CN110679524A - 凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法 - Google Patents

凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于水产动物养殖领域，尤其是凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，具体步骤是：(1)育苗海水处理；(2)室内育苗池清洗消毒；(3)无特定病原无节幼体投放；(4)无特定病原饵料制备与投喂；(5)育苗过程关键节点把控；(6)育苗全过程检测跟踪；(7)虾苗无特定病原检测与质量检验；(8)虾苗出售，该苗种培育方法采用生态式育苗理念，遵循凡纳滨对虾自然生活繁衍的基本法则，构建苗池人为藻相和自然天成菌相，全程禁止水产禁药和抗生素，可以显著提高凡纳滨对虾的育苗成活率，平均成活率可达到75％以上，可确保培育的虾苗无特定病原携带(SPF)，虾苗肠道饱满，胃口俱佳。

Description

凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法
技术领域
本发明属于水产动物养殖领域，尤其是凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法。
背景技术
近年来，我国对虾养殖产业迅速发展，与此同时，养殖环境的恶化、苗种质量的良莠不齐等多方因素，给整个对虾养殖业沉重打击，养殖成功率、养殖产量一年比一年低，作为对虾养殖产业基础的对虾苗种生产的重要性日益突出。进入21世纪，对虾养殖业内的养殖趋势已由片面追求速度向高质量生产转型，优质苗种培育已经引起了政府、企业、养殖户的高度重视，人们对于优质苗种的需求及认知达到了前所未有的高度。对虾苗种质量的优劣直接影响对虾在后期养殖过程中的生长速度和成活率，同时也是整个对虾养殖过程成败的重要影响因素之一。
凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)，又称南美白对虾(Penaeusvannamei)，俗称白对虾或白虾，自1988年由中科院海洋研究所张伟权教授从美国引进国内，并在1992年突破了育苗关，从小试到中试直至在全国各地推广养殖，直到1999年，广东省深圳市的国家级农业龙头公司天俊实业与美国的海洋生物技术公司开展合作，正式引进美国无特定病原(SPF)南美白对虾种虾和繁育技术，成功地批量培育出了无特定病原(SPF)南美白对虾苗；进入2000 年以后，凡纳滨对虾养殖规模逐年扩大。在我国研究推广至今，已历经30年，形成了从引种、育苗到养殖、加工、销售的完整产业链，并成为当前我国对虾养殖的主要品种，是我国养殖范围最广、产量最高的对虾种类，其养殖量占我国对虾养殖的70％以上。
优质、健康的苗种是对虾养殖成功的前提和基础，国内外学者对凡纳滨对虾亲虾养殖与营养强化，室内、室外水泥池育苗试验，工厂化育苗，生态育苗及仿生态育苗的摸索，有益微生物在对虾育苗中的应用，无公害对虾育苗及养殖HACCP模式的建立，虾苗病害防治，生物饵料在对虾育苗中的应用等方面进行了大量的研究，也取得了一定的成果。随着凡纳滨对虾养殖业的蓬勃发展，部分省市的质量技术监督部门发布了一些与凡纳滨对虾种苗相关的标准规程，如：海南省发布的DB46/T 129-2008《南美白对虾苗种繁育技术规程》，浙江省发布的DB33/T464-2004《无公害南美白对虾苗种》和DB 33/T 399.1-2003《无公害南美白对虾第1部分-苗种生产技术规范》，有力的推动了凡纳滨对虾产业的健康规范发展。
查阅国内一些企事业单位、个人申请了凡纳滨对虾育苗相关的专利，如：胡壮涛等人发明公开了一种生态培育南美白对虾虾苗的方法(申请号：201610898563.6)，利用池塘生态环境定向培养饵料生物如单胞藻、轮虫、枝角类、挠足类等，在室外大塘(高位池)中投入南美白对虾无节幼体，并以丰富的饵料生物来培育虾苗的育苗技术，该法主要在室外进行南美白对虾育苗，与本单位授权的发明专利凡纳滨对虾室外水体生态式育苗方法(申请号： 201510068607.8)有异曲同工之妙；崔朝霞等人发明公开了一种凡纳滨对虾的育苗方法(申请号：200810015938.5)，将凡纳滨对虾无节幼体投放入育苗池内，同时培养轮虫喂养凡纳滨对虾无节幼体其中凡纳滨对虾无节幼体投放密度为1万尾/m2，并加入虾片、豆浆和酵母的人工饵料，该法无节幼体投放的密度过低，并不适用于工厂化、规模化的育苗需求；广东恒兴集团有限公司公开了一种凡纳滨对虾小水体育苗方法(申请号：201410076358.2)，该法适用于1m3左右的圆形水族箱中开展，仅属于小水体育苗方法；茂名市金阳热带海珍养殖有限公司公开了一种高强抗逆性和抗病能力虾苗的工厂化生态育苗方法(申请号：201510338222.9)，通过对室内育苗池水质环境的生物调控和水温、光照、透明度、溶氧量、盐度、PH值、有害物质及病害生物等有效控制，优化育苗环境条件，减少用药、减少投料和减少排水；增强虾苗抗逆性和抗病能力，提高虾苗品质和成活率，该法缺少虾苗培育过程中的检测跟踪及质量评价，对真正培育无特定病原(SPF)的虾苗仍存在一定风险。上述相关专利和有关的文献虽然对凡纳滨对虾的苗种培育做了多种方法、模式的尝试，但关于无特定病原(SPF)的虾苗培育方法涉及甚少。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，该苗种培育方法采用生态式育苗理念，遵循凡纳滨对虾自然生活繁衍的基本法则，构建苗池人为藻相和自然天成菌相，全程禁止水产禁药和抗生素，可以显著提高凡纳滨对虾的育苗成活率。
