CN110538091A - 局部用组合物和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一般涉及用于减少细纹和皱纹的出现、滋润皮肤、促进水合、强化和修复皮肤、减少炎症和发红、减少氧化剂、抵御污染、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑、改善皮肤屏障功能、以及紧致和调理皮肤的使用方法和组合物。该组合物包含糖类同分异构体、角叉菜胶钠、海盐和透明质酸钠中的一种或多于一种的组合。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年5月29日提交的美国临时专利申请62/677273的优先权,其公开内容通过引用整体并入本文。
技术领域
本发明一般涉及可用于局部用组合物的组合物,例如用于减少眼睛周围细纹和皱纹出现的化妆品组合物。
背景技术
衰老、长期暴露于不利的环境因素、营养失调、疲劳等会以视觉上不期望的方式改变皮肤和组织的视觉外观、物理性能或生理功能。最显著和明显的改变包括细纹和皱纹的发展、弹性的丧失、下垂的增加、紧致度的丧失、颜色均匀性或色调的损失、粗糙的表面纹理和斑驳的色素沉着。随着皮肤和组织老化或经历长期的环境损害而发生的不太明显但可测量的改变包括细胞和组织活力的普遍降低、细胞复制速率的降低、皮肤血流量的减少、水分含量的降低、结构和功能的累积误差、普通生化过程正常调节的变化以及皮肤和组织改造和修复自身能力的降低。皮肤的外观和功能的许多变化由皮肤的外表皮层的改变导致,而其他的变化由下面真皮的改变导致。无论对皮肤损伤的刺激如何,当发生损伤时,许多自然和复杂的生化机制启动以试图修复损伤。
难以避免或不可能避免可能损害皮肤或组织的外在和内在因素。当暴露于一些外在因素时,当受到损害时,或通过内在因素时,结构蛋白和涉及弹性以及皮肤和组织结合的蛋白质(例如,弹性蛋白、胶原蛋白、层粘连蛋白和纤连蛋白)的产生可能减少。这些蛋白质的减少可导致不希望的结果,例如皮肤的下垂、紧致度降低等。因此,需要能够紧致和调理皮肤和/或增加弹性蛋白、胶原蛋白、层粘连蛋白和/或纤连蛋白的产生的组合物和方法。
皮肤和/或毛发的保湿有助于克服皮肤中的一些不想要的改变。然而,皮肤的保湿可能是困难的。对于具有比平均水平更干燥的皮肤(干性皮肤类型)的对象来说尤其如此。暴露于化学品、溶剂、洗涤剂、化妆品、纤维织物或干燥环境是皮肤可能失去水分的很多途径中的一些。
皮肤和毛发会由于皮肤和毛发的清洗和/或清洁而失去水分。通常将皮肤和毛发清洗和/或清洁组合物施用于皮肤和/或毛发,并用水(例如洗去型产品)冲洗掉,从而去除皮肤的天然油脂和脂质。此外,清洗和/或清洁组合物常常具有可以对待清洁的表面具有腐蚀性的成分。例如,很多类型的洁面乳或洁净爽肤水使用了可以导致皮肤刺激性的一些表面活性剂。
包括粉底和面膜在内的化妆品可以导致皮肤的干燥。通常将粉底施用于皮肤并留在皮肤上,以使得可以施用额外的化妆品或掩盖不想要的瑕疵或颜色的外观。与粉底相关的一些问题包括皮肤刺激、稳定性、缺乏足够的效果、难以应用于皮肤和皮肤干燥。通常将面膜施用于皮肤并留在皮肤上一段时间,以使面膜所宣称的益处发生。与面膜相关的问题包括皮肤刺激、稳定性、缺乏足够的效果、难以应用于皮肤和皮肤干燥。许多面膜还会使皮肤脱屑,这可能会导致或加剧刺激、敏感和干燥。
保湿剂是化学剂的复杂混合物,专门设计用来使皮肤的外层(表皮)更柔软和更柔韧。它们通过减少蒸发来增加皮肤的水合(含水量)。天然存在的皮肤脂质和甾醇以及人造或天然油、湿润剂、润肤剂、润滑剂等可以是商业皮肤保湿剂组合物的一部分。它们通常作为美容和治疗用途的商业产品提供,但是也可以使用常用的药学成分自制。然而,保湿剂不是完美的。一些与保湿剂相关的问题包括:令人不愉快的触觉特性(例如,厚重感、油腻感、或黏腻感)、不稳定、皮肤刺激、或保湿能力不足。
其他人试图制造减少眼睛周围细纹和皱纹的出现、滋润皮肤、促进水合、强化和修复皮肤、紧致和调理皮肤的组合物和方法。然而,许多尝试都是无效的,仅解决了一种或几种不希望的结果,或者本身引起了不可接受的副作用,例如皮肤刺激或过敏反应。此外,并非每种有效组合物都适合每种皮肤或组织类型。因此,需要有效减少眼睛周围细纹和皱纹的出现、滋润皮肤、促进水合、强化和修复皮肤以及紧致和调理皮肤的新产品。
发明内容
发明人已经确定了与当前化妆品相关的问题的解决方案。该解决方案在于包括糖类同分异构体、角叉菜胶钠、透明质酸钠和海盐的成分的组合。该组合可用于制造局部用组合物,减少细纹和皱纹的出现、滋润皮肤、促进水合、强化和修复皮肤、减少炎症和发红、减少氧化剂、抵御污染、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑、和/或紧致和调理肌肤。糖类同分异构体显示出增加角质形成细胞的丝聚合蛋白和闭合蛋白的产生、降低TNF-α产生、增加皮肤电导并增加抗氧化能力。角叉菜胶钠显示出增加表皮产生透明质酸、真皮产生透明质酸、角质层产生神经酰胺和表皮产生神经酰胺。
在一些方面,公开了一种局部用组合物,其包括糖类同分异构体、角叉菜胶钠、透明质酸钠和海盐中的任何一种、任何组合或全部。所述组合物内成分的量可以改变(例如,该量以重量百分比计可以为低如0.000001%至高如98%,或是其间的任意范围)。在一些方面,局部用组合物包含0.001重量/重量%至5重量/重量%的糖类同分异构体,0.001重量/重量%至5重量/重量%的角叉菜胶钠,0.0001重量/重量%至5重量/重量%的海盐,和0.0001重量/重量%至1重量/重量%的透明质酸钠。在一些例子中,该组合物包含有效量的糖类同分异构体、角叉菜胶钠和海盐。在一些例子中,该组合物包含有效地进行以下的一种或多于一种的一定量的糖类同分异构体、角叉菜胶钠和海盐:减少细纹和皱纹的出现、滋润皮肤、促进水合、强化和修复皮肤、减少炎症和发红、减少氧化剂、抵御污染、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑、和/或紧致和调理皮肤。在一些例子中,该组合物包含有效量的透明质酸钠以增加皮肤湿润度、改善皮肤屏障功能、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑和/或紧致和调理皮肤。在一些例子中,该组合物包含有效量的糖类同分异构体以调理和滋润皮肤、减少TNF-α产生、增加皮肤电导和/或增加抗氧化能力,和/或有效量的角叉菜胶钠和海盐以促进皮肤水合、强化和修复皮肤、增加表皮和真皮的透明质酸的产生、和/或增加角质层和表皮的神经酰胺的产生。
在一些例子中,组合物还包含水。在一些例子中,组合物包含75重量/重量%至95重量/重量%的水。在一些例子中,组合物还包含甘油、EDTA二钠、二苯甲酮-4、丁二醇、三乙醇胺、双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷、黄原胶、c-异硬脂醇和/或二异硬脂醇苹果酸酯中的一种或多于一种。在一些例子中,该组合物含有0.5重量/重量%至8重量/重量%的甘油、0.005重量/重量%至1重量/重量%的EDTA二钠、0.005重量/重量%至1重量/重量%的二苯甲酮-4、1重量/重量%至10重量/重量%的丁二醇、0.01重量/重量%至1重量/重量%三乙醇胺、0.01重量/重量%至3重量/重量%的双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷、0.01重量/重量%至1重量/重量%的黄原胶、0.01重量/重量%至5重量/重量%的c-异硬脂醇和/或1重量/重量%至10重量/重量%的二异硬脂醇苹果酸酯中的一种或多于一种。在一些例子中,该组合物含有双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷和黄原胶中的一种或多于一种。在一些例子中,该组合物含有0.01重量/重量%至3重量/重量%的双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷和0.01重量/重量%至1重量/重量%的黄原胶。在一些例子中,组合物包含c-异硬脂醇。在一些例子中,组合物包含0.01重量/重量%至5重量/重量%的c-异硬脂醇。在一些例子中,组合物包含二异硬脂醇苹果酸酯。在一些例子中,组合物包含1重量/重量%至10重量/重量%的二异硬脂醇苹果酸酯。
在一些方面,本发明的组合物还可以包含表面活性剂、含硅酮的化合物、UV剂、油、和/或本说明书所确定的其他成分或本领域中已知的成分。该组合物可以是化妆水、乳霜、润肤霜、面膜、磨砂膏、洗液、凝胶、精华、乳液(例如,水包油、油包水、水包硅酮、硅酮包水、水包油包水、油包水包油、硅酮包水包油等)、溶液(如水溶液或水醇溶液)、无水基底(如,口红或粉末)、软膏剂、乳剂、糊状物、气溶胶、固体形式、眼部啫喱、凝胶精华、凝胶乳液等。该组合物可配制用于局部皮肤应用,在使用期间每天至少1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、或多于7次。在本发明的一些方面中,组合物可以是储存稳定或颜色稳定的,或是两者兼具。还期望可以选择组合物的黏度以达到希望的结果,例如根据希望的组合物类型,该组合物的黏度可以从1cps到远超过1百万cps,或者是其中可得到的任意范围或整数(举例来说,如在25℃下在布氏黏度计上用TC轴以2.5rpm的转速测量的2cps、3cps、4cps、5cps、6cps、7cps、8cps、9cps、10cps、20cps、30cps、40cps、50cps、60cps、70cps、80cps、90cps、100cps、200cps、300cps、400cps、500cps、600cps、700cps、800cps、900cps、1000cps、2000cps、3000cps、4000cps、5000cps、6000cps、7000cps、8000cps、9000cps、10000cps、20000cps、30000cps、40000cps、50000cps、60000cps、70000cps、80000cps、90000cps、100000cps、200000cps、300000cps、400000cps、500000cps、600000cps、700000cps、800000cps、900000cps、1000000cps、2000000cps、3000000cps、4000000cps、5000000cps、10000000cps等)。
在非限制性方面中,该组合物可以具有约6至约9的pH。在一些方面,pH可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14。组合物可以包含甘油三酯。非限制性实例包括短链、中链和长链甘油三酯。在一些方面,甘油三酯是中链甘油三酯(例如辛酸甘油三酯、癸酸甘油三酯)。组合物还可以包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例包括苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或其任何混合物。在一些实施方案中,组合物不含对羟基苯甲酸酯。
本发明的组合物可以具有UVA和UVB吸收性质。该组合物可以具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或更大的防晒指数(SPF),或是其中可以得到的任何整数。该组合物可以是防晒露、防晒喷雾或防晒霜。
本发明的组合物还可包含以下附加成分中的任何一种、任何组合或全部:调理剂、保湿剂、pH调节剂、结构化剂、无机盐、防腐剂、增稠剂、含硅酮的化合物、精油、香料、维生素、药物成分或抗氧化剂,或这些成分的任何组合或这些成分的混合物。在一些方面,组合物可以包含在之前句子中确定的这些附加成分中的至少二种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或多于十种、或全部。这些附加成分的非限制性实例在本说明书通篇指出并通过引用并入本部分。这类成分的量以组合物的重量或体积计可以为0.0001%至99.9%,或者是在如本说明书其他章节中所公开的范围之间的任何整数或范围,其通过引用并入本段。
还公开了本文公开的组合物的使用方法。在一些方面,公开了减少细纹和皱纹的出现、滋润皮肤、促进水合、强化和修复皮肤、和/或紧致和调理皮肤的方法。在一些方面,公开了增加皮肤湿润度、改善皮肤屏障功能、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙和增加皮肤润滑的方法。在一些例子中,方法包括将本文公开的任何一种组合物局部施用于皮肤和/或有此需要的面部和/或眼部区域。在一个方面,局部施用本文公开的任何一种组合物,并将组合物留在施用区域上,在一段时间后从施用区域移除,和/或在施用后直接移除。
在一些方面,本文公开的组合物用于减少细纹和皱纹的出现。在一些方面,本文公开的组合物用于使皮肤湿润。在一些方面,本文公开的组合物用于促进皮肤水合。在一些方面,本文公开的组合物用于强化和修复皮肤。在一些方面,本文公开的组合物用于紧致和调理皮肤。在一些例子中,本文公开的组合物用于增加透明质酸的表达。在一些例子中,本文公开的组合物用于增加神经酰胺的合成。在一些例子中,本文公开的组合物用于增加丝聚合蛋白的产生。在一些例子中,本文公开的组合物用于增加皮肤的电导。在一些例子中,本文公开的组合物用于增加闭合蛋白的产生。在一些例子中,本文公开的组合物用于抑制TNFα的产生。在一些例子中,本文公开的组合物用于减少TNFα的产生。在一些例子中,本文公开的组合物用于减少氧化剂。在一些例子中,本文公开的组合物用于增加皮肤湿润度、改善皮肤屏障功能、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙和增加皮肤润滑。在一些例子中,本文公开的方法包括将本文公开的任何一种组合物局部施用于皮肤和/或面部和/或眼部区域。
还涉及的是本说明书通篇所公开的所述组合物可以被用作保留型或洗去型组合物。举例来说,保留型组合物可以是局部施用于皮肤并在皮肤上保持一段时间(例如,至少5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、20分钟或30分钟,或至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时或24小时,或者整夜或整个白天)的组合物。或者,洗去型组合物可以是打算施用于皮肤并然后在一段时间内,如小于5分钟、4分钟、3分钟、2分钟或1分钟,(例如用水)从皮肤移除或洗去的产品。洗去型组合物的实例可以是洗面奶、洗发水、调节剂或肥皂。保留型组合物的实例可以是皮肤保湿剂、防晒霜、面膜、晚霜或日霜。
