CN110709423A - 用icos激动剂和ox40激动剂治疗癌症的组合疗法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了治疗有需要的患者中的癌症的方法，所述方法包括向所述患者依次施用有效量的针对人ICOS的药剂和有效量的针对人OX40的药剂。本发明还提供了抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其依次用于治疗有需要的人中的癌症。

Description

用ICOS激动剂和OX40激动剂治疗癌症的组合疗法
发明领域
本发明总体涉及治疗人疾病的免疫疗法。更具体地，本发明涉及免疫调节剂诸如抗ICOS抗体和抗OX40抗体的依序给药在癌症治疗中的用途。
发明背景
癌症免疫是多步骤过程，其被一系列负免疫检查点和正共刺激受体(其当有效触发时可以实现抗肿瘤应答)严格调控(Mellman, I., 等人 (2011) Cancer ImmunotherapyComes of Age. Nature 480(7378), 480-489)。然而，肿瘤已经建立各种机制来通过改变免疫浸润物的应答性来规避免疫清除。在一些情况下，肿瘤将高度依赖于单一机制，并且在这些情况下，有可能用单药免疫调节疗法实现显著的临床活性(Hoos, A. (2016).Development of immuno-oncology drugs - from CTLA4 to PD1 to the nextgenerations. Nat Rev Drug Discov. 15(4), 235-47)。然而，由于肿瘤经常利用多种、重叠和冗余的机制来阻断抗肿瘤免疫应答，因此可能需要组合疗法以在各种各样的肿瘤类型间获得持久的效力。因此，需要新的免疫靶向疗法来改善所有癌症的治疗。
因此，需要用于治疗疾病、特别是癌症的免疫调节剂的给药的组合治疗和策略。
附图简述
图1是一组图，其显示OX40+ CD4和CD8 T细胞中的抗ICOS抗体(H2L5 IgG4PE)浓度依赖性增加。
图2是一组图，其显示在用癌症患者PBMC的体外测定中，抗ICOS抗体(H2L5IgG4PE)处理增加OX40+ CD4和CD8 T细胞。
图3是一组图，其显示抗ICOS抗体(H2L5 IgG4PE)处理增加扩增的TIL培养物中的OX40+ CD4和CD8 T细胞。
图4是一组图，其显示抗OX40抗体处理增加血液中的ICOS+ CD4和CD8 T细胞，同时降低来自CT26的肿瘤中的ICOS+ CD4。
图5是一组图，其显示抗ICOS抗体处理增加来自携带CT26肿瘤的小鼠的血液中的OX40+ T细胞。
图6是一组图，其显示抗ICOS抗体处理增加来自CT26的血液中的OX40+ T-reg和CD4 T-效应子。
图7是一组图，其显示抗ICOS抗体处理增加来自CT26的肿瘤中的OX40+ ICOS- T-细胞。
图8是一组图，其显示huPBMC模型中来自ICOS治疗的A2058黑色素瘤肿瘤的血液和脾脏中的OX40+ T细胞的变化。
图9是表格和示意图，其显示本文所述的抗ICOS抗体(17G9克隆)/抗OX40抗体(OX86克隆)同时和分阶段给药研究的研究设计。
图10是一组图，其显示用100 µg抗ICOS抗体和100 µg抗OX40抗体组合(组6)、100µg抗OX40抗体(组3)和100 µg抗ICOS抗体(组4)治疗的组中的肿瘤体积和存活率。
图11是一组图，其显示用10 µg抗ICOS抗体和100 µg抗OX40抗体组合(组7)、100 µg抗OX40抗体(组3)和10 µg抗ICOS抗体(组5)治疗的组中的肿瘤体积和存活率。
图12一组图，其显示用分阶段给药抗ICOS抗体和抗OX40抗体(用100 µg抗OX40导入/100 µg抗ICOS后续(组9)和适当的对照(组8：100 µg抗OX40导入/100 µg IgG2b后续；组10：100 µg大鼠IgG1导入/100 µg抗ICOS后续)治疗的组的肿瘤体积和存活率。
图13显示表达ICOS和OX40双重阳性T细胞的肿瘤的图和表格。
图14是显示基于TME中的区域进一步分离肿瘤的图。
图15A-15D是显示肿瘤中T-reg和CD8上的ICOS和OX40表达的图。图15A显示各种肿瘤中的表达ICOS的T调节细胞的比例。图15B显示各种肿瘤中的表达OX40的T调节细胞的比例。图15C显示各种肿瘤中的表达ICOS的细胞毒性T细胞的比例。图15D显示各种肿瘤中的表达OX40的细胞毒性T细胞的比例。
图16：106-222、人源化106-222 (Hu106)和人受体X61012 (GenBank登录号)VH序列的氨基酸序列的比对。
图17：106-222、人源化106-222 (Hu106)和人受体AJ388641 (GenBank登录号)VL序列的氨基酸序列的比对。
图18：侧接SpeI和HindIII位点的Hu106 VH基因的核苷酸序列与推导的氨基酸序列。
图19：侧接NheI和EcoRI位点的Hu106-222 VL基因的核苷酸序列与推导的氨基酸序列。
图20：119-122、人源化119-122 (Hu119)和人受体Z14189 (GenBank登录号)VH序列的氨基酸序列的比对。
图21：119-122、人源化119-122 (Hu119)和人受体M29469 (GenBank登录号) VL序列的氨基酸序列的比对。
图22：侧接SpeI和HindIII位点的Hu119 VH基因的核苷酸序列与推导的氨基酸序列。
图23：侧接NheI和EcoRI位点的Hu119 VL基因的核苷酸序列与推导的氨基酸序列。
图24：小鼠119-43-1VH cDNA的核苷酸序列与推导的氨基酸序列。
图25：小鼠119-43-1 VL cDNA的核苷酸序列和推导的氨基酸序列。
图26：设计的侧接Spel和Hindlll位点的119-43-1 VH基因的核苷酸序列与推导的氨基酸序列。
图27：设计的侧接Nhel和EcoRI位点的119-43-1 VL基因的核苷酸序列与推导的氨基酸序列。
发明概述
在一个方面，本发明提供了治疗有需要的患者中的癌症的方法，其包括向所述患者依次施用有效量的针对人ICOS的药剂和有效量的针对人OX40的药剂。在一个实施方案中，在施用针对人ICOS的药剂之后，施用针对人OX40的药剂。在另一个实施方案中，在施用针对人OX40的药剂之后，施用针对人ICOS的药剂。在一个实施方案中，针对人ICOS的药剂是ICOS激动剂抗体。在一个实施方案中，针对人OX40的药剂是OX40激动剂抗体。
在一个方面，本发明提供了抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其依次用于治疗有需要的人中的癌症。在一个实施方案中，在施用抗ICOS抗体或其抗原结合片段之后，施用抗OX40抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方案中，在施用抗OX40抗体或其抗原结合片段之后，施用抗ICOS抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，所述抗ICOS抗体是ICOS激动剂抗体。在一个实施方案中，所述抗OX40抗体是OX40激动剂抗体。
发明详述
定义
如本文所用，“ICOS”意指任何诱导型T-细胞共刺激蛋白。ICOS(诱导型T-细胞共刺激剂)的替代名称包括AILIM；CD278；CVID1、JTT-1或JTT-2、MGC39850或8F4。ICOS是在活化的T细胞上表达的CD28-超家族共刺激性分子。由该基因编码的蛋白属于CD28和CTLA-4细胞表面受体家族。其形成同型二聚体并在细胞-细胞信号传导、免疫应答和细胞增殖的调节中发挥重要作用。人ICOS(同种型2)(登录号: UniProtKB - Q9Y6W8-2)的氨基酸序列下面如SEQID NO:39所示。
Figure 476808DEST_PATH_IMAGE001
人ICOS(同种型1)(登录号: UniProtKB - Q9Y6W8-1)的氨基酸序列下面如SEQ IDNO:48所示。
Figure 811974DEST_PATH_IMAGE002
ICOS的活化经由通过ICOS-L(B7RP-1/B7-H2)的结合而发生。B7-1和B7-2(CD28和CTLA4的配体)都不结合或活化ICOS。然而，已经显示ICOS-L微弱结合CD28和CTLA-4两者(Yao S等人, “B7-H2 is a costimulatory ligand for CD28 in human”, Immunity, 34(5); 729-40 (2011))。ICOS的表达似乎限于T细胞。ICOS表达水平在不同的T细胞亚群和T细胞活化状态之间变化。已经显示ICOS表达在静息TH17、T滤泡辅助(TFH)和调节性T(Treg)细胞上；然而，不同于CD28；ICOS在幼稚TH1和TH2效应子T-细胞群体上并不高度表达(PaulosCM等人, “The inducible costimulator (ICOS) is critical for the development ofhuman Th17 cells”, Sci Transl Med, 2(55); 55ra78 (2010))。在通过TCR接合而活化后，ICOS表达在CD4+和CD8+效应T-细胞上被高度诱导(Wakamatsu E,等人, “Convergentand divergent effects of costimulatory molecules in conventional andregulatory CD4+ T cells”, Proc Natal Acad Sci USA, 110(3); 1023-8 (2013))。通过ICOS受体的共刺激信号传导仅发生在接受同时TCR活化信号的T细胞中(Sharpe AH和Freeman GJ. “The B7-CD28 Superfamily”, Nat. Rev Immunol, 2(2); 116-26(2002))。在活化的抗原特异性T细胞中，ICOS调节TH1和TH2细胞因子(包括IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-4、IL-13和其他)的产生。ICOS也刺激效应T细胞增殖，尽管程度小于CD28(Sharpe AH和Freeman GJ. “The B7-CD28 Superfamily”, Nat. Rev Immunol, 2(2);116-26 (2002))。针对ICOS的抗体及其在疾病治疗中的使用方法描述于例如WO2012/131004、US20110243929和US20160215059中。US20160215059通过引用并入本文。具有激动剂活性的针对人ICOS的鼠抗体的CDR显示于PCT/EP2012/055735 (WO 2012/131004)中。针对ICOS的抗体也公开于WO 2008/137915、WO 2010/056804、EP 1374902、EP1374901和EP1125585中。针对ICOS的激动剂抗体或ICOS结合蛋白公开于WO2012/13004、WO2014/033327、WO2016/120789、US20160215059和US20160304610中。US2016/0304610中的示例性抗体包括37A10S713。37A10S713的序列在下面作为SEQ ID NO: 49-56再现。
“针对ICOS的药剂”意指能够结合ICOS的任何化学化合物或生物分子。在一些实施方案中，针对ICOS的药剂是ICOS结合蛋白。在一些其他实施方案中，针对ICOS的药剂是ICOS激动剂。
如本文所用的术语“ICOS结合蛋白”是指能够结合ICOS的抗体和其他蛋白构建体，诸如结构域。在一些情况下，ICOS是人ICOS。术语“ICOS结合蛋白”可以与“ICOS抗原结合蛋白”可互换使用。因此，如本领域中所理解，抗ICOS抗体和/或ICOS抗原结合蛋白将被认为是ICOS结合蛋白。如本文所用，“抗原结合蛋白”是结合抗原(诸如ICOS)的任何蛋白，包括但不限于本文所述的抗体、结构域和其他构建体。如本文所用，ICOS结合蛋白的“抗原结合部分”将包括能够结合ICOS的ICOS结合蛋白的任何部分，包括但不限于抗原结合抗体片段。
在一个实施方案中，本发明的ICOS抗体包含以下CDR中的任何一个或组合：
Figure 557393DEST_PATH_IMAGE004
Figure 55371DEST_PATH_IMAGE005
Figure 827018DEST_PATH_IMAGE006
。
在一些实施方案中，本发明的抗ICOS抗体包含重链可变区，其与SEQ ID NO:46具有至少90%序列同一性。合适地，本发明的ICOS结合蛋白可包含重链可变区，其与SEQ IDNO:46具有约85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。
人源化重链(VH)可变区(H2)：
Figure 715339DEST_PATH_IMAGE007
。
在本发明的一个实施方案中，所述 ICOS抗体在具有SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列的轻链可变区中包含CDRL1 (SEQ ID NO:43)、CDRL2 (SEQ ID NO:44)和CDRL3 (SEQID NO:45)。包含SEQ ID NO:47中所示的人源化轻链可变区的本发明的ICOS结合蛋白被命名为“L5”。因此，包含SEQ ID NO:46的重链可变区和SEQ ID NO:47的轻链可变区的本发明的ICOS结合蛋白在本文中可被命名为H2L5。
在一些实施方案中，本发明的ICOS结合蛋白包含轻链可变区，其与SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列具有至少90%序列同一性。合适地，本发明的ICOS结合蛋白可包含轻链可变区，其与SEQ ID NO:47具有约85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。
人源化轻链(VL)可变区(L5)
Figure 597845DEST_PATH_IMAGE008
。
CDR或最小结合单元可以通过至少一个氨基酸取代、缺失或添加进行修饰，其中变体抗原结合蛋白基本上保留未修饰蛋白(诸如包含SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47的抗体)的生物学特性。
应理解，CDR H1、H2、H3、L1、L2、L3各自都可以单独或与任何其他CDR组合以任何排列或组合进行修饰。在一个实施方案中，通过取代、缺失或添加最多达3个氨基酸(例如1或2个氨基酸，例如1个氨基酸)来修饰CDR。典型地，所述修饰是取代，尤其是保守取代，例如如下表1中所示。
表1
侧链 成员
疏水的 Met、Ala、Val、Leu、Ile
中性亲水的 Cys、Ser、Thr
酸性的 Asp、Glu
碱性的 Asn、Gln、His、Lys、Arg
影响链取向的残基 Gly、Pro
芳族的 Trp、Tyr、Phe
抗体的亚类部分决定次级效应子功能，诸如补体活化或Fc受体(FcR)结合和抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)(Huber,等人, Nature 229(5284): 419-20 (1971);Brunhouse,等人, Mol Immunol 16(11): 907-17 (1979))。在鉴定用于具体应用的最佳抗体类型中，可以考虑抗体的效应子功能。例如，hIgG1抗体具有相对长的半衰期，在固定补体方面非常有效，并且它们结合FcγRI和FcγRII结两者。相比之下，人IgG4抗体具有较短的半衰期，不固定补体并且对FcR具有较低的亲和力。在IgG4的Fc区中用脯氨酸替代丝氨酸228(S228P)降低用hIgG4观察到的异质性并延长血清半衰期(Kabat,等人, “Sequences ofproteins of immunological interest” 5.sup.th Edition (1991); Angal,等人, MolImmunol 30(1): 105-8 (1993))。用谷氨酸替代亮氨酸235(L235E)的第二个突变消除残余FcR结合和补体结合活性(Alegre, 等人, J Immunol 148(11): 3461-8 (1992))。所得的具有两个突变的抗体被称为IgG4PE。hIgG4氨基酸的编号源自EU编号参考资料：Edelman,G.M.等人, Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969). PMID: 5257969。 在本发明的一个实施方案中，ICOS抗体是IgG4同种型。在一个实施方案中，ICOS抗体包含IgG4 Fc区，所述IgG4 Fc区包含替代S228P和L235E，可以具有名称IgG4PE。在一个实施方案中，ICOS抗体是H2L5 IgG4PE。
如本文所用，“ICOS-L”和“ICOS配体”可互换使用，并且是指人ICOS的膜结合的天然配体。ICOS配体是在人中由ICOSLG基因编码的蛋白。ICOSLG也已被命名为CD275(分化簇275)。ICOS-L的替代名称包括B7RP-1和B7-H2。
如本文所用，“针对OX40的药剂”或“针对OX-40的药剂”意指能够结合OX40的任何化学化合物或生物分子。在一些实施方案中，针对OX40的药剂是OX40激动剂。在一些实施方案中，针对OX40的药剂是OX40结合蛋白。
如本文所用的术语“OX40结合蛋白”是指能够结合OX40的抗体和其他蛋白构建体，诸如结构域。在一些情况下，所述OX40是人OX40。术语“OX40结合蛋白”可以与“OX40抗原结合蛋白”可互换使用。因此，如本领域中所理解，抗OX40抗体和/或OX40抗原结合蛋白将被认为是OX40结合蛋白。如本文所用，“抗原结合蛋白”是结合抗原、诸如OX40的任何蛋白，包括但不限于本文所述的抗体、结构域和其他构建体。如本文所用，OX40结合蛋白的“抗原结合部分”将包括能够结合OX40的OX40结合蛋白的任何部分，包括但不限于，抗原结合抗体片段。
CD134，也称为OX40，是受体的TNFR-超家族的成员，与CD28不同，其不会在静息幼稚T细胞上组成型表达。OX40是次级共刺激分子，在活化后24至72小时后表达；其配体OX40L也不在静息的抗原呈递细胞上表达，但在其活化后。OX40的表达依赖于T细胞的完全活化；没有CD28的情况下，OX40的表达被延迟并且水平降低四倍。OX40/OX40-配体(OX40受体)/(OX40L)是对于T细胞增殖、存活、细胞因子产生和记忆细胞生成至关重要的一对共刺激分子。早期体外实验表明，通过OX40在CD4+ T细胞上的信号传导导致TH2发育，而不导致TH1发育。这些结果得到体内研究的支持，所述体内研究显示阻断OX40/OX40L相互作用阻止TH2介导的过敏性免疫应答的诱导和维持。然而，阻断OX40/OX40L相互作用改善或预防TH1介导的疾病。此外，显示施用可溶性OX40L或将OX40L基因转移至肿瘤中强烈地增强小鼠中的抗肿瘤免疫。最近的研究还表明，OX40/OX40L可以在促进CD8 T细胞介导的免疫应答中发挥作用。如本文所讨论，OX40信号传导阻断CD4+ CD25+天然存在的调节性T细胞的抑制功能，并且OX40/OX40L对在外周免疫相比于耐受的整体调节中发挥关键作用。OX-40抗体、OX-40融合蛋白及其使用方法公开于美国专利号：US 7,504,101；US 7,758,852；US 7,858,765；US 7,550,140；US 7,960,515；和US 9,006,399和国际公开：WO 2003082919；WO 2003068819；WO2006063067；WO 2007084559；WO 2008051424；WO2012027328；和WO2013028231。
在本文中，本发明的抗原结合蛋白(ABP)或抗OX40抗原结合蛋白是结合OX40的蛋白，并且在一些实施方案中，进行以下中的一种或多种：通过OX40调节信号传导，调节OX40的功能，激动OX40信号传导，刺激OX40功能或共同刺激OX40信号传导。美国专利9,006,399的实施例1公开了OX40结合测定。本领域技术人员将容易地认识到各种其他众所周知的测定法来建立此类功能。
在一个实施方案中，OX40抗原结合蛋白是WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)(国际申请日2011年8月23日)中公开的OX40抗原结合蛋白。在另一个实施方案中，所述抗原结合蛋白包含WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)(国际申请日2011年8月23日)中公开的抗体的CDR，或与公开的CDR序列具有90％同一性的CDR。在一个进一步实施方案中，所述抗原结合蛋白包含WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)(国际申请日2011年8月23日)中公开的抗体的VH、VL或两者，或与公开的VH或VL序列具有90%同一性的VH或VL。
在另一个实施方案中，所述OX40抗原结合蛋白公开于WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)(国际申请日2012年2月9日)。在另一个实施方案中，所述抗原结合蛋白包含WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)(国际申请日2012年2月9日)中公开的抗体的CDR，或与公开的CDR序列具有90%同一性的CDR。在一个进一步实施方案中，所述抗原结合蛋白包含WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)(国际申请日2012年2月9日)中公开的抗体的VH、VL或两者，或与公开的VH或VL序列具有90%同一性的VH或VL。
在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含本文的图16至27中显示的CDR或VH或VL序列中的一个或多个，或与其具有90%同一性的序列。
在一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含以下CDR中的任何一个或组合：
Figure 950329DEST_PATH_IMAGE009
。
在一些实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含重链可变区，其与SEQ IDNO:5具有至少90%序列同一性。合适地，本发明的OX40结合蛋白包含重链可变区，其与SEQID NO:5具有约85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。
人源化重链(VH)可变区：
。
在本发明的一个实施方案中，所述OX40 ABP或抗体在具有SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的轻链可变区中包含CDRL1 (SEQ ID NO:7)、CDRL2 (SEQ ID NO:8)和CDRL3(SEQ ID NO:9)。在一些实施方案中，本发明的OX40结合蛋白包含SEQ ID NO:11中所示的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的OX40结合蛋白包含SEQ ID NO:5的重链可变区和SEQ ID NO:11的轻链可变区。
人源化轻链(VL)可变区
Figure 689111DEST_PATH_IMAGE012
。
在一些实施方案中，本发明的OX40结合蛋白包含轻链可变区，其与SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列具有至少90%序列同一性。合适地，本发明的OX40结合蛋白可包含轻链可变区，其与SEQ ID NO:11具有约85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。
在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含以下CDR中的任何一个或组合：
Figure 161681DEST_PATH_IMAGE013
。
在一些实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含重链可变区，其与SEQ IDNO:17具有至少90%序列同一性。合适地，本发明的OX40结合蛋白可包含重链可变区，其与SEQ ID NO:17具有约85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。
人源化重链(VH)可变区：
。
在本发明的一个实施方案中，所述OX40 ABP或抗体在具有SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的轻链可变区中包含CDRL1 (SEQ ID NO:19)、CDRL2 (SEQ ID NO:20)和CDRL3(SEQ ID NO:21)。在一些实施方案中，本发明的OX40结合蛋白包含SEQ ID NO:23中所示的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的OX40结合蛋白包含SEQ ID NO:17的重链可变区和SEQ ID NO:23的轻链可变区。
人源化轻链(VL)可变区
。
在一些实施方案中，本发明的OX40结合蛋白包含轻链可变区，其与SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列具有至少90%序列同一性。合适地，本发明的OX40结合蛋白可包含轻链可变区，其与SEQ ID NO:23具有约85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性。
CDR或最小结合单元可以通过至少一个氨基酸取代、缺失或添加进行修饰，其中变体抗原结合蛋白基本上保留未修饰蛋白(诸如包含SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:11的抗体或包含SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:23的抗体)的生物学特性。
应理解，CDR H1、H2、H3、L1、L2、L3各自都可以单独或与任何其他CDR组合以任何排列或组合进行修饰。在一个实施方案中，通过取代、缺失或添加最多达3个氨基酸(例如1或2个氨基酸，例如1个氨基酸)来修饰CDR。典型地，所述修饰是取代，尤其是保守取代，例如如表1中所示。
在一个实施方案中，本发明的ABP或抗体包含例如本文的图16-17的106-222抗体的CDR，例如分别具有如图16中所公开的SEQ ID NO 1、2和3中所示的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和例如分别具有如SEQ ID NO 7、8和9中所示的序列的CDRL1、CDRL2和CDRL3。在一个实施方案中，本发明的ABP或抗体包含如WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)(国际申请日2011年8月23日)中所公开的106-222、Hu106或Hu106-222抗体的CDR。在一个进一步实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含如本文的图16-17中所示的106-222抗体的VH和VL区域，例如，具有如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的VH和如图17中具有如SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的VH。在另一个实施方案中，本发明的ABP或抗体包含具有如本文的图16中的SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的VH，和具有如本文的图17中的SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的VL。在一个进一步实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含如WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)(国际申请日2011年8月23日)中所公开的Hu106-222抗体或106-222抗体或Hu106抗体的VH和VL区域。在一个进一步实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体是106-222、Hu106-222或Hu106，例如，如WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)(国际申请日2011年8月23日)中所公开。在一个进一步实施方案中，本发明的ABP或抗体包含与本段落中的序列具有90%同一性的CDR或VH或VL或抗体序列。
在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含例如本文的图20-21的119-122抗体的CDR，例如，分别具有如SEQ ID NO 13、14和15中所示的氨基酸序列的CDRH1、CDRH2和CDRH3。在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含如WO2012/027328(PCT/US2011/048752)(国际申请日2011年8月23日)中所公开的119-122或Hu119或Hu119-222抗体的CDR。在一个进一步实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含具有如本文的图20中的SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的VH，和具有如本文的图21中所示的SEQ IDNO:22中所示的氨基酸序列的VL。在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含具有如SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的VH，和具有如SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的VL。在一个进一步实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含如WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)(国际申请日2011年8月23日)中所公开的119-122或Hu119或Hu119-222抗体的VH和VL区域。在一个进一步实施方案中，本发明的ABP或抗体是119-222或Hu119或Hu119-222抗体，例如，如WO2012/027328 (PCT/US2011/048752)(国际申请日2011年8月23日)中所公开。在一个进一步实施方案中，本发明的ABP或抗体包含与本段落中的序列具有90%同一性的CDR或VH或VL或抗体序列。
在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含119-43-1抗体的CDR，例如，如本文的图24-25中所示。在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含如WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)(国际申请日2012年2月9日)中所公开的119-43-1抗体的CDR。在一个进一步实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含如图24-27中所示的119-43-1抗体的VH区之一和VL区之一。在一个进一步实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含如WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)(国际申请日2012年2月9日)中所公开的119-43-1抗体的VH和VL区域。在一个进一步实施方案中，本发明的ABP或抗体是如本文的图24-27中所公开的119-43-1或119-43-1嵌合体。在一个进一步实施方案中，本发明的ABP或抗体如WO2013/028231 (PCT/US2012/024570)(国际申请日2012年2月9日)中所公开。在进一步实施方案中，将本段落中描述的ABP或抗体中的任一种人源化。在进一步实施方案中，将本段落中描述的ABP或抗体中的任一种工程改造以制备人源化抗体。在一个进一步实施方案中，本发明的ABP或抗体包含与本段落中的序列具有90%同一性的CDR或VH或VL或抗体序列。
在另一个实施方案中，将本发明的任何抗OX40 ABP或抗体的任何小鼠或嵌合序列工程改造以制备人源化抗体。
在一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含：包含SEQ ID NO:1或13的氨基酸序列的重链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:2或14的氨基酸序列的重链可变区CDR2；和/或包含SEQ ID NO:3或15的氨基酸序列的重链可变区CDR3，或与其具有90%同一性的重链可变区CDR。
在又另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含：包含SEQ ID NO:7或19的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包含SEQ ID NO:8或20的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，和/或包含SEQ ID NO:9或21的氨基酸序列的轻链可变区CDR3，或与其具有90%同一性的重链可变区。
在一个进一步实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含：轻链可变区(“VL”)，其包含SEQ ID NO:10、11、22或23的氨基酸序列或与SEQ ID NO:10、11、22或23的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含重链可变区(“ VH”)，其包含SEQ ID NO:4、5、16和17的氨基酸序列或与SEQ ID NO:4、5、16和17的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含SEQ ID NO:5的可变重链序列和SEQ ID NO:11的可变轻链序列或与其具有90%同一性的序列。在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含SEQ IDNO:17的可变重链序列和SEQ ID NO:23的可变轻链序列或与其具有90%同一性的序列。
在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含由SEQ ID NO:12或24的核酸序列或与SEQ ID NO:12或24的核苷酸序列具有至少90%同一性的核酸序列编码的可变轻链。在另一个实施方案中，本发明的抗OX40 ABP或抗体包含由SEQ ID NO:6或18的核酸序列或与SEQ ID NO:6或18的核苷酸序列具有至少90%同一性的核酸序列编码的可变重链。
本文还提供了单克隆抗体。在一个实施方案中，所述单克隆抗体包含可变轻链，所述可变轻链包含SEQ ID NO:10或22的氨基酸序列或与SEQ ID NO:10或22的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。进一步提供了包含可变重链的单克隆抗体，所述可变重链包含SEQ ID NO:4或16的氨基酸序列或与SEQ ID NO:4或16的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。
如本文所用，术语“激动剂”是指抗原结合蛋白（包括但不限于抗体），其在与共同信号传导受体接触后引起以下中的一种或多种：(1)刺激或活化受体；(2)增强、增加或促进、诱导或延长受体的活性、功能或存在；和/或(3)增强、增加、促进或诱导受体的表达。可以通过本领域中已知的各种测定法在体外测量激动剂活性，所述测定法诸如但不限于测量细胞信号传导、细胞增殖、免疫细胞活化标志物、细胞因子产生。还可以通过测量替代终点(诸如但不限于测量T细胞增殖或细胞因子产生)的各种测定法在体内测量激动剂活性。
如本文所用，术语“拮抗剂”是指抗原结合蛋白（包括但不限于抗体），其在与共同信号传导受体接触后引起以下中的一种或多种：(1)减弱、阻断或失活受体和/或阻断其天然配体对受体的活化，(2)降低、减少或缩短受体的活性、功能或存在，和/或(3)降低、减少、消除受体的表达。可以通过本领域中已知的各种测定法在体外测量拮抗剂活性，所述测定法诸如但不限于测量细胞信号传导、细胞增殖、免疫细胞活化标志物、细胞因子产生的增加或减少。还可以通过测量替代终点(诸如但不限于测量T细胞增殖或细胞因子产生)的各种测定法在体内测量拮抗剂活性。
如本文所用，术语“交叉竞争结合”是指将与本发明的任何药剂竞争结合靶标的任何药剂，诸如抗体。两种抗体之间对结合的竞争可以通过本领域中已知的各种方法(包括流式细胞术、Meso Scale Discovery和ELISA)测试。可以直接测量结合，意味着可以将两种或更多种结合蛋白与共同信号传导受体接触，并且可以测量对一种或每种的结合。或者，可以针对结合或天然配体来测试目标分子的结合，并彼此进行定量比较。
如本文所用的术语“结合蛋白”是指能够结合抗原的抗体和其他蛋白构建体，诸如结构域。
术语“抗体”在本文中以最广泛意义使用来指具有免疫球蛋白样结构域(例如IgG、IgM、IgA、IgD或IgE)的分子，并且包括单克隆、重组、多克隆、嵌合、人、人源化、多特异性的抗体，包括双特异性抗体和异源缀合物抗体；单一可变结构域(例如VH、VHH、VL、结构域抗体(dAbTM))、抗原结合抗体片段、Fab、F(ab’)2、Fv、二硫化物连接的Fv、单链Fv、二硫化物连接的scFv、双抗体、TANDABS™等，以及上述任一种的修饰版本。
替代抗体形式包括替代骨架，其中抗原结合蛋白的一个或多个CDR可以被排列在合适的非免疫球蛋白支架或骨架上，诸如亲合体、SpA支架、LDL受体A类结构域、亲和多聚体(avimer)或EGF结构域。
术语“结构域”是指折叠的蛋白结构，其保留其独立于蛋白的其余部分的三级结构。通常，结构域负责蛋白的离散的功能特性，并且在许多情况下可以被添加、除去或转移至其他蛋白，而不损失蛋白和/或结构域的其余部分的功能。
术语“单一可变结构域”是指包含抗体可变结构域特征序列的折叠的多肽结构域。因此，其包括完整抗体可变结构域诸如VH、VHH和VL以及修饰的抗体可变结构域(例如，其中一个或多个环已经被抗体可变结构域的非特征序列替代)，或已被截短或包含N-或C-末端延伸的抗体可变结构域，以及至少保留全长结构域的结合活性和特异性的可变结构域的折叠片段。单一可变结构域能够独立于不同的可变区或结构域来结合抗原或表位。“结构域抗体”或“dAb(TM)”可以被认为与“单一可变结构域”相同。单一可变结构域可以是人的单一可变结构域，但也包括来自其他物种的单一可变结构域，诸如啮齿类铰口鲨和骆驼科VHHdAbsTM。骆驼科VHH是衍生自物种(包括骆驼、美洲驼、羊驼、单峰骆驼和原驼)的免疫球蛋白单一可变结构域多肽，其产生天然缺乏轻链的重链抗体。此类VHH结构域可以根据本领域中可得的标准技术人源化，并且此类结构域被认为是“单一可变结构域”。如本文所用，VH包括骆驼科VHH结构域。
可以通过在非抗体蛋白支架上布置一个或多个CDR来提供抗原结合片段。如本文所用的“蛋白支架”包括但不限于免疫球蛋白(Ig)支架，例如IgG支架，其可以是四链或二链抗体，或其可仅包含抗体的Fc区，或其可以包含来自抗体的一个或多个恒定区，所述恒定区可以是人或灵长类来源的，或者其可以是人和灵长类动物恒定区的人工嵌合体。
蛋白支架可以是Ig支架，例如IgG或IgA支架。IgG支架可以包含抗体的一些或全部结构域(即，CH1、CH2、CH3、VH、VL)。抗原结合蛋白可以包含选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgG4PE的IgG支架。例如，所述支架可以是IgG1。支架可以由抗体的Fc区组成或包含抗体的Fc区，或者是其一部分。
亲和力是一个分子(例如本发明的抗原结合蛋白)与另一分子(例如其靶抗原)在单一结合位点的结合强度。可以通过平衡方法(例如酶联免疫吸附测定(ELISA)或放射性免疫测定(RIA))或动力学(例如BIACORETM分析)来测定抗原结合蛋白与其靶标的结合亲和力。例如，实施例5中描述的BiacoreTM方法可用于测量结合亲和力。
亲合力(avidity)是两个分子在多个位点彼此结合的强度的总和，例如，考虑到相互作用的价数。
“分离的”意指将该分子，诸如抗原结合蛋白或核酸，从天然发现其的环境中移出。例如，分子可以从天然与其一起正常存在的物质中纯化出来。例如，样品中分子的质量可以是总质量的95%。
如本文所用的术语“表达载体”意指可用于将目标核酸引入细胞(诸如真核细胞或原核细胞)或无细胞表达***中的分离的核酸，其中目标核酸序列被表达为肽链，诸如蛋白。此类表达载体可以是例如包含目标核酸的粘粒、质粒、病毒序列、转座子和线性核酸。一旦将表达载体引入细胞或无细胞表达***(例如网织红细胞裂解物)中，由目标核酸编码的蛋白通过转录/翻译机制产生。本发明范围内的表达载体可为真核或原核表达提供必要的元件，并且包括病毒启动子驱动的载体，诸如CMV启动子驱动的载体(例如pcDNA3.1、pCEP4及其衍生物)、杆状病毒表达载体，果蝇表达载体；以及由哺乳动物基因启动子，诸如人Ig基因启动子驱动的表达载体。其他实例包括原核表达载体，诸如T7启动子驱动的载体(例如pET41)、乳糖启动子驱动的载体和***糖基因启动子驱动的载体。本领域普通技术人员将认识到许多其他合适的表达载体和表达***。
如本文所用的术语“重组宿主细胞”意指包含目标核酸序列的细胞，所述目标核酸序列在将其引入细胞之前被分离。例如，目标核酸序列可以在表达载体中，而细胞可以是原核的或真核的。示例性真核细胞是哺乳动物细胞，诸如但不限于COS-1、COS-7、HEK293、BHK21、CHO、BSC-1、HepG2、653、SP2/0、NS0、293、HeLa、骨髓瘤细胞、淋巴瘤细胞或其任何衍生物。最优选地，真核细胞是HEK293、NS0、SP2/0或CHO细胞。大肠杆菌是示例性原核细胞。根据本公开的重组细胞可以通过转染、细胞融合、永生化或本领域中众所周知的其他程序产生。转染入细胞的目标核酸序列，诸如表达载体，可以是染色体外的或被稳定整合至细胞的染色体中。
“嵌合抗体”是指一种类型的工程改造的抗体，其含有衍生自供体抗体的天然存在的可变区(轻链和重链)，其与衍生自受体抗体的轻链和重链恒定区缔合。
“人源化抗体”是指其CDR衍生自非人供体免疫球蛋白的一种类型的工程改造的抗体，该分子的剩余免疫球蛋白衍生部分衍生自一种或多种人免疫球蛋白。另外，可以改变框架支持残基以保持结合亲和力(参见例如，Queen等人 Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson,等人, Bio/Technology, 9:421 (1991))。合适的人受体抗体可以是通过与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性选自常规数据库、例如KABAT™数据库、Los Alamos数据库和Swiss Protein数据库的抗体。特征在于与供体抗体的框架区同源性(基于氨基酸)的人抗体可以合适于提供重链恒定区和/或重链可变框架区用于***供体CDR。可以类似的方式选择能够提供轻链恒定或可变框架区的合适的受体抗体。应当注意，不需要受体抗体的重链和轻链源于相同的受体抗体。现有技术描述了生产此类人源化抗体的几种方式-例如参见EP-A-0239400和EP-A-054951。
术语“完全人抗体”包括具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区(如果存在)的抗体。本发明的人序列抗体可以包括不被人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变引入的突变，或通过体内体细胞突变引入的突变)。完全人抗体包含仅由最终人来源的多核苷酸编码的氨基酸序列或与此类序列相同的氨基酸序列。如本文所意指，由***转基因小鼠中产生的小鼠基因组中编码人免疫球蛋白的DNA编码的抗体是完全人抗体，因为它们由最终为人来源的DNA编码。在这种情况下，编码人免疫球蛋白的DNA可以在小鼠内重排(以编码抗体)，并且也可以发生体细胞突变。由已经在小鼠中经历此类变化的原始人DNA编码的抗体是如本文所意指的完全人抗体。使用此类转基因小鼠使得可以针对人抗原选择完全人抗体。如本领域中所理解，可以使用噬菌体展示技术制备完全人抗体，其中将人DNA文库***包含人种系DNA序列的用于生成抗体的噬菌体中。
术语“供体抗体”是指将其可变区、CDR或其他功能片段或其类似物的氨基酸序列贡献给第一免疫球蛋白配偶体的抗体。因此，供体提供了改变的免疫球蛋白编码区，和所得的表达改变的抗体，其具有供体抗体特征性的抗原特异性和中和活性。
术语“受体抗体”是指与供体抗体异源的抗体，其向第一免疫球蛋白配偶体贡献编码其重链和/或轻链框架区和/或其重链和/或轻链恒定区的全部(或任何部分)氨基酸序列。人抗体可以是受体抗体。
如本文所用的术语“VH”和“VL”各自是指抗原结合蛋白的重链可变区和轻链可变区。
“CDR”被定义为抗原结合蛋白的互补决定区氨基酸序列。这些是免疫球蛋白重链和轻链的高可变区。在免疫球蛋白的可变部分中存在三个重链CDR(或CDR区)和三个轻链CDR(或CDR区)。因此，如本文所用的“CDR”是指全部三个重链CDR、全部三个轻链CDR、全部重链CDR和轻链CDR、或至少两个CDR。
在整个本说明书中，可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基根据Kabat编号惯例编号。类似地，实施例中使用的术语“CDR”、“CDRL1”、“CDRL2”、“CDRL3”、“CDRH1”、“CDRH2”、“CDRH3”遵循Kabat编号惯例。对于进一步信息，参见Kabat等人，Sequences ofProteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and HumanServices，National Institutes of Health(1991)。
对于本领域技术人员显而易见的是，存在可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基的替代编号惯例。也存在CDR序列的替代编号惯例，例如在Chothia等人(1989)Nature 342: 877-883中阐述的那些。抗体的结构和蛋白折叠可意味着其他残基被认为是CDR序列的一部分，且为本领域技术人员所理解为如此。
技术人员可获得的CDR序列的其他编号惯例包括“AbM”(University of Bath)和“接触(contact)”(University College London)方法。可使用Kabat、Chothia、AbM和接触方法中的至少两种确定最小重叠区域以提供“最小结合单元”。最小结合单元可以是CDR的子部分。
查询核酸序列和主题核酸序列之间的“同一性百分比”为“同一性”值，其表示为百分比，其是在进行成对BLASTN比对后，当主题核酸序列与查询核酸序列具有100%查询覆盖率时，通过BLASTN算法计算。查询核酸序列和主题核酸序列之间的此类成对BLASTN比对通过使用在National Center for Biotechnology Institute网站上可得的BLASTN算法的默认设置进行，其中关闭低复杂度区域的过滤器。
查询氨基酸序列和主题氨基酸序列之间的“同一性百分比”为“同一性”值，其表示为百分比，其是在进行成对BLASTNP比对后，当主题氨基酸序列与查询氨基酸序列具有100%查询覆盖率时，通过BLASTNP算法计算。查询氨基酸序列和主题氨基酸序列之间的此类成对BLASTNP比对通过使用在National Center for Biotechnology Institute网站上可得的BLASTNP算法的默认设置进行，其中关闭低复杂度区域的过滤器。
查询序列可以与主题序列具有100%同一性，或者与主题序列相比，其可以包括最多达特定整数数目的氨基酸或核苷酸改变，使得%同一性小于100%。例如，查询序列与主题序列具有至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。这种改变包括至少一个氨基酸缺失、取代(包括保守和非保守取代)或***，并且其中所述改变可以发生在查询序列的氨基或羧基末端位置，或那些末端位置之间的任何位置，其单独的散布在查询序列中的氨基酸或核苷酸间，或在查询序列内的一个或多个连续组中。
可以在查询序列的整个长度(包括CDR)上确定%同一性。或者，%同一性可以排除CDR，例如CDR与主题序列具有100%同一性，并且%同一性变化在查询序列的剩余部分中，使得CDR序列是固定的/完整的。
在一个方面，提供了治疗有需要的患者中的癌症的方法，其包括向所述患者依次施用有效量的针对人ICOS的药剂和有效量的针对人OX40的药剂。在一个实施方案中，在施用针对人OX40的药剂之前，施用针对人ICOS的药剂。在另一个实施方案中，在施用针对人ICOS的药剂之前，施用针对人OX40的药剂。在一个实施方案中，针对人ICOS的药剂是抗ICOS抗体或其抗原结合部分。在一个实施方案中，针对人OX40的药剂是抗OX40抗体或其抗原结合部分。
在一个方面，提供了抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其依次用于治疗有需要的人中的癌症。在一个实施方案中，在施用抗OX40抗体或其抗原结合片段之前，施用抗ICOS抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方案中，在施用抗ICOS抗体或其抗原结合片段之前，施用抗OX40抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面，提供了抗ICOS抗体或其抗原结合部分和抗OX40抗体或其抗原结合部分在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中依次施用抗ICOS抗体或其抗原结合部分和抗OX40抗体或其抗原结合部分，且其中在施用抗ICOS抗体或其抗原结合部分之后，施用抗OX40抗体或其抗原结合部分。
本发明还提供了编码本发明的抗ICOS抗体、抗OX40抗体或所述抗体中任一种的抗原结合部分的多核苷酸。在一个实施方案中，提供了宿主细胞，其包含编码本发明的抗ICOS抗体、抗OX40抗体或所述抗体中任一种的抗原结合部分的多核苷酸。本发明还提供了制备抗ICOS抗体、抗OX40抗体或所述抗体的抗原结合部分的方法，其包括以下步骤：a)在合适的条件下培养包含编码本发明的抗ICOS抗体、抗OX40抗体或所述抗体的抗原结合部分的多核苷酸的宿主细胞，以表达所述抗ICOS抗体、抗OX40抗体或所述抗体的抗原结合部分；和b)分离所述抗-ICOS、抗-OX40或所述抗体的抗原结合部分。
在另一个方面，提供了编码抗ICOS抗体或其抗原结合部分的多核苷酸，其中将抗ICOS抗体或其抗原结合部分与抗OX40抗体或其抗原结合部分依次施用于癌症患者，且其中在施用抗ICOS抗体或其抗原结合部分之后，施用抗OX40抗体或其抗原结合部分。
在又另一个方面，提供了编码抗OX40抗体或其抗原结合部分的多核苷酸，其中将抗OX40抗体或其抗原结合部分与抗ICOS抗体或其抗原结合部分依次施用于癌症患者，且其中在施用抗ICOS抗体或其抗原结合部分之后，施用抗OX40抗体或其抗原结合部分。
在另一个方面，提供了包含本文任一方面的多核苷酸的载体。在另一个方面，提供了包含本文任一方面的载体的宿主细胞。
在又另一个方面，提供了制备抗ICOS抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括：a)在合适的条件下培养包含本文任一方面的多核苷酸的宿主细胞以表达抗ICOS抗体或其抗原结合部分；和b)分离所述抗ICOS抗体或其抗原结合部分。
在另一个方面，提供了制备抗OX40抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括：a)在合适的条件下培养包含本文任一方面的多核苷酸的宿主细胞以表达抗OX40抗体或其抗原结合部分；和b)分离所述抗OX40抗体或其抗原结合部分。
在本文任一方面的一个实施方案中，所述抗ICOS抗体是ICOS激动剂。在一个实施方案中，所述抗ICOS抗体包含：包含与SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VH结构域；和包含与如SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VL结构域。在另一个实施方案中，所述抗ICOS抗体包含：包含SEQ IDNO:46中所示的氨基酸序列的VH结构域和包含如SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列的VL结构域。在一个实施方案中，所述抗ICOS抗体包含以下中的一种或多种：如SEQ ID NO:40中所示的CDRH1；如SEQ ID NO:41中所示的CDRH2；如SEQ ID NO:42中所示的CDRH3；如SEQ IDNO:43中所示的CDRL1；如SEQ ID NO:44中所示的CDRL2和/或如SEQ ID NO:45中所示的CDRL3或每个CDR的直接等同物，其中所述直接等同物在所述CDR中具有不多于两个氨基酸取代。
在本文任一方面的一个实施方案中，所述抗OX40抗体是OX40激动剂。在一个实施方案中，所述抗OX40抗体包含：包含与SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VH结构域；和包含与如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VL结构域。在另一个实施方案中，所述抗OX40抗体包含：包含SEQ IDNO:5中所示的氨基酸序列的VH结构域和包含如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的VL结构域。在一个实施方案中，所述抗OX40抗体包含以下中的一种或多种：如SEQ ID NO:1中所示的CDRH1；如SEQ ID NO:2中所示的CDRH2；如SEQ ID NO:3中所示的CDRH3；如SEQ ID NO:7中所示的CDRL1；如SEQ ID NO:8中所示的CDRL2和/或如SEQ ID NO:9中所示的CDRL3或每个CDR的直接等同物，其中所述直接等同物在所述CDR中具有不多于两个氨基酸取代。
在本文任一方面的一个实施方案中，将针对人ICOS的药剂施用2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30连续天。在本文任一方面的一个实施方案中，将针对人OX40的药剂施用2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30连续天。
在一个方面，所述癌症选自结肠直肠癌(CRC)、胃癌、食管癌、子***、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、卵巢癌、黑色素瘤、肾细胞癌(RCC)、EC鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、间皮瘤、胰腺癌和***癌。
在另一个方面，所述癌症选自头颈癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、***癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、星型细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、炎性乳腺癌、威尔姆氏肿瘤(Wilm's tumor)、尤因氏肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、肾癌、肝癌、黑色素瘤、胰腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞肿瘤、甲状腺癌、成淋巴细胞性T细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、AML、慢性中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性T细胞白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤原巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞白血病、早幼粒细胞性白血病、红细胞白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、成淋巴细胞型T细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、神经母细胞瘤、膀胱癌、泌尿道上皮癌、外阴癌、子***、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、口腔癌、口部癌症、GIST(胃肠间质瘤)和睾丸癌。
本发明的一些实施方案进一步包括将至少一种肿瘤剂和/或至少一种免疫刺激剂施用于所述人。
在一个方面，所述人具有实体瘤。在一个方面，所述肿瘤选自头颈癌、胃癌、黑色素瘤、肾细胞癌(RCC)、食管癌、非小细胞肺癌、***癌、结肠直肠癌、卵巢癌和胰腺癌。在另一个方面，所述人具有液体肿瘤，诸如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、多发性骨髓瘤、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、滤泡性淋巴瘤、急性骨髓性白血病和慢性髓细胞性白血病。
本公开还涉及用于治疗癌症或减轻癌症的严重程度的方法，所述癌症选自：脑癌(神经胶质瘤)、成胶质细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、威尔姆氏肿瘤、尤因氏肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌、成淋巴细胞性T-细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性T-细胞白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤原巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞白血病、早幼粒细胞性白血病、红细胞白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、成淋巴细胞型T细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、神经母细胞瘤、膀胱癌、泌尿道上皮癌、肺癌、外阴癌、子***、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、口腔癌、口部癌症、GIST(胃肠间质瘤)和睾丸癌。
如本文所用的术语“治疗”及其语法变型是指治疗性治疗。在提到特定病况时，治疗意味着(1)改善病况或该病况的一种或多种生物临床表现；(2)干扰(a)导致或造成该病况的生物级联中的一个或多个点或(b)病况的一种或多种生物临床表现；(3)缓解与病况或其治疗相关的一种或多种症状、效应或副作用；或(4)减缓病况的发展或该病况的一种或多种生物临床表现。还考虑使用本发明的方法和/或组合物的预防性治疗。技术人员将理解，“预防”不是绝对的术语。在医学中，“预防”被理解为是指药物的预防性施用，以显著降低病况或其生物临床表现的可能性或严重程度，或延迟该病况或其生物临床表现的发生。例如当认为主体处于发展癌症的高风险中时，诸如当主体具有强烈的癌症家族史或当主体暴露于致癌物质时，预防性治疗是适当的。
如本文所用，术语“癌症”、“赘生物”和“肿瘤”可以可互换使用，并且呈单数或复数形式，是指已经历使其变为对宿主生物体具有病理性的恶性转化的细胞。可以通过良好确立的技术，尤其是组织学检查，容易地将原发性癌细胞与非癌细胞区分开。如本文所用的癌细胞的定义不仅包括原发性癌细胞，还包括衍生自癌细胞祖先的任何细胞。这包括转移的癌细胞，以及衍生自癌细胞的体外培养物和细胞系。当提及通常表现为实体瘤的癌症类型时，“临床可检测”的肿瘤是基于肿瘤块可检测到的肿瘤；例如，通过程序诸如计算机断层摄影(CT)扫描、磁共振成像(MRI)、X-射线、超声或身体检查时触诊，和/或其由于从患者可获得的样品中的一种或多种癌症特异性抗原的表达而可检测到。肿瘤可能是造血性(或血液学或血液或血液相关的)癌症，例如衍生自血细胞或免疫细胞的癌症，其可被称为“液体肿瘤”。基于血液肿瘤的临床病况的具体实例包括：白血病，诸如慢性粒细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和急性淋巴细胞性白血病；浆细胞恶性肿瘤，诸如多发性骨髓瘤、MGUS和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症；淋巴瘤，诸如非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤；等。
所述癌症可以是其中存在异常数目的母细胞或不希望的细胞增殖或被诊断为血液癌症(包括淋巴性和骨髓性恶性肿瘤)的任何癌症。骨髓性恶性肿瘤包括但不限于：急性骨髓性(或粒细胞性或髓细胞性或原粒细胞性)白血病(未分化或分化的)、急性前骨髓性(或早幼粒细胞性或前髓细胞性或前髓母细胞性)白血病、急性骨髓单核细胞性(或骨髓单核母细胞性)白血病、急性单核细胞性(或单核母细胞性)白血病、红细胞白血病和巨核细胞性(或巨核母细胞性)白血病。这些白血病可以一起称为急性骨髓性(或粒细胞性或髓细胞性的)白血病(AML)。骨髓恶性肿瘤还包括骨髓增值性病症(MPD)，其包括但不限于：慢性髓细胞性(或骨髓性)白血病(CML)、慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)、原发性血小板增多症(或血小板增多)和真性红细胞增多症(PCV)。骨髓恶性肿瘤还包括：脊髓发育不良(或骨髓增生异常综合征或MDS)，其可被称为难治性贫血(RA)、具有过量母细胞的难治性贫血(RAEB)以及具有过量转化中的母细胞的难治性贫血(RAEBT)；以及伴有或不伴有原因不明性髓样化生的骨髓纤维化(MFS)。
造血癌症还包括淋巴恶性肿瘤，其可影响***、脾脏、骨髓、外周血和/或结外位点。淋巴癌包括B-细胞恶性肿瘤，其包括但不限于B-细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)。B-NHL可以是惰性的(或低度)、中度(或侵袭性)或高度(高侵袭性)。惰性B细胞淋巴瘤包括：滤泡性淋巴瘤(FL)；小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)；边缘区淋巴瘤(MZL)，包括结节MZL、结外MZL、脾MZL和具有绒毛状淋巴细胞的脾MZL；淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)；以及粘膜相关淋巴样组织(MALT或结外边缘区)淋巴瘤。中度B-NHL包括：涉及或不涉及白血病的套细胞淋巴瘤(MCL)、弥漫性大细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性大细胞(或3级或3B级)淋巴瘤和原发性纵隔淋巴瘤(PML)。高度B-NHL包括伯基特淋巴瘤(BL)、伯基特样淋巴瘤、小无裂解细胞淋巴瘤(SNCCL)和成淋巴细胞性淋巴瘤。其他B-NHL包括免疫母细胞性淋巴瘤(或免疫细胞瘤)、原发性渗出性淋巴瘤、HIV相关(或AIDS相关)的淋巴瘤和移植后淋巴增值性病症(PTLD)或淋巴瘤。B细胞恶性肿瘤还包括但不限于：慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、幼淋巴细胞性白血病(PLL)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(WM)、毛细胞白血病(HCL)、大颗粒淋巴细胞性(LGL)白血病、急性淋巴性(或淋巴细胞性或成淋巴母细胞性)白血病和卡斯尔曼氏病。NHL还可包括：T-细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)，其包括但不限于未另作说明(NOS)的T-细胞非霍奇金淋巴瘤、外周T-细胞淋巴瘤(PTCL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、血管免疫母细胞性淋巴样病症(AILD)、鼻自然杀伤(NK)细胞/T-细胞淋巴瘤、γ/δ淋巴瘤、皮肤型T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿和塞扎里综合征(Sezary syndrome)。
造血癌症还包括霍奇金淋巴瘤(或疾病)，其包括典型霍奇金淋巴瘤，结节硬化型霍奇金淋巴瘤，混合细胞型霍奇金淋巴瘤，淋巴细胞主型(LP)霍奇金淋巴瘤，结节LP霍奇金淋巴瘤和淋巴细胞衰竭型霍奇金淋巴瘤。造血癌症还包括浆细胞疾病或癌症，诸如多发性骨髓瘤(MM)，包括郁积型MM，意义未确定(或未知或未明)的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)，浆细胞瘤(骨，髓外)，淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)，瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症，浆细胞白血病和原发性淀粉样变性病(AL)。造血癌症还可包括额外造血细胞的其他癌症，包括多形核白细胞(或中性粒细胞)，嗜碱性粒细胞，嗜酸性粒细胞，树突状细胞，血小板，红细胞和自然杀伤细胞。包括造血细胞的组织，在本发明中被称为“造血细胞组织”，包括骨髓；外周血；胸腺；和外周淋巴组织，诸如脾脏、***、与粘膜相关的淋巴组织(例如与肠相关淋巴组织)、扁桃体，派伊尔淋巴集结和阑尾，以及与其他粘膜相关的淋巴组织，例如支气管内衬。
如本文所用，术语“化合物A2”意指针对人ICOS的药剂。在一些实施方案中，化合物A2是针对人ICOS的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，化合物A2是ICOS激动剂。合适地，化合物A2意指具有如SEQ ID NO:46中所示的重链可变区和如SEQ ID NO:47中所示的轻链可变区的人源化单克隆抗体。
如本文所用，术语“化合物B2”意指针对人OX40的药剂。在一些实施方案中，化合物B2是OX40激动剂。在一些实施方案中，化合物B2是针对人OX40的抗体或其抗原结合部分。合适地，化合物B2意指具有如SEQ ID NO:5中所示的重链可变区和如SEQ ID NO:11中所示的轻链可变区的人源化单克隆抗体。
合适地，本发明的组合在“指定时段”内施用。
如本文所用的术语“指定时段”及其语法变型意指施用化合物A2和化合物B2中的一种和化合物A2和化合物B2中的另一种之间的时间间隔。
合适地，如果化合物在“指定时段”内施用而不是同时施用，则它们两者在彼此的约24小时内施用 - 在该情况下，指定时段将为约24小时；合适地，它们将两者在彼此的约12小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约12小时；合适地，它们将两者在彼此的约11小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约11小时；合适地，它们将两者在彼此的约10小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约10小时；合适地，它们将两者在彼此的约9小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约9小时；合适地，它们将两者在彼此的约8小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约8小时；合适地，它们将两者在彼此的约7小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约7小时；合适地，它们将两者在彼此的约6小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约6小时；合适地，它们将两者在彼此的约5小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约5小时；合适地，它们将两者在彼此的约4小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约4小时；合适地，它们将两者在彼此的约3小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约3小时；合适地，它们将在彼此的约2小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约2小时；合适地，它们将两者在彼此的约1小时内施用 - 在该情况下，所述指定时段将为约1小时。如本文所用，化合物A2和化合物B2在分开少于约45分钟内的施用被视为同时施用。
合适地，当将本发明的组合施用“指定时段”时，将所述化合物共同施用“时间的持续时间”。
如本文所用的术语“时间的持续时间”及其语法变型意指将本发明的两种化合物施用指定的连续天数。除非另有定义，否则连续天数不必以治疗开始起始或以治疗结束终止，只需要连续天数在治疗过程期间的某个点发生。
关于“指定时段”施用：
合适地，两种化合物都将在指定时段内施用至少一天 - 在该情况下，时间的持续时间为至少一天；合适地，在治疗过程期间，两种化合物都将在指定时段内施用连续至少3天 -在该情况下，时间的持续时间将为至少3天；合适地，在治疗过程期间，两种化合物都将在指定时段内施用连续至少5天 - 在该情况下，时间的持续时间将为至少5天；合适地，在治疗过程期间，两种化合物都将在指定时段内施用连续至少7天 - 在该情况下，时间的持续时间将为至少7天；合适地，在治疗过程期间，两种化合物都将在指定时段内施用连续至少14天 - 在该情况下，时间的持续时间将为至少14天；合适地，在治疗过程期间，两种化合物都将在指定时段内施用连续至少30天 - 在该情况下，时间的持续时间将为至少30天。
合适地，如果化合物不在“指定时段”内施用，则将它们依次施用。如本文所用的术语“依次施用”及其语法衍生物意指将化合物A2和化合物B2中的一种施用连续两天或更多天，并且随后将化合物A2和化合物B2中的另一种施用连续两天或更多天。在其中施用化合物A2的连续数天的时段期间，施用至少1个剂量、至少2个剂量、至少3个剂量、至少4个剂量、至少5个剂量、至少6个剂量、至少7个剂量、至少8个剂量、至少9个剂量或至少10个剂量的化合物A2。在其中施用化合物B2的连续数天的时段期间，施用至少1个剂量、至少2个剂量、至少3个剂量、至少4个剂量、至少5个剂量、至少6个剂量、至少7个剂量、至少8个剂量、至少9个剂量或至少10个剂量的化合物B2。在其中施用化合物A2的连续数天的时段期间，可以将化合物A2施用每天至少三次，每天至少两次，每天至少一次或每天少于一次，例如每2天一次，每3天一次，每周一次，每2周一次，每3周一次或每4周一次。在其中施用化合物B2的连续数天的时段期间，可以将化合物B2施用每天至少三次，每天至少两次，每天至少一次或每天少于一次，例如每2天一次，每3天一次，每周一次，每2周一次，每3周一次或每4周一次。
同样，本文考虑在化合物A2和化合物B2中的一种和化合物A2和化合物B2中的另一种的依次施用之间利用的药物假期。如本文所用，药物假期是在依次施用化合物A2和化合物B2中的一种之后且在施用化合物A2和化合物B2中的另一种之前数天的时段，其中既不施用化合物A2也不施用化合物B2。合适地，所述药物假期将是选自以下的数天的时段：1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天和14天。
依次施用也可以包括将化合物A2和化合物B2中的一种施用连续两天或更多天，且然后将化合物A2和化合物B2两者随后施用连续两天或更多天。依次施用可以包括将化合物A2和化合物B2两者施用连续两天或更多天，且然后将化合物A2和化合物B2中的一种随后施用连续两天或更多天。
关于依次施用：
合适地，将化合物A2和化合物B2中的一种施用连续1至30天，随后为任选的药物假期，随后将化合物A2和化合物B2中的另一种施用连续1至30天。合适地，将化合物A2和化合物B2中的一种施用连续1至21天，随后为任选的药物假期，随后将化合物A2和化合物B2中的另一种施用连续1至21天。合适地，将化合物A2和化合物B2中的一种施用连续1至14天，随后为1至14天的药物假期，随后将化合物A2和化合物B2中的另一种施用连续1至14天。合适地，将化合物A2和化合物B2中的一种施用连续1至7天，随后为1至10天的药物假期，随后将化合物A2和化合物B2中的另一种施用连续1至7天。
合适地，将按顺序首先施用化合物B2，随后为任选的药物假期，随后施用化合物A2。合适地，将化合物B2施用连续3至21天，随后为任选的药物假期，随后将化合物A2施用连续3至21天。合适地，将化合物B2施用连续3至21天，随后为1至14天的药物假期，随后将化合物A2施用连续3至21天。合适地，将化合物B2施用连续3至21天，随后为3至14天的药物假期，随后将化合物A2施用连续3至21天。合适地，将化合物B2施用连续21天，随后为任选的药物假期，随后将化合物A2施用连续14天。合适地，将化合物B2施用连续14天，随后为1至14天的药物假期，随后将化合物A2施用连续14天。合适地，将化合物B2施用连续7天，随后为3至10天的药物假期，随后将化合物A2施用连续7天。合适地，将化合物B2施用连续3天，随后为3至14天的药物假期，随后将化合物A2施用连续7天。合适地，将化合物B2施用连续3天，随后为3至10天的药物假期，随后将化合物A2施用连续3天。
应理解，“指定时段”施用和“依次”施用可以随后为重复给药或可以随后为替代给药方案，并且药物假期可以在重复给药或替代给药方案之前。
本发明的方法也可以与癌症治疗的其他治疗方法一起采用。
化合物A2和化合物B2可以通过任何适当的途径施用。合适的途径包括经口、直肠、经鼻、局部(包括经颊和舌下)、肿瘤内、***和肠胃外(包括皮下、肌肉内、静脉内、皮内、鞘内和硬膜外)。应理解，优选的途径可以随着例如组合的接受者的状况和待治疗的癌症而变化。还应理解，施用的每种药剂可以通过相同或不同的途径来施用，并且化合物A2和化合物B2可以在药物组合物/制剂中复合在一起。
在一个实施方案中，静脉内施用本发明的组合的一种或多种组分。在一个实施方案中，经口施用本发明的组合的一种或多种组分。在另一个实施方案中，肿瘤内施用本发明的组合的一种或多种组分。在另一个实施方案中，全身性、例如静脉内施用本发明的组合的一种或多种组分，且肿瘤内施用本发明的组合的一种或多种其他组分。在任何实施方案中，例如，在本段落中，本发明的组分作为一种或多种药物组合物施用。
在一个方面，提供了用于治疗癌症的方法，其包括向有需要的人施用治疗有效量的(i)抗ICOS抗体或其抗原结合部分以及一种或多种稀释剂、媒介物、赋形剂和/或非活性成分，以及(ii)抗OX40抗体或其抗原结合部分或其抗原结合部分以及一种或多种稀释剂、媒介物、赋形剂和/或非活性成分。在一个实施方案中，与作为单一疗法的任一药剂的施用或同时施用相比，抗ICOS抗体或其抗原结合部分和抗OX40抗体或其抗原结合部分的依次施用提供了协同作用。
在一个实施方案中，所述抗ICOS抗体或其抗原结合部分包含：包含与SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VH结构域；和包含与如SEQ IDNO:8中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VL结构域。
在一个实施方案中，提供了治疗癌症的方法，其中以选自每周一次、每两周一次、每三周一次和每四周一次的时间间隔施用抗ICOS抗体或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，以选自每周一次、每两周一次、每三周一次和每四周一次的时间间隔施用抗OX40抗体或其抗原结合部分。如本领域中所理解，任一药剂的施用的开始可以通过间隙时段分开。所述间隙时段可以是12小时、1至6天、1周、2周、3周、4周、5周或6周。通过实例的方式，可以在治疗的第1天施用抗ICOS抗体，两周的间隙时段之后，开始在第14天开始的抗OX40抗体疗法。在一个方面，用所述抗ICOS抗体治疗可以继续以例如每一、二、三或四周的时间间隔施用单一IV输注。类似地，用所述抗OX40抗体治疗可以继续以例如每一、二、三或四周的时间间隔施用单一IV输注。
在一个实施方案中，所述抗ICOS抗体或其抗原结合部分作为IV输注施用。在一个实施方案中，所述抗OX40抗体或其抗原结合部分作为IV输注施用。在一个方面，所述抗ICOS抗体或其抗原结合部分在抗OX40抗体或其抗原结合部分之前施用。在一个实施方案中，在开始施用所述抗ICOS抗体或其抗原结合部分之后的选自1周、2周、3周和4周的时间点起始抗OX40抗体或其抗原结合部分的施用。在一个方面，所述抗OX40抗体或其抗原结合部分在抗ICOS抗体或其抗原结合部分之前施用。在一个实施方案中，开始抗OX40抗体或抗OX40疗法和开始抗ICOS抗体疗法之间的间隙时段选自1天、1周、2周、3周、4周、5周和6周。
在一个实施方案中，将抗ICOS抗体或其抗原结合部分和所述抗OX40抗体或其抗原结合部分施用于所述人，直至所述人显示疾病进展或不可接受的毒性。在一个实施方案中，提供了用于治疗癌症的方法，其进一步包括将至少一种抗肿瘤剂和/或至少一种免疫调节剂施用于所述人。
典型地，在本发明中，对所治疗的易感肿瘤具有活性的任何抗肿瘤剂都可以在癌症治疗中被共同施用。此类药剂的实例可见于Cancer Principles and Practice ofOncology, V.T. Devita, T.S. Lawrence,和S.A. Rosenberg (编辑), 第10版 (2014年12月5日), Lippincott Williams & Wilkins Publishers。本领域普通技术人员将能够基于药物的特定特征和所涉及的癌症来辨别何种药剂组合是可用的。可用于本发明中的典型的抗肿瘤剂包括但不限于：抗微管剂或抗有丝***剂诸如二萜类和长春花生物碱；铂配位络合物；烷基化剂诸如氮芥、氧氮磷环类(oxazaphosphorines)、烷基磺酸酯、亚硝基脲和三氮烯；抗生素药剂诸如放线菌素、蒽环类和博来霉素；拓扑异构酶I抑制剂诸如喜树碱；拓扑异构酶II抑制剂诸如表鬼臼毒素；抗代谢物诸如嘌呤和嘧啶类似物和抗-叶酸化合物；激素和激素类似物；信号转导途径抑制剂；非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂；促凋亡剂；细胞周期信号传导抑制剂；蛋白酶体抑制剂；热休克蛋白抑制剂；癌症代谢的抑制剂；和癌症基因治疗剂，诸如基因修饰的T细胞。
用于与本发明的方法或组合组合使用或共同施用的进一步的一种或多种活性组分的实例是抗肿瘤剂。抗肿瘤剂的实例包括但不限于化疗剂；免疫调节剂；免疫调节物和免疫刺激佐剂。
实施例
以下实施例举例说明本发明的各个非限制性方面。
实施例1：抗ICOS抗体处理增加T细胞上的OX40表达；抗OX40抗体处理增加T细胞上的ICOS表达
如图1中所示，观察到OX40+ CD4和CD8 T细胞中的抗ICOS抗体(H2L5 IgG4PE)浓度依赖性增加。在板结合的抗CD3 (0.6µg/mL)存在的情况下，用各种浓度的板结合的H2L5 IgG4PE或IgG4同种型对照，获得图1中显示的数据。
在用癌症患者PBMC的体外测定中，抗ICOS抗体(H2L5 IgG4PE)处理增加OX40+CD4和CD8 T细胞(图2)。图2中显示的数据为用板结合的抗CD3 (0.6µg/mL)和H2L5 IgG4PE(10µg/mL)。抗ICOS抗体(H2L5 IgG4PE)处理在扩增的TIL(肿瘤浸润性淋巴细胞)培养物(0.6 µg/mL的抗CD3和10 µg/mL的H2L5 IgG4PE)中增加OX40+ CD4和CD8 T细胞(图3)。
在携带CT26肿瘤的小鼠中，抗ICOS抗体处理增加血液中的OX40+ T细胞(图5)。抗ICOS抗体处理增加来自携带CT26肿瘤的小鼠的血液中的OX40+ T-reg和CD4 T-效应子(图6)。观察到EMT6血液中的相似趋势，但T-regs和T-效应子两者的ICOS阳性百分比更高。抗ICOS抗体处理增加来自携带CT26肿瘤的小鼠的肿瘤中的OX40+ ICOS- T-细胞(图7)。基于ICOS和OX40表达的差异门控挑取CT26 TIL的T细胞群体中的OX40表达的增加。观察到在huPBMC(人外周血单核细胞)模型中的来自ICOS处理的A2058黑色素瘤肿瘤的血液和脾脏中的OX40+ T细胞的变化(图8)。
抗OX40抗体处理增加血液中的ICOS+ CD4和CD8 T细胞，同时降低来自携带CT26肿瘤的小鼠的肿瘤中的ICOS+ CD4 (图4)。
实施例2：抗ICOS抗体/抗OX40抗体同时和分阶段给药研究
在CT26同基因模型中研究抗ICOS抗体(17G9克隆)和抗OX40抗体(OX86克隆)的效力。图9显示进行的抗ICOS抗体(17G9克隆)/抗OX40抗体(OX86克隆)同时和分阶段给药研究的研究设计。将CT26小鼠结肠癌肿瘤细胞的5.0 x 104个细胞/小鼠皮下接种至右后侧腹。给药在随机分组当天开始。如图9中的表格和示意图中所示，实施同时和分阶段给药。
在用100 μg或10 μg抗ICOS抗体和100 μg抗OX40抗体组合的同时给药治疗并用抗ICOS或抗OX40单一疗法与适当同种型对照治疗的组中的肿瘤体积和存活率显示于图10-11中。组3接受100 µg抗OX40单一疗法。观察到一只总共消退；发现3只小鼠在剂量4后48小时死亡，并且1/10只在第46天存活。组4接受100 µg抗ICOS单一疗法。存在0只总共消退，发现2只死亡，在测量前的第12天1只小鼠没有发现，并且2/10只在第46天存活。组5接受10 ug抗ICOS单一疗法。存在0只总共消退，无一发现死亡，0/10只在第46天存活。组6接受100 µg抗OX40和100 µg抗ICOS组合。观察到4只消退，无一发现死亡，并且6/10只在第46天存活。组7接受10 µg抗ICOS和100 µg抗OX40组合。存在2只消退，在第4剂量后48小时发现1只死亡，并且3/10只在第46天存活。与抗OX40和抗ICOS单一疗法各自相比，观察到抗ICOS抗体和抗OX40抗体组合中对存活率的协同作用(图10)。
图12显示用分阶段给药抗ICOS抗体和抗OX40抗体(用100 µg抗OX40导入/100 µg抗ICOS后续(组9)和适当的对照(组8：100 µg抗OX40导入/100 µg IgG2b后续；组10：100 µg大鼠IgG1导入/100 µg抗ICOS后续)治疗的组的肿瘤体积和存活率。在图12中显示肿瘤体积的图中，垂直线#1指示后续给药的开始，且垂直线#2指示导入给药的结束。
组8接受100 µg抗OX40导入和100 µg大鼠IgG2b后续。观察到1只总共消退，在第5剂量(后续的第2剂量)后2小时发现2只死亡，并且1/10只在第46天存活。组10接受100 µg大鼠IgG1导入和100 µg抗ICOS后续。观察到0只总共消退，在第6剂量(后续的第3剂量)后1至4小时发现1只死亡，并且0/10只在第46天存活。组9接受100 µg抗OX40导入和100 µg抗ICOS后续。存在1只消退，无一发现死亡，并且2/10只在第46天存活。
实施例3：T细胞上的ICOS和OX40表达
图13显示表达ICOS和OX40双重阳性T细胞的肿瘤。食管和黑色素瘤显示最高数目的ICOS和OX40双重阳性T细胞；然而，该研究中仅使用5个黑色素瘤样品。图14显示数据(Clarient Multiomyx)，其显示基于TME(肿瘤微环境)中的区域的肿瘤的进一步分离。在图15A-15D中，显示肿瘤中T-reg和CD8上的ICOS和OX40表达。使用不同的亲本群体用于ICOSvs. OX40图的归一化。在头颈、食管和SCLC(小细胞肺癌)肿瘤中发现最高比例的表达ICOS的T调节细胞(T-reg细胞)(图15A)。在子宫颈、食管和黑色素瘤肿瘤中发现最高比例的表达OX40的T调节细胞(图15B)。在头颈、食管、SCLC和黑色素瘤肿瘤中发现最高比例的表达ICOS的细胞毒性T细胞(图15C)。在子宫颈、食管和黑色素瘤肿瘤中发现最高比例的表达OX40的细胞毒性T细胞(图15D)。

Claims (36)

1.治疗有需要的患者中的癌症的方法，所述方法包括：向所述患者依次施用有效量的针对人ICOS的药剂和有效量的针对人OX40的药剂。
2.权利要求1的方法，其中在施用针对人OX40的药剂之前，施用针对人ICOS的药剂。
3.权利要求1的方法，其中在施用针对人ICOS的药剂之前，施用针对人OX40的药剂。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述针对人ICOS的药剂是抗ICOS抗体或其抗原结合部分。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述针对人ICOS的药剂或抗ICOS抗体或其抗原结合部分是ICOS激动剂。
6.权利要求4-5中任一项的方法，其中所述抗ICOS抗体包含：包含与SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VH结构域；和包含与如SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VL结构域。
7.权利要求4-6中任一项的方法，其中所述抗ICOS抗体包含：包含SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列的VH结构域和包含如SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列的VL结构域。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述针对人OX40的药剂是抗OX40抗体或其抗原结合部分。
9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述针对人OX40的药剂或抗OX40抗体或其抗原结合部分是OX40激动剂。
10.权利要求8-9中任一项的方法，其中所述抗OX40抗体包含：包含与SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VH结构域；和包含与如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VL结构域。
11.权利要求8-10中任一项的方法，其中所述抗OX40抗体包含：包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的VH结构域和包含如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的VL结构域。
12.权利要求1-11中任一项的方法，其中每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次施用所述针对人ICOS的药剂或抗ICOS抗体或其抗原结合部分。
13.权利要求1-12中任一项的方法，其中每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次施用所述针对人OX40的药剂或抗OX40抗体或其抗原结合部分。
14.权利要求1-13中任一项的方法，其中所述癌症选自结肠直肠癌(CRC)、胃癌、食管癌、子***、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、卵巢癌、黑色素瘤、肾细胞癌(RCC)、EC鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、间皮瘤、胰腺癌和***癌。
15.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述针对人ICOS的药剂或抗ICOS抗体或其抗原结合部分作为静脉内(IV)输注施用。
16.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述针对人OX40的药剂或抗PD1抗体或其抗原结合部分或抗PDL1抗体或其抗原结合部分作为静脉内(IV)输注施用。
17.权利要求1-16中任一项的方法，其中在开始施用所述针对人ICOS的药剂或抗ICOS抗体或其抗原结合部分之后的选自1周、2周、3周和4周的时间点起始所述针对人OX40的药剂或抗OX40抗体或其抗原结合部分的开始施用。
18.权利要求1-16中任一项的方法，其中在开始施用所述针对人OX40的药剂或抗OX40抗体或其抗原结合部分之后的选自1周、2周、3周和4周的时间点起始所述针对人ICOS的药剂或抗ICOS抗体或其抗原结合部分的开始施用。
19.权利要求1-18中任一项的方法，其中将所述针对人ICOS的药剂或抗ICOS抗体或其抗原结合部分和所述针对人OX40的药剂或抗OX40抗体或其抗原结合部分施用于所述人，直至所述人显示疾病进展或不可接受的毒性。
20.抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其依次用于治疗有需要的人中的癌症，其中在施用所述抗OX40抗体或其抗原结合片段之前，施用所述抗ICOS抗体或其抗原结合片段，或其中在施用所述抗ICOS抗体或其抗原结合片段之前，施用所述抗OX40抗体或其抗原结合片段。
21.如权利要求20中所请求保护的抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其中所述抗OX40抗体是OX40激动剂。
22.如权利要求20或21中所请求保护的抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其中所述抗OX40抗体包含：包含与SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VH结构域；和包含与如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VL结构域。
23.如权利要求20-22中任一项中所请求保护的抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其中所述抗OX40抗体包含：包含SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的VH结构域和包含如SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的VL结构域。
24.如权利要求20-23中任一项中所请求保护的抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其中所述抗ICOS抗体是ICOS激动剂。
25.如权利要求20-24中任一项中所请求保护的抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其中所述抗ICOS抗体包含：包含与SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VH结构域；和包含与如SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的VL结构域。
26.如权利要求20-25中任一项中所请求保护的抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其中所述抗ICOS抗体包含：包含SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列的VH结构域和包含如SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列的VL结构域。
27.如权利要求20-26中任一项中所请求保护的抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其中每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次施用所述抗ICOS抗体。
28.如权利要求20-27中任一项中所请求保护的抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其中每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次施用所述抗OX40抗体。
29.如权利要求20-28中任一项中所请求保护的抗ICOS抗体或其抗原结合片段和抗OX40抗体或其抗原结合片段，其中所述癌症选自结肠直肠癌(CRC)、胃癌、食管癌、子***、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、卵巢癌、黑色素瘤、肾细胞癌(RCC)、EC鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、间皮瘤、胰腺癌和***癌。
30.抗ICOS抗体或其抗原结合部分和抗OX40抗体或其抗原结合部分在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中依次施用所述抗ICOS抗体或其抗原结合部分和所述抗OX40抗体或其抗原结合部分。
31.编码抗ICOS抗体或其抗原结合部分的多核苷酸，其中将所述抗ICOS抗体或其抗原结合部分与抗OX40抗体或其抗原结合部分依次施用于癌症患者。
32.编码抗OX40抗体或其抗原结合部分的多核苷酸，其中将抗OX40抗体或其抗原结合部分与抗ICOS抗体或其抗原结合部分依次施用于癌症患者，且其中在施用所述抗ICOS抗体或其抗原结合部分之后，施用所述抗OX40抗体或其抗原结合部分。
33.载体，其包含权利要求31-32中任一项的多核苷酸。
34.宿主细胞，其包含权利要求33的载体。
35.制备抗ICOS抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括：a)在合适的条件下培养包含权利要求31的多核苷酸的宿主细胞以表达所述抗ICOS抗体或其抗原结合部分；和b)分离所述抗ICOS抗体或其抗原结合部分。
36.制备抗OX40抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括：a)在合适的条件下培养包含权利要求32的多核苷酸的宿主细胞以表达所述抗OX40抗体或其抗原结合部分；和b)分离所述抗OX40抗体或其抗原结合部分。
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