本发明的技术方案为：
凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)育苗海水处理：海水经高锰酸钾絮凝沉淀、一次氯消毒、二次氯消毒、沙缸过滤、一次泡沫分离器处理、二次泡沫分离器处理、陶氏超滤机精密过滤、水质调节、沉淀和过滤棉袋入池；(2)室内育苗池清洗消毒：育苗池用碘液、洗洁精和草酸按照一定比例混合后彻底刷洗，淡水冲干净后通风晾晒；(3)无特定病原无节幼体投放：选择经检测合格，无特定病原携带(SPF)的N2～N3阶段无节幼体按照10～30万尾/m3的密度投放到育苗池中；(4)无特定病原饵料制备与投喂：生物饵料的制备，包括微藻类、轮虫和丰年虫的培养，要通过检测确保投喂的饵料是无特定病原携带(SPF)，人工饵料的投喂，包括虾片、微生态制剂及其他辅料等，每个产品也必须通过无特定病原(SPF)的检测；(5)虾苗培育关键点把控：a.育苗温度范围，全程27～32℃；b.育苗车间的光照和通风，避免阳光直射，苗池正上方2～3m 处用遮阳布挡光，打开车间门窗，自然通风；c.苗池人为藻相构建：无节幼体发育到N5～N6时，开始向苗池投喂角毛藻、海链藻，维持水体中藻类密度5万～8万cell/mL，一直持续到虾苗完全变糠虾Ⅰ期(M1)，保持苗池的藻类不老化；d.苗池自然菌相形成：每日向苗池水体中投喂一定量的光合细菌，以供虾苗摄食菌体及净化水质，每日投喂一定量的EM菌培养基，为苗池的细菌增殖提供必要的营养物质，以配合藻类和人工饵料中的有益细菌繁殖，形成天然的菌相，达到苗池的总菌平衡；e.饵料投喂：虾苗蚤Ⅰ阶段(Z1)投喂早期微囊料和前期罐装虾片，投喂量为1g/m3，4顿/天，虾苗蚤Ⅱ(Z2)至蚤Ⅲ阶段(Z3)，投喂量增加到 1.2～1.5g/m3，6顿/天，使用冻死或烫死的丰年虫无节幼体投喂100～150g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、拖便情况进行调整；虾苗糠Ⅰ(M1)至糠Ⅲ阶段(M3)投喂中期微囊料和中期桶装虾片，投喂量15～25g/百万尾，6顿/天，使用冻死或烫死的丰年虫无节幼体投喂 200～300g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；虾苗到仔虾阶段投喂中后期桶装虾片，投喂量40～60g/百万尾，6顿/天，使用活的丰年虫无节幼体投喂250～300g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；f.加换水：蚤Ⅲ(Z3)至糠Ⅲ阶段(M3)每日按海水与淡水1:1比例加6～10cm，仔虾后每日换水15％～30％，每日加水前向苗池投入1.2～1.5g/m3的维他命C；g.溶氧量：保持水体溶氧量6mg/L以上，N2～N6阶段充气呈微波状态，Z1～Z3阶段微沸腾状态，M1～M3阶段沸腾状态，仔虾后强沸腾状态；(6) 育苗全过程检测跟踪：对投放无节幼体前、Z3阶段、M3阶段、PL3和PL7阶段的苗池海水进行水质和细菌的全程跟踪；(7)虾苗无特定病原检测与质量检验：对PL3和PL7阶段的虾苗进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)的无特定病原携带检测，在PL5～PL8阶段对虾苗进行多重指标的质量检验；(8)虾苗出售：对特定病原检测和质量检验合格的虾苗，按照客户的出苗要求，提前1～2天调整苗池盐度，出苗现场控制打包密度和水温，将虾苗正常出售给客户。
进一步的，所述育苗海水处理，高锰酸钾处理浓度为0.5～1.0g/m3，絮凝沉淀时间24～48h，一次氯消毒和二次氯消毒的有效氯浓度为20～25g/m3和10～15g/m3，水质调节则是通过添加小苏打(NaHCO3)40～50g/m3，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)5～10g/m3，充气混合均匀，停气沉淀12～24h。
进一步的，所述育苗池清洗消毒，用10L淡水+有效浓度10％的碘液50m L+洗洁精2～5m L制成的混合溶液彻底刷洗内外壁两遍，淡水冲干净后通风晾晒2～3天。
进一步的，所述无特定病原无节幼体，生产幼体的亲虾需通过虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类无特定病原的检测，确保无节幼体是 SPF的。
进一步的，所述苗池自然菌相形成，每日向苗池水体所投光合细菌的浓度需达到1.8× 107CFU/mL以上，EM菌培养基浓度需达到18g/m3以上。
进一步的，所述育苗全过程检测跟踪，定期检测育苗水体中的水质和细菌量等，具体就是总碱度120～160，pH值7.9～8.4，氨氮<0.4mg/L，亚硝酸盐<0.1mg/L，育苗用水黄菌≤10000，育苗用水绿菌≤1000，育苗用水荧光菌0，育苗用水总菌≥弧菌10倍。
