CN110663541A - 一种直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法和栽培方法 - Google Patents
一种直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法和栽培方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110663541A CN110663541A CN201910952001.9A CN201910952001A CN110663541A CN 110663541 A CN110663541 A CN 110663541A CN 201910952001 A CN201910952001 A CN 201910952001A CN 110663541 A CN110663541 A CN 110663541A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sesame
- congo
- seeds
- distant
- distant hybrid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 244000150738 Sesamum radiatum Species 0.000 title claims abstract description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 title claims abstract description 19
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 241000894007 species Species 0.000 title claims description 19
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 claims abstract description 40
- 230000010152 pollination Effects 0.000 claims abstract description 37
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims abstract description 29
- 241000207961 Sesamum Species 0.000 claims abstract 8
- 241001573881 Corolla Species 0.000 claims description 12
- 230000035784 germination Effects 0.000 claims description 11
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 5
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 2
- 235000009438 Gossypium Nutrition 0.000 claims 1
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 claims 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 52
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 14
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 abstract description 13
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 8
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 8
- 238000012546 transfer Methods 0.000 abstract description 5
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract description 3
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 33
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 241000222336 Ganoderma Species 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 5
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 5
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 240000008397 Ganoderma lucidum Species 0.000 description 4
- 235000001637 Ganoderma lucidum Nutrition 0.000 description 4
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000635519 Haloarcula marismortui (strain ATCC 43049 / DSM 3752 / JCM 8966 / VKM B-1809) 30S ribosomal protein S8e Proteins 0.000 description 3
