CN110419475A - 一种烯虫炔酯滴加法梯级流动诱导龟足腺介幼虫***方法 - Google Patents
一种烯虫炔酯滴加法梯级流动诱导龟足腺介幼虫***方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种烯虫炔酯滴加法梯级流动诱导龟足腺介幼虫附着***方法。该方法首先按照烯虫炔酯：二甲基亚砜为1：45～60（w/v）的重量体积比例助溶，加乙醇配制成含有烯虫炔酯5～8mg/mL的诱变剂。在梯级培育池A池、B池注满清洁的海水后，将腺介幼虫移入梯级培育池的A池、B池海水中并持续微充气。之后开启诱变剂滴加管，对A池连续滴加诱变剂。启动梯级培育池的进水泵进行注水，连续的注水时间为4‑6天。4‑6天后，停止注水和滴加，分别取出腺介幼虫附着基，即可转入稚体养殖阶段。本发明操作简单，能耗少，成本低，作用稳定，诱导效果显著，***率可达80%以上，是一种诱导龟足腺介幼虫附着***的好方法。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖的技术领域，具体涉及一种烯虫炔酯(CAS:42588-37-4)滴加法梯级流动诱导龟足腺介幼虫附着***方法
背景技术
龟足(Capitulum mitella Linnaeus)是一种具有较高经济价值和发展前景的海水养殖品种，隶属于节肢动物门、甲壳亚门、蔓足下纲、围胸总目、有柄目、铠茗荷亚目、指茗荷科(Pollicipidae)龟足属(Capitulum)。龟足俗称笔架、佛手、狗爪螺等，一般栖居在海浪剧烈冲击水流通畅的中、高潮区的岩石缝隙中，常见于群生簇状分布或与鳞笠藤壶、刺巨藤壶等伴生粘附于岩石或其它物体表面。由于受到栖息环境的制约，龟足种群规模较小且大小个体混杂，幼体常附着在成体柄部；采捕时均将成簇个体挖出，大量未达到食用规格的幼体也被带走，使种群资源受到极大破坏；撬砸等采挖行为也容易破坏岩礁生境，同时岩礁上的作业对采捕者而言也极具危险性。为了合理开发和保护龟足资源，有必要对龟足进行人工育苗和增养殖研究，这样，可大大减少对野生资源的采捕，控制对环境的过度开发，从而有效保护福建特色的海产品资源和海岸生态环境。
指茗荷科的另一属指茗荷属(Pollicipe)具有很大的经济价值。在西班牙、葡萄牙P.polymerus和P.pollicipes更是被视为美味佳肴，作为一种巨大经济价值的渔业资源被高度开发利用，有着广阔的商业需求和很高的市场价格，目前每公斤的价格可高达200欧元。由于过度的开发利用，出于保护的需要，西班牙等国均限制其开采量。
蔓足类的生活史通常要经过营浮游生活的6期无节幼体、不摄食的腺介幼虫、固着的稚体和成体几个发育阶段。腺介幼虫是蔓足类发育过程中的一个重要阶段，唯一的作用是选择适宜附着的基质并完成***。在腺介幼虫附着***过程中，腺介幼虫的游泳足快速划动，以规律性的“步伐”在基质表面行走，通过第一触角探测附着基质，分泌临时胶体形成足迹；如果基质条件适宜，腺介幼虫则分泌永久胶体附着，进而***为稚体，个体进入固着生活阶段。蔓足类浮游的腺介幼虫在附着***过程中，其形态结构及生活习性发生了剧烈变化。如果腺介幼虫不能完成附着***，随着营养物质的耗尽，最终走向死亡。无柄蔓足类藤壶是最主要的海洋污损生物，国外以纹藤壶(Amphibalanus amphitrite)为模型生物对藤壶的附着***机制进行了多年研究，希望能开发出干扰其附着***的高效、绿色的防污剂。经济有柄蔓足类(指茗荷属和龟足属)与无柄蔓足类藤壶分属于不同的目，它们的形态和生活方式存在很大的差异。有柄类龟足分泌的粘胶剂借助于柄的基部固着在基质上，无柄类藤壶分泌的粘胶剂则通过整个底盘固着在基质上。无柄类藤壶在人工条件下腺介幼虫易于附着***，而有柄类(龟足属和指茗荷属)对生态的要求特殊，在人工条件下腺介幼虫难以完成附着***。对经济有柄蔓足类而言，腺介幼虫在室内完成附着***是人工育苗的关键；对污损无柄蔓足类来说，干扰其附着***是防除的关键。
虽然目前实验室实现从龟足卵的人工孵化、无节幼虫的培养、最后能够大规模培养出腺介幼虫，但要实现龟足的人工育苗，必须突破在人工条件下诱导龟足腺介幼虫附着***的难题。龟足腺介幼虫人工条件下的附着***是在室内完成其生活史的必经过程，也是实现龟足人工育苗的核心问题，因此需要筛选出能够有效诱导龟足腺介幼虫附着***的方法或制剂。
保幼激素及类似物是最重要的一类昆虫激素,具有调控昆虫生长、发育、***和生殖等的生理功能，同样能调控虾蟹等甲壳类的生长发育。虽然近年对保幼激素的作用分子机制进行了大量研究，但远未彻底揭示保幼激素的作用机理。由于保幼激素及类似物种类繁多，且具有多种生理调节功能；昆虫和甲壳类的种类多样，且同一物种不同的发育阶段、药物的浓度、作用的时机等都会影响激素的效应。因此，某一激素针对某一物种的作用往往是不同的。中国专利(专利号201510183853.8)公开了《一种利用保幼激素-Ⅲ诱导龟足金星幼虫附着***的方法》。在此工作的基础上，再次筛选出以保幼激素类似物烯虫炔酯为主要成份的诱变制剂。
发明内容
根据我们的研究结果，本发明以烯虫炔酯为主要作用成份配制成龟足腺介幼虫附着***的专用制剂；该制剂使用方法简单，使用后腺介幼虫的***率可达到55％以上，获得的稚体能够正常生长发育成为成体。
为了实现上述目标，本发明采取的技术方案为：
1.龟足腺介幼虫附着***的诱变剂的配制：
按照烯虫炔酯：二甲基亚砜为1：45～60(w/v)的重量体积比例助溶，加乙醇配制成含有烯虫炔酯5～8mg/mL的诱变剂，4℃条件下低温保存。
2.首先在梯级培育池A池、B池注满清洁的海水后，将收集培养的腺介幼虫移入梯级培育池的A池、B池海水中。
3、A池、B池海水进行持续微充气，使腺介幼虫自由分散。
4、微充气10分钟后，开启诱变剂滴加管，对A池连续滴加诱变剂，诱变剂滴加的速度以A池、B池水体总体积的水量计，每升每分钟6滴。
5.滴加20分钟后，启动梯级培育池的进水泵，注水管对A池进行不间断注水，24小时注水量为A池、B池水体总体积的1/3。连续的注水时间为4-6天。注入的清洁海水，混合后经由A池、B池流入梯级培育池的C池，当C池水满之后，由排出管批出培育尾水。C池的设置，即延长了诱导海水的停留时间，同时可将A池、B池未附着的腺介幼虫进一步诱导附着，有效防止腺介幼虫活体的流失。
6、4-6天后，停止注水和滴加，分别取出腺介幼虫附着基，即可转入稚体养殖阶段。
从取出腺介幼虫附着基可以发现A池、B池腺介幼虫附着***量最大，而C池属于A池、B池的尾水，仍然有部分的附着***体。
所述的清洁海水：水温为23-28℃，盐度为25-35，pH 7.8-8.1。
本发明所述的梯级培育池由梯级水池、空气***、海水注入管和诱变剂滴加管构成，其中梯级水池由A池、B池、C池安水位的高度由高到低依次排列而成，A池、B池之间，B池、C池之间，分别通过A池溢水管、B池溢水管相连接；C池的海水储满后，尾水由尾水管排出；海水注入管开口于A池，诱变剂滴加管位于A池的上方。
所述的空气***，由空压机、输气管和爆汽盘构成并以此连接，输气管铺设于位于A池、B池、C池的底部，爆气盘与空气管连接后设置在A池、B池、C池的底部的中心处。
所述的诱变剂滴加管，在诱变剂滴加管出口端并排设置5-10路带有阀门的滴加控制头。
所述的烯虫炔酯，购置于试剂公司。
采用本发明方法进行了4批次6天的跟踪试验，每批次等量投入10000只腺介幼虫，记录到每批次龟足腺介幼虫***发育成稚体***率数据如下：
从上表可以看出，本发明跟踪实验组4批次培育稚体的***率都高于80％，平均数可达到82.5％，获得的稚体能够正常生长发育成为成体。
本发明操作简单，能耗少，成本低，作用稳定，诱导效果显著，***率可达80％以上。本方法给出了制剂应用的合适浓度、处理时间和诱导时机，是一种诱导龟足腺介幼虫附着***的好方法。
附图说明
图1是本实用新型所述的梯级培育池结构示意图。
图2是本实用新型所述的梯级培育池诱变剂滴加管结构示意图。
具体实施方式
本实用新型已连续在多批次的龟足腺介幼虫中进行诱导，均达到良好的效果。以下实施例方式对本发明做进一步的说明。
图1中，1是诱变剂滴加管；2是梯级水池中的A池；3是A池溢水管；4是梯级水池中的B池；5是B池溢水管；6是梯级水池中的C池；7是C池侧壁上的尾水管；8是空气***中的爆气盘；9是输气管；10是海水注入管；11是空压机。A池(2)、B池(4)、C池(6)呈梯级水位崇高到低排列。A池溢水管(3)连接了A池(2)和B池(4)；B池溢水管(5)连接了B池(4)和C池(6)。
图2中，1是诱变剂滴加管；12是诱变剂滴加管(1)出口端并排设置5-10路带有阀门的滴加控制头。
实施例1
1.龟足腺介幼虫附着***的诱变剂的配制：
按照烯虫炔酯：二甲基亚砜为1：45～60(w/v)的重量体积比例助溶，加乙醇配制成含有烯虫炔酯8mg/mL的诱变剂，4℃条件下低温保存。
2.梯级培育池：
本实施例所述的梯级培育池结构如技术方案所示。其中：
所述的梯级水池中A池(2)的尺寸为：1000mm(长)×1500mm(宽)×1000mm(高)，注水高度800mm。
所述的梯级水池中B池(4)的尺寸为：1200mm(长)×1500mm(宽)×900mm(高)，注水高度700mm。
所述的梯级水池中C池(6)的尺寸为：800mm(长)×1500mm(宽)×800mm(高)，注水高度600mm。C池(6)的海水充满后，尾水由尾水管(7)排出。
3.培育：
1、首先在梯级培育池A池(2)、B池(4)注满清洁的海水后，将收集培养的5600只腺介幼虫移入梯级培育池的A池(2)、B池(4)海水中。
2、对A池(2)、B池(4)海水进行持续微充气，使腺介幼虫自由分散。
3、微充气10分钟后，开启诱变剂滴加管(1)，对A池(2)连续滴加诱变剂，诱变剂滴加的速度每分钟6滴，共开10路的滴加控制头(1)。
4.滴加20分钟后，启动梯级培育池的进水泵，注水管(10)对A池(2)进行不间断注水，控制24小时注水量0，5立方米。连续的注水时间为5天。注入的清洁海水，混合后经由A池(2)、B池(4)流入梯级培育池的C池(6)，当C池(6)水满之后，由尾水管(7)排出培育尾水。
5、5天后，停止注水和滴加，分别取出腺介幼虫附着基，即可转入稚体养殖阶段。
6、取出腺介幼虫附着基进行计数，A池(2)、B池(4)和C池(6)中的***稚体分别为：1994、2478、189只，合并后为4661，总***率为83.23％。
本实施例所用的清洁海水：水温为23-28℃，盐度为25-35，pH 7.8-8.1。
实施例2
1.龟足腺介幼虫附着***的诱变剂的配制：
按照烯虫炔酯：二甲基亚砜为1：45(w/v)的重量体积比例助溶，加乙醇配制成含有烯虫炔酯8mg/mL的诱变剂，4℃条件下低温保存。
2.梯级培育池结构：
本实施例所述的梯级培育池结构如技术方案所示。其中：
所述的梯级水池中A池(2)的尺寸为：1米(长)×1.5米(宽)×1米(高)，注水高度800mm。
所述的梯级水池中B池(4)的尺寸为：1.2米(长)×1.5米(宽)×0.9米(高)，注水高度0.7米。
所述的梯级水池中C池(6)的尺寸为：0.8米(长)×1.5米(宽)×0.8米(高)，注水高度0.6米。C池(6)的海水充满后，尾水由尾水管(7)排出。
3.培育：
1)首先在梯级培育池A池(2)、B池(4)注满清洁的海水后，将收集培养的5600只腺介幼虫移入梯级培育池的A池(2)、B池(4)海水中。
2)对A池(2)、B池(4)海水进行持续微充气，使腺介幼虫自由分散。
3)微充气10分钟后，开启诱变剂滴加管(1)，对A池(2)连续滴加诱变剂，诱变剂滴加的速度每分钟4滴，共开10路的滴加控制头(12)，持续滴加150分钟。
4)滴加150分钟后，启动梯级培育池的进水泵，注水管(10)对A池(2)进行不间断注水，控制24小时注水量0.5立方米。连续的注水时间为5天。注入的清洁海水，混合后经由A池(2)、B池(4)流入梯级培育池的C池(6)，当C池(6)水满之后，由尾水管(7)排出培育尾水。
5)5天后，停止注水和滴加，分别取出腺介幼虫附着基，即可转入稚体养殖阶段。
6)取出腺介幼虫附着基进行计数，A池(2)、B池(4)和C池(6)中的***稚体分别为：1994、2478、189只，合并后为4661，总***率为83.23％。
本实施例所用的清洁海水：水温为23℃，盐度为35，pH 7.8。
实施例3
1.龟足腺介幼虫附着***的诱变剂的配制：
按照烯虫炔酯：二甲基亚砜为1：45(w/v)的重量体积比例助溶，加乙醇配制成含有烯虫炔酯8mg/mL的诱变剂，4℃条件下低温保存。
2.梯级培育池结构：
本实施例所述的梯级培育池结构如技术方案所示。其中：
所述的梯级水池中A池(2)的尺寸为：1米(长)×1米(宽)×1米(高)，注水高度0.8米，水体体积为1立方米。
所述的梯级水池中B池(4)的尺寸为：1米(长)×1米(宽)×0.9米(高)，注水高度0.7米。
所述的梯级水池中C池(6)的尺寸为：0.8米(长)×1米(宽)×0.8米(高)，注水高度0.6米。C池(6)的海水充满后，尾水由尾水管(7)排出。
3.培育：
1)首先在梯级培育池A池(2)、B池(4)注满清洁的海水后，将收集培养的5600只腺介幼虫移入梯级培育池的A池(2)、B池(4)海水中。
2)对A池(2)、B池(4)海水进行持续微充气，使腺介幼虫自由分散。
3)微充气10分钟后，开启诱变剂滴加管(1)，对A池(2)连续滴加诱变剂，诱变剂滴加的速度每分钟5滴，共开10路的滴加控制头(12)，持续滴加20分钟。
4)滴加20分钟后，启动梯级培育池的进水泵，注水管(10)对A池(2)进行不间断注水，控制24小时注水量0.36立方米。连续的注水时间为4天。注入的清洁海水，混合后经由A池(2)、B池(4)流入梯级培育池的C池(6)，当C池(6)水满之后，由尾水管(7)排出培育尾水。
5)4天后，停止注水和滴加，分别取出腺介幼虫附着基，即可转入稚体养殖阶段。
6)取出腺介幼虫附着基进行计数，A池(2)、B池(4)和C池(6)中的***稚体分别为：1994、2478、189只，合并后为4661，总***率为83.23％。
本实施例所用的清洁海水：水温为25℃，盐度为30，pH8.1。
Claims (4)
1.一种烯虫炔酯滴加法梯级流动诱导龟足腺介幼虫***方法，其特征在于：
1）龟足腺介幼虫附着***的诱变剂的配制：
按照烯虫炔酯：二甲基亚砜为1：45～60（w/v）的重量体积比例助溶，加乙醇配制成含有烯虫炔酯5～8mg/mL的诱变剂，4℃条件下低温保存；
2）首先在梯级培育池A池、B池注满清洁的海水后，将收集培养的腺介幼虫移入梯级培育池的A池、B池海水中；
3）对A池、B池海水进行持续微充气，使腺介幼虫自由分散；
4）微充气10分钟后，开启诱变剂滴加管，对A池连续滴加诱变剂，诱变剂滴加的速度以A池、B池水体总体积的水量计，每升每分钟6滴；
5）滴加20分钟后，启动梯级培育池的进水泵，注水管对A池进行不间断注水，24小时注水量为A池、B池水体总体积的1/3。
2.根据权利要求1所述的一种烯虫炔酯滴加法梯级流动诱导龟足腺介幼虫***方法，其特征在于所述的梯级培育池由梯级水池、空气***、海水注入管和诱变剂滴加管构成，其中梯级水池由A池、B池、C池安水位的高度由高到低依次排列而成，A池、B池之间，B池、C池之间，分别通过A池溢水管、B池溢水管相连接；C池的海水储满后，尾水由尾水管排出；海水注入管开口于A池，诱变剂滴加管位于A池的上方。
3.根据权利要求2所述的一种烯虫炔酯滴加法梯级流动诱导龟足腺介幼虫***方法，其特征在于所述的空气***，由空压机、输气管和爆汽盘构成并以此连接，输气管铺设于位于A池、B池、C池的底部，爆气盘与空气管连接后设置在A池、B池、C池的底部的中心处。
4.根据权利要求2所述的一种烯虫炔酯滴加法梯级流动诱导龟足腺介幼虫***方法，其特征在于所述的诱变剂滴加管，在诱变剂滴加管出口端并排设置5-10路带有阀门的滴加控制头。
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2019
- 2019-08-01 CN CN201910707796.7A patent/CN110419475A/zh not_active Withdrawn
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