进一步的，所述虾苗无特定病原检测，取PL3和PL7阶段的虾苗进行实时荧光定量PCR (RT-PCR)的虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类无特定病原携带检测。
进一步的，所述虾苗质量检验，取PL5～PL8阶段对虾苗进行多重指标的质量检验，具体包括虾体黄菌≤200，虾体绿菌≤10，虾体荧光菌0，现场观察荧光0，脱壳/弱苗<6％，畸形 /损伤<10％、胃肠内含物中肠不足1/4≤15％、肝胰脏颜色>90％颜色一致、肝胰脏消化细胞>70％、应激≥85％、体表寄生物<10％、鳃发育>70％、变异系数<12％。
进一步的，所述虾苗出售，出小苗(虾苗全长0.5～0.6cm)：接苗方气温20℃以下，包装水温23℃，接收方气温20℃以上，包装水温21～22℃；调苗方气温25度以上，包装要求栓冰瓶，打包密度4～6万尾/袋。
进一步的，所述虾苗出售，出大苗(虾苗全长0.8cm以上)：运输时间小于3小时，包装水温28～30℃，运输时间3～6小时，包装水温26～28℃，运输时间大于6小时，包装水温24～26℃，密度要求：虾苗全长0.8～1.0cm：运输<3小时，5000～6000尾/袋，运输>3小时，4000～5000 尾/袋；虾苗全长1.0～1.2cm：运输<3小时，4000～5000尾/袋，运输>3小时，3000～4000尾/ 袋；虾苗全长>1.2cm：运输<3小时的，3000～4000尾/袋，运输>3小时的不允许出苗。
本发明的有益效果为：本发明苗种培育方法采用生态式育苗理念，遵循凡纳滨对虾自然生活繁衍的基本法则，构建苗池人为藻相和自然天成菌相，全程禁止水产禁药和抗生素，可以显著提高凡纳滨对虾的育苗成活率，平均成活率可达到75％以上，可确保培育的虾苗无特定病原携带(SPF)，虾苗肠道饱满，胃口俱佳，游泳迅速，抗应激能力强，个体均匀无损伤，非常适合凡纳滨对虾SPF虾苗实际生产的运用，进而提升了虾苗的质量，有效促进了虾苗的标粗成活率及养殖成活率和成功率。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明：
实施例1：
凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，包括以下步骤：
(1)育苗海水处理：海水首先用浓度为0.5g/m3高锰酸钾处理，絮凝沉淀时间24h，一次氯消毒和二次氯消毒的有效氯浓度分别为20g/m3和10g/m3，水质调节添加小苏打(NaHCO3)40g/m3，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)5g/m3，充气混合均匀，停气沉淀12h；
(2)室内育苗池清洗消毒：用10L淡水+有效浓度10％的碘液50m L+洗洁精2～5m L制成的混合溶液彻底刷洗育苗池内外壁两遍，淡水冲干净后通风晾晒3天；
(3)无特定病原无节幼体投放：通过检测入场进口亲虾的虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类无特定病原为无携带，确保其生产的无节幼体是SPF的；
(4)虾苗培育关键点把控：a.育苗温度范围，全程28～30℃；b.育苗车间的光照和通风，避免阳光直射，苗池正上方2～3m处用遮阳布挡光，打开车间门窗，自然通风；c.苗池人为藻相构建：无节幼体发育到N5～N6时，开始向苗池投喂角毛藻、海链藻，维持水体中藻类密度5万～8万cell/mL，一直持续到虾苗完全变糠虾Ⅰ期(M1)，保持苗池的藻类不老化；d.苗池自然菌相形成：每日向苗池水体中投喂光合细菌的浓度需达到2.0×107CFU/mL，以供虾苗摄食菌体及净化水质，每日投喂一定量的EM菌培养基浓度需达到20g/m3，为苗池的细菌增殖提供必要的营养物质，以配合藻类和人工饵料中的有益细菌繁殖，形成天然的菌相，达到苗池的总菌平衡；e.饵料投喂：虾苗蚤Ⅰ阶段(Z1)投喂早期微囊料和前期罐装虾片，投喂量为1g/m3，4顿/天，虾苗蚤Ⅱ(Z2)至蚤Ⅲ阶段(Z3)，投喂量增加到1.2g/m3，6顿/ 天，使用冻死或烫死的丰年虫无节幼体投喂100～150g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、拖便情况进行调整；虾苗糠Ⅰ(M1)至糠Ⅲ阶段(M3)投喂中期微囊料和中期桶装虾片，投喂量15～20g/百万尾，6顿/天，使用冻死或烫死的丰年虫无节幼体投喂200g/百万尾，4顿/ 天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；虾苗到仔虾阶段投喂中后期桶装虾片，投喂量50g/百万尾，6顿/天，使用活的丰年虫无节幼体投喂250g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；f.加换水：蚤Ⅲ(Z3)至糠Ⅲ阶段(M3)每日按海水与淡水1:1比例加6cm，仔虾后每日换水25％，每日加水前向苗池投入1.5g/m3的维他命C；g.溶氧量：保持水体溶氧量6mg/L以上，N2～N6阶段充气呈微波状态，Z1～Z3阶段微沸腾状态， M1～M3阶段沸腾状态，仔虾后强沸腾状态；