- 108020005120 Plant DNA Proteins 0.000 description 3
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 3
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 3
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 3
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 3
- PEYUIKBAABKQKQ-AFHBHXEDSA-N (+)-sesamin Chemical compound C1=C2OCOC2=CC([C@H]2OC[C@H]3[C@@H]2CO[C@@H]3C2=CC=C3OCOC3=C2)=C1 PEYUIKBAABKQKQ-AFHBHXEDSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIOFUWFRIANQPC-JKIFEVAISA-N Floxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=C(F)C=CC=C1Cl UIOFUWFRIANQPC-JKIFEVAISA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- LUSZGTFNYDARNI-UHFFFAOYSA-N Sesamol Natural products OC1=CC=C2OCOC2=C1 LUSZGTFNYDARNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 235000012730 carminic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- PEYUIKBAABKQKQ-UHFFFAOYSA-N epiasarinin Natural products C1=C2OCOC2=CC(C2OCC3C2COC3C2=CC=C3OCOC3=C2)=C1 PEYUIKBAABKQKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- VRMHCMWQHAXTOR-CMOCDZPBSA-N sesamin Natural products C1=C2OCOC2=CC([C@@H]2OC[C@@]3(C)[C@H](C=4C=C5OCOC5=CC=4)OC[C@]32C)=C1 VRMHCMWQHAXTOR-CMOCDZPBSA-N 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000005200 bud stage Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L magnesium chloride Substances [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000008775 paternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000009394 selective breeding Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000021404 traditional food Nutrition 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
- A01H1/02—Methods or apparatus for hybridisation; Artificial pollination ; Fertility
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G22/00—Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明提供的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法和栽培方法，获得该远缘杂种的方法包括以下步骤：以刚果野芝麻为母本，芝麻栽培种为父本进行人工杂交，常规田间管理，采收的种子即为所述远缘杂种；其中，所述人工杂交包括母本花开前和花开后进行连续两天以上的人工授粉。通过对重复授粉的时间进行限定，获得真实的远缘杂种。克服了常规的杂交方法不能直接获得芝麻远缘杂种植株，以及采用幼胚抢救技术获得芝麻杂种植株的方法难以进行广泛的推广和利用的缺陷；为刚果野芝麻优异基因的转移与利用奠定了基础，为完善芝麻远缘杂交育种技术提供了技术支撑。
Description
技术领域
本发明涉及生物育种技术领域，具体涉及一种获得野芝麻与栽培种远缘杂种的方法和栽培方法。
背景技术
芝麻(S.indicum L.，2n＝26)隶属于胡麻科胡麻属，是古老的油料作物之一，也是我国传统的优质油料作物；而且芝麻籽中含有丰富的不饱和脂肪酸和蛋白质，以及芝麻素(sesamin)、芝麻酚(sesamol)、维生素E等天然抗氧化类物质，因此，芝麻也是一种保健食品，具有很高的营养价值和广阔的消费群体，是我国许多传统食品不可或缺的原材料。
然而，由于芝麻栽培种在长期的进化和人工选择中，许多优良基因被淘汰，导致育种亲本间遗传基础越来越狭窄，遗传的多样性越来越贫乏；而且抗病耐渍性较差，易受环境条件的影响，严重影响芝麻生产的发展。而芝麻野生种在长期进化过程中形成了适应不同自然环境的极其丰富的遗传多样性，聚集了很多有利基因，如刚果野芝麻(S.schinzianumA.,2n＝64)具有抗旱、抗病、耐渍、耐寒、耐高温等优异特性，因此，将野生种中的有利基因导入栽培种不仅可以增加栽培种资源的遗传多样性，提高抗病耐渍性，而且对创制优良新种质和培育新品种具有重要意义。
为此，国内外学者就芝麻属的远缘杂交技术开展了大量的研究，研究表明现有传统的杂交方法一般包括人工去雄；单次授粉或一天之内重复授粉；种子收获等步骤，但是该方法存在杂交不结实，杂种胚不发育等现象，不能获得芝麻远缘杂种植株；现有能够成功获得芝麻属远缘杂种植株的方法大多是采用幼胚抢救技术，所述幼胚抢救技术是通过人为改善幼胚发育条件，促进幼胚发育成植株。但是，幼胚抢救技术需要较完善的组织培养技术平台，而且要熟练掌握胚培养技术，因此，采用幼胚抢救技术获得芝麻杂种植株的方法难以进行广泛的推广和利用，这大大限制了远缘杂交对芝麻育种改良的推广，因此，建立一种直接获得野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，将会为加快野芝麻优异性状基因的转移利用、完善芝麻远缘杂交育种技术提供技术支撑。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中采用常规的杂交方法不能获得芝麻远缘杂种植株、采用幼胚抢救技术获得芝麻杂种植株的方法难以进行广泛的推广和利用的缺陷，从而提供一种直接获得野芝麻与栽培种远缘杂种的方法和栽培方法。
为此，本发明提供如下技术方案：
一种直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，包括以下步骤：以刚果野芝麻为母本，芝麻栽培种为父本进行人工杂交，常规田间管理，采收的种子即为所述远缘杂种；
其中，所述人工杂交包括母本花开前和花开后进行连续两天以上的人工授粉。
所述人工杂交包括以下步骤：
父本花粉采集与保存：采取父本盛花期含雄蕊的花冠，低温密封遮光保存；
母本去雄：于傍晚将母本盛花期次日即将盛开的花朵去除花冠和雄蕊，保留雌蕊；
重复授粉：将采集的父本花粉授予人工去雄后的母本雌蕊，完成第一次授粉，次日清晨进行第二次授粉。
所述第一次授粉的时间为母本去雄时的傍晚。
所述父本花粉采集与短期保存步骤中的低温为5-15℃。
将刚果野芝麻与芝麻栽培种分批播种，保证亲本花期相遇。
所述母本比父本提前播种10-15天；由于父母双亲花期不一致，所以选择错期播种，母本花期偏迟，可以较父本提前播种10-15天，以提高授粉的成功率，进而获得刚果野芝麻与栽培种的远缘杂种。
母本的种植行距为55-65cm，株距为35-45cm；父本行距为35-45cm，株距为15-25cm；母本播种时间为5月下旬或6月上旬。因刚果野芝麻具有强分枝特性，因此在种植时对种植密度进行限定，有利于刚果野芝麻的生长。
所述芝麻栽培种为中芝11、中芝12、中芝13、中芝14、赣芝3号、赣芝10号、赣芝12号、赣芝13号、赣芝15号中的任意一种。
本发明还提供了一种直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的栽培方法，包括以下步骤：将上述直接获得的远缘杂种进行萌发培育、育苗、移栽。
所述育苗移栽步骤中的萌发培育是指将收获的种子放置在温度为26-30℃，湿度为90-100％的环境中进行萌发培育。
所述育苗为待萌发培育的种子露白后，将露白的种子转移至育苗块中，盖上基质进行育苗；
所述移栽为当育苗块中的幼苗生长至1-2对真叶全展时移栽至田间。
所述基质为疏松的基质；优选地，所述疏松的基质为泥炭土基质。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，包括以下步骤：以刚果野芝麻为母本，芝麻栽培种为父本进行人工杂交，常规田间管理，采收的种子即为所述远缘杂种；其中，所述人工杂交包括母本花开前和花开后进行连续两天以上的人工授粉。通过对重复授粉的时间进行限定，直接获得真实的远缘杂种植株，克服了常规的杂交方法不能直接获得芝麻远缘杂种植株，以及采用幼胚抢救技术获得芝麻杂种植株的方法难以进行广泛的推广和利用的缺陷；而且，为刚果野芝麻优异基因的转移与利用奠定了基础，为完善芝麻远缘杂交育种技术提供了技术支撑。
2.本发明提供的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，发明人经研究发现，芝麻柱头在花开放前一天就具有一定的可授性，在去雄的傍晚时间柱头可授性已经能够满足杂交需要，而花开放后到下午时，柱头可授性已经显著降低，此时授粉成功率很低。因此，采用花开放前的傍晚去雄时授粉一次，第二天早上正是芝麻散粉时间，即花开放时再次授粉，两次授粉时间均在柱头可授性较佳的时候完成，有利于提高杂交亲和性，进而获得远缘杂种。
3.本发明提供的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，发明人经研究还发现，芝麻花一般在早上开放并散粉，下午花冠会自然脱落导致花粉散尽或失去活力，所以需要对早上开放的花粉进行采集和短期保存，以便到傍晚进行授粉；并且采用低温密封遮光保存的方法对花粉进行短期保存后活力基本没有降低，杂交后可以正常萌发并完成受精，完全能满足授粉的需求。因此，本发明采用父本花粉采集与保存，可有效地防止父本花粉散尽或失去活力，保证第一次授粉的成功率。
4.本发明提供的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，由于父母双亲花期不一致，所以选择错期播种，可以提高授粉的成功率，进而获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种。
5.本发明提供的上述刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的栽培方法，包括以下步骤：将上述刚果野芝麻与栽培种远缘杂交获得的杂种进行萌发培育、育苗、移栽；由于杂种种子发芽势较弱、幼苗植株长势不旺盛等原因，采用育苗移栽可以很好地保护真实杂种的生长。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明中刚果野芝麻与栽培种中芝11的远缘杂种植株与双亲植株的形态学比较；
图2是本发明中刚果野芝麻与栽培种中芝11的远缘杂种植株的SSR分子标记鉴定电泳图；
图3是对比例中刚果野芝麻与栽培种中芝11的远缘杂种植株的SSR分子标记鉴定电泳图。
附图标记：
A为刚果野芝麻，B为实验例中刚果野芝麻与栽培种中芝11的真实杂种，C为芝麻栽培种中芝11；1为蕾期植株(Bar＝5cm)，2为花期植株，3为不同部位叶片(Bar＝5cm，从左到右依次为基部、中部和上部叶片)，4为花冠及花药(Bar＝1cm)，5为花粉育性观察(Bar＝100μm)；HS04、HS23、HS28、ZM01、ZM09、ZM10为6对双亲差异SSR引物名称，PS为母本刚果野芝麻，PI为父本栽培种中芝11，SI-1、SI-2和SI-3为3个远缘杂种植株。C-1、C-2、C-3、C-4和C-5为对比例1中的获得的5个假杂种植株。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
为了方便数据对比，本发明各实施例和对比例中均以刚果野芝麻为母本，栽培种中芝11为父本。
10×Taq buffer购买自Fermentas公司；
10mMol dNTPs购买自北京鼎国生物技术有限责任公司；
5U/μl Taq DNA聚合酶购买自Fermentas公司。
实施例
本实施例提供一种获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，及该杂种的栽培方法，具体包括如下步骤：
以刚果野芝麻为母本，栽培种中芝11为父本。
双亲种植：母本于2017年5月25日播种，父本11于2017年6月6日播种。其中，母本的行距为60cm，株距为40cm；父本的行距以40cm，株距20cm。
父本花粉的采集与短期保存：双亲进入盛花期后，于2017年7月25日早晨7:00取父本中花冠开放、花粉开始散发的花冠(含雄蕊)，将其放置在垫有潮湿滤纸的密封盒内，其湿度为80％，将密封盒放置在5℃低温环境中遮光保存至傍晚。
人工去雄：2017年7月25日傍晚19:00将母本植株上次日即将开放的花朵人工去除花冠和雄蕊，仅保留雌蕊。
第一次授粉：在母本进行人工去雄后，立即将采集和保存的父本花粉取出，授予人工去雄后的母本雌蕊。
重复授粉：2017年7月26日上午7:00，取正在开放的父本花朵雄蕊上的花粉对第一次授粉的母本雌蕊进行再次授粉。
重复上述父本花粉的采集与短期保存、人工去雄、第一次授粉、重复授粉的步骤，授粉花朵数共为650朵。
种子收获：重复授粉40天后，蒴果和种子发育成熟，于9月中下旬收获发育生长正常的蒴果216个，收集发育正常的种子157粒，晾干保存。
育苗移栽：次年5月26日，将杂交后收获的种子于垫有3层滤纸的培养皿中，在温度为28℃，湿度为100％条件下进行萌发培育；待萌发培育的种子露白后，将138粒正常露白的种子转移至湿度为100％的育苗块中，盖上疏松的基质泥炭土进行育苗；待育苗植株的幼苗生长至1-2对真叶全展时移栽至田间。
对比例
本实施例提供一种刚果野芝麻与栽培种远缘杂交的方法，及该杂交获得的种子的栽培方法，具体包括如下步骤：
以刚果野芝麻为母本，栽培种中芝11为父本。
双亲种植：父本、母本均于2017年6月1日播种，其中，母本的行距为65cm，株距为35cm；父本的行距以40cm，株距20cm。
人工去雄：于2017年7月30日傍晚18:00将母本植株上次日即将开放的花朵人工去除花冠和雄蕊，仅保留雌蕊，并挂吊牌作为标记。
授粉：于2017年7月31日早上6：00取正在开放的父本花朵雄蕊上的花粉授予人工去雄后并做有标记的母本雌蕊。
重复上述人工去雄、授粉的步骤，共杂交580朵花。
种子收获：重复授粉40天后，蒴果和种子发育成熟，可以收获。于9月中下旬收获发育生长正常的蒴果195个，收集发育正常的种子.106粒，晾干保存。
育苗移栽：2018年5月26日，将杂交后收获的种子于垫有3层滤纸的培养皿中，在温度为28℃，湿度为100％条件下进行萌发培育；待萌发培育的种子露白后，将76粒正常露白的种子转移至湿度为100％的育苗块中，盖上疏松的基质泥炭土进行育苗；待育苗植株的幼苗生长至1-2对真叶全展时移栽至田间。
实验例
对上述实验例的后代植株进行形态学以及分子标记鉴定。
后代植株形态学鉴定：
育苗移栽后25天，后代植株进入蕾花期，比较观察双亲以及实施例和对比例中杂交后代植株的叶片、茎秆、花冠颜色、蜜腺大小、花粉育性等性状指标，具体见表1，实验例1的植株长势见附图1。
1％醋酸洋红染色液的配置：取45ml冰醋酸，加蒸馏水55ml，煮沸后缓慢加入洋红1g，搅拌均匀后加入1颗铁锈钉，煮沸10分钟，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。
花粉育性观察具体操作步骤如下：
取花粉置于载玻片中，滴加2滴1％醋酸洋红染色液，充分混合，立即盖片染色15min后，吸取多余的染色液于显微镜下进行显微观察。
表1父母本及各实验例和对比例的后代植株形态学鉴定结果
由附图1和表1可知，实验例中杂种植株的各性状生长表现介于双亲之间、且花粉败育，可以初步视为真实杂种植株；由表1结果可知对比例中杂种植株的各性状生长表现与母本植株完全一致，可以初步视为非真实杂种植株。
后代植株分子标记鉴定：
采取双亲的植株叶片，以及实验例1的3株后代植株叶片和对比例1的5株后代植株叶片，首先，用2×CTAB提取液进行DNA提取；其次利用双亲DNA筛选差异的SSR分子标记，采用的40对引物中筛选到6对双亲存在差异的SSR引物，具体的6对双亲差异SSR引物见DNA序列表；然后利用该6对差异DNA引物对双亲和实验例的3个后代植株DNA和对比例的5个植株DNA进行PCR扩增和凝胶电泳检测，实验例的电泳结果见附图2，对比例的电泳结果见附图3。
其中，2×CTAB提取液的制备方法如下：
称取十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)4g，NaCl 16.364g，1M Tris-HCl 20ml(pH为8.0)，0.5M EDTA(pH为8.0)8ml，先用70ml无菌超纯水溶解,再定容至200ml，灭菌，冷却后依次加入1％的2-巯基乙醇400ul，摇匀即可。
TE缓冲液的制备方法如下：
1)1M Tris-HCl(pH 8.0)的配制：称取三(羟甲基)氨基甲烷6.06g，加超纯水40ml溶解，滴加浓HCl调pH至8.0，定容至50ml；
2)0.5M EDTA(pH 8.0)的配制：称取乙二胺四乙酸二钠9.306g，加超纯水35ml，剧烈搅拌，用NaOH颗粒调pH至8.0，定容至50ml；
3)TE缓冲液的配制：取上述1M Tris-HCl(pH 8.0)溶液1ml，0.5M EDTA(pH 8.0)溶液0.2ml，超纯水定容至100ml，即得。
应用2×CTAB提取液提取DNA方法如下：
取2片植株叶片于研钵中，加入液氮冷却后进行研磨，磨成粉末后转移至2ml离心管中；加入800μl的2×CTAB提取液，65℃水浴45min后，取出冷却至室温；加入氯仿/异戊醇(v/v＝24/1)的混合液800ul，缓慢摇晃5min；于12000rpm离心15min，取上清；加入-20℃预冷的异丙醇0.6ul，混匀，静置15min；3000rpm离心3min，去除上清液，留下絮状沉淀，加入70％乙醇溶液1ml漂洗15min；去掉上层溶液，留下絮状沉淀，晾干；加30ulTE缓冲液溶解后，-20℃冰箱保存备用。
SSR分子标记引物的具体操作如下：
将上述提取的DNA作为模板应用于PCR反应体系，所得SSR-PCR反应体系(15μl)为：50ng/μl模板DNA2μl、50ng/μl正反引物各1μl、10×Taq buffer1.5μl、10mMol dNTPs 0.3μl、25mMol MgCl2 1.2μl和5U/μl Taq DNA聚合酶0.2μl。
PCR扩增的程序为：
PCR扩增程序为94℃变性3min；94℃变性60s，57℃退火30s，72℃延伸45s，40个循环；然后72℃延伸10min，4℃保存。
凝胶电泳检测方法如下：
PCR产物用6％的PAGE凝胶进行电泳分离，电泳缓冲液为1×TBE溶液，电泳采用150V恒压电泳1.5h，电泳结束后，用10％醋酸溶液固定凝胶6min后，0.2％的硝酸银水溶液渗透银染12min；蒸馏水漂洗两次，每次2分钟；然后在1.5％氢氧化钠和0.4％甲醛混合溶液中显色，最后清水漂洗凝胶并记录读取数据。
由附图2可知，各实验例中6对SSR引物的扩增产物显示：3个后代植株DNA扩增到的条带均来自双亲，因此，从分子上证明了实验例中杂种植株的真实性；由附图3可知，对比例中4对SSR引物的扩增结果显示，随机选取的5个植株DNA扩增到的条带均为母本，没有检测到父本条带，因此，从分子上证明了对比例中所获得的植株均为假杂种。
由上述各实验例后代植株形态学鉴定和分子标记鉴定结果可知：本发明中提供的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，通过对重复授粉的时间进行限定，获得真实的远缘杂种植株，克服了现有的芝麻远缘杂交育种研究过程中只能通过胚抢救获得杂种的难题，减轻了胚抢救过程中组织培养的繁重工作量；而且利用该方法可以在不具备组织培养技术平台的条件下，直接实现刚果野芝麻与栽培种的远缘杂交，获得真实杂种，为刚果野芝麻优异基因的转移与利用奠定基础，为完善芝麻远缘杂交育种技术提供了技术支撑。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
SEQUENCE LISTING
<110> 江西省农业科学院作物研究所
<120> 一种直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法和栽培方法
<130> NHA201900274
<160> 12
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> HS04正向引物（人工序列）
<400> 1
tatgacgaaa aagcccacag 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> HS04反向引物（人工序列）
<400> 2
gccgaaactc tcaattttcc 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> HS23正向引物（人工序列）
<400> 3
tccctcttca gatccaatcc 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> HS23反向引物（人工序列）
<400> 4
atgacggaga agaggacgat 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> HS28正向引物（人工序列）
<400> 5
acacttgtaa atgggggagg 20
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> HS28反向引物（人工序列）
<400> 6
gagcgagaag caagagagag a 21
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> ZM01正向引物（人工序列）
<400> 7
gtttcttggt cttatcacag c 21
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> ZM01反向引物（人工序列）
<400> 8
taccaacgtc actcttcttt c 21
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> ZM09正向引物（人工序列）
<400> 9
ctcgccgttc taacattatc 20
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> ZM09反向引物（人工序列）
<400> 10
agtacagtct cctccgattt t 21
<210> 11
<211> 21
<212> DNA
<213> ZM10正向引物（人工序列）
<400> 11
atgcccatct ccatatactc t 21
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> ZM10反向引物（人工序列）
<400> 12
aattcttgcc tgactctacg 20
Claims (10)
1.一种直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，其特征在于，包括以下步骤：以刚果野芝麻为母本，芝麻栽培种为父本进行人工杂交，常规田间管理，采收的种子即为所述远缘杂种；
其中，所述人工杂交包括母本花开前和花开后进行连续两天以上的人工授粉。
2.根据权利要求1所述的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，其特征在于，所述人工杂交包括以下步骤：
父本花粉采集与保存：采取父本盛花期含雄蕊的花冠，低温密封遮光保存；
母本去雄：于傍晚将母本盛花期次日即将盛开的花朵去除花冠和雄蕊，保留雌蕊；
重复授粉：将采集的父本花粉授予人工去雄后的母本雌蕊，完成第一次授粉，次日清晨进行第二次授粉。
3.根据权利要求1所述的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，其特征在于，所述第一次授粉的时间为母本去雄时的傍晚。
4.根据权利要求1-3任一项所述的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，其特征在于，所述父本花粉采集与短期保存步骤中的低温为5-15℃。
5.根据权利要求1-3任一项所述的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，其特征在于，将刚果野芝麻与芝麻栽培种分批播种，保证亲本花期相遇。
6.根据权利要求5所述的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，其特征在于，所述母本比父本提前播种10-15天。
7.根据权利要求1-6任一项所述的直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法，其特征在于，所述芝麻栽培种为中芝11、中芝12、中芝13、中芝14、赣芝3号、赣芝10号、赣芝12号、赣芝13号、赣芝15号中的任意一种。
8.一种直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的栽培方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1-7任一项所直接获得的远缘杂种进行萌发培育、育苗、移栽。
9.根据权利要求8所述的刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的栽培方法，其特征在于，所述的萌发培育是指将收获的种子放置在温度为26-30℃，湿度为90-100％的环境中进行培育。
10.根据权利要求8所述的刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的栽培方法，其特征在于，所述育苗为待萌发培育的种子露白后，将露白的种子转移至育苗块中，盖上基质进行育苗；
所述移栽为当育苗块中的幼苗生长至1-2对真叶全展时移栽至田间。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910952001.9A CN110663541B (zh) | 2019-10-08 | 2019-10-08 | 一种直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法和栽培方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910952001.9A CN110663541B (zh) | 2019-10-08 | 2019-10-08 | 一种直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法和栽培方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110663541A true CN110663541A (zh) | 2020-01-10 |
| CN110663541B CN110663541B (zh) | 2021-05-25 |
Family
ID=69080973
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910952001.9A Active CN110663541B (zh) | 2019-10-08 | 2019-10-08 | 一种直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法和栽培方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110663541B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112655546A (zh) * | 2020-12-21 | 2021-04-16 | 江西省农业科学院作物研究所 | 一种三蒴型芝麻的高产定向改良方法 |
| CN113557952A (zh) * | 2020-04-28 | 2021-10-29 | 王建华 | 一种芝麻远缘杂交育种的方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102965431A (zh) * | 2012-08-31 | 2013-03-13 | 河南省农业科学院 | 芝麻栽培种与Sesamum radiatum野生种远缘杂交后代的分子鉴定方法 |
| US8993835B2 (en) * | 2010-04-28 | 2015-03-31 | Sesaco Corporation | Pygmy sesame plants for mechanical harvesting |
| CN104604736A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-05-13 | 河南省农业科学院芝麻研究中心 | 一种芝麻光敏感核雄性不育系及其杂交制种方法 |
| CN105104186A (zh) * | 2015-07-10 | 2015-12-02 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种利用幼胚挽救技术获得芝麻野生种和栽培种远缘杂交后代的方法 |
| CN105104185A (zh) * | 2015-07-10 | 2015-12-02 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种采用幼胚挽救获得芝麻远缘杂交后代的方法 |
| WO2017092110A1 (zh) * | 2015-12-03 | 2017-06-08 | 河南省农业科学院芝麻研究中心 | 芝麻花序有限基因Sidt1及其SNP标记 |
| CN109310059A (zh) * | 2016-04-13 | 2019-02-05 | 艾乐速Ag技术有限公司 | 花粉现场调节和保存方法 |
-
2019
- 2019-10-08 CN CN201910952001.9A patent/CN110663541B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8993835B2 (en) * | 2010-04-28 | 2015-03-31 | Sesaco Corporation | Pygmy sesame plants for mechanical harvesting |
| CN102965431A (zh) * | 2012-08-31 | 2013-03-13 | 河南省农业科学院 | 芝麻栽培种与Sesamum radiatum野生种远缘杂交后代的分子鉴定方法 |
| CN104604736A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-05-13 | 河南省农业科学院芝麻研究中心 | 一种芝麻光敏感核雄性不育系及其杂交制种方法 |
| CN105104186A (zh) * | 2015-07-10 | 2015-12-02 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种利用幼胚挽救技术获得芝麻野生种和栽培种远缘杂交后代的方法 |
| CN105104185A (zh) * | 2015-07-10 | 2015-12-02 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种采用幼胚挽救获得芝麻远缘杂交后代的方法 |
| WO2017092110A1 (zh) * | 2015-12-03 | 2017-06-08 | 河南省农业科学院芝麻研究中心 | 芝麻花序有限基因Sidt1及其SNP标记 |
| US10301687B2 (en) * | 2015-12-03 | 2019-05-28 | Henan Sesame Research Center, Henan Academy Of Agricultural Sciences | Sidt 1 gene controlling determinate growth habit in sesame and SNP molecular marker thereof |
| CN109310059A (zh) * | 2016-04-13 | 2019-02-05 | 艾乐速Ag技术有限公司 | 花粉现场调节和保存方法 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| R, PATHIRANA: "Natural Cross-Pollination in Sesame (Sesamum indicum L.)", 《PLANT BREEDING》 * |
| S. RAJESWARI等: "Production of interspecific hybrids between Sesamum alatum Thonn and", 《SOUTH AFRICAN JOURNAL OF BOTANY》 * |
| 伍尚信: "芝麻高产栽培技术", 《现代农业科技》 * |
| 刘红艳等: "芝麻栽培种与野生种种间杂交亲和性研究", 《中国农学通报》 * |
| 张海洋等: "芝麻栽培种与野生种（Sesamum schinzianum Asch、Sesamum radiatum Schum & Thonn）种间杂交后代的生物学特性", 《中国农业科学》 * |
| 杨弘远等: "芝麻授粉方法和性因素年龄的初步研究", 《湖北农业科学》 * |
| 王云生等: "《植物生理学》", 31 December 2018, 中国农业大学出版社 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113557952A (zh) * | 2020-04-28 | 2021-10-29 | 王建华 | 一种芝麻远缘杂交育种的方法 |
| CN112655546A (zh) * | 2020-12-21 | 2021-04-16 | 江西省农业科学院作物研究所 | 一种三蒴型芝麻的高产定向改良方法 |
| CN112655546B (zh) * | 2020-12-21 | 2022-05-24 | 江西省农业科学院作物研究所 | 一种三蒴型芝麻的高产定向改良方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110663541B (zh) | 2021-05-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104756853B (zh) | 一种新品种茶树的杂交育种方法 | |
| CN106688878A (zh) | 利用长雄野生稻无性繁殖特性培育多年生稻的方法 | |
| CN104488694A (zh) | 一种快速培育转基因玉米自交系的方法 | |
| CN110663541B (zh) | 一种直接获得刚果野芝麻与栽培种远缘杂种的方法和栽培方法 | |
| CN102960237B (zh) | 花生种间杂交品种的获得、繁殖保存与分子细胞学鉴定方法 | |
| Kishor et al. | Intergeneric hybrid of two rare and endangered orchids, Renanthera imschootiana Rolfe and Vanda coerulea Griff. ex L.(Orchidaceae): Synthesis and characterization | |
| CN101790958B (zh) | 一种小报春品种的选育方法 | |
| CN106954546B (zh) | 一种细胞质雄性不育早熟大白菜种质材料的选育方法 | |
| Daskalova et al. | Initial determination of polymorphism and in vitro conservation of some Ramonda serbica and Ramonda nathaliae populations from Albania, Macedonia and Bulgaria | |
| CN101897293A (zh) | 一种利用分子标记进行国兰杂交育种的方法 | |
| CN111937742A (zh) | 芙蓉菊与甘菊的属间远缘杂种创制方法 | |
| CN111024897A (zh) | 一种光核桃花的资源***评价和筛选方法 | |
| CN105104186A (zh) | 一种利用幼胚挽救技术获得芝麻野生种和栽培种远缘杂交后代的方法 | |
| Schwartz-Tzachor et al. | Flower characteristics and breeding system of two phenological ecotypes of Cyclamen persicum Mill.(Myrsinaceae) in Israel | |
| CN105104185B (zh) | 一种采用幼胚挽救获得芝麻远缘杂交后代的方法 | |
| US5557036A (en) | Dark red kidney bean variety and method of production | |
| Hayamanesh | The effect of high temperature on physiological and metabolic parameters and reproductive tissues of okra (Abelmoschus esculentus (L.) Moench) | |
| CN104853595B (zh) | 细胞质雄性不育洋桔梗及其制造方法 | |
| AU727616B2 (en) | Method for producing polyploid plants, and polyploid plants | |
| US20160000032A1 (en) | Zoysia japonica steud gin gi | |
| KR100495609B1 (ko) | 동계 시설재배용 부추 변종식물 및 이의 육종방법 | |
| KR100495610B1 (ko) | 동계 시설재배용 부추 변종식물 및 이의 육종방법 | |
| Murphy | Developing a hemp dihaploid protocol | |
| KR100470450B1 (ko) | 봄철 하우스재배용 부추 신품종 식물 | |
| KR100470451B1 (ko) | 노지재배용 부추 신품종 식물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |