CN110624080A - 治疗属血热瘀阻证的眼内出血性疾病的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物组合物，特别是指一种治疗属血热瘀阻证的眼内出血性疾病的药物组合物。该药物组合物由有效量的墨旱莲、生蒲黄、丹参、郁金、赤芍、牡丹皮、荆芥炭、生地黄、夏枯草、炒茜草、川芎、三七组成，本发明解决了现有药物中存在的临床治疗效果不理想的问题，经药效学试验证实，本发明中的药物组合物对于由肾上腺素加冰水造成的血瘀模型大鼠全血比粘度(高、中、低切)均有降低作用；可明显增加肾上腺素致微循环障碍小鼠耳廓微动脉及微静脉管径，加快微血管内RBC流速，改善小鼠耳廓微循环；均可明显缩短华法林致凝血障碍小鼠出、凝血时间。经急性毒性预试验证实，该药物组合物毒性较小。

Description

治疗属血热瘀阻证的眼内出血性疾病的药物组合物

技术领域

本发明属于药物组合物，特别是指一种治疗属血热瘀阻证的眼内出血性疾病的药物组合物。

背景技术

出血性眼病是眼科临床上常见的一类眼病，多种眼病可以导致眼内出血，常见的有：视网膜静脉阻塞、视网膜血管炎、糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、中心性渗出性脉络膜视网膜病变、眼外伤导致的前房积血、玻璃体积血以及视网膜出血性疾病等。中医认为出血原因多由热邪而致，血热淤阻是其主要证型。

视网膜静脉阻塞(retinal vein occlusion，RVO)是一种以视网膜出血、渗出、水肿及静脉迂曲扩张为主要临床特点的常见眼底病。根据视网膜缺血情况可分为缺血型视网膜静脉阻塞和非缺血型视网膜静脉阻塞。大多数发生在中老年人，常为单眼发病。本病的病因复杂，老年患者多与高血压、动脉硬化、高血脂、高血粘度和血液动力学的改变密切相关。青年患者以病灶性、中毒性、内源性及反应性疾病引起的静脉炎症为主。视网膜静脉阻塞的发生与全身情况有着密切关系。

视网膜血管炎是以非特异性的血管周围浸润，血管壁增厚形成白鞘为特征的眼底病。由多种原因引起，特发性视网膜血管炎又称Eales病、视网膜静脉周围炎、青年复发性视网膜玻璃体出血，是以大量或反复发作性玻璃体出血，最终导致视功能严重损害为主要临床特征的血管炎性病变。常发生于青年男性，多双眼先后发病。

年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，ARMD)又称老年性黄斑变性，为黄斑部组织结构的衰老性改变，是老年人最常见的致盲性疾病之一。临床分为干性(萎缩性)与湿性(渗出性)两大类，前者常双眼同时发病，后者多为双眼先后发病。干性比湿性发病率高，干性ARMD有时可以转化为湿性ARMD。病因尚不清楚，可能与遗传因素、环境影响、视网膜慢性光损伤(可见光中尤其是蓝光)、营养失调、代谢障碍、免疫性疾病、心血管疾病等原因有关。视网膜色素上皮(RPE)吞噬和消化光感受器外节盘膜的功能逐渐减退，残余的代谢产物***至Bruch膜(玻璃膜)处，积存在RPE与Bruch膜之间，形成大量的玻璃膜疣，日久色素上皮与Bruch膜发生变性，从而导致ARMD。干性ARMD主要为脉络膜毛细血管萎缩、玻璃膜增厚和RPE萎缩等引起的黄斑区萎缩改变；湿性ARMD主要是由于玻璃膜的破坏，脉络膜毛细血管经由玻璃膜损害处向RPE或神经上皮处生长，形成脉络膜新生血管，引起渗出、出血，最终形成机化瘢痕。

