CN110754299A - 一种瓶栽培育茯苓菌核的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种瓶栽培育茯苓菌核的方法。本发明以瓶栽培茯苓菌核，用木屑(可以是杉木屑和杂木屑)为茯苓菌核生长载体，实现了茯苓菌核不用聚乙烯袋和松木的室内栽培技术，为茯苓菌核形成研究提供了方法，为菌核生产提供技术,同时有利于充分利用各种木料的尾料，又环保无污染，能带来良好的生态效应。

Description

一种瓶栽培育茯苓菌核的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及一种瓶栽培育茯苓菌核的方法。
背景技术
目前培育茯苓菌核采取的方法有袋料栽培法(CN101731100A公开的茯苓袋料栽培方法)、段木栽培法(专利CN110419385A和CN108934761A等)和依赖松树兜的生料栽培(专利CN105309201A公开的一种茯苓生料栽培方法)等，段木栽培法需使用松木材，不仅成本高，而且会造成松林资源的破坏；生料栽培需要有砍伐后残留的松树兜。使用袋料栽培法可以采用木屑作为培养基质，解决了上述问题，但是采用袋料栽培法的问题在于除了接种茯苓菌株外还需接种鲜茯苓菌核块作为新生菌核的“原基”，而茯苓新鲜菌核块取材受限，且栽种步骤繁琐，经本人试验如果不接种新鲜的茯苓菌核块作为新生菌核的“原基”，菌核形成率仅仅60％左右，而且存在白色污染的问题。此外上述栽种方法均需要完全埋在土壤内，即难以形成立体化的现代化栽培体系。
目前茯苓菌核的形成机制研究属于目前研究的难题，是哪些外界因素诱导茯苓菌核的形成暂未见报道，目前也并没有适应现代化立体的瓶栽技术出现。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明公开了一种瓶栽培育茯苓菌核的方法。本发明以瓶栽培茯苓菌核，用木屑(可以是杉木屑和杂木屑)为茯苓子菌核生长载体，实现了茯苓菌核不用聚乙烯袋、茯苓菌核和松木的栽培技术，既有利于充分各种木料的尾料，降低了培养成本又环保无污染，能带来良好的生态效应。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种瓶栽培育茯苓菌核的方法，包括如下步骤：
步骤一、将茯苓菌种于固体培养基中培养，至获得茯苓菌丝体；
步骤二、将茯苓菌丝体接种在茯苓菌核培养基中至茯苓菌丝长满茯苓菌核培养基，茯苓菌核培养基处于组培瓶中，备用；
步骤三、将沙子高温灭菌得到无菌沙子，无菌沙子冷却后放置于组培瓶中，覆盖茯苓菌核培养基，覆盖高度为4-6cm，然后将茯苓菌核培养基置于28-30℃条件下暗培养10-15天，使茯苓菌核培养基中茯苓菌丝长入细沙中1-3cm，备用；
步骤四、取土壤，加入组培瓶中，覆盖在无菌沙子上，覆盖的土壤层高度为3-5cm，然后组培瓶置于25-35℃条件下暗培养，每隔一周，补加水至组培瓶的最上层的土壤上，培养60天以上，至瓶内的茯苓菌核培养基中长出颗粒大小为3-8mm的小菌核，表皮褐色，内部组织呈米白色即得到茯苓菌核。
进一步的改进，所述固体培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
进一步的改进，所述茯苓菌核培养基包括基质和水；基质包括以重量计的木屑78％-80％，麸皮15％-19％，玉米1％-3％，白砂糖1％-3％，硫酸镁0.5％-1.5％，硫酸钙0.2％-0.5％。
进一步的改进，所述基质与水的质量比为1:3；基质和水一起加至组培瓶容积的1/3，然后121℃灭菌2h冷却即得到无菌的茯苓菌核培养基。
进一步的改进，所述步骤三中将沙子160-170℃干热灭菌2h后得到无菌沙子。
进一步的改进，所述步骤一中，所述茯苓菌种为从茯苓菌核中组织分离的茯苓菌株；采用组织分离法从茯苓菌核中取0.5cm*0.5cm的小块组织，置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，25℃-28℃培养，获得茯苓菌丝体，备用。
进一步的改进，所述土壤为马尾松树林5-10cm深处的土壤。
附图说明
图1为本发明流程图；
图2为实施例1与对比例4的对比图，其中图中左侧为对比例4的培养图，图中右侧为实施例1的培养图。
图3和图4为本发明培养出的茯苓菌核图，茯苓菌核见图中箭头所示。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
一种瓶栽培育茯苓菌核的方法，利用沙子和土壤诱导培育茯苓菌核的方法，其茯苓菌核固体培养基的原料由木屑(可以是松木屑、杉木屑和杂木屑等)、麸皮、玉米、白砂糖、硫酸镁、硫酸钙和水组成。各原料的加入量是木屑78％-80％，麸皮15％-19％，玉米1％-3％，白砂糖1％-3％，硫酸镁0.5％-1.5％，硫酸钙0.2％-0.5％；砂子需干热灭菌；土壤为马尾松树林土壤层5-10cm处的土壤；茯苓菌种为从茯苓菌核中组织分离的茯苓菌株；
步骤一、采用组织分离法从茯苓菌核中取小块组织，置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，25℃-28℃培养，获得茯苓菌丝体，备用；
步骤二、在组培瓶内加入木屑，麸皮，玉米，白砂糖，硫酸镁，硫酸钙和水，料液比为1:3，装量为容积的1/3，121℃灭菌2h冷却得到无菌的茯苓菌核培养基，接种直径为5-8mm的含茯苓菌丝的菌饼一块，在25-28℃条件下暗培养，培养15-20天，使茯苓菌丝长满固体培养基，备用；
步骤三、沙子，160-170℃干热灭菌2h冷却后，加入上述已长满茯苓菌丝的组培瓶中，覆盖茯苓菌核培养基，覆盖高度为4-6cm，置于28-30℃条件下暗培养，培养10-15天，使组培瓶中茯苓菌丝长入细沙中1-3cm，备用；
步骤四、取马尾松树林5-10cm处的土壤，加入步骤三的组培瓶中，覆盖在无菌细沙上，覆盖的土壤层高度为3-5cm，置于25-35℃条件下暗培养，每隔一周，补加自来水至组培瓶的最上层的土壤上，培养60天以上，瓶内的茯苓菌核培养基中可长出颗粒大小为3-8mm的小菌核，表皮褐色，内部组织呈米白色。
按照上述方法培养100瓶，其中有89瓶有茯苓菌核形成，茯苓菌核培养成功率达到90％左右，因此为茯苓菌核的瓶栽式立体培养提供了指导。
对比例1：在与实施例1其余步骤相同的基础上，所覆盖的沙子改为生沙子(未经160-170℃干热灭菌的)，发现无菌核形成。
对比例2：在与实施例1其余步骤相同的基础上，不覆盖土壤，发现无菌核形成。
对比例3：在与实施例1其余步骤相同的基础上，不覆盖沙子，发现无菌核形成；
对比例4：在与实施例1其余步骤相同的基础上，既不覆盖沙子，又不覆盖土壤，发现无菌核形成。
对比例5：在与CN101731100A公开的茯苓袋料栽培方法其余步骤相同的基础上，不接种新鲜的茯苓菌核块作为新生菌核的“原基”，种植八窖，每窖五袋，仅仅有25袋形成菌核，形成率仅为60％左右。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但并不仅仅限于说明书和实施方案中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里所示出叙述。

Claims (6)

1.一种瓶栽培育茯苓菌核的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、将茯苓菌种于固体培养基中培养，至获得茯苓菌丝体；
步骤二、将茯苓菌丝体接种在茯苓菌核培养基中至茯苓菌丝长满茯苓菌核培养基，茯苓菌核培养基处于组培瓶中，备用；
步骤三、将沙子高温灭菌得到无菌沙子，无菌沙子冷却后放置于组培瓶中，覆盖茯苓菌核培养基，覆盖高度为4-6cm，然后将茯苓菌核培养基置于28-30℃条件下暗培养10-15天，使茯苓菌核培养基中茯苓菌丝长入细沙中1-3cm，备用；
步骤四、取土壤，加入组培瓶中，覆盖在无菌沙子上，覆盖的土壤层高度为3-5cm，然后组培瓶置于25-35℃条件下暗培养，每隔一周，补加水至组培瓶的最上层的土壤上，培养60天以上，至瓶内的茯苓菌核培养基中长出颗粒大小为3-8mm的小菌核，表皮褐色，内部组织呈米白色即得到茯苓菌核。
2.如权利要求1所述的瓶栽培育茯苓菌核的方法，其特征在于，所述固体培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
3.如权利要求1所述的瓶栽培育茯苓菌核的方法，其特征在于，所述茯苓菌核培养基包括基质和水；基质包括以重量计的木屑78％-80％，麸皮15％-19％，玉米1％-3％，白砂糖1％-3％，硫酸镁0.5％-1.5％，硫酸钙0.2％-0.5％。
4.如权利要求3所述的瓶栽培育茯苓菌核的方法，其特征在于，所述基质与水的质量比为1:3；基质和水一起加至组培瓶容积的1/3，然后121℃灭菌2h冷却即得到无菌的茯苓菌核培养基。
5.如权利要求1所述的瓶栽培育茯苓菌核的方法，其特征在于，所述步骤三中将沙子160-170℃干热灭菌2h后得到无菌沙子。
6.如权利要求1所述的瓶栽培育茯苓菌核的方法，其特征在于，所述土壤为马尾松树林5-10cm深处的土壤。
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