CN110603058A - 含有病毒的稳定组合物 - Google Patents
含有病毒的稳定组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110603058A CN110603058A CN201880029784.7A CN201880029784A CN110603058A CN 110603058 A CN110603058 A CN 110603058A CN 201880029784 A CN201880029784 A CN 201880029784A CN 110603058 A CN110603058 A CN 110603058A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- composition
- virus
- concentration
- buffer
- formulation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
- A61K39/285—Vaccinia virus or variola virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16741—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
- C12N2760/18541—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
描述了组合物,这些组合物包含不是MVA的包膜病毒、约5mM至约300mM浓度的硫酸盐和缓冲液,并且该组合物具有约6.0至约8.5的pH。还披露了通过制备所述病毒制剂来稳定包膜病毒组合物的方法。
Description
政府支持的声明
本发明是根据由以下机构颁发的合同HHSO100201500008C在政府支持下完成:美国卫生与公众服务部(Department of Health and Human Services of the UnitedStates of America);准备与反应助理办公室(Office of the Assistant forPreparedness and Response);生物医学高级研究与发展局(Biomedical AdvancedResearch and Development Authority)。美国政府享有本发明的一些权利。
技术领域
本发明涉及适于储存的含有包膜病毒的组合物以及相关药物产品的领域。如本文所披露的优选组合物是包含以下的组合物:包膜病毒,如流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)或单纯疱疹病毒;硫酸盐;和缓冲液,如磷酸盐或Tris缓冲液,这些组合物用于长期储存。这些组合物尤其可以用作针对各种病原体或疾病的疫苗或治疗剂。
背景技术
使用诸如呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、痘苗病毒、单纯疱疹病毒和痘病毒等包膜病毒作为预防性疫苗。另外,包膜病毒目前在许多临床研究中用于针对包括癌症在内的许多病原体或靶标的预防性或治疗性疫苗接种。与其他活病毒疫苗或灭活病毒疫苗一样,基于预防性或治疗性包膜病毒的药物在应用于接受者或患者之前需要加以储存,并因此需要在不损失其效力的情况下储存数天、数周或数月直至数年。由于包膜病毒的包膜参与细胞进入并且是重组抗原复制或表达以在受试者中刺激免疫应答的先决条件,病毒滴度的下降与感染性的变化密切相关,并因此与产物的有效性密切相关。
注意到包膜病毒的温度敏感性高于无包膜病毒(Wallis C.和Melnick JL.JVirol[病毒学杂志]1968;2:953-4)。由于含有病毒编码的膜蛋白的细胞外囊泡是重组包膜病毒产生的副产物,包膜病毒(例如,RSV、流感、痘病毒、痘苗病毒或HSV)的配制甚至更复杂,并且需要考虑到影响病毒感染性的许多变量的定制方法。
除了少数例外情况,疫苗活性损失的原因还没有被很好了解(Rexroad J.等人,Cell Preservation Technology.[细胞保存技术],2004,1(2):91-104)。将包膜病毒稳定化可能非常具有挑战性。已经开发了包膜病毒的冷冻干燥的制剂用于增加热稳定性,参见例如除了表面活性剂和磷酸盐缓冲液以外还含有二糖与甘氨酸的赋形剂组合的冷冻干燥的流感病毒亚单位制剂,Flood等人,PLoS One.2016,11(11):e0164692。然而,冷冻干燥过程更耗时,并且在干燥过程期间需要添加剂来保持病毒的生物活性,以避免活性损失。此外,在给予之前需要重构步骤,这使给予程序变得复杂。
已经使用与有效冷链(制造、分配、储存和给予)的维护组合的配制方法的组合来稳定化疫苗制剂。然而,在许多发展中国家,冷链基础设施不完善或者不可靠,这可能导致疫苗的稳定性降低,从而导致功效降低。
因此,本领域中存在对开发稳定的基于包膜病毒的疫苗制剂的需要,这些基于包膜病毒的疫苗制剂可以用于药学应用中并且可以在不影响产物的生物活性的情况下储存延长的时间段。更特定地,应该将病毒滴度损失和/或具有潜在的增加的毒性或改变的免疫原性的副产物的形成限制到最低程度。包膜病毒还应该在应用和临床使用期间针对剪切力加以保护,并且特别是在运输时针对与各种气候形势相关的升高温度加以保护,或者应避免由于不当观察或冷链中断而造成的效力损失。此外,存在在产物的制造、储存和运输期间在一个或多个冻融循环后保持活性的需要。
将结合本发明的具体说明更详细地描述本发明的这些和其他目的。Sediq等人的相关未决专利申请是在与本申请相同的日期提交的,将该申请的全部披露内容通过引用并入本文。
发明内容
为了满足这些和其他需要,本文描述了包含痘病毒的组合物,其具有如与先前披露的制剂相比改进的热稳定性和改进的针对搅拌应力的稳定性。所述组合物中所含的痘病毒保持其效力和感染性。这是通过在具有在约6.0至约8.5范围内的pH的缓冲液中以约5mM至约300mM的浓度将硫酸盐(优选地硫酸钠)添加至包膜病毒来实现的。这些组合物相比本领域中已知常规组合物的改进之处在于,当例如在室温下、在-20℃储存温度下或在加速应力后储存时,显示较小的病毒聚集和构象变化、较小的储存pH变化和/或较小的浊度变化。具体地,预期本发明满足在约25℃下数周或数月或在约2℃至约8℃下更长时间段并且在冷冻条件外的贮存期限的目标产品概况特征。本发明还提供了在低于0℃下(特定地在-20℃下)数周或数月或更长时间段的贮存期限。
在一个一般方面中,本发明提供了一种组合物,优选液体组合物,其包含:a)包膜病毒;b)缓冲液;和c)浓度为约5mM至约300mM的硫酸盐,其中所述组合物具有约6.0至约8.5的pH,前提是所述包膜病毒不是编码丝状病毒抗原的MVA病毒。
在一些实施例中,本发明涉及药物组合物,其包含:a)包膜病毒;b)缓冲液;和c)浓度为约5mM至约300mM的硫酸盐,其中所述药物组合物具有约6.0至约8.5的pH,前提是所述包膜病毒不是编码丝状病毒抗原的MVA病毒。
在一个实施例中,根据本发明的实施例的组合物或药物组合物中的包膜病毒不是MVA病毒。
在另一个实施例中,根据本发明的实施例的组合物或药物组合物中的包膜病毒不是痘病毒。
在一些实施例中,组合物或药物组合物适合于通过注射,例如,通过肌内、皮下、静脉内或鼻内施用来给予。例如,药物组合物可以用于针对病原体或癌症进行治疗或预防。
在另一个一般方面中,本发明涉及稳定化包膜病毒组合物的方法,该方法包括制备包含以下的组合物:a)包膜病毒;b)缓冲液;和c)浓度为约5mM至约300mM的硫酸盐,其中所述组合物具有约6.0至约8.5的pH,前提是所述包膜病毒不是编码丝状病毒抗原的MVA病毒。
在一些实施例中,本发明涉及稳定化包膜病毒组合物的方法,其包括:(1)制备包含以下的组合物:包膜病毒;b)缓冲液;和c)浓度为约5mM至约300mM的硫酸盐,其中所述组合物具有约6.0至约8.5的pH,和(2)将所述组合物储存在2℃至8℃范围内的温度下,前提是所述包膜病毒不是编码丝状病毒抗原的MVA病毒。
在一些实施例中,本发明涉及稳定化包膜病毒组合物的方法,其包括将浓度为约5mM至约300mM的硫酸盐添加至所述包膜病毒组合物,前提是所述包膜病毒组合物包含不是编码丝状病毒抗原痘病毒的MVA病毒的包膜病毒。
在一个实施例中,根据本发明的实施例的方法中的包膜病毒不是MVA病毒。
在另一个实施例中,根据本发明的实施例的方法中的包膜病毒不是痘病毒。
附图说明
并入本说明书并构成本说明书一部分的附图图解说明本发明的若干个实施例,并且与说明一起用于解释本发明的原理。应理解的是本发明不限于附图中示出的准确实施例。
图1:使用Fluoromax 4获得的不含Na2SO4(A1-A4,10mM Tris pH 7.5、8.0、8.5和9.0)和含有100mM Na2SO4(B1-B4,10mM Tris pH 7.5、8.0、8.5和9.0,100mM Na2SO4)的不同制剂的各向异性结果。黑线(用*指示)显示在加速应力前获得的扫描(25℃下1周),并且灰线显示在该应力后获得的扫描。
图2:从上到下:显示在施加加速应力(25℃下1周)后,不含Na2SO4(A1-A4;10mMTris pH 7.5、8.0、8.5和9.0)和含有100mM Na2SO4(B1-B4;10mM Tris pH 7.5、8.0、8.5和9.0,100mM Na2SO4)的不同制剂的pH变化、发射峰漂移、发射强度变化、Z平均直径的变化和多分散性指数(PDI)的变化。
图3:从左到右,图的每一列显示在施加加速应力(37℃下1天)后,浊度、Z平均直径和多分散性指数(PDI)的变化。不同制剂组排列在竖直面中,也就是从上到下:不含盐的制剂(制剂A1-A4)、含有100mM Na2SO4的制剂(制剂B1-B4)、含有100mM CaCl2的制剂(制剂C1-C4)、含有100mM MgSO4的制剂(制剂D1-D4)、含有100mM MgCl2的制剂(制剂E1-E4)和含有140mM NaCl的制剂(制剂F1-F4)。这些制剂在实例3中充分描述。
图4:从左到右,图的每一列显示在施加加速应力(37℃下1天)后,浊度、Z平均直径和多分散性指数(PDI)的变化。不同制剂组排列在竖直面中,也就是从上到下:不含盐的制剂(制剂A1-A4)、含有100mM Na2SO4的制剂(制剂B1-B4)、含有100mM MgCl2的制剂(制剂C1-C4)和含有100mM NaCl的制剂(制剂D1-D4)。这些制剂在实例4中充分描述。
图5使用Fluoromax 4获得的四种不同制剂(对照A、1、对照B和3)的各向异性、荧光发射和90度光散射结果。以*指示的黑线代表在T0的扫描,而无*的线条代表在施加呈5℃下储存3个月的形式的应力后的扫描。这些制剂在实例6中充分描述。
图6:使用Fluoromax 4获得的四种不同制剂(对照A、1、对照B和3)的各向异性、荧光发射和90度光散射结果。以*指示的黑线代表在T0的扫描,而无*的线条代表在施加呈-20℃下储存3个月的形式的应力后的扫描。这些制剂在实例6中充分描述。
图7:使用Fluoromax 4获得的四种不同制剂(对照A、1、对照B和3)的各向异性、荧光发射和90度光散射结果。以*指示的黑线代表在T0的扫描,而无*的线条代表在施加呈20个冻融循环的形式的加速应力后的扫描。这些制剂在实例6中充分描述。
图8:使用Fluoromax 4获得的五种制剂(对照A、1、对照B、3和7)的各向异性、荧光发射和90度光散射结果。以*指示的黑线代表在T0的扫描,而无*的线条代表在施加呈以200rpm搅拌1天(24h)的形式的加速应力后的扫描。这些制剂在实例6中充分描述。
图9:从左到右,图的每一列显示浊度、Z平均直径和多分散性指数(PDI)。从顶部到底部,图显示在制备后(T0)、在5℃下3个月后(3M5C)、在-20℃下3个月后(3M-20℃)、在20个冻融循环后(20FT)和在搅拌1天后(AG)的值。制剂排列在这些图的x轴上(对照A、1、对照B、3和7)。这些制剂在实例6中充分描述。
具体实施方式
说明书披露一个或多个并入本发明特征的实施例。所披露的实施例只是例示本发明。本发明的范围并不限于所披露的实施例。
在背景技术和整篇说明书中引用或描述多种出版物、文章、专利申请和专利;这些参考文献各自通过引用以其全文并入本文。通过引用并入的材料在一定程度上与本说明书发生冲突或不一致时,本说明书将替代任何此类材料。包括在本说明书中的文件、法案、材料、装置、物品或类似物的讨论用于向本发明提供背景的目的。这种讨论不承认任何或所有这些事项形成关于所披露或要求保护的任何发明的现有技术的一部分。
应理解,本发明并不限于本文所述的特定方法、方案和试剂,因为这些可变。还应理解,本文所用术语仅用于描述特定实施例的目的,并且不意图限制本发明的范围。除非另外定义,本文所使用的所有科学技术术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。否则,在此所使用的某些术语具有说明书中阐述的含义。
必须注意,除非上下文另外明确规定,否则如本文和所附权利要求书中所使用,单数形式“一个/一种(a/an)”和“该”包括复数指示物。因此,例如,对“一种核酸”的提及包括一种或多种核酸序列,并且对“该方法”的提及包括对本领域普通技术人员已知的可以修改或取代本文所述方法的等效步骤和方法的提及。
除非另外指明,否则在一系列要素前面的术语“至少”应被理解为指该系列中的每一个要素。另外必须注意,除非另有说明,任何数值,如本文所述的浓度或浓度范围,应被理解为在所有情况下都被术语“约”修饰。在整篇说明书中,设想关于任何量或浓度的术语“约”包括该量。例如,在本文中设想“约5mM”包括5mM以及关于所述实体被理解为大约5mM的值。数值典型地包括所列举值的±10%。例如,1mg/mL的浓度包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同样地,1%至10%(w/v)的浓度范围包括0.9%(w/v)至11%(w/v)。如在此所使用,数值范围的使用明确地包括所有可能的子范围,该范围内的所有单个数值,包括值的这些范围内的整数和分数,除非上下文另有明确指示。同样,在本发明上下文中在本文所用任何数值前面的术语“约”可以被删除并由没有术语“约”的数值替代,但是较不优选。
如在此所使用的,多个引用的要素之间的连接术语“和/或”应被理解为涵盖单独的和组合的选项两者。例如,当两种要素由和/或连接时,第一选项是指在不具有第二要素的情况下第一要素的应用。第二选项是指在不具有第一要素的情况下第二要素的应用。第三选项是指第一要素和第二要素一起的应用。这些选项中的任一个应被理解为属于该含义之内,并且因此满足如在此所使用的术语“和/或”的要求。这些选项中的多于一个的同时应用也应被理解为属于该含义之内,并且因此满足术语“和/或”的要求。
贯穿本说明书和以下权利要求,除非上下文另有要求,否则词语“包含(comprise)”以及变化形式如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”将理解为隐含包括所陈述的整体或步骤或一组整体或步骤,但不排除任何其他整体或步骤或任何其他组整体或步骤。当在本文中使用时,术语“包含(comprising)”可以用术语“含有(containing)”或“包括(including)”来取代,或者在本文中使用时用术语“具有(having)”取代。无论何时在此在本发明的方面或实施例的上下文中使用时,前述任何术语(包含、含有、包括、具有)可以用术语“由……组成”或“基本上由……组成”来取代,但是较不优选。
当在此使用时,“由……组成”不包括未在权利要求要素中指定的任何要素、步骤或成分。当在此使用时,“基本上由……组成”并不排除不会实质性地影响权利要求的基本和新颖特征的材料或步骤。
如本文所用的术语“聚集”是指其中两种或更多种蛋白质或病毒积聚和/或凝结在一起的过程。完整的天然蛋白质以及降解的蛋白质都可能发生聚集。蛋白质聚集通常是因蛋白质的疏水基团暴露然后积聚导致的。病毒聚集可能是由于病毒包膜上表达的蛋白质的修饰而发生的。
术语“核酸”、“核苷酸序列”、“核酸序列”和“多核苷酸”可以互换使用,并且是指线性或分支的、单链或双链的RNA或DNA或者其杂合体。该术语还涵盖RNA/DNA杂合体。多核苷酸可以通过化学合成获得,或者衍生自微生物。术语“外源”核酸序列在结合重组病毒使用时意指外来核酸序列,即用于产生重组病毒的非重组病毒中不含的或者在产生重组病毒时***病毒基因组中的核酸序列。
术语“药物制剂”、“药物组合物”和“药剂”在本文中可互换使用,是指用于预防或治疗疾病的物质和/或物质的组合。
“药学上可接受的”意味着,载体、添加剂、抗生素、防腐剂、佐剂、稀释剂、稳定剂或赋形剂在所用剂量和浓度下不会在其所给予的一个或多个受试者中引起任何一种或多种不期望的或有害的效应。
术语“受试者”和“患者”可互换使用。如本文所用,受试者典型地是哺乳动物,如非灵长类动物(例如,牛、猪、马、猫、犬、大鼠等)或灵长类动物(例如,猴子和人),并且在一些优选实施例中是人。
根据本发明,“病毒”意指病毒、病毒颗粒、病毒载体和病毒疫苗。这些术语都可以互换使用。这个术语包括野生型病毒、重组和非重组病毒、活病毒和活减毒病毒。
除非另有说明,本发明的实践采用分析学、免疫学、分子生物学、微生物学、细胞生物学和重组DNA的常规技术,这些技术在本领域的技能之内。参见例如Sambrook、Fritsch和Maniatis,Molecular Cloning:A Laboratory Manual[分子克隆:实验室手册],第2版,1989;Current Protocols in Molecular Biology[当前分子生物学方案],Ausubel FM,等人编辑,1987;丛书Methods in Enzymology[酶学方法](学术出版社公司(AcademicPress,Inc.));PCR2:A Practical Approach [PCR2:实用方法],MacPherson MJ,Hams BD,Taylor GR编辑,1995;Antibodies:A Laboratory Manual[抗体:实验室手册],Harlow和Lane编辑,1988。
在整篇说明书中,除非另有说明,诸如pH等物理参数的值是在25℃下测量的那些值。
本发明涉及组合物,其包含包膜病毒、浓度为约5mM至约300mM的硫酸盐和具有在约6.0与8.5之间范围内的pH的缓冲液,前提是所述包膜病毒不是编码丝状病毒抗原的MVA病毒。
术语“组合物”是指含有活性药物或生物成分(例如,包膜病毒,包括但不限于流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)或单纯疱疹病毒(HSV))以及一种或多种其他组分的制剂。在本文中,术语“组合物”和“制剂”可以与术语“药物组合物”、“疫苗组合物”、“疫苗”和“疫苗制剂”互换使用。