中心性渗出性脉络膜视网膜病变(central exudative chorioretin opathy)简称“中渗”，是一种局限于黄斑或其附近的脉络膜视网膜肉芽肿性炎症。以黄斑部有灰白色渗出病灶伴局限性视网膜下新生血管和出血为特点。病因至今未明。其发病与弓形体病、结核、组织胞浆菌病、Lyme病及病毒感染等有关。炎症原发于黄斑或其附近的脉络膜，由于脉络膜肉芽肿炎症诱发新生血管，并经被损害的Bruch膜及色素上皮侵入视网膜神经上皮层下，形成新生血管膜而致渗出、出血、机化，最终因疤痕形成而造成中心视力永久性损害。

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病的严重并发症之一。随着生活水平的提高，发病率日趋增高。DR的病变部位在视网膜微血管***，以眼底出现微血管瘤、出血斑点、硬性渗出、棉绒斑和新生血管为特征。双眼发病，其严重程度主要取决于病程长短和血糖控制状况。视网膜微循环异常是DR的基础。早期表现为毛细血管内皮细胞的基底膜增厚及周细胞丧失，内皮细胞的屏障功能遭到破坏，血管中成分渗出，继而毛细血管闭塞，广泛的视网膜缺血引起视网膜水肿和新生血管形成，在此基础上出现各种的眼底改变。

眼球钝挫伤导致的眼内血管破裂而引起的前房出血、玻璃体积血、视网膜出血等，玻璃体积血是指由于脉络膜血管或视网膜血管破裂而致血液流入玻璃体腔的一种常见的眼部并发症，又称“玻璃体出血”。常因视网膜静脉阻塞、糖尿病视网膜病变、视网膜血管炎、老年性黄斑变性、高血压视网膜病变、Coats病、眼内手术、外伤等引起。上述疾病严重时均可导致玻璃体积血的发生。

从疾病预后上看，视网膜静脉阻塞、视网膜血管炎的预后与是否发生视网膜无灌注区和合并黄斑水肿有关，非缺血性视网膜静脉阻塞未合并黄斑区水肿的患者视力预后较好。糖尿病视网膜病变的预后与患者血糖控制水平及视网膜增增殖情况以及黄斑水肿的发生有关，年龄相关性黄斑变性和中渗症的预后与新生血管发生的部位和视网膜瘢痕化程度有关，临床多预后不良。外伤性前房积血预后较好，前房积血大多数可完全消失，其视力预后主要取决于外伤导致的眼内结构的破坏程度有关。而上述疾病的晚期或严重患者均可引起玻璃体积血，因而玻璃体积血的预后与玻璃体积血发生的时间、引起玻璃体积血的原因有关，玻璃体积血久不吸收的患者需行玻璃体切除术治疗。

关于视网膜静脉阻塞、视网膜血管炎、糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、中心性渗出性脉络膜视网膜病变、眼外伤导致的前房积血以及玻璃体积血的治疗方法如下：

1、西医治疗方法

视网膜静脉阻塞应积极寻找病因，治疗原发病，如治疗高血压、动脉硬化、糖尿病、高血脂和感染病灶等。目前西医对本病的治疗尚无特效疗法。缺血型视网膜静脉阻塞一旦发现视网膜有大片无灌注区后，应行视网膜光凝治疗，防止新生血管和新生血管青光眼发生。严重的黄斑囊样水肿，应行玻璃体腔注射抗VEGF药物或***缓释剂以减轻黄斑水肿，提高视功能。

视网膜血管炎的治疗首先应进行病因治疗如抗结核治疗、糖皮质激素治，如合并视网膜无灌注区形成者、玻璃体积血甚至视网膜新生血管者应行视网膜光凝治疗、玻璃体腔注射抗VEGF药物治疗、严重者需行玻璃体切除术治疗等。

湿性ARMD的治疗目前以玻璃体腔注射抗VEGF药物联合中药辨证施治为主。

中心性渗出性脉络膜视网膜病变治疗应查找可能的病因，进行对因治疗。怀疑为结核感染者，应行结核菌素试验，阳性者进行规则的抗结核治疗；怀疑病毒或弓形虫感染者，行血清抗体检查。若查不出任何病因，可适当给予非特异性抗炎药治疗，同时需联合玻璃体腔注射抗VEGF药物治疗。

