CN108619086A - 一种治疗组织损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液 - Google Patents

一种治疗组织损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种治疗组织损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液,细胞凝胶制剂的配方为：按体积百分比，凝胶溶液为50％～90％：复方电解质和/或氨基酸注射液细胞重悬液为10％～50％，每毫升细胞凝胶制剂中含有0.5×105～2×107个细胞。凝胶溶液包括下述质量与体积组分1～50mg高分子材料稳定剂，40～160ul丙三醇，20～150mg人血白蛋白，20～120mg羟乙基淀粉，复方电解质注射液和/或氨基酸注射液0.84～0.96ml。该凝胶制剂生物相容性好，不含有二甲基亚砜(DMSO)且能直接进行低温保存，制备操作简便，‑80℃储存能够长期稳定的维持细胞的高活性，可以作为皮肤损伤、瘘道和粘膜损伤等创面的治疗应用。

Description

一种治疗组织损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻 存细胞活性的凝胶溶液
技术领域
本发明涉及生物技术和生物医药领域，特别涉及一种治疗组织损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液。
背景技术
皮肤是人体面积最大的器官，是人体的天然屏障，它直接与外界环境接触，是机体免于脱水和感染的第一道防线。创面修复是创伤修复的难点，而大面积难愈性创面的修复是临床治疗的一大难题。研究表明，干细胞可以通过复合机制(包括促进细胞分化，旁分泌细胞因子，并能促血管化)来影响局部组织微环境，促进血管形成和诱导肉芽组织生成从而更好的促进伤口愈合，有效地缩短治疗的时间。特定条件下，利用干细胞的可塑性，可以诱导分化出脂肪干细胞，表皮干细胞等，应用干细胞还可以重建皮脂腺，毛囊以及汗腺，减少瘢痕形成，从而形成皮肤功能的修复，表皮干细胞(ESC)在皮肤形成愈合过程中起着重要的作用，表皮干细胞能保持增殖分化能力，可以分化为表皮中的各种细胞，另外，毛囊干细胞不仅能转换成毛囊组织内的多种细胞类型，还能迁移到皮肤表面，形成表皮细胞。而单纯地细胞悬液在伤口处保持细胞活性的时间较短，不能保证尽可能多的活的干细胞发挥其作用，尽可能长时间维持干细胞在创面的活性使其发挥成为一个热点。除此皮肤表面的创伤，瘘是正常情况下不连接器官或动脉之间的异常链接或通道，可以发生在身体的多个部位，如肛瘘，子宫颈瘘，肠***瘘，子宫腹膜瘘等。克罗恩病和溃疡性结肠炎是形成直肠瘘，肠瘘，肠皮肤瘘的主要病因，克罗恩病中所报道的瘘发生率为17％至50％，但对此病中瘘的治疗是极具挑战性的问题，很多疗法对此类瘘的治疗效果不佳，且复发率较高，使得受累患者非常痛苦，显著降低了生活质量。寻找一种新的有效的治疗方法是目前临床上亟待解决的问题。
间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是中胚层来源的具有高度自我更新能力和多项分化潜能的多能干细胞，广泛存在于全身多种组织中。间充质干细胞是多能干细胞，具有“横向分化”或“跨系分化”的能力，能支持造血干细胞的生长，还可以在不同的诱导条件下，在体外分化为多种组织细胞，可以作为理想的种子细胞用于病变和衰老引起的组织器官损伤修复。间充质干细胞为贴壁细胞，在表面生长较好，能够释放促进多种生长因子，并且可以抑制炎症发生，并具有多项分化的能力，直接接触创面或瘘道可以最大程度的发挥干细胞的修复治疗作用，能更有效的减轻病人的痛苦，拥有广阔的经济效益和社会效益。
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一,冻存后细胞-196℃液氮中低温保存，可以长期稳定的保存细胞的特性，且适度的保存一定量细胞，可以防止因正在培养的细胞污染等使细胞丢种，起到保种的作用，目前所应用的常规细胞冻存保护剂是二甲基亚砜(DMSO),但是DMSO会调节细胞的水分代谢，通过调节渗透压影响细胞的生长状态，在一定程度上会诱发细胞凋亡，制备中需要尽可能的减少复苏后细胞与DMSO的接触，给制备过程增加的一定的难度。DMSO易挥发，对人体具有一定的毒性，对眼睛有刺激作用，使用过程中，对操作设备和环境的要求较高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，提供了一种治疗组织损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液。此凝胶溶液中不含有传统细胞冻存方法中常用的冻存保护剂DMSO,很大程度的减少了DMSO对于活细胞的伤害。在非液氮保存细胞的条件，-80℃能长期稳定高效的保持细胞的活性。本发明的另一个目的是提供了一种含有活细胞和凝胶制剂的细胞凝胶制剂，可以在使用前完成包括无菌在内的所有质量检测。解冻后可以立即使用，使用简便。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种保持冻存细胞活性的凝胶溶液，包括下述质量与体积组分：高分子材料稳定剂1～50mg，丙三醇40～160ul，人血白蛋白20～150mg，羟乙基淀粉20～120mg，复方电解质注射液和/或氨基酸注射液0.84～0.96ml。
所述高分子材料稳定剂为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖、胶原中的一种或几种的组合。
所述高分子材料稳定剂、丙三醇、人血白蛋白、羟乙基淀粉、复方电解质注射液、氨基酸注射液都是药用级原辅料。
一种含有上述保持冻存细胞活性的凝胶溶液的治疗组织损伤的细胞凝胶制剂，按体积百分比，凝胶溶液为50％～90％：复方电解质和/或氨基酸注射液细胞重悬液为10％～50％，每毫升细胞凝胶制剂中含有0.5×105～2×107个细胞。
所述细胞为间充质干细胞、亚全能干细胞、表皮干细胞、内皮祖细胞、表皮细胞、内皮细胞、毛囊干细胞中的一种或多种。
所述间充质干细胞来源于骨髓、脐带、脐血、胎盘、羊膜、牙髓或脂肪组织。
上述细胞凝胶制剂在制备治疗组织损伤药物中的应用。
所述组织损伤包括皮肤溃疡、烧伤、烫伤、褥疮、糖尿病足、肛瘘、溃疡性结肠炎、肠***瘘、子宫腹膜瘘。
本发明的优点在于：
1.本发明提供的细胞凝胶制剂中不含有二甲基亚砜(DMSO),简化了制备工艺，且能大大的减少制备过程中DMSO对细胞的伤害，更好的保持了细胞的活性。冻存细胞凝胶制剂复苏后放置4℃，8小时后细胞的活率能达到90％以上；且此不含有DMSO的凝胶制剂制备后-20℃冻存7天后复苏，细胞的活率能到达80％以上，远高于含DMSO的凝胶制剂。
2.本发明的细胞凝胶制剂可以在-80℃保存能良好的保持细胞活性达2年以上。且摒弃了传统的液氮保存和运输，降低了存储成本和运输的危险性。
3.本发明提供的细胞凝胶制剂的配方中不含有动物源性成分，不含有抗生素和防腐剂，复苏后的细胞凝胶制剂仍能够维持细胞的高活性和细胞的生物学特性和功能，可以作为皮肤损伤、烧伤、瘘道和粘膜损伤等创面的治疗应用，也可制备人造皮肤或细胞膜片。所述的组织损伤包括但是不限于肛瘘，溃疡性结肠炎，肠***瘘，子宫腹膜瘘，皮肤溃疡，烧伤，烫伤，褥疮和糖尿病足。
附图说明
图1是本发明脐带间充质干细胞在海藻酸钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(1:20:20)凝胶中的活率检测图。
图2是本发明脐带间充质干细胞在海藻酸钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(1:20:20)凝胶中的得率检测图。
图3是本发明脐带间充质干细胞在海藻酸钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(5:15:12)凝胶中的活率检测图。
图4是本发明脐带间充质干细胞在海藻酸钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(5:15:12)凝胶中的得率检测图。
图5是脐带间充质干细胞在不同高分子材料配制凝胶溶液中细胞活率检测图。
图6是脐带间充质干细胞在不同高分子材料配制凝胶溶液中细胞得率的检测图。
图7是细胞凝胶制剂在不同的温度储存下的细胞活率检测图
图8凝胶对不同来源的干细胞的冻存保护稳定性。
图9凝胶制剂长期冻存后，海藻酸钠钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(4:5:5)凝胶制剂中脐带间充质干细胞的活率曲线图(24个月)。
图10脐带间充质干细胞凝胶制剂冻存24个月后细胞成脂成骨分分化图。
图11是含有脐带间充质干细胞的海藻酸钠钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(4:5:5)凝胶制剂对大鼠皮损的治疗作用图。
具体实施方式
下面结合附图与具体实施方案对本发明进一步说明，其具体实施方案应该理解为仅为举例说明，不是限定性的，不能以下述举例说明来限定本发明的保护范围。
本发明的保持冻存细胞活性的凝胶溶液，包括下述质量与体积组分：高分子材料稳定剂1～50mg，丙三醇40～160ul，人血白蛋白20～150mg，羟乙基淀粉20～120mg，复方电解质注射液和/或氨基酸注射液0.84～0.96ml。
所述高分子材料稳定剂为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖、胶原中的一种或几种的组合。
所述高分子材料稳定剂、丙三醇、人血白蛋白、羟乙基淀粉、复方电解质注射液、氨基酸注射液都是药用级原辅料。
一种含有上述保持冻存细胞活性的凝胶溶液的治疗组织损伤的细胞凝胶制剂，按体积百分比，凝胶溶液为50％～90％：复方电解质和/或氨基酸注射液细胞重悬液为10％～50％，每毫升细胞凝胶制剂中含有0.5×105～2×107个细胞。
所述细胞为间充质干细胞、亚全能干细胞、表皮干细胞、内皮祖细胞、表皮细胞、内皮细胞、毛囊干细胞中的一种或多种。
所述间充质干细胞来源于骨髓、脐带、脐血、胎盘、羊膜、牙髓或脂肪组织。
上述细胞凝胶制剂在制备治疗组织损伤药物中的应用。
所述组织损伤包括皮肤溃疡、烧伤、烫伤、褥疮、糖尿病足、肛瘘、溃疡性结肠炎、肠***瘘、子宫腹膜瘘。
所述的含有细胞的凝胶制剂制备方法，具体步骤如下：
(1)凝胶溶液配制：按照上述提供配比，将注射级或药用级原辅料：高分子稳定剂，丙三醇，人血白蛋白，羟乙基淀粉，溶于复方电解质注射液和/或氨基酸注射液经充分搅拌混匀、待用。
(2)细胞制备：取自细胞库中经检测过的细胞用10％胎牛血清的DEME/F12培养基在37℃，5％CO2恒温恒湿培养箱中培养，待细胞的融合度达到90％左右，用胰酶替代物(TrypleTMExpress)进行消化，离心收集细胞，取上清后用复方电解质溶液进行重悬，调整细胞浓度5×105-5×107个/mL冰上保存待用。
(3)细胞凝胶制剂的制备：将已制备的细胞悬液加入到凝胶溶液中，充分混合均匀，混合后进行分装，得到细胞凝胶制剂，直接冻存于-80℃冰箱中待用。
实施例1脐带间充质干细胞在海藻酸钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(1:20:20)凝胶中的活率和得率检测
将无菌海藻酸钠20mg、人血白蛋白400mg及羟乙基淀粉400mg组合成共混粉末溶于16.8ml复方电解质中，室温溶胀24小时后，再加入3.2ml丙三醇,充分搅拌混匀,配制成的高分子材料凝胶溶液。静置后待用，取900ul凝胶溶液加入100ul含有0.5×105个脐带间充质干细胞的复方电解质重悬液，混合均匀，制成细胞凝胶制剂，制备后各组抽取3支进行计数，作为冻存0H的计数，其余直接冻存于-80℃冰箱中，细胞冻存后1天，7天，15天，30天，各组别分别取3支进行计数，由实验结果可见，该凝胶制剂具有良好的细胞相容性，即维持脐带间充质干细胞的活性与得率(图1、2)
实施例2脐带间充质干细胞在海藻酸钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(5:15:12)凝胶中的活率检测
将无菌海藻酸钠1g、人血白蛋白3g及羟乙基淀粉2.4g组合成共混粉末溶于19.2ml复方电解质中，室温溶胀48小时后，再加入0.8ml丙三醇,充分搅拌混匀,配制成高分子材料凝胶溶液。静置后待用，取600ul凝胶溶液加入400ul含有2×107个脐带间充质干细胞的复方电解质重悬液，混合均匀，制成细胞凝胶制剂，制备后各组抽取3支进行计数，作为冻存0H的计数，其余直接冻存于-80℃冰箱中，细胞冻存后1天，7天，15天，30天，各组别分别取3支进行计数。由实验结果可见，该凝胶制剂具有良好的细胞相容性，即维持脐带间充质干细胞的活性与得率(图3、4)。
实施例3脐带间充质干细胞在不同高分子材料配制凝胶溶液中细胞活率与得率的检测
将无菌高分子稳定剂800mg、人血白蛋白1g及羟乙基淀粉1g组合成共混粉末溶于18.8ml氨基酸注射液中，室温溶胀48小时后，再加入1.2ml丙三醇,配置凝胶溶液，此实验所选取的高分子材料分四组，海藻酸钠；透明质酸钠；壳聚糖；质量比胶原：透明质酸钠＝1:1。取700ul凝胶溶液加入300ul含有6×105个脐带间充质干细胞的氨基酸注射液的重悬液制备间充质干细胞凝胶制剂，制备后各组抽取3支进行计数，作为冻存0H的计数，细胞冻存后1天，7天，30天，90天，各组别分别取3支进行计数，计算细胞的活率和得率。结果显示，采用不同的高分子稳定剂配置细胞凝胶制剂，细胞凝胶制剂冻存3个月后的细胞都维持在80％以上，且四组之间的差异不大，证明所选用的高分子稳定剂材料中的一种或几种混合均可以用作凝胶的原料(图5、6)。
实施例4细胞凝胶制剂在不同的温度储存下的细胞活率检测
将无菌透明质酸钠1.2g、人血白蛋白1.5g及羟乙基淀粉1.5g组合成共混粉末溶于28.2ml复方电解质中，室温溶胀48小时后，再加入1.8ml丙三醇,配置凝胶溶液。取700ul凝胶溶液加入300ul含有6×105个脐带间充质干细胞的复方电解质重悬液制备间充质干细胞凝胶制剂，制备后的凝胶制剂分两组，-20℃和-80℃两种储存方式进行储存。以制备冻存前的时间点为0H,以冻存过夜后的时间为1天，随后选择3天，7天，30天，90天，每组各取3支制剂进行复苏计数，对凝胶制剂进行活率和得率检测。结果显示：细胞凝胶制剂-80℃冻存3个月后细胞的活率在90％以上；-20℃冻存的的凝胶制剂，复苏后，细胞的活率和得率会随冻存时间的延长而下降，但-20℃冻存7天后细胞的活率仍可以保持80％以上(图7)。
实施例5凝胶溶液对于不同来源的细胞的冻存保护作用。
比较不同来源的干细胞在凝胶制剂中的活率，将无菌海藻酸钠2g、人血白蛋白2.5g及羟乙基淀粉2.5g组合成共混粉末溶于47ml复方电解质中，室温溶胀48小时后，再加入3ml丙三醇,配置凝胶溶液，待混合均匀后，取700ul凝胶溶液加入300ul含有6×105个细胞的复方电解质重悬液制备细胞凝胶制剂，将脐带来源，胎盘来源，脂肪来源和毛囊来源的干细胞以及表皮干细胞与海藻酸钠凝胶分别混合。-80℃冻存1天，15天，30天,90天后检测细胞的活率。计数后发现，不同来源的细胞在以上凝胶中，-80℃冻存后均可以保持良好的细胞活性(图8)。
实施例6凝胶制剂长期冻存后，海藻酸钠钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(4:5:5)凝胶制剂中脐带间充质干细胞的活率(24个月)
将无菌海藻酸钠(1.6mg)、人血白蛋白(2g)及羟乙基淀粉(2g)组合成共混粉末溶于45ml复方电解质溶液中，室温溶胀48小时后，再加入5ml丙三醇，充分搅拌混匀,配制成50ml的高分子材料凝胶溶液。静置后待用，取800ul凝胶溶液加入200ul含有1×106个脐带间充质干细胞的复方电解质重悬液，混合均匀，制成海藻酸钠钠/人血白蛋白/羟乙基淀粉(4:5:5)的细胞凝胶制剂。第0，1，3，6，15，18，24个月，各取3支进行细胞活率检测，并检测其表型与分化能力。由实验结果得出，该凝胶制剂负载的软骨细胞均可以在-80℃长期保存至24个月，具有良好的稳定性(图9)，且能长期保存细胞的干性(图10)。
实施例7本发明的干细胞凝胶制剂对大鼠体表瘘管的治疗作用
选取大鼠作为模型动物，建立大鼠表皮瘘管模型，每只大鼠一个瘘管，造模后随机分组，实验分3组，对照组：空白凝胶组；实验组：细胞凝胶组，1×105个细胞/瘘；空白组：DPBS，每组至少入组大鼠6只，建模后连续两天给药，每天给药一次，每天对伤口进行观察。比较大鼠的瘘管恢复情况。实验结果显示，实验组的大鼠瘘管恢复情况明比空白组和对照组明显加快。在造模第8天实验组模型伤口愈合，瘘管恢复，呈不瘘状，空白组在造模12天瘘口面积虽然减少，但依然存在，至造模后19天才瘘管恢复。
表一、实验动物模型恢复情况表
实施例8本发明的干细胞凝胶制剂对大鼠皮损的治疗作用
选取大鼠作为动物模型，建立大鼠皮肤缺损模型，每只大鼠两个创面，模型创面直径2cm,造模后随机分组，实验分三组：对照组：空白凝胶组；实验组：细胞凝胶组，1×106个细胞/孔；空白组：生理盐水，每组至少入组创面3个，建模后连续两天给药，每天给药一次，每天对伤口进行直径测量，比较大鼠创面的恢复情况。实验结果显示，细胞凝胶组在给药第4天开始效果显著，创面的愈合速度明显较空白组和对照组快(图11)。
综上所述，本发明的内容并不局限在上述的实施例中，相同领域内的有识之士可以在本发明的技术指导思想之内可以轻易提出其他的实施例，但这种实施例都包括在本发明的范围之内。

Claims (8)

1.一种保持冻存细胞活性的凝胶溶液，其特征在于，包括下述质量与体积组分：高分子材料稳定剂1～50mg，丙三醇40～160ul，人血白蛋白20～150mg，羟乙基淀粉20～120mg，复方电解质注射液和/或氨基酸注射液0.84～0.96ml。
2.根据权利要求1所述保持冻存细胞活性的凝胶溶液，其特征在于，所述高分子材料稳定剂为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖、胶原中的一种或几种的组合。
3.根据权利要求1所述保持冻存细胞活性的凝胶溶液，其特征在于，所述高分子材料稳定剂、丙三醇、人血白蛋白、羟乙基淀粉、复方电解质注射液、氨基酸注射液都是药用级原辅料。
4.一种含有权利要求1-3任一项所述保持冻存细胞活性的凝胶溶液的治疗组织损伤的细胞凝胶制剂，其特征在于，按体积百分比，凝胶溶液为50％～90％：复方电解质和/或氨基酸注射液细胞重悬液为10％～50％，每毫升细胞凝胶制剂中含有0.5×105～2×107个细胞。
5.根据权利要求4所述治疗组织损伤的细胞凝胶制剂，其特征在于，所述细胞为间充质干细胞、亚全能干细胞、表皮干细胞、内皮祖细胞、表皮细胞、内皮细胞、毛囊干细胞中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述治疗组织损伤的细胞凝胶制剂，其特征在于，所述间充质干细胞来源于骨髓、脐带、脐血、胎盘、羊膜、牙髓或脂肪组织。
7.如权利要求4-6任一种所述细胞凝胶制剂在制备治疗组织损伤药物中的应用。
8.根据权利要求7所述细胞凝胶制剂在制备治疗组织损伤药物中的应用，其特征在于，所述组织损伤包括皮肤溃疡、烧伤、烫伤、褥疮、糖尿病足、肛瘘、溃疡性结肠炎、肠***瘘、子宫腹膜瘘。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110269868A (zh) * 2019-06-12 2019-09-24 江苏艾尔康生物医药科技有限公司 一种含有自体真皮成纤维细胞透明质酸凝胶剂的构建方法
CN112891617A (zh) * 2021-02-01 2021-06-04 北京中卫医正科技有限公司 含有间充质干细胞的液体医用生物功能敷料及其制备方法
CN112970740A (zh) * 2020-12-22 2021-06-18 山东华领奥源生物科技有限公司 一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液及其应用
CN114451397A (zh) * 2020-10-22 2022-05-10 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 用于保存干细胞的凝胶制剂及其制备方法以及含有凝胶制剂和干细胞的药物组合物
CN116803417A (zh) * 2023-08-24 2023-09-26 北京益华生物科技有限公司 一种***黏膜修复组合物及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102670654A (zh) * 2012-04-28 2012-09-19 北京汉氏联合干细胞研究院有限公司 一种用于创面修复的干细胞制剂及其制备方法
CN106474155A (zh) * 2016-10-19 2017-03-08 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂及其制备方法和用途
CN106538512A (zh) * 2016-10-08 2017-03-29 北京汉氏联合干细胞研究院有限公司 一种保持冻存细胞活性的干细胞凝胶制剂及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102670654A (zh) * 2012-04-28 2012-09-19 北京汉氏联合干细胞研究院有限公司 一种用于创面修复的干细胞制剂及其制备方法
CN106538512A (zh) * 2016-10-08 2017-03-29 北京汉氏联合干细胞研究院有限公司 一种保持冻存细胞活性的干细胞凝胶制剂及其应用
CN106474155A (zh) * 2016-10-19 2017-03-08 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杜淼等: ""金鱼胚胎细胞超低温保存及其发育能力的研究"", 《动物学报》 *
高芳等: "《血液及造血***疾病病人的护理》", 31 March 2005, 中国协和医科大学出版社 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110269868A (zh) * 2019-06-12 2019-09-24 江苏艾尔康生物医药科技有限公司 一种含有自体真皮成纤维细胞透明质酸凝胶剂的构建方法
CN114451397A (zh) * 2020-10-22 2022-05-10 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 用于保存干细胞的凝胶制剂及其制备方法以及含有凝胶制剂和干细胞的药物组合物
CN114451397B (zh) * 2020-10-22 2023-04-14 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 用于保存干细胞的凝胶制剂及其制备方法以及含有凝胶制剂和干细胞的药物组合物
CN112970740A (zh) * 2020-12-22 2021-06-18 山东华领奥源生物科技有限公司 一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液及其应用
CN112891617A (zh) * 2021-02-01 2021-06-04 北京中卫医正科技有限公司 含有间充质干细胞的液体医用生物功能敷料及其制备方法
CN116803417A (zh) * 2023-08-24 2023-09-26 北京益华生物科技有限公司 一种***黏膜修复组合物及其应用
CN116803417B (zh) * 2023-08-24 2023-10-27 北京益华生物科技有限公司 一种***黏膜修复组合物及其应用

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