CN110339197A - 一种防治血管性痴呆的磷酸二酯酶9a抑制剂的用途 - Google Patents

一种防治血管性痴呆的磷酸二酯酶9a抑制剂的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN110339197A
CN110339197A CN201910551371.1A CN201910551371A CN110339197A CN 110339197 A CN110339197 A CN 110339197A CN 201910551371 A CN201910551371 A CN 201910551371A CN 110339197 A CN110339197 A CN 110339197A
Authority
CN
China
Prior art keywords
purposes
group
vascular dementia
preparation
drug
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910551371.1A
Other languages
English (en)
Inventor
刘培庆
罗海彬
陈健文
谌正楠
李民
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sun Yat Sen University
Guangzhou Zhongda Nansha Technology Innovation Industrial Park Co Ltd
National Sun Yat Sen University
Original Assignee
Guangzhou Zhongda Nansha Technology Innovation Industrial Park Co Ltd
National Sun Yat Sen University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Zhongda Nansha Technology Innovation Industrial Park Co Ltd, National Sun Yat Sen University filed Critical Guangzhou Zhongda Nansha Technology Innovation Industrial Park Co Ltd
Priority to CN201910551371.1A priority Critical patent/CN110339197A/zh
Publication of CN110339197A publication Critical patent/CN110339197A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A61K31/522—Purines, e.g. adenine having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. hypoxanthine, guanine, acyclovir
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于药物技术领域，具体涉及如式I所示的磷酸二酯酶9A(PDE9A)抑制剂LW33，其药学上可接受的盐以及二者之一所组成的药物组合物的用途。本发明所涉及的化合物可应用于制备预防或/和治疗血管性痴呆的药物，也可用于制备改善小鼠单侧颈总动脉结扎(UCCAo)模型和大鼠中动脉缺血模型学习记忆功能障碍的药物，也可用于制备降低血清中IL‑1β、IL‑6、MDA并升高血清中SOD含量的药物和制备影响小鼠和大鼠血管性痴呆组织病理结构的药物。

Description

一种防治血管性痴呆的磷酸二酯酶9A抑制剂的用途
技术领域
本发明涉及药物技术领域，具体来说是一种用于防治血管性痴呆的磷酸二酯酶9A抑制剂的用途。
背景技术
血管性痴呆(Vascular Dementia，VaD)是由流向大脑的血流量减少而引起的一种影响认知能力的进行性疾病,其约占所有痴呆患者的17-20％，成为继阿尔茨海默病(AD)的第二大主要形式的痴呆症，并且在老年人群中普遍存在。临床表现为认知功能障碍、神经功能缺失等。
脑血管疾病的异质性使得阐明神经病理学机制和血管性痴呆机制具有挑战性。脑血流的充足供应对于维持大脑结构和功能的完整性具有重要的意义，脑血管的细微病变都可能对认知功能造成长远的不可逆的损伤。目前公认的由心脏疾病或者颈动脉狭窄或堵塞导致的脑血流灌注低于某个阈值时可以导致认知功能障碍。Marshall等在文章中提出脑血流降低40％～50％可导致不可逆的大脑功能抑制和认知功能障碍。而各种细胞信号转导和调节机制，包括细胞凋亡、自噬，氧化应激和炎症，由于它们参与脑缺血而与VaD相关。小胶质细胞，星形胶质细胞以及一些受神经损伤的神经元和少突胶质细胞在经危险性刺激后被激活时可以分泌炎症介质和其它标志物。一些数据报道，TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎细胞因子在血管性痴呆进程中发挥关键作用。
迄今为止，VaD治疗还没有特效药，当前的治疗手段主要是控制VaD导致的认知障碍的发展进程，但都缺乏显著疗效。目前临床上应用的胆碱酯酶抑制剂如石杉碱甲、多奈哌齐等以及NMDA受体阻断剂美金刚(Memantine)以及其他一些脑循环促进剂尼莫地平、施普善等均不能有效地改善或逆转VaD患者的症状和体征。随着VaD患者的病情加剧，生活往往无法自理，长期需要家人或专职医疗人员的护理，给家庭和社会带来严重的精神损失和经济压力。而且目前尚无FDA批准用于治疗VaD的有效药物。因此寻找新靶点、新机制的有效药物成为迫切需求。
LW33是PDE9A的强效选择性抑制剂(IC50为5.0nM，对其他PDE亚型的选择性大于50倍)，是基于PDE9A晶体结构设计并合成的全新结构高效价N-取代吡唑并[3,4-d]嘧啶酮类优选化合物。分子式C18H20CIN5O，分子量357.8。物化特性分析显示，白色至淡黄色粉末，易溶于甲醇、乙醇、丙酮，难溶于水、氯仿、乙酸乙酯等弱极性有机溶剂；药效及初步安全性分析显示，IC50＝5.0nM，小鼠急毒LD50接近1.5g/kg；药代动力学分析显示，大鼠单次灌胃5mg/kg后，Tmax＝2.0h，Cmax＝372.54ng/L，AUC(0-t)＝1640.87μg/L*hr，t1/2＝1.46h，口服生物利用度F＝57％。
该化合物与PDE9A复合物晶体结构显示，其与辉瑞化合物有类似的作用机制。前期药理研究表明，在动物体内东莨菪碱模型中，1.0mg/kg LW33对东莨菪碱致小鼠记忆障碍有显著性记忆改善作用，其药效与阳性对照物石杉碱甲一致。Aβ1-40脑内注射大鼠模型中，LW33低(0.35mg/kg)、中(0.7mg/kg)、高剂量(1.4mg/kg)干预后，能改善模型大鼠的认知功能，缩短潜伏期、增加经过平台次数、延长在目标象限停留时间。海马区cGMP水平显著上升。
此外，LW33还可以诱导海马脑片早期LTP及后期LTP的形成，以及早期LTP和后期LTP的融合，而AChEI多奈哌齐仅能诱导早期LTP形成，与文献报道PDE9抑制剂BAY73-6691的研究结果一致，提示PDE9A抑制剂较AChEI能更有效持久地增强学习记忆。机制研究发现，LW33主要通过cGMP/PKG/CREB信号通路产生抗神经保护作用。但是，截止到现在，尚未见LW33作为治疗血管性痴呆的应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供LW33在制备预防和/或治疗血管性痴呆疾病药物中的用途，黄芪甲苷通过下调LPS诱导的BV2炎症模型中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平，改善UCCAo模型小鼠和模型大鼠的学***台次数、延长在目标象限停留时间。同时可降低模型大鼠血清中MDA含量、升高SOD活性，并降低血清中IL-1β、IL-6的含量及改善血管性痴呆模型小鼠和大鼠脑组织皮层区和海马区的神经元坏死等病理状态，具有防治血管性痴呆的新用途。
为实现上述目的，本发明提供了一种一种由下述化合物(Ⅰ)表示的磷酸二酯酶9A抑制剂LW33，或其药学上可接受的盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备用于预防或/和治疗血管性痴呆疾病药物的用途。
进一步地，所述LW33在制备预防和/或治疗血管性痴呆疾病药物中缓解LPS诱导的BV2炎症反应的作用浓度为0.1～1μM。
进一步地，所述LW33在用于治疗血管性痴呆时降低炎症因子TNF-α、IL1-β和IL-6的mRNA表达的浓度为0.1～1μM。
进一步地，本发明还提供了LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备影响单侧颈总动脉结扎(UCCAo)模型小鼠脑组织病理结构药物中的用途。
进一步地，本发明还提供了LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备改善单侧颈总动脉结扎(UCCAo)模型小鼠学习记忆功能障碍药物的用途。
进一步地，所述化合物或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物的使用剂量为10～20mg/kg。
本发明还提供了LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备改善血管性痴呆模型大鼠学习记忆功能障碍的用途。
进一步地，所述化合物或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物的使用剂量为1～9mg/kg。
本发明还提供了一种LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备用于降低血管性痴呆模型大鼠血清中MDA含量、升高血清中SOD含量的药物中的用途。
本发明还提供了LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备降低血管性痴呆模型大鼠血清中IL-1β、IL-6药物中的用途。
本发明还提供了LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备影响血管性痴呆模型大鼠脑组织病理结构药物中的用途。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为LW33对小鼠小胶质细胞BV2增殖的细胞毒作用；
图2为LW33对LPS诱导的BV2细胞增殖的影响；
图3a为LW33对LPS诱导BV2炎症模型的炎症因子IL1-β的mRNA水平的影响；
图3b为LW33对LPS诱导BV2炎症模型的炎症因子IL-6的mRNA水平的影响；
图3c为LW33对LPS诱导BV2炎症模型的炎症因子TNF-α的mRNA水平的影响；
图4为LW33治疗21天对UCCAo模型小鼠脑组织海马CA1区神经元的影响(HE染色)；
图5为LW33治疗14天对模型大鼠脑组织海马CA1区神经元的影响(HE染色)；
图6为LW33治疗14天对模型大鼠脑组织皮层区神经元的影响(HE染色)；
图7为LW33的化学结构式。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1、LW33对BV2细胞活力的影响
(1)实验材料：BV2(小鼠小胶质细胞)，购于中国科学院细胞库；DMEM培养基(美国Gibco)；胎牛血清(美国Gibco)；CCK8(日本同仁化学研究所)；Bay73-6691(1-(2-氯苯基)-6-[(2R)-3,3,3-三氟-2-甲基丙基]-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮,拜耳)；PF-04447943(6-[(3S，4S)-4-甲基-1-(嘧啶-2-基甲基)吡咯烷-3-基]-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮，美国MCE)。
(2)实验方法：5.0×103的BV2细胞加入到96孔板的板孔中，培养24h。吸出原培养液，加入含有不同浓度(0.1μM、0.3μM、1μM)的LW33的完全培养液，以加入不含LW33的完全培养液作为正常对照。继续培养24h，向每孔中加入10μL CCK8，将培养板在孵育箱内培养2h，用酶标仪在450nm处检测各孔吸光度值，检测细胞活力。
(3)实验结果：由图1结果表明，LW33在0.1～1μM范围内，对细胞活力没有明显的改变，无明显细胞毒性作用。
实施例2、LW33对LPS诱导的BV2细胞增殖的影响
(1)实验材料
小鼠小胶质细胞BV2(中国科学院细胞库)，DMEM培养基(美国Gibco)、胎牛血清(美国Gibco)、CCK8(日本同仁)、LPS(Sigma)
(2)实验方法
5.0×103的BV2细胞加入到96孔板的板孔中，培养24小时。将BV2细胞分为：
对照组：LPS处理组(1μg/mL作用时间24h)；
LPS处理组(1μg/mL作用时间24h)+LW33 0.1μM；
LPS处理组(1μg/mL作用时间24h)+LW33 0.3μM；
LPS处理组(1μg/mL作用时间24h)+LW33 1μM；
LPS处理组(1μg/mL作用时间24h)+Bay73-6691 3μM；
LPS处理组(1μg/mL作用时间24h)+PF-04447943 3μM；
24h后CCK8检测细胞增殖情况。以LPS未刺激组作为对照，分析各组BV2细胞增殖率的差异。
(3)实验结果：详见图2。与LPS未刺激组相比，LPS刺激BV2(小鼠小胶质细胞)24h后，细胞活力下降；而LW33在0.1μM～0.3μM浓度范围内可以升高BV2活力，具有保护作用。
实施例3、LW33对LPS诱导的BV2炎症因子mRNA水平的影响
(1)材料与方法：HLF细胞购于中山大学实验动物中心；
BV2购于中国科学院细胞库，DMEM培养基(美国Gibco)、胎牛血清(美国Gibco)、0.25％胰酶(美国Gibco)、双抗(美国Gibco)、LPS(Sigma)、DMSO(MPBIO)、IL-1、IL-1β、TNF-α引物(上海生工)、Thermo Revert Aid Kit试剂盒(Thermo Fisher Scientific)
(2)试验方法
将细胞接种于60mm中皿，胞培养箱中培养。当细胞生长融合至50～60％，分别用0.1、0.3、1μM LW33以及3μM Bay73-6691、PF-04447943对BV2细胞进行预处理1h，随后再加入1μg/mL的LPS进行刺激，作用24h后提取细胞总RNA进行实时荧光定量PCR试验。测得浓度后，取1μg总RNA按照Thermo Revert Aid Kit试剂盒说明书逆转为cDNA，Q-PCR步骤参照TOYOBO SYBR Premix EX TaqTM试剂盒说明书推荐用量进行优化，按95℃for 60s，95℃for10s，60℃for 30s进行扩增40个循坏。以β-action为内参，根据2-ΔΔCt法计算各基因的相对表达量，即表达量的变化倍数。
(3)实验结果：详见图3a、3b、3c。在0.1～1μM范围内，LW33呈剂量依赖性下调IL-1、IL-1β、TNF-α的mRNA水平，与模型组相比，有统计学差异。与模型组相比，LW33在0.1～1μM范围内，能缓解LPS诱导的炎症反应。
实施例4、LW33对单侧颈总动脉结扎(UCCAo)模型小鼠的影响
有研究表明，单侧CCA(UCCAo)的永久性闭塞模型显示CBF(脑血流量)，WM(白质)病变和记忆障碍延迟的慢性轻度减少。此外，促炎细胞因子的水平增加，而抗炎细胞因子的水平在脑中降低。这种小鼠模型是研究炎症反应，WM损伤和记忆障碍之间关联的有力工具，这可能有助于阐明VaD的病理机制，特别是SIVD(皮质下缺血性血管性痴呆)。
(1)实验材料
实验动物：SPF级KM小鼠40只，8～9周龄，体重28～40g，雄性，购自于中山大学实验动物中心(许可证号：SYXK(粤)2016-0112)，环境温度:20～25℃，湿度50～70％，自由摄食饮水。
LW33(中山大学药学院)、多奈哌齐(卫材药业有限公司)羧甲基纤维素钠CMCNa(天津致远化学试剂有限公司)
(2)实验方法
动物分组：SPF级KM小鼠40只，按体重随机分为5组，分别是假手术组，模型组，LW33低、高剂量组(10、20mg/kg)、多奈哌齐组，每组8只。
模型制备：除假手术组外，其他各组小鼠在1周的适应期后，给小鼠施用0.45％戊巴比妥钠用于诱导麻醉。通过中线颈部切口，从邻近的迷走神经分离右颈总动脉(CCA)，并用6-0丝线缝合(n＝32)。假手术组(n＝8)，对小鼠进行相同的外科手术而不进行颈动脉结扎。手术后，将小鼠放置笼子中，并给予食物和水。
给药方案：假手术组灌胃给予同等量溶媒0.5％CMCNa，LW33低(10mg/kg)、LW33高剂量组(20mg/kg)以及多奈哌齐组(2.1mg/kg)给予相应受试药物。造模后次日开始给药，每天给药1次，连续给药21天。末次给药1h后再测相关指标。
检测指标：每天观察各组小鼠一般状态、给药前和给药结束后分别称量体重，给药第21天为实验终点，末次给药1h后进行Morris水迷宫试验，测定完毕后假手术或UCCAO手术后30天，用戊巴比妥钠深度麻醉小鼠，并用0.01MPBS经心脏灌注，然后用含有4％多聚甲醛的0.1M磷酸盐缓冲液(PB，pH7.4)的固定剂灌注。脑组织固定24h后做HE染色。
(3)实验结果
1)小鼠一般状态及体重
与假手术组比较，造模各组动物活动减少，毛发欠光滑，其它外观体征、粪便性状等未见明显差异。与模型对照组比较，LW33组及多奈哌齐组动物外观体征、行为活动、粪便性状等未见明显差异。由表1可见，与正常对照组比较,造模组动物体重没有明显改变，未见统计学差异(P>0.05)。与模型组比较，LW33组小鼠体重未见统计学差异(P>0.05)，但是0周时，多奈哌齐组小鼠体重有所减轻，有统计学差异(P<0.05)。
表1 LW33对UCCAo小鼠体重的影响(g，Means±SD，n＝8)
与模型对照组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
2)LW33对UCCAo小鼠空间探索和学习记忆能力的影响
与假手术组比较，模型组小鼠逃避潜伏期显著升高，在定位航行的第一天和第四天，有统计学差异(P<0.05)，提示单侧结扎CCA可导致小鼠学***台次数和在目标象限的停留时间明显减少(P＜0.01)，提示单侧结扎CCA造模3周可导致小鼠空间探索能力减弱。与模型组比较，LW33高剂量组和多奈哌齐组可以改善模型小鼠的空间探索障碍(P<0.05)。见表2、表3：
表2 LW33对UCCAo小鼠逃避潜伏期的影响(Means±SD，n＝8)
与模型对照组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
表3 LW33对UCCAo小鼠空间探索的影响(Means±SD，n＝8)
与模型对照组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
3)LW33对UCCAo小鼠脑组织HE染色的影响
如图4的HE染色结果所示：假手术小鼠海马CA1区正常神经元数量较多，细胞核呈圆形，核仁明显且胞浆着色均匀，包膜完整。模型组小鼠海马CA1区正常神经元明显减少，细胞核固缩，神经元细胞周围疏松，间隙变大。
由实验结果可知，PDE9A抑制剂LW33在高剂量(20mg/kg)下可以改善UCCAo模型小鼠的学习记忆功能障碍，其作用与阳性药多奈哌齐效果相当。LW33高剂量组和多奈哌齐组能改善小鼠海马CA1区神经元损伤，且神经元数量较模型组有所增加。
实施例5、LW33对致血管性痴呆模型大鼠的影响
使用缺血性中风的啮齿动物模型可能有助于阐明造成人类认知障碍的病变类型。大鼠血管内大脑中动脉(MCA)闭塞被认为是人脑缺血的方便可靠的模型。在大鼠血管内MCA闭塞模型中可以诱导感觉运动和认知功能障碍，但是由血管内MCA闭塞引起的感觉运动缺陷可能随时间而改善，研究数据表明，在大鼠中，该模型可导致认知障碍的进行性过程。这与VaD的临床进展一致。到目前为止，使用该模型的实验研究已经证明了原发性缺血区域中脑缺血损伤和AD型神经病理学的直接相互作用。此外，与认知功能的进行性衰退相一致，在大鼠血管内MCA闭塞模型中已经证实了在原发性缺血区域，海马远端的远端区域的延迟神经变性。因此该模型可用于研究VaD。并提供对VaD的一些病理生理学机制的深入了解。
(1)实验材料
实验动物：SPF级SD大鼠72只，雄性，体重200～240g，购自于中山大学实验动物中心(许可证号：SCXK(粤)2016-0029)，环境温度:20～25℃，湿度50～70％，自由摄食饮水。
LW33(中山大学药学院)、尼莫地平片(广东华南药业集团有限公司)、羧甲基纤维素钠(天津致远化学试剂有限公司)、多聚甲醛(国药集团化学试剂有限公司)、大鼠SOD试剂盒(南京建成生物工程研究所)、大鼠MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所)、大鼠IL-6试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)、大鼠TNF-α试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)、大鼠IL-1β试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)。
(2)实验方法
动物分组：SPF级雄性Sprague Dawley大鼠72只，按体重随机分为6组，分别是假手术组、模型组、LW33低剂量组(1mg/kg)、LW33中剂量组(3mg/kg)、LW33高剂量组(9mg/kg)、尼莫地平组(9.3mg/kg)。每组12只。
模型制备：除假手术组外，其他各组大鼠根据Nagasawa等方法改良的线栓法制作模型。以2％戊巴比妥钠腹腔注射(40mg/kg)麻醉，仰卧固定于手术板上。右颈部备皮、清洗，纵向剪开约1cm小口，分离CCA、ICA及ECA并挂线备用，结扎ECA与CCA,用动脉夹夹闭ICA远心端后,迅速于ECA与ICA分叉处作一切口,从切口处***一端加热成光滑球形尼龙线(直径为0.25mm,距球端2cm处作标记)。线***ICA后,于入口处稍稍结扎尼龙线与入口处ICA段,然后松开夹闭ICA的动脉夹,继续***尼龙线至稍有阻力后略回撤,至线***深度为(18.5±0.5)mm左右,实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。再次结扎入口处,尼龙线外留约1cm,缝合皮肤。缺血1h后轻轻提拉所留线头至有阻力,实现大脑中动脉再灌注,则造模完成。假手术组只结扎ECA与ICA。
给药方案：假手术组灌胃给予同等量溶媒(0.5％CMCNa)，LW33低剂量组(1mg/kg)、LW33中剂量组(3mg/kg)、LW33高剂量组(9mg/kg)、尼莫地平组(9.3mg/kg)给予相应受试药物。造模后次日开始给药，每天给药1次，连续给药14天。末次给药1h后再测相关指标。
检测指标：每天观察各组大鼠一般状态，给药第14天为实验终点，末次给药1h后依次进行被动回避(PAT)试验、Morris水迷宫试验，测定完毕后取大鼠腹腔静脉血置于含有EDTA的抗凝采血管中，3000rpm 4℃离心10min，吸取上清测定SOD、MDA、IL-1β、IL-6含量，取血后剪开颈胸部皮肤，暴露气管，迅速解剖胸腔，暴露心、肺，并用0.01M PBS经心脏灌注，然后用含有4％多聚甲醛的0.1M磷酸盐缓冲液(PB，pH7.4)的固定剂灌注。脑组织固定24h后做HE染色。
(3)实验结果
1)大鼠一般状态与假手术组比较，造模各组动物活动减少，毛发欠光滑，其它外观体征、粪便性状等未见明显差异。与模型对照组比较，各给药组组及动物外观体征、行为活动、粪便性状等未见明显差异。
2)LW33对模型大鼠在获得被动回避反应过程中记忆巩固的影响
术后给予LW33治疗2周后，在PAT测试期，与假手术相比，模型组大鼠进入暗箱的逃避潜伏期明显缩短(P<0.01)，错误次数增多(P<0.05)，提示可诱导SD大鼠获得性记忆巩固障碍；与模型组大鼠相比，LW33高剂量以及尼莫地平组可以延长大鼠进入暗箱的逃避潜伏期(P<0.01)且减少错误次数(P<0.01)。
表4.LW33对模型大鼠在训练期和测试期中潜伏期的影响(g，Means±SD，n＝12)
与模型对照组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
3)LW33对模型大鼠在Morris水迷宫试验中长时程记忆和空间探索能力的影响
在适应性训练中，与假手术组比较，各组大鼠游泳速度没有明显差异；假手术组大鼠学***台的时间(潜伏期)随着训练时间而缩短；模型组大鼠学***组作用相当，特别是在第五天与模型组的潜伏期存在统计学差异(P<0.05)。见表5、表6：
表5.LW33对模型大鼠逃避潜伏期的影响(g，Means±SD，n＝12)
与模型对照组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
表6.LW33对模型大鼠空间探索能力的影响(g，Means±SD，n＝12)
与模型对照组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
4)LW33对模型大鼠血清SOD、MDA含量的影响
与假手术组比较，模型组大鼠SOD含量显著下降(P＜0.01)，说明可导致大鼠血清SOD含量明显下降。与模型组比较，LW33高剂量组大鼠SOD含量升高有统计学差异(P＜0.01)；与假手术组比较，模型组大鼠血清MDA含量显著增加(P＜0.01)，说明可导致大鼠血清MDA水平明显升高。与模型组比较，LW33高剂量组以及尼莫地平组可降低模型大鼠血清MDA水平(P＜0.01)；见表7
表7 LW33对模型大鼠血清SOD、MDA含量的影响(Means±SD，n＝6)
与模型对照组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
5)LW33对模型大鼠血清IL-1β、IL-6含量的影响
与假手术组比较，模型组大鼠IL-1β、IL-6含量升高(P＜0.01)，说明可导致大鼠血清IL-1β、IL-6含量明显升高。与模型组比较，LW33高剂量组大鼠IL-1β、IL-6含量降低，分别有统计学差异(P＜0.01，P＜0.05)；见表8
表8 LW33对模型大鼠血清IL-1β、IL-6含量的影响(Means±SD，