在某些实施例中,制剂、组合物、药物组合物、疫苗组合物、疫苗或疫苗制剂是稳定的或稳定化的组合物。
对于都可以互换使用的“稳定的”、“稳定化的”、“稳定性”或“稳定化”,应理解,在药物组合物的贮存期限所需的储存后,含于本发明组合物中的包膜病毒基本上保持其物理稳定性、同一性、完整性,和/或化学稳定性、同一性、完整性、颗粒形态和/或生物活性或效力。
测量稳定性的各种分析技术是技术人员已知的,并且决定稳定性的所述特征可以通过选自由以下项组成的组的方法中的至少一种来确定:固有荧光、各向异性、动态光散射、pH测量、以及在350nm下的浊度测量和90度光散射,如实例中更详细地描述。可以在所选温度和其他储存条件下持续所选时间段测量稳定性。
确定颗粒形态的方法是技术人员所熟知的。例如,颗粒形态可以使用透射电子显微术和免疫电子显微术(免疫-EM),使用例如如以下文献中所述的方法或与以下文献中所述的方法类似的方法来确定:Schweneker等人,Recombinant modified vaccinia virusAnkara generating Ebola virus-like particles[产生埃博拉病毒样颗粒的重组修饰型痘苗病毒安卡拉].J.of Virology[病毒学杂志]2017年3月22日。确定颗粒形态的替代性方法包括例如描述于例如以下文献中的纳米颗粒追踪分析(NTA):Vasco等人(2010),Critical Evaluation of纳米颗粒Tracking Analysis(NTA)by NanoSight for theMeasurement of Nanoparticles and Protein Aggregates[NanoSight针对纳米颗粒和蛋白质聚集体的测量对纳米颗粒追踪分析(NTA)的批判性评价].Pharmaceutical Research[药学研究].27:796-810。纳米颗粒追踪分析(NTA)是液体中的粒度分布和聚集的直接实时可视化和分析方法。基于激光照射的显微技术,通过电荷耦合器件(CCD)摄影机实时分析纳米颗粒的布朗运动,每个颗粒是通过专用的颗粒追踪图像分析程序同时但单独地可视化并追踪的。NTA同时测量粒度和颗粒散射强度的能力允许解析异质性颗粒混合物和直接估计颗粒浓度。
如本文所用的术语“效力”或“感染性”是指包膜病毒(例如,流感病毒、RSV、痘病毒或HSV)的活性,该活性表示为通常作为InfU/mL给出的感染单位(InfU)、蚀斑形成单位(pfu)或pfu/剂量、或作为TCID50/mL给出的组织培养感染剂量50(TCID50)。两个术语“效力”和“感染性”在本发明中可互换使用。诸如痘病毒、流感病毒、RSV、痘病毒或HSV等包膜病毒的效力可以使用技术人员已知的各种方法来确定,如例如通过荧光激活细胞分选仪(FACS)测定或组织培养感染剂量50(TCID50)测定来确定。如本发明中所用的示例性FACS测定和TCID50测定描述于实例中。
如本文所用,术语“贮存期限”意指对于用作人类医药,产物在规定的储存条件下(例如,在2℃至8℃下储存)根据产物特征保持活性和/或稳定的时间。贮存期限对应于超出给定规范的下限或上限的时间点。
在某些实施例中,将本发明的实施例中任一实施例的组合物进一步限定为当在4℃下储存六个月时具有起始感染性(在第0天)的至少50%、60%、79%、80%或90%的感染性。
在某些实施例中,将本发明的实施例中任一实施例的组合物进一步限定为当在25℃下储存三个月时具有起始感染性(在第0天)的至少50%、60%、79%、80%或90%的感染性。
在某些实施例中,将本发明的实施例中任一实施例的组合物进一步限定为当在-20℃下储存三个月、优选六个月时具有起始感染性(在第0天)的至少50%、60%、79%、80%或90%的感染性。
在某些实施例中,当在4℃下储存六个月时,本发明的实施例中任一实施例的组合物具有不超过起始感染性(在第0天)的50%、40%、30%、20%、10%或5%的感染性降低。
在某些实施例中,当在25℃下储存三个月时,本发明的实施例中任一实施例的组合物具有不超过起始感染性(在第0天)的50%、40%、30%、20%、10%或5%的感染性降低。
在某些实施例中,当在-20℃下储存三个月、优选六个月时,本发明的实施例中任一实施例的组合物具有不超过起始感染性(在第0天)的50%、40%、30%、20%、10%或5%的感染性降低。
根据特定实施例,当在25℃(+/-5℃)下持续3周(优选地3个月、6个月或至少1年)的总体病毒滴度损失小于0.5log10 InfU/mL或TCID50/mL,优选地小于0.4log10 InfU/mL或TCID50/mL,更优选地小于0.3log10 InfU/mL或TCID50/mL时,本发明的组合物是稳定的。
根据本发明的“总体病毒滴度损失”定义为在组合物于所指示温度n下(例如,在37℃下)储存时间t(例如,持续1周)期间测量的作为log10 TCID50/mL给出的累积病毒滴度损失。可替代地,总体病毒滴度损失可以作为log10 InfU/mL给出。总体病毒滴度损失是作为xlog10(例如,作为0.5log10,在37℃下持续1周)给出。
在各个实施例中,可以使用加速稳定性研究测量加速应力,这些加速稳定性研究是在升温下进行以缩短组合物的稳定性评价,例如,在37℃下持续1周。此类加速稳定性研究允许预测在较高温度下的稳定性,不必等待实测数据。
在本发明的优选实施例中,储存期间的病毒滴度损失是在5℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.4log10 InfU/mL或TCID50/mL,优选地在5℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.3log10 InfU/mL或TCID50/mL,更优选地在5℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.2log10InfU/mL或TCID50/mL。
在本发明的优选实施例中,储存期间的病毒滴度损失是在-20℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.4log10 InfU/mL或TCID50/mL,优选地在-20℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.3log10 InfU/mL或TCID50/mL,更优选地在-20℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.2log10 InfU/mL或TCID50/mL。
在本发明的优选实施例中,储存期间的病毒滴度损失是在-50℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.4log10 InfU/mL或TCID50/mL,优选地在-50℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.3log10 InfU/mL或TCID50/mL,更优选地在-50℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.2log10 InfU/mL或TCID50/mL。
在本发明的优选实施例中,储存期间的病毒滴度损失是在-80℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.4log10 InfU/mL或TCID50/mL,优选地在-80℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.3log10 InfU/mL或TCID50/mL,更优选地在-80℃+/-3℃下持续至少3个月时小于0.2log10 InfU/mL或TCID50/mL。
确定包膜病毒滴度的测定例如描述于以下文献中:Kaufmann和Kabelitz(2002),Methods in Microbiology[微生物学方法]第32卷:Immunology of Infection[感染的免疫学],学术出版社,ISBN 0125215320。来自该测定的滴度报告为蚀斑形成单位/毫升(PFU/mL)。如用于本发明的FACS测定和TCID50测定描述于实例中,并且可以可替代地与任何其他适宜方法一起使用。
根据优选实施例,本发明的组合物是水性组合物。在某些实施例中,组合物适合于储存在室温下(例如,在环境温度下)、在约-20℃与25℃之间、在约-20℃与4℃之间、在约2℃与25℃之间或在约2℃与8℃之间。这些实施例中任一实施例的组合物可以是液体或冷冻液体。本发明的组合物适合于在约-20℃与25℃之间、在约-20℃与4℃之间、在约2℃与25℃之间或在约2℃与8℃之间,在每个规定的温度范围下持续超过3个月、6个月、9个月、12个月、24个月或更久的延长储存。在本发明的优选实施例中,包含包膜病毒的组合物适合于在2℃至8℃下持续超过6个月、9个月、12个月、24个月或更久的延长储存。
如本文所用,“室温”或环境“温度”是25℃+/-3℃的温度。
包膜病毒
根据本发明的包膜病毒是指能感染人的属于任何属的包膜病毒,包括但不限于呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、单纯疱疹病毒(HSV)、痘病毒、痘苗病毒和修饰型痘苗病毒安卡拉(MVA)病毒。
在本发明的优选实施例中,包膜病毒选自由以下项组成的组:RSV、流感病毒和HSV。
RSV病毒
呼吸道合胞病毒(RSV)是副粘病毒科(其还包括常见呼吸道病毒,如引起麻疹和腮腺炎的那些)肺炎病毒属中包膜的非分段负链RNA病毒。存在两种主要的RSV亚型:亚型A和亚型B。在世界范围内,据估计每年发生六千四百万例RSV感染,导致160.000人死亡(WHOAcute Respiratory Infections Update September 2009[WHO急性呼吸道感染2009年9月更新])。RSV是婴儿和年幼儿童的严重呼吸道疾病的首要病因,并且是婴幼儿细支气管炎的主要病因(Welliver(2003)J Pediatr[儿科杂志]143:S112)。最严重的疾病尤其发生在早产儿、老年人和免疫受损的个体中。在2岁以下的儿童中,RSV是最常见的呼吸道病原体,占因呼吸道感染而住院的约50%,并且住院高峰发生在2-4月龄。据报道,几乎所有儿童到2岁时都被RSV感染过。一生中的重复感染归因于天然免疫无效。在老年人中,RSV疾病负荷、死亡率和发病率的水平仅次于由非大范围流行性甲型流感感染引起的那些。RSV感染还可以在患有慢性肺病的个体和免疫受损的成年人(如骨髓移植受者)中引起严重疾病。RSV在上呼吸道中复制,随后蔓延至下气道,引起细支气管炎或肺炎。该病毒引起炎症、气道水肿、增加的粘液产生和呼吸上皮破裂。
为了感染宿主细胞,RSV像其他包膜病毒(如流感病毒和HIV)一样需要病毒膜与宿主细胞膜融合。对于RSV,保守的融合蛋白(RSV F蛋白)融合病毒膜和宿主细胞的细胞膜。在目前的模型中,基于副粘病毒研究,RSV F蛋白最初折叠成“融合前”构象。在细胞进入期间,融合前构象经历再折叠和构象变化,成为其“融合后”构象。因此,RSV F蛋白是亚稳蛋白,该亚稳蛋白通过最初折叠成亚稳态形式(融合前构象),该亚稳态形式随后经历离散/逐步构象变化,成为较低能量构象(融合后构象)将不可逆蛋白重折叠与膜并置相结合来驱动膜融合。因此,产生对抗RSV的疫苗的努力集中于开发含有RSV F蛋白的融合前形式的疫苗(参见例如WO 20101149745、WO 2010/1149743、WO 2009/1079796、WO2012/158613)。F蛋白序列在RSV株系之间非常(约90%)保守(Johnson和Collins,J Gen Virol[普通病毒学期刊].(1988)69:2623-2628)。唯一的市场化单克隆抗体帕利珠单抗是针对RSV的F蛋白。
RSV的G蛋白是重度糖基化并且起吸附蛋白的作用的表面蛋白。与F蛋白相比,G蛋白在株系之间非常可变,但是中央保守结构域(CCD)除外,该中央保守结构域包含RSV A2株系的G蛋白的氨基酸残基153-184或其他株系中的相应氨基酸残基。中央保守结构域和相邻区域(残基145-193)二者都以刚性且重度O糖基化的粘蛋白样区域为界。中央保守结构域的N末端的一半含有在超过700个株系之间保守的小区域。C末端的一半含有4个保守的半胱氨酸,这4个保守的半胱氨酸以1-4、2-3拓扑连接并折叠成胱氨酸套索。
RSV疫苗候选物包括例如RSV融合蛋白疫苗、嵌合融合蛋白-糖蛋白疫苗和各种活的减毒RSV疫苗等。可以使用主动免疫来预防RSV疾病,但是目前没有可用疫苗。本发明的实施例包括组合物,这些组合物含有亚型A或亚型B的RSV,优选地表达一种或多种抗原(如RSV疫苗候选物或异源抗原)的修饰型无毒力重组RSV。
流感病毒
流感病毒是主要的人病原体,引起呼吸***疾病(通常称为“流行性感冒”或“流感”),其严重性范围为从亚临床感染至可导致死亡的原发性病毒性肺炎。感染的临床效应随流感株系的毒力以及宿主的暴露、病史、年龄和免疫状态而变。据估计每年世界范围内有约10亿人经历流感病毒感染,导致3百万至5百万例严重疾病,并且估计有300,000至500,000例流感相关死亡。这些感染大多数可以归因于携带H1或H3血凝素亚型的甲型流感病毒,较小贡献来自乙型流感病毒,因此在季节性疫苗中包括所有三种的代表。当前的免疫实践依赖于流行的流感病毒的早期鉴定以允许及时产生有效的季节性流感疫苗。除了在预测将在下一季节期间占主导的株系方面的固有困难以外,抗病毒抗性和免疫逃逸也在当前疫苗预防发病和死亡的失效中起作用。除此以外,由源自动物宿主并重配以增加人-人传播的高毒力病毒株系引起大范围流行病的可能性也对全球健康造成严重且现实的威胁。
甲型流感病毒在自然界中分布广泛,并且可以感染多种鸟类和哺乳动物。流感病毒是属于正粘病毒科的包膜RNA病毒。其基因组由八个单链RNA区段组成,这些单链RNA区段编码11种不同的蛋白质:一种核蛋白(NP)、三种聚合酶蛋白(PA、PB1和PB2)、两种基质蛋白(M1和M2)、三种非结构蛋白(NS1、NS2和PB1-F2)以及两种外部糖蛋白-血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。这些病毒是基于HA和NA蛋白的抗原结构的差异来分类的,其不同组合代表独特的病毒亚型,这些病毒亚型进一步分类为具体的流感病毒株系。虽然所有已知亚型都可以在鸟类中发现,但是当前流行的人甲型流感亚型是H1N1和H3N2。***发生分析已经证实将血凝素细分为两个主要组:尤其H1、H2、H5和H9亚型在***发生组1中,并且尤其H3、H4和H7亚型在***发生组2中。
乙型流感病毒株系严格地是人株系。乙型流感病毒株系内HA中的抗原变异小于在甲型株系内观察到的那些。乙型流感病毒的两个在遗传和抗原方面不同的谱系在人中流行,如由B/Yamagata/16/88(也称为B/Yamagata)和B/Victoria/2/87(B/Victoria)谱系表示的(Ferguson等人,2003)。虽然由乙型流感病毒引起的疾病谱通常轻于由甲型流感病毒引起的疾病谱,但是对于乙型流感病毒感染仍经常观察到需要住院的严重疾病。本发明的实施例包括组合物,这些组合物含有甲型或乙型中任何亚型的流感,优选地表达一种或多种抗原(如流感抗原或异源抗原)的修饰型无毒力重组流感。
单纯疱疹病毒
一般称为疱疹的单纯疱疹病毒的感染可以归因于单纯疱疹病毒1型(HSV-1)或单纯疱疹病毒2型(HSV-2)。HSV-1主要通过口口接触传播,并且HSV-2几乎仅通过性传播,引起生殖器或***区域感染(生殖器疱疹)。
针对HSV-1或HSV-2的疫苗可以用于预防单纯疱疹。本发明中使用的HSV抗原包括通常已知的各种HSV衍生抗原。优选地,本发明的适宜HSV抗原包括但不限于gH、gL、gM、gB、gC、gK、gE或gD或其衍生物,优选糖蛋白gB、gD或gH或其衍生物,并且更优选糖蛋白gB或gD或其衍生物。本发明组合物中包括的HSV或修饰型HSV可以表达适宜HSV抗原。本发明的实施例包括组合物,这些组合物含有HSV(HSV-1或HSV-2),优选地表达一种或多种抗原(如HSV抗原或异源抗原)的修饰型无毒力重组HSV。
据报道,用溶瘤病毒(HSV-1)治疗一种肿瘤诱导所治疗和未治疗的对侧肿瘤消退(参见Toda M,等人“Herpes simplex virus as an in situ cancer vaccine for theinduction of specific anti-tumor immunity[作为原位癌症疫苗用于诱导特异性抗肿瘤免疫力的单纯疱疹病毒].”Hum Gene Ther[人类基因疗法]1999;10:385-93)。已经在I期人体临床试验中证实若干种不同的溶瘤单纯疱疹病毒1型(HSV-1)株系是安全的。参见Aghi和Martuza,Oncogene[癌基因](2005)24:7802-7816。本发明的实施例还包括组合物,这些组合物含有在癌细胞中选择性复制的无毒力的修饰型重组HSV-1或HSV-2,这些癌细胞如膀胱癌或黑色素瘤细胞,如US9623059中所述的那些,将该案是通过引用并入本文。
本发明的痘病毒
痘病毒是指能感染人的属于任何属的痘病毒(例如,正痘病毒属、禽痘病毒属、副痘病毒属、亚塔痘病毒属(yatapoxvirus)和软疣痘病毒属)。
痘病毒可以是正痘病毒属或禽痘病毒属。禽痘病毒属包括但不限于金丝雀痘病毒(CNPV)和禽痘病毒(FWPV)。正痘病毒属(OPV)可以包括例如天花病毒(smallpox virus)(也称为痘症病毒(variola virus))、痘苗病毒(vaccinia virus)、牛痘病毒(cowpox virus)和猴痘病毒。
痘病毒还可以是痘苗病毒或FWPV或FPV,如WO 2016/034678中所述的那种。FWPV的实例包括FP1、FP5、FP9、FPV M、FPV S、VR-229、VR-250、USDA株系和POXVAC-TC。痘苗病毒(VACV)的实例包括例如安卡拉、VACV西储(WR)、VACV哥本哈根(VACV-COP)、天坛(Temple of Heaven)、巴黎、布达佩斯、大连、Gam、MRIVP、Per、塔什干、TBK、天坛(Tian Tan)、Tom、Bern、Patwadangar、BIEM、B-15、EM-63、IHD-J、IHD-W、池田(Ikeda)株系、DryVax(也称为VACV Wyeth或纽约市卫生局[NYCBH]株系,如例如美国专利7,410,644中所述)、NYVAC、ACAM1000、ACAM2000、痘苗Lister(也称为Elstree)、LC16mO、LC16m8、修饰型痘苗病毒安卡拉(MVA)、如在国际专利申请PCT/EP 01/02703(WO 01/68820)中表征的MVA-Vero、ACAM3000 MVA和修饰型痘苗病毒安卡拉-巴伐利亚诺迪克(modified vacciniavirus Ankara-Bavarian Nordic,MVA-BN)。
