CN110478351A

CN110478351A - 多靶标作用化合物x7的新用途

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Publication number: CN110478351A
Application number: CN201910931160.0A
Authority: CN
Inventors: 缪朝玉; 王朋; 苏定冯; 周延; 刘建国; 张丽荣; 周杰; 周欣
Original assignee: Shenyang Neptune Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Shenyang Neptune Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2019-09-29
Filing date: 2019-09-29
Publication date: 2019-11-22

Abstract

本发明涉及一种多靶标作用化合物X7的新用途，所述X7是式(I)所示的3‑(4‑(4‑(1H‑苯并***‑1‑基)丁基)哌嗪‑1‑基)苯并异噻唑盐酸盐，本发明的多靶标作用化合物X7的新用途包括：X7在制备抗高血压的药物、靶器官保护作用(防止心血管肥厚、肾脏损害等)的药物、预防脑卒中发生和死亡的药物中的应用。该药具有不加快心率的优点。本发明还涉及有上述化合物的药物组合物。其优点表现在：本发明扩大了多靶标作用化合物X7的用途，为高血压患者人群、脑卒中患者人群、心血管肥厚、肾脏损害等患者人群提供了新的治疗方案，具有很好的应用前景。

Description

多靶标作用化合物X7的新用途

技术领域

本发明涉及医药学技术领域，具体地说，是多靶标作用化合物X7的新用途。

背景技术

高血压是以体循环动脉压增高为主要表现的临床综合征，是最常见的心血管疾病。可分为原发性及继发性两大类，其中绝大部分属于原发性高血压，占总高血压患者的95％以上。高血压如果得不到有效的控制和治疗，会引起脑血管意外(脑卒中)、肾功能衰竭、心力衰竭、冠心病、眼底病变等并发症。且这些并发症大多可致死或致残。最近发表的我国≥40岁17万人群8年随访结果表明，心脑血管病已成为我国的首位死因，而高血压是第一危险因素。药物治疗是目前有效控制高血压的主要疗法。在抗高血压药物治疗领域，传统的降压药物包括如下几种：1)利尿剂：通过排钠利尿，减少体内循环中钠和水的含量，使血容量下降而降低血压。利尿剂的副作用主要为低血钾，低血钾可以诱发严重心律失常，还可以妨碍利尿剂的降压作用。2)β受体阻滞剂：通过多种作用途径而产生降压作用，可归纳为以下几个方面：①减少心排出量，机体产生适应性反应，外周血管阻力降低，血压下降；②阻断中枢β受体，减少交感神经纤维的神经传导；③阻断突触前膜β2的兴奋受体，减少NE的释放；④抑制肾素释放；⑤增加ANP和PGI2的舒血管作用；⑥压力感受体的再建等。β受体阻滞剂的不良反应：疲劳，肢体寒冷，肠胃不适，眼睛闪烁及视觉盲点等。3)α1受体阻滞剂：通过选择性作用于突触α1受体，使阻力血管和容量血管都扩张，从而使动脉血压下降。α1受体阻滞剂降压显著，且能降低血胆固醇、甘油三脂，改善胰岛素抵抗，轻度逆转LVH，因对***有抑制作用，故可明显改善***肥大患者的排尿困难。适用于有糖或脂代谢异常、***肥大的患者。该类药物的副作用有头痛、头晕、心悸、无力等，其缺点是可出现周围性水肿和体重增加，并且首次给药时可出现明显的首剂现象，即***性低血压。4)钙拮抗剂：在血管平滑肌及心肌组织中细胞膜上特异L型钙通道水平选择性阻滞Ca2+的内流，从而起到血管平滑肌松弛，血管阻力降低，钙拮抗剂的副作用主要为面部潮红(尤见于短效二氢吡啶类)、头痛、头晕、心悸、便秘和踝部水肿，主要与其过度血管扩张有关，使用时易从小剂量开始以减轻其不良反应。5)ACEI：作用于肾素-血管紧张素-醛固酮***(RAS)***，此类药物与血管紧张素I转化酶结合，抑制血管紧张素II生成，使缓激肽分解减慢，导致血管舒张，血压下降。ACEI较常见的不良反应主要为干咳和血管神经性水肿。若同时服用含钾补充剂或保钾利尿剂则易发生高钾血症。

因此，针对现有技术的不足，发明人设计了本发明多靶标作用化合物X7的新用途，X7是一种苯并***基哌嗪类化合物。将多靶标作用化合物X7用于治疗高血压及其并发症，取得了明显的技术效果。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术的不足，提供多靶标作用化合物X7的新用途。

本发明的第二个目的是针对现有技术的不足，提供一种药物组合物。

本发明的第三个目的是针对现有技术的不足，提供上述药物组合物的用途。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

多靶标作用化合物X7是指式(I)化合物或其药学上可接受的盐；

式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备预防、治疗及延缓高血压、高血压引起的靶器官损伤及高血压相关疾病的药物中的应用，

作为本发明的一个优选实施方案，所述的靶器官损伤是高血压引起的心、脑、肾或血管的损伤；所述高血压相关疾病，包括动脉粥样硬化、高血脂、肥胖、冠心病、主动脉夹层和高血糖、糖耐量异常、代谢综合征、糖尿病。

作为本发明的一个优选实施方案，其中所述的靶器官损伤是左心室肥厚、脑卒中、肾皮质萎缩或主动脉增厚、心绞痛、心肌梗死、心功能衰竭、肾功能衰竭、视网膜动脉硬化、高血压眼底病变。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种药物组合物，包括药学上可接受的载体和如上所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

作为本发明的一个优选实施方案，所述药物中含有20mg-1000mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

作为本发明的一个优选实施方案，所述药物组合物的制药剂型为口服制剂或注射剂，所述口服制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂丸剂或混悬剂。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

如上所述药物组合物在制备预防、治疗及延缓高血压、高血压引起的靶器官损伤及高血压相关疾病的药物中的应用。

X7化学名称：3-(4-(4-(1H-苯并***-1-基)丁基)哌嗪-1-基)苯并异噻唑盐酸盐。分子式：C₂₁H₂₄SN₆·HCl，分子量：428.98，

本发明优点在于：

1、扩大了X7的用途，实验结果显示：X7具有降压效果确切、起效快、降压伴有轻度心率减慢、不影响心脏传导***、对血流动力学产生有利的影响、长期用药对高血压引起的器官损伤有保护作用的优点。本发明既扩大了降压新药X7的用途，又为高血压及其并发症提供了新的治疗方案，为该类患者增大了生存几率，减轻了患者痛苦，具有很好的应用前景。

2、本发明化合物毒副作用小，安全性好，对高血压引起的多种靶器官损伤有明显的疗效。

附图说明

附图1是大鼠清醒自由活动血压连续测量装置示意图。

附图2是X7降低SHR血压的剂量与效应关系。

附图3是X7降低2K1C犬血压的剂量与效应的关系。

附图4是心肌-模型组病理HE染色图，A：HE×100，心肌纤维排列整齐，心肌间质水肿，间质纤维化，心肌间质血管轻度扩张充血，心肌细胞片状坏死，少量单核细胞、淋巴细胞浸润；B：HE×200，心肌纤维排列整齐，无断裂，心肌细胞变宽，轻度肥大，心肌间胶原纤维细胞增生，心肌细胞片状坏死，少量单核细胞、淋巴细胞浸润。

附图5是心肌-阳性对照组病理HE染色图，A：HE×100，心肌纤维排列整齐，心肌间质水肿，间质纤维化，心肌细胞片状变性，未见单核细胞、淋巴细胞浸润；B：HE×200，心肌纤维排列整齐，无断裂，心肌细胞间隙减小，无明显肥大，间质纤维化，心肌间胶原纤维细胞增生，心肌细胞片状变性，未见炎症细胞浸润。

附图6是心肌-X7治疗组病理HE染色图，A：HE×100，心肌纤维排列整齐，间质纤维化，心肌细胞偶见片状变性、坏死区域，未见炎症细胞浸润；B：HE×200，心肌纤维排列整齐，无断裂，心肌细胞间隙减小，无明显肥大，间质纤维化，心肌间胶原纤维细胞增生，心肌细胞偶见片状变性或坏死，未见炎症细胞浸润。

附图7是肾脏-模型组病理HE染色图，A：HE×100，肾小球系膜细胞增生、基质弥漫性增加，可见炎症细胞浸润；B：HE×200，肾小球萎缩、坏死，肾动脉纤维化和玻璃样变，淋巴细胞、单核细胞和成纤维细胞浸润。

附图8是肾脏-阳性对照组病理HE染色图，A：HE×100，肾小球系膜细胞增生、基质弥漫性增加，可见少量炎症细胞浸润；B：HE×200，肾小球形态正常，有少量淋巴细胞浸润，肾动脉纤维化和玻璃样变减少，少量淋巴细胞、单核细胞和成纤维细胞浸润。

附图9是肾脏-X7治疗组病理HE染色图，A：HE×100，肾小球系膜细胞增生、基质弥漫性增加，未见炎症细胞浸润；B：HE×200，肾小球形态完整，个别肾小球基质间隙增大，但肾小球形态仍然正常，少量肾动脉纤维化，未见炎症细胞浸润。

