CN110628849A - 氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法 - Google Patents

氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110628849A
CN110628849A CN201810662216.2A CN201810662216A CN110628849A CN 110628849 A CN110628849 A CN 110628849A CN 201810662216 A CN201810662216 A CN 201810662216A CN 110628849 A CN110628849 A CN 110628849A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ala
cofactor
riboflavin
flavin reductase
gly
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810662216.2A
Other languages
English (en)
Inventor
冯进辉
崔云凤
陈曦
王玉
刘祥涛
吴洽庆
朱敦明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Institute of Industrial Biotechnology of CAS
Original Assignee
Tianjin Institute of Industrial Biotechnology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Institute of Industrial Biotechnology of CAS filed Critical Tianjin Institute of Industrial Biotechnology of CAS
Priority to CN201810662216.2A priority Critical patent/CN110628849A/zh
Publication of CN110628849A publication Critical patent/CN110628849A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
    • C12N9/0026—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on CH-NH groups of donors (1.5)
    • C12N9/0028—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on CH-NH groups of donors (1.5) with NAD or NADP as acceptor (1.5.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/30—Nucleotides
    • C12P19/32—Nucleotides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two N-atoms in the same ring, e.g. purine nucleotides, nicotineamide-adenine dinucleotide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/30—Nucleotides
    • C12P19/36—Dinucleotides, e.g. nicotineamide-adenine dinucleotide phosphate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y105/00—Oxidoreductases acting on the CH-NH group of donors (1.5)
    • C12Y105/01—Oxidoreductases acting on the CH-NH group of donors (1.5) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.5.1)
    • C12Y105/0103—Flavin reductase (1.5.1.30)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公布了一种氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法，利用黄素还原酶、核黄素或者核黄素‑5‑磷酸(FMN)作用下，将还原态烟酰胺辅因子氧化为氧化态。本方法转化效率高，添加的共底物为催化剂量，并且共底物价格低廉，对环境影响小，为氧化还原酶的反应中氧化态烟酰胺辅因子再生提供了一条高效的途径。

Description

氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法
技术领域
本发明属于生物催化领域，尤其涉及氧化还原酶的烟酰胺类辅因子再生的方法。
背景技术
氧化还原酶是继水解酶之后工业运用最广泛的酶，氧化还原酶可以氧化或者还原羟基、醛基、氨基、巯基等，相应地，氧化还原辅因子在反应中起传递还原当量氢、电子的作用。氧化还原辅因子主要包括烟酰胺类辅因子NAD(H)和NADP(H)、黄素类辅因子FMN/FAD、卟啉等。其中烟酰胺类辅因子中，大部分的氧化还原酶依赖NAD(H)，少部分氧化还原酶依赖NADP(H)。在氧化还原酶的转化过程中，需要与底物摩尔量相同的辅因子，但是烟酰胺类的辅因子价格昂贵，如果不能够原位使辅因子再生，则反应成本极高。通过辅因子再生不仅可以降低反应成本，驱动反应完成的同时也可简化产品的分离。
目前已知的报道中，能够具有潜在应用价值的实现氧化态辅因子NAD+，NADP+再生的方法主要为酶法，酶法再生由于选择性高、反应条件温和占据着主导地位。如利用α-酮戊二酸与谷氨酸脱氢酶偶联实现氧化态辅因子NADP+的再生(Sergio Riva, RobertoBovara,Piero Pasta,Giacomo Carrea J.Org.Chem.,1986,51,2902-2906)；利用丙酮酸与乳酸脱氢酶偶联实现氧化态辅因子NAD+的再生(Antjie Gupta,Anke Tschentscher,MariaBobkova EP2004838B1)。上述的酶方法需要加入α-酮戊二酸或者丙酮酸的摩尔量要高于所需转化的底物摩尔量，从而实现反应的完全进行。利用漆酶与Meldola’s Blue偶联实现氧化态辅因子NAD+的再生(Ferrandi Erica Elisa,Monti Daniela,Patel Ilabahen,KittlRoman,Haltrich Dietmar,Riva Sergio,Ludwig Roland Adv. Synth.Catal.2012,354,2821-2828，)但是该方法需要加入价格较为昂贵的Meldola’s Blue。如何能够开发一种高效的辅因子酶再生方法，能够利用催化量的底物，实现高浓度的目标底物转化仍然是急需解决的一个问题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明利用黄素还原酶(FR)作为辅因子的再生酶、核黄素或核黄素-5-磷酸(FMN)作为共底物实现辅因子NAD+，NADP+的再生，该方法使用的黄素还原酶在pH 5.0-10.0范围内均能够保持高酶活，实现氧化态辅因子的再生。
本发明是通过利用如下技术方案实现的：
在反应体系中加入黄素还原酶，核黄素或者FMN，还原态辅因子即可转化为氧化态辅因子。
本发明提供了制备黄素还原酶制备的方法。
该制备方法包括以下步骤：(1)合成黄素还原酶基因并构建到pET21a表达载体上，获得带有目的酶基因的重组质粒。(2)将重组质粒转入宿主菌细胞(优选大肠杆菌BL21(DE3))，获得相应的工程菌株。(3)将上述的黄素还原酶基因构建到pET21a 表达载体上，获得带有目的酶基因的重组质粒(4)将重组质粒转入宿主菌细胞(优选大肠杆菌BL21(DE3))，获得相应的突变体工程菌株(5)将工程菌株接种至L-B培养基中，25℃培养16小时。(5)离心收集菌体，破菌留取上清液。
本发明还提供了利用黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态烟酰胺辅因子的方法。具体地，将黄素还原酶、核黄素或者FMN加入到还原态烟酰胺辅因子溶液中，即可以生成氧化态烟酰胺辅因子。
本发明的有益效果：本发明利用黄素还原酶的高活性，通过加入催化量的共底物核黄素或者FMN，还原态烟酰胺辅因子即可生成氧化态烟酰胺辅因子，从而实现氧化态烟酰胺辅因子的再生。本方法转化效率高，共底物用量少，并且操作简单方便、条件温和，适用于工业生产中氧化态辅因子的再生。
具体实施方式
下面的实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。
实施例1：黄素还原酶基因获得的
1.1黄素还原酶基因的合成及获得
黄素还原酶基因来源于Mycobacterium neoaurum的核黄素还原酶(MFR)(GenBank:WP_049744407.1)或者是来源于Escherichia coli的黄素还原酶(EFR)(GenBank:AUY29864.1)，根据大肠杆菌密码子偏好性对该基因优化后送公司合成，密码子优化后的基因，分别在5’端添加NdeI(CATATG)酶切位点、在3’端添加XhoI(CTCGAG) 酶切位点，克隆至PET21a载体上。
1.2重组质粒的转化
氯化钙法制备感受态大肠杆菌细胞。
将消化纯化后的PCR产物用化学转化的方法转入大肠杆菌中，转化过程为：
(1)取10μL重组质粒于50μL大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，冰浴30min。
(2)42℃水浴热激90s，快速置于冰上1～2min。
(3)加入新鲜LB液体培养基600μL，于37℃振荡培养45～60min。
(4)取200μL菌液涂布于含有氨苄青霉素(1mg/mL)的LB固体培养基表面， 37℃培养12～16h至单菌落出现。
实施例2：黄素还原酶表达菌的构建及诱导表达
将消化纯化后的PCR产物用化学转化的方法转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中后，挑取单克隆至4mL含氨苄青霉素(1mg/mL)的LB培养基中，取新鲜菌液送测序公司测序，测序结果显示正确的表达菌。配置种子液50mL，培养基为LB 液体培养基(蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 10g/L)，用接种环挑取基因工程菌单菌落接入培养基中，37℃，200rpm培养过夜。将过夜培养的种子液以1％的接种量转接到发酵培养基，25℃，200rpm培养20h。取发酵液5mL浓缩超声破菌后，检测脱水酶活力。
实施例3：黄素还原酶纯化
诱导表达后的发酵液6500rpm离心十分钟收集菌体，收集菌体用缓冲液(0.1mol/LpH 7.0磷酸钠缓冲液和0.5M NaCl)重悬洗涤一遍，采用同样方法离心缓冲液重悬，重悬液采用高压匀浆均质机进行破碎，破碎液6000rpm，4℃离心20min获得粗酶液，将获得的粗酶液采用His-Trap TM/FF亲和层析柱进行分离纯化，采用含咪唑的洗脱液 (0.1M磷酸钠、0.5MNaCl、0.25M咪唑，pH 7.0)，进行梯度洗脱，收集活性部分，采用SDS-PAGE检测酶蛋白纯度。
实施例4：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子
在96孔板中加入适量的黄素还原酶，0.2mM FMN，0.5mM的NADH，检测在 340nm下的紫外吸收变化，获得MFR的比活为650U/mg，EFR的比活为480U/mg
实施例5：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1mL反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)，辅因子NAD+(0.1mM)，黄素还原酶(MFR)，核黄素-5-磷酸(0.1mM)30℃反应， 12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例6：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1mL反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)，辅因子NAD+(0.1mM)，黄素还原酶(EFR)，核黄素-5-磷酸(0.1mM)30℃反应， 12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例7：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1mL反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)，辅因子NADH(0.1mM)，黄素还原酶(MFR)，核黄素-5-磷酸(0.1mM)30℃反应， 12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例8：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)，辅因子NAD+(0.05mM)，黄素还原酶(MFR)，核黄素-5-磷酸(0.1mM)30℃反应，
12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例9：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，共表达了7α-甾体脱氢酶与黄素还原酶(MFR)的菌体，核黄素-5-磷酸(0.1mM)30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例10：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)的破菌液，黄素还原酶(MFR)的破菌液，核黄素-5-磷酸(0.1mM)30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例11：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)的破菌液，黄素还原酶(EFR)的破菌液，核黄素(0.1mM)30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例12：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)的破菌液，黄素还原酶(EFR)的破菌液，核黄素(0.1mM)，NADP+(0.1mM)30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例13：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)的破菌液，黄素还原酶(EFR)的破菌液，核黄素(0.1mM)，30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例14：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)的破菌液，黄素还原酶(EFR)的破菌液，核黄素(0.5mM)，30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例15：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)的破菌液，黄素还原酶(EFR)的破菌液，核黄素(0.01mM)，30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例16：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)的破菌液，黄素还原酶(EFR)的破菌液，核黄素-5-磷酸(0.1mM)30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例17：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)的破菌液，黄素还原酶(EFR)的破菌液，核黄素-5-磷酸(0.1mM)，NADP+(0.1mM) 30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例18：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)的破菌液，黄素还原酶(EFR)的破菌液，核黄素-5-磷酸(0.1mM)，30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例19：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)的破菌液，黄素还原酶(EFR)的破菌液，核黄素-5-磷酸(0.5mM)，30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
实施例20：黄素还原酶、核黄素或者FMN再生氧化态辅因子的方法
在1L反应体系中，加入鹅去氧胆酸(10mM)，7α-甾体脱氢酶(7α-HSDH)的破菌液，黄素还原酶(EFR)的破菌液，核黄素-5-磷酸(0.01mM)，30℃反应，12小时后检测，鹅去氧胆酸转化率>95％。
序列表
<110> 中国科学院天津工业生物技术研究所
<120> 1. 氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法
<130> 20180306
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 161
<212> PRT
<213> Mycobacterium neoaurum
<400> 1
Met Ser Ala Thr Asp Leu Ser Pro Thr Ser Leu Arg Glu Ala Phe Gly
1 5 10 15
His Phe Pro Ser Gly Val Ile Ala Ile Ala Ala Glu Val Asp Gly Thr
20 25 30
Arg Val Gly Leu Ala Ala Ser Thr Phe Val Pro Val Ser Leu Glu Pro
35 40 45
Pro Leu Val Ala Phe Cys Val Gln Asn Ser Ser Thr Thr Trp Pro Lys
50 55 60
Leu Lys Asp Leu Pro Ser Leu Gly Ile Ser Val Leu Gly Glu Ala His
65 70 75 80
Asp Thr Ala Ala Arg Thr Leu Ala Ala Lys Thr Gly Asp Arg Phe Ala
85 90 95
Gly Leu Glu Thr Glu Ser Arg Asp Ser Gly Ala Val Phe Ile Asn Gly
100 105 110
Thr Ser Val Trp Leu Glu Ser Ala Ile Glu Gln Leu Val Pro Ala Gly
115 120 125
Asp His Thr Ile Val Val Leu Arg Val Ser Asp Ile Val Ile Asn Glu
130 135 140
Ala Val Pro Pro Ile Val Phe His Arg Ser Ala Phe Arg Lys Leu Gly
145 150 155 160
Ala
<210> 2
<211> 233
<212> PRT
<213> Escherichia coli
<400> 2
Met Thr Thr Leu Ser Cys Leu Val Thr Ser Val Gly Ala Ile Thr Ala
1 5 10 15
Thr Val Thr Ala Val Ala Ile Val Pro Ala Ala Ala Pro Ser Pro Ala
20 25 30
Ala Gly Gly Thr Leu Met Val Val Met Ala Gly Ala Ala Leu Ala Pro
35 40 45
Pro Ser Met Ala Ser Thr Pro Ala Gly Leu Gly Pro Ile Gly Leu His
50 55 60
Ile Gly Ala Ser Gly Ile Ala Leu Thr Ala Leu Ala Val Met Ala Ala
65 70 75 80
Ile Leu Leu Ala His Gly Ile Val Val Ala Ile Pro His Gly Gly Ala
85 90 95
Thr Leu Ala Ala Ala Gly Gly Ala Pro Met Ile Leu Ile Ala Gly Gly
100 105 110
Thr Gly Pro Ser Thr Ala Ala Ser Ile Leu Leu Thr Ala Leu Ala Ala
115 120 125
Ala Pro Ala Ala Ala Ile Thr Ile Thr Thr Gly Gly Ala Gly Gly Gly
130 135 140
His Leu Thr Ala Leu Cys Gly Leu Gly Ala Leu Ser Leu Leu His Pro
145 150 155 160
Gly Leu Gly Val Val Pro Val Val Gly Gly Pro Gly Ala Gly Thr Ala
165 170 175
Gly Ala Thr Gly Thr Val Leu Thr Ala Val Leu Gly Ala His Gly Thr
180 185 190
Leu Ala Gly His Ala Ile Thr Ile Ala Gly Ala Pro Gly Met Ala Leu
195 200 205
Ile Ala Ala Ala Leu Pro Cys Ser Gly Ala Ala Ala Ala Gly Ala Ala
210 215 220
Leu Pro Gly Ala Ala Pro Ala Pro Ile
225 230

Claims (5)

1.氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法，将黄素还原酶、核黄素或核黄素-5-磷酸(FMN)加入到可生成还原态烟酰胺辅因子溶液中，从而实现氧化态烟酰胺辅因子的再生。
2.如权利要求1所述的氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法，其特征在于，黄素还原酶的序列包含了来源于Mycobacterium neoaurum的核黄素还原酶(GenBank:WP_049744407.1)或者是来源于Escherichia coli的黄素还原酶(GenBank:WP_074551252.1)的具有至少80％序列相似性蛋白质，所述的黄素还原酶具有氧化还原态烟酰胺辅因子的活力。
3.如权利要求2所述的氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法，其特征在于，黄素还原酶的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1，No.2所示。
4.如权利要求1所述的氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法，其特征在于，还原态的烟酰胺辅因子为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)或者烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)。
5.如权利要求1所述的氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法，其特征在于，该方法可以应用于醇脱氢酶在氧化醇的反应中。
CN201810662216.2A 2018-06-25 2018-06-25 氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法 Pending CN110628849A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810662216.2A CN110628849A (zh) 2018-06-25 2018-06-25 氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810662216.2A CN110628849A (zh) 2018-06-25 2018-06-25 氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110628849A true CN110628849A (zh) 2019-12-31

Family

ID=68967979

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810662216.2A Pending CN110628849A (zh) 2018-06-25 2018-06-25 氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110628849A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112852911A (zh) * 2020-07-23 2021-05-28 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种熊去氧胆酸的制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DALE G. DRUECKHAMMER 等: "FMN Reductase Catalyzed Regeneration of NAD(P) for Use in Enzymatic Synthesis", 《J. ORG. CHEM.》 *
吕陈秋 等: "烟酰型辅酶NAD（P）＋和NAD（P）H再生的研究进展", 《有机化学》 *
朱晨杰 等: "天然烟酰胺辅因子再生体系及其人工类似物研究进展", 《化工学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112852911A (zh) * 2020-07-23 2021-05-28 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种熊去氧胆酸的制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11371065B2 (en) Genetically engineered strain
Ni et al. Highly stereoselective reduction of prochiral ketones by a bacterial reductase coupled with cofactor regeneration
Weckbecker et al. Improved synthesis of chiral alcohols with Escherichia coli cells co-expressing pyridine nucleotide transhydrogenase, NADP+-dependent alcohol dehydrogenase and NAD+-dependent formate dehydrogenase
CN107686850B (zh) 一种利用共表达重组菌株转化生产α-酮戊二酸的方法
US10294479B2 (en) Candida carbonyl reductase and method for preparing (R)-lipoic acid precursor
KR101474816B1 (ko) Ｎａｄｈ 또는 ｎａｄｐｈ의 존재 하에 산화환원효소/탈수소화효소를 이용한 세코디온 유도체의 거울상이성질체 선택적인 효소적 환원 방법에 의한 세콜 유도체의 제조 방법
CN112662637B (zh) 一种甲酸脱氢酶突变体及其制备方法和应用
CN111996176B (zh) 羰基还原酶突变体及其应用
CN109609426B (zh) 一种以甲醇/甲醛和葡萄糖为共底物生产1,3-丙二醇的方法
CN108410831B (zh) 酮酸还原酶、基因、工程菌及在合成手性芳香2-羟酸中的应用
CN109706189B (zh) 一种d-手性肌醇的制备方法
WO2020259585A1 (zh) 一种生产羟基酪醇的工程菌
CN109722442B (zh) 7β-羟基胆酸脱氢酶及其应用
CN110628849A (zh) 氧化态烟酰胺类辅因子再生的方法
Feng et al. Whole-cell biotransformation for simultaneous synthesis of allitol and D-gluconic acid in recombinant Escherichia coli
CN108060145B (zh) 一种酶活提高的2,3-丁二醇脱氢酶突变体及其构建方法
CN111826358B (zh) 12-羟基胆酸脱氢酶及其应用
JP2004159587A (ja) ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属細菌組換え体、及びそれを用いた光学活性体の製造方法
CN111254170B (zh) 一种多酶耦合制备(s)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸的方法
CN109897872B (zh) 酶法制备(2s,3s)-n-叔丁氧羰基-3-氨基-1-氯-2-羟基-4-苯基丁烷
JP2006503559A (ja) Ｄ−マンニトールを製造するための方法並びに微生物
CN111826405B (zh) 一种生物催化还原丙酮酸产d-乳酸的方法
CN116590374A (zh) 一种多酶偶联一锅法不对称制备精草铵膦的方法
CN112852912B (zh) 一种合成7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸的方法
CN116218802A (zh) 一种l-泛解酸内酯脱氢酶及其突变体、编码基因及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20191231

RJ01 Rejection of invention patent application after publication