在一些实施例中,VACV选自DryVax、ACAM1000、ACAM2000、Lister、EM-63、VACV-COP、WR、NYCBH、NYVAC和MVA的组。
在本发明的一些实施例中,痘病毒是修饰型安卡拉痘苗(MVA)病毒。
修饰型痘苗病毒安卡拉(MVA)
MVA可以是例如MVA-572、MVA-575、MVA-I721、如作为VR-1508TM保藏的MVA、如作为VR-1566TM保藏的MVA、ACAM3000MVA、MVA-BN或任何类似减毒的MVA株系。MVA还可以是MVA-BN。
MVA-572以保藏号ECACC V94012707于1994年1月27日保藏于欧洲动物细胞培养物保藏中心(ECACC,疫苗研究和生产实验室、公共卫生实验室服务局、应用微生物学研究中心,波顿当,索尔兹伯里,威尔特郡SP4 0JG,英国、)。MVA-575是以ECACC V00120707于2000年12月7日保藏。Acam3000 MVA是以保藏号:PTA-5095于2003年3月27日保藏于美国模式培养物保藏中心(ATCC)(美国模式培养物保藏中心,大学路10801,马纳萨斯,弗吉尼亚州20110-2209,美国)。MVA-I721是作为CNCM I721保藏于巴斯德研究所的法国国家微生物培养物保藏中心。MVA-BN是于2000年8月30日以编号V00083008保藏于ECACC。MVA-BN已经描述于国际PCT公开案WO 02/042480中(还参见例如美国专利号6,761,893和6,913,752)。
MVA还可以包括本文所述的任何MVA病毒或MVA-BN的衍生物或变体。MVA或MVA-BN的“衍生物”或“变体”是指展现与其所涉及的MVA或MVA-BN基本相同的复制特征,但是在其基因组的一个或多个部分中展现差异的MVA或MVA-BN病毒。与所保藏病毒具有相同的“复制特征”的病毒是以与所保藏株系相似的扩增比率在CEF细胞和以下细胞系中复制的病毒:HaCat(Boukamp等人[1988],J Cell Biol[细胞生物学杂志]106:761-771)、人骨肉瘤细胞系143B(ECACC号91112502)、人胚肾细胞系293(ECACC号85120602)和人***细胞系HeLa(ATCC号CCL-2)。确定MVA、其衍生物和变体的这些特性的测试和测定是技术人员所熟知的,如WO 02/42480中所述的细胞系许可性测定。在示例性细胞系许可性测定中,用肠胃外和衍生或变体MVA病毒以较低的每个细胞的感染复数(即,0.05感染单位/细胞(5x104TCID50))感染哺乳动物细胞系。在吸收1小时后,去除病毒接种物并将细胞洗涤三次,以去除任何剩余的未吸收病毒。添加补充有3%FCS的新鲜培养基并使感染持续总共4天(在37℃,5%CO2下),其中可以制备病毒提取物。通过将板在-80℃下冷冻三次来停止感染。随后使用技术人员熟知的方法在CEF细胞上确定病毒增殖和细胞病变效应(CPE),这些方法是如Carroll和Moss[1997],Virology[病毒学]238,198-211中所述的那些方法。
更具体地,MVA-BN或者MVA-BN的衍生物或变体优选地具有在鸡胚成纤维细胞(CEF)中繁殖性复制的能力,但是在以下细胞系中不具有繁殖性复制的能力:人角质形成细胞的细胞系HaCat(Boukamp等人(1988),J.Cell Biol.[细胞生物学杂志]106:761-771)、人骨肉瘤细胞系143B(ECACC保藏号91112502)、人胚肾细胞系293(ECACC保藏号85120602)和人***细胞系HeLa(ATCC保藏号CCL-2)。另外,MVA-BN的衍生物或变体具有比Hela细胞和HaCaT细胞系中的MVA-575低至少两倍、更优选地低三倍的病毒扩增比率。对MVA变体的这些特性的测试和测定描述于WO 02/42480中或如上所述的示例性细胞系许可性测定中。
术语“不能繁殖性复制”或“没有繁殖性复制的能力”例如描述于WO 02/42480中,该案还传授如何获得具有如上文所提及的所需特性的MVA。该术语适用于在感染后4天时具有使用WO 02/42480中或美国专利号6,761,893中所述的测定得出的小于1的病毒扩增比率的病毒。
术语“不能繁殖性复制”是指在感染后4天时具有小于1的病毒扩增比率的病毒。WO02/42480中或美国专利号6,761,893中描述的测定适用于确定病毒扩增比率。
病毒的扩增或复制通常表示为从受感染细胞产生的病毒(输出)与最初用于首先感染细胞的量(输入)的比率,称之为“扩增比率”。等于“1”的扩增比率定义从受感染细胞产生的病毒的量与最初用于感染细胞的量相同的扩增状态,意味着受感染细胞许可病毒感染和繁殖。相比之下,小于1的扩增比率(即,输出与输入水平相比有所下降)指示缺少繁殖性复制,并因此指示病毒的减弱。
在某些实施例中,根据本发明的实施例的组合物中的包膜病毒不是MVA,优选地该包膜病毒不是MVA-BN,更优选地该包膜病毒不是如以保藏号V00083008保藏于欧洲动物细胞培养物保藏中心(ECACC)的或其衍生物。
在一些实施例中,根据本发明的实施例的组合物中的包膜病毒不是在体外在鸡胚成纤维细胞(CEF)细胞中具有繁殖性复制的能力但是在人角质形成细胞的细胞系HaCat、人骨肉瘤细胞系143B、人胚肾细胞系293和人***细胞系HeLa中不具有繁殖性复制的能力的MVA-BN病毒或其衍生物。
在一些实施例中,根据本发明的实施例的组合物中的包膜病毒不是优选地在体外在鸡胚成纤维细胞(CEF)细胞中具有繁殖性复制的能力但是在人角质形成细胞的细胞系HaCat、人骨肉瘤细胞系143B、人胚肾细胞系293和人***细胞系HeLa中不具有繁殖性复制的能力的、以保藏号V00083008保藏于欧洲动物细胞培养物保藏中心(ECACC)的MVA-BN病毒或其衍生物。
在优选实施例中,本文所披露的包膜病毒或任何优选病毒是纯化的或部分纯化的病毒。用于包膜病毒(例如,流感、RSV、痘病毒和HSV)的产生和纯化的方法是本领域技术人员已知的并且进一步描述于下文中。
任何实施例的包膜病毒可以是重组或非重组包膜病毒,优选地重组流感、RSV、痘病毒或HSV痘苗病毒。术语“重组”是指病毒,更特定地包膜病毒,其包含***其基因组中的、并非天然存在于亲本病毒中的外源核酸序列。重组病毒(例如,包膜病毒,比如但不限于流感、RSV、痘病毒或HSV)因此是指通过将合成或半合成来源的核酸序列的两个或更多个区段进行人工组合而制造的核酸或病毒,其在自然界中不存在或者以在自然界中未发现的布置连接至另一种核酸。该人工组合最常通过使用良好确立的基因工程技术人工操作核酸的经分离区段来完成。通常,如本文所述的“重组”包膜病毒是指通过标准基因工程方法产生的包膜病毒,例如,本发明的包膜病毒是由此基因工程化的或遗传修饰的包膜病毒。术语“重组包膜病毒”因此包括在其基因组中具有稳定整合的优选地呈转录单位形式的重组核酸的包膜病毒。转录单位可以包括启动子、增强子、终止子和/或沉默子。本发明的重组包膜病毒可以在调控元件的诱导后表达异源抗原决定簇、多肽或蛋白质(抗原)。
术语“抗原决定簇”是指刺激宿主的免疫***产生抗原特异性免疫应答(不论是细胞应答还是体液抗体应答)的任何分子。抗原决定簇可以包括引发宿主的免疫应答并形成抗原的一部分的蛋白质、多肽、抗原性蛋白质片段、抗原和表位;蛋白质、多肽和抗原性蛋白质片段以及表位的同源物或变体,包括例如糖基化的蛋白质、多肽、抗原性蛋白质片段、抗原和表位;以及编码此类分子的核苷酸序列或基因。因此,蛋白质、多肽、抗原性蛋白质片段和表位并不限于特定的天然核苷酸或氨基酸序列,而是涵盖与天然序列相同的序列以及对天然序列的修饰,如缺失、添加、***和取代。
当在抗原决定簇的上下文中使用时,术语“衍生物”和“变体”优选地在核苷酸或氨基酸序列水平上,与特定蛋白质、多肽、抗原性蛋白质片段、抗原和表位中的所提及抗原决定簇具有至少约50%、至少约60%或65%、至少约70%或75%、至少约80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%或89%,更典型地至少约90%、91%、92%、93%或94%,并且甚至更典型地至少约95%、96%、97%、98%或99%,最典型地至少约99%的同一性。确定核酸和氨基酸之间的序列同一性的技术是本领域中已知的。两个或更多个序列可以通过确定其“同一性百分比”来进行比较。两个序列(不论是核酸还是氨基酸序列)的同一性百分比等于两个经比对序列之间的确切匹配数除以较短序列的长度并乘以100。
术语“表位”是指抗原上B细胞和/或T细胞对其响应的位点,该位点是单独的或与另一蛋白质(如例如,主要组织相容性复合物(“MHC”)蛋白或T细胞受体)联合。表位可以从连续氨基酸形成或者通过蛋白质的二级和/或三级折叠并置从不连续氨基酸形成。从连续氨基酸形成的表位典型地在暴露于变性溶剂后保留,而通过三级折叠形成的表位典型地在用变性溶剂处理后损失。表位典型地在独特的空间构象中包括至少5、6、7、8、9、10或更多个氨基酸,但是通常少于20个氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括例如x射线结晶学和二维核磁共振。参见,例如,Methods in Molecular Biology[分子生物学方法]第66卷中的“Epitope Mapping Protocols[表位定位方案]”,Glenn E.Morris编辑(1996)。
在某些实施例中,本发明的重组病毒是包含如下核酸的重组病毒,该核酸编码***该重组病毒的基因组中的外源核酸序列。
术语“外源”在用于本文中时意味着,将所提及分子引入病毒基因组中。该分子可以例如通过将编码核酸引入病毒基因组中来引入。因此,该术语在用于提及外源核酸的表达时是指将编码核酸以可表达形式引入病毒中。相比之下,术语“内源”是指存在于宿主中的所提及分子。
在某些实施例中,本发明的重组病毒是包含如下核酸的重组病毒,该核酸编码***该重组病毒的基因组中的表达外源核酸序列的核酸。
如本文所用,可以互换使用的术语“表达(expressed)”、“表达(express)”、“表达(expressing)”、“表达(expression)”等表示目标序列的单独的转录以及转录和翻译二者。因此,在提及以DNA形式存在的核苷酸序列的表达时,从这种表达产生的产物可以是RNA(从待表达序列的单独的转录产生)或多肽序列(从待表达序列的转录和翻译二者产生)。术语“表达”因此还包括以下可能性:RNA和多肽产物二者都得自所述表达,并一起保持在相同的共有环境中。例如,当mRNA在翻译为多肽产物后仍持续存在时就是这种情况。
根据其他实施例,任何实施例的外源核酸序列可以编码抗原,优选地该抗原是病毒抗原或肿瘤相关抗原(TAA)。
优选地,病毒抗原衍生自病毒,如例如丝状病毒(优选地马尔堡病毒(MARV)和/或埃博拉病毒(EBOV),如例如WO 2016/034678中所述)、人免疫缺陷病毒I型(HIV-1;如gp 120或gp 160)、***(FMD)病毒(参见WO 2016/202828)、人或动物疱疹病毒(优选地衍生自HSV1或HSV2)、巨细胞病毒(CMV)、水痘带状疱疹病毒(VZV),或衍生自肝炎病毒(如乙型肝炎病毒(HBV)(例如乙型肝炎表面抗原或其衍生物(参见WO 2011/015656和WO 2013/007772))、甲型肝炎病毒(HAV)、丙型肝炎病毒(HCV;参见WO 04/111082;优先地来自基因型1b株系的非结构性HCV蛋白)、肝炎E病毒(HEV))、人***瘤病毒(HPV;参见WO 90/10459、WO95/09241、WO 98/04705、WO 99/03885和WO 07/121894;来自HPV16和HPV18株系的E6和E7蛋白是优选的)、呼吸道合胞病毒(RSV;参见WO 2014/019718)或流感病毒(WO 2012/048817)。
根据本发明的某些实施例,所述抗原优选地选自HCV、HBV、HIV-1、HPV、RSV、EBOV和/或MARV的抗原,优选地是EBOV和MARV。
在某些实施例中,根据本发明的实施例的组合物含有包膜病毒,该包膜病毒不是如WO 2016/034678中所述的含有编码丝状病毒的抗原蛋白或抗原决定簇的外源核酸序列的重组MVA,并且将该申请通过引用于此完全并入。在通过引用并入的材料与本说明书矛盾或不一致时,本发明的说明书将代替如上文已经提及的任何这种材料。通过引用并入的还包括WO 2016/034678的序列表。
在特定实施例中,本发明的重组病毒是包含编码一种或多种丝状病毒蛋白(优选一种或多种丝状病毒糖蛋白,优选三种丝状病毒糖蛋白)的核酸的重组病毒,前提是该重组病毒不是MVA。
在其他特定实施例中,丝状病毒糖蛋白选自埃博拉病毒苏丹株(SEBOV)、埃博拉病毒扎伊尔株(ZEBOV)和马尔堡病毒(MARV)。
在其他特定实施例中,丝状病毒糖蛋白选自埃博拉病毒苏丹株(SEBOV)、埃博拉病毒扎伊尔-Mayinga株(ZEBOV-Mayinga)和马尔堡病毒莫索克株(Marburg virus Musoke)。在其他特定实施例中,本发明的重组病毒是包含编码SEBOV、ZEBOV-Mayinga和MARV-莫索克的丝状病毒糖蛋白的核酸的重组病毒,前提是该重组病毒不是MVA。
在某些实施例中,本发明的重组病毒包含还编码丝状病毒核蛋白、优选埃博拉病毒的丝状病毒核蛋白、更优选埃博拉病毒象牙海岸(Ivory Coast)株的核蛋白(NP-EBOV-CdI)的核酸。
在某些优选实施例中,根据本发明的组合物中使用的重组病毒不是如WO2016/034678中所述命名为MVA-mBN226、MVA-mB255、MVA-mBN254的重组MVA。
在某些实施例中,肿瘤相关抗原选自癌胚抗原(CEA)、粘蛋白-1(MUC-1)、***酸性磷酸酶(PAP)、B7-1(也称为CD80)、细胞内粘附分子-1(ICAM-1,也称为CD54)、淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3,也称为CD58)、***特异性抗原(PSA)、HER-2和brachyury或其任一组合。优选地,TAA选自CEA、MUC-1、B7-1、ICAM-1、LFA-3、HER-2和brachyury。此类重组体的其他详情例如描述于WO 2015/175340和WO 2008/045346中。
用于产生非重组和重组包膜病毒的方法
获得重组包膜病毒(例如,流感、RSV、HSV、VACV或MVA)或将外源编码序列***包膜病毒基因组中的方法是本领域技术人员所熟知的。例如,用于标准分子生物学技术(如DNA克隆、DNA和RNA分离、蛋白质印迹分析、RT-PCR和PCR扩增技术)的方法描述于MolecularCloning,A laboratory Manual 2nd Ed.[分子克隆,实验室手册第2版](J.Sambrook等人,冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)(1989))中,并且用于处理和操作病毒的技术描述于Virology Methods Manual[病毒学方法手册](B.W.J.Mahy等人(编辑),学术出版社(1996))中。类似地,用于包膜病毒的处理、操作和基因工程的技术和实际知识描述于以下文献中:Molecular Virology:A Practical Approach[分子病毒学:实用方法](A.J.Davison和R.M.Elliott(编辑),The Practical Approach Series[实用方法丛书],英国牛津的牛津大学出版社的IRL出版社(IRL Press at Oxford UniversityPress,Oxford,UK)(1993),参见,例如,Chapter 9:Expression of genes by Vacciniavirus vectors[第9章:通过痘苗病毒载体表达基因]);Current Protocols in MolecularBiology[当前分子生物学方案](约翰威利父子公司(John Wiley&Son,Inc.)(1998),参见,例如,Chapter 16,Section IV:Expression of proteins in mammalian cells usingvaccinia viral vector[第16章,第IV节:使用痘苗病毒载体在哺乳动物细胞中表达蛋白质]);和Genetic Engineering,Recent Developments in Applications[基因工程,应用中的最新发展](苹果学术出版社(Apple Academic Press)(2011),Dana M.Santos,参见,例如,Chapter 3:Recombinant-mediated Genetic Engineering of a BacterialArtificial Chromosome Clone of Modified Vaccinia Virus Ankara(MVA)[第3章:修饰型痘苗病毒安卡拉(MVA)的细菌人工染色体克隆的由重组体介导的基因工程])。重组MVA的构建和分离也描述于以下文献中:Methods and Protocols,Vaccinia Virus andPoxvirology[方法和方案,痘苗病毒和痘病毒学],ISBN 978-1-58829-229-2(Staib等人),胡马纳出版社(Humana Press)(2004)参见,例如,第7章。其他重组包膜病毒的产生也是本领域中已知的。参见,例如,US 9492533描述包含Us8基因中的失活突变的突变体HSV株系的产生,US 20050118192描述具有一个或多个疱疹病毒糖蛋白基因中的缺陷的突变体HSV株系的产生;US 20160176932描述具有替代性三聚结构域的稳定的融合前呼吸道合胞病毒(RSV)F多肽的表达;US 20160136262描述流感疫苗和相关方法。所有参考文献都是通过引用并入本文。
在另一个方面中,本发明提供了产生免疫调节蛋白的方法,该方法包括在体外培养用突变体病毒感染的细胞系,该突变体病毒关于产生感染性病毒必需的第一基因是有缺陷的,并且包括编码免疫调节蛋白的异源核苷酸序列,所述细胞系是能够支持所述突变体病毒的复制的互补细胞系;以及可任选地此后从所述培养物分离免疫调节蛋白。
特定地,在需要可靠的哺乳动物细胞衍生的产物时以及在常规稳定细胞表达***不成功或不合适时,重组HSV载体具有用作替代性表达***的潜力。该***可以作为常规分批培养***来操作,其中使用标准组织培养***使补充细胞,即CR1细胞(表达HSV1的gH的重组补充Vero衍生细胞系的名称)生长至汇合,用含有用于异源基因表达的编码序列的重组病毒以高滴度感染这些细胞。在感染后的适当时间,可以收集培养上清液并加工以回收相关蛋白质。
为了更充分地说明本发明,将只以实例方式而不以限制方式描述实施例。gH缺陷性病毒的构建和特性描述于以下文献中:Forrester等人,1992J.Virol.[病毒学杂志]66,第341页;WO 92/05263;和WO 94/21807。另外,所有遗传操作程序都可以根据标准方法来实施,如以下文献中所述:"Molecular Cloning"A Laboratory Manual[“分子克隆”实验室手册],Sambrook、Fritsch和Maniatis编辑,冷泉港实验室出版社1989。
用于产生和纯化根据本发明使用的基于病毒的材料(如病毒载体)和/或病毒的方法是本领域技术人员已知的。可用方法包括在以下中复制病毒:CEF细胞或细胞系(特别是DF-1(US 5,879,924))、EBx鸡细胞系(WO 2005/007840)、EB66鸭细胞(WO 08/129058)或疣鼻栖鸭(Cairina moschata)永生化禽类细胞(WO 2007/077256或WO 2009/004016)。这些细胞或细胞系可以在本领域技术人员熟知的条件下培养。用于在CEF细胞中进行病毒培养和病毒扩增的无血清方法描述于例如WO 2004/022729中。产生病毒的上游和下游工艺可以从WO 2012/010280或2016/087457获得。可用于纯化本申请的病毒的方法详细披露于以下文献中:WO 03/054175、WO 07/147528、WO 2008/138533、WO 2009/100521和WO 2010/130753。用于在鸭胚衍生细胞中繁殖和纯化重组包膜病毒的示例性方法描述于以下文献中:Leon等人[2016],The EB66 cell line as a valuable cell substrate for MVA-basedvaccines production[作为有价值的细胞基质用于基于MVA的疫苗生产的EB66细胞系],Vaccine[疫苗]34:5878-5885。
在一些实施例中,所述组合物包含在约1x 106InfU/mL至约2x 109InfU/mL、优选约1x 107InfU/mL至约2x 109InfU/mL、更优选约1x 107InfU/mL至约4x108InfU/mL范围内的病毒滴度。在某些其他实施例中,该滴度在约0.1x 108InfU/mL至约4x 108InfU/mL范围内。
硫酸盐
在某些实施例中,硫酸盐是单价阳离子盐。根据本发明的单价阳离子是例如钠阳离子、钾阳离子或铵阳离子。
在某些实施例中,本发明的硫酸盐选自硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁和/或硫酸铵。
在优选实施例中,硫酸盐是硫酸钠、硫酸镁和/或硫酸铵,优选硫酸钠。在某些实施例中,硫酸钠盐是一元和/或二元硫酸盐。优选地,硫酸盐是硫酸二钠(Na2SO4)和/或硫酸氢钠(NaHSO4)盐,优选地硫酸盐是硫酸二钠(Na2SO4)盐。
在某些实施例中,硫酸盐(例如,硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁和/或硫酸铵)浓度在约5mM与300mM之间、在约5mM与250mM之间、在约5mM与220mM之间、在约5mM与200mM之间、在约5mM与180mM之间、在约5mM与150mM之间、在约5mM与120mM之间、在约10mM与300mM之间、在约20mM与300mM之间、在约30mM与300mM之间、在约40mM与300mM之间、在约50mM与300mM之间、在约70mM与300mM之间、在约80mM与300mM之间、在约80mM与150mM之间、在约90mM与150mM之间、在约90mM与120mM之间、在约90mM与110mM之间、在约48mM与110mM之间或在约10mM与110mM之间。在某些实施例中,本发明的组合物包含浓度为约100mM的硫酸盐,优选硫酸钠(特别是Na2SO4和/或NaHSO4)、硫酸钾、硫酸镁和/或硫酸铵,更优选硫酸钠和/或硫酸铵,最优选硫酸钠。
在某些实施例中,硫酸钠(特别是Na2SO4和/或NaHSO4)的浓度是在如上文针对其他硫酸盐所述的浓度范围的一个浓度范围内,优选地如本文所述的组合物中的Na2SO4和/或NaHSO4盐是以约50mM与150mM之间的浓度、优选地以约100mM的浓度存在。
在本发明的优选实施例中,如本文所述的硫酸盐和任何优选硫酸盐是无机盐,优选地其中该无机盐不含碳原子。
pH和缓冲液
根据本发明的组合物具有约6.0至约8.5、优选地在约6.5与8.5之间的pH。
在某些实施例中,根据本发明的组合物具有在约6.5与8.5之间、在约6.6与8.0之间、在约6.8与7.5之间、在约6.8与7.2之间、在约6.8与8.2之间、在约6.9与8.2之间、在约7.0与8.5之间、在约7.2与8.2之间、在约7.4与8.2之间、在约7.6与8.2之间或在约7.5与8.5之间的pH。
为了维持此pH,根据本发明的组合物包含在组合物的pH下具有缓冲能力的缓冲液。如本文所用的术语“缓冲液”或“缓冲溶液”是指由弱酸与其共轭碱(或反之亦然)的混合物组成的水溶液。在将少量或中等量的强酸或强碱添加至该缓冲液时,其pH变化极小,并因此使用该缓冲液来防止溶液的pH变化。缓冲溶液在众多种应用中用作将pH保持在几乎不变的值的手段。对于酸性区中的缓冲液,可以通过将诸如盐酸等强酸添加至缓冲剂来将pH调节至所需值。对于碱性缓冲液,可以添加诸如氢氧化钠等强碱。可替代地,可以从酸与其共轭碱的混合物制造缓冲液混合物。例如,可以从乙酸与乙酸钠的混合物制造乙酸盐缓冲液。类似地,可以从碱与其共轭酸的混合物制造碱性缓冲液。优选地,缓冲液是药学上可接受的缓冲液。
缓冲液的实例包括但不限于磷酸盐缓冲盐水(例如,PBS)、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液(例如,SSC)、柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液、TES、DIPSO、TEA、EPPS、Bicine、Tris(三(羟甲基)氨基甲烷)、Tris-HCl(三(羟甲基)氨基甲烷-HCl)、Tricine(N-[三(羟甲基)甲基)-甲基]-甘氨酸)、TAPSO、HEPES、TES、MOPS、PIPES、POPSO、MES、琥珀酸缓冲液。磷酸盐缓冲盐水(缩写PBS)是含有磷酸钠、氯化钠以及(在一些组合物中)氯化钾和磷酸钾的基于水的盐溶液。优选地,缓冲液选自TRIS、TRIS-HCL、Tricine、柠檬酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、柠檬酸盐/磷酸盐和磷酸盐缓冲液的组。在另一个优选实施例中,缓冲液是TRIS缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、组氨酸、柠檬酸盐/磷酸盐或磷酸盐缓冲液。磷酸盐缓冲液优选地包含Na2HPO4与KH2PO4的混合物或Na2HPO4与NaH2PO4的混合物。柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液优选地包含Na2HPO4和柠檬酸钠。在某些实施例中,缓冲液包含Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液。
所述缓冲液优选地以约5mM与40mM之间的浓度存在。在某些实施例中,所述缓冲液是以约5mM与25mM之间、约8mM与22mM之间、约8mM与15mM之间或约5mM与15mM之间的浓度存在。在某些实施例中,所述缓冲液是以约10mM的浓度存在。
在其他优选实施例中,所述缓冲液是具有在约6.5至8.5、优选地约7.5至8.5范围内的pH、最优选具有约8.0的pH的Tris缓冲液。
在其他优选实施例中,所述缓冲液是具有在约6.5至8.5范围内的pH、具有在约6.5至7.5范围内的pH、具有在约7.0至8.5范围内的pH、具有在约6.9至7.6范围内的pH、具有在约7.3至7.6范围内的pH、具有在约6.9至7.2范围内的pH、更优选具有约7.0的pH、更优选具有约7.5的pH的磷酸盐缓冲液。
在其他优选实施例中,所述缓冲液是具有在约6.0至8.0范围内的pH、优选地具有在约6.5至7.5范围内的pH的柠檬酸盐缓冲液或柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液。
其他成分
本发明的组合物可以进一步包括一种或多种药学上可接受的和/或批准的载体、添加剂、抗生素、防腐剂、佐剂、抗氧化剂、稀释剂和/或稳定剂。此类辅助物质可以是但不限于一种或多种糖、糖醇、多元醇、洗涤剂、一种或多种氨基酸、粘度增强剂、一种或多种其他盐、抗氧化剂、乙醇、EDTA或类似物。
在某些实施例中,本发明的组合物进一步包含糖、糖醇和/或多元醇。
在某些其他实施例中,本发明的组合物包含选自蔗糖、乳糖、甘露糖和海藻糖的组的糖。
在某些实施例中,本发明的组合物包含选自山梨醇、甘油或甘露醇的多元醇,该多元醇优选地是甘油和/或山梨醇。在某些实施例中,本发明的组合物包含山梨醇。在某些实施例中,本发明的组合物包含甘油。
在某些实施例中,任何组合物中所述糖或糖醇的浓度是在约1%(w/w)至10%(w/w)之间的范围内。在优选实施例中,所述组合物中的糖或糖醇的所述浓度是在约2%(w/w)至10%(w/w)之间、3%(w/w)至10%(w/w)之间、4%(w/w)至10%(w/w)之间、1%(w/w)至9%(w/w)之间、1%(w/w)至8%(w/w)之间、1%(w/w)至7%(w/w)之间、1%(w/w)至6%(w/w)之间、2%(w/w)至6%(w/w)之间、2.5%(w/w)至6%(w/w)之间、4%(w/w)至6%(w/w)之间、5%(w/w)至7%(w/w)之间的范围内,或者是约6%(w/w)。在某些实施例中,所述组合物中的蔗糖的浓度是约6%(w/w)。
在某些实施例中,所述组合物中的多元醇的浓度是在约1%(w/w)至6%(w/w)之间的范围内。在优选实施例中,所述组合物中的多元醇的所述浓度是在约2%(w/w)至6%(w/w)之间、3%(w/w)至6%(w/w)之间、4%(w/w)至6%(w/w)之间、1%(w/w)至4%(w/w)之间、1%(w/w)至3%(w/w)之间、1%(w/w)至2.5%(w/w)之间的范围内,或者是约5%(w/w)。在某些实施例中,所述组合物中的甘油的浓度是在约1%(w/w)至6%(w/w)之间的范围内。在优选实施例中,所述组合物中的多元醇的所述浓度是在约2%(w/w)至6%(w/w)之间、3%(w/w)至6%(w/w)之间、4%(w/w)至6%(w/w)之间、1%(w/w)至4%(w/w)之间、1%(w/w)至3%(w/w)之间、1%(w/w)至2.5%(w/w)之间的范围内,或者是约5%(w/w)。在某些实施例中,所述组合物中的甘油的浓度大约在约1%(w/w)至6%(w/w)之间的范围内,优选5%(w/w)。
在某些实施例中,本发明的组合物进一步包含洗涤剂,优选非离子型洗涤剂。已经显示非离子型表面活性剂例如通过降低聚集来诱导多种病毒在液态中的稳定(Evans等人[2004],J.Pharm Sci.[药物制剂科学杂志]93:2458-75;US7,456,009;US 2007/0161085),或者被添加以降低对容器表面的吸附。
在某些实施例中,洗涤剂选自聚山梨醇酯、月桂基硫酸钠和泊洛沙姆的组,优选地该聚山梨醇酯选自聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60和聚山梨醇酯-80的组。
在某些实施例中,聚山梨醇酯(特别是聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60和聚山梨醇酯-80)具有约0.001%(w/w)至约1%(w/w)、优选约0.001%(w/w)至约0.5%(w/w)的浓度范围。在优选实施例中,聚山梨醇酯具有约0.001%(w/w)至约0.1%(w/w)、约0.001%(w/w)至约0.008%(w/w)、约0.001%(w/w)至约0.005%(w/w)的浓度范围。聚山梨醇酯浓度优选地高于0.001%(w/w),但是优选地低于0.005%(w/w)。
在某些实施例中,所述泊洛沙姆选自泊洛沙姆182、泊洛沙姆188、泊洛沙姆121、泊洛沙姆331、泊洛沙姆338和/或泊洛沙姆407的组。
在某些实施例中,泊洛沙姆(特别是泊洛沙姆182、泊洛沙姆188、泊洛沙姆121、泊洛沙姆331、泊洛沙姆338和/或泊洛沙姆407)浓度是在约0.001%(w/w)与1%(w/w)之间、优选地在约0.005%(w/w)与0.5%(w/w)之间、在约0.01%(w/w)与0.1%(w/w)之间、在约0.01%(w/w)与0.05%(w/w)之间、在约0.015%(w/w)与0.03%(w/w)之间的范围内,或者是约0.025%(w/w)。
在某些实施例中,本发明的组合物进一步包含氨基酸,优选地其中该氨基酸选自精氨酸、甘氨酸、丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸、组氨酸、谷氨酸盐、谷氨酸和天冬氨酸或其任一组合的组。在优选实施例中,氨基酸选自谷氨酸、精氨酸或甘氨酸。氨基酸优选地是L-异构体,优选L-精氨酸、L-甘氨酸和/或L-组氨酸。所述一种或多种氨基酸不是由本发明的重组或非重组病毒编码的氨基酸。因此,氨基酸并非是通过病毒(例如,VACV或MVA)的纯化过程含于组合物中,而是在产生用于制造疫苗的组合物期间添加的。
氨基酸优选地以约0.1%(w/w)与约10%(w/w)之间、优选地约0.1%(w/w)与约5%(w/w)之间的浓度存在于组合物中。在另一个实施例中,氨基酸优选地以约0.1%(w/w)与约2.5%(w/w)之间、优选地约2.0%(w/w)与约5%(w/w)之间的浓度存在于组合物中。
已经发现氨基酸并且特别是组氨酸、精氨酸或甲硫氨酸诱导多种病毒在液态中的稳定(参见EVANS等人J Pharm Sci.[药物制剂科学杂志]2004年10月,93(10):2458-75;US7,456,009;US 2007/0161085;US 7,914,979;WO 2014/029702;WO 2014/053571)。当组氨酸存在于液体组合物中以改进稳定性时,组氨酸通常是以至少5mM、并且优选至少10mM的浓度存在(参见EVANS等人J Pharm Sci.[药物制剂科学杂志]2004年10月,93(10):2458-75;US 7,456,009;WO2014/029702)。当精氨酸存在于液体组合物中以改进稳定性时,精氨酸通常是以至少50mM(参见US 2007/0161085,至少1%(w/v)精氨酸对应于至少约57.4mM)、并且有时优选至少150mM、并且特别是约300mM(参见WO 2014/029702)的浓度存在。当甲硫氨酸存在于液体组合物中以改进稳定性时,甲硫氨酸通常以至少25mM、并且优选约67mM的浓度存在(参见WO 2014/029702)。
在某些实施例中,氨基酸(优选精氨酸,更优选L-精氨酸)是以低于300mM、优选低于150mM、低于100mM、低于75mM或甚至低于50mM的浓度存在。同样,当甲硫氨酸存在于根据本发明的液体组合物中时,该甲硫氨酸优选地以低于60mM、优选低于50mM、低于40mM、低于30mM或甚至低于25mM的浓度存在。更通常地,当一种或多种氨基酸存在于根据本发明的组合物中时,该一种或多种氨基酸优选地以低于300mM、优选地低于150mM、低于100mM、低于75mM、低于50mM、低于40mM、低于30mM、低于25mM、低于20mM、低于10mM、低于9mM、低于8mM、低于7.5mM、低于7mM、低于6mM或甚至低于5mM的浓度存在。
在某些实施例中,本发明的组合物不含组氨酸、精氨酸和/或谷氨酸。
在某些实施例中,本发明的组合物进一步包含一种或多种其他药物添加剂,如粘度增强剂。根据本发明的粘度增强剂包括但不限于聚乙二醇(PEG)、纤维素(如甲基纤维素(MC)或羧甲基纤维素(CMC))、明胶、琼脂和/或琼脂糖及其衍生物。例如,粘度增强剂的浓度可以在本发明的组合物的约0.1%(w/w)与10%(w/w)之间、优选约1%(w/w)与5%(w/w)之间的范围内。
此外,粘度增强剂可以提高溶液粘度。
在本发明的某些实施例中,组合物进一步包含佐剂。
在某些实施例中,本发明的组合物进一步包含药学上可接受的盐。在某些优选实施例中,该盐是氯化钠。氯化钠优选地以约10mM与100mM之间、优选地约20mM与100mM之间、约40mM与100mM之间或约50mM与100mM之间的浓度存在于本发明的组合物中。在优选实施例中,氯化钠是以约70mM的浓度存在。
在某些实施例中,本发明的组合物进一步包含一种或多种抗氧化剂。
在某些实施例中,抗氧化剂选自以下项的组:甲硫氨酸、抗坏血酸、α生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、阿诺克索牟(anoxomer);丁羟茴醚、丁羟甲苯、柠檬酸、柠檬酸盐和叔丁基氢醌。抗氧化剂赋形剂可以以包膜病毒组合物的0.01%(w/w)、0.05%(w/w)、0.1%(w/w)、0.5%(w/w)、1%(w/w)、2%(w/w)、3%(w/w)、4%(w/w)、5%(w/w)、6%(w/w)、7%(w/w)、8%(w/w)、9%(w/w)、10%(w/w)的浓度存在,包括其间的所有值和范围。
在某些实施例中,本发明的组合物进一步包含螯合剂,优选地药学上可接受的螯合剂。螯合剂可以进一步改进组合物特别是在液态中的稳定性。
在某些实施例中,螯合剂选自乙二胺四乙酸(EDTA)、1,2-双(邻氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸(BAPTA)、乙二醇四乙酸(EGTA)、二巯基琥珀酸(DMSA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)和2,3-二巯基-1-丙磺酸(DMPS),优选地所述螯合剂是EDTA。
在某些实施例中,螯合剂是以至少50μM的浓度存在,优选地是以50μM至1mM、50μM至750μM、50μM至500μM、50μM至250μM、50μM至150μM、50μM至100μM、50μM至75μM、100μM至300μM、100μM至250μM、100μM至200μM、100μM至150μM、150μM至1mM、150μM至750μM、150μM至500μM或150μM至250μM范围内的浓度存在,优选地所述螯合剂可以以在50μM至150μM范围内的浓度存在。
在某些实施例中,本发明的组合物进一步包含乙醇。在某些实施例中,本发明的组合物以0.05%(v/v)至5%(v/v)范围内的浓度,优选地以0.01%(v/v)至5%(v/v)、0.01%(v/v)至2.5%(v/v)、0.01%(v/v)至1.5%(v/v)、0.1%(v/v)至5%(v/v)、0.1%(v/v)至2.5%(v/v)、0.1%(v/v)至1.5%(v/v)或0.25%(v/v)至0.75%(v/v)范围内的浓度进一步包含乙醇。
重量摩尔渗透压浓度
在一些实施例中,本发明的组合物具有对于宿主生理上可接受的离子强度。在组合物中包括盐的目的是达到所需的离子强度或重量摩尔渗透压浓度以稳定组合物,以及减小副作用或在作为疫苗的组合物的注射位点的局部反应。在一些实施例中,本发明的组合物具有在约200mOsm/L至约1000mOsm/L范围内,在约200mOs/L至约900mOs/l、约200mOs/L至约800mOs/l、约200mOs/L至约700mOs/l、约200mOs/L至约600mOs/l或约200mOs/L至约500mOs/l范围内的总重量摩尔渗透压浓度(溶液中分子的总数)。在一些实施例中,本发明的组合物具有在约250mOs/L至约450mOs/L范围内、优选地约300mOs/L的总重量摩尔渗透压浓度。如所述的重量摩尔渗透压浓度既促进在2℃-8℃或更高温度下的长期储存,同时也使组合物适用于肠胃外(尤其肌内或皮下)注射。对离子强度的贡献可以来自缓冲化合物产生的离子以及来自非缓冲盐的离子。优选地,溶液的重量摩尔渗透压浓度和离子浓度与人体的重量摩尔渗透压浓度和离子浓度相匹配(等渗的)。
其他优选组合物
在一个实施例中,本发明提供了一种组合物,其包含a)包膜病毒;b)缓冲液;和c)浓度为约5mM至约300mM的硫酸盐,其中该组合物具有约6.0至约8.5的pH,并且该包膜病毒不是表达丝状病毒抗原的MVA。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度在约5mM与25mM之间的Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液、在约5mM与150mM之间的硫酸钠浓度,其中所述组合物具有在约7.0与8.5之间的范围内的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度在约5mM与25mM之间的Tris缓冲液、在约5mM与150mM之间的硫酸钠浓度,其中所述组合物具有在约7.5与8.5之间的范围内的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约8mM至约12mM的Tris缓冲液、和浓度为约80mM至约100mM的硫酸钠,其中所述组合物具有约7.7至8.2的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约8mM至约12mM的Tris缓冲液、浓度为90mM至110mM的硫酸钠,含有或不含4%(w/w)至6%(w/w)蔗糖或甘油,其中所述组合物具有约7.6至约8.2的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约8mM至约12mM的Tris缓冲液、浓度为约45mM至约55mM的硫酸钠和浓度为约60mM至约80mM的氯化钠,其中所述组合物具有约7.6至约8.0的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的Tris缓冲液、约100mM的硫酸钠浓度,其中所述组合物具有约8的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的Tris缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠,含有4%(w/w)至6%(w/w)蔗糖或甘油,其中所述组合物具有约8的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的Tris缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠和浓度为约6%(w/w)的蔗糖,其中所述组合物具有约8的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的Tris缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠和浓度为约5%(w/w)的甘油,其中所述组合物具有约8的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的Tris缓冲液、浓度为约50mM的硫酸钠和约70mM氯化钠,其中所述组合物具有约7.7的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度在约5mM与25mM之间的磷酸盐缓冲液、在约5mM与150mM之间的硫酸钠浓度,其中所述组合物具有在约6.8与7.5之间的范围内的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度在约7.5mM与12mM之间的磷酸盐缓冲液、浓度在约90mM与110mM之间的硫酸钠,其中所述组合物具有在约6.8与7.2之间的范围内的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的磷酸盐缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠,其中所述组合物具有在约6.8与7.8之间的范围内的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的磷酸盐缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠,其中所述组合物具有约7的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的磷酸盐缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠,其中所述组合物具有约7.5的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度在约7.5mM与12mM之间的磷酸盐缓冲液、浓度在约90mM与110mM之间的硫酸钠,含有或不含4%(w/w)至6%(w/w)蔗糖或甘油,其中所述组合物具有在约6.8与7.2之间的范围内的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的磷酸盐缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠,含有或不含4%(w/w)至6%(w/w)蔗糖或甘油,其中所述组合物具有约7的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的磷酸盐缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠和浓度为约6%(w/w)的蔗糖,其中所述组合物具有约7的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的磷酸盐缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠和浓度为约5%(w/w)的甘油,其中所述组合物具有约7的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的磷酸盐缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠,含有或不含4%(w/w)至6%(w/w)蔗糖或甘油,其中所述组合物具有约7.5的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,组合物包含浓度为约10mM的磷酸盐缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠和浓度为约5%(w/w)的甘油,其中所述组合物具有约7.5的pH。
在根据本发明的另一个实施例中,在如本文所述的实施例中任一实施例的组合物中,包膜病毒不是MVA。
在根据本发明的另一个实施例中,在如本文所述的实施例中任一实施例的组合物中,包膜病毒不是痘病毒。
在某些实施例中,本发明涉及药物组合物,其包含如本文所述的实施例中任一实施例的组合物。
在某些实施例中,包含任一实施例的组合物的药物组合物是适合于肠胃外给予的药物组合物。
在本发明的某些实施例中,包含任一实施例的组合物的药物组合物是适合于肌内、皮下、静脉内或鼻内施用的药物组合物。
在某些实施例中,根据本发明的组合物含于小瓶中。术语“小瓶”是指能够储存诸如如本文所披露的病毒等活性药物成分的任何容器、器皿、药筒、装置、玻璃安瓿或注射器。术语小瓶、容器、器皿、药筒、装置、玻璃安瓿或注射器因此可以互换使用。小瓶通常是由惰性材料(特别是玻璃(如DIN 2R I型硼硅玻璃小瓶)或聚合材料)制得。在优选实施例中,组合物含于注射器中。
可以通过本领域中已知的任何方式将本发明的组合物给予至受试者(优选人)。给予途径包括但不限于肌内注射、皮下注射、皮内注射、静脉内施用、鼻内给予、透皮(transdermal)给予、经皮(transcutaneous)给予或经皮肤(percutaneous)给予。本领域技术人员可以以已知方式优化给予方式、给予的剂量和次数。
在某些实施例中,本申请的组合物包含在104至109TCID50/mL、105至5x 108TCID50/mL、106至108TCID50/mL或107至108TCID50/mL的剂量范围内的病毒。用于受试者(优选地人)的优选剂量包含106至109TCID50之间,包括106TCID50、107TCID50或108TCID50的剂量。优选地,用于人的剂量包含至少2x 107TCID50、至少3x 107TCID50、至少5x 107TCID50、至少1x108TCID50、至少2x 108TCID50,优选地于0.1mL至0.5mL的体积中。
本发明还涉及本发明的实施例中任一实施例的组合物或药物组合物,其用于治疗和/或预防疾病或抵抗病原体,该疾病优选地是选自癌症或感染性疾病的疾病。
本发明还涉及本发明的实施例中任一实施例的组合物或药物组合物用于制造用于治疗和/或预防疾病或抵抗病原体的药剂的用途,该疾病优选地是选自癌症或感染性疾病的疾病。
另一个实施例涉及用于有需要的受试者(优选人)的疫苗接种的方法,其使用本发明的实施例中任一实施例的组合物或药物组合物。
另一个实施例涉及用于治疗和/或预防疾病或抵抗病原体的方法,该疾病优选地是选自癌症或感染性疾病的疾病,该方法包括将如本文所述的组合物或药物组合物给予至有需要的受试者(优选人)。
在某些实施例中,本发明涉及稳定包膜病毒组合物的方法,其包括制备任一实施例的组合物。
在某些实施例中,本发明涉及稳定包膜病毒组合物的方法,其包括制备任一实施例的组合物并将所述组合物储存于2℃至8℃范围内的温度下的步骤。
在某些实施例中,本发明涉及稳定包膜病毒组合物的方法,其包括将浓度为约5mM至约300mM的硫酸盐添加至包膜病毒组合物、优选地添加浓度在约10mM与140mM之间的硫酸盐的步骤。
在某些实施例中,本发明涉及稳定任一实施例的包膜病毒组合物的方法,其中该包膜病毒组合物包含缓冲液,并且其中所述组合物具有在约6.5与8.5之间的pH。
下文的详细实例意图促进对本发明的更佳理解。然而,这些实例并不限制本发明。在考虑本文所披露的本发明的说明书和实践后,本领域技术人员将了解本发明的其他实施例。
实例
实例1:
含有痘病毒的液体原料药的制备
如以下实例中使用的MVA-BN-FILO(MVA-mBN266)已经详细描述于WO2016/034678中。MVA编码三种丝状病毒糖蛋白即埃博拉病毒苏丹株(GP-SEBOV)的糖蛋白、埃博拉病毒扎伊尔-Mayinga株(GP-ZEBOV-Mayinga)的糖蛋白和马尔堡病毒莫索克株(GP-MARV-莫索克)的糖蛋白,以及埃博拉病毒象牙海岸株(NP-EBOV-CdI)的核蛋白。将GP-ZEBOV-Mayinga和GP-MARV-莫索克的表达盒***基因间隔区IGR 148/149中。将GP-SEBOV和NP-EBOV-CdI的表达盒***在痘病毒启动子下的基因间隔区IGR 88/89中,如WO 2016/034678中所述。使用技术人员已知的标准方法纯化重组病毒。将具有5x 108InfU/mL的病毒浓度的MVA-BN-FILO散装原料药(BDS)储存于含有140mM NaCl的10mM Tris(pH 7.7)中。为了改进产物在2℃至8℃下的稳定性,已经分析了超过200种使用各种盐、糖添加剂、氨基酸和缓冲液的不同制剂。最佳结果是用硫酸钠(Na2SO4)获得的。
实例2:
pH、缓冲液和硫酸盐的效应
已经使用超滤/透析过滤将MVA-BN-FILO BDS缓冲液交换至MilliQ级水中。之后,掺入特定体积的浓缩Tris缓冲液(在不同pH下)和硫酸钠(Na2SO4)溶液以获得最终制剂。这种制剂,即制剂B是由10mM Tris缓冲液和100mM Na2SO4组成,并将其分为分别具有pH 7.5、8、8.5和9的制剂B1、B2、B3和B4。
一起取不含100mM Na2SO4的相同组合物(制剂A1、A2、A3和A4)作为比较物。表1给出所制备制剂的概述。所有制剂都具有3.75x 108InfU/mL的MVA病毒效力滴度。
表1:这项研究中制备的制剂的组成。
组成 | |
制剂A1 | 10mM Tris pH 7.5 |
制剂A2 | 10mM Tris pH 8 |
制剂A3 | 10mM Tris pH 8.5 |
制剂A4 | 10mM Tris pH 9 |
制剂B1 | 10mM Tris pH 7.5+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
制剂B2 | 10mM Tris pH 8+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
制剂B3 | 10mM Tris pH 8.5+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
制剂B4 | 10mM Tris pH 9+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
使每种制剂经历在25℃下的加速应力条件1周,已知该条件导致MVA降解。在施加加速应力之前和之后测量样品。在Fluoromax 4荧光分光光度计(Jobin Yvon Horiba,英国)上进行对各向异性(图1)和固有荧光(在图2中记录为发射峰漂移和发射强度变化)的测量。在Zetasizer上进行动态光散射测量(在图2中记录为Z平均直径变化和多分散性指数(PDI)变化)。另外,还在施加加速应力之前和之后测量pH。
结果与结论
各向异性测量的结果显示于图1中。据显示,所有各向异性扫描在施加加速应力后都有所变化。对于所有制剂,各向异性扫描在应力后下降,这指示MVA的蛋白质中的被激发基团变得柔性更强。这种柔性增加可以归因为蛋白质中那些特定基团的解折叠和/或蛋白质构建体的解离。然而,当溶液中存在硫酸盐时,这种变化的程度较不显著。另外,在含有硫酸盐的制剂中在不同pH下的变化是相似的,指示硫酸盐的稳健的稳定效应。考虑到各向异性与蛋白质浓度和光散射无关的事实,这指示使用这种方法获得的结果是非常可靠的。
图2显示在加速应力后制剂A1-A4(不含Na2SO4)和B1-B4(含有Na2SO4)的pH变化、发射峰漂移、发射强度变化、Z平均直径变化和多分散性指数(PDI)变化的结果。可以从Z平均直径和PDI的变化看出,硫酸盐的存在对胶体稳定性具有显著效应,这些变化在含有硫酸盐的制剂中较低。改进的胶体稳定性表示微粒混合物不易聚集或解离。由于MVA-BN-FILO的胶体不稳定性与降低的病毒效力之间的关联,改进的胶体稳定性可能会影响病毒的活性。所观察到的pH和发射强度的变化有限,特别是在pH 7.5和8.0下对于含有Na2SO4的制剂而言。由于发射强度可能受样品的散射特性影响,发射强度可能会因样品的散射特性增加的事实而降低。与发射强度相比,峰漂移不依赖于光散射,并且结果显示,对于所有硫酸盐制剂,峰漂移都较低。这指示,蛋白质结构中的构象变化在这些制剂中是有限的,并且硫酸盐具有稳健的稳定效应。
实例3
实验设计和方法
为了进一步研究硫酸盐对MVA病毒的稳定性的效应,已经测试了若干种具有不同盐的其他制剂。这些其他制剂的概述显示于表2中。
表2:所测试制剂的组成
组成 | |
制剂A1 | 10mM Tris pH 7.5 |
制剂A2 | 10mM Tris pH 8 |
制剂A3 | 10mM Tris pH 8.5 |
制剂A4 | 10mM Tris pH 9 |
制剂B1 | 10mM Tris pH 7.5+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
制剂B2 | 10mM Tris pH 8+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
制剂B3 | 10mM Tris pH 8.5+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
制剂B4 | 10mM Tris pH 9+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
制剂C1 | 10mM Tris pH 7.5+100mM CaCl<sub>2</sub> |
制剂C2 | 10mM Tris pH 8+100mM CaCl<sub>2</sub> |
制剂C3 | 10mM Tris pH 8.5+100mM CaCl<sub>2</sub> |
制剂C4 | 10mM Tris pH 9+100mM CaCl<sub>2</sub> |
制剂D1 | 10mM Tris pH 7.5+100mM MgSO<sub>4</sub> |
制剂D2 | 10mM Tris pH 8+100mM MgSO<sub>4</sub> |
制剂D3 | 10mM Tris pH 8.5+100mM MgSO<sub>4</sub> |
制剂D4 | 10mM Tris pH 9+100mM MgSO<sub>4</sub> |
制剂E1 | 10mM Tris pH 7.5+100mM MgCl<sub>2</sub> |
制剂E2 | 10mM Tris pH 8+100mM MgCl<sub>2</sub> |
制剂E3 | 10mM Tris pH 8.5+100mM MgCl<sub>2</sub> |
制剂E4 | 10mM Tris pH 9+100mM MgCl<sub>2</sub> |
制剂F1 | 10mM Tris pH 7.5+140mM NaCl |
制剂F2 | 10mM Tris pH 8+140mM NaCl |
制剂F3 | 10mM Tris pH 8.5+140mM NaCl |
制剂F4 | 10mM Tris pH 9+140mM NaCl |
使每种制剂经历加速应力条件(在37℃下1天),已知该条件导致MVA降解。样品取自每种制剂并在施加加速应力之前和之后进行测量。在BioTek Neo读板仪上进行对浊度的测量。在Zetasizer上进行动态光散射(DLS)(记录为Z平均直径变化和PDI变化)测量。
结果与结论
在这个实验中获得的所有结果的概述显示于图3中。每个组代表在不同pH下每种制剂获得的结果。图的每一列显示使用单独测定获得的测量。
从浊度结果看出,含有MgCl2的制剂(制剂E1-4)在加速应力后显示最小变化,其次是Na2SO4制剂(制剂B1-4)和MgSO4制剂(制剂D1-4),这两种制剂似乎经历了有限的浊度变化。应注意,浊度是由于溶液中存在颗粒导致光整体散射的结果。这种散射的程度或浊度取决于多种因素,尤其是粒度、颗粒浓度和颗粒形状。关于胶体的其他信息是通过DLS结果(Z平均直径和PDI)来提供。
对于含有CaCl2的制剂(制剂C1-4),在加速应力后Z平均直径的变化最低。然而,这些制剂的初始Z平均直径都超过900nm。这对于MVA制剂(具有约200nm大小的MVA)是相对高的,指示在施加加速应力之前存在初始聚集。不考虑含有CaCl2的制剂的结果的情况下,含有NaCl的制剂(制剂F1-4)在应力后显示最小的Z平均直径变化。有趣的是,Na2SO4制剂(制剂B1-4)的表现似乎与含有NaCl的制剂一样好,其次是MgSO4制剂(制剂D1-4)。这个观察结果显示,制剂中硫酸盐的存在改进胶体稳定性。与MgSO4相比,MgCl2的存在(E1-4)似乎对稳定性具有负面效应,这与所测试的pH无关。关于PDI变化,Na2SO4制剂(制剂B1-4)显示最小变化,其次是MgSO4制剂(制剂D1-4)和含有NaCl的制剂(制剂F1-4)。基于所示数据,与上文针对Z平均直径变化所给出的解释相同的解释也可以适用于PDI结果,指示硫酸盐的存在很重要并且Na2SO4是最优选的。
实例4
实验设计和方法
在这项研究中,在不同pH的磷酸盐缓冲液中测试与实例3相同的盐的效应。这些其他制剂的概述显示于表3中。
表3:所测试制剂的组成
使每种制剂经历加速应力条件(在37℃下1天)。在施加加速应力之前和之后测量样品。在BioTek Neo读板仪上进行对浊度的测量。在Zetasizer上进行动态光散射(DLS)(记录为Z平均直径变化和PDI变化)测量。
结果与结论
在这个实例中获得的所有结果的概述显示于图4中。每个组代表在不同pH下每种制剂获得的结果。图的每一列显示使用单独测定获得的测量。
总的来说,从浊度结果可以得出结论,在所有4种制剂(B1-4)中,含有Na2SO4的制剂似乎经历了最小变化。关于浊度,MgCl2制剂(制剂C1-4)的表现不如Na2SO4制剂,其次是含有NaCl的制剂(制剂D1-4)。通过提供关于胶体特性的其他信息的DLS获得的结果再次显示Na2SO4对MVA-BN-FILO的稳定性的显著有益效应,这在所测试的所有pH值下都观察到了。对于MgCl2和CaCl2制剂(C1-4和D1-4),观察到在应力后Z平均直径的特别大并且不期望的增加,指示含有氯化物的盐制剂中的Mg2+离子对MVA-BN-FILO的胶体稳定性的负面效应。因此,可以得出结论,含有Na2SO4的制剂的稳定效应比所测试的其他制剂更稳健。
实例5
实验设计和方法
在这个实验中,制备来自早期研究的有前景的制剂以及新颖制剂和不含硫酸盐的对照制剂。这些制剂的概述显示于表4中。
使每种制剂经历加速应力条件(即,在25℃下2周;2W25C)。使制剂5、6和8额外暴露于另一种加速应力条件下,即在37℃下1天(1D37C)。在施加加速应力之前和之后测量样品的效力。效力测量是通过荧光激活细胞分选仪(FACS)测定来进行,如下文所述,并表示为相对效力差异(参见表5)。
表4:所测试制剂的组成
组成 | |
对照制剂 | 10mM Tris pH 7.7+140mM NaCl |
制剂1 | 10mM Tris pH 8+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
制剂2 | 10mM Tris pH 8+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>+6%蔗糖 |
制剂3 | 10mM Tris pH 8+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>+5%甘油 |
制剂4 | 10mM Tris pH 7.7+50mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>+70mM NaCl |
制剂5 | 10mM磷酸盐pH 7+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
制剂6 | 10mM磷酸盐pH 7+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>+6%蔗糖 |
制剂7 | 10mM磷酸盐pH 7.5+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
制剂8 | 10mM磷酸盐pH 7+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>+5%甘油 |
制剂9 | 10mM磷酸盐pH 7+50mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>+70mM NaCl |
制剂10 | 10mM磷酸盐pH 7+50mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>+70mM NaCl+5%甘油 |
制剂11 | 10mM磷酸盐pH 7+50mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>+5%甘油 |
结果与结论
作为加速应力条件的结果,所测试的每种制剂的效力损失的概述显示于表5中。
表5:效力分析结果的概述
总的来说,结果指示,所测试组合物中硫酸盐的存在对加速应力后的效力损失具有正面效应。此外,硫酸盐与相对较高的pH(>7.5)的组合进一步改进稳定性(参见制剂1、2、3、4和7)。另外,制剂中甘油的存在似乎也减小效力损失。这是通过针对制剂3和8所观察到的效力损失所证实的(尤其在1D37C之后,对于制剂8)。
实例6
实验设计和方法
在这个实验中,制备来自先前研究的有前景的含有硫酸盐的制剂(实例5,表5:制剂1、3和7)以及不含硫酸盐的对照制剂。已经使用超滤/透析过滤对MVA-BN-FILO原料药进行缓冲液交换。将大致具有所需药品浓度的制剂填充至玻璃小瓶中,加塞并加帽。这些制剂的概述显示于表6中。使每种制剂经历以下应力条件:i)在5℃下3个月,ii)在-20℃下3个月,iii)20个冻融循环,iv)以200rpm搅拌1天。在所指示的应力条件中的一种之前和之后,通过各种光谱学方法(例如,各向异性、固有荧光、90度光散射、磷光、动态光散射和浊度)测量样品。另外,测量样品的效力。
在BioTek Neo读板仪上进行对浊度的测量。在Zetasizer上进行动态光散射(DLS)(记录为Z平均直径变化和PDI变化)测量。在Fluoromax 4荧光分光光度计(Jobin YvonHoriba,英国)上在石英比色皿中进行对各向异性、固有荧光、90度光散射和磷光的测量。效力测量是通过荧光激活细胞分选仪(FACS)测定进行,并表示为感染单位/mL(表7)以及相对效力差异(表8)。
表6:所测试制剂的组成
制剂 | 组成 |
对照A | 10mM Tris pH 7.7+140mM NaCl |
对照B | 10mM Tris pH 7.7+70mM NaCl+5%甘油 |
1 | 10mM Tris pH 8.0+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
3 | 10mM Tris pH 8.0+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>+5%甘油 |
7 | 10mM Na/K磷酸盐pH 7.5+100mM Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> |
结果与结论
制剂在施加应力条件之前和之后的效力呈现于表7和表8中。图5、6、7和8分别含有MVA制剂在制备之后以及在5℃下3个月、在-20℃下3个月、20个冻融循环和以200rpm搅拌1天的应力条件之后的各向异性、荧光发射和90度光散射光谱。图9含有所测试样品的浊度、Z平均直径和PDI。制剂3显示在-20℃下3个月后、在20个冻融循环后和在搅拌1天后没有效力损失(表7和表8)。所测量到的变化在测定变化内。制剂7显示在搅拌1天后没有效力损失,而在-20℃下3个月或20个冻融循环后出现显著下降(表7和表8)。
MVA制剂是感染性MVA颗粒(活性物质)以及各种宿主细胞蛋白和其他工艺产生的杂质的固有组合;该组合一起形成带白色的悬浮液,该悬浮液含有具有通过平均直径和PDI测量的大小的小颗粒和大颗粒。浊度和90度光散射提供对这些悬浮液中的微粒性质的额外了解。大体上,可以得出结论,制剂中的硫酸盐导致浊度降低,这对于制剂1最显著(图9)。在这个实例中,在所指示的应力条件后,硫酸盐对减少制剂1中的较大颗粒的破坏效应与对照A相比进一步增强,如通过甚至更低的浊度、光散射、Z平均值和PDI的值所测量(图5-9)。
制剂3,即含有硫酸钠和甘油的Tris中的MVA,显示各向异性光谱、荧光发射光谱、90度光散射、浊度、Z平均直径和PDI在以下应力条件之后没有变化或变化极小:i)在-20℃下3个月,ii)20个冻融循环和iii)以200rpm搅拌1天(图6-9)。这与效力损失没有变化(在测定变化内)的观察结果一致。与Tris和甘油组合的硫酸盐积极地影响MVA制剂,并且关于悬浮液的微粒性质和胶体特性建立适当平衡;例如,当与T0相比时,制剂维持其浊度以及一定异质性,如通过约0.3的PDI所显示(图9)。
制剂7,即含有硫酸钠的磷酸盐缓冲液中的MVA,具有高PdI和高Z平均值(图9),这指示存在许多小颗粒和大颗粒。制剂7以与制剂3类似的方式针对搅拌诱导的应力稳定MVA。搅拌没有诱导制剂7的荧光发射、90度光散射或浊度的变化,但是测量到各向异性值略有下降。这指示平均而言,Trp环境变得刚性较低(例如,解离或解折叠),但不影响MVA胶体悬浮液的整体微粒性质。搅拌没有诱导制剂7的效力变化;所观察到的变化可能是由非MVA相关蛋白的解离或降解引起的。另外,制剂7在搅拌1天后的PdI和Z平均值与在5℃下3个月或在-20℃下3个月之后的值相比较低,指示颗粒和其粒度分布与根据不含大量聚集物或聚簇的纯化MVA颗粒所预期的更加一致。制剂7与制剂1相比指示,与硫酸盐组合的磷酸盐的存在对搅拌诱导的应力的抵抗比含有硫酸盐的Tris更强(表7和表8)。
在这个实例中,对照制剂B(Tris、甘油和NaCl)的效力损失与对照制剂A(Tris和NaCl)相比类似或较差,指示甘油的存在没有改进不含硫酸盐的对照制剂的物理和生物特性。然而,在用硫酸钠替代对照制剂B的氯化钠时(制剂3),得到MVA制剂的稳定,且效力变化极小至没有变化;表7和表8针对-20℃、20x冻融和搅拌条件呈现的值在测定变化内。
总而言之,通过将硫酸盐添加至制剂稳定MVA的效力和物理稳定性。硫酸盐与甘油的组合在冷冻状态中和在冻融后稳定MVA颗粒。改进的MVA稳定性可以对包括长期储存、贮存和现场使用在内的供应链是有益的。
表7:制剂在T0和在应力条件之后的效力
表8:所测试制剂在应力之后的效力与在T0时的效力(=100%)相比的相对效力损失(%)
实例7
实验设计和方法
虽然不希望受限于理论,但是人们相信,硫酸盐(SO42-)对包膜病毒和其衍生产物的稳定性具有正面效应。因此,将研究硫酸盐对以下三种包膜病毒和疫苗的影响:1)呼吸道合胞病毒(RSV)、2)单纯疱疹病毒疫苗(HSV)和3)流感疫苗。
在这项研究中,对于每种包膜病毒/疫苗将研究总计十种pH/缓冲液组合(参见表9)。为了获得这些组合,将使用超滤/透析过滤将每种病毒/疫苗经缓冲液交换至MilliQ级水中。之后,将掺入特定体积的浓缩pH/缓冲溶液以获得最终制剂中各自的所需浓度。这些制剂的每一种将与或不与100mM Na2SO4组合以及与或不与100mM MgSO4组合以研究硫酸盐的效应。此外,将在150mM NaCl的存在和不存在下制备每种制剂。最后,将一起取仅具有150mM NaCl的一种制剂作为阴性对照。表10给出待研究的组合的概述。
表9.pH/缓冲液筛选的概述。缓冲液浓度将为10mM。
表10.对于每种pH/缓冲液-包膜病毒/疫苗组合待研究的盐组合的概述。
将采用加速应力条件作为诱导病毒降解的工具。这包括但不限于温度诱导的应力、搅拌应力和冻融循环。将在施加加速应力条件之前和之后使用不同分析方法来监测病毒的物理/化学特性。这包括但不限于光谱测定(固有荧光、磷光(phosphorence)、各向异性、UV)、动态光散射、浊度和pH测量。
实例中用于确定稳定性的方法
固有荧光测定
MVA蛋白含有在激发后重发射光的芳香族氨基酸(荧光团),特别是色氨酸和较低程度地酪氨酸和苯丙氨酸。色氨酸的发射最大值和量子产率很大程度上取决于其环境的极性。在极性水性环境中(例如,球状蛋白质的表面,或在解离和游离状态中),量子产率相对低,而在极性环境中(例如,聚集体内部,或在亲脂病毒包膜内),量子产率增加。这个特征使得色氨酸荧光成为研究蛋白质构象变化、聚集、降解、解离和分子相互作用的有用工具。
本领域中已知荧光强度是蛋白质稳定性的灵敏量度。根据样品中发生的变化的性质,可以在应力后观察到增加或减少。预期蛋白质解折叠和衣壳解离导致固有荧光下降,并且预期聚集导致增加。发射最大值的位置变化提供关于荧光团的环境的额外信息。通常,在荧光团暴露于水性更强的环境的情况下发生红移(强度最大值朝向较长波长移动)。在加强荧光团与水的隔离时,典型地发生蓝移(强度最大值移动至较短波长)。
应将所获得的受应力样品荧光始终与对照样品比较。与t=0样品相比的变化(较高或较低)指示不太稳定的制剂。保持接近t=0样品值的受应力样品更稳定。
应用两种不同的荧光技术,即基于比色皿的荧光分光光度计和基于微量板的读板仪。在所用范围内,两种技术的精确度都<5%(CV%)。
用Fluoromax-4荧光分光光度计(Jobin Yvon Horiba,英国)进行基于比色皿的稳态荧光测量。这些测量是使用恒温比色皿支架在25℃下进行。使用Hellma石英比色皿。对于稳态发射测量,使用2nm(激发)和4nm(发射)的带通和0.1的积分时间,在290nm下激发样品并在300nm与450nm之间监测发射。
使用Biotek Neo 2读板仪测量基于微量板的固有荧光测定。将样品以一式三份转移至UV透明的平底微量板中。在280nm下以10nm的带宽激发后测量色氨酸荧光,并且在310nm至450nm之间测量发射。
各向异性
稳态荧光各向异性测量荧光团使偏振光转向的能力。使激发波长在一个方向上偏振,随后在由荧光团发射时转向。使用滤波器测量与所激发波长在相同平面上的发射波长,这意味着只有与激发波长在相同平面上的光才会被检测到。发生转向的偏振光越多,检测器上的信号越低。使光转向的能力取决于单独荧光团的平均柔性;荧光团的柔性越强,越多的光将被转向,并且检测器上的信号越低。这使得各向异性成为研究蛋白质构象变化、聚集、降解、解离和分子相互作用的有用工具。
本领域中已知各向异性是蛋白质稳定性的灵敏量度。根据样品中发生的变化的性质,可以在应力后观察到增加或减少。预期蛋白质解折叠和衣壳解离导致各向异性下降,并且预期聚集导致增加。应将所获得的受应力样品各向异性始终与对照样品比较。由于施加应力后的增加或减少取决于降解途径并且对每种活性药物成分(API)具有特异性,因此无法预测。与t=0样品相比的变化(较高或较低)指示不太稳定的制剂。保持接近t=0样品值的受应力样品更稳定。
用Fluoromax-4-荧光分光光度计(Jobin Yvon Horiba,英国)进行稳态荧光各向异性测量。这些测量是使用恒温比色皿支架在25℃下进行。使用Hellma石英比色皿。使用T形式配置以Glan-Thompson棱镜偏振器来进行稳态各向异性测量。各向异性是在得自290nm激发的发射峰范围(333-375nm)内测量。根据以下等式计算荧光各向异性A:
其中G是校正因子,G=I90,0/I90,90。Im,n是在给定波长的荧光强度,并且下标是指偏振器相对于竖直轴在激发(m)和发射(n)光束中的位置。以1.0s积分时间/1nm光谱步长记录光谱。
90度光散射
用Fluoromax-4荧光分光光度计(Jobin Yvon Horiba,英国)进行基于比色皿的90度光散射测量。这些测量是使用恒温比色皿支架在25℃下进行。使用Hellma石英比色皿。通过使用优化的带通组合和0.01s的积分时间监测在激发波长下的发射,在500nm与750nm之间的波长下测量90度角的光散射。光散射光谱提供关于溶液的浓度、折射率和粒度的信息。已经显示这种技术对于生物制剂的聚集状态中的小变化灵敏。例如,光散射的减少可以解释为颗粒浓度的降低或者相同数目颗粒的大小的减小或者其组合。光散射的增加通常与由于颗粒数目增加或相同数目颗粒的大小增加或其组合所致的聚集相关。
动态光散射
动态光散射(DLS)是用于测量悬浮液中或溶液中的粒度分布的技术。偏振激光进入样品中并被样品中存在的颗粒散射。随后通过光电倍增器收集散射光。在此分析强度随时间的波动。由于较小颗粒因其较高布朗运动而比较大颗粒更快地穿过溶液,较小颗粒的强度波动也更高。由于MVA是颗粒并散射偏振激光,DLS可以用于确定MVA粒度的增加(例如,聚集)和/或减小(例如,解离),这使DLS成为检测聚集或解离的有用技术。
在DLS中,将样品以一式三份转移至UV透明的平底微量板中。使用配备有10mV He-Ne激光器(830nm)并以90°角操作的DLS设备Zetasizer APS(马尔文公司(Malvern),英国)测量粒度和分布。
将所获得的受应力样品粒度分布与对照样品相比较。与t=0样品相比的变化(较高或较低)指示不太稳定的制剂。保持接近t=0样品值的受应力样品更稳定。
在350nm下的浊度测量
比浊法测量透射光由于样品中颗粒的散射所致的强度损失(表观吸光度),这是在样品中的分子不吸收光的波长(例如,对于蛋白质是主要生色团的样品,为350nm)的情况下检测的。在分子聚集或形成超分子复合物时,在来自单独颗粒时是随机的光散射现在变得凝聚,并且由此使所测量的强度增加。这使得光散射和比浊法成为检测聚集和复合物形成或解离的有用技术。
在浊度测定中,将样品以一式三份转移至UV透明的平底微量板中。通过微量板读取器在230nm与500nm之间记录吸光度光谱,并测量在975nm下的吸光度以确定并可能地校正光程长度的差异。如果需要,在测定中包括由不含MVA的制剂组成的对照样品,以针对散射性或吸收性基质组分进行校正。使用在350nm下的表观吸光度作为浊度的定量量度。
浊度测定指示MVA样品的稳定性。MVA聚集导致浊度增加,并且衣壳解离导致浊度降低。在浊度值>1NTU时,测定精确度<5%(CV%)。
应将所获得的受应力样品浊度始终与对照样品比较。与t=0样品相比的变化(较高或较低)指示不太稳定的制剂。预期与t=0样品相当的受应力样品更稳定。
磷光
磷光是指来自激发三重态的发射,而荧光是指来自激发单重态的发射。磷光基本上是以与荧光(ns级)类似的方式但具有较长时间尺度(ms至ms)的辐射的发射,使得发射在激发停止后继续进行。根据雅布隆斯基图(Jablonski diagram),荧光团吸收光并从基态到达单重态,之后系间窜跃至三重态。与荧光相比,来自三重态的发射(磷光)具有较低能量,并因此处于较高波长。磷光信号可以是活性药物成分(API)的特有特性,并且在降低的情况下提供对构象变化、降解或解离的指示。磷光发射的增加可以在形成较大且刚性的结构时发生,例如,在蛋白质聚集的情况下发生。
使用Fluoromax-4荧光分光光度计(Jobin Yvon Horiba,英国)进行磷光测量。这些测量是使用恒温比色皿支架在25℃下进行。使用Hellma石英比色皿。样品在343nm下被激发,并且使用2nm(激发)和4nm(发射)的带通和0.5s的积分时间在360nm与550nm之间监测磷光。
确定感染性(效力)的方法
荧光激活细胞分选仪(FACS)测定
通过荧光激活细胞分选仪(FACS)测定来确定重组或非重组MVA的滴度(InfU/mL)。用缀合荧光染料的对痘苗病毒(VACV)具有特异性的抗体对MVA感染的幼仓鼠肾细胞21(BHK-21)细胞进行免疫染色,随后使用用于定量细胞计数的配备有BD流量传感器的FACSVerseTM(BD生物科技公司(BD Bioscience))仪器对上述细胞进行采集和定量。
更详细地,将2.5x 105个BHK 21细胞(来源ATCC)接种于12孔板中的GMEM/9%FBS/1.8%Ala-Gln中。在第二天用目标MVA病毒原液的连续稀释物感染细胞。在37℃下孵育1h后,添加利福平(100μg/mL,于GMEM/9%FBS/1.8%Ala-Gln中)。在感染后19±2h收获细胞,并用BD Perm/WashTM试剂盒进行固定和透化,之后进行抗体染色。将固定的细胞与抗痘苗FITC(菲茨杰拉德工业国际公司(Fitzgerald Industries International),目录号60-v68)一起孵育60-90分钟。然后,通过流式细胞术使用BD FACSVerseTM细胞计数器确定病毒阳性细胞的百分比。通过对平行固定的未染色细胞使用BD FACSVerseTM流量传感器来确定总细胞计数。该测定的Inf U/mL的计算是基于病毒阳性细胞的百分比、感染期间所用的病毒稀释度、感染体积和平均每孔细胞数。为了限制细胞计数孔间变化性的效应,通过将多个孔的细胞计数取平均值来确立细胞数。对于病毒样品的InfU/mL的计算,只包括含有2%至35%VACV阳性细胞的稀释物。每个样品稀释物的InfU/mL的计算是根据下式来进行:
组织培养感染剂量50(TCID50)MVA感染性测定
TCID50是使用10倍稀释物以96孔形式滴定MVA感染性的方法,如WO03/053463的实例2中所述。在基于TCID50的测定中使用10倍稀释物以96孔形式进行MVA的滴定。在测定的终点,使用抗痘苗病毒抗体和适当的染色溶液使感染的细胞可视化。将2-3日龄原代CEF(鸡胚成纤维细胞)细胞在7%RPMI中稀释至1x 105个细胞/mL。以每个稀释度8份重复进行10倍稀释。在稀释后,将100μL接种于96孔板的每个孔中。然后将细胞在37℃和5%CO2下孵育过夜。
在10倍步骤中使用不含胎牛血清的RPMI制造含有病毒的溶液的稀释物。然后,将100μL的每种病毒样品添加至含有细胞的孔中。将96孔板在37℃和5%CO2下孵育5天以允许感染和病毒复制。在感染后5天用痘苗病毒特异性抗体对细胞进行染色。对于特异性抗体的检测,使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗。MVA特异性抗体是兔多克隆IgG部分的抗痘苗病毒抗体(夸泰特公司(Quartett),柏林,德国),#9503-2057)。该二抗是HRP偶联的山羊多克隆抗兔IgG抗体(普洛麦格公司(Promega),曼海姆(Mannheim),德国),#W4011)。根据已知技术进行显色反应。将每个具有在显色反应中呈阳性的细胞的孔标记为阳性以计算TCID50。通过使用Spearman-Kaerber计算方法来计算滴度。数据还可以被表示为病毒滴度的对数,该病毒滴度是从T=0时间点起的任何给定时间点的相对差异。
如上所述的实例被视为只是示例性的,本发明的真实范围和精神由以下权利要求来指示。
Claims (29)
1.一种组合物,该组合物包含a)包膜病毒;b)缓冲液;和c)浓度为约5mM至约300mM的硫酸盐,其中所述组合物具有约6.0至约8.5的pH,并且该包膜病毒不是表达丝状病毒抗原的MVA病毒。
2.如权利要求1所述的组合物,其中该包膜病毒不是MVA病毒。
3.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中该包膜病毒选自由以下项组成的组:流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)和单纯疱疹病毒。
4.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中该包膜病毒是重组包膜病毒。
5.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中该组合物是液体组合物或冷冻液体,优选在约2℃与约8℃之间储存的液体组合物。
6.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中该缓冲液包含选自由以下项组成的组的一种或多种:Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、组氨酸、柠檬酸盐缓冲液、和柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液。
7.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中该缓冲液具有约5mM至约40mM的浓度。
8.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中该缓冲液具有在约5mM与25mM之间的浓度。
9.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中该缓冲液是在约6.5与8.5之间的pH下的Tris缓冲液。
10.如权利要求1-9中任一项所述的组合物,其中该缓冲液是在约7.5与8.5之间的pH下、优选地具有等于8的pH的Tris缓冲液。
11.如权利要求1-9中任一项所述的组合物,其中该缓冲液是在约6.5与8.5之间的pH下的磷酸盐缓冲液。
12.如权利要求1-9中任一项所述的组合物,其中该缓冲液是在约6.8与7.8之间的pH下、优选地具有7.0或7.5的pH的磷酸盐缓冲液。
13.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中该硫酸盐选自由以下项组成的组:硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁和硫酸铵。
14.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中所述硫酸盐是硫酸钠和/或硫酸铵,优选硫酸钠。
15.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中该硫酸盐浓度是约5mM至约150mM。
16.如权利要求1-11或14-16中任一项所述的组合物,该组合物包含浓度为约10mM的Tris缓冲液、约100mM的硫酸钠浓度,其中所述组合物具有约8的pH。
17.如权利要求1-9或12-16中任一项所述的组合物,该组合物包含浓度为约10mM的磷酸盐缓冲液、浓度为约100mM的硫酸钠,其中所述组合物具有约7.5的pH。
18.如前述权利要求中任一项所述的组合物,该组合物进一步包含氯化钠。
19.如权利要求19中任一项所述的组合物,该组合物包含浓度在10mM与100mM之间的氯化钠。
20.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中该组合物进一步包含糖、糖醇和/或多元醇。
21.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中该多元醇是甘油。
22.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中甘油浓度在约1%(w/w)至6%(w/w)之间的范围内。
23.如前述权利要求中任一项所述的组合物,其中甘油浓度在约5%(w/w)之间的范围内。
24.如权利要求21所述的组合物,其中该糖是蔗糖。
25.如权利要求21或25所述的组合物,其中糖浓度在约1%(w/w)至10%(w/w)之间的范围内。
26.一种药物组合物,该药物组合物包含如前述权利要求中任一项所述的组合物。
27.一种制备如前述权利要求中任一项所述的组合物的方法,该方法包括将a)该包膜病毒;b)该缓冲液;和c)浓度为约5mM至约300mM的该硫酸盐组合在该组合物中,其中所述组合物具有约6.0至约8.5的pH。
28.一种稳定包膜病毒组合物的方法,该方法包括制备如前述权利要求中任一项所述的组合物。
29.如权利要求28所述的方法,该方法进一步包括将该组合物储存于从2℃至8℃的温度下。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP17171069.2 | 2017-05-15 | ||
EP17171069 | 2017-05-15 | ||
EP17199167 | 2017-10-30 | ||
EP17199167.2 | 2017-10-30 | ||
PCT/EP2018/062506 WO2018210804A1 (en) | 2017-05-15 | 2018-05-15 | Stable virus-containing composition |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110603058A true CN110603058A (zh) | 2019-12-20 |
Family
ID=62599536
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201880029784.7A Pending CN110603058A (zh) | 2017-05-15 | 2018-05-15 | 含有病毒的稳定组合物 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11306292B2 (zh) |
EP (1) | EP3624851A1 (zh) |
JP (1) | JP2020519666A (zh) |
KR (1) | KR20200003921A (zh) |
CN (1) | CN110603058A (zh) |
AU (1) | AU2018269319A1 (zh) |
CA (1) | CA3061678A1 (zh) |
WO (1) | WO2018210804A1 (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018211419A1 (en) * | 2017-05-15 | 2018-11-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stable virus-containing composition |
US20220193222A1 (en) * | 2018-11-30 | 2022-06-23 | Vaccine Stabilization Institute | Viral formulations containing amino acids |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013177172A2 (en) * | 2012-05-21 | 2013-11-28 | Sanofi Pasteur Limited | Herpesvirus compositions and related methods |
US20140056942A1 (en) * | 2012-08-21 | 2014-02-27 | Zhisong Qiao | Liquid stable virus vaccines |
WO2015057548A1 (en) * | 2013-10-16 | 2015-04-23 | Merck Sharp & Dohme Corp | Thermostable respiratory synctial virus (rsv) vaccine compositions |
Family Cites Families (51)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3919044A (en) | 1973-03-28 | 1975-11-11 | Armour Pharma | Processes for concentrating and purifying viruses and viral antigens |
FR2643817B1 (fr) | 1989-03-06 | 1993-12-17 | Transgene Sa | Composition pharmaceutique, utile a titre preventif ou curatif contre les tumeurs induites par les papillomavirus |
JP3895366B2 (ja) | 1990-09-25 | 2007-03-22 | キャンタブ ファーマシューティカルズ リサーチ リミティド | ウィルス ワクチン |
WO1994021807A2 (en) | 1993-03-19 | 1994-09-29 | Cantab Pharmaceuticals Research Limited | Defective mutant non-retroviral virus (e.g. hsv) as vaccine |
FR2710536B1 (fr) | 1993-09-29 | 1995-12-22 | Transgene Sa | Usage anti-cancéreux d'un vecteur viral comportant un gène modulateur de la réponse immunitaire et/ou inflammatoire. |
AU711121B2 (en) | 1995-02-21 | 1999-10-07 | Cantab Pharmaceuticals Research Limited | Viral preparations, vectors, immunogens, and vaccines |
AU731860B2 (en) | 1996-07-25 | 2001-04-05 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Recombinant pox virus for immunization against tumor-associated antigens |
FR2751879B1 (fr) | 1996-07-30 | 1998-10-30 | Transgene Sa | Composition pharmaceutique contre les tumeurs et infections a papillomavirus |
US5672485A (en) | 1996-08-13 | 1997-09-30 | Regents Of The University Of Minnesota | Immortalized cell lines for virus growth |
FR2766091A1 (fr) | 1997-07-18 | 1999-01-22 | Transgene Sa | Composition antitumorale a base de polypeptide immunogene de localisation cellulaire modifiee |
AU4346101A (en) * | 2000-03-07 | 2001-09-17 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus formulations |
US7456009B2 (en) | 2000-03-07 | 2008-11-25 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus formulations |
MXPA02008873A (es) | 2000-03-14 | 2003-02-10 | Anton Mayr | Cepa alterada del virus de vaccinia ankara modificado (mva). |
DE60116371T3 (de) | 2000-11-23 | 2016-11-17 | Bavarian Nordic A/S | Variante des modifizierten vaccinia ankara virus |
NZ533302A (en) | 2001-12-10 | 2005-11-25 | Bavarian Nordic As | Poxvirus containing formulations and process for preparing stable, poxvirus containing compositions containing a disaaccharide and a pharmaceutically acceptable polymer i.e. dextran or polyvinylpyrrolidon (PVP) |
SI1407006T1 (sl) | 2001-12-20 | 2006-04-30 | Bavarian Nordic As | Postopek za ponovno pridobivanje in ciscenje poksvirusov iz inficiranih celic |
EP1434858B2 (en) | 2002-09-05 | 2018-12-19 | Bavarian Nordic A/S | Method for the amplification of a poxvirus under serum free conditions |
AU2004263813B8 (en) | 2003-02-25 | 2008-09-11 | Medimmune, Llc | Methods of producing influenza vaccine compositions |
FR2855758B1 (fr) | 2003-06-05 | 2005-07-22 | Biomerieux Sa | Composition comprenant la polyproteine ns3/ns4 et le polypeptide ns5b du vhc, vecteurs d'expression incluant les sequences nucleiques correspondantes et leur utilisation en therapeutique |
DK1646715T3 (da) | 2003-07-22 | 2010-08-16 | Vivalis | Fremstilling af poxvirum med adhærente eller ikke-adhærente fuglecellelinjer |
WO2005028634A2 (en) | 2003-09-18 | 2005-03-31 | Emory University | Improved mva vaccines |
MXPA06013490A (es) * | 2004-05-19 | 2007-06-12 | Johnson & Johnson | Metodo y formulacion para el suministro transdermico de agentes inmunologicamente activos. |
ES2619936T3 (es) | 2004-11-05 | 2017-06-27 | Wellstat Biologics Corporation | Formulaciones de virus envueltos estables y filtrables |
US9024003B2 (en) | 2006-01-05 | 2015-05-05 | Transgene S.A. | Avian telomerase reverse transcriptase |
BRPI0710242A2 (pt) | 2006-04-21 | 2011-08-09 | Transgene Sa | uso de uma composição |
US8058049B2 (en) | 2006-06-20 | 2011-11-15 | Transgene S.A. | Process for producing poxviruses and poxvirus compositions |
US8865185B2 (en) | 2006-09-08 | 2014-10-21 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of use for HSV-1 and HSV-2 vaccines |
EP2073837B1 (en) | 2006-10-06 | 2014-06-25 | Bavarian Nordic Inc. | Recombinant modified vaccinia ankara virus encoding a her-2 antigen in combination with a taxane for use in treating cancer |
EP1985305A1 (en) | 2007-04-24 | 2008-10-29 | Vivalis | Duck embryonic derived stem cell lines for the production of viral vaccines |
EP3988651A1 (en) | 2007-05-14 | 2022-04-27 | Bavarian Nordic A/S | Purification of vaccinia virus- and recombinant vaccinia virus-based vaccines |
JP5421250B2 (ja) | 2007-07-03 | 2014-02-19 | トランスジーン ソシエテ アノニム | トリ不死化細胞株 |
SG188813A1 (en) | 2007-12-24 | 2013-04-30 | Id Biomedical Corp Quebec | Recombinant rsv antigens |
KR20100113159A (ko) | 2008-02-12 | 2010-10-20 | 사노피 파스퇴르 리미티드 | 폭스바이러스 정제를 위해 이온 교환 및 겔 여과 크로마토그래피를 사용하는 방법 |
JP5855564B2 (ja) | 2009-05-12 | 2016-02-09 | トランジェーヌ、ソシエテ、アノニムTransgene S.A. | オルソポックスウイルスの製造および精製方法 |
AU2010264688A1 (en) | 2009-06-24 | 2012-01-19 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Recombinant RSV antigens |
KR20120093811A (ko) | 2009-06-24 | 2012-08-23 | 아이디 바이오메디컬 코포레이션 오브 퀘벡 | 백신 |
EP2461826A2 (en) | 2009-08-07 | 2012-06-13 | Transgene SA | Composition for treating hbv infection |
WO2012010280A1 (en) | 2010-07-20 | 2012-01-26 | Bavarian Nordic A/S | Method for harvesting expression products |
US9173933B2 (en) | 2010-10-15 | 2015-11-03 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant modified vaccinia virus Ankara influenza vaccine |
RS56748B1 (sr) | 2011-05-13 | 2018-03-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Pre-fuzioni rsv f antigeni |
PL3299030T3 (pl) * | 2011-07-11 | 2022-12-05 | Takeda Vaccines, Inc. | Pozajelitowe preparaty szczepionek przeciw norowirusowi |
TWI575070B (zh) | 2011-07-12 | 2017-03-21 | 傳斯堅公司 | Hbv聚合酶突變體 |
CA2846372C (en) | 2011-09-08 | 2021-01-12 | New York University | Oncolytic herpes simplex virus and therapeutic uses thereof |
JP6523955B2 (ja) | 2012-08-01 | 2019-06-05 | バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ | 組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ(mva)rsウイルス(rsv)ワクチン |
TWI690322B (zh) | 2012-10-02 | 2020-04-11 | 法商傳斯堅公司 | 含病毒的調配物及其使用 |
CA2913859C (en) | 2013-05-30 | 2021-11-30 | Crucell Holland B.V. | Influenza virus vaccines and uses thereof |
MY171210A (en) | 2013-06-17 | 2019-10-02 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Stabilized soluble pre-fusion rsv f polypeptides |
IL248511B (en) | 2014-05-13 | 2022-07-01 | Bavarian Nordic As | Combined therapy for the treatment of cancer with a focovirus expressing the antigen and a monoclonal antibody against tim-3 |
WO2016034678A2 (en) | 2014-09-03 | 2016-03-10 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant modified vaccinia virus ankara (mva) filovirus vaccine |
DK3226894T3 (da) | 2014-12-01 | 2019-10-21 | Transgene Sa | Stabile flydende vacciniavirus-formuleringer |
CA2987159A1 (en) | 2015-06-15 | 2016-12-22 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant modified vaccinia virus ankara (mva) foot and mouth disease virus (fmdv) vaccine |
-
2018
- 2018-05-15 US US16/611,339 patent/US11306292B2/en active Active
- 2018-05-15 KR KR1020197036763A patent/KR20200003921A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-05-15 CA CA3061678A patent/CA3061678A1/en active Pending
- 2018-05-15 AU AU2018269319A patent/AU2018269319A1/en not_active Abandoned
- 2018-05-15 JP JP2019563161A patent/JP2020519666A/ja active Pending
- 2018-05-15 EP EP18730979.4A patent/EP3624851A1/en not_active Withdrawn
- 2018-05-15 CN CN201880029784.7A patent/CN110603058A/zh active Pending
- 2018-05-15 WO PCT/EP2018/062506 patent/WO2018210804A1/en unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013177172A2 (en) * | 2012-05-21 | 2013-11-28 | Sanofi Pasteur Limited | Herpesvirus compositions and related methods |
US20140056942A1 (en) * | 2012-08-21 | 2014-02-27 | Zhisong Qiao | Liquid stable virus vaccines |
WO2015057548A1 (en) * | 2013-10-16 | 2015-04-23 | Merck Sharp & Dohme Corp | Thermostable respiratory synctial virus (rsv) vaccine compositions |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20200003921A (ko) | 2020-01-10 |
EP3624851A1 (en) | 2020-03-25 |
WO2018210804A1 (en) | 2018-11-22 |
JP2020519666A (ja) | 2020-07-02 |
AU2018269319A1 (en) | 2019-11-07 |
US20200165577A1 (en) | 2020-05-28 |
CA3061678A1 (en) | 2018-11-22 |
US11306292B2 (en) | 2022-04-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10111947B2 (en) | Virus-containing formulation and use thereof | |
ES2370675T3 (es) | Procedimiento para proteger partículas virales. | |
RU2704485C2 (ru) | Стабильные жидкие препараты вируса осповакцины | |
RU2491340C2 (ru) | Вакцина против цитомегаловируса и способ ее получения | |
Legrand et al. | Induction of potent humoral and cell-mediated immune responses by attenuated vaccinia virus vectors with deleted serpin genes | |
US20230323389A1 (en) | Synthetic modified vaccinia ankara (smva) based coronavirus vaccines | |
JP2019531288A (ja) | ワクチン接種または遺伝子治療のための効率的なウイルスベクターベースの組成物を得るための新規方法 | |
Loomis et al. | Chimeric fusion (F) and attachment (G) glycoprotein antigen delivery by mRNA as a candidate Nipah vaccine | |
Kulkarni et al. | Vaccinia virus-based vaccines confer protective immunity against SARS-CoV-2 virus in Syrian hamsters | |
Yan et al. | A bivalent human adenovirus type 5 vaccine expressing the rabies virus glycoprotein and canine distemper virus hemagglutinin protein confers protective immunity in mice and foxes | |
Kastenmayer et al. | Elimination of A-type inclusion formation enhances cowpox virus replication in mice: implications for orthopoxvirus evolution | |
CN110603058A (zh) | 含有病毒的稳定组合物 | |
Jiao et al. | A single intranasal administration of virus-like particle vaccine induces an efficient protection for mice against human respiratory syncytial virus | |
Yu et al. | One time intranasal vaccination with a modified vaccinia Tiantan strain MVTTZCI protects animals against pathogenic viral challenge | |
JP7406377B2 (ja) | 安定なウイルス含有組成物 | |
Megret et al. | Immunopotentiation of the antibody response against influenza HA with apoptotic bodies generated by rabies virus G-ERA protein-driven apoptosis | |
Hao et al. | Development of improved mumps vaccine candidates by mutating viral mRNA cap methyltransferase sites in the large polymerase protein | |
US20230065895A1 (en) | Poxviral-based vaccine against severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 and methods using the same | |
Zhang et al. | Single dose recombinant VSV based vaccine elicits robust and durable neutralizing antibody against Hantaan virus |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |