CN110403907A - 复合干细胞再生肽混悬剂的用途及其备制 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及到一种复合干细胞再生肽混悬剂的用途及其备制,可用于保健和多种医疗用途的化合物。特别涉及采用干细胞活性因子(再生肽)和番茄红素备制成混悬剂的化合物,根据干细胞的类型特性,应用于人表皮光损害/光老化预防和修复,应用于神经损害,心、脑血管损害或疾病等脏器、器官的损害/疾病的预防、保健和治疗。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物工程领域,具体涉及一种干细胞再肽和番茄红素及载媒合成的化合物。
背景
人体是一个十分复杂生命体,除了具备一般动物的生物特性以外,具有发达的高级神经***,使我们有极高的思维活动能力。人体还具有很强的自我修复能力,当人体受到伤害后,一般都能自行修复。人类从胚胎发育、生命诞生、成熟、衰老直至死亡的整个生命过程中无时不包含着人与环境及其他物质相互作用,不可避免地会发生组织器官的损伤和功能衰退。由于受到疾病、外部因素、自身基因的影响,阻碍组织、细胞的分化、增殖,导致细胞组织长久不能修复或异常增殖。大部分的神经细胞,生成后很难再生。诸如糖尿病足的慢性溃疡,由于其内分泌功能受到影响,使表皮细胞难以修复;一些疾病(诸如某些炎症、内分泌失调)因素导致的脱发(或毛囊坏死),给较多的人带来苦恼;颅脑外伤、脑卒中、缺血缺氧性脑病等导致的神经功能严重损害,致使一些人死亡、昏迷、植物状态、神经功能严重缺损等。干细胞和干细胞再生因子的研究给此类疾病的修复和改善带来了希望。1962年Cohen首次发现了表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)一类体内活性物质。由于他在EGF上的特殊贡献,1989年获得了诺贝尔医学与生理奖。人表皮因子(Human epidermal growthfactctor,hEGF)具有较多的生物效应:①促进低分子量化合物从细胞外到细胞内,增加细胞其营养;②激活磷酸果糖激酶,活化糖酵解作用以增加呼吸代谢;③激活RNA和蛋白的合成;④刺激透明质酸和糖蛋白等细胞外大分子物质合成;⑤促进果酸、***素等一些物质合成,增进细胞增殖;⑥促进DNA合成。基于人表皮活性因子的这些生物特性,hEGF已广泛应用于医学临床领域,除了烧伤、烫伤、胃肠道的修复以外,还主要用于促进表皮、神经等器官细胞的修复和再生,广泛用于术后皮肤伤口的愈合、激光的伤口愈合、皮肤溃疡的愈合。
2014年海军总院王凤,栾佐、2015年广西王兆康报道用人间充质干细胞再生肽鞘内注射治疗新生儿中-重度缺氧缺血性脑病的临床研究表明,人间充质干细胞再生肽鞘内注射治疗新生儿中-重度缺氧缺血性脑病取得较好效果;2016年广西医科大学翟晶磊的人脐带间充质干细胞治疗阿尔兹海默症细胞模型的作用及机制分析研究,用阿尔兹海默症细胞模型进一步验证间充质干细胞(hUC-MSCs)的治疗作用,HGF和IL-6在hUC-MSCs分泌谱中作用关键。
中国农业科学院生物技术研究所赵宏,刘昱辉研究证实,hEGF是由53个氨基酸组成的小肽,分子量为6045Da,等电点pl为4.6,对热稳定,耐受胰蛋白酶、糜蛋白酶和胃蛋白酶。hEGF在-20℃中能保持长期稳定;在中性pH条件下100℃煮沸30min仍保持稳定,但在100℃0.1mol/L NaOH或0.2mol/L HCI中失活。这为干细胞再生肽的备制提供了条件依据。
由于受到疾病、致病因素、自身基因、干细胞再生肽的培养条件、数量、再生效应等因素影响,使上述干细胞和干细胞再生肽在人类疾病治疗和预防上的应用受到一定限制,不能达到预期的理想效果。近年来,人们研究发现了番茄红素具有促进组织修复、抗氧化、预防衰老等作用。番茄红素可以弥补、增加干细胞再生肽的细胞修复、再生作用。2005年哈尔滨医科大学公共卫生学院李辉等、2012年第三军医大学屈明玥的实验证明,番茄红素对大鼠的氧化损伤、神经元损伤具有高效拮抗作用;国内外很多研究表明,番茄红素对人体有抗氧化、预防衰老、辅助一些疾病的治疗作用。而且番茄红素的溶媒载体亚麻籽油也具有促进脑细胞的发育、增加SOD活性等功能。牛至油是一种天然防腐剂,可防止生物制品腐败变质,同时也是抗氧化剂。