糖尿病视网膜病变的治疗首先要严格控制血糖。同时可用羟苯磺酸钙等改善微循环。对于严重的黄斑水肿者，可玻璃体腔注射激素类缓释剂或抗VEGF。对出血较多者，可予止血药物。视网膜激光光凝治疗可防止或减缓增生性改变，对保存患者视力非常重要，对玻璃体积血或增殖型视网膜病变者，行玻璃体切除术联合视网膜复位手术。

眼外伤导致的前房积血可给予半卧位安静休息，包扎双眼。积血多，吸收慢，尤其有暗黑色血块时，伴眼压升高，经药物治疗眼压在5～7天内不能控制，应作前房冲洗术或凝血块切除术，以避免角膜血染和视神经损害。

玻璃体积血西医治疗首先要针对病因进行治疗，头高位安静卧床，出血期可给予止血药物如止血敏注射液100mg或安络血注射液10mg肌注，每日1次。应用抗凝剂者应停用抗凝剂。陈旧性出血可予普罗碘胺注射液0.4g，每日1次肌注，或尿激酶1万单位，每日1次，患眼局部电离子导入。随着现代玻璃体切除手术的成熟发展，玻璃体积血保守治疗15天-1个月、积血无明显吸收或玻璃体已发生增殖机化者，应及时行玻璃体切除手术，手术后再行FFA检查进一步明确发生玻璃体出血的病因，必要时行视网膜光凝治疗以预防出血的再次发生。

2、中医病机及治疗方法

视网膜静脉阻塞多因情志抑郁，肝气不舒，肝郁气滞，瘀血阻络；或暴怒伤肝，肝气上逆；或肝肾阴虚，肝阳上亢；或阴虚火旺，上扰清窍；或肝火内盛，热郁脉络，致使目中脉络阻塞，血溢脉外而发病。临床分为肝郁络阻证、阴虚阳亢证、血热郁阻证、阴虚火旺证，治疗以舒肝解郁，散瘀通脉、滋阴散瘀，平肝潜阳、清热凉血，解毒散瘀、滋阴降火，凉血散瘀为法。

视网膜血管炎的主要病机为火热动血。多由情志内伤，肝气不舒，郁久化热，肝火上炎；或嗜辣恣燥，火热内扰，热伤营分，血热妄行；或肝肾阴虚，虚火上炎，灼伤脉络，或久病心脾两虚，血虚气弱，失于统摄，血不循经所致。临床分为热瘀脉络证、阴虚肝郁证、气血两虚证、瘀血结滞证，治疗分别以清热凉血，止血散瘀、滋阴解郁，凉血散瘀、补气摄血，宁心安神、活血散结，祛瘀明目为法。

年龄相关性黄斑变性的病机多因年老体衰，肾精亏虚，不能上注于目，以滋神光；或肝肾阴虚，虚火上炎；或脾虚不运，痰湿内聚，脉络阻滞，清气不能上承所致。临床分为肝肾阴亏证、脾虚湿困证、阴虚火旺证，治疗分别以补益肝肾，益精明目、健脾利湿，活血明目、滋阴降火，凉血散血为法。

中心性渗出性脉络膜视网膜病变多由肝肾阴亏，虚火上炎；或饮食不节，湿热内生，熏蒸目窍；或情志不畅，肝郁气滞，日久化热，热入营血，迫血外溢所致。临床分为阴虚火旺证、湿热内蕴证、肝经郁热证，治疗分别以滋阴降火，凉血散血、清热利湿，升清降浊、疏肝理气，活血化瘀。

糖尿病视网膜病变的主要病机是阴虚燥热，阴虚为本，燥热为标。多因长期情志抑郁，气郁化火，火热内燔，消灼肺胃阴津而发为消渴；或过食肥甘，醇酒厚味，损伤脾胃，致积热内蕴，胃热炽盛，消谷耗液，发为消渴；或素体阴虚，肾阴耗损，肾失固涩，发为消渴；消渴日久，阴损及阳，阴阳俱虚，或病久入络，血脉瘀滞。临床分为阴虚燥热证、气阴两虚证、胃热内盛证、肾气虚衰证，治疗分别以滋阴润燥、益气养阴，凉血化瘀、清胃通腑、补肾益气为法。

眼外伤导致的前房积血是由于外力伤及眼深部组织，气血受挫，组织受损甚至挫伤目系，致使视物模糊，或视力丧失。临床分为络伤出血、气滞血瘀证，治疗以止血散瘀、行气活血，化瘀止痛为法。

玻璃体积血多因热入血分，迫血妄行；或肝郁气滞，血溢络外；或眼部外伤，脉络破损；或肝肾阴虚，虚火灼络而发病，临床分为在治疗本病时要坚持“急则治其标，缓则治其本”的原则，在全身辨证施治的基础上，结合辨病分期加减用药。在出血早期以凉血止血为主，中期宜活血化瘀，至晚期积血凝结或增殖机化，则佐以破血消瘀，软坚散结之品等。临床全身辨证施治分为血热瘀阻证、肝郁气滞证、虚火上炎证、血络受损证，治疗分别以清热凉血，化瘀止血、活血化瘀，止血明目、滋阴降火，凉血止血、养血活血，止血化瘀。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗属血热瘀阻的眼内出血性疾病的药物组合物。用于治疗属血热瘀阻的视网膜静脉阻塞、视网膜血管炎、糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、中心性渗出性脉络膜视网膜病变、眼外伤导致的前房积血、玻璃体积血以及视网膜出血性疾病。

本发明的整体技术构思是：

治疗属血热瘀阻证的眼内出血性疾病的药物组合物，由下列质量份数的原料药组成：

墨旱莲10-50；生蒲黄3-20；丹参5-30；郁金5-30；赤芍5-40；牡丹皮5-40；荆芥炭3-30；生地黄5-35；夏枯草5-40；炒茜草3-30；川芎3-25；三七3-20。

更进一步，治疗属血热瘀阻证的眼内出血性疾病的药物组合物，由下列质量份数的原料药组成：

墨旱莲15-40；生蒲黄5-15；丹参6-20；郁金6-20；赤芍6-25；牡丹皮6-30；荆芥炭5-20；生地黄6-25；夏枯草10-30；炒茜草5-20；川芎5-20；三七3-10。

更进一步，治疗属血热瘀阻证的眼内出血性疾病的药物组合物，由下列质量份数的原料药组成：

墨旱莲30；生蒲黄12；丹参15；郁金12；赤芍15；牡丹皮20；荆芥炭6；生地黄20；夏枯草20；炒茜草6；川芎9；三七5。

本发明与河北省邢台市眼科医院于《河北中医》2012年5月第34卷第5期中的《止血明目无糖颗粒治疗早期玻璃体出血46例疗效观察》一文中公开的止血明目无糖颗粒的区别在于：

1、组方原则及用药机理不同

对比文件中止血明目无糖颗粒(药物组成：墨旱莲、丹参、郁金、蒲黄、赤芍药、牡丹皮、荆芥炭等)。方中以墨旱莲、丹参、郁金为主药进行组方，滋阴益肾，凉血止血，丹参疏通血脉，郁金行气解瘀，佐以蒲黄止血而能行血化瘀，赤芍药清热凉血，牡丹皮功擅血热妄行所致出血，荆芥炭与其他止血药同用增加了止血作用。因此，其组方有滋补肝肾、清热凉血、活血祛瘀的功效，充分体现了中医学“标本兼治”的原则。

本申请中的药物组合物以凉血止血，活血散瘀为组方原则，用于治疗血热瘀阻的视网膜静脉阻塞、视网膜血管炎、糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、中心性渗出性脉络膜视网膜病变、眼外伤导致的前房积血、玻璃体积血以及视网膜出血性疾病，其组成为生蒲黄、墨旱莲、丹参、郁金、赤芍、牡丹皮、荆芥炭、生地黄、夏枯草、炒茜草、川芎、三七。方中以墨旱莲凉血止血，生蒲黄止血散瘀为君药。丹皮、赤芍、生地黄清热凉血，增强凉血止血的功效；荆芥炭、三七、炒茜草以止血散瘀为主要功效，三七又有止血祛瘀通经络的功效，止血而不留瘀，三药可增强君药止血散瘀的功效。以上六味共为臣药。丹参活血散瘀，夏枯草能清肝明目，散结消瘀以防止血留瘀，为佐药。郁金行气散瘀，川芎行气活血，使气行血散不留瘀，引诸药直达病所，为使药。

2、治疗适应症不同

对比文件中止血明目无糖颗粒主要用于早期玻璃体出血的患者，对出血时间并没有做出明确的界定。由以上适应症可以看出，本申请适用于证属血热瘀阻证的眼内出血性疾病包括前房出血、玻璃体出血及视网膜出血，可适用于辨证为血热瘀阻证的出血性眼病的各个时期，临床适应症较对比文件更为具体和广泛。

本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于：

经药效学试验证实，本发明中的药物组合物对于由肾上腺素加冰水造成的血瘀模型大鼠全血比粘度(高、中、低切)均有降低作用；可明显增加肾上腺素致微循环障碍小鼠耳廓微动脉及微静脉管径，加快微血管内RBC流速，改善小鼠耳廓微循环；均可明显缩短华法林致凝血障碍小鼠出、凝血时间。经急性毒性预试验证实，该药物组合物毒性较小。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步描述，但不作为对本发明的限定。

实施例1

本实施例中的药物组合物由由下列质量份数的原料药组成：

墨旱莲10；生蒲黄3；丹参5；郁金5；赤芍5；牡丹皮5；荆芥炭3；生地黄5；夏枯草5；炒茜草3；川芎3；三七3。

实施例2

本实施例中的药物组合物由由下列质量份数的原料药组成：

墨旱莲50；生蒲黄20；丹参30；郁金30；赤芍40；牡丹皮40；荆芥炭30；生地黄35；夏枯草40；炒茜草30；川芎25；三七20。

实施例3

本实施例中的药物组合物由由下列质量份数的原料药组成：

墨旱莲15；生蒲黄5；丹参6；郁金6；赤芍6；牡丹皮6；荆芥炭5；生地黄6；夏枯草10；炒茜草5；川芎5；三七3。

实施例4

本实施例中的药物组合物由由下列质量份数的原料药组成：

墨旱莲40；生蒲黄15；丹参20；郁金20；赤芍25；牡丹皮30；荆芥炭20；生地黄25；夏枯草30；炒茜草20；川芎20；三七10。

实施例5

本实施例中的药物组合物由由下列质量份数的原料药组成：

墨旱莲30；生蒲黄12；丹参15；郁金12；赤芍15；牡丹皮20；荆芥炭6；生地黄20；夏枯草20；炒茜草6；川芎9；三七5。

申请人委托河北医科大学中医学院中药药理实验室对本发明中的药物组合物进行了药效学试验及急性毒性试验，具体如下：

一、药效学试验

1、试验参加者：任艳青；张玲非；赵静；王益红；牛丽颖

2、试验单位：河北医科大学中医学院中药药理实验室

3、试验日期：2008年12月至2009年2月

(一)对血瘀大鼠血液流变性的影响

1、试验目的：通过观察本发明的药物组合物对血瘀大鼠血液流变性的影响，评价其活血化瘀作用

2、试验材料

(1)受试物：本发明中的药物组合物(10g/袋)。

(2)动物：SD大鼠(清洁级)，雄性，体重180-200g，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003；动物饲料为消毒饲料、垫料为消毒垫料，亦由该中心提供；实验动物使用许可证SYXK(冀)2006-0047，动物室环境：室温：20-23℃，相对湿度：45-60％。

(3)试药：盐酸肾上腺素注射液，上海禾丰制药有限公司，批号071201。

(4)仪器：全自动自清洗血流变仪LBY-N6B，北京普利生仪器有限公司。

3、试验方法

将大鼠随机分为4组，每组8只，分别为正常对照组、模型对照组、受试物低剂量组(1.5g/kg)，受试物高剂量组(3.0g/kg)。给药组灌胃给药，每日一次，容量为1.0ml/100g体重，正常对照组及模型对照组给予等量纯净水，连续7天。末次给药后2小时除正常对照组外，其他各组大鼠均皮下0.1％盐酸肾上腺素，共二次，第一次给0.8ml/kg，第二次给0.6ml/kg，中间间隔4小时，第一次肾上腺素后2小时，将大鼠置冰水中浸泡5min，处置后各组大鼠禁食不进水20小时，分别用10％水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，迅速注入肝素抗凝管内，摇匀后用于测定血流变学指标。

4、统计学处理：

数据用表示，采用t检验比较各组间差异情况(SPSS12.0 for windows)

5、试验结果：

结果见表1，由结果可见，模型对照组大鼠高、中、低切全血比粘度均较正常对照组升高(P＜0.01)，说明血瘀模型已经形成，受试物(1.5g/kg、3.0g/kg)组大鼠全血比粘度(低、中、高切)均较模型对照组大鼠降低(P＜0.01)。

表1本发明中药物组合物对血瘀大鼠血液流变性的影响

与模型对照组比较：^*P<0.05，^**P<0.01。

6、结论：本试验结果表明：本发明中的药物组合物(1.5g/kg、3.0g/kg)可降低血瘀大鼠全血比粘度(高、中、低切)，具有一定的活血化瘀作用。

(二)对小鼠耳廓微循环的影响

1、试验目的：观察本发明中的药物组合物对小鼠耳廓微循环影响。

2、试验材料：

(1)药物：本发明中的药物组合物(10g/袋)；盐酸肾上腺素注射液，天津金耀氨基酸有限公司。

(2)动物：昆明种小鼠(清洁级)，雌雄各半，体重18-20g，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003；动物饲料为消毒饲料，垫料为消毒垫料，亦由该中心提供；实验动物使用许可证SYXK(冀)2006-0047,动物室环境：室温：20-23℃，相对湿度：45-60％。

(3)仪器：XTB-A型连续变倍体视显微镜，桂林光学仪器厂。

3、试验方法：

将小鼠随机分为3组，每组10只，分别为空白对照组、本发明中药物组合物低剂量组(2g/kg，相当于人临床用量的4.5倍)、本发明中药物组合物高剂量组(4g/kg，相当于人临床用量的9倍)。试验时先腹腔注射12％乌拉坦麻醉(1.2g/kg,0.1ml/10g体重)，以医用橡皮膏轻贴轻拉去掉右耳廓软毛，将小鼠腹部向下固定在小鼠观察台上，调节耳托高度，使耳廓平展在耳托上，并在耳托及耳廓上涂以液体石蜡。将小鼠观察台置显微镜载物台上，调节冷光源适当亮度，调整视野选择微动脉与微静脉，放大72倍观察，用测微尺测量微血管动脉和静脉管径、观察RBC的流速，并按下述标准记分：快速(直线状)：4分；中速(虚线状)：3分；慢速(粒状)：2分；停止(凝滞状)：1分。各组小鼠分别尾静脉注射1：1000肾上腺素，0.1ml/10g体重，造成小鼠微循环障碍，观察指标同前；然后给药组小鼠分别灌胃给药，空白对照组给予等量纯净水，并分别于给药后20分钟、10分钟进行观察，观察指标同前。

4、统计学处理：

数据用表示，采用t检验比较各组间差异情况(SPSS12.0 for windows)及自身t检验比较自身差异情况。

5、试验结果：

(1)对小鼠耳廓微循环动脉管径的影响

结果见表2，从结果可见，各组小鼠尾静脉注射肾上腺素后，小鼠耳廓微循环动脉管径明显较造模前窄(P＜0.01)；对照组小鼠给水后20分、40分小鼠耳廓微循环动脉管径均无明显变化(P＞0.05)；本发明中药物组合物(2g/kg、4g/kg)组小鼠组药后20分、40分小鼠耳廓微循环动脉管径均明显较造模后及空白对照组增加(P＜0.01)。

表2本发明中药物组合物对小鼠耳廓微循环动脉管径的影响(n＝10)

与造模前自身比较，^←P＜0.05^←←P＜0.01。

与空白对照组比较，^*P＜0.05^**P＜0.01。

(2)对小鼠耳廓微循环静脉管径的影响

结果见表3，从结果可见，各组小鼠尾静脉注射肾上腺素后，小鼠耳廓微循环静脉管径明显较造模前窄(P＜0.01)；对照组小鼠给水后20分、40分小鼠耳廓微循环静脉管径均无明显变化(P＞0.05)；本发明中药物组合物(2g/kg、4g/kg)小鼠给药后20分、40分小鼠耳廓微循环静脉管径均明显较造模后及空白对照组增加(P＜0.01)。

表3本发明中药物组合物对小鼠耳廓微循环静脉管径的影响(n＝10)

与造模前自身比较，^←P＜0.05，^←←P＜0.01。

与空白对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

(3)对小鼠耳廓微循环动脉内红细胞流速的影响

结果见表4，从结果可见，各组小鼠尾静脉注射肾上腺素后，小鼠耳廓微血管内RBC流速分值明显较造模前慢(P＜0.01)；对照组小鼠给水后20分、40分小鼠耳廓微血管内RBC流速分值均无明显变化(P＞0.05)；本发明中药物组合物(2g/kg、4g/kg)组小鼠给药后20分、40分小鼠耳廓微血管内RBC流速分值均明显较造模后及空白对照组增加(P＜0.01)。

表4本发明中药物组合物对小鼠耳廓微循环动脉内红细胞流速的影响(n＝10)

与造模前自身比较，^←P＜0.05，^←←P＜0.01。

与空白对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

6、结论：本试验结果表明：本发明中药物组合物(2g/kg、4g/kg)可明显增加肾上腺素致微循环障碍小鼠耳廓微动脉及微静脉管径，加快微血管内RBC流速，改善小鼠耳廓微循环。

(三)对华法林致凝血障碍小鼠出、凝血时间的影响

1、试验目的：通过观察本发明中药物组合物对华法林致凝血障碍小鼠出、凝血时间的影响，以评价其止血作用。

2、试验材料：

(1)受试物：本发明中药物组合物(10g/袋)。

(2)动物：昆明种小鼠(清洁级)，雄性，体重18-20g，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003；动物饲料为消毒饲料、垫料为消毒垫料，亦由该中心提供；实验动物使用许可证SYXK(冀)2006-0047，动物室环境：室温：20-23℃，相对湿度：45-60％。

(3)试药：华法林片(2.5mg/片)，齐鲁制药有限公司，批号901006kp。

3、试验方法：

将小鼠随机分为4组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、本发明中药物组合物小剂量组(2g/kg，相当于人临床用量的4.5倍)、本发明中药物组合物中剂量组(4g/kg，相当于人临床用量的9倍)。除正常对照组外，其余各组均连续4天灌胃给予华法林(2mg/kg)，每日1次，造成小鼠凝血障碍。同时给药组连续灌胃给药共7天，每日一次，容量为0.2ml/10g体重，正常对照组及模型对照组给予等量纯净水。末次给药后1小时，采用剪尾法测出血时间，玻片法测凝血时间。

4、统计学处理：

数据用表示，采用t检验比较各组间差异情况(SPSS12.0 for windows)

5、试验结果：

结果见表5，从结果可见，模型对照组小鼠出血时间和凝血时间均明显较正常对照组小鼠延长(P＜0.01)，表明小鼠连续4天灌胃给予华法林(2mg/kg)已致小鼠凝血障碍；本发明中药物组合物(2g/kg、4g/kg)组小鼠出血时间和凝血时间明显较模型对照给小鼠缩短(P＜0.01)。

表5对华法林致凝血障碍小鼠出血时间和凝血时间的影响

与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

6、结论：本试验结果表明：本发明中的药物组合物可明显对抗华法林致的小鼠凝血障碍，有一定的止血作用。

小结：

研究结果表明：本发明中的药物组合物(1.5g/kg、3g/kg)对由于肾上腺素加冰水造成的血瘀模型大鼠全血比粘度(高、中、低切)均有降低作用；本发明中的药物组合物(2g/kg、4g/kg)可明显增加肾上腺素致微循环障碍小鼠耳廓微动脉及微静脉管径，加快微血管内RBC流速，改善小鼠耳廓微循环；均可明显缩短华法林致凝血障碍小鼠出、凝血时间。

二、急性毒性试验(最大给药量试验)

1、试验材料：

供试品：本发明中的药物组合物(10g/袋)，试验前用热纯净水配成小鼠灌胃的量大浓度(0.65g/ml)。

2、动物：昆明种小鼠(清洁级)，雌雄各半，体重18-20g，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003；动物饲料为消毒饲料、垫料为消毒垫料，亦由该中心提供；实验动物使用许可证SYXK(冀)2006-0047,动物室环境：室温：20-23℃，相对湿度：45-60％。

3、试验方法：

经预试无法测出LD₅₀，故进行量大给药量试验。取小鼠40只，雌雄各半，随机分为两组，每组20只，分别为对照组和给药组，各组小鼠均禁食12小时，然后给药组上鼠用0.65g/ml的本发明中的药物组合物混悬液(最大浓度)灌胃，容量为0.4ml/10g体重(最大容量)，一日共给药三次，累积剂量为67.2g/kg/日，相当于成人临床用量的156.3倍(临床成人70kg，用量30g/日)，对照组小鼠给予等容量蒸馏水，观察给药后14日内动物一般状态，毛色、体重、饮食、活动等指标变化。

4、试验结果：

结果见表1、表2，结果可见，各组小鼠在14日内一般状态良好，毛色光滑，体重增长，饮食及活动未见异常，无一死亡，未发现明显毒性反应。其小鼠灌胃给药的量大给药量为67.2g/kg/日，相当于成人临床用量的156.3倍(临床成人70kg，用量30g/日)。

表1各组小鼠体重变化(n＝10)

表2各组小鼠进食量变化(g/只，n＝10)

天数(d)	对照组(♂)	对照组(♀)	给药组(♂)	给药组(♀)
					0	3.5	2.5	3.2	2.6
7	6.2	3.8	5.8	4.2
					14	6.8	4.2	6.4	3.8

5、结语：

经急性毒性预试验，无法测出其小鼠灌胃的LD₅₀，试验证明其小鼠灌胃给药的最大给药量为67.2g/kg/日，相当于成人临床用量的156.3倍(临床成人70kg，用量30g/日)，说明该药毒性较小。

Claims (3)

1.治疗属血热瘀阻证的眼内出血性疾病的药物组合物，其特征在于它由下列质量份数的原料药组成：

墨旱莲10-50；生蒲黄3-20；丹参5-30；郁金5-30；赤芍5-40；牡丹皮5-40；荆芥炭3-30；生地黄5-35；夏枯草5-40；炒茜草3-30；川芎3-25；三七3-20。

2.根据权利要求1所述的治疗属血热瘀阻证的眼内出血性疾病的药物组合物，其特征在于它由下列质量份数的原料药组成：

墨旱莲15-40；生蒲黄5-15；丹参6-20；郁金6-20；赤芍6-25；牡丹皮6-30；荆芥炭5-20；生地黄6-25；夏枯草10-30；炒茜草5-20；川芎5-20；三七3-10。

3.根据权利要求1所述的治疗属血热瘀阻证的眼内出血性疾病的药物组合物，其特征在于它由下列质量份数的原料药组成：

墨旱莲30；生蒲黄12；丹参15；郁金12；赤芍15；牡丹皮20；荆芥炭6；生地黄20；夏枯草20；炒茜草6；川芎9；三七5。