(5)育苗全过程检测跟踪：检测M3和PL3阶段育苗水体中的水质和细菌量，总碱度160左右，pH值8.1～8.3，氨氮<0.05mg/L，亚硝酸盐<0.08mg/L，育苗用水黄菌＜100，育苗用水绿菌为0，育苗用水荧光菌为0；
(6)虾苗无特定病原检测：取PL3阶段的虾苗进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)的虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类特定病原携带检测后，所有病原携带显示为阴性；
(7)虾苗质量检验：取PL5阶段对虾苗进行多重指标的质量检验，虾体黄菌＜20，虾体绿菌为0，虾体荧光菌0，现场观察荧光0，脱壳/弱苗为3％，畸形/损伤为5％、胃肠内含物中肠不足1/4为6％、肝胰脏颜色为95％颜色一致、肝胰脏消化细胞为80％、应激为95％、体表寄生物为0、鳃发育为85％、变异系数为5.24％，判定结果为A级，适合养殖；
(8)虾苗出售：出小苗(虾苗全长0.55～0.60cm)，包装水温21.5℃，栓250mL冰瓶，打包密度5.5万尾/袋，总计230袋，本批次育苗投放无节幼体1500万尾，成活率达到了84.33％。
实施例2：
一种应用于虾无节幼体微流水清洗消毒的方法，包括以下步骤：
凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，包括以下步骤：
(1)育苗海水处理：海水首先用浓度为0.8g/m3高锰酸钾处理，絮凝沉淀时间24h，一次氯消毒和二次氯消毒的有效氯浓度分别为20g/m3和10g/m3，水质调节添加小苏打(NaHCO3)50g/m3，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)8g/m3，充气混合均匀，停气沉淀24h；
(2)室内育苗池清洗消毒：用10L淡水+有效浓度10％的碘液50m L+洗洁精2～5m L制成的混合溶液彻底刷洗育苗池内外壁两遍，淡水冲干净后通风晾晒2天；
(3)无特定病原无节幼体投放：通过检测入场进口亲虾的虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类无特定病原为无携带，确保其生产的无节幼体是SPF的；
(4)虾苗培育关键点把控：a.育苗温度范围，全程27～29℃；b.育苗车间的光照和通风，避免阳光直射，苗池正上方2～3m处用遮阳布挡光，打开车间门窗，自然通风；c.苗池人为藻相构建：无节幼体发育到N5～N6时，开始向苗池投喂角毛藻、海链藻，维持水体中藻类密度5万～8万cell/mL，一直持续到虾苗完全变糠虾Ⅰ期(M1)，保持苗池的藻类不老化；d.苗池自然菌相形成：每日向苗池水体中投喂光合细菌的浓度需达到2.5×107CFU/mL，以供虾苗摄食菌体及净化水质，每日投喂一定量的EM菌培养基浓度需达到25g/m3，为苗池的细菌增殖提供必要的营养物质，以配合藻类和人工饵料中的有益细菌繁殖，形成天然的菌相，达到苗池的总菌平衡；e.饵料投喂：虾苗蚤Ⅰ阶段(Z1)投喂早期微囊料和前期罐装虾片，投喂量为1g/m3，4顿/天，虾苗蚤Ⅱ(Z2)至蚤Ⅲ阶段(Z3)，投喂量增加到1.2g/m3，6顿/ 天，使用冻死的丰年虫无节幼体投喂100～150g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、拖便情况进行调整；虾苗糠Ⅰ(M1)至糠Ⅲ阶段(M3)投喂中期微囊料和中期桶装虾片，投喂量15～20g/百万尾，6顿/天，使用冻死的丰年虫无节幼体投喂200g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；虾苗到仔虾阶段投喂中后期桶装虾片，投喂量60g/百万尾，6顿/天，使用活的丰年虫无节幼体投喂250g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；f.加换水：蚤Ⅲ(Z3)至糠Ⅲ阶段(M3)每日按海水与淡水1:1比例加 5cm，仔虾后每日换水20％，每日加水前向苗池投入1.5g/m3的维他命C；g.溶氧量：保持水体溶氧量6mg/L以上，N2～N6阶段充气呈微波状态，Z1～Z3阶段微沸腾状态，M1～M3阶段沸腾状态，仔虾后强沸腾状态；
(5)育苗全过程检测跟踪：检测M3和PL3阶段育苗水体中的水质和细菌量，总碱度155左右，pH值8.0～8.2，氨氮<0.02mg/L，亚硝酸盐<0.05mg/L，育苗用水黄菌＜200，育苗用水绿菌为0，育苗用水荧光菌为0；
(6)虾苗无特定病原检测：取PL3和PL7阶段的虾苗进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)的虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类特定病原携带检测后，所有病原携带显示为阴性；
(7)虾苗质量检验：取PL8阶段对虾苗进行多重指标的质量检验，虾体黄菌＜50，虾体绿菌为0，虾体荧光菌0，现场观察荧光0，脱壳/弱苗为3％，畸形/损伤为5％、胃肠内含物中肠不足1/4为1％、肝胰脏颜色为95％颜色一致、肝胰脏消化细胞为90％、应激为97％、体表寄生物为0、鳃发育为90％、变异系数为8.24％，判定结果为A级，适合养殖；
(8)虾苗出售：出大苗(虾苗全长0.80～0.94cm)，客户运输时间2.5小时，包装水温28℃，打包密度5500尾/袋，总计1500袋，本批次育苗投放无节幼体1000万尾，成活率达到了82.5％。
实施例3：
凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，包括以下步骤：
(1)育苗海水处理：海水首先用浓度为1.0g/m3高锰酸钾处理，絮凝沉淀时间36h，一次氯消毒和二次氯消毒的有效氯浓度分别为25g/m3和10g/m3，水质调节添加小苏打(NaHCO3)45g/m3，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)10g/m3，充气混合均匀，停气沉淀 24h；
(2)室内育苗池清洗消毒：用10L淡水+有效浓度10％的碘液50m L+洗洁精2～5m L制成的混合溶液彻底刷洗育苗池内外壁两遍，淡水冲干净后通风晾晒3天；
(3)无特定病原无节幼体投放：通过检测入场进口亲虾的虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类无特定病原为无携带，确保其生产的无节幼体是SPF的；
(4)虾苗培育关键点把控：a.育苗温度范围，全程29℃；b.育苗车间的光照和通风，避免阳光直射，苗池正上方2～3m处用遮阳布挡光，打开车间门窗，自然通风；c.苗池人为藻相构建：无节幼体发育到N5～N6时，开始向苗池投喂角毛藻、海链藻，维持水体中藻类密度5万cell/mL，一直持续到虾苗完全变糠虾Ⅰ期(M1)，保持苗池的藻类不老化；d.苗池自然菌相形成：每日向苗池水体中投喂光合细菌的浓度需达到1.0×108CFU/mL，以供虾苗摄食菌体及净化水质，每日投喂一定量的EM菌培养基浓度需达到25g/m3，为苗池的细菌增殖提供必要的营养物质，以配合藻类和人工饵料中的有益细菌繁殖，形成天然的菌相，达到苗池的总菌平衡；e.饵料投喂：虾苗蚤Ⅰ阶段(Z1)投喂早期微囊料和前期罐装虾片，投喂量为 1g/m3，4顿/天，虾苗蚤Ⅱ(Z2)至蚤Ⅲ阶段(Z3)，投喂量增加到1.2g/m3，6顿/天，使用冻死或烫死的丰年虫无节幼体投喂100～150g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、拖便情况进行调整；虾苗糠Ⅰ(M1)至糠Ⅲ阶段(M3)投喂中期微囊料和中期桶装虾片，投喂量15～20g/ 百万尾，6顿/天，使用冻死或烫死的丰年虫无节幼体投喂200g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；虾苗到仔虾阶段投喂中后期桶装虾片，投喂量50g/百万尾，6 顿/天，使用活的丰年虫无节幼体投喂250g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；f.加换水：蚤Ⅲ(Z3)至糠Ⅲ阶段(M3)每日按海水与淡水1:1比例加6cm，仔虾后每日换水25％，每日加水前向苗池投入1.5g/m3的维他命C；g.溶氧量：保持水体溶氧量6mg/L以上，N2～N6阶段充气呈微波状态，Z1～Z3阶段微沸腾状态，M1～M3阶段沸腾状态，仔虾后强沸腾状态；
(5)育苗全过程检测跟踪：检测M3和PL3阶段育苗水体中的水质和细菌量，总碱度140左右，pH值8.0～8.3，氨氮<0.05mg/L，亚硝酸盐<0.08mg/L，育苗用水黄菌＜100，育苗用水绿菌为0，育苗用水荧光菌为0；
(6)虾苗无特定病原检测：取PL3和PL7阶段的虾苗进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)的虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类特定病原携带检测后，所有病原携带显示为阴性；
(7)虾苗质量检验：取PL5和PL8阶段对虾苗进行多重指标的质量检验，虾体黄菌＜50，虾体绿菌为0，虾体荧光菌0，现场观察荧光0，脱壳/弱苗为＜5％，畸形/损伤＜5％、胃肠内含物中肠不足1/4＜5％、肝胰脏颜色＞95％颜色一致、肝胰脏消化细胞＞85％、应激＞95％、体表寄生物为0、鳃发育＞85％、变异系数5.24～8.78％，判定结果都为A级，适合养殖；
(8)虾苗出售：出小苗(虾苗全长0.55～0.60cm)，包装水温22℃，不栓冰瓶，打包密度5.9万尾/袋，总计220袋，出大苗(虾苗全长0.85～1.10cm)，包装水温27℃，打包密度3800尾/袋，总计580袋，本批次育苗投放无节幼体2000万尾，成活率达到了75.92％。
实施例4：
凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，包括以下步骤：
(1)育苗海水处理：海水首先用浓度为0.8g/m3高锰酸钾处理，絮凝沉淀时间48h，一次氯消毒和二次氯消毒的有效氯浓度分别为20g/m3和15g/m3，水质调节添加小苏打(NaHCO3)50g/m3，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)8g/m3，充气混合均匀，停气沉淀12h；
(2)室内育苗池清洗消毒：用10L淡水+有效浓度10％的碘液50m L+洗洁精5m L制成的混合溶液彻底刷洗育苗池内外壁两遍，淡水冲干净后通风晾晒2天；