发明内容
本发明优选的设法单独或以任何组合的方式解决该化合物的一种或多种组成形式,通过提供所附权利要求的***方法,来满足上述疾病的预防保健、及其治疗用。
本发明涉及的一个方案中是采用亚麻籽油为溶剂经微波萃取方法,从番茄中提取番茄红素,使其中的α-亚麻酸0.57mg/ml和亚麻油酸0.15mg/ml;
本发明涉及的一个方案中番茄红素提取方法应该包括:选用优质20-22%固体含量新疆新鲜番茄酱→亚麻籽油→混匀(液料比2∶1(mL∶g)→微波(功率500W/50mim/每10mim搅动一次)→过滤渣滓→备用。
本发明涉及的一个公开的新疆牛至人工栽培方法获取牛至及其用蒸馏的方法获取牛至油。
本发明涉及的一个方案依据其上皮干细胞再生肽(hEGF),采用改良的乳化冷凝交联制备明胶缓释微球法5d后,备制hEGF,与权力要求2物质整合为化合物。根据用途(皮肤防晒、修复、防老化、组织修复),制成混悬霜剂、混悬膏剂、混悬喷雾剂。
本发明涉及的一个方案依据其毛囊干细胞再生肽(kGF)的备制方法:对C57鼠真皮细胞分离培养;进行鼠真皮细胞毛囊诱导能力鉴定(细胞活性检测、免疫组织化学检测、流式细胞检测分析);通过RT-PCR从毛囊干细胞RNA中扩增出NGF的DNA全场片段,构建拷贝逆转录病毒载体pLXSN-NGF,脂质体转染导入PA317,感染NSCs,获得高度表达的毛囊干细胞再生因子的基因工程干细胞;再对PC12-T-rkB细胞以及对体外培养的相应区域的毛囊干细胞的影响检测其生物活性,证明该基因工程干细胞可分泌相应的毛囊干细胞再生因子;后再扩增、提取相应的再生因子,合成化合物,根据用途(毛发再生、修复、防治瘢痕、组织修复),制成混悬霜剂、混悬膏剂、混悬喷雾剂。
本发明涉及的一个方案依据其神经干细胞再生肽(NGF),根据脑不同部位采用新生大鼠脑不同部位的神经干细胞,进行体外培养、传代、对不同部位的干细胞进行特征鉴定,证明不同脑区分离培养神经干细胞。然后,通过RT-PCR从人胎脑组织中RNA中扩增出NGF的DNA全场片段,构建拷贝逆转录病毒载体pLXSN-NGF,脂质体转染导入PA317,感染NSCs,获得高度表达的神经干细胞再生因子的基因工程干细胞,通过对PC12-T-rkB细胞以及对体外培养的相应区域的神经元的影响检测其生物活性,证明该基因工程干细胞可分泌相应的神经干细胞再生因子。后在扩增、提取相应的再生因子,合成化合物,根据用途(中枢神经、周围神经损伤修复、再生),备制成混悬喷剂、混悬口服剂、混悬注入剂。
本发明涉及的一个方案依据其间充质干细胞外泌体(MSC-exo)采取经取足月破宫产健康新生儿脐带组织块,用直接贴壁法分离培养Huc-MSCs;经Huc-MSCs表面标志物鉴定、Huc-MSCs多向分化能力鉴定(Huc-MSCs成骨诱导、Huc-MSCs成脂诱导);根据Huc-MSCs来源Exosomes的提取(收取上清液)、鉴定(透射电子形态学观察:透射电镜下30-100nm,包膜完整胞内低电子密度,呈圆形或椭圆形囊泡状结构;、SDS-PAGE蛋白凝胶电泳图像分析);再进行传代、增殖、提纯、制成冻干合成化合物,根据用途(中枢神经、周围神经损伤修复、再生),备制成混悬口服剂、混悬注入剂。
本发明涉及的一个方案依据其特征在于其干细胞再生肽不同特性,添加载媒和至少一种液体,制成本化合物的混悬霜剂、混悬膏剂、混悬喷剂,用于涂抹表皮,喷洒损伤组织,用于皮肤的防晒、防皮肤光老化、晒伤皮肤修复、损伤组织修复。
本发明涉及的一个方案依据其特征在于其干细胞再生肽不同生物特性,添加载媒和至少一种液体,制成本化合物的混悬口服剂,用于治疗中枢神经、外周神经、心血管等损伤的修复、再生。
本发明涉及的一个方案依据其特征在于其干细胞再生肽不同生物特性,添加载媒和至少一种液体,制成本化合物的混悬注射剂,用于治疗中枢神经、外周神经、心血管等损伤的修复、再生。
本发明涉及的一个方案依据其特征在于本化合物依据其干细胞再生肽不同生物特性、用途、载入人体途径,利于、延长制品的保存时间,本化合物添加或不添加牛至油或牛至提取物,以防止制品的过早失效或腐败,延长其使用期。
Claims (10)
1.一种包括干细胞再生肽(Stem cell peptide)(又称干细胞活性因子(stem cellfactot,SCF)、番茄红素(Lycopene)及其载媒、适量牛至油的化合物;
所述化合物选自番茄红素及其载媒、适量牛至油,还包含至少一种以下的内容组成种类:上皮细胞再生肽(hEGF)、毛囊干细胞再生肽(kGF)、神经干细胞再生肽(NGF)、间充质干细胞外泌体(MSC-exo)、至少有一种液体。
2.根据权利要求1所述的这种化合物,其特征在于:这种番茄红素是采用亚麻籽油为溶剂和载体、添加适量牛至油,用微波提取的方法将番茄红素萃取,其中使之每ml含0.5mg-0.69mg番茄红素,及α-亚麻酸0.57mg/ml和亚麻油酸0.15mg/ml。
3.根据权利要求1所述的这种化合物,其特征在于涉及到本化合物中的上皮干细胞再生肽(hEGF):采用改良的乳化冷凝交联制备明胶缓释微球法5d后,备制hEGF,与权利要求2物质整合为化合物,制成混悬剂。
4.根据权利要求1所述的这种化合物,其特征在于:涉及到本化合物中的毛囊干细胞再生肽(kGF):(1)C57鼠真皮细胞分离培养;(2)鼠真皮细胞毛囊诱导能力鉴定(细胞活性检测、免疫组织化学检测、流式细胞检测分析);(3)通过RT-PCR从毛囊干细胞RNA中扩增出NGF的DNA全场片段,构建拷贝逆转录病毒载体pLXSN-NGF,脂质体转染导入PA317,感染NSCs,获得高度表达的毛囊干细胞再生因子的基因工程干细胞;(4)通过对PC12-T-rkB细胞以及对体外培养的相应区域的毛囊干细胞的影响检测其生物活性,证明该基因工程干细胞可分泌相应的毛囊干细胞再生因子。(5)后再扩增、提取相应的再生因子,合成化合物,制成混悬剂。。
5.根据权利要求1所述的这种化合物,其特征在于:涉及到本化合物中的神经干细胞再生肽(NGF),根据脑不同部位采用新生大鼠脑不同部位的神经干细胞,进行体外培养、传代、对不同部位的干细胞进行特征鉴定,证明不同脑区分离培养神经干细胞。然后,通过RT-PCR从人胎脑组织中RNA中扩增出NGF的DNA全场片段,构建拷贝逆转录病毒载体pLXSN-NGF,脂质体转染导入PA317,感染NSCs,获得高度表达的神经干细胞再生因子的基因工程干细胞,通过对PC12-T-rkB细胞以及对体外培养的相应区域的神经元的影响检测其生物活性,证明该基因工程干细胞可分泌相应的神经干细胞再生因子。后在扩增、提取相应的再生因子,合成化合物,制成混悬剂。
6.根据权利要求1所述的这种化合物,其特征在于:涉及到本化合物中的间充质干细胞外泌体(MSC-exo):(1)MSC-exo经取足月破宫产健康新生儿脐带组织块,用直接贴壁法分离培养Huc-MSCs;(2)Huc-MSCs表面标志物鉴定、Huc-MSCs多向分化能力鉴定(Huc-MSCs成骨诱导、Huc-MSCs成脂诱导);(3)Huc-MSCs来源Exosomes的提取(收取上清液)、鉴定(透射电子形态学观察:透射电镜下30-100nm,包膜完整胞内低电子密度,呈圆形或椭圆形囊泡状结构;SDS-PAGE蛋白凝胶电泳图像分析);(4)传代、增殖、提纯、冻干;(5)合成化合物,制成混悬剂。
7.根据权利要求1所述的这种化合物,其特征在于:涉及到本化合物中的干细胞再生肽不同特性,添加载媒和至少一种液体,制成本化合物霜剂/膏剂,用于涂抹表皮,用于皮肤的防晒、防皮肤光老化、修复皮肤晒伤。
8.根据权利要求1所述的这种化合物,其特征在于:涉及到本化合物中的干细胞再生肽不同特性,添加至少一种液体,制成本化合物的喷雾剂,喷洒或涂抹于损伤组织,用于人组织再生、修复。
9.根据权利要求1所述的这种化合物,其特征在于:涉及到本化合物中的干细胞再生肽不同生物特性,添加上述至少一种物质,制成注射剂,注入/输入人体特定部位,用于预防、治疗人体的多种疾病。
10.根据权利要求1所述的这种化合物,其特征在于涉及到本化合物依据中的干细胞再生肽不同生物特性,利于、延长制品的保存时间,化合物添加或不添加牛至油或牛至提取物。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20191105 |
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |