方式中，包括用量占化妆品总量的10-50％的微胶囊。

在可选的实施方式中，包括：微胶囊、辅酶Q10、大豆卵磷脂、生育酚乙酸酯、迷迭香精油和荷荷芭油；或者，

微胶囊、增稠剂、保湿剂、增溶剂、香精和防腐剂；或者，

微胶囊、乳化剂、润肤剂、保湿剂、香精和防腐剂。

本发明实施例提供的***花叶提取物的制备方法的有益效果包括：本发明提供的***花叶提取物的制备方法采用未干燥的***花叶进行提取，即可以采用新鲜的***花叶进行提取，并且提取时用醇溶液在温度小于或等于60℃条件下进行，这样一来，使得***花叶中的萜烯类和***二酚均不容易挥发、分解，从而能够提高提取物中的萜烯类和***二酚的保留量。

本发明实施例提供的***花叶提取物的有益效果包括：本发明实施例提供的***花叶提取物是由上述的方法提取制备的，该***花叶提取物中具有较高含量的萜烯类和***二酚。

本发明实施例提供的微胶囊的制备方法的有益效果包括：本发明实施例提供的微胶囊的制备方法将上述的***花叶提取物制备成微胶囊，能够将***花叶提取物包裹于β-环状糊精和***胶制备的壁材内，进而减少萜烯类和***二酚的损失，即可以保护萜烯类和***二酚活性成分。

本发明实施例提供的微胶囊的有益效果包括：本发明实施例提供的微胶囊是由上述微胶囊的制备方法制备的，其含有较多的萜烯类和***二酚活性成分。

本发明实施例提供的化妆品的有益效果包括：本发明实施例提供的化妆品包括上述的***二酚提取物或微胶囊，进而含有萜烯类和***二酚活性物质，以起到良好的皮肤修复效果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响的检测结果图；

图2为对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响的检测结果图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下对本发明的***花叶提取物的制备方法、***花叶提取物、微胶囊的制备方法、微胶囊和化妆品作进一步的详细描述。

本发明提供一种***花叶提取物的制备方法，其包括：将粉碎的、未干燥的***花叶和醇溶液混合，在温度小于或等于60℃的条件下，超声提取，得到原提取物。

上述未干燥的***花叶可以是新鲜的***花叶。经发明人研究发现，在提取***花叶中的物质时，若是采用干燥的***花叶进行提取，会大大的减少提取物中萜烯类的含量，采用未经过干燥加工的***花叶，能够有效保留更多的活性物质，例如：萜烯类和***二酚。

经发明人研究发现，在温度小于或等于60℃条件下，用醇溶液提取新鲜的***花叶，能够进一步地减少萜烯类和***二酚的损耗，进而使得制得的提取物中含有较多的萜烯类和***二酚，以改善制备的提取物的性质。

经发明人研究发现，采用本发明的***花叶提取物的制备方法制备出的具有较高含量的萜烯类和***二酚的提取物，其中的萜烯类能够与***二酚的效果协同，进而提升提取物抗炎、止痛等作用。

上述醇溶液例如可以是：质量浓度为70-95％的乙醇溶液。

进一步地，***花叶与醇溶液的用量比例可以是1:5左右，且上述用量比可以是指质量比。

本发明超声提取原提取物的时间可以是0.5-2h，超声的强度在此不作具体限定。

上述粉碎的、未干燥的***花叶可以过20-40目筛后，在用醇溶液进行提取。

本发明的***花提取物的制备方法还包括浓缩上述原提取物，并将醇溶液回收。

在原提取物浓缩后，添加辛酸/癸酸甘油三酯，混合溶解后，待混合物油水分离，得到上层油状提取物。该上层油状提取物即是含有萜烯类和***二酚的***花提取物。

进一步地，在浓缩后的原提取物溶解于辛酸/癸酸甘油三酯后，可以添加盐水进行稀释，在搅拌混匀后，静置，待油水分离，取上层油状提取物，即含有萜烯类和***二酚的***花提取物，该油状提取物呈淡绿色的。

经发明人研究发现，上述油状的***花叶提取物中含有的***二酚的量占5-20％，以使该***花叶提取物满足作为抗炎的化妆品添加剂的需求。

在浓缩后的原提取物中添加辛酸/癸酸甘油三酯，不仅能够提高萜烯类和***二酚之间的融合性能，还能够进一步地改善萜烯类对***二酚的协同作用，使得制备出的***二酚提取物的性能更佳。

在原提取物和辛酸/癸酸甘油三酯的混合物中添加盐水稀释，能够去除提取物中的杂质，并使得油状提取物能够快速的分离出来。

进一步地，添加于浓缩后的原提取物的辛酸/癸酸甘油三酯的重量可以是浓缩后的原提取物的2-5倍，以便充分利用辛酸/癸酸甘油三酯改善萜烯类对***二酚的协同作用。

在浓缩后的原提取物和辛酸/癸酸甘油三酯混合后，可以采用超声助溶，以进一步地利用辛酸/癸酸甘油三酯改善萜烯类对***二酚的协同作用。

上述盐水的质量浓度可以在10％左右，盐水的重量或体积可以是浓缩后的原提取物的1.5-3倍，以快速的去除杂质，并促使油水分离。

本发明提供的一种微胶囊的制备方法包括：将β-环状糊精、***胶、单甘脂和按照本发明的***花叶提取物的制备方法制备的***花叶提取物混合制成水溶液，均质后，喷雾干燥。

其中，β-环状糊精和***胶作为微胶囊的壁材，单甘脂作为微胶囊的乳化剂。

进一步地，本发明的微胶囊的制备方法具体包括：将β-环状糊精溶液和***胶溶液混合，制得胶液；再将胶液于含有单甘脂的***花叶提取物混合。

再进一步地，将β-环状糊精溶于水，制成β-环状糊精溶液；并将***胶溶于温度大致为55-60℃的水中，制成***胶溶液；再将β-环状糊精溶液和***胶溶液混合，制得胶液。

上述含有单甘脂的***花叶提取物中含有的单甘脂的质量浓度大致为5％。

经发明人研究发现，采用β-环状糊精和***胶作为微胶囊的壁材将***花叶提取物包裹起来，一方面可以将***花叶提取物保护于壁材内，避免萜烯类和***二酚的挥发、损耗，进而保留较多的活性成分，另一方面还可以改善整个微胶囊的溶解性，即改变***花叶提取物在水中的溶解度，便于后续对***花叶提取物的利用。

上述均质的方法包括：将β-环状糊精、***胶、单甘脂和按照本发明的***花叶提取物的制备方法制备的***花叶提取物混合制成水溶液置于振荡器上振荡大致48h左右，振荡时的温度大致控制为55～60℃、振荡时的压强控制为20MPa左右，均质2次左右。

上述喷雾干燥的条件包括：在进风温度为120-140℃，进料温度控制为55-60℃，出风温度为60-70℃。经发明人研究发现，采用较高温度差的进风温度和进料温度，能够避免***花叶提取物中的活性物质的损耗，还能够进一步促进***花叶提取物中萜烯类对***二酚的协同作用。

需要说明的是，在喷雾干燥后，还可以对微胶囊产品过70-80目筛。

本发明的制备方法提供的***花叶提取物和微胶囊均能够用于制备化妆品，上述化妆品可以包括但是不限于凝胶、乳霜和精华油等。

本发明提供的化妆品可以是含有占总重量的10-50％的微胶囊的化妆品，例如：凝胶或乳霜。

进一步地，含有微胶囊的修复凝胶还可以包括：微胶囊、增稠剂、保湿剂、增溶剂、香精和防腐剂。再进一步地，除了微胶囊之外，按照重量百分比计，具体还包括：增稠剂1-10％，保湿剂5.0-40％，增溶剂0.5-10％，香精0.2-0.8％，防腐剂0.3-0.5％。

增稠剂选自聚丙烯酸钠、卡波姆、羟乙基纤维素、聚丙烯酰胺和聚乙烯醇中的一种或多种；保湿剂选自山梨醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇、木糖醇中的一种或几种；增溶剂选自氢化蓖麻油和PEG-40氢化蓖麻油中的一种或两种；防腐剂选自苯氧乙醇、DMDM乙内酰脲、羟苯甲酯、羟苯丙酯、甲基异噻唑啉酮和对羟基苯乙酮中的一种或多种。

需要说明的是，上述含有微胶囊的修复凝胶的余量为制备护肤凝胶用的基础凝胶。

含有微胶囊的膏剂还可以包括：微胶囊、乳化剂、润肤剂、保湿剂、香精和防腐剂。再进一步地，除了微胶囊之外，按照重量百分比计，具体包括：乳化剂5-10％，润肤剂2-5％，保湿剂5.0-40％，香精0.2-0.8％，防腐剂0.3-0.5％。

乳化剂选自鲸蜡硬脂醇、聚二甲基硅氧烷、脂肪酸单甘油脂、山嵛醇聚醚-25、季戊四醇二硬脂酸酯以及硬脂醇聚醚-21中的一种或多种。润肤剂选自小麦胚芽油、葡萄籽油、乳木果油以及甜杏仁油中的一种或多种。保湿剂为山梨醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇、木糖醇中的一种或几种的混合物。

需要说明的是，上述含有微胶囊的膏剂的余量为制备护肤凝胶用的基础乳霜。

含有***花叶提取物的精华油包括：微胶囊、辅酶Q10、大豆卵磷脂、生育酚乙酸酯、迷迭香精油和荷荷芭油；进一步地，除了微胶囊之外，按重量百分比计，包括以下组分：***花叶提取物10.0-60％、辅酶Q10：0.5-5％、大豆卵磷脂0.5-5％、生育酚乙酸酯：0.05-5％、迷迭香精油：0.1-5％，余量为荷荷芭油。

以下结合实施例对本发明的***花叶提取物的制备方法、***花叶提取物、微胶囊的制备方法、微胶囊和化妆品作进一步的详细描述。

实施例1

将过20目筛的、粉碎的、新鲜的***花叶与质量浓度为70％的乙醇溶液混合，新鲜***花叶与乙醇溶液的质量比为1:5；然后在温度为室温(28℃)下超声提取0.5h；提取后将减压浓缩(温度不超过60℃)，回收乙醇，得到浓缩液。

在浓缩液中添加2倍质量的辛酸/癸酸甘油三酯溶解，并利用超声助溶；在加入浓缩液质量1.5倍的、质量浓度为10％的盐水稀释，搅拌混匀后，静置20min，油水分离后，得到上层油状的***花叶提取物。

将β-环状糊精溶于水中，制得β-环状糊精溶液；将***胶溶于55℃的水中，制成***胶溶液；将β-环状糊精溶液混入***胶溶液中，再加入含有质量浓度为5％的***花叶提取物，加水混匀制成水溶液。其中，β-环状糊精与阿拉比较的质量比为40:3，β-环状糊精与含有5％单甘脂的***花叶提取物的质量比为8:5。

将上述水溶液置于振荡器上振荡48h，振荡温度55℃，压强20MPa，均质2次。

将均质后的混合物喷雾干燥，进风温度120℃，进料温度55℃，出风温度60℃。喷雾干燥后过70目筛，制得微胶囊。

实施例2

将过40目筛的、粉碎的、新鲜的***花叶与质量浓度为95％的乙醇溶液混合，新鲜***花叶与乙醇溶液的质量比为1:5；然后在温度为35℃下超声提取2h；提取后将减压浓缩(温度不超过60℃)，回收乙醇，得到浓缩液。

在浓缩液中添加5倍质量的辛酸/癸酸甘油三酯溶解，并利用超声助溶；在加入浓缩液质量3倍的、质量浓度为10％的盐水稀释，搅拌混匀后，静置40min，油水分离后，得到上层油状的***花叶提取物。

将β-环状糊精溶于水中，制得β-环状糊精溶液；将***胶溶于60℃的水中，制成***胶溶液；将β-环状糊精溶液混入***胶溶液中，再加入含有质量浓度为5％的***花叶提取物，加水混匀制成水溶液。其中，β-环状糊精与阿拉比较的质量比为40:3，β-环状糊精与含有5％单甘脂的***花叶提取物的质量比为8:5。

将上述水溶液置于振荡器上振荡52h，振荡温度60℃，压强20MPa，均质3次。

将均质后的混合物喷雾干燥，进风温度140℃，进料温度60℃，出风温度70℃。喷雾干燥后过80目筛，制得微胶囊。

实施例3

将过30目筛的、粉碎的、新鲜的***花叶与质量浓度为80％的乙醇溶液混合，新鲜***花叶与乙醇溶液的质量比为1:5.5；然后在温度为室温(25℃)下超声提取1.5h；提取后将减压浓缩(温度不超过60℃)，回收乙醇，得到浓缩液。

在浓缩液中添加3倍质量的辛酸/癸酸甘油三酯溶解，并利用超声助溶；在加入浓缩液质量2倍的、质量浓度为9.5％的盐水稀释，搅拌混匀后，静置30min，油水分离后，得到上层油状的***花叶提取物。

将β-环状糊精溶于水中，制得β-环状糊精溶液；将***胶溶于58℃的水中，制成***胶溶液；将β-环状糊精溶液混入***胶溶液中，再加入含有质量浓度为5％的***花叶提取物，加水混匀制成水溶液。其中，β-环状糊精与阿拉比较的质量比为40:3，β-环状糊精与含有5％单甘脂的***花叶提取物的质量比为8:5。

将上述水溶液置于振荡器上振荡40h，振荡温度58℃，压强20MPa，均质2次。

将均质后的混合物喷雾干燥，进风温度130℃，进料温度58℃，出风温度65℃。喷雾干燥后过70目筛，制得微胶囊。

实施例4

将过20目筛的、粉碎的、新鲜的***花叶与质量浓度为90％的乙醇溶液混合，新鲜***花叶与乙醇溶液的质量比为1:4.5；然后在温度为60℃下超声提取1h；提取后将减压浓缩(温度不超过60℃)，回收乙醇，得到浓缩液。

在浓缩液中添加4倍质量的辛酸/癸酸甘油三酯溶解，并利用超声助溶；在加入浓缩液质量2.5倍的、质量浓度为9％的盐水稀释，搅拌混匀后，静置40min，油水分离后，得到上层油状的***花叶提取物。

将β-环状糊精溶于水中，制得β-环状糊精溶液；将***胶溶于56℃的水中，制成***胶溶液；将β-环状糊精溶液混入***胶溶液中，再加入含有质量浓度为5％的***花叶提取物，加水混匀制成水溶液。其中，β-环状糊精与阿拉比较的质量比为40:3，β-环状糊精与含有5％单甘脂的***花叶提取物的质量比为8:5。

将上述水溶液置于振荡器上振荡50h，振荡温度56℃，压强20MPa，均质2次。

将均质后的混合物喷雾干燥，进风温度140℃，进料温度55℃，出风温度65℃。喷雾干燥后过80目筛，制得微胶囊。

实施例5-8

实施例5-8为分别用实施例1-4制备的微胶囊制备修复凝胶及其制备方法。

实施例5-8提供的修复凝胶的部分成分如下表1所示：

表1

实施例5-8均为将各种原料混合、搅拌即可。

实施例9-12

实施例9-12为分别用实施例1-4制备的微胶囊制备膏剂及其制备方法。

实施例9-12提供的膏剂的部分成分如下表2所示：

表2

实施例9-12均为将各种原料混合、搅拌即可。

实施例13-16

实施例13-16为分别用实施例1-4制备的微胶囊制备精华油及其制备方法。

实施例13-16提供的精华油的部分成分如下表3所示：

表3

实施例13-16均为将各种原料混合、搅拌即可。

一、对实施例7提供的含有20％微胶囊的修复凝胶进行抗炎功效评价，试验完成单位为广东药科大学。

本次测试所用斑马鱼为Tg(corola:eGFP)转基因斑马鱼，由英国伦敦学院引入，本实验室扩繁。试剂：三卡因(麦克林)。

主要设备为：Z-A-D5五层单排独立养殖单元(上海海圣生物实验设备有限公司)；SZ680连续变倍体式显微镜(重庆奥特光学仪器有限公司)；ZXSD-A1090生化培养箱(上海智城分析仪器制造有限公司)；DMi8倒置荧光显微镜(莱卡，德国)；SQP万分之一电子秤(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)。

主要试验方法包括：

1、将性成熟斑马鱼雌雄分缸饲养于斑马鱼养殖单元中。水温：26±2℃；PH6.7；电导率：520μs/cm；光照/黑暗周期：14h:10h。暴露实验开始前一天将雌雄以1:2配对，自然交配产卵。

2、巨噬细胞和中性粒细胞聚集试验

1)挑选发育至3dpf(days post fertilization)的健康斑马鱼Tg(corola:eGFP)置于6孔细胞培养板中，20条/孔，加入5mL供试品溶液预处理1h，以养殖水为空白对照组。

2)在体视显微镜下用手术刀将斑马鱼尾鳍切断，再置于6孔细胞培养板中，15条/孔，加入5mL供试品溶液，在曲线控制生化培养箱中孵育。

3)孵育至6h后，用三卡因将斑马鱼麻醉，在荧光显微镜下观察巨噬细胞和中性粒细胞在尾鳍伤口聚集情况并拍照。

4)统计细胞数量，计数范围为离切口200μm以内的区域。

3、巨噬细胞和中性粒细胞清除试验

1)在体视显微镜下用手术刀将斑马鱼Tg(corola:eGFP)尾鳍切断，然后将斑马鱼置于6孔细胞培养板中，20条/孔，加入5mL的养殖水培养，置于曲线控制生化培养箱中孵育。

2)孵育6h后，将斑马鱼置于到96孔细胞培养板中，在荧光显微镜下挑选伤口处聚集巨噬细胞和中性粒细胞数较多的斑马鱼进行实验。

3)将斑马鱼置于6孔细胞培养板中，15条/孔，加入5mL供试品溶液，以养殖水为空白对照组，置于曲线控制生化培养箱中继续孵育。

4)孵育6h后，即切尾12h后，用三卡因将斑马鱼麻醉，在荧光显微镜下观察巨噬细胞和中性粒细胞在尾鳍伤口聚集情况并拍照记录。

5)统计细胞数量，计数范围为离切口200μm以内的区域。

4、采用SPSS19.0软件统计处理数据，实验数据均用±SEM数据表示，用单因素方差分析。各浓度组与空白对照组两两比较：*P<0.05。

5、1)见表4和图1结果，实施例7提供的修复凝胶(微胶囊含量20％)对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响(与空白对照组比较：*P<0.05)。

表4对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响(与空白对照组比较：*P<0.05)

注：表中0、50、100、200(μg/mL)是指用实施例7提供的修复凝胶稀释后的浓度。

根据图1可知，空白对照组(Control)的斑马鱼尾鳍伤口处有大量巨噬细胞和中性粒细胞聚集，而修复凝胶(微胶囊含量为20％)实验组的斑马鱼尾鳍伤口处的巨噬细胞和中性粒细胞聚集逐渐减少。

根据表4和图1可知，空白对照组(Control)的巨噬细胞和中性粒细胞数为22.25±1.18个。同时修复凝胶(微胶囊含量为20％)浓度为50μg/mL实验组的巨噬细胞和中性粒细胞数为21.20±0.96个，与空白对照组(22.25±1.18个)相比较没有显著性差异(P>0.05)。而修复凝胶(微胶囊含量为20％)浓度为100和200μg/mL实验组的巨噬细胞和中性粒细胞数分别为18.25±0.92和18.18±0.70个，与空白对照组(22.25±1.18个)相比较均有显著性差异(P<0.05)。由此可知，100和200μg/mL修复凝胶(微胶囊含量为20％)均能显著抑制巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集；并且可以判定，实施例7提供的修复凝胶能抑制巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集。

2)见表5和图2结果，实施例7提供的修复凝胶(微胶囊含量20％)对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响(与空白对照组比较：*P<0.05)。

表5修复凝胶(微胶囊含量为20％)对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响

(与空白对照组比较：*P<0.05)

注：表中0、50、100、200(μg/mL)是指用实施例7提供的修复凝胶稀释后的浓度。

根据图2可知，空白对照组(Control)的斑马鱼尾鳍伤口处有大量巨噬细胞和中性粒细胞聚集，而修复凝胶(微胶囊含量为20％)实验组的斑马鱼尾鳍伤口处的巨噬细胞和中性粒细胞聚集逐渐减少。

根据图2和表5可知，空白对照组的巨噬细胞和中性粒细胞数为21.33±1.11个。同时修复凝胶(微胶囊含量为20％)浓度为50和100μg/mL实验组的巨噬细胞和中性粒细胞数分别为19.91±1.05和18.89±1.10个，与空白对照组(21.33±1.11个)相比较均没有显著性差异(P>0.05)。而修复凝胶(微胶囊含量为20％)浓度为200μg/mL实验组的巨噬细胞和中性粒细胞数为17.64±0.64个，与空白对照组(21.33±1.11个)相比较具有显著性差异(P<0.05)。由此可知，200μg/mL修复凝胶(微胶囊含量为20％)能显著促进巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除，并且可以判定，实施例7提供的修复凝胶能在斑马鱼尾鳍伤口处清除。

综上，本申请提供的修复凝胶具有良好的抗炎功效。

二、对实施例12提供的含有30％微胶囊的膏剂进行人体斑贴试验。

该实验的对照为不含微胶囊的膏剂。

受试者:共30人，男2人，女28人，年龄21-55岁，符合受试者志愿入选标准。

斑试方法:选用合格的斑试器，以封闭式斑贴试验方法，将膏剂约0.03g涂于斑试器内，外用专用胶带贴敷于受试者背部，24小时后去除膏剂。分别于去除后0.5、24、48小时观察皮肤反应，按《化妆品安全技术规范》(2015年版)中皮肤反应分级标准记录其结果，结果见表6。

表6人体皮肤斑贴试验结果

注：上表中不同皮肤反应从0至5不良反应逐渐加重。

由表6可知，本发明提供的膏剂不会出现皮肤不良反应。

三、对实施例15提供的含有25％的微胶囊的精华油进行皮肤屏障损伤预防与修复的实验，实验单位为：云南黄家医圈中医肿瘤医院。

该实验按照“国家食品药品监督管理局”“药物非临床研究质量管理规范”(2003年9月)实施。

经皮失水率(TEWL)是判断皮肤屏障功能的主要方法之一，经皮失水率(TEWL)的增加可以认为与皮肤屏障功能下降相关。已知在各种皮肤屏障功能受损的问题皮肤(例如特应性皮炎、接触性皮炎等)中，水分从皮肤的丧失比健康皮肤更旺盛。

所以实验首先采取测试“经皮失水率”来作为判断产品有无“皮肤屏障损伤预防和修复的功效”。

实验材料等主要包括：市售餐具洗涤剂：按实际使用质量分数，用蒸馏水稀释成5％溶液；烧杯：2L规格，北京玻璃仪器产生产；计时器：WB388，欧西亚电子(深圳)有限公司生产；恒定光源小室：具备恒定光源的小室，便于皮肤科医生评判皮肤反应；皮肤水分含量测定仪，德国CK公司生产；皮肤经表皮失水率测定仪，德国CK公司生产。

1)方法：该实验将“修复精华油(微胶囊含量为25％)”、对比空白样品(甘油)用于试验。入选合格的志愿者10人，均完成试验。志愿者年龄在23岁至41岁之间，平均年龄30.2±5.94岁。在试验期间，受试者未出现红斑、丘疹、风团、瘙痒等与试用样品相关联的皮肤不良反应。

在恒温(22±1℃)，恒湿(50±5％)的房间适应30分钟后，先测试志愿者左手前臂内侧(分为两个区域)皮肤的角质层含水量。将样品按(2.0±0.1)mg/cm2用量涂在志愿者左手前臂内侧(4cm×4cm)的一个区域，分别在1小时、2小时、4小时测试皮肤的角质层含水量。另外一个区域涂抹空白对照样(甘油)。

然后测试志愿者右前臂内侧(4cm×4cm)(分为两个区域)经皮失水率，再用胶带剥脱志愿者右手前臂内侧15次以便造成皮肤屏障损伤。将样品按(2.0±0.1)mg/平方厘米用量涂在右前臂内侧的一个区域，另外一个区域涂抹空白对照样(甘油)按摩至吸收后，分别在1小时、2小时、4小时测试皮肤的经皮失水率(TEWL)。

评价结果用角质层含水量平均值表示，结果见表7。

表7在不同时间的角质层含水量(％)

样品	0小时	1小时	2小时	4小时
					精华油	19.7±8.8	41.5±10.7	40.8±9.5	40.5±9.4
空白对照	19.7±7.3	25.4±7.5	23.3±7.6	22.2±8.8

根据表7结果可知，对于皮肤角质层含水量的提高作用，精华油大于空白对照，结果表明，精华油有增加皮肤角质层含水量的作用。

评价结果用经皮失水率(TEWL)平均值表示，结果见表8。

表8在不同时间的经皮失水率TEWL/％

样品	0小时	1小时	2小时	4小时
					精华油	4.4±1.8	6.0±1.7	5.3±0.9	4.5±1.0
空白对照	4.8±1.6	7.3±1.3	6.5±1.0	6.9±1.0

根据表8结果可知，对于经皮失水率(TEWL)的降低作用，精华油小于空白对照样品，结果表明，精华油有皮肤屏障损伤预防和修复的功效。

2)研究对象：10名女性参加试验，年龄30岁～58岁。所有受试者面部表现：皮肤泛红、瘙痒、干燥、蜕皮等。皮肤科医生对面部皮肤进行临床评价后选择。

受试者使用产品前由皮肤科医生对面部皮肤进行临床评价后，进行面部皮肤含水量和1小时内经表皮失水率测试。之后每天早晚使用精华油产品，连续使用28天，不可以间断。28天后到皮肤科进行面部皮肤进行临床评价及皮肤含水量和经表皮失水率测试，对比使用前后的皮肤情况。28天内如果出现皮肤情况恶化者停用产品，严重者到医院就诊。

对比使用前后，皮肤含水量的测试，结果见表9。

表9使用前后皮肤角质层含水量(％)

使用精华油28天后皮肤角质层含水量的测定结果发现，对于皮肤角质层含水量的有提高作用，结果表明，精华油有皮肤屏障损伤预防和修复的功效。

对比使用前后，皮肤1小时内的经皮失水率(TEWL)测定结果见表10。

表10每个人使用前后的经皮失水率TEWL/％

使用精华油28天后，对于经皮失水率(TEWL)的降低作用明显，结果表明，精华油有皮肤屏障损伤预防和修复的功效。

综上，本发明提供的精华油有皮肤屏障损伤预防和修复的功效。

实施例17

实施例17制备微胶囊的方法和实施例3类似，不同之处在于，提取***花叶时使用的是干燥的***花叶。

将实施例17制备的微胶囊制备成精华油，精华油的配方与实施例15相同。

对实施例17和15提供的精华油进行皮肤屏障损伤预防与修复的实验，具体实验方法和上述相同，结果见表11和12。

表11在不同时间的角质层含水量(％)

样品	0小时	1小时	2小时	4小时
					实施例15	19.7±8.8	41.5±10.7	40.8±9.5	40.5±9.4
实施例17	19.7±5.1	37.4±3.3	33.3±1.6	30.2±3.8

表12在不同时间的经皮失水率TEWL/％

样品	0小时	1小时	2小时	4小时
					实施例15	4.4±1.8	6.0±1.7	5.3±0.9	4.5±1.0
实施例17	4.8±1.6	6.6±1.1	6.2±0.4	5.4±0.7

根据表11和表12的结果可知，对于皮肤角质层含水量的提高作用，实施例15提供的精华油大于实施例17；对于经皮失水率(TEWL)的降低作用，实施例15的精华油小于实施例17；结果表明，用新鲜的***花叶提取的提取物制备的微胶囊的效果更佳。

综上所述，本发明提供的***花叶提取物的制备方法采用未干燥的***花叶进行提取，即可以采用新鲜的***花叶进行提取，并且提取时用醇溶液在温度小于或等于60℃条件下进行，这样一来，使得***花叶中的萜烯类和***二酚均不容易挥发、分解，从而能够提高提取物中的萜烯类和***二酚的保留量。

本发明实施例提供的***花叶提取物是由上述的方法提取制备的，该***花叶提取物中具有较高含量的萜烯类和***二酚。

本发明实施例提供的微胶囊的制备方法将上述的***花叶提取物制备成微胶囊，能够将***花叶提取物包裹于β-环状糊精和***胶制备的壁材内，进而减少萜烯类和***二酚的损失，即可以保护萜烯类和***二酚活性成分。

本发明实施例提供的微胶囊是由上述微胶囊的制备方法制备的，其含有较多的萜烯类和***二酚活性成分。

本发明实施例提供的化妆品包括上述的***二酚提取物或微胶囊，进而含有萜烯类和***二酚活性物质，以起到良好的皮肤修复效果。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种***花叶提取物的制备方法，其特征在于，包括：

将粉碎的、未干燥的***花叶和醇溶液混合，在温度小于或等于60℃的条件下，超声提取，得到原提取物。

2.根据权利要求1所述***花叶提取物的制备方法，其特征在于，还包括浓缩所述原提取物，再添加辛酸/癸酸甘油三酯，混合溶解后，待混合物油水分离，得到上层油状提取物。

3.根据权利要求2所述***花叶提取物的制备方法，其特征在于，在浓缩后的所述原提取物溶解于所述辛酸/癸酸甘油三酯后，添加盐水稀释，再静置，待油水分离，得到上层油状提取物。

4.一种***花叶提取物，其特征在于，其是由权利要求1-3任一项所述的***花叶提取物的制备方法制备的。

5.一种微胶囊的制备方法，其特征在于，包括：将β-环状糊精、***胶、单甘脂和权利要求4所述的***花叶提取物混合制成水溶液，均质后，喷雾干燥。

6.根据权利要求5所述的微胶囊的制备方法，其特征在于，将β-环状糊精、***胶、单甘脂和所述的***花叶提取物混合制成水溶液，具体包括：

将β-环状糊精溶液和***胶溶液混合，制得胶液；再将所述胶液于含有单甘脂的所述***花叶提取物混合。

7.一种微胶囊，其特征在于，其是由权利要求5或6所述的微胶囊的制备方法制备的。

8.一种化妆品，其特征在于，包括权利要求4所述的***花叶提取物或权利要求7所述的微胶囊。

9.根据权利要求8所述的化妆品，其特征在于，包括用量占所述化妆品的总量的10-50％的所述微胶囊。

10.根据权利要求8所述的化妆品，其特征在于，包括：所述微胶囊、辅酶Q10、大豆卵磷脂、生育酚乙酸酯、迷迭香精油和荷荷芭油；或者，

所述微胶囊、增稠剂、保湿剂、增溶剂、香精和防腐剂；或者，

所述微胶囊、乳化剂、润肤剂、保湿剂、香精和防腐剂。

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