(3)无特定病原无节幼体投放：通过检测入场进口亲虾的虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类无特定病原为无携带，确保其生产的无节幼体是SPF的；
(4)虾苗培育关键点把控：a.育苗温度范围，全程28～31℃；b.育苗车间的光照和通风，避免阳光直射，苗池正上方2～3m处用遮阳布挡光，打开车间门窗，自然通风；c.苗池人为藻相构建：无节幼体发育到N5～N6时，开始向苗池投喂角毛藻、海链藻，维持水体中藻类密度8万cell/mL，一直持续到虾苗完全变糠虾Ⅰ期(M1)，保持苗池的藻类不老化；d.苗池自然菌相形成：每日向苗池水体中投喂光合细菌的浓度需达到1.5×107CFU/mL，以供虾苗摄食菌体及净化水质，每日投喂一定量的EM菌培养基浓度需达到30g/m3，为苗池的细菌增殖提供必要的营养物质，以配合藻类和人工饵料中的有益细菌繁殖，形成天然的菌相，达到苗池的总菌平衡；e.饵料投喂：虾苗蚤Ⅰ阶段(Z1)投喂早期微囊料和前期罐装虾片，投喂量为1g/m3，4顿/天，虾苗蚤Ⅱ(Z2)至蚤Ⅲ阶段(Z3)，投喂量增加到1.2g/m3，6顿/天，使用烫死的丰年虫无节幼体投喂100～150g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、拖便情况进行调整；虾苗糠Ⅰ(M1)至糠Ⅲ阶段(M3)投喂中期微囊料和中期桶装虾片，投喂量15～20g/ 百万尾，6顿/天，使用烫死的丰年虫无节幼体投喂200g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；虾苗到仔虾阶段投喂中后期桶装虾片，投喂量55～60g/百万尾，6顿 /天，使用活的丰年虫无节幼体投喂250g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；f.加换水：蚤Ⅲ(Z3)至糠Ⅲ阶段(M3)每日按海水与淡水1:1比例加6cm，仔虾后每日换水30％，每日加水前向苗池投入1.0g/m3的维他命C；g.溶氧量：保持水体溶氧量6mg/L以上，N2～N6阶段充气呈微波状态，Z1～Z3阶段微沸腾状态，M1～M3阶段沸腾状态，仔虾后强沸腾状态；
(5)育苗全过程检测跟踪：检测M3和PL3阶段育苗水体中的水质和细菌量，总碱度135左右，pH值8.1～8.2，氨氮<0.07mg/L，亚硝酸盐<0.06mg/L，育苗用水黄菌＜200，育苗用水绿菌为0，育苗用水荧光菌为0；
(6)虾苗无特定病原检测：取PL3阶段的虾苗进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)的虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类特定病原携带检测后，所有病原携带显示为阴性；
(7)虾苗质量检验：取PL5阶段对虾苗进行多重指标的质量检验，虾体黄菌＜10，虾体绿菌为0，虾体荧光菌0，现场观察荧光0，脱壳/弱苗为4％，畸形/损伤为3％、胃肠内含物中肠不足1/4为5％、肝胰脏颜色为90％颜色一致、肝胰脏消化细胞为85％、应激为95％、体表寄生物为0、鳃发育为85％、变异系数为6.14％，判定结果为A级，适合养殖；
(8)虾苗出售：出小苗(虾苗全长0.52～0.60cm)，包装水温21℃，栓250mL冰瓶，打包密度6万尾/袋，总计320袋，本批次育苗投放无节幼体2000万尾，成活率达到了96.0％。
实施例5：
凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，包括以下步骤：
(1)育苗海水处理：海水首先用浓度为0.5g/m3高锰酸钾处理，絮凝沉淀时间48h，一次氯消毒和二次氯消毒的有效氯浓度分别为30g/m3和15g/m3，水质调节添加小苏打(NaHCO3)50g/m3，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)8g/m3，充气混合均匀，停气沉淀24h；
(2)室内育苗池清洗消毒：用10L淡水+有效浓度10％的碘液50m L+洗洁精4m L制成的混合溶液彻底刷洗育苗池内外壁两遍，淡水冲干净后通风晾晒3天；
(3)无特定病原无节幼体投放：通过检测入场进口亲虾的虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类无特定病原为无携带，确保其生产的无节幼体是SPF的；
(4)虾苗培育关键点把控：a.育苗温度范围，全程31℃；b.育苗车间的光照和通风，避免阳光直射，苗池正上方2～3m处用遮阳布挡光，打开车间门窗，自然通风；c.苗池人为藻相构建：无节幼体发育到N5～N6时，开始向苗池投喂角毛藻、海链藻，维持水体中藻类密度6万cell/mL，一直持续到虾苗完全变糠虾Ⅰ期(M1)，保持苗池的藻类不老化；d.苗池自然菌相形成：每日向苗池水体中投喂光合细菌的浓度需达到2.5×107CFU/mL，以供虾苗摄食菌体及净化水质，每日投喂一定量的EM菌培养基浓度需达到30g/m3，为苗池的细菌增殖提供必要的营养物质，以配合藻类和人工饵料中的有益细菌繁殖，形成天然的菌相，达到苗池的总菌平衡；e.饵料投喂：虾苗蚤Ⅰ阶段(Z1)投喂早期微囊料和前期罐装虾片，投喂量为 1g/m3，4顿/天，虾苗蚤Ⅱ(Z2)至蚤Ⅲ阶段(Z3)，投喂量增加到1.3g/m3，6顿/天，使用冻死的丰年虫无节幼体投喂100～150g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、拖便情况进行调整；虾苗糠Ⅰ(M1)至糠Ⅲ阶段(M3)投喂中期微囊料和中期桶装虾片，投喂量15～20g/ 百万尾，6顿/天，使用冻死的丰年虫无节幼体投喂200g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；虾苗到仔虾阶段投喂中后期桶装虾片，投喂量50～60g/百万尾，6顿 /天，使用活的丰年虫无节幼体投喂250g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；f.加换水：蚤Ⅲ(Z3)至糠Ⅲ阶段(M3)每日按海水与淡水1:1比例加6cm，仔虾后每日换水30％，每日加水前向苗池投入1.5g/m3的维他命C；g.溶氧量：保持水体溶氧量6mg/L以上，N2～N6阶段充气呈微波状态，Z1～Z3阶段微沸腾状态，M1～M3阶段沸腾状态，仔虾后强沸腾状态；
(5)育苗全过程检测跟踪：检测M3和PL3阶段育苗水体中的水质和细菌量，总碱度155左右，pH值8.2～8.3，氨氮<0.08mg/L，亚硝酸盐<0.07mg/L，育苗用水黄菌＜500，育苗用水绿菌为0，育苗用水荧光菌为0；
(6)虾苗无特定病原检测：取PL3和PL7阶段的虾苗进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)的虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类特定病原携带检测后，所有病原携带显示为阴性；
(7)虾苗质量检验：取PL5和PL8阶段对虾苗进行多重指标的质量检验，虾体黄菌＜80，虾体绿菌为0，虾体荧光菌0，现场观察荧光0，脱壳/弱苗＜4％，畸形/损伤＜6％、胃肠内含物中肠不足1/4＜5％、肝胰脏颜色＞95％颜色一致、肝胰脏消化细胞＞85％、应激＞95％、体表寄生物为0、鳃发育＞85％、变异系数4.64～7.78％，判定结果都为A级，适合养殖；
(8)虾苗出售：出小苗(虾苗全长0.52～0.59cm)，包装水温22℃，不栓冰瓶，打包密度4.8万尾/袋，总计390袋，出大苗(虾苗全长0.80～1.0cm)，包装水温28℃，打包密度5000尾/袋，总计1000袋，该批次育苗投放无节幼体3000万尾，成活率达到了79.07％。
上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理和最佳实施例，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。

Claims (8)

1.凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)育苗海水处理：海水经高锰酸钾絮凝沉淀、一次氯消毒、二次氯消毒、沙缸过滤、一次泡沫分离器处理、二次泡沫分离器处理、陶氏超滤机精密过滤、水质调节、沉淀和过滤棉袋入池；(2)室内育苗池清洗消毒：育苗池用碘液、洗洁精和草酸按照一定比例混合后彻底刷洗，淡水冲干净后通风晾晒；(3)无特定病原无节幼体投放：选择经检测合格，无特定病原携带(SPF)的N2～N3阶段无节幼体按照10～30万尾/m3的密度投放到育苗池中；(4)无特定病原饵料制备与投喂：生物饵料的制备，包括微藻类、轮虫和丰年虫的培养，要通过检测确保投喂的饵料是无特定病原携带(SPF)，人工饵料的投喂，包括虾片、微生态制剂及其他辅料等，每个产品也必须通过无特定病原(SPF)的检测；(5)虾苗培育关键点把控：a.育苗温度范围，全程27～32℃；b.育苗车间的光照和通风，避免阳光直射，苗池正上方2～3m处用遮阳布挡光，打开车间门窗，自然通风；c.苗池人为藻相构建：无节幼体发育到N5～N6时，开始向苗池投喂角毛藻、海链藻，维持水体中藻类密度5万～8万cell/mL，一直持续到虾苗完全变糠虾Ⅰ期(M1)，保持苗池的藻类不老化；d.苗池自然菌相形成：每日向苗池水体中投喂一定量的光合细菌，以供虾苗摄食菌体及净化水质，每日投喂一定量的EM菌培养基，为苗池的细菌增殖提供必要的营养物质，以配合藻类和人工饵料中的有益细菌繁殖，形成天然的菌相，达到苗池的总菌平衡；e.饵料投喂：虾苗蚤Ⅰ阶段(Z1)投喂早期微囊料和前期罐装虾片，投喂量为1g/m3，4顿/天，虾苗蚤Ⅱ(Z2)至蚤Ⅲ阶段(Z3)，投喂量增加到1.2～1.5g/m3，6顿/天，使用冻死或烫死的丰年虫无节幼体投喂100～150g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、拖便情况进行调整；虾苗糠Ⅰ(M1)至糠Ⅲ阶段(M3)投喂中期微囊料和中期桶装虾片，投喂量15～25g/百万尾，6顿/天，使用冻死或烫死的丰年虫无节幼体投喂200～300g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；虾苗到仔虾阶段投喂中后期桶装虾片，投喂量40～60g/百万尾，6顿/天，使用活的丰年虫无节幼体投喂250～300g/百万尾，4顿/天，并且要依据虾苗摄食、粪便情况进行调整；f.加换水：蚤Ⅲ(Z3)至糠Ⅲ阶段(M3)每日按海水与淡水1:1比例加6～10cm，仔虾后每日换水15％～30％，每日加水前向苗池投入1.2～1.5g/m3的维他命C；g.溶氧量：保持水体溶氧量6mg/L以上，N2～N6阶段充气呈微波状态，Z1～Z3阶段微沸腾状态，M1～M3阶段沸腾状态，仔虾后强沸腾状态；(6)育苗全过程检测跟踪：对投放无节幼体前、Z3阶段、M3阶段、PL3和PL7阶段的苗池海水进行水质和细菌的全程跟踪；(7)虾苗无特定病原检测与质量检验：对PL3和PL7阶段的虾苗进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)的无特定病原携带检测，在PL5～PL8阶段对虾苗进行多重指标的质量检验；(8)虾苗出售：对特定病原检测和质量检验合格的虾苗，按照客户的出苗要求，提前1～2天调整苗池盐度，出苗现场控制打包密度和水温。
2.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，其特征在于：所述育苗海水处理，高锰酸钾处理浓度为0.5～1.0g/m3，絮凝沉淀时间24～48h，一次氯消毒和二次氯消毒的有效氯浓度为20～25g/m3和10～15g/m3，水质调节则是通过添加小苏打(NaHCO3)40～50g/m3，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)5～10g/m3，充气混合均匀，停气沉淀12～24h。
3.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，其特征在于：所述室内育苗池清洗消毒，用10L淡水+有效浓度10％的碘液50mL+洗洁精2～5mL制成的混合溶液彻底刷洗内外壁两遍，淡水冲干净后通风晾晒2～3天。
4.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，其特征在于：所述无特定病原无节幼体投放，生产幼体的亲虾需通过虾肝肠胞虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类无特定病原的检测，确保无节幼体是SPF的。
5.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，其特征在于：苗池自然菌相形成，每日向苗池水体所投光合细菌的浓度需达到1.8×107CFU/mL以上，EM菌培养基浓度需达到18g/m3以上。
6.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，其特征在于：育苗全过程检测跟踪，定期检测育苗水体中的水质和细菌量等，具体就是总碱度120～160，pH值7.9～8.4，氨氮<0.4mg/L，亚硝酸盐<0.1mg/L，育苗用水黄菌≤10000，育苗用水绿菌≤1000，育苗用水荧光菌0，育苗用水总菌≥弧菌10倍。
7.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，其特征在于：虾苗无特定病原检测与质量检验，取PL3和PL7阶段的虾苗进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)的虾肝肠孢虫(EHP)、虾白斑综合征病毒(WSSV)、虾桃拉病毒(TSV)、传染性皮下和造血坏死病毒(IHHNV)、传染性肌坏死病毒(IMNV)、坏死性肝胰腺炎细菌(NHPB)、急性肝胰腺坏死病细菌(AHPND)、哈维氏弧菌(Vh)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)等虾类无特定病原携带检测；取PL5～PL8阶段对虾苗进行多重指标的质量检验，具体包括虾体黄菌≤200，虾体绿菌≤10，虾体荧光菌0，现场观察荧光0，脱壳/弱苗<6％，畸形/损伤<10％、胃肠内含物中肠不足1/4≤15％、肝胰脏颜色>90％颜色一致、肝胰脏消化细胞>70％、应激≥85％、体表寄生物<10％、鳃发育>70％、变异系数<12％。
8.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾室内工厂化生态式无特定病原苗种的培育方法，其特征在于：虾苗出售，出小苗(虾苗全长0.5～0.6cm)：接苗方气温20℃以下，包装水温23℃，接收方气温20℃以上，包装水温21～22℃；调苗方气温25度以上，包装要求栓冰瓶，打包密度4～6万尾/袋；出大苗(虾苗全长0.8cm以上)：运输时间小于3小时，包装水温28～30℃，运输时间3～6小时，包装水温26～28℃，运输时间大于6小时，包装水温24～26℃，密度要求：虾苗全长0.8～1.0cm：运输<3小时，5000～6000尾/袋，运输>3小时，4000～5000尾/袋；虾苗全长1.0～1.2cm：运输<3小时，4000～5000尾/袋，运输>3小时，3000～4000尾/袋；虾苗全长>1.2cm：运输<3小时的，3000～4000尾/袋，运输>3小时的不允许出苗。
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