还考虑了包含本发明的组合物的试剂盒。在一些实施方案中,组合物包含在容器中。该容器可以是瓶子、分配器或包装。该容器可以分配预定量的组合物。一些方面,组合物以喷雾、薄雾、团块或液体分配。容器可以在其表面上包含标记。该标记可以是字词、缩写、图片或符号。
预期对于本发明的任何方法或组合物,可以实施本说明书中所讨论的任何实施方案,反之亦然。此外,本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。
在一些实施方案中,本发明的组合物可以是可药用的或可化妆用的,或可以具有舒适的触觉性质。“可药用的”、“可化妆用的”和/或“舒适的触觉性质”描述具有令皮肤感觉舒适的特定的触觉性质的组合物(例如,不是太水或太油的组合物、具有丝滑质地的组合物、非黏性或非黏着的组合物等)。可药用的或可化妆用的还可以涉及组合物的乳脂状或润滑性能,或组合物的水分保留性能。
还预期了一种包含本发明的组合物的产品。在非限制性方面,产品可以是化妆品。化妆品可以是本说明书其他章节所述的那些,或是本领域技术人员已知的那些。产品的非限制性实例包括保湿剂、乳霜、化妆水、柔肤水、精华、凝胶、洗液、润肤霜、磨砂膏、粉底、晚霜、口红、清洁剂、爽肤水、防晒霜、面膜、抗老化产品、除臭剂、止汗剂、香水、古龙水等。
还公开了本发明的以下实施方案1至实施方案30。实施方案1是一种处理皮肤的方法,其包括向皮肤局部施用包含糖类同分异构体、角叉菜胶钠、海盐和透明质酸钠的局部用组合物。实施方案2是实施方案1的方法,其中组合物包含0.001重量/重量%至5重量/重量%的糖类同分异构体、0.001重量/重量%至5重量/重量%的角叉菜胶钠、0.0001重量/重量%至5重量/重量%的海盐和0.0001重量/重量%至1重量/重量%的透明质酸钠。实施方案3是实施方案1至2中任一项的方法,其中组合物包含一定量的糖类同分异构体、角叉菜胶钠和海盐,它们有效减少细纹和皱纹的出现、滋润皮肤、促进水合、强化和修复皮肤、减少炎症和发红、减少氧化剂、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑、改善皮肤屏障功能、和/或紧致和调理皮肤。实施方案4是实施方案1至3中任一项的方法,其中组合物包含有效量的透明质酸钠,以增加皮肤湿润度、改善皮肤屏障功能、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑和/或紧致和调理皮肤。实施方案5是实施方案1至4中任一项的方法,其中组合物包含:有效量的糖类同分异构体,以调理和滋润皮肤、减少TNF-α产生、增加皮肤电导和/或增加抗氧化能力;和/或有效量的角叉菜胶钠和海盐,以促进皮肤水合、强化和修复皮肤、增加表皮和真皮的透明质酸的产生、和/或增加角质层和表皮的神经酰胺的产生。实施方案6是根据实施方案1至5中任一项的方法,其中组合物包含水。实施方案7是实施方案6的方法,其中组合物包含75重量/重量%至95重量/重量%的水。实施方案8是实施方案1至7中任一项的方法,其中组合物包含甘油、EDTA二钠、二苯甲酮-4、丁二醇和三乙醇胺。实施方案9是实施方案8的方法,其中组合物包含0.5重量/重量%至8重量/重量%的甘油、0.005重量/重量%至1重量/重量%的EDTA二钠、0.005重量/重量%至1重量/重量%的二苯甲酮-4、1重量/重量%至10重量/重量%的丁二醇和0.01重量/重量%至1重量/重量%的三乙醇胺。实施方案10是实施方案1至9中任一项的方法,其中组合物包含双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷和黄原胶。实施方案11是实施方案10的方法,其中组合物包含0.01重量/重量%至3重量/重量%的双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷和0.01重量/重量%至1重量/重量%的黄原胶。实施方案12是实施方案1至11中任一项的方法,其中组合物包含c-异硬脂醇。实施方案13是实施方案12的方法,其中组合物包含0.01重量/重量%至5重量/重量%的c-异硬脂醇。实施方案14是实施方案1至13中任一项的方法,其中组合物包含二异硬脂醇苹果酸酯。实施方案15是实施方案14的方法,其中组合物包含1重量/重量%至10重量/重量%的二异硬脂醇苹果酸酯。实施方案16是局部用组合物,其包含糖类同分异构体、角叉菜胶钠、海盐和透明质酸钠。实施方案17是实施方案16的组合物,其中组合物包含0.001重量/重量%至5重量/重量%的糖类同分异构体、0.001重量/重量%至5重量/重量%的角叉菜胶钠、0.0001重量/重量%至5重量/重量%的海盐和0.0001重量/重量%至1重量/重量%的透明质酸钠。实施方案18是实施方案16至17中任一项的组合物,其中组合物包含一定量的糖类同分异构体、角叉菜胶钠和海盐,它们有效减少细纹和皱纹的出现、滋润皮肤、促进水合、强化和修复皮肤、减少炎症和发红、减少氧化剂、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑、改善皮肤屏障功能、和/或紧致和调理皮肤。实施方案19是实施方案16至18中任一项的组合物,其中组合物包含有效量的透明质酸钠,以增加皮肤湿润度、改善皮肤屏障功能、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑和/或紧致和调理皮肤。实施方案20是实施方案16至19中任一项的组合物,其中组合物包含有效量的糖类同分异构体,以调理和滋润皮肤、减少TNF-α产生、增加皮肤电导和/或增加抗氧化能力;和/或有效量的角叉菜胶钠和海盐,以促进皮肤水合、强化和修复皮肤、增加表皮和真皮的透明质酸的产生、和/或增加角质层和表皮的神经酰胺的产生。实施方案21是实施方案16至20中任一项的组合物,其中组合物包含水。实施方案22是实施方案21的组合物,其中组合物包含75重量/重量%至95重量/重量%的水。实施方案23是实施方案16至22中任一项的组合物,其中组合物包含甘油、EDTA二钠、二苯甲酮-4、丁二醇、和三乙醇胺。实施方案24是实施方案23的组合物,其中组合物包含0.5重量/重量%至8重量/重量%的甘油、0.005重量/重量%至1重量/重量%的EDTA二钠、0.005重量/重量%至1重量/重量%的二苯甲酮-4、1重量/重量%至10重量/重量%的丁二醇和0.01重量/重量%至1重量/重量%的三乙醇胺。实施方案25是实施方案16至24中任一项的组合物,其中组合物包含双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷和黄原胶。实施方案26是实施方案25的组合物,其中组合物包含0.01重量/重量%至3重量/重量%的双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷和0.01重量/重量%至1重量/重量%的黄原胶。实施方案27是实施方案16至26中任一项的组合物,其中组合物包含c-异硬脂醇。实施方案28是实施方案27的组合物,其中组合物包含0.01重量/重量%至5重量/重量%的c-异硬脂醇。实施方案29是实施方案16至28中任一项的组合物,其中组合物包含二异硬脂醇苹果酸酯。实施方案30是实施方案29的组合物,其中组合物包含1重量/重量%至10重量/重量%的二异硬脂醇苹果酸酯。
“局部施用”是指施用或涂敷组合物到嘴唇或角质组织的表面上。“局部皮肤用组合物”包括适合在皮肤和/或角质组织局部施用的组合物。这类组合物一般为皮肤病学上可接受的,这是因为当施用到皮肤和/或角质组织时,其不具有异常毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等。本发明的局部护肤用组合物可以具有选定的黏度,以避免施用到皮肤和/或角质组织后明显的滴落或淤积。
“角质组织”包括配置作为哺乳动物最外保护层的含有角质的层,并且包括但不限于嘴唇、皮肤、毛发和指甲。
将术语“约”或“大约”定义为如本领域普通技术人员所理解的接近于。在一个非限制性实施方案中,该术语定义为10%以内,优选5%以内,更优选1%以内,最优选0.5%以内。
术语“基本上”及其变体是指10%以内、5%以内、1%以内、或0.5%以内的范围。
术语“抑制”或“减少”包含为了达到期望结果的任何可测量的减少或完全的抑制。术语“促进”或“增加”包含为了达到期望结果的任何可测量的增加,例如蛋白质或分子(举例来说,基质蛋白,例如纤连蛋白、层粘连蛋白、胶原蛋白或弹性蛋白,或者分子,例如透明质酸)的可测量的增加。
如本说明书和/或权利要求所使用的术语,术语“有效的”表示足以实现期望的、预期的或想要的结果。
当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”、“包括”、“含有”或“具有”或这些术语的任何变体一起使用时,要素前面不使用数量词可以表示“一个”,但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。
如本说明书和权利要求所使用的,术语“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性的或开放式的,并且不排除另外的、未列举的元素或方法步骤。
使用的组合物和方法可以“包含”本说明书通篇所公开的成分或步骤的任何、“主要由其组成”或“由其组成”。关于短语“基本上由其组成”,本发明组合物和方法的基本和新颖性质是能够减少细纹和皱纹的出现、滋润皮肤、促进水合、强化和修复皮肤、紧致和调理肌肤、改善皮肤屏障功能、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑。
通过下面的详细描述,本发明的其他目的、特征和优点会变得明显。然而,应理解详细的描述和实施例在表明本发明的具体实施方案时仅以举例说明的方式给出。另外,期望通过该详细描述,本发明的精神和范围内的变化和修改对于本领域技术人员会变得明显。
附图说明
以下附图形成本说明书的一部分,并被包含以进一步证实本发明的特定方面。通过参照这些附图的一个或多于一个并结合本文所提供的具体实施方案的详细说明可以更好地理解本发明。
图1A是第9天在未经处理的对照的人皮肤外植体中透明质酸(深色)的组织学视图。
图1B是经角叉菜胶钠和海盐处理的第9天人皮肤外植体中透明质酸(深色)的组织学视图。
图2是显示与未经处理的外植体相比,角叉菜胶钠和海盐对表皮和真皮中透明质酸合成的影响的图表。
图3A是第9天在未经处理的对照的人皮肤外植体中神经酰胺(深色)的组织学视图。
图3B是经角叉菜胶钠和海盐处理的第9天人皮肤外植体中神经酰胺(深色)的组织学视图。
图4是显示与未经处理的外植体相比,角叉菜胶钠和海盐对角质层和表皮中神经酰胺合成的影响的图表。
具体实施方式
如上所述,本发明提供了与当前化妆品相关的问题的解决方案。解决方案的前提是使用各种成分的组合以减少细纹和皱纹的出现、滋润皮肤、促进水合、强化和修复皮肤、减少炎症和发红、减少氧化剂、抵御污染、改善皮肤屏障功能、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑、增加角质形成细胞的丝聚合蛋白和闭合蛋白的产生、减少TNF-α的产生、增加皮肤电导、增加抗氧化能力、增加表皮和真皮的透明质酸的产生、增加角质层和表皮的神经酰胺的产生、和/或紧致和调理的皮肤。糖类同分异构体(浮游生物提取物)、角叉菜胶钠、海盐和透明质酸钠的组合可用于制造局部皮肤用组合物。
以下子部分更详细地描述本发明的非限制性方面。
本发明的具体组合物被设计为用作局部用组合物。该组合物依赖于糖类同分异构体、角叉菜胶钠、海盐和透明质酸钠中的任何一种、任何组合或全部的独特组合。这些组合可用于制造局部皮肤用组合物以减少细纹和皱纹的出现、使皮肤湿润、促进水合、强化和修复皮肤、减少氧化剂、抵御污染、改善皮肤屏障功能、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑性、和/或紧致和调理皮肤。这些组合物的非限制性实例提供于下面实施例3的表3至表9中。
本文公开的一些组合物可应用于皮肤并留在皮肤上一段时间(例如,至少1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、或60分钟或长于60分钟)。之后,如果需要的话,该组合物可从皮肤上冲洗掉或揭掉。本文公开的一些组合物可以施用于皮肤并立即从皮肤上冲洗掉。本文公开的一些组合物可以施用于皮肤并至少部分地被皮肤吸收。
在以下部分中描述本发明的这些和其他非限制性方面。
A.活性成分
本发明的前提是确定活性成分,即糖类同分异构体、角叉菜胶钠、透明质酸钠和海盐中的一种或多于一种的组合可用于减少细纹和皱纹的出现。
糖类同分异构体是由称为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)并属于海洋浮游生物家族的微生物合成的胞外多糖。在一些例子中,这种成分是可商购的,例如来自Barnet,其以商品名Benoiderm提供糖类同分异构体。已经确定了该成分可以用于增加丝聚合蛋白的产生、增加皮肤水分、提高闭合蛋白的产生、抑制TNFα产生并减少氧化剂。
角叉菜胶钠是角叉菜胶的钠盐,是从红藻科(Rhodophyceae)的杉藻科(Gigartinaceae)或红翎菜科(Solieriaceae)的各种成员中提取的多糖。海盐是由海水蒸发产生的盐,而不是从沉积物中提取的。已经确定海盐和角叉菜胶钠的组合可用于增加在皮肤中产生透明质酸和神经酰胺。在一些例子中,海盐可与角叉菜胶钠一起商购获得。在一些例子中,该成分可商购获得,例如来自Barnet,其以商品名AESTHIGELTM提供角叉菜胶钠和海盐的组合。
透明质酸钠是透明质酸的钠盐,是在包括***在内的各种组织中天然存在的化合物。在一些例子中,透明质酸钠可以以粉末形式商购,例如以商品名溶液从Tri-K Industries商购,并且已经显示出增加皮肤湿润度、改善皮肤屏障功能、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、并增加皮肤润滑(Solution Presentation,Tri-KIndustries,Inc.,2016)。
这些成分的组合可以以不同的产品形式使用以处理各种皮肤状况。作为非限制性实例,成分的组合可以配制成乳液(例如,水包油、油包水)、凝胶、精华、凝胶乳液、凝胶精华、化妆水、面膜、磨砂膏、洗液、乳霜或润肤霜。
本文描述的提取物可以是通过本领域已知的提取方法及其组合获得的提取物。提取方法的非限制性实例包括使用液-液萃取、固相萃取、水溶液萃取、乙酸乙酯提取、醇提取、丙酮提取、油提取、超临界二氧化碳提取、加热提取、压力提取、压降提取、超声提取等。提取物可以是液体、固体、干燥液体、重悬固体等。
B.成分的量
预望本发明的组合物可以包含任意量的本说明书所讨论的成分。该组合物还可包含任意数目的本说明书全文中所描述的附加成分(例如,颜料或附加的化妆品或药物成分)的组合。在该组合物中任意成分的浓度可以改变。例如,在非限制性实施方案中,组合物在其最终形式中可以包含以下量的本说明书和权利要求通篇所提及的至少一种成分、主要由或由以下量的本说明书和权利要求通篇所提及的至少一种成分组成:例如,至少约0.0001%、0.0002%、0.0003%、0.0004%、0.0005%、0.0006%、0.0007%、0.0008%、0.0009%、0.0010%、0.0011%、0.0012%、0.0013%、0.0014%、0.0015%、0.0016%、0.0017%、0.0018%、0.0019%、0.0020%、0.0021%、0.0022%、0.0023%、0.0024%、0.0025%、0.0026%、0.0027%、0.0028%、0.0029%、0.0030%、0.0031%、0.0032%、0.0033%、0.0034%、0.0035%、0.0036%、0.0037%、0.0038%、0.0039%、0.0040%、0.0041%、0.0042%、0.0043%、0.0044%、0.0045%、0.0046%、0.0047%、0.0048%、0.0049%、0.0050%、0.0051%、0.0052%、0.0053%、0.0054%、0.0055%、0.0056%、0.0057%、0.0058%、0.0059%、0.0060%、0.0061%、0.0062%、0.0063%、0.0064%、0.0065%、0.0066%、0.0067%、0.0068%、0.0069%、0.0070%、0.0071%、0.0072%、0.0073%、0.0074%、0.0075%、0.0076%、0.0077%、0.0078%、0.0079%、0.0080%、0.0081%、0.0082%、0.0083%、0.0084%、0.0085%、0.0086%、0.0087%、0.0088%、0.0089%、0.0090%、0.0091%、0.0092%、0.0093%、0.0094%、0.0095%、0.0096%、0.0097%、0.0098%、0.0099%、0.0100%、0.0200%、0.0250%、0.0275%、0.0300%、0.0325%、0.0350%、0.0375%、0.0400%、0.0425%、0.0450%、0.0475%、0.0500%、0.0525%、0.0550%、0.0575%、0.0600%、0.0625%、0.0650%、0.0675%、0.0700%、0.0725%、0.0750%、0.0775%、0.0800%、0.0825%、0.0850%、0.0875%、0.0900%、0.0925%、0.0950%、0.0975%、0.1000%、0.1250%、0.1500%、0.1750%、0.2000%、0.2250%、0.2500%、0.2750%、0.3000%、0.3250%、0.3500%、0.3750%、0.4000%、0.4250%、0.4500%、0.4750%、0.5000%、0.5250%、0.0550%、0.5750%、0.6000%、0.6250%、0.6500%、0.6750%、0.7000%、0.7250%、0.7500%、0.7750%、0.8000%、0.8250%、0.8500%、0.8750%、0.9000%、0.9250%、0.9500%、0.9750%、1.0%、1.1%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、2.0%、2.1%、2.2%、2.3%、2.4%、2.5%、2.6%、2.7%、2.8%、2.9%、3.0%、3.1%、3.2%、3.3%、3.4%、3.5%、3.6%、3.7%、3.8%、3.9%、4.0%、4.1%、4.2%、4.3%、4.4%、4.5%、4.6%、4.7%、4.8%、4.9%、5.0%、5.1%、5.2%、5.3%、5.4%、5.5%、5.6%、5.7%、5.8%、5.9%、6.0%、6.1%、6.2%、6.3%、6.4%、6.5%、6.6%、6.7%、6.8%、6.9%、7.0%、7.1%、7.2%、7.3%、7.4%、7.5%、7.6%、7.7%、7.8%、7.9%、8.0%、8.1%、8.2%、8.3%、8.4%、8.5%、8.6%、8.7%、8.8%、8.9%、9.0%、9.1%、9.2%、9.3%、9.4%、9.5%、9.6%、9.7%、9.8%、9.9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或99%或其中可得到的任何范围。在非限制性方面,该百分比可以按整个组合物的重量或体积进行计算。本领域普通技术人员会理解,给定组合物中的浓度可以根据成分的添加、替换和/或减少而改变。
C.载剂
本发明的组合物可以包括所有类型的载剂和载体,或并入到所有类型的载剂和载体中。载剂或载体可以是药学上或皮肤病学上可接受的载剂或载体。载剂或载体的非限制性实例包括水、甘油、醇、油、含硅化合物、硅酮化合物和蜡。变化方案和其他合适的载剂对于熟练的技术人员是明显的,并且适用于本发明。在一些方面,化合物、成分和试剂的浓度和组合以这样的方式进行选择,以使得组合物是化学相容的并且不形成从最终产品中沉淀出来的复合物。
D.结构
本发明的组合物可以被构建或配制为多种不同形式。非限制性实例包括乳液(例如,油包水、水包油包水、水包油、水包硅酮、硅酮包水、油包水包油、硅酮包水包油的乳液)、乳霜、化妆水、溶液(水溶液或者水-醇溶液)、无水基底(例如口红和粉末)、凝胶、面膜、磨砂膏、润肤霜、去角质膏和软膏。变体和其他的结构对于熟练技术人员是明显的,并且适用于本发明。
E.附加成分
除了发明人所公开成分的组合之外,组合物还可以包含附加成分,例如化妆品成分和药物有效成分。这些附加成分的非限制性实例在以下子部分中进行描述。
1、化妆品成分
CTFA国际化妆品成分词典和手册(2004和2008)描述了多种可以在本发明的情况下使用的非限制性化妆品成分。这些成分种类的实例包括:芳香剂(人造的和天然的,例如葡萄糖酸、苯氧乙醇和三乙醇胺)、染料和着色成分(例如蓝色1号、蓝色1号色淀、红色40号、二氧化钛、D&C蓝色4号、D&C绿色5号、D&C橙色4号、D&C红色17号、D&C红色33号、D&C紫色2号、D&C黄色10号和D&C黄色11号)、香料/芳香剂(例如,甜菊叶(Stevia rebaudiana)提取物,以及薄荷醇)、吸附剂、润滑剂、溶剂、保湿剂(包括例如润肤剂、湿润剂、成膜剂、闭塞剂和影响皮肤天然保湿机制的试剂)、拒水剂、UV吸收剂(物理和化学吸收剂,例如对氨基苯甲酸(“PABA”)和相应的PABA衍生物、二氧化钛、氧化锌等)、精油、维生素(例如A、B、C、D、E和K)、微量金属(例如锌、钙和硒)、抗刺激物(例如类固醇和非固醇类抗炎剂)、植物提取物(例如芦荟(Aloe vera)、柑橘、黄瓜提取物、银杏(Ginkgo biloba)、人参和迷迭香)、抗菌剂、抗氧化剂(例如BHT和生育酚)、螯合剂(例如乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸四钠)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、pH调节剂(例如氢氧化钠和柠檬酸)、吸收剂(例如淀粉辛烯琥珀酸铝、高岭土、玉米淀粉、燕麦淀粉、环糊精、滑石和沸石)、皮肤漂白和光亮剂(例如氢醌和烟酰胺乳酸盐/酯)、湿润剂(例如山梨醇、脲、甲基葡糖醇聚醚-20、糖类同分异构体和甘露醇)、剥离剂、防水剂(例如氢氧化镁/铝硬脂酸盐)、皮肤调理剂(例如芦荟提取物、尿囊素、没药醇、神经酰胺、聚二甲基硅氧烷、透明质酸、生物糖胶-1、乙基己基甘油、戊二醇、氢化聚癸烯、辛基十二烷基油酸酯和甘草酸二钾)。这些附加成分中的一些的非限制性实例在以下子部分中提供。
a.UV吸收剂和/或反射剂
可以与本发明的组合物组合使用的UV吸收剂和/或反射剂包括化学和物理防晒物质。可以使用的化学防晒物质的非限制性实例包括对氨基苯甲酸(PABA)、PABA酯(PABA甘油酯、PABA戊基二甲酯和PABA辛基二甲酯)、PABA丁酯、PABA乙酯、PABA乙基二羟基丙酯、二苯甲酮(氧苯酮、磺异苯酮、二苯甲酮和二苯甲酮-1到12)、肉桂酸盐/酯(甲氧基肉桂酸辛酯(桂皮酸酯)、对甲氧基肉桂酸异戊酯、辛基甲氧基肉桂酸酯、西诺沙酯、二异丙基肉桂酸甲酯、甲氧基肉桂酸DEA盐、二异丙基肉桂酸乙酯、甘油辛酸酯二甲氧基肉桂酸酯和甲氧基肉桂酸乙酯)、肉桂酸酯、水杨酸酯(均甲基水杨酸酯、水杨酸苄酯、乙二醇水杨酸酯、异丙基苄醇水杨酸酯等)、邻氨基苯甲酸盐/酯、尿刊酸乙酯、胡莫柳酯、水杨酸辛酯、二苯甲酰基甲烷衍生物(例如阿伏苯宗)、奥克立林、辛基三嗪酮、棓酰棓酸三油酸酯、氨基苯甲酸甘油酯、2-羟基-1,4-萘醌和二羟基丙酮、乙基己基三嗪酮、二辛基丁酰胺基三嗪酮、苯亚甲基丙二酸酯聚硅氧烷、对苯二亚甲基二莰酮磺酸、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯、双二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸酯、双苯并唑基苯基乙基己基亚氨基三嗪、甲酚曲唑三硅氧烷、亚甲基双苯并***基四甲基丁基苯酚和双乙基己基氧苯酚甲氧苯基三嗪、4-甲基苯亚甲基莰酮和4-甲氧基肉桂酸异戊酯。物理防晒物质的非限制性实例包括高岭土、滑石、凡士林和金属氧化物(例如二氧化钛和氧化锌)。
b.保湿剂
可以与本发明的组合物一起使用的保湿剂的非限制性实例包括氨基酸、硫酸软骨素、双甘油、赤藓糖醇、果糖、葡萄糖、甘油、甘油聚合物、乙二醇、1,2,6-己三醇、蜂蜜、透明质酸、氢化蜂蜜、氢化淀粉水解物、肌醇、乳糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、甘露醇、天然保湿因子、PEG-15丁二醇、聚甘油山梨醇、吡咯烷酮羧酸的盐、PCA钾、丙二醇、糖类同分异构体、葡糖醛酸钠、PCA钠、山梨醇、蔗糖、海藻糖、脲和木糖醇。
其他实例包括乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、丙氨酸、藻类提取物、翠叶芦荟(Aloe barbadensis)、翠叶芦荟提取物、翠叶芦荟凝胶、药蜀葵(Althea officinalis)提取物、杏(Prunus armeniaca)仁油、精氨酸、精氨酸天冬氨酸盐、山金车(Arnica montana)提取物、天冬氨酸、鳄梨(Persea gratissima)油、屏障鞘脂、丁醇、蜂蜡、山萮醇、β-谷甾醇、白桦(Betula alba)树皮提取物、琉璃苣(Borago officinalis)提取物、假叶树(Ruscusaculeatus)提取物、丁二醇、金盏花(Calendula officinalis)提取物、金盏花油、小烛树(Euphorbia cerifera)蜡、菜籽油、辛酸/癸酸甘油三酯、豆蔻(Elettaria cardamomum)油、巴西棕榈(Copernicia erifera)蜡、胡萝卜(Daucus carota sativa)油、蓖麻(ricinuscommunis)油、神经酰胺、地蜡、十六/十八醇聚醚-5、十六/十八醇聚醚-12、十六/十八醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇辛酸酯、十六醇聚醚-20、十六醇聚醚-24、鲸蜡醇乙酸酯、鲸蜡醇辛酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、洋甘菊(Anthemis nobilis)油、胆固醇、胆固醇酯、胆甾醇羟基硬脂酸酯、柠檬酸、鼠尾草(Salvia sclarea)油、可可(Theobroma cacao)脂、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、椰子(Cocos nucifera)油、胶原蛋白、胶原蛋白氨基酸、玉米(Zea mays)油、脂肪酸、癸基油酸酯、聚二甲基硅氧烷共聚醇、聚二甲基硅氧烷醇、己二酸二辛酯、琥珀酸二辛酯、二聚季戊四醇六辛酸酯/六癸酸酯、DNA、赤藓糖醇、乙氧基二乙二醇、亚油酸乙酯、蓝桉油、月见草(Oenothera biennis)油、脂肪酸、斑点老鹳草油、葡萄糖胺、葡糖谷氨酸酯、谷氨酸、甘油聚醚-26、甘油、丙三醇、二硬脂酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、月桂酸甘油酯、亚油酸甘油酯、豆蔻酸甘油酯、油酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯SE、甘氨酸、乙二醇硬酯酸酯、乙二醇硬酯酸酯SE、葡糖氨基葡聚糖、葡萄(Vitis vinifera)籽油、美洲榛(Corylusamericana)坚果油、欧洲榛(corylus avellana)坚果油、己二醇、透明质酸、杂交红花(Carthamus tinctorius)油、氢化蓖麻油、氢化椰油酸甘油酯、氢化椰子油、氢化羊毛脂、氢化卵磷脂、氢化棕榈油甘油酯、氢化棕榈仁油、氢化大豆油、氢化牛脂酸甘油酯、氢化植物油、水解胶原蛋白、水解弹性蛋白、水解葡糖氨基葡聚糖、水解角蛋白、水解大豆蛋白、羟基化羊毛脂、羟基脯氨酸、硬脂酸异鲸蜡醇酯、异鲸蜡醇硬脂酰基硬脂酸酯、油酸异癸酯、异硬脂酸异丙酯、羊毛脂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、异硬脂酰胺DEA、异硬脂酸、异硬脂醇乳酸酯、异硬脂醇新戊酸酯、茉莉(Jasminum officinale)油、霍霍巴(Buxus chinensis)油、巨藻、石栗(Aleurites moluccana)坚果油、乳酰胺MEA、羊毛脂醇聚醚-16、羊毛脂醇聚醚-10乙酸酯、羊毛脂、羊毛脂酸、羊毛脂醇、羊毛脂油、羊毛脂蜡、薰衣草(Lavandula angustifolia)油、卵磷脂、柠檬(Citrus medica limonum)油、亚油酸、亚麻酸、澳洲坚果油、麦芽糖醇、母菊(Chamomilla recutita)油、甲基葡糖倍半硬脂酸酯、甲基硅烷醇PCA、矿物油、貂油、被孢霉油、肉豆蔻醇乳酸酯、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻醇丙酸酯、新戊二醇二辛酸酯/二癸酸酯、辛基月桂醇、辛基月桂醇肉豆蔻酸酯、辛基月桂醇硬脂酰基硬脂酸酯、羟基硬脂酸辛酯、棕榈酸辛酯、水杨酸辛酯、硬脂酸辛酯、油酸、橄榄(Oleaeuropaea)油、橙(Citrus aurantium dulcis)油、棕榈(Elaeis guineensis)油、棕榈酸、泛硫乙胺、泛醇、泛醇基乙基醚、石蜡、PCA、桃(Prunus persica)仁油、花生(Arachishypogaea)油、PEG-8C12-18酯、PEG-15椰油烷基胺、PEG-150二硬脂酸酯、PEG-60甘油异硬脂酸酯、PEG-5甘油硬脂酸酯、PEG-30甘油硬脂酸酯、PEG-7氢化蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、PEG-40失水山梨醇全油酸酯、PEG-5大豆甾醇、PEG-10大豆甾醇、PEG-2硬脂酸酯、PEG-8硬脂酸酯、PEG-20硬脂酸酯、PEG-32硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-50硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-150硬脂酸酯、十五内酯、薄荷(mentha piperita)油、凡士林、磷脂、浮游生物提取物、多氨基酸多糖缩合物、聚甘油(3)二异硬脂酸酯、聚季铵盐(24)、聚山梨醇酯(20)、聚山梨醇酯(40)、聚山梨醇酯(60)、聚山梨醇酯(80)、聚山梨醇酯(85)、肉豆蔻酸钾、棕榈酸钾、丙二醇、丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇硬脂酸酯、丙二醇硬脂酸酯SE、PVP、吡哆醇二棕榈酸酯、视黄醇、视黄醇棕榈酸酯、米(Oryza sativa)糠油、RNA、迷迭香(Rosmarinus officinalis)油、玫瑰油、红花(Carthamus tinctorius)油、鼠尾草(Salviaofficinalis)油、檀香(Santalum album)油、丝氨酸、血清蛋白、芝麻(Sesamum indicum)油、牛油果(Butyrospermum pakii)脂、蚕丝粉、软骨素硫酸钠、透明质酸钠、乳酸钠、棕榈酸钠、PCA钠、聚谷氨酸钠、可溶胶原蛋白、失水山梨醇月桂酸酯、失水山梨醇油酸酯、失水山梨醇棕榈酸酯、失水山梨醇倍半油酸酯、失水山梨醇硬脂酸酯、山梨醇、大豆(Glycine soja)油、鞘脂、角鲨烷、角鲨烯、硬脂酰胺MEA-硬脂酸酯、硬脂酸、硬脂氧基聚二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷、硬脂醇、硬脂醇甘草亭酸酯、硬脂醇庚酸酯、硬脂醇硬脂酸酯、向日葵(Helianthus annuus)籽油、甜杏仁(Prunus amygdalus dulcis)油、合成蜂蜡、生育酚、乙酸生育酚酯、生育酚亚油酸酯、三山嵛精、十三烷醇新戊酸酯、十三烷醇硬脂酸酯、三乙醇胺、三硬脂酸精、脲、植物油、水、蜡、小麦(Triticum vulgare)胚芽油和依兰(Canangaodorata)油。
c.抗氧化剂
可以与本发明的组合物一起使用的抗氧化剂的非限制性实例包括乙酰半胱氨酸、抗坏血酸多肽、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、BHA、BHT、叔丁基氢醌、半胱氨酸、半胱氨酸HCl、二戊基氢醌、二叔丁基氢醌、二鲸蜡醇硫代二丙酸酯、二油基生育酚甲基硅烷醇、抗坏血酸硫酸酯二钠、二硬脂醇硫代二丙酸酯、双十三烷醇硫代二丙酸酯、没食子酸月桂酯、异抗坏血酸、抗坏血酸酯、阿魏酸乙酯、阿魏酸、没食子酸酯、氢醌、巯基乙酸异辛酯、曲酸、抗坏血酸镁、抗坏血酸磷酸酯镁、甲基硅烷醇抗坏血酸酯、天然植物抗氧化剂例如绿茶或葡萄籽提取物、去甲二氢愈创木酸、没食子酸辛酯、苯巯基乙酸、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾、亚硫酸钾、没食子酸丙酯、醌、迷迭香酸、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、超氧化物歧化酶、巯基乙酸钠、山梨醇缩糠醛、硫二甘醇、亚硫基二乙酰胺、硫二乙酸、巯基乙酸、硫代乳酸、硫代水杨酸、生育酚聚醚氧-5、生育酚聚醚-10、生育酚聚醚-12、生育酚聚醚-18、生育酚聚醚-50、生育酚、托可索伦、乙酸生育酚酯、生育酚亚油酸酯、生育酚烟酸酯、生育酚琥珀酸酯和三(壬基苯基)亚磷酸酯。
d.结构化剂
在其他非限制性方面,本发明的组合物可以包含结构化剂。在某些方面,结构化剂帮助给组合物提供流变学特征以有助于组合物的稳定性。在其他方面,结构化剂还可以起乳化剂或表面活性剂的作用。结构化剂的非限制性实例包括硬脂酸、棕榈酸、硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛醇、硬脂酸、棕榈酸、具有平均约1至约21个亚乙基氧单元的硬脂醇的聚乙二醇醚、具有平均约1至约5个亚乙基氧单元的鲸蜡醇的聚乙二醇醚及其混合物。
e.乳化剂
在本发明的某些方面,组合物不包含乳化剂。然而,在其他方面,组合物可以包含一种或更多种乳化剂。乳化剂可以降低相间表面张力并改善乳液的剂型和稳定性。乳化剂可以是非离子的、阳离子的、阴离子的和两性离子的乳化剂(参见美国专利第5011681号;第4421769号;第3755560号)。非限制性实例包括甘油酯、丙二醇酯、聚乙二醇的脂肪酸酯、聚丙二醇的脂肪酸酯、山梨醇的酯、失水山梨醇酐酯、羧酸共聚物、葡萄糖的酯和醚、乙氧基化的酯、乙氧基化的醇、磷酸烷基酯、聚氧乙烯脂肪醚磷酸酯、脂肪酸酰胺、酰基乳酸酯、皂、TEA硬脂酸酯、DEA油醇聚醚-3磷酸酯、聚乙二醇20失水山梨醇单月桂酸酯(聚山梨醇酯(20))、聚乙二醇5大豆甾醇、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-21、十六/十八醇聚醚-20、鲸蜡硬脂基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇、C12-13链烷醇聚醚-3、PPG-2甲基葡萄糖醚二硬脂酸酯、PPG-5-鲸蜡醇聚醚-20、双-PEG/PPG-20/20聚二甲基硅氧烷、鲸蜡醇聚醚-10、聚山梨醇酯80、鲸蜡醇磷酸酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、二乙醇胺鲸蜡醇磷酸酯、聚山梨醇酯60、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、花生醇、花生基葡萄糖苷及其混合物。
f.含有硅酮的化合物
在非限制性方面,含硅酮的化合物包括分子主链由交替的硅和氧原子与连接在硅原子上的侧基组成的聚合产物家族中的任何成员。通过改变-Si-O-链的长度、侧基和交联,硅酮可以合成为各种各样的材料。它们的稠度可以从液体到凝胶到固体改变。
可以在本发明的情况下使用的含硅酮的化合物包括在本说明书中所描述的或本领域普通技术人员已知的那些。非限制性实例包括硅油(例如挥发性和非挥发性油)、凝胶和固体。在一些方面,含硅酮的化合物包括硅油,例如聚有机硅氧烷。聚有机硅氧烷的非限制性实例包括聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、聚硅酮11、苯基聚三甲基硅氧烷、聚三甲基硅氨基二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷、或它们与其他任何给定比例的有机硅氧烷材料的混合物,以根据预期的应用(举例来说,施用至特定区域例如皮肤、毛发或眼睛)达到期望的稠度和应用特征。“挥发性硅油”包括具有低气化热的硅油,即通常低于约50卡每克硅油。挥发性硅油的非限制性实例包括:环聚二甲基硅氧烷,例如道康宁344流体、道康宁345流体、道康宁244流体和道康宁245流体、挥发硅7207(康涅狄格州丹伯里,UnionCarbide Corp.);低黏度聚二甲基硅氧烷,即黏度大约为50cst或更低的聚二甲基硅氧烷(举例来说,聚二甲基硅氧烷,例如道康宁200-0.5cst流体)。道康宁流体可以从密歇根州米德兰的Dow Corning Corporation购得。在CTFA化妆品成分词典的第三版中(通过引用并入),环聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷分别被描述为环状二甲基聚硅氧烷化合物和用三甲基硅氧基单元封端的完全甲基化的线性硅氧烷聚合物的混合物。可以在本发明的情况下使用的其他非限制性挥发性硅油包括从纽约州沃特福德的General Electric Co.,Silicone Products Div.和密歇根州艾德里安的SWS Silicones Div.of StaufferChemical Co.购得的那些。
g.去角质剂
去角质剂包括去除皮肤外表面上的死皮肤细胞的成分。这些试剂可以通过机械、化学和/或其他方式起作用。机械去角质剂的非限制性实例包括研磨剂,例如浮石、二氧化硅、布、纸、壳、珠、固体晶体、固体聚合物等。化学去角质剂的非限制性实例包括酸和酶去角质剂。可用作去角质剂的酸包括但不限于乙醇酸、乳酸、柠檬酸、α羟基酸、β羟基酸等。本领域技术人员已知的其他去角质剂也可考虑为用于本发明的范围内。
h.精油
精油包括来自药草、花朵、树木和其他植物的油。这类油一般以植物细胞间微小的液滴存在,并可以用本领域技术人员已知的若干方法进行提取(例如,蒸气蒸馏、花香提取(即使用脂肪提取)、浸渍、溶剂提取或机械压榨)。当这些类型的油暴露于空气时,其趋于挥发(即挥发性油)。因此,虽然许多精油是无色的,但是随着时间其被氧化并且颜色变得更深。精油不溶于水,但溶于醇、醚、固定油(植物的)和其他有机溶剂。在精油中发现的一般物理特征包括约160℃至240℃的沸点和约0.759至约1.096的密度。
精油一般通过油被发现的来源植物命名。例如,玫瑰油或薄荷油分别来自玫瑰或薄荷植物。可以在本发明的情况下使用的精油的非限制性实例包括芝麻油、澳洲坚果油、茶树油、月见草油、西班牙鼠尾草油、西班牙迷迭香油、芫荽油、百里香油、众香果油、玫瑰油、大茴香油、凤仙花油、香柠檬油、玫瑰木油、香柏油、甘菊油、鼠尾草油、香紫苏油、丁香油、柏木油、桉油、茴香油、海茴香油、乳香油、香叶油、姜油、葡萄柚油、茉莉油、杜松子油、薰衣草油、柠檬油、柠檬草油、梨莓油、橘子油、甘牛至油、没药油、苦橙花油、橙油、绿叶油、胡椒油、黑胡椒油、苦橙叶油、松油、奥图玫瑰油、迷迭香油、檀香油、绿薄荷油、甘松油、香根草油、冬青油、依兰依兰。还预期本领域技术人员已知的其他精油在本发明的情况下是有用的。
i.增稠剂
包括增稠剂或凝胶剂在内的增稠剂,包括可以增加组合物黏度的物质。增稠剂包括可以增加组合物黏度而基本上不改变组合物内活性成分功效的那些。增稠剂还可以增加本发明的组合物的稳定性。在本发明的某些方面,增稠剂包括氢化聚异丁烯、三羟基硬脂酸甘油酯、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、或其混合物。
可以在本发明的情况下使用的另外的增稠剂的非限制性实例包括羧酸聚合物、交联的聚丙烯酸酯聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、多糖和胶。羧酸聚合物的实例包括含有一种或多于一种衍生自丙烯酸的单体的交联化合物、经取代的丙烯酸和这些丙烯酸和经取代的丙烯酸的盐和酯,其中所述交联剂含有两个或更多个碳-碳双键,并衍生自多元醇(参见美国专利第5087445号;第4509949号;第2798053号;CTFA国际化妆品成分词典,第四版,1991,第12和80页)。可商购获得的羧酸聚合物的实例包括卡波姆,其为丙烯酸与蔗糖或季戊四醇的烯丙基醚交联的均聚物(例如,购自B.F.Goodrich的CARBOPOLTM900系列)。
交联的聚丙烯酸酯聚合物的非限制性实例包括阳离子型聚合物和非离子型聚合物。实例描述于美国专利第5100660号、第4849484号、第4835206号、第4628078号、第4599379号。
聚丙烯酰胺聚合物(包括非离子的聚丙烯酰胺聚合物,其包括经取代的支化的或未支化的聚合物)的非限制性实例包括聚丙烯酰胺、异构烷烃和月桂醇聚醚-7、丙烯酰胺和经取代的丙烯酰胺与丙烯酸和经取代的丙烯酸的多嵌段共聚物。
多糖的非限制性实例包括纤维素、羧甲基羟乙基纤维素、乙酸丙酸羧酸纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、微晶纤维素、纤维素硫酸钠及其混合物。其他实例为烷基取代的纤维素,其中纤维素聚合物的羟基被羟烷基化(优选地羟乙基化或羟丙基化)以形成羟烷基化的纤维素,其然后用C10-C30直链或支链烷基基团通过醚键进行进一步改性。一般这些聚合物为C10-C30直链或支链醇与羟烷基纤维素的醚。其他有用的多糖包括硬葡聚糖类,其包含每三个单元具有(1-6)连接的葡萄糖的(1-3)连接的葡萄糖单元的直链。
本发明可以使用的胶的非限制性实例包括***树胶、琼脂、藻胶、藻酸、藻酸铵、支链淀粉、藻酸钙、角叉菜胶钙、肉毒碱、角叉菜胶、糊精、明胶、结冷胶、瓜尔豆胶、瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵、锂蒙脱石、透明质酸、水合二氧化硅、羟丙基壳聚糖、羟丙基瓜尔胶、卡拉亚胶、巨藻、角豆胶、纳豆胶、藻酸钾、角叉菜胶钾、藻酸丙二醇酯、菌核胶、羧甲基葡聚糖钠、角叉菜胶钠、黄蓍胶、黄原胶及其混合物。
j.防腐剂
可以在本发明的情况下使用的防腐剂的非限制性实例包括季铵盐防腐剂(例如聚季铵盐-1和苄烷铵卤化物(例如苯扎氯铵(“BAC”)和苯扎溴铵))、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、苯氧乙醇、苄醇、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒或其组合。
2.药物成分
还预期药物活性成分对本发明的组合物是有用的。药物活性成分的非限制性实例包括抗粉刺剂、用于处理酒渣鼻的试剂、止痛剂、麻醉剂、***直肠的、抗组胺药、包括非甾族消炎药在内的消炎剂、抗生素、抗菌剂、抗病毒素、抗微生物剂、抗癌活性物、抗疥螨剂、灭虱剂、抗肿瘤药、防汗药、止痒剂、抗牛皮癣药、抗脂溢剂、生物活性蛋白质和多肽、烧伤处理剂、烧灼剂、脱色剂、脱毛剂、尿布疹处理剂、酶、毛发生长刺激剂、包括DFMO及其盐和类似物在内的毛发生长抑制剂、止血剂、角质分离剂、口疮处理剂、唇疱疹处理剂、牙科或牙周处理剂、光敏感活性物、皮肤保护剂/屏障剂、包括激素和皮质激素的类固醇、晒伤处理剂、遮光剂、经皮活性物、鼻活性物、***活性物、疣处理剂、创伤处理剂、创伤愈合剂等。
F.试剂盒
还预期用于本发明的一些方面的试剂盒。例如,本发明的组合物可以包括在试剂盒内。试剂盒可以包括容器。容器可以包括瓶子、金属管、层压管、塑料管、分配器、高压容器、阻隔性容器、包装、隔室、口红容器、压缩容器、能够保存化妆品组合物的化妆品盘或其他类型的容器,例如注射或吹塑成型的塑料容器,其中保存分散体或组合物或期望的瓶子、分配器或包装。试剂盒和/或容器在其表面上可包含标记。举例来说,标记可以是字词、短语、缩写、图片或符号。
容器可以分配预定量的组合物。在其他实施方案中,可以挤压容器(例如金属、层合体或塑料管)以分配期望量的组合物。组合物可以分配为喷雾、气溶胶、液体、流体或半固体。容器可以具有喷雾、抽吸或挤压机构。试剂盒还可以包含使用试剂盒组分以及使用任何包含于容器内的组合物的说明书。说明书可以包含如何施用、使用和保存组合物的说明。
实施例
列出以下实施例以说明本发明的优选的实施方案。本领域技术人员应理解,以下实施例中所公开的技术代表本发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术,并因此可以被认为构成其实践的优选模式。然而,根据本公开,本领域技术人员应理解,在不脱离本发明的精神和范围的情况下,在所公开的具体实施方案中可以做许多改变,并仍获得类似或相似的结果。
本文所公开和要求保护的所有组合物和方法可以根据本公开不需要不合适的实验即制成和实现。尽管本发明的组合物和方法已经按照优选实施方案进行了描述,但是对于本领域技术人员明显的是,可以对所述组合物和方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中实施变化,而不脱离本发明的概念、精神和范围。更具体地,明显地,化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂,同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。
实施例1
(所用材料)
表1中的活性成分用于获得下面提到的体外数据。
表1
成分 |
糖类同分异构体,由Barnet以商品名Benoiderm提供。 |
水和角叉菜胶钠和海盐,由Barnet以商品名AESTHIGEL<sup>TM</sup>提供。 |
透明质酸钠,由Tri-K Industries提供。 |
实施例2
(体外活性)
已经确定糖类同分异构体、角叉菜胶钠、透明质酸钠和海盐可以减少细纹和皱纹的出现、滋润皮肤、促进水合、强化和修复皮肤、减少氧化剂、抵御污染、和/或紧致和调理肌肤。结果的总结在表2中示出,用于确定成分性能的方法在下文提供。
表2
丝聚合蛋白的产生:测量由糖类同分异构体引起的角质形成细胞中丝聚合蛋白的产生的变化。丝聚合蛋白是皮肤中天然保湿因子(NMF)的前体。增加的NMF增加了皮肤的水分含量。确定了糖类同分异构体使角质形成细胞中丝聚合蛋白的产生增加了28%。
使用分析角质形成细胞裂解物中丝聚合蛋白浓度的生物测定法来测定经处理和未经处理的角质形成细胞中丝聚合蛋白的产生。作为非限制性实例,使用SIMONETM蛋白质免疫印迹方案进行生物测定。SIMONTM蛋白质免疫印迹生物测定使用定量的蛋白质免疫印迹免疫分析技术,该技术使用对丝聚合蛋白特异的抗体来定量检测测试样品中的丝聚合蛋白。对于每个样品,使正常的人表皮角质形成细胞(NHEK)在含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙的EPI-200–Mattek生长培养基中生长。处理之前,NHEK在37℃、5%CO2下在生长培养基中孵育过夜。然后将NHEK在生长培养基中与糖类同分异构体一起孵育24小时至36小时或在没有糖类同分异构体(阴性对照)的情况下孵育24小时至36小时。然后,洗涤NHEK,收集并储存在冰上或更冷的条件下,直到使用裂解缓冲液在冰上裂解并超声处理。裂解物在-80℃下存储直至在定量分析中使用。
裂解后,将细胞样品以蛋白质浓度归一化。然后加载归一化的样品和分子量标准物,并使用毛细管电泳在变性的蛋白质分离凝胶上运行。将凝胶中的蛋白质固定化并使用对丝聚合蛋白特异的第一抗体进行免疫学检测。然后,用结合第一抗体的酶联检测抗体对固定化的蛋白质进行免疫检测。然后,将化学发光底物溶液加入到固定化的蛋白质中,以允许与固定化中结合的丝聚合蛋白的量成比例的化学发光显影。在特定的时间停止化学发光显影,然后测量化学发光信号的强度,并与阳性和阴性对照进行比较。
皮肤的保湿/水合:使用皮肤水分/水合分析,糖类同分异构体已经显示出增加皮肤水分的临床测量值。该分析采用Nova Dermal Phase Meter确定阻抗测量值。阻抗计测量皮肤水分含量的变化。皮肤外层具有不同的电性能。当皮肤干燥时,其导电很差。当其变得更加含水时,产生增加的导电性。因此,皮肤阻抗(与导电性有关)的变化可以用于评价皮肤水合的变化。确定了糖类同分异构体使电导增加了79%,从而显示出提高的水分/水合。
对于该分析,使用经处理的和未经处理的人造皮肤等价物。根据仪器说明针对每个测试日校准Nova Dermal Phase Meter。出于比较的目的,对温度和相对湿度进行标记。如下进行阻抗评估:测量前,将样品在具有确定湿度(例如30%至50%)和温度(例如68℃至72℃)的室内进行平衡。对每个样品取阻抗读数,记录并取平均值。阻抗计使用T5设定,其在施用到样品后每五秒对阻抗值进行平均。变化以统计方差和显著性进行报告。
闭合蛋白的产生:闭合蛋白是对于紧密连结的形成和皮肤水分屏障功能重要的蛋白质。确定了糖类同分异构体使角质形成细胞中闭合蛋白的产生增加了170%。
使用分析角质形成细胞裂解物中闭合蛋白浓度的生物测定法来测定经处理和未经处理的角质形成细胞中闭合蛋白的产生。作为非限制性实例,使用SIMONTM蛋白质免疫印迹方案进行生物测定。生物测定法采用定量蛋白质免疫印迹测定技术,使用闭合蛋白特异性抗体定量检测测试样品中的闭合蛋白。对于样品,来自Life Technologies(C-005-5C)的成年人表皮角质形成细胞(HEKa)在37℃和5%CO2下,在含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙、并补充有来自LifeTechnologies(S-101-5)的角质形成细胞生长补充剂(HKGS)的生长培养基中生长24小时。然后将HEKa在生长培养基中与糖类同分异构体一起孵育24小时至48小时,无糖类同分异构体作为阴性对照,或用1mM CaCl2作为阳性对照。然后,洗涤NEKa,收集并储存在冰上或更冷的条件下,直到使用裂解缓冲液在冰上裂解并超声处理。测定样品的蛋白质浓度并用于使样品归一化。将细胞裂解物储存在-80℃直至用于生物测定。
裂解细胞样品并以蛋白质浓度进行归一化。然后加载归一化的样品和分子量标准物,并使用毛细管电泳在变性的蛋白质分离凝胶上运行。将凝胶中的蛋白质固定化并使用对闭合蛋白特异的第一抗体进行免疫学检测。然后,用结合第一抗体的酶联检测抗体对固定化的蛋白质进行免疫检测。然后,将化学发光底物溶液加入到固定化的蛋白质中,以允许与固定化中结合的闭合蛋白的量成比例的化学发光显影。在特定的时间停止化学发光显影,测量化学发光信号的强度,并与阳性和阴性对照进行比较。
肿瘤坏死因子α(TNF-α)的抑制:糖类同分异构体已经显示出对角质形成细胞中TNF-α的产生的抑制。TNF-α是TNF超家族的原型配体。其是在炎症中起重要作用的多效细胞因子。其表达的增加与促炎活性上调有关。用于分析糖类同分异构体效应的生物测定法使用了反映TNF-α的存在和细胞活力的分光光度测量。确定了糖类同分异构体使角质形成细胞中TNF-α的产生被抑制了88%。
在37℃下5%的CO2中在EpiLife标准生长培养基(Cascade Biologics)中培养的半汇合正常人类成年角质形成细胞(Cascade Biologics)用佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA,10ng/ml,Sigma Chemical,#P1585-1MG)和糖类同分异构体(经处理的样品)处理6小时或用PMA处理6小时且无其他处理(未经处理的样品)。PMA导致TNF-α分泌明显的增加,所述TNF-α分泌在处理6小时后达到峰值。孵育之后,收集细胞培养基,并使用来自R&DSystems(#DTA00C)的夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)定量TNF-α的分泌量。
简而言之,ELISA测定采用定量的夹心酶免疫分析技术,因此将对TNF-α特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。标准品以及经处理和未经处理的样品被移液到微孔板中,以使得任何存在的TNF-α能够由固定化的抗体结合。洗掉所有未结合的物质后,添加对TNF-α特异的酶联多克隆抗体到孔中。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后,添加底物溶液到孔中,使得颜色能够与最初步骤中结合的TNF-α的量成比例的显现。在特定的时间停止颜色显现,颜色的强度使用酶标仪在450nm处测量。
抗氧化能力:糖类同分异构体已显示出具有抗氧化能力。生物体的抗氧化***包括酶,例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶;大分子,例如白蛋白、血浆铜蓝蛋白和铁蛋白;和大量的小分子,包括抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素、还原型谷胱甘肽、尿酸和胆红素。內源的和源自食物的抗氧化剂的总数表示细胞外液的总抗氧化能力。所有不同抗氧化剂的协作提供比单独的任何单个化合物更强的对抗反应性氧或氮自由基侵袭的保护。因此,总的抗氧化能力与测量单独组分获得的抗氧化能力相比可以给出更相关的生物信息,因为其归因于血浆和体液中存在的所有抗氧化剂的累积效应。确定糖类同分异构体具有Trolox的36%的抗氧化能力,这表明糖类同分异构体能够还原氧化剂。
通过氧自由基吸收能力(ORAC)分析来确定抗氧化能力。该分析对抑制氧化剂如已知导致损害细胞(例如皮肤细胞)的氧自由基的活动的程度及所用时间进行定量。对照和糖类同分异构体的ORAC值由Zen-Bio ORAC抗氧化剂测定试剂盒(#AOX-2)来确定。简而言之,该分析测定由于AAPH(2,2'-偶氮双-2-甲基丙脒二盐酸盐)的分解而形成的过氧化自由基形成的荧光素荧光随时间的损失。Trolox(一种水溶性维生素E类似物)以剂量依赖的方式作为抑制荧光素衰减的阳性对照。
透明质酸的产生:测试在水中含1.5%的AESTHIGELTM(角叉菜胶钠和海盐)(即0.00975%的干物质)。从50岁女性的腹部整形术中取出直径约11mm的人皮肤外植体。将外植体在37℃下在补充有5%CO2的潮湿气氛中的存活外植体培养基中培养。在D0、D2、D3、D6、D8和D9天,通过使用小刮铲每个外植体(n=3)局部施用2mg产物进行处理。对照外植体(n=3)除了更新存活外植体培养基外不接受任何处理。将存活培养基更新一半(1mL)至J3、J6和J8。在D9,取每种条件的三个外植体并切成两半。将半个外植体固定在缓冲的***中,另一半在-80℃下冷冻。
在普通Bouin中固定48小时和在***中固定24小时后,将样品干燥并使用自动组织处理器Leica TP 1020浸泡在石蜡中。用切片机(Minot型Leica RM2125)获取5微米的切片,并将切片固定在SuperfrostTM组织学载玻片上。使用Leica Orthoplan或Leica DMLB显微镜通过光学显微镜检查进行显微镜观察。拍摄的图像是使用Olympus DP72相机和Cell^D软件制作的。在用Masson's trichrome Goldner变体染色的石蜡切片上检查一般形态。用稀释至1/100的抗透明质酸生物素化蛋白(HABP)(Seikagaku编号400763-1A),采用放大器***生物素/链霉亲和素(Vector,Vectastain PK-7200)将透明质酸在室温下染色1小时。
参见图1A至图1B中,描绘了在D9的外植体组织的组织学图像,其中左侧的未经处理的对照(图1A)和右侧的经角叉菜胶钠和海盐处理的样品(图1B)显示出透明质酸合成的增加(深色染色)。参见图2,显示了与未经处理的外植体相比,角叉菜胶钠和海盐对表皮和真皮中透明质酸合成的影响。学生t检验用于确定两个批次具有统计学显著性的概率。如果p<0.1(#),则两组之间的差异是显著的,两个批次显著不同的概率为90%,或如果p<0.05(*),两个批次显著不同的概率为95%,或如果p<0.01(**),两个批次显著不同的概率为99%。未经处理的外植体中透明质酸占表皮总表面积的11.8%,与之相比,用角叉菜胶钠和海盐处理的外植体中透明质酸占表皮表面积的36.6%。未经处理的外植体中透明质酸占真皮总表面积的7.1%,与之相比,用角叉菜胶钠和海盐处理的外植体中透明质酸占真皮表面积的15.9%。在这项统计学上显著的比较研究中(p<0.01),角叉菜胶钠和海盐因此显著增加了透明质酸的合成,其中在表皮中增加了210%,在真皮中增加了124%。
神经酰胺的产生:用稀释至1/50的小鼠单克隆抗体抗神经酰胺(Enzo LifeScience,编号ALX-804-196克隆MID15B4),采用放大器***生物素/链霉亲和素将神经酰胺在室温下标记2小时。进行视频显微镜观察以观察神经酰胺(粉红色染色)。
参见图3A至图3B中,描绘了在D9的外植体组织的组织学图像,其中左侧的未经处理的对照(图3A)和右侧的经角叉菜胶钠和海盐处理的样品(图3B)显示出神经酰胺合成增加(深色染色)。参见图4,显示了与未经处理的外植体相比,角叉菜胶钠和海盐对角质层和表皮中神经酰胺合成的影响。学生t检验用于确定两个批次具有统计学显著性的概率。如果p<0.1(#),则两组之间的差异是显著的,两个批次显著不同的概率为90%,或如果p<0.05(*),两个批次显著不同的概率为95%,或如果p<0.01(**),两个批次显著不同的概率为99%。未经处理的外植体中神经酰胺占角质层总表面积的13.7%,与之相比,用角叉菜胶钠和海盐处理的外植体中神经酰胺占角质层表面积的20.7%。未经处理的外植体中神经酰胺占表皮总表面积的31.4%,与之相比,用角叉菜胶钠和海盐处理的外植体中神经酰胺占表皮表面积的48.8%。在这项统计学上显著的比较研究中(p<0.01),角叉菜胶钠和海盐因此显著增加了神经酰胺的合成,其中在角质层中增加了51%,在表皮中增加了55%。
实施例3
(示例性制剂)
具有本文公开的成分的制剂被制备为局部皮肤用组合物。表3中的制剂是作为精华制备的局部皮肤用组合物的一个实施例。
表3^
^制剂可以通过在70℃至75℃加热下在烧杯中混合所述成分直到均匀来制备。然后,制剂可以冷却到标准室温(20℃至25℃)。另外,如果需要,例如可以添加另外的成分来改变对皮肤提供益处的组合物或成分的流变特性。
1PemulenTM TR-2包含乙酸乙酯和环己烷。
Ultrez 10包含卡波姆。
2000包含3-碘-2-丙炔基丁基氨基甲酸酯和环糊精衍生物。
68包含1,2-己二醇和辛酰乙二醇。
Bio-1PF包含透明质酸钠。
*可以添加赋形剂,例如以改变组合物的流变性能。或者,水的量可以改变,只要组合物中水的量为至少40重量/重量%,优选60重量/重量%至98重量/重量%。
表4中的制剂是作为精华制备的局部皮肤用组合物的另一个实施例。
表4^
^制剂可以通过在70℃至75℃加热下在烧杯中混合所述成分直到均匀来制备。然后,制剂可以冷却到标准室温(20℃至25℃)。另外,如果需要,例如可以添加另外的成分来改变对皮肤提供益处的组合物或成分的流变特性。
1PemulenTM TR-2包含乙酸乙酯和环己烷。
Ultrez 10包含卡波姆。
2000包含3-碘-2-丙炔基丁基氨基甲酸酯和环糊精衍生物。
Bio-1PF包含透明质酸钠。
*可以添加赋形剂,例如以改变组合物的流变性能。或者,水的量可以改变,只要组合物中水的量为至少40重量/重量%,优选60重量/重量%至98重量/重量%。
表5中的制剂是作为精华制备的局部皮肤用组合物的另一个实施例。
表5^
^制剂可以通过在70℃至75℃加热下在烧杯中混合所述成分直到均匀来制备。然后,制剂可以冷却到标准室温(20℃至25℃)。另外,如果需要,例如可以添加另外的成分来改变对皮肤提供益处的组合物或成分的流变特性。
Ultrez 10包含卡波姆。
2000包含3-碘-2-丙炔基丁基氨基甲酸酯和环糊精衍生物。
68包含1,2-己二醇和辛酰乙二醇。
Bio-1PF包含透明质酸钠。
5Seric OMC包含云母、甲氧基肉桂酸乙基己酯、氢化卵磷脂和丁二醇。
*可以添加赋形剂,例如以改变组合物的流变性能。或者,水的量可以改变,只要组合物中水的量为至少40重量/重量%,优选60重量/重量%至98重量/重量%。
表6中的制剂是作为精华制备的局部皮肤用组合物的另一个实施例。
表6^
成分 | 浓度%(按重量计) |
水 | 93 |
卡波姆 | 0.2 |
EDTA二钠 | 0.1 |
二苯甲酮-4 | 0.1 |
甘油 | 2.0 |
丁二醇 | 2.5 |
羟丙基环糊精 | 0.1 |
碘代丙炔基丁基氨基甲酸酯 | 0.01 |
辛酰乙二醇 | 0.3 |
透明质酸钠 | 0.001 |
苯甲酸钠 | 0.0001 |
糖类同分异构体 | 0.01 |
苯氧乙醇 | 0.4 |
角叉菜胶钠 | 0.01 |
海盐 | 0.0008 |
双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷 | 0.2 |
黄原胶 | 0.2 |
Seric OMC<sup>2</sup> | 0.3 |
三乙醇胺 | 0.3 |
赋形剂* | 适量 |
^制剂可以通过在70℃至75℃加热下在烧杯中混合所述成分直到均匀来制备。然后,制剂可以冷却到标准室温(20℃至25℃)。另外,如果需要,例如可以添加另外的成分来改变对皮肤提供益处的组合物或成分的流变特性。
2Seric OMC包含云母、甲氧基肉桂酸乙基己酯、氢化卵磷脂和丁二醇。
*可以添加赋形剂,例如以改变组合物的流变性能。或者,水的量可以改变,只要组合物中水的量为至少40重量/重量%,优选60重量/重量%至98重量/重量%。
表7中的制剂是作为精华制备的局部皮肤用组合物的另一个实施例。
表7^
^制剂可以通过在70℃至75℃加热下在烧杯中混合所述成分直到均匀来制备。然后,制剂可以冷却到标准室温(20℃至25℃)。另外,如果需要,例如可以添加另外的成分来改变对皮肤提供益处的组合物或成分的流变特性。
1PemulenTM TR-2包含乙酸乙酯和环己烷。
Ultrez 10包含卡波姆。
2000包含3-碘-2-丙炔基丁基氨基甲酸酯和环糊精衍生物。
68包含1,2-己二醇和辛酰乙二醇。
Bio-1PF包含透明质酸钠。
*可以添加赋形剂,例如以改变组合物的流变性能。或者,水的量可以改变,只要组合物中水的量为至少40重量/重量%,优选60重量/重量%至95重量/重量%。
表8中的制剂是作为精华制备的局部皮肤用组合物的另一个实施例。
表8^
^制剂可以通过在70℃至75℃加热下在烧杯中混合所述成分直到均匀来制备。然后,制剂可以冷却到标准室温(20℃至25℃)。另外,如果需要,例如可以添加另外的成分来改变对皮肤提供益处的组合物或成分的流变特性。
1PemulenTM TR-2包含乙酸乙酯和环己烷。
Ultrez 10包含卡波姆。
2000包含3-碘-2-丙炔基丁基氨基甲酸酯和环糊精衍生物。
Bio-1PF包含透明质酸钠。
*可以添加赋形剂,例如以改变组合物的流变性能。或者,水的量可以改变,只要组合物中水的量为至少40重量/重量%,优选60重量/重量%至95重量/重量%。
表9中的制剂是作为眼用凝胶剂制备的局部皮肤用组合物的另一个实施例。
表9^
成分 | 浓度%(按重量计) |
水 | 88 |
丁二醇 | 5.0 |
甘油 | 4.1 |
羟基苯乙酮 | 0.5 |
戊二醇 | 0.4 |
三乙醇胺 | 0.4 |
丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物 | 0.4 |
丙二醇 | 0.4 |
丙烯酸甘油酯/丙烯酸共聚物 | 0.3 |
辛酰乙二醇 | 0.2 |
苯氧乙醇 | 0.1 |
二苯甲酮-4 | 0.1 |
乙基己基甘油 | 0.1 |
EDTA二钠 | 0.1 |
丙二醇 | 0.01 |
糖类同分异构体 | 0.01 |
角叉菜胶钠 | 0.01 |
透明质酸钠 | 0.01 |
海盐 | 0.001 |
赋形剂* | 适量 |
^制剂可以通过在70℃至75℃加热下在烧杯中混合所述成分直到均匀来制备。然后,制剂可以冷却到标准室温(20℃至25℃)。另外,如果需要,例如可以添加另外的成分来改变对皮肤提供益处的组合物或成分的流变特性。
*可以添加赋形剂,例如以改变组合物的流变性能。或者,水的量可以改变,只要组合物中水的量为至少40重量/重量%,优选60重量/重量%至95重量/重量%。
实施例4
(附加测定)
可以用于确定在本说明书全文和权利要求书中所公开的任意一种成分、或成分的任意组合、或具有所述成分组合的组合物的功效的测定,可以通过本领域普通技术人员已知的方法进行确定。以下是可以在本发明的情况中使用的非限制性测定。应认识到,可以使用其他测试程序,包括例如客观程序和主观程序。
透明质酸的产生:可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分的任一种组合或具有该组合的组合物导致的人真皮成纤维细胞中透明质酸(HA)产生的变化。HA是参与稳定基质结构的多糖,并且涉及向组织和细胞提供膨压。作为一个非限制性实例,可以使用来自R&D Systems(DY3614)的Hyaluronan DuoSet ELISA试剂盒来测定经处理和未经处理的成人真皮成纤维细胞(HDFa)中HA的产生。在该测定中,为了产生样品,在处理之前,将来自Cascade Biologics(C-13-5C)的半汇合HDFα细胞在37℃和10%的CO2下、在饥饿培养基(0.15%胎牛血清和1%青霉素链霉素的Dulbecco's Modified Eagle培养基)培养72小时。然后,将细胞用含有测试化合物、阳性对照(来自Sigma-Aldrich的佛波醇12-豆蔻酸酯13-乙酸酯(P1585)和来自Sigma-Aldrich的血小板衍生的生长因子(P3201))的新鲜饥饿培养基或无添加的新鲜饥饿培养基培养24小时。然后收集培养基并在-80℃下冷冻直至用于ELISA测定。
简而言之,该ELISA测定采用定量的夹心酶免疫分析技术,因此对HA特异的捕获抗体可以预先涂覆在微孔板上。标准品和来自经处理和未经处理的细胞的培养基被移液到微孔板中,以使得任何存在的HA能够由固定化的抗体结合。洗掉所有未结合的物质后,将对HA特异的酶联检测抗体添加到孔中。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后,添加底物溶液到孔中,使得颜色能够与最初步骤中结合的HA的量成比例的显现。在特定的时间停止颜色显现,颜色的强度可以使用酶标仪在450nm处测量。
弹性蛋白刺激测定:弹性蛋白是一种***蛋白,其在伸展或收缩后帮助皮肤恢复形状。弹性蛋白也是在需要储存机械能的位置使用的重要负载蛋白。弹性蛋白是由许多可溶性弹性蛋白原蛋白分子在由赖氨酰氧化酶催化的反应中连接而成。通过直接ELISA夹心法在培养的人成纤维细胞中监测弹性蛋白分泌和弹性蛋白纤维,并使用Meso ScaleDiscovery***SECTOR 2400成像***进行分析。
层粘连蛋白和纤连蛋白刺激测定:层粘连蛋白和纤连蛋白是真皮-表皮连接区(DEJ)(也被称为基膜)中主要的蛋白质。DEJ位于真皮和表皮联结之间,形成被称为表皮突(rete ridge)的指状突出。表皮细胞从真皮的血管中接收其养分。表皮突增大暴露于这些血管和所需养分的表皮的表面积。DEJ提供两种组织区室的黏连,并控制皮肤的结构完整性。层粘连蛋白和纤连蛋白是位于DEJ中的两种糖蛋白。层粘连蛋白和纤连蛋白被认为是细胞间的黏合剂,由真皮成纤维细胞分泌,以帮助促进表皮细胞到DEJ的细胞内和细胞间黏连。
层粘连蛋白和纤连蛋白的分泌可以通过定量培养的人成纤维细胞的细胞上清液中的层粘连蛋白和纤连蛋白来监测,培养的人成纤维细胞用含或不含1.0%最终浓度的测试成分的培养基处理3天。培养之后,在酶联免疫吸附测定(ELISA)中,使用针对每种蛋白质的免疫荧光抗体,测定层粘连蛋白和纤连蛋白含量。
胶原蛋白刺激测定:胶原蛋白是对皮肤结构关键的一种细胞外基质蛋白。增加的胶原蛋白合成帮助改善皮肤紧致度和弹性。使用生物测定来检验对人表皮成纤维细胞的前胶原肽(一种胶原蛋白的前体)产生的效果。该测定的终点是反映前胶原肽的存在和细胞活力的分光光度测量。该测定采用定量的夹心酶免疫分析技术,因此将对前胶原肽特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。标准品和样品移液到孔中,存在的所有前胶原肽由固定化的抗体结合。洗掉所有未结合的物质后,添加对前胶原肽特异的酶联多克隆抗体到孔中。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后,将底物溶液添加到孔中,以使颜色与最初步骤中结合的前胶原肽的量成比例的显现。停止颜色显现,颜色的强度使用酶标仪在450nm处测量。
为了产生样品和对照,将半汇合的正常人成体表皮成纤维细胞(CascadeBiologics)在含有10%胎牛血清(Mediatech)的标准DMEM生长培养基中于37℃,10%CO2中培养。用每种测试成分和对照处理细胞3天。孵育之后,收集细胞培养基,并使用如上所述的来自Takara(#MK101)的夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)定量I型前胶原肽的分泌量。
角质形成细胞单层渗透性:可测定由本说明书中所公开的每种活性成分、成分的任一种组合或具有该组合的组合物导致的角质形成细胞单层的渗透性变化。角质形成细胞单层渗透性是皮肤屏障完整性的量度。作为非限制性实例,可使用Millipore(ECM642)的体外血管渗透性测定来确定经处理和未经处理的角质形成细胞中的角质形成细胞单层渗透性。该测定分析了内皮细胞吸附、输送和渗透性。简略来说,来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角质形成细胞可被接种到收集孔内的多孔胶原蛋白涂覆膜上。然后,在37℃和5%的CO2下,在含有来自Life Technologies的钙(M-EP-500-CA)、并补充有来自Life Technologies(S-101-5)的角质形成细胞生长补充剂(HKGS)的Epilife生长培养基中生长24小时。该孵育时间使得细胞能够形成单层并封闭膜孔。然后用含有测试化合物/提取物(测试样品)或不含测试化合物/提取物(未经处理的对照)的新鲜培养基替换该培养基,并将角质形成细胞在37℃和5%的CO2下再培养48小时。为了确定在用/不用测试化合物/提取物孵育后的角质形成细胞单层的渗透性,用含有高分子量的异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖的新鲜培养基替换该培养基,并将角质形成细胞在37℃和5%的CO2下孵育4小时。在孵育4小时期间,FITC可以以与单层渗透性成比例的速率穿过角质形成细胞单层和多孔膜进入收集孔中。在培养4小时后,可以确定收集孔中的细胞活力和FITC的含量。对于FITC含量,收集孔中的培养基被收集,并且在520nm处激发时在480nm(Em)处测定培养基的荧光。渗透性百分比以及与未经处理的对照相比的百分比变化可以通过以下等式确定:渗透性百分比=((测试样品的平均Ex/Em)/未经处理的对照的平均Ex/Em)*100;百分比变化=测试样品的渗透性百分比-未经处理的对照的渗透性百分比。
抗氧化(AO)分析:测量本说明中所公开的成分中的任一种、成分的组合或具有所述组合的组合物的总抗氧化能力的体外生物分析。所述分析依赖样品中的抗氧化剂抑制(2,2'-联氮-双-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐])被正铁肌红蛋白氧化成·+的能力。活生物体的抗氧化***包含酶,例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶;高分子,例如白蛋白、血浆铜蓝蛋白和铁蛋白;和大量小分子,包括抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素、还原型谷胱甘肽、尿酸和胆红素。內源的和源自食物的抗氧化剂的总数表示细胞外液的总抗氧化能力。所有不同抗氧化剂的协作提供比单独的任何单个化合物更强的对抗反应性氧或氮自由基侵袭的保护。因此,总的抗氧化能力与测量单独组分获得的抗氧化能力相比可以给出更相关的生物信息,因为其考虑了血浆和体液中存在的所有抗氧化剂的累积效应。样品中抗氧化剂预防ABTS氧化的能力与Trolox(水溶性生育酚类似物)的能力进行比较,并以Trolox的摩尔当量进行定量。来自Cayman Chemical(Ann Arbor,Michigan USA)的抗氧化能力试剂盒#709001可以用作体外生物测定,以测量说明书中公开的任何一种活性成分、成分的组合、或具有所述组合的组合物中的每一种的总抗氧化能力。方案可以根据制造商的建议进行。
B16色素沉着分析:黑素生成是黑素细胞产生黑色素的过程,黑色素是一种天然产生的给予皮肤、毛发和眼睛颜色的色素。抑制黑素生成有益于预防皮肤变黑和减轻与老化有关的黑斑。该生物分析采用B16-F1黑素细胞(ATCC),一种永生化的小鼠黑色素瘤细胞系,来分析化合物对黑素生成的效果。该分析的终点是黑色素产生和细胞活性的分光光度测量。B16-F1黑素细胞可以在具有10%胎牛血清(Mediatech)的标准DMEM生长培养基中在37℃、10%CO2下培养,然后用在说明书中公开的任何一种活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物处理6天。孵育之后,黑色素分泌通过在405nm处的吸收进行测量,并定量细胞活性。
蘑菇酪氨酸酶活性分析:在哺乳动物细胞中,酪氨酸酶在来自酪氨酸(和来自多巴色素聚合)的黑色素生物合成中催化两个步骤。酪氨酸酶位于黑素细胞中,并产生赋予皮肤、毛发和眼睛颜色的黑色素(芳香醌化合物)。纯化的蘑菇酪氨酸酶(Sigma)可以与其底物L-Dopa(Fisher)在存在或不存在说明书中公开的活性成分的每一种、成分的任一种组合、或具有所述组合的组合物的情况下孵育。色素形成可以通过在490nm的比色板测定进行评估。蘑菇酪氨酸酶活性的抑制百分比可以通过与未经处理的对照物比较进行计算,以确定测试成分或其组合抑制纯净酶活性的能力。将测试提取物的抑制与曲酸(Sigma)的抑制进行比较。
基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9(MMP3;MMP9)的酶活性分析:体外的基质金属蛋白酶(MMP)抑制分析。MMP是胞外蛋白酶,其凭借宽的底物特异性在许多正常状态和疾病状态中起作用。MMP3底物包括胶原蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白;而MMP9底物包括胶原蛋白VII、纤连蛋白和层粘连蛋白。使用来自BioMol International的用于MMP3(AK-400)和MMP-9(AK-410)的比色药物发现试剂盒,该分析设计用于测量MMP的蛋白酶活性,使用含硫多肽作为显色底物(Ac-PLG-[2-巯基-4-甲基-戊酰基]-LG-OC2H5)5,6。MMP裂解位点的肽键由含硫多肽中的硫酯键替代。该键被MMP水解产生巯基,其与DTNB[5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸),埃尔曼试剂]反应生成2-硝基-5-硫代苯甲酸,可以通过其在412nm处的吸光度进行检测(在pH 6.0和高于7时,ε=13600M-1cm-1)。可以分析说明书中公开的活性成分、成分的任一种组合、或具有所述组合的组合物。
基质金属蛋白酶1(MMP1)酶活性分析:体外的基质金属蛋白酶(MMP)抑制分析。MMP是胞外蛋白酶,其凭借宽的底物特异性在许多正常转改和疾病状态中起作用。MMP1底物包括胶原蛋白IV。分子探针Enz/Chek白明胶酶/胶原酶分析试剂盒(#E12055)利用荧光明胶底物来检测MMP1蛋白酶活性。在溶蛋白性裂解后,显示亮绿色荧光,并可以使用荧光酶标仪来观测亮绿色荧光以测量酶活性。
将来自Invitrogen的Enz/Chek白明胶酶/胶原酶分析试剂盒(#E12055)设计为体外分析以测量MMP1酶活性。可以分析说明书中公开的活性成分、成分的任一种组合、或具有所述组合的组合物。该分析依赖于纯化的MMP1酶降解荧光明胶底物的能力。一旦底物被MMP1特异地裂解,则显示亮绿色荧光,并可以使用荧光酶标仪观测亮绿色荧光。在纯化的酶和底物存在或不存在的条件下培养测试材料以确定其蛋白酶抑制能力。
环氧合酶(COX)分析:体外环氧合酶-1和环氧合酶-2(COX-1、COX-2)抑制分析。COX是一种展现环氧合酶和过氧化物酶两者活性的双功能酶。环氧合酶活性将花生四烯酸转化为过氧化氢内过氧化物(***素G2;PGG2),过氧化物酶组分将内过氧化物(***素H2;PGH2)还原为相应的醇,***素、凝血噁烷和环***素的前体。该COX抑制剂筛选分析测定环氧合酶的过氧化物酶组分。过氧化物酶活性通过监测氧化的N,N,N',N'-四甲基-对苯二胺(TMPD)的出现比色地进行分析。该抑制剂筛选分析包括COX-1和COX-2酶两者,以筛选同工酶特异性抑制剂。比色的COX(绵羊)抑制剂筛选分析(#760111,Cayman Chemical)可以用于分析说明书中所公开的活性成分的每一种、成分的任一种组合、或具有所述组合的组合物对纯化的环氧合酶(COX-1或COX-2)活性的影响。根据制造商的指示,纯化的酶、血红素和测试提取物可以在分析缓冲液中混合,并在室温下摇动孵育15分钟。孵育之后,可以加入花生四烯酸和比色底物开始反应。颜色变化可以通过在590nm的比色板读数进行评估。COX-1或COX-2活性的抑制百分比可以通过与未经处理的对照物比较进行计算,以确定测试提取物抑制纯化酶的活性的能力。
脂肪氧合酶(LO)分析:体外的脂肪氧合酶抑制分析。LO是非血红素的含铁加双氧酶,其催化分子氧加成到脂肪酸。亚油酸盐/酯和花生四烯酸盐/酯是植物中和动物中LO的主要底物。然后,花生四烯酸可以转化为羟基二十碳三烯(HETE)酸衍生物,其随后转化为白三烯(有效的炎症介质)。该分析通过测量利用花生四烯酸培养的脂肪氧合酶(5-LO、12-LO或15-LO)产生的氢过氧化物提供用于筛选脂肪氧合酶抑制剂的精确和方便的方法。比色的LO抑制剂筛选试剂盒(#760700,Cayman Chemical)可以用于确定说明书中所公开的活性成分的每一种、成分的任一种组合、或具有所述组合的组合物抑制酶活性的能力。纯化的15-脂肪氧合酶和测试成分可以在分析缓冲液中混合,并在室温下摇动孵育10分钟。孵育之后,可以加入花生四烯酸以开始反应,并且混合物可以在室温下再孵育10分钟。可以加入比色底物以终止催化,颜色变化可以通过在490nm的荧光板读数进行评估。脂肪氧合酶活性的抑制百分比可以通过与未经处理的对照物比较来计算,以确定说明书中所公开的活性成分的每一种、成分的任一种组合、或具有所述组合的组合物抑制纯化酶的活性的能力。
弹性蛋白酶分析:来自Molecular Probes(俄勒冈州尤金,USA)的弹性蛋白酶分析(试剂盒#E-12056)可以用作测量本说明书中所公开的每种活性成分、成分的任一种组合或具有所述组合的组合物的弹性蛋白酶活性抑制的体外酶抑制分析。EnzChek试剂盒含有可溶的牛颈韧带弹性蛋白,其可用染料标记以使共轭荧光淬灭。非荧光底物可以被弹性蛋白酶或其他蛋白酶消化以产生高荧光的片段。产生的荧光增强可以用荧光微孔板测定仪进行监测。来自弹性蛋白底物的消化产物在约505nm处具有最大吸收,在约515nm处具有最大荧光发射。当使用EnzChek弹性蛋白酶分析试剂盒用于弹性蛋白酶抑制剂的筛选时,肽、N-甲氧基琥珀酰基-Ala-Ala-Pro-Val-氯甲基酮可用作选择性的、共同的弹性蛋白酶抑制剂。
油控制分析:用于测量皮脂腺中皮脂分泌的减少和/或皮脂腺中皮脂产生的减少的分析可以通过使用本领域普通技术人员已知的标准技术进行分析。在具体的例子中,可以使用前额。本说明书中所公开的每种活性成分、成分的任一种组合或具有该组合的组合物可以每天一次或两次地施用到前额的一部分一段设定的日子(例如1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或多于14天),而前额的其他部分不用所述组合物处理。在一段固定的日子期满后,皮脂分泌可以通过将细吸油纸施用到经处理的和未经处理的前额皮肤上进行分析。这是通过首先用湿的和干的布从经处理的和未经处理的区域去除所有皮脂实现的。然后将吸油纸施用到经处理的和未经处理的前额区域,可以绕着前额放置橡皮筋以轻轻地将吸油纸压到皮肤上。2小时后,吸油纸可以移去,使其干燥,然后进行透照。越深的吸油纸对应于越多的皮脂分泌(或较浅的吸油纸对应于减少的皮脂分泌)。
红斑分析:测量皮肤发红减少的分析可以使用Minolta Chromometer进行评估。皮肤红斑可以通过在对象前臂施用0.2%的十二烷基硫酸钠溶液来引发。该区域用封闭的贴片保护24小时。24小时后,除去贴片,可以使用Minolta Chroma Meter的a*值对刺激诱导的发红进行评估。a*值测量肤色在红色区域的变化。在阅读后,立即用说明书中公开的活性成分、成分的任一种组合、或具有所述组合的组合物来处理该区域。可以定期进行重复测量以确定制剂减少发红和刺激的能力。
皮肤清透度和雀斑与老年斑减少的分析:皮肤清透度和雀斑与老年斑减少使用Minolta Chromometer进行评价。肤色改变可以使用Minolta Chroma Meter的a*值进行评估以确定由产品处理引起刺激的可能性。a*值测量肤色在红色区域的变化。这用于确定说明书中公开的活性成分的每一种、成分的任一种组合、或具有所述组合的组合物是否诱导刺激。测量可以在脸的每一侧进行并进行平均,作为左边和右边脸的值。皮肤清透度也可以使用Minolta Meter进行测量。测量是Minolta Meter的a*、b、和L值的组合,并与皮肤的亮度有关,而且非常好地对应皮肤的光滑度和水合。皮肤测定如上进行。在一个非限制性方面,皮肤清透度可以描述为L/C,其中C是色度并定义为(a2+b2)1/2。
皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和皮肤色调分析:皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和皮肤色调可以用临床评分技术进行评估。例如,皮肤干燥的临床评分可以通过五点标准Kligman量表进行确定:(0)皮肤是柔软和湿润的;(1)皮肤呈现正常而没有可见的干燥;(2)皮肤感觉轻微干燥而没有可见的剥落;(3)皮肤感觉干燥、坚韧并且具有一些鳞屑的发白的外观;以及(4)皮肤感觉非常干燥、粗糙并且具有有鳞屑的发白的外观。评估可以由两个临床医师独立进行并进行平均。
皮肤色调临床评分分析:皮肤色调的临床评分可以通过十点模拟数值量表实施:(10)平滑的均匀的皮肤、粉红棕色的颜色。手持放大镜检查时没有暗的、发红的或有鳞的斑块。皮肤的微观纹理摸上去非常均匀;(7)不用放大镜观察到均匀的皮肤色调。没有鳞状区域,但是有由于色素淀积或红斑引起的轻微变色。没有直径大于1cm的疹斑;(4)轻易地注意到皮肤变色和不均匀的纹理。少量鳞片。一些区域摸上去皮肤粗糙;以及(1)不均匀的皮肤着色和纹理。多个区域的鳞片和变色,色素减退、发红的或黑色的斑点。大面积的直径超过1cm的不均匀着色。评估由两个临床医师独立进行并进位行平均。
皮肤光滑度的临床评分分析:皮肤光滑度的临床评分可以通过十点模拟数值量表进行分析:(10)光滑的,皮肤是湿润的和闪光的,手指划过表面时没有阻力;(7)一定程度光滑的,微小的阻力;(4)粗糙的、可见地改变,摩擦时有摩擦力;以及(1)粗糙的、片状的、不均匀的表面。评估由两个临床医师独立进行并进行平均。
用Packman等人(1978)公开的方法进行的皮肤光滑度和皱纹减少的分析:皮肤光滑度和皱纹的减少也可以通过使用Packman等人(1978)公开的方法进行可视化评估。例如,每一名对象就诊时,对每一名对象的表面面线(SFL)的深度、浅度和总数量都可以进行认真的评分和记录。通过将数量因子乘以深度/宽度/长度因子得到数字的分数。获得眼睛区域和嘴巴区域(左侧和右侧)的分数,加到一起作为总的皱纹分数。
用复制品进行的线条和皱纹的显现分析:皮肤上线条和皱纹的显现可以使用复制品进行评估,所述复制品是皮肤表面的印模。可以使用如硅橡胶的材料。复制品可以通过图像分析进行分析。线条和皱纹可见性的变化可以通过利用硅复制品形成对象的脸并用计算机图像分析***分析复制品图像进行客观地定量。复制品可以从眼睛区域和颈部区域获得,并用数码相机以低照明入射角进行拍摄。数字图像可以用图像处理程序进行分析并确定复制品被皱纹和细纹覆盖的区域。
用Hargens Ballistometer进行的皮肤紧致度分析:皮肤紧致度可以用HargensBallistomete(通过在皮肤上落下一个小物体并记录前两个反弹峰来评估皮肤弹性和紧致度的装置)进行测量。Ballistometry是具有相对钝的探头(4平方毫米-接触面积)的小的轻量探测器。探测器轻轻地穿透进入皮肤,并产生依赖于皮肤外层性质的测量,所述皮肤外层包括角质层和外表皮以及部分真皮层。
用Gas Bearing Electrodynamometer进行的皮肤柔软度/柔韧性分析:皮肤柔软度/柔韧性可以使用Gas Bearing Electrodynamometer(一种测量皮肤压力/张力性质的仪器)进行评估。皮肤的黏弹性与皮肤保湿有关。可以通过用双面胶将探测器附着在皮肤表面来实现对脸颊区域特定位点的测量。可以将大约3.5gm的力平行施加于皮肤表面,精确地测量皮肤的位移。然后可以计算皮肤的柔韧性,并表达为DSR(动态弹簧刚度,以gm/mm计)。
用表面光度仪/记录针方法进行的皮肤表面轮廓分析:皮肤表面轮廓可以通过使用表面光度仪/记录针方法进行测量。这包括闪光或拖动记录针穿过复制品表面。记录针的垂直位移通过距离传感器可以录入计算机,在扫描复制品的一定长度后,皮肤轮廓的横截面分析可以以二维曲面产生。该扫描可以沿着固定的轴重复任意次数以产生模拟的皮肤3-D图像。使用记录针技术可以获得十个随机的复制品截面,并组合产生平均值。感兴趣的值包括Ra,其为通过相对于平均轮廓高度的将轮廓高度积分计算得到的所有粗糙度(高度)值的算术平均数。Rt,其为最高峰和最低谷之间的最大垂直距离,以及Rz,其为平均峰振幅减去平均峰高度。数值以用mm为单位标定的数值给出。设备应在每次使用前通过扫描已知数值的金属标准物进行标准化。Ra值可以通过下式计算:Ra=标准化粗糙度;lm=横向(扫描)长度;以及y=轮廓位置相对于平均轮廓高度的绝对值(x-轴)。
MELANODERMTM分析:在其他非限制性方面,可以通过使用皮肤类似物例如MELANODERMTM来评价说明书中公开的活性成分的每一种、成分的任一种组合、或具有所述组合的组合物的功效。当黑素细胞(皮肤类似物中的一种细胞)暴露于L-二羟苯基丙氨酸(L-DOPA)(黑色素的前体)时阳性着色。皮肤类似物MELANODERMTM可以用包含说明书中公开的活性成分的每一种、成分的任一种组合、或具有所述组合的组合物的各种基底来处理或者用单独的基地作为对照来处理。或者,未经处理的皮肤类似物样品可以用作对照。
透明质酸酶活性的抑制:可测定由本说明书中所公开的每种活性成分、成分的任一种组合或具有该组合的组合物导致的透明质酸酶的活性变化。透明质酸酶是一种分解HA的酶。HA是参与稳定基质结构的多糖,并且涉及向组织和细胞提供膨压。作为一个非限制性实例,透明质酸酶活性可以使用修改自Sigma-Aldrich方案#EC 3.2.1.35的体外方案来测定。简而言之,将来自Sigma-Aldrich的透明质酸酶类型1-S(H3506)加入至含有测试化合物或对照物的微孔板反应孔中。单宁酸可以用作阳性对照抑制剂,对照酶不加入测试化合物,并且含有测试化合物或阳性对照但不含透明质酸酶的孔可以用作背景阴性对照。在加入底物(HA)之前,将孔在37℃孵育10分钟。加入底物,并且将反应在37℃下孵育45分钟。然后,将每个反应溶液的一部分转移并轻轻混合在乙酸钠和pH为3.75的乙酸的溶液中,以停止该一部分反应(停止孔)。在将一部分反应溶液加入到停止孔中之后,停止孔和反应孔应该都含有相同体积的溶液。反应孔和停止孔均在室温下孵育10分钟。然后测量反应孔和停止孔在600nm处的吸光度。抑制可以使用以下公式来计算:抑制剂(或对照)活性=(在600nm处的抑制剂停止孔吸光度-在600nm处的抑制剂反应孔吸光度);初始活性=在600nm处的对照酶吸光度;抑制百分比=[(初始活性/抑制剂活性)*100]-100。
过氧化物酶体增殖剂-激活的受体γ(PPAR-γ)的活性:可测定由本说明书中所公开的每种活性成分、成分的任一种组合或具有该组合的组合物导致的PPAR-γ的活性变化。PPAR-γ是一种对皮脂产生关键的受体。作为非限制性实例,可使用分析测试化合物或组合物抑制配体结合的能力的生物测定来确定PPAR-γ的活性。简略来说,可以使用荧光小分子pan-PPAR配体(从Life Technologies获得的FLUORMONETMPan-PPAR Green(PV4894))来确定测试化合物或组合物是否能够抑制配体与PPAR-γ的结合。样品孔含有PPAR-γ和荧光配体和二者之一:测试化合物或组合物(测试);参考抑制剂;罗格列酮(阳性对照);或者没有测试化合物(阴性对照)。将孔孵育一段设定的时间以使得配体有机会与PPAR-γ结合。然后可测定每个样品孔的荧光偏振,并与阴性对照孔比较以确定测试化合物或组合物的抑制百分比。
细胞因子阵列:将人表皮角质形成细胞培养至70%至80%汇合。吸出板中的培养基并加入0.025%的胰蛋白酶/EDTA。当细胞变圆时,轻轻地对培养皿抽液以释放细胞。从培养皿中去除含有胰蛋白酶/EDTA的细胞并中和。将细胞离心5分钟。以180×g形成细胞团。吸出上清液。获得的细胞团在EPILIFETM培养基(Cascade Biologics)中重悬。将细胞以约10%至20%的汇合度接种到6孔板中。在细胞变为约80%汇合之后吸出培养基,添加1.0ml的EPILIFETM,并将佛波醇13-豆蔻酸酯12-乙酸酯(“PMA”)(已知的炎症诱导剂)和测试组合物稀释物添加至两个重复的孔中(即,将1.0%(100X储液中的100μl)和0.1%(100X储液中的10μl)的测试组合物稀释为最终体积为1ml的EpiLife生长培养基)。轻轻地搅拌培养基以确保充分混合。另外,在存在或不存在额外的PMA的情况下,向对照孔中添加1.0ml的EPILIFETM。在定量给料之后,将板在37±1℃和5.0±1%CO2中孵育约5小时。孵育5小时后,将所有培养基收集在锥形管中并在-70℃冷冻。
为了分析,将16块的杂交室连接至16块的FAST载玻片,以16个抗细胞因子抗体加实验对照组一式三份排列(Whatman BioSciences),将载玻片置于用于加工的FAST框架中(每框架4个载玻片)。在室温下,使用70ml S&S蛋白质阵列封闭缓冲液(WhatmanSchleicher和Scheull)将阵列封闭15分钟。移除封闭缓冲液,并向每个阵列添加70ml各自的上清液样品。在轻微振动下,阵列在室温下孵育3小时。使用TBS-T将阵列清洗3次。使用70ml混合型抗体处理阵列,混合型抗体含有对应于每个阵列捕捉抗体的一个生物素化抗体。在轻微振动下,阵列在室温下孵育1小时。使用TBS-T将阵列清洗3次。在轻微振动下,在室温下使用70ml含有链霉亲和素-Cy5缀合物的溶液孵育1小时。使用TBS-T将阵列清洗3次,在去离子水中快速冲洗并干燥。
载玻片可以在Perkin-Elmer ScanArray 4000共聚焦荧光成像***中成像。可以保存阵列图像并使用Imaging Research ArrayVision软件进行分析。简略来说,通过减去背景信号来确定点强度。可以平均来自每个样品条件下的点重复,然后和适当的对照组比较。
内皮管的形成:内皮管的形成与血管形成以及微脉管毛细血管形成有关。毛细血管形成和血管形成可以促成皮肤发红和酒槽鼻。在存在或不存在测试提取物和化合物的情况下,在细胞培养***中,可以使用具有预成型的初代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的毛细管破坏试验来确定内皮细胞形成管的能力。
简略来说,将HUVEC在细胞外基质中进行体外培养,其刺激内皮细胞的黏附和管状形态发生以形成毛细管状的腔结构。这些体外形成的毛细管在许多方面和人类的毛细血管类似。毛细管试验是基于该现象的,并用于评价潜在的脉管***靶向试剂。
HUVEC培养物在5%CO2、37℃下在培养器中生长。用于HUVEC的完整培养基为内皮管细胞基础培养基(EBM),其补充有2%的胎牛血清(FBS)、12μg/ml的牛脑提取液、1μg/ml皮质醇、和1μg/ml的GA-1000(庆大霉素-两性霉素)。在第3代至第8代之间的HUVEC培养物可以用于所有的分析实验。
使用荧光试剂Calcein AM预标记HUVEC,并将其接种于含有其完整生长培养基的96孔培养板的细胞外基质中。在形态发生过程之后约4小时,形成内皮毛细管。然后,作为处理条件,将50μl体积的设定剂量的测试试剂应用到形成的毛细管培养物中。可以向未处理对照组加入测试试剂的载剂。索坦(FDA批准的抗血管生成药物)可以包括一种浓度作为分析性能的对照。在处理之后的约6小时,通过显微镜来检查每个孔中的内皮管形态并成像,并定量分析在处理条件下的毛细管破坏活性。每个测试条件可以在重复孔中实施,包括对照组。
本文所公开和要求保护的所有组合物和方法可以根据本公开不需要过度的实验即可制成和实现。尽管本发明的组合物和方法已经按照优选实施方案进行了描述,但是对于本领域技术人员明显的是,可以对所述组合物和方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序进行改变,而不脱离本发明的概念、精神和范围。更具体地,明显地,化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂,同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。
参考文献
以下参考文献在一定程度上提供示例性程序细节或对本文所陈述细节进行补充的其他细节,它们通过引用明确地并入本文。
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Sodium Hyaluronate Powder Product Data Sheet,Tri-K Industries,Inc.,2008
Solution Presentation,Tri-K Industries,Inc.,2016
Claims (20)
1.一种处理皮肤的方法,其包括对皮肤局部施用包含以下的局部用组合物:
(a)有效量的糖类同分异构体;
(b)有效量的角叉菜胶钠;
(c)有效量的海盐;和
(d)有效量的透明质酸钠;
其中处理皮肤以减少细纹和皱纹的出现、增加皮肤湿润度、促进水合、强化和修复皮肤、减少炎症和发红、减少氧化剂、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑、改善皮肤屏障功能、和/或紧致和调理皮肤。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述组合物包含0.001重量/重量%至5重量/重量%的糖类同分异构体、0.001重量/重量%至5重量/重量%的角叉菜胶钠、0.0001重量/重量%至5重量/重量%的海盐、和0.0001重量/重量%至1重量/重量%的透明质酸钠。
3.根据权利要求1所述的方法,其中所述组合物包含:
有效量的糖类同分异构体,以调理皮肤和滋润皮肤、减少TNF-α产生、增加皮肤电导、和/或增加抗氧化能力;和/或
有效量的角叉菜胶钠和海盐,以促进皮肤水合、强化和修复皮肤、增加表皮和真皮的透明质酸的产生、和/或增加角质层和表皮的神经酰胺的产生。
4.根据权利要求1所述的方法,其中所述组合物包含水。
5.根据权利要求4所述的方法,其中所述组合物包含75重量/重量%至95重量/重量%的水。
6.根据权利要求1所述的方法,其中所述组合物包含甘油、EDTA二钠、二苯甲酮-4、丁二醇和三乙醇胺。
7.根据权利要求6所述的方法,其中所述组合物包含0.5重量/重量%至8重量/重量%的甘油、0.005重量/重量%至1重量/重量%的EDTA二钠、0.005重量/重量%至1重量/重量%的二苯甲酮-4、1重量/重量%至10重量/重量%的丁二醇、和0.01重量/重量%至1重量/重量%的三乙醇胺。
8.根据权利要求1所述的方法,其中所述组合物包含0.01重量/重量%至3重量/重量%的双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷和0.01重量/重量%至1重量/重量%的黄原胶。
9.根据权利要求1所述的方法,其中所述组合物包含0.01重量/重量%至5重量/重量%的c-异硬脂醇。
10.根据权利要求1所述的方法,其中所述组合物包含1重量/重量%至10重量/重量%的二异硬脂醇苹果酸酯。
11.一种局部用组合物,其包含:
(a)有效量的糖类同分异构体;
(b)有效量的角叉菜胶钠;
(c)有效量的海盐;和
(d)有效量的透明质酸钠;
其中所述组合物有效地减少细纹和皱纹的出现、增加皮肤湿润度、促进水合、强化和修复皮肤、减少炎症和发红、减少氧化剂、减少皮肤脱屑、减少皮肤粗糙、增加皮肤润滑、改善皮肤屏障功能、和/或紧致和调理皮肤。
12.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中所述组合物包含0.001重量/重量%至5重量/重量%的糖类同分异构体、0.001重量/重量%至5重量/重量%的角叉菜胶钠、0.0001重量/重量%至5重量/重量%的海盐、和0.0001重量/重量%至1重量/重量%的透明质酸钠。
13.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中所述组合物包含:
有效量的糖类同分异构体,以调理皮肤和滋润皮肤、减少TNF-α产生、增加皮肤电导、和/或增加抗氧化能力;和/或
有效量的角叉菜胶钠和海盐,以促进皮肤水合、强化和修复皮肤、增加表皮和真皮的透明质酸的产生、和/或增加角质层和表皮的神经酰胺的产生。
14.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中所述组合物包含水。
15.根据权利要求14所述的局部用组合物,其中所述组合物包含75重量/重量%至95重量/重量%的水。
16.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中所述组合物包含甘油、EDTA二钠、二苯甲酮-4、丁二醇和三乙醇胺。
17.根据权利要求16所述的局部用组合物,其中所述组合物包含0.5重量/重量%至8重量/重量%的甘油、0.005重量/重量%至1重量/重量%的EDTA二钠、0.005重量/重量%至1重量/重量%的二苯甲酮-4、1重量/重量%至10重量/重量%的丁二醇、和0.01重量/重量%至1重量/重量%的三乙醇胺。
18.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中所述组合物包含0.01重量/重量%至3重量/重量%的双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷和0.01重量/重量%至1重量/重量%的黄原胶。
19.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中所述组合物包含0.01重量/重量%至5重量/重量%的c-异硬脂醇。
20.根据权利要求11所述的局部用组合物,其中所述组合物包含1重量/重量%至10重量/重量%的二异硬脂醇苹果酸酯。
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