附图10是脑-模型组病理HE染色图，A：HE×100，脑组织整体结构正常，未见出血及炎症细胞浸润，神经细胞及周围间隙无明显增宽；B：HE×200，神经细胞排列正常，少量神经细胞胞质区域增大，核固缩，部分神经细胞膨大、水肿。

附图11是脑-阳性对照组病理HE染色图，A：HE×100，脑组织整体结构正常，未见出血及炎症细胞浸润，神经细胞及周围间隙无明显增宽；B：HE×200，神经细胞排列正常，少量神经细胞胞质区域增大，核深染。

附图12是脑-X7治疗组病理HE染色图，A：HE×100，脑组织整体结构正常，有个别出血点，未见炎症细胞浸润，神经细胞及周围间隙无明显增宽；B：HE×200，神经细胞排列正常，少量神经细胞胞质区域增大，核深染。个别神经细胞膨大水肿。

附图13是主动脉-模型组病理HE染色图，HE×40。A：壁厚：134μm，内径：1293μm，壁厚/内径＝0.104，主动脉形态正常，管壁较厚；B：壁厚：134μm，内径：1342μm，壁厚/内径＝0.1，主动脉形态正常，管壁较厚。

附图14是主动脉-阳性对照组病理HE染色图，HE×40。A：壁厚：110μm，内径：1647μm，壁厚/内径＝0.067，主动脉形态正常，管壁较薄；B：壁厚：122μm，内径：1500μm，壁厚/内径＝0.081，主动脉形态正常，管壁较薄。

附图15是主动脉-X7治疗组病理HE染色图，HE×40。A：壁厚：122μm，内径：1586μm，壁厚/内径＝0.077，主动脉形态正常，管壁较薄；B：壁厚：122μm，内径：1562μm，壁厚/内径＝0.078，主动脉形态正常，管壁较薄。

附图16是SHR-SP生存曲线。

附图17是X7化合物对肾上腺素α_1A受体的作用。

附图18是X7化合物对肾上腺素α_1B受体的作用。

附图19是X7化合物对肾上腺素α_1D受体的作用。

附图20是X7化合物对5-羟色胺5-HT_2A受体的作用。

附图21是X7化合物对组织胺H₁受体的作用。

附图22是X7化合物对肾上腺素α_2B受体的作用。

附图23是X7化合物对5-羟色胺5-HT_1A受体的作用。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例中所述的英文缩写词表见下表。

英文缩写词表

实施例1 X7单次给药对SHR血压和心率的影响

1.1.实验目的

了解受试品X7单次灌胃给药对SHR血压和心率的影响，内容包括降低血压的量效关系、起效时间、最大降压幅度、血压降低维持时间、对心率的影响以及血压变化与心率的关系。

1.2.实验材料

1.2.1.受试药物

受试药：代号X7，外观呈白色粉末状，装密封袋放冰箱4℃保存。生产批号：2013103001。使用前用生理盐水临时配制。

阳性对照药：苯磺酸氨氯地平片，辉瑞制药有限公司，批准文号：国药准字：H10950224，生产批号：L02430。

1.2.2实验分组与剂量设置

实验分组：根据动物随机分组的原则，实验设溶媒对照组、阳性对照组、受试品X7先设一个剂量，根据血压变化结果向下降低和向上增加剂量，找出最低有效剂量和最大有效剂量。

剂量设置：所有药物用生理盐水溶解，给药容积为5ml/kg，不同剂量组按照等容积不等浓度方法配置，溶媒对照组给生理盐水5ml/kg；阳性对照组药物用苯磺酸氨氯地平，剂量5mg/kg；X7的剂量从低到高有1.25mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg 5个剂量组，全部实验共有7个组，每组动物数量为10只。

1.2.3.给药途径与给药次数

给药途径：为了避免用灌胃针灌胃时捉拿大鼠出现应激反应而影响实验结果，在动脉插管手术的同时还做了胃造瘘插管，瘘管引出体外。实验时通过胃瘘管给药代替灌胃给药。给药次数为单次给药。

1.2.4.其他实验用试剂

0.9％氯化钠注射液：山东华鲁制药有限公司生产，批准文号：国药准字H37022749，生产批号：A13011703。

肝素钠：国药集团化学试剂有限公司生产，规格：1g/瓶，技术条件符合Q/CYDZ66-2012,生产批号：20130617。

盐酸***注射液：福建古田药业有限公司，规格：2ml：10mg/支，国药准字：H3502148，批号：130303。

***注射液：河南省安阳市益康制药厂，规格：2ml：10mg/支，国药准字：H41021491，批号：1403031。

1.2.5.实验动物

品系：自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)。

级别：普通级

性别：雄性

数量：70只

体重：250±20克

来源：SHR系本教研室从美国引进繁殖。用普通大鼠饲料喂养，自由饮水，光线12小时明暗自动转换，室内温度20-22℃。

1.2.6.实验仪器

大鼠清醒自由活动血压连续测量装置，该装置主要组成如下(图1)：

压力换能器，复旦大学电子工程系PT14M2型生理实验压力传感器；

灌注三通管，法国Plastimed公司；

灌注四通管，法国Plastimed公司；

单通道转动装置，美国SpaldingMedicalproducts；

压力信号放大器，MPA-HBBS，上海奥尔科特科技有限公司生产；

恒速推注泵，浙江医科大学仪器厂WZ-50G注射机；

聚乙烯管，法国Biotrol公司，PE10(内径0.3mm,外径0.50mm)；PE50(内径0.58mm,外径0.96mm)；

生物电放大器：MPA-SBBB，上海奥尔科特生物科技有限公司生产。

电子天平：梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司，型号：AL204。

手术器械等。

1.3.实验方法

1.3.1.动、静脉导管的制备

采用两种规格的聚乙烯(Polyethylene，PE)导管，即PE10管(内径0.30mm，外径0.50mm)和PE50管(内径0.58mm,外径0.96mm)制作动脉导管，将PE10管与PE50管加热对接，对接处形成一膨大***，检验对接处牢固、导管通畅后即可应用，应用时将导管充满肝素化PVP液，并将PE50管一端用金属针封闭，PE10管经股动脉***低位腹主动脉。

1.3.2.动脉插管

大鼠以盐酸***50mg/kg和***5mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉后大鼠仰卧位固定，左侧腹股沟处剪毛、消毒，行约2cm长皮肤切口，暴露股动脉鞘，仔细分离股动脉，***充满肝素化生理盐水(200IU/ml)的导管，将动脉导管缝合固定在腹股沟部肌肉上，以引针将导管经皮下至颈项部皮肤穿出。连续缝合腹股沟处皮肤切口，将颈部引出的动脉导管用自制马鞍装置固定以防大鼠清醒后抓咬。

1.3.3.造胃瘘

动静脉插管结束后，腹部正中剪毛、消毒。沿腹白线切开肌肉层，于肝叶下找到胃，在胃壁做荷包缝合，***自制硅胶胃管，收紧荷包。用引针将胃管从一侧腹肌穿至皮下并在颈后皮肤穿出以马鞍固定，缝合肌肉层和皮肤。

1.3.4.清醒自由活动大鼠的血压测量

大鼠插管后恢复24小时，放入自制的有机玻璃圆筒内，将动脉导管与测压***连接，大鼠可以在圆筒内自由活动并自由饮水摄食。每搏血压信号经压力换能器转换为生物电信号，由计算机实时记录每搏血压和心动间期(图2)。经1-2小时的适应稳定后，记录1小时血压心率作为基础值，然后经胃瘘管给药，连续记录给药后24小时血压和心动周期数据，脱机后可以调取记录时间内的任何时间段数据进行分析。

1.4统计处理

实验结果以均数±标准差(_x±s)表示，数据用Excel2010和SPSS18.0软件对组间数据采用ANOVA方差分析，用配对和非配对t检验进行两组间比较，以P<0.05定义为具有显著的统计学差异。

1.5.观察指标

X7单次给药后最低和最高有效剂量。

X7单次给药后起效时间。

X7单次给药后剂量与效应的关系。

X7单次给药后血压降低维持的时间。

X7单次给药后对心率的影响以及心率变化与血压的关系。

1.6.实验结果

1.6.1.X7降低SHR血压的剂量探索

对X7的降压剂量探索从1.25mg/kg开始，该剂量灌胃给药后SHR的收缩压最大降幅只有11mmHg；增加剂量到2.5mg/kg时收缩压下降仍不明显，为13mmHg；但当剂量增加到10mg/kg时，收缩压降低非常显著，在2.5mg、5mg和10mg/kg剂量之间呈现明显的量效关系，即随着剂量的增加，血压也相应降低。血压降低的绝对值在30-36mmHg之间；然而，使用高于10mg/kg的剂量，降压作用并没有相应增加。

以药物使SHR血压收缩压降低大于20mmHg为有效的标准判断，从图2可以看出，X75mg/kg的灌胃给药剂量可使血压降压幅度达到30mmHg，可设为中剂量；向下2.5mg/kg可作为低剂量组、向上10mg/kg可作为高剂量组。

X7给SHR大鼠灌胃给药后，最大降压效果出现在给药后30min。

1.6.2.X7单次灌胃给药降低SHR血压的起效时间观察

用X7和苯磺酸氨氯地平各5mg/kg给SHR灌胃后对血压的观察发现，X7降低血压的起效时间明显比苯磺酸氨氯地平快。与给药前比较，X7灌胃给药后2.5min血压降低12mmHg，5min降低约20mmHg，与0min比较即出现统计学显著性差异(P<0.01)，10min降低达26mmHg；最大降压作用出现在给药后30min。与之相比，氨氯地平降压作用起效较慢，给药后10min血压降低9mmHg，达到血压降低20mmHg的时间在给药后45min，最大降压作用出现在给药后90min。

1.6.3.X7单次给药对SHR血压和心率的影响

X7对SHR血压的影响：

SHR股动脉植入测压导管，经24h恢复后连接清醒自由活动大鼠血压测量装置，连续记录24小时血压，脱机处理数据，将每2小时的血压值平均后发现：

溶媒对照组大鼠收缩压稳定在175mmHg左右，舒张压116-120mmHg之间。

阳性对照组SHR给5mg/kg氨氯地平，给药后血压显著降低，收缩压由给药前的172mmHg降至给药后的最低点135mmHg，降幅达37mmHg，随着给药后时间的延长，血压逐渐回升但回升速度较慢，但直到给药后20h血压仍维持在显著低于给药前的水平，舒张压的变化与收缩压相一致。

受试药X7低剂量(2.5mg/kg)、中剂量(5mg/kg)和高剂量(10mg/kg)三个剂量组，给药后收缩压和舒张压在8h以内也有显著降低，且血压的降低与剂量成依赖关系，即剂量越大，血压降低越明显，高剂量组血压最大降幅为26mmHg，血压降低维持时间为8-10h，12h以后，SHR的收缩压和舒张压回升逐渐接近给药前水平。

X7对SHR心率的影响：

溶媒对照组SHR的心率用药前后变化不大，波动幅度较小。

阳性对照组SHR给氨氯地平5mg/kg后，随着血压的降低，心率加快非常明显，在给药6小时内(在该时间段血压也处于最低值)，心率加快与给药前比较有统计学显著性差异(P<0.01)，由给药前的351次/分，最高增加到416次/分，心率的变化与血压呈负相关，即血压降低，心率加快，血压回升，心率减慢。

X7低中高三个剂量组给药前后比较，随着血压的降低，心率不仅没有升高，反而略有减慢。在给药后0-2h，心率减慢比较明显，到6-8h，随着血压的逐渐回升，心率也逐渐恢复，当血压恢复到给药前水平，心率也基本恢复到给药前状态。

1.7结论

1.7.1.X7降压效果确切，量效关系明确，适合SHR的低中高降压剂量分别为2.5mg/kg、5mg/kg和10mg/kg。

1.7.2.X7单次灌胃给药降低SHR血压起效迅速，降压起效时间较苯磺酸氨氯地平快。

1.7.3.X7单次灌胃给药可以维持SHR血压降低约6-8小时。

1.7.4.X7单次灌胃给药在降低血压的同时有轻度的心率减慢。

实施例2 X7单次给药对肾血管性高血压犬血压和心率的影响

2.1.实验目的

了解受试品X7单次灌胃给药对在清醒状态下两肾一夹(2K1C)肾血管性高血压Beagle犬血压的影响，观察内容包括量效关系、血压降低最大幅度、血压降低维持时间以及对心率的影响。

2.2.实验材料

2.2.1.受试药物

2.2.2.其他实验用试剂

戊巴比妥钠：德国Merck生物技术公司生产，进口分装，规格：25g/瓶，生产批号：WS20130112。

2.2.3.剂量设置

剂量设置：溶媒对照组：生理盐水1ml/kg；

阳性对照组：苯磺酸氨氯地平1.5mg/kg；X7：0.25mg/kg，0.5mg/kg，1mg/kg，1.5mg/kg，2mg/kg，4mg/kg，6mg/kg共7个剂量组。

2.2.4.给药途径、给药容积及给药次数

受试药物临用前用生理盐水溶解，配制成相应浓度等体积溶液；

给药途径：灌胃给药；

给药容积：1ml/kg；给药次数为单次。

2.2.5.实验动物

种属：健康Beagle犬

来源：上海甲干生物科技有限公司

性别：雄雌兼用，体重：8～10kg

数量：22只，成模后的犬随机分为三组，每组6只，余3只备用，每组给药1次后需停药7-10天后可以重复利用。

许可证：SCXK(沪)2010-0028

质量合格证编号：2010002802091

2.2.6.实验仪器

四通道PowerLab8/30高速记录仪，产地：澳大利亚。

桥式放大器：型号：ML211，产地：澳大利亚。

压力换能器，型号：MLT844，产地：澳大利亚。

动物专用多普勒无创血压计：型号：DS-100型，产地：安徽合肥。

手术器械：手术刀、手术剪、止血钳等。

2.3.实验方法

犬用3％戊巴比妥钠30mg/kg静脉注射麻醉，仰卧固定于恒温39℃手术台，上腹部备皮，75％酒精消毒，铺无菌手术单，上腹部正中切口约5cm长，逐层切开皮肤、皮下组织、腹直肌鞘，打开腹膜进入腹腔，于肝下缘找到右侧肾脏，用湿纱布将周围小肠、网膜等分隔并用拉勾拉开腹壁切口，充分暴露右侧肾脏，钝性分离肾周筋膜。在肾静脉下方找到斜行走向的肾动脉并将其游离，与动脉平行放置直径约1mm的不锈钢丝，用4-0丝线将钢丝连同右肾动脉一起结扎，结扎后小心抽出钢丝，不完全恢复肾脏供血。(8-10kg Beagle犬肾动脉直径约小于2mm，将其缩窄后可使肾动脉流量下降约60％)。检查纱布、器械无误后，逐层关腹，缝皮。伤口以酒精纱布覆盖并包扎。术后肌注青霉素钠40万单位/天，连续三天以预防感染。肾动脉缩窄术手术后45天用多普勒无创血压计测量血压，收缩压大于160mmHg为高血压模型合格，然后随机分组，再次用戊巴比妥钠静脉注射麻醉，行股动脉插管手术，术后恢复24h。在清醒状态下联机PowerLab记录监测血压，连接血压记录***后稳定15-30min开始记录作为基础值(给药后0时血压)，然后给药，连续记录给药后0-120min血压变化，之后每隔2h记录血压5min，连续24h。

2.4.统计处理

实验结果以均数±标准差表示，用Excel2010和SPSS18.0软件对组间数据进行ANOVA方差分析，用配对和非配对t检验进行两组间比较，以P<0.05定义为具有显著的统计学差异。

2.5.观察指标

X7对2K1C犬给药剂量与降压效应的关系。

X7对2K1C犬给药后的起效时间。

不同剂量的X7给药后2K1C犬血压最大降低幅度和维持时间。

X7对2K1C犬心率的影响，以及血压变化与心率的关系。

2.6.实验结果

2.6.1.X7对2K1C Beagle犬的量效关系实验

Beagle犬经过一侧肾动脉狭窄手术45天后，用多普勒无创血压计测量血压，当平均收缩压在160mmHg以上，舒张压在90mmHg以上，符合高血压标准后的犬方可进入实验。实验前做股动脉插管手术，恢复24h后在清醒条件下连接压力换能器和PowerLab***记录血压。在犬稳定的状态记录5-10min血压作为基础值(0min)，给药后连续记录120min，以便分析量效关系；然后每间隔2h记录一次血压，每次5-10min，以便分析血压降低维持时间和对HR的影响。

对量效关系的研究实验最低剂量从0.25mg/kg开始，向上增加剂量有0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、2mg/kg、4mg/kg和6mg/kg，共7个剂量。从表1可以看出，不同剂量的X7给药后最大血压降低幅度出现在给药后30min左右；在低于4mg/kg的剂量，血压降低幅度随着剂量的增加而增加，两者之间存在有明显的量效关系。但在剂量超过4mg/kg以后，增加剂量后血压不再相应降低。因此，可以确定X7用于2K1C高血压模型犬降压的合适剂量为：1mg/kg(低剂量)、2mg/kg(中剂量)、4mg/kg(高剂量)(表1，图3)。

表1.X7单次给药对2K1C犬血压的量效关系实验(单位：mmHg；n＝6)

*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001与0min比较

2.6.2.X7单次灌胃给药对降低2K1C Beagle犬血压起效时间的观察

观察药物对2K1C犬的起效时间使用了X7的中剂量，即2mg/kg和阳性药苯磺酸氨氯地平1.5mg/kg。观察时间为给药后120min。单次灌胃后对收缩压分析发现，X7降压的起效时间比氨氯地平快。与0min血压比较，X7灌胃给药后5min，收缩压降低有统计学显著意义，10min降压大于20mmHg。与之相比，氨氯地平降压作用起效较慢，给药后30min血压降低20mmHg并有统计学显著意义(表2)。

表2.X7单次给药后对2K1C犬的血压起效时间的观察

(单位：mmHg；n＝6)

*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与0min比较

2.6.2.X7单次给药对2K1C Beagle犬血压的影响

溶媒对照组犬的血压给药前后一直处于相对平稳状态，24h收缩压波动在165mmHg左右；

阳性对照组，药物为氨氯地平片，剂量为1.5mg/kg，给药后收缩压、舒张压在0-2h降到最低点，降低幅度分别为31mmHg和25mmHg，维持血压平稳降低时间较长，收缩压给药后24h、舒张压给药后10h与给药前比较仍有统计学显著意义。

X7分低中高三个剂量，对血压(收缩压、舒张压)降低有显著量效关系存在，最大降压幅度同样也出现在给药后0-2小时，维持血压平稳降低收缩压大于12h、舒张压大于6h。

2.6.3.X7单次给药对2K1C Beagle犬心率的影响

如表2-4所示，溶媒对照组犬的心率给药前后变化不大，稳定在155次/分左右。

苯磺酸氨氯地平给药后心率加快明显，且心率加快维持时间与血压降低相一致，血压维持平稳降低的时间为22-24h，而心率加快也基本持续在相应时间；增加的幅度由给药前的154±3次/分，最高达到168±11次/分，统计学差异显著(P<0.05)。

X7给药后心率的表现与阳性对照药氨氯地平正好相反，X7给药后心率减慢，心率减慢持续的时间与维持血压降低时间一致，在12h以内。此后，随着血压的回升，心率也逐渐恢复到给药前水平。从X7剂量分析对心率的影响，可以发现心率减慢的程度与剂量有关，即随着剂量的增加，心率减慢也增加，心率减慢在给药后2h最明显，但心率减慢的幅度并不大，以X7高剂量组为例，心率最低为131次/分，给药前为156次/分，减慢了25次/分(表3)。

表3.X7对Beagle犬HR的影响(单位：次/分，n＝6)

*P<0.05，**P<0.01与0min比较

2.7.结论

2.7.1.X7单次给药对降低2K1C犬降压效果确切，量效关系明显，4mg/kg剂量降压可达到50mmHg以上。适合犬降压的低中高药物剂量分别为1mg/kg、2m/kg和4mg/kg。

2.7.2.X7单次给药对降低2K1C犬的血压起效较快，给药后10min即可使血压显著降低，起效时间明显较苯磺酸氨氯地平快。

2.7.3.X7单次给药可维持2K1C犬的血压平稳降低10-12小时，明显较苯磺酸氨氯地平的22-24h短。

2.7.4.X7对犬的心率有轻度减慢作用，心率的变化与血压变化有关，即血压降低，心率减慢，血压升高，心率加快。

实施例3 X7多次给药对2K1C犬和SHR血压和心电图的影响

3.1.实验目的

了解X7多次给药对2K1C犬和SHR是否对心脏传导***有影响，如果有影响，停药后是否可以恢复。

3.2.实验材料

3.2.1.受试药物

X7外观呈白色粉末状，装密封袋放冰箱4℃保存。生产批号：2013103001。使用前用生理盐水临时配制。

3.2.2实验分组与剂量设置

实验根据随机分组的原则设容媒对照和受试品X7各一组，SHR每组12只，Beagle犬每组6只；犬和大鼠的剂量均用中剂量，即SHR 5mg/kg，Beagle犬2mg/kg，每天上午9点左右灌胃给药，给药后60min用无创测压方法检测血压。

3.2.3.其他实验用试剂

3.2.4.实验动物

SHR：

品系：自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat，SHR)。

级别：普通级；性别：雄性；数量：24只；体重：250±20克。

来源：SHR系本教研室从美国引种繁殖。用普通大鼠饲料喂养，自由饮水，光线12小时明暗自动转换，室内温度20-22℃。

Beagle犬：

来源：上海甲干生物科技有限公司；性别：雄雌兼用；体重：9～10kg；数量：6只；许可证：SCXK(沪)2010-0028；质量合格证编号：2010002802091。

3.2.5.仪器与材料

大鼠无创血压测量仪：上海奥尔科特生物科技有限公司，型号：ALC-NIBP。

4通道PowerLab8/30高速记录仪，型号：ML870/P，产地：澳大利亚。

生物电放大器，型号：ML132，产地：澳大利亚。

注射器、灌胃针等。

3.3.实验方法

犬和大鼠用无创测压方法测量血压，每天一次连续7天。第7天大鼠在麻醉状态下、犬在清醒状态下用PowerLab记录标准加压肢体导联II导联心电图，用PowerLab自带分析软件自动测量QT时间、QRS综合波时间等心电图指标作为基础值；然后灌胃给药，每天一次，连续7天。每天给药时间相对固定，给药后60min测量血压一次。第7天给药后再次测量心电图，心电图的分析结果作为给药后值；然后停止给药，每天测血压一次，连续7天，停药后第7天后再次测量II导联。将用药前中后三次的心电图加以比较，了解药物是否影响心电的传导以及影响停药后的恢复情况。

3.4.观察指标

犬和大鼠正常状态的血压、心率和心电图指标(QT时间、QRS综合波宽度、T波宽度、和ST段高度)。

用X7连续用药7天后犬和大鼠的血压、心率和心电图指标(QT时间、QRS综合波宽度、T波宽度、和ST段高度)。

如果上述指标受到药物影响，停药一周后是否可以恢复。

3.5.统计处理

3.6.实验结果

3.6.1.SHR测试结果

血压：给药前对SHR的血压测量了一周时间，收缩压平均在175±3mmHg，随后给X75mg/kg，每天一次，连续一周，检测血压为140±8mmHg，平均降幅达35mmHg，停药一周后，血压恢复到给药前水平。舒张压的变化与收缩压相一致。

心率：给药前一周平均心率346±76次/分，用药一周后心率没有随着血压的降低而加快，反而略有减慢，平均为326±54次/分，停药一周后测量心率为329±59次/分，与基础值比较无统计学显著性意义。

心电图：经对QT时间和ST段变化分析，X7多次给药对SHR心电图没有影响(表4)。

表4.X7多次给药对SHR血压、心率和心电图的影响(n＝12)

***P<0.001与基础值比较

3.6.1.2 K1C Beagle犬测试结果

血压：给药前对6只2K1C犬每天测量一次血压，连续7天的平均值作为给药前的血压基础值，基础值的收缩压为170±4mmHg；然后给X72mg/kg，每天一次连续7天，给药期间每天测收缩压一次，测量时间在给药后60min，治疗期间的平均血压为140±4mmHg，与给药前比较收缩压降低了30mmHg；此后停药的一周里每天仍然测量血压一次，平均血压为175±4mmHg，恢复到了给药前水平，

心率：2K1C犬的心率基础值为150±9次/分，一周治疗结束时心率138±12次/分，与基础值比较心率略有减慢，降低了12次/分，停药后一周，心率基本恢复到给药前状态。

心电图：QT时间给药后延长了0.01s，QRS综合波宽度时间延长了0.01s，这两者和对照基础值相比无统计学显著性，亦未超出其生理性波动范围，且停药后均恢复到给药前水平(表5)。

表5.X7用药前后2K1C犬血压、心率和心电图变化(n＝6)

*P<0.05，**P<0.01与基础值比较

3.7.实验结论

3.7.1.X7多次给药对SHR和2K1C犬的血压有显著降低作用，停药后可以恢复到给药前水平。

3.7.2.X7多次给药后SHR和2K1C犬的心率均有不同程度的减慢，停药一周后心率恢复接近给药前水平。

3.7.2X7多次给药对2K1C犬心电图的QT间期和QRS综合波时间略有延长，这两者和对照基础值相比无统计学显著性，亦未超出其生理性波动范围，且停药一周后可恢复。

实施例4 X7单次给药对SD大鼠血流动力学的影响

4.1.实验目的

了解X7对大鼠血流动力学指标是否有影响。

4.2.实验材料

4.2.1.受试药物

4.2.2.实验分组与剂量设置

实验分组：实验根据随机分组原则设溶媒对照组、阳性对照组、受试品X7设低中高三个剂量组，共五组，每组大鼠数量为10只。

剂量设置：溶媒对照组，生理盐水5ml/kg；阳性对照组，氨氯地平5mg/kg；X7低剂量组(2.5mg/kg)；中剂量组(5mg/kg)；高剂量组(10mg/kg)。

4.2.3.其他实验用试剂

乌来糖：国药集团化学试剂有限公司生产，规格：500g/瓶，纯度：≥98％，生产批号：20130609。使用时用双蒸水配制25％溶液。

4.2.4.给药途径、给药次数及给药容积

受试药物临用前用生理盐水溶解，稍微超声制成相应浓度等体积溶液；给药途径：通过胃造瘘给药代替灌胃给药，给药容积：5ml/kg；给药次数为单次。

4.2.5.实验动物

品系：60只健康SD大鼠。

级别：SPF级。

性别：雄性。

动物生产许可证号：SCXK(沪)2008-0016。

实验动物质量合格证：2008001641813。

体重：200±20克。

来源：第二军医大学(实验动物中心)。

动物购回后在本单位实验动物房分笼适应性饲养三天，用普通大鼠饲料喂养，自由饮水，光线12小时明暗自动转换，室内温度20-22℃。

4.2.6.仪器

MPA2000：上海奥尔科特生物科技有限公司生产，型号：MPA2000。

天平：美国双杰兄弟(集团)有限公司，常州双杰测试仪器厂生产，型号：T1000。

4.3.实验方法

SD大鼠称重后用25％乌拉坦1.5g/kg腹腔注射麻醉，并固定，将舌牵出以防止舌后坠引起窒息。手术区域剃毛，75％酒精消毒，分离一侧股动脉***充满100u/ml的肝素生理盐水的自制动脉导管；切开颈部皮肤，分离右侧颈总动脉，***自制心导管。动脉导管和心导管连接压力换能器，压力换能器和生物电放大器经MPA2000与电脑相连，实时显示心电波形和动脉压力波形，缓慢推进心导管，到达主动脉瓣口时轻轻转动导管，当动脉压力波型突然变成标准的心室内方波表示导管已经进入左心室，固定导管。针状电极***四肢皮下连接生物电放大器。按500U/kg静脉注射肝素使其肝素化，以防止导管堵塞。手术操作完毕，动物稳定15分钟记录下述指标作为基础值(0时)。然后通过胃瘘管缓慢注入相应的受试药物，于给药后5、15、30、60、90和120min分钟重复测量观察指标。手术过程中若收缩压低于80mmHg持续达5分钟以上(非药物所致)则该动物作废弃处理。

4.4.观察指标

心率(HR)、平均动脉压(MBP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室等容收缩、舒张期最大变化速率(±dp/dtmax)。

4.5.统计处理

4.6.实验结果

4.6.1.X7单次给药对SD大鼠MBP和HR的影响

对MBP的影响：

容积对照组SD大鼠的MBP平均在93mmHg左右，从实验开始到观察结束的120min一直处于相对稳定状态；

阳性对照组氨氯地平，剂量5mg/kg，给药后30min开始血压逐渐下降，到给药后120min降压幅度最大，为31mmHg；

受试品X7给药后降低血压的起效时间比阳性对照药氨氯地平快，给药后5min即出现血压显著降低，随着剂量的增加，MBP降低幅度也相应增加，说明X7降低平均动脉压有明显的量效关系存在。X7给药后MBP降低的最大幅度也在120min，低中高三个剂量组的最大血压降幅分别为24mmHg、27mmHg和30mmHg(表6)。

对心率的影响：

从表7可以看出，给药前后比较，溶媒对照组大鼠的心率稳定，给药前后变化不明显。

氨氯地平在给药后即出现心率加快，参考氨氯地平对血压的影响可以发现，在给药30min后，血压降低幅度开始增加，而心率也相应加快，到结束实验时(给药后120min)，心率由给药前的363次/min，增加到390次/min，给药前后比较，心率的增加非常显著。

X7低中高三个剂量组给药随着血压的降低心率不仅没有增加，反而有不同程度的减慢，在给药5min后，心率出现减慢，到给药后15min以后，心率减慢与给药前比较有统计学显著意义，并一直维持到实验结束。

表6.X7对大鼠MBP的影响(单位：mmHg；n＝10)

*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与0min比较

表7.X7对大鼠心率的影响(单位：次/分；n＝10)

*P<0.05，**P<0.01与0min比较

4.6.2.X7单次给药对SD大鼠左心室功能的影响

X7对LVSP的影响：

与对MBP的影响一致，用药前后比较，X7低中高三个剂量和阳性对照药氨氯地平均有非常显著的降低LVSP的作用。给药后120min，氨氯地平降低LVSP达38mmHg，X7低中高三个剂量分别降低大鼠的LVSP为28mmHg、33mmHg和41mmHg，不仅降低LVSP的幅度大，而且在低中高剂量之间有量效关系存在(表8)。

对LVEDP的影响：

从表9中可以看出，溶媒对照组和药物治疗组的LVEDP值很接近，给药前后变化不大，都在10mmHg以下，没有统计学差异，说明X7不影响麻醉大鼠的LVEDP。

对±dp/dtmax的影响：

X7和阳性对照药氨氯地平给药前后比较或在不同时间点与溶媒对照组比较，数据接近，没有统计学差异，说明X7和氨氯地平均对±dp/dtmax没有影响(表10，11)。

表8.X7对大鼠LVSP的影响(单位：mmHgn＝10)

*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与0 min比较

表9.X7对大鼠LVEDP的影响(单位：mmHgn＝10)

表10.X7对大鼠左心室收缩最大速率(+dp/dtmax)的影响(单位：mmHgn＝10)

*P<0.05，**P<0.01与0min比较

表11.X7对大鼠左心室舒张最大速率(-dp/dtmax)的影响(单位：mmHgn＝10)

4.7.实验结论

4.7.1.X7单次灌胃给药对大鼠血流动力学有明显的影响，主要表现为显著地降低血压和左心室收缩压。

4.7.2.X7在降低血压的同时伴有心率轻度减慢。

4.7.3.X7对大鼠左心室舒张末压和左心室最大收缩和舒张速率没有影响。

实施例5 X7单次给药对Beagle犬血流动力学的影响

5.1.实验目的

了解X7单次给药对麻醉Beagle犬左心室血流动力学指标、外周血管血流量和血管阻力的影响。

5.2.实验材料

5.2.1.受试药物

5.2.2.实验分组与剂量设置

实验分组：实验根据随机分组的原则设溶媒对照组、阳性对照组、受试品X7设低中高三个剂量组，共五组，每组动物数量为6只。

剂量设置：溶媒对照组，生理盐水5ml/kg；阳性对照组，苯磺酸氨氯地平1.5mg/kg；X7低剂量组(1mg/kg)、中剂量组(2mg/kg)；高剂量组(4mg/kg)。

5.2.3.其他实验用试剂

戊巴比妥钠：德国Merck生物技术公司生产，进口分装，规格：25g/瓶，批号：WS20130112。

5.2.4.给药途径、给药次数及给药容积

受试药物临用前用生理盐水溶解，稍微超声制成相应浓度等体积溶液；给药途径：十二指肠造瘘给药；给药容积：1ml/kg；给药次数为单次。

5.2.5.实验动物

种属：健康Beagle犬。

来源：上海谓山动物养殖场。

性别：雄雌兼用。

数量：31只。

体重：8～10kg。

许可证：SCXK(沪)2010－0027。

质量合格证编号：2005000400050。

5.2.6.实验仪器

PowerLab：埃德仪器国际贸易(上海)有限公司，型号：ML830。

Transonic电磁血流量仪：型号：T420，产地：美国。

动物呼吸机：上海奥尔科特生物科技有限公司，型号：ALC-V10B。

高频电刀：苏州康迪电子有限公司，型号：S900E。

5.3.实验方法

Beagle犬用3％戊巴比妥钠(30mg/kg)经小腿静脉注射麻醉后，仰卧固定于恒温(39℃)手术台上，颈部、双侧股动脉沟、左胸部手术剃毛，75％的乙醇消毒手术区；分离右侧股动脉并插管连接压力换能器与PowerLab相连用于检测血压，分离左侧股动脉连接流量探头用于测定动脉流量；切开颈部皮肤暴露气管，做倒T字切口，连接呼吸机，做机械通气(呼吸机设定：频率22次/min，呼吸比1:2，潮气量20ml/min)；分离右侧颈外动脉连接流量探头用于测量颈总动脉血流量；取胸骨左侧纵向切口，切断第3-4肋骨暴露心脏，打开心包并做心包吊床，分离冠状动脉左旋支起始部和主动脉根部，涂抹耦合剂，放置探头用于测量心输出量和冠状动脉血流量；用套管针从心尖部***左心室，连接压力换能器用于检测左心室内压等血流动力学指标；将针状电极***四肢远端皮下用于记录心电图；十二指肠造瘘便于给药。手术操作结束稳定15min，记录各项数据作为基础值(0min)，然后十二指肠瘘管给药，记录给药后5、15、30、60、90、120min血流动力学数据和血流量数据。

5.4.观察指标

记录指标：心率(HR)、平均动脉压(MBP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室最大收缩与舒张速率(±dp/dtmax)、心输出量(CO)、冠状动脉流量(CBF)、颈总动脉流量(CF)、股动脉流量(FAF)。

指标的计算：

心脏指数(CI)＝心输出量(L/ml)/体表面积(m²)

冠状动脉流量(CBF；ml/min/100g心肌)＝(实测值(ml/min)/心肌重量(g))*100

冠状动脉阻力(CAR；mmHg/ml/min)＝平均动脉压/冠脉流量

体循环总外周阻力(TPR；mmHg/ml/min)＝平均动脉压(mmHg)/心输出量(ml/min)

5.5.数据及统计学分析

5.6.实验结果

5.6.1.X7单次给药对Beagle犬MBP和HR的影响

对MBP的影响：

对血压正常的Beagle犬给溶媒生理盐水前后MBP仅在一个狭窄的范围内波动，波动范围在86-90mmHg之间。

治疗组苯磺酸氨氯地平和X7均有显著降低Beagle犬血压的作用，从给药后5min到实验结束时的120min，血压持续降低。阳性对照药苯磺酸氨氯地平1.5mg/kg剂量，使犬的MBP由给药前的92mmHg逐渐减低到120min时的71mmHg；而X7低中高三个剂量组不仅使平均动脉压同样降低，而且在低中高三个剂量组之间有量效关系存在，即随着X7剂量的增加，MBP的降低也随之增加(表12)。

对HR的影响：

从表13可以看出，溶媒组犬的HR给药前后变化不大，阳性对照组给苯磺酸氨氯地平后HR逐渐加快，由154次/分，逐渐升高到120min时的173次/分，HR增加19次/分。X7给药后HR的表现与苯磺酸氨氯地平正好相反，X7给药后HR变化是减慢，而且HR的减慢与剂量有关，剂量越大HR减慢越明显。

表12.X7对Beagle犬MBP的影响(单位：mmHgn＝6)

*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与0min比较

表13.X7对Beagle犬HR的影响(单位：次/分；n＝6)

*P<0.05，**P<0.01与0min比较

5.6.2.X7单次给药对Beagle犬左心室功能的影响

对左心室收缩压(LVSP)的影响：

对LVSP的影响与对血压的影响一致，治疗组犬的LVSP在给药后持续降低，给X7犬的LVSP降低与剂量有关，即剂量增加，LVSP降低明显，说明X7降低犬的LVSP也有量效关系存在(表14)。

对左心室舒张末压(LVEDP)的影响：

溶媒对照组、阳性对照组和X7低中高三个剂量组均不影响LVEDP，受试各组的LVEDP值也均在正常范围(表15)。

对左心室最大收缩与舒张速率(±dp/dtmax)的影响：

从表16、17可以看出，用配对T检验比较0min与给药后的+dp/dtmax，虽然绝对值比较接近，但仍出现有统计学显著性差异，但没有量效关系的存在；将治疗组的±dp/dtmax与溶媒对照组同时间点比较，则绝对值非常接近，没有统计学显著性差异。

表14.X7对Beagle犬LVSP的影响(单位：mmHg/s；n＝6)

*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与0min比较

表15.X7对Beagle犬LVEDP的影响(单位：mmHg；n＝6)

表16.X7对Beagle犬+dp/dtmax的影响(单位：mmHg/s；n＝6)

*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与0min比较

表17.X7对Beagle犬-dp/dtmax的影响(单位：mmHg/s；n＝6)

*P<0.05与0min比较

5.6.3.X7单次给药对Beagle犬血流量的影响

X7对心输出量(CO)的影响：

实验发现，阳性对照药苯磺酸氨氯地平有增加CO的作用，该组CO给药前平均为0.95L/min，给药后大部分测量时间点CO值在1.05L/min，用药前后比较CO相差有统计学显著性(P<0.05)，这可能与氨氯地平用药后的心率加快，导致CO升高有关。

受试X7给药后有减慢心率的作用，因此CO值在给药后也下降，从低中高三个剂量组的CO值分析，CO的降低与给药剂量有关，剂量越大，CO越低(表18)。

X7对冠状动脉血流量(CBF)的影响：

用药前后比较，溶媒对照组的CBF虽然有降低，但降低程度有限，没有统计学差异；阳性对照给药后在30min之内CBF增加明显，从给药前的84.2ml/min，增加到用药后60min的91.7ml/min，随后逐渐下降到接近给药前水平。

受试品X7用药后CBF变化与CO一致，用药后CBF降低且与用药剂量有关(表19)。

X7对颈总动脉血流量(CF)和股动脉血流量(FAF)的影响：

溶媒对照组、阳性对照组、X7低中高三个剂量组对CF的影响与对CO的影响相似，阳性对照药有轻度升高CF的作用；X7给药后CF逐渐降低，高剂量组降低最明显，由用药前的84.5ml/min，降低到用药后120min时的63.3，降幅明显(表20)。与CF流量相比，X7对FAF的影响较小，从表21可以看出，溶媒对照组和治疗组给药后各时间段与0min比较，FAF数据相对稳定。

表18.X7对Beagle犬CO的影响(单位：L/min；n＝6)

*P<0.05，**P<0.01，P<0.001与0min比较

表19.X7对Beagle犬CBF的影响(单位：ml/min/100g心肌；n＝6)

*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与0min比较

表20.X7对Beagle犬CF的影响(单位：ml/min；n＝6)

*P<0.05，**P<0.01，P<0.001与0min比较

表21.X7对Beagle犬FAF的影响(单位：ml/min；n＝6)

5.6.4.X7单次给药对麻醉开胸Beagle犬血管阻力和心脏指数的影响

对总外周阻力(TPR)的影响：

溶媒组的TPR给药前后非常稳定，仅在92-94dyn·s·cm^-5范围内波动。治疗组氨氯地平和X7给药后TPR逐渐降低。氨氯地平的TPR给药前为98.6，给药后逐渐降低，到给药后120min时降低到69.4，前后比较降低相差非常显著(P<0.0001)；

X7给药后也有降低TPR的作用，但维持时间较短，仅在给药后30minTPR的降低与给药前比较有统计学显著意义，此后，TPR逐渐升高接近给药前水平(表22)。

表22.X7对Beagle犬TPR的影响(单位：TPR，dyn·s·cm^-5 n＝6)

*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与0min比较

对心指数(CI)的影响：

溶媒对照组用药前后CI稳定在1.78左右；阳性对照药的给药后CI升高明显，给药前为1.87，给药后5min即升高并维持在2.0以上，并一直维持到用药后的120min；

X7给药后CI的表现正好与阳性对照药苯磺酸氨氯地平相反，X7给药后CI逐渐降低，而且CI的降低与剂量有关，剂量越大，CI下降越明显(表23)。

表23.X7对Beagle犬CI的影响(单位：L/min/m² n＝6)

*P<0.05，**P<0.01与0min比较

对冠状动脉阻力(CAR)的影响：

如表24所示，给药后各时间点与0时比较，溶媒对照组Beagle犬的CAR略有升高，但升高没有达到统计学显著意义。治疗组给药后CAR显著降低，特别是阳性对照组和X7高剂量组的CAR下降最明显，给药后持续降低并一直维持到实验结束时的120min。

表24.X7对Beagle犬CAR的影响(单位：mmHg/ml/min；n＝6)

*P<0.05，**P<0.01，P<0.001与0min比较

5.7.实验结论

5.7.1.X7对麻醉开胸犬的平均动脉压有显著的降低作用。

5.7.2.X7降压的同时伴有心率减慢。

5.7.3.X7可降低对麻醉开胸犬的左心室收缩压，但不影响左心室舒张末压。

5.7.4.X7有降低心输出量和冠状动脉流量的作用，对颈总动脉血流量有降低作用，但对股动脉血流量没有影响。

5.7.5.X7有降低冠状动脉阻力和总外周阻力的作用，但降低总外周阻力维持的时间较短。

5.7.6.X7对心脏指数有降低作用。

实施例6 X7长期给药对SHR血压、血压波动性、ABR功能和器官保护作用的影响

6.1.实验目的

了解受试药X7长期给药对自发性高血压大鼠(SHR)血压(BP)、血压波动性(BPV)、动脉压力感受反射敏感性(BRS)的影响和对高血压造成的器官损伤是否有保护作用。

6.2.实验材料

6.2.1.受试药物

受试药：代号X7，外观呈白色粉末状，4℃密闭保存。生产批号：2013103001。X7实验中制成药物饲料喂食。

阳性对照药：苯磺酸氨氯地平，由浙江新赛科药业有限公司生产，外观呈白色粉末状，4℃密封保存，产品批号：07151007。

6.2.2.实验试剂

0.9％氯化钠注射液：由山东华鲁制药有限公司生产，规格：500ml，批准文号：国药准字H37022749，生产批号：E14112114。

肝素钠：由上海圆创生物科技有限公司生产，规格：5g/瓶，生产批号：Lot73685321。

盐酸***注射液：由福建古田药业有限公司生产，规格：2ml：10mg/支，国药准字：H3502148，批号：130303。

***注射液：由河南省安阳市益康制药厂生产，规格：2ml：10mg/支，国药准字：H41021491，批号：1403031。

盐酸去氧肾上腺素注射液：由上海禾丰制药有限公司生产，规格：1ml：10mg，沪卫药准字(1995)第010045号，产品批号：011001。使用时配制成40ug/ml工作液，即1ml去氧肾上腺素原液加入250ml生理盐水稀释。

6.2.3.剂量设置及分组

实验分为3组，即：

溶剂对照组：生理盐水；

阳性对照组：氨氯地平，5mg/kg；

受试药：X7，10mg/kg；

每组动物数量20只，雌雄各半。

6.2.4.给药途径

给药方式：制备含药饲料供大鼠自由摄取；

经多次测量，SHR平均每日进食量为50g/kg/d，按阳性组氨氯地平5mg+大鼠饲料粉50g，和受试药X710mg+大鼠饲料粉50g，充分混匀后制成两种药物饲料，供SHR随意摄取。

6.2.5.实验动物

品系：4月龄自发性高血压大鼠(SHR)；

级别：普通级；

性别：雌雄各半；

数量：60只；

体重：雄性SHR体重，350±20g；雌性SHR体重，200±20g；

6.2.6.实验仪器

大鼠尾动脉无创测压装置：由上海奥尔科特科技有限公司生产。

大鼠清醒自由活动血压连续测量装置：上海奥尔科特科技有限公司生产。

压力换能器：由上海奥尔科特科技有限公司生产。

压力信号放大器：由上海奥尔科特科技有限公司生产，型号：MPA-HBBS。

恒速推注泵：由浙江医科大学仪器厂生产，型号：WZ-50G注射机。

聚乙烯管：法国Biotrol公司，PE10(内径0.3mm，外径0.50mm)；PE50(内径0.58mm，外径0.96mm)。

生物电放大器：由上海奥尔科特生物科技有限公司生产，型号：MPA-SBB。

电子天平：由梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司，型号：AL204。

6.3.实验方法

6.3.1.体重变化

SHR达到四月龄随机分组后进入实验编组，用苦味酸编号并称重，以后每30天称量一次体重。

6.3.2.长期给药期间的SHR血压检测

给药前用尾动脉无创测压的方法测量SHR基础血压，隔天1次，连续3次，

3次血压的平均值作为基础值。然后开始喂食药物饲料(对照组用普通鼠饲料喂养)，给药后每3天检测一次尾动脉压，连续3次，以后每月检测一次，连续检测4个月。

6.3.3.长期治疗后SBPV、HPV及BRS功能的检测

给药4个月后，大鼠用盐酸***50mg/kg和***5mg/kg腹腔注射麻醉，仰卧位固定，左侧腹股沟处剪毛、消毒，切开皮肤，暴露股动脉鞘，仔细分离股动脉和股静脉。经股动脉***充满肝素化生理盐水的动脉导管，直至低位腹主动脉，再经股静脉***静脉导管。将动静脉导管用引针经皮下上行至颈项部皮肤穿出。缝合皮肤切口，再将颈项部引出的动静脉导管用自制马鞍固定以防大鼠清醒后抓咬导管，插管结束后将大鼠送回动物房饲养24h。

大鼠恢复24h后，放入自制的圆筒内，将动脉导管与测压***连接，大鼠可以在圆筒内自由活动和饮水摄食。每搏血压信号经压力换能器转换为生物电信号，由计算机实时记录每搏血压和心动间期。联机后的大鼠经1～2h的适应，待血压心率稳定后，记录1h的血压和心率用于计算SBPV和HPV，然后在记录血压的同时，经静脉管注射盐酸去氧肾上腺素5ug/kg，使血压升高20～50mmHg，待血压恢复至基础血压后，再次注射，连续3次，脱机后计算BRS。

6.3.4.高血压相关重要脏器大体标本观察

本实验检测的与高血压相关的主要器官有心脏、脑、肾脏和主动脉。BRS检测后，过量麻醉处死大鼠，打开胸腔和腹腔，取出心脏、截取3cm长的胸主动脉、双侧肾脏和全脑称重。计算心脏指数(HW/BW)、右肾指数(RKW/BW)、左肾指数(LKW/BW)、脑指数(BW/BW)、以及胸主动脉指数(AW/Length)。

6.3.5.高血压相关重要脏器HE染色光学显微镜下观察

每组取1、3、5号动物的脑、心脏、右侧肾脏和胸主动脉制成病理切片，行HE染色，进行病理观察和评分(见病理照片和病理检查结果部分)。

6.4.观察指标

给药期间体重和血压变化。各组间SBPV、HPV。各组间的BRS。

各组间大鼠全心重/体重(HW/BW)、右肾重/体重(RKW/BW)、左肾重/体重(LKW/BW)、脑重/体重(BW/BW)和胸主动脉重/长度(AW/length)。

大鼠肾脏肾小球硬化评分(GSS)。

附：GSS方法：(在肾脏皮层随机以50个肾小球作为基数进行GSS)

0级：无肾小球系膜膨胀；

1级：轻微肾小球系膜膨胀(少于30％)；

2级：中度肾小球系膜膨胀(介于30-60％)；

3级：重度肾小球系膜膨胀(多于60％)；

4级：肾小球硬化。

GSS分值计算方法＝(1分×1级肾小球病变数目+2分×2级肾小球病变数目+3分×3级肾小球病变数目+4分×4级肾小球数目)/实测肾小球病变数目×100％。

病理组织学检查：脑、心脏、右侧肾脏和胸主动脉病变情况。

6.5.统计处理

实验结果以均数±标准差表示，用Excel 2010和SPSS 18.0软件对组间数据进行ANOVA方差分析，用配对和非配对t检验进行两组间比较，以P<0.05定义为具有显著的统计学差异。

6.6.实验结果

6.6.1.X7长期给药对SHR体重的影响

由于开始实验时SHR已有四个月龄，已是成年。因此，经过四个月的喂养，体重较为稳定，没有出现因肥胖或拒食含药饲料而出现体重较大波动从而影响血压等问题(表25)。

表25.X7长期给药对SHR各时间段体重变化的影响(单位：g；n＝20)

*p<0.05与0天比较

6.6.2.X7长期给药期间各组SHR血压和心率的变化

⑴对血压的影响

溶剂对照组SHR的SBP给药前的基础值平均值在172±4mmHg，给药后随着饲养时间的延长，血压有缓慢升高趋势，到实验结束共饲养了111天，血压一直稳定在170-180mmHg；给氨氯地平的阳性对照组和受试药X7治疗组开始治疗前血压与溶剂对照组接近，均在173mmHg，开始治疗后一周，血压即显著下降，氨氯地平组平均降幅达30mmHg，X7治疗组平均降幅为26mmHg。到实验结束时，两个治疗组的血压降低幅度均达20mmHg以上并稳定在较低状态，与溶剂对照组同时间点比较均有显著的统计学差异(表26)。

表26.X7长期给药对SHR SBP的影响(单位：mmHg；n＝20)

***P<0.001与0天比较

⑵对心率的影响

溶剂对照组SHR的心率治疗前后心率稳定在400次/分左右；氨氯地平阳性对照组大鼠的心率给药后略有升高，但升高有限(给药前404次/分；给药后最高值434次/分)；受试药X7组大鼠的心率治疗前后均比较稳定，平均在410次/分左右；阳性组和受试药组SHR的心率与溶剂对照组同时间点比较没有统计学显著性差异(表27、28)。

表27.X7长期给药对SHR SBP的影响(单位：mmHg；n＝20)

***P<0.001与0天比较

表28.X7长期给药对SHR HR的影响(单位：次/分；n＝20)

6.6.3.X7长期给药对SHR的SBPV、HPV和BRS功能的影响

⑴对SBPV和HPV的影响

经过4个月的长期治疗，与溶剂对照组比较发现，X7的HPV略升高、阳性对照组氨氯地平的HPV升高较明显，但无统计学显著性差异；对SBPV的影响为，两个治疗组的SBPV绝对值虽有降低，但降低幅度有限，也没有达到统计学显著性差异(表29)。

⑵对BRS功能的影响

本单位以往的研究发现，高血压动物均有不同程度的BRS降低，BRS降低越严重，高血压动物的靶器官损伤程度也就越严重，如果药物能有效改善BRS，则器官损伤程度会减轻。本次实验发现，溶剂对照组SHR的BRS检测结果为0.27±0.05，给氨氯地平(F＝55.0，P＝0.000)和X7(F＝61.0，P＝0.000)的治疗组分别为0.55±0.15和0.53±0.14，与溶剂对照组比较，BRS功能有显著改善(表29)。

表29.长期给药对SPPV、HPV和BRS的影响(n＝20)

***P<0.001vs溶剂对照组

6.6.4.X7长期给药对SHR心脏、肾脏、胸主动脉、脑指数的影响

经过111天治疗，氨氯地平和X7治疗组心脏指数、肾脏指数、脑指数和胸主动脉指数与溶剂对照组比较均无明显变化(表30)。

表30.X7长期给药对SHR心脏、肾脏、胸主动脉、脑指数的影响(n＝20)

6.6.5.X7长期给药对SHR肾脏GSS评分的影响

以肾小球硬化程度的半定量化指标做为高血压对肾脏损害的标准进行评分，实验发现，溶剂对照组大鼠的肾脏病变较为严重，肾小球病变以2-3级为主，GSS的分值为1.75±0.07；阳性药氨氯地平和受试药X7治疗组的大鼠肾小球病变程度明显较溶剂对照组轻，以1-2级为主，GSS分值分1.57±0.08和1.51±0.06，与溶剂对照组比较具有统计学显著性差异，说明X7和氨氯地平长期治疗对由高血压造成的肾脏损害有明显的保护作用(表31)。

表31.X7长期给药对SHR肾脏GSS评分的影响(n＝20)

*P<0.05，**P<0.01VS溶剂对照组

6.6.6.高血压靶器官损伤病理改变

心肌组织(图4～图6)

模型组：大鼠心肌纤维排列整齐，心肌间隙增宽，心肌细胞轻度肥大，心肌间质水肿，间质纤维化，胶原纤维增生，心肌细胞片状坏死，少量单核细胞、淋巴细胞浸润。

阳性对照组：心肌纤维排列整齐，心肌细胞未见肥大，间质纤维化，胶原纤维增生，心肌细胞片状变性或坏死，未见单核细胞、淋巴细胞浸润。

X7治疗组：给药组心肌纤维排列整齐，心肌细胞形态正常，间质纤维化，胶原纤维增生减少，心肌细胞片状变性或坏死，未见单核细胞、淋巴细胞浸润。

肾组织(图7～图9)

模型组：大鼠肾脏可以看到肾小球系膜细胞增生、基质弥漫性增加，肾小球萎缩、坏死，肾动脉纤维化和玻璃样变，大量淋巴细胞、单核细胞和成纤维细胞浸润。

阳性对照组：肾小球形态完整，少量肾动脉纤维化和玻璃样变，肾组织和肾小球内仍有大量淋巴细胞、单核细胞和成纤维细胞浸润。

X7治疗组：给药组肾小球形态完整，基质间隙正常，少量肾动脉纤维化，肾组织和肾小球内淋巴细胞、单核细胞和成纤维细胞浸润较模型组减轻。

脑组织(图10～图12)

模型组：大鼠脑组织内神经细胞排列正常，周围间隙无明显增宽，无炎症细胞浸润，偶见出血点和神经细胞水肿。

阳性对照组：神经细胞排列正常，周围间隙无增宽，未见炎症细胞浸润。

X7治疗组：神经细胞排列正常，周围间隙无明显增宽，无炎症细胞浸润，偶见出血点和神经细胞水肿。

主动脉(图13～图15)

模型组：大鼠胸主动脉的血管壁较厚、壁厚/内径比率较大。

阳性对照组和X7治疗组：胸主动脉的血管壁较薄、壁厚/内径比率显著小于模型组。

6.7.实验结论

6.7.1.X7长期口服途径给药可显著降低SHR血压，治疗前后血压降低大于20mmHg以上并能维持稳定。

6.7.2.X7长期给药能改善SHR动脉压力感受性反射功能的敏感性，从而对高血压造成的器官损伤有保护作用。

6.7.3.X7长期给药对高血压造成的肾小球损害有保护作用。

实施例7 X7长期给药对SHR-SP生存时间的影响

7.1.实验目的

了解X7长期给药是否能延缓SHR-SP脑卒中的发生而延长生存时间。

7.2.实验材料

7.2.1.受试药物

受试药：代号X7，外观呈白色粉末状，4℃密闭保存。生产批号：2013103001。X7难溶于水，实验中制成药物饲料喂食。

7.2.2实验试剂

氯化钠：由国药集团化学试剂有限公司生产，规格：500g，批号：F20101203。

7.2.3.剂量设置及分组

实验分为3组，即：

溶剂对照组：生理盐水；

阳性对照组：氨氯地平，5mg/kg；

受试药：X7，10mg/kg；

每组动物数量10只。

7.2.4.给药途径

给药方式：制备含药饲料供大鼠自由摄取；

经多次测量，SHR-SP平均每日进食量为50g/kg/d，按阳性组氨氯地平5mg+大鼠饲料粉50g，和受试药X710mg+大鼠饲料粉50g，充分混匀后制成两种药物饲料，供SHR-SP随意摄取。

7.2.5实验动物

品系：有脑卒中倾向的自发性高血压大鼠(SHR-SP)；

级别：普通级；

性别：雄性；

体重：350g±20g；

数量：30只；

该品系是本教研室从国外引种，在本校实验动物中心SPF级动物房饲养繁殖，6月龄运回教研室实验动物房，普通饲料喂养，饮用1％的盐水以加速脑卒中的发生，室内温度20-22℃，光线12小时明暗自动转换。

7.3.实验方法

每批达到6月龄的SHR-SP经过随机分组后进入实验编组，用苦味酸编号并称重，每30天称量一次体重。

给药前用尾动脉无创测压的方法测量SHR-SP的基础血压，隔天1次，连续3次，3次血压平均值作为基础值。然后开始喂食药物饲料(对照组用普通鼠饲料喂养)并将饮用水改为1％的盐水，给药物饲料的初期每3天测一次血压，连续3次，以后每一个月检测一次血压，连续4个月。

每天观察并记录动物死亡情况，观察时间到三组大鼠的存活率有显著差异即可停止实验，统计各组大鼠存活率，绘制生存时间曲线。

7.4.观察指标

治疗期间体重变化。

血压(SBP)。

各组SHR生存率。

7.5统计处理

实验结果以均数±标准差表示，用Excel2010和SPSS18.0软件对组间数据进行ANOVA方差分析，用配对和非配对t检验进行两组间比较，大鼠生存百分率用卡方检验，以P<0.05定义为具有显著的统计学差异。

7.6.实验结果

7.6.1.X7长期治疗对大鼠体重的影响

SHR-SP六个月已是成年大鼠，因此，在四个月的治疗期间，体重相对稳定，没有因鼠粮中含有药物影响摄食量而出现影响体重的现象(表32)。

表32.X7长期给药对SHR-SP各时间段体重变化的影响(单位：g；n＝10)

**P<0.01与0天比较

7.6.2.X7对SHR-SP治疗期间血压的影响

溶剂对照组SHR-SP的血压治疗前后无明显变化，血压范围在180mmHg左右，氨氯地平和X7治疗组SHR-SP的血压给药前与溶剂对照组接近，而给药后下降非常显著，血压平均稳定在155mmHg左右，平均降幅达到20mmHg以上(表33)。

7.6.3.X7长期治疗对SHR-SP生存时间的影响

雄性SHR-SP平均寿命在12个月左右，最后全部死于脑卒中。本实验在SHR-SP6月龄进入实验。实验期间将饮水中加入了1％的氯化钠以加快脑卒中的发生。实验开始后第三个月，溶剂对照组即有6只死亡，而两个治疗组仅有1只死亡。到6个月时，溶剂对照组的SHR-SP已经全部死亡，两个治疗组的SHR-SP死亡数量均只有5只。经卡方检验显示，治疗组SHR-SP生存率与溶剂对照组比较具有非常显著的统计学差异，说明药阳性药氨氯地平和受试药X7对延缓SHR-SP脑卒中的发生具有非常显著的作用(表34，图16)。

表33.X7对SHR-SP生存期间SBP的影响(单位：mmHg；n＝10)

*P<0.05，***P<0.001与0天比较

表34.X7对SHR-SP生存率的影响(单位：％；n＝10)

*P<0.05，**P<0.01vs溶剂对照组

7.7实验结论

X7能显著地延缓SHR-SP脑卒中的发生时间，延长SHR-SP的生存时间。

实施例8靶标研究：1μM初步筛选结果

初筛实验方法：

在初筛实验中，采用了87个分子靶标，检测化合物1μM浓度下对酶活性或放射配体结合试验的影响，实验至少重复2次。结果以放射配体特异性结合抑制百分比或酶活性抑制百分比表示，抑制作用≥50％作为初筛有显著意义的标准，进入复筛。

结果：

如表35所示，在初筛的87个分子靶标中，有17个分子靶标进入复筛。

表35初筛实验结果

Experimental results

注：抑制百分比≥50％表示有显著意义，进入复筛(共17个靶标)。

*批次：代表在同一分析中同时测试的阳性化合物。

实施例9靶标研究：复筛实验结果

复筛实验方法：

复筛实验中，采用化合物0.1nM～1μM之间5个浓度(0.1nM，1nM，10nM，0.1μM，1μM)测量对靶分子作用的量效关系，实验至少重复2次。结果以抑制百分比表示，并计算IC₅₀(50％抑制时浓度)、Ki(抑制常数)、n_H(Hill系数)。

结果：

如表36所示，在17个进入复筛的靶标中，化合物的IC₅₀在几个nM及以下的分子靶标有7个，10几个nM及以上的分子靶标有10个。图17～图23还显示了化合物的IC₅₀在几个nM及以下的7个分子靶标的量效曲线。

结论：该化合物对肾上腺素α₁受体、5-羟色胺5-HT_2A受体、组织胺H₁受体等分子靶标有明显的阻断作用。

表36.复筛结果总结表

Summary of experimental results

本发明既扩大了X7的用途，又为高血压及其并发症提供了新的治疗方案，毒副作用小，安全性好，对高血压引起的多种靶器官损伤有明显的疗效。为该类患者增大了生存几率，减轻了患者痛苦，具有很好的应用前景。

所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备预防、治疗及延缓高血压、高血压引起的靶器官损伤及高血压相关疾病的药物中的应用，

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述的靶器官损伤是高血压引起的心、脑、肾或血管的损伤；所述高血压相关疾病，包括动脉粥样硬化、高血脂、肥胖、冠心病、主动脉夹层和高血糖、糖耐量异常、代谢综合征、糖尿病。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的靶器官损伤是左心室肥厚、脑卒中、肾皮质萎缩或主动脉增厚、心绞痛、心肌梗死、心功能衰竭、肾功能衰竭、视网膜动脉硬化、高血压眼底病变。

4.一种药物组合物，其特征在于，包括药学上可接受的载体和权利要求1所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

5.根据权利要求4所述药物组合物，其特征在于，所述药物中含有20mg-1000mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

6.根据权利要求5所述药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的制药剂型为口服制剂或注射剂，所述口服制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂丸剂或混悬剂。

7.权利要求4所述药物组合物在制备预防、治疗及延缓高血压、高血压引起的靶器官损伤及高血压相关疾病的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述的靶器官损伤是高血压引起的心、脑、肾或血管的损伤；所述高血压相关疾病，包括动脉粥样硬化、高血脂、肥胖、冠心病、主动脉夹层和高血糖、糖耐量异常、代谢综合征、糖尿病。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的靶器官损伤是左心室肥厚、脑卒中、肾皮质萎缩或主动脉增厚、心绞痛、心肌梗死、心功能衰竭、肾功能衰竭、视网膜动脉硬化、高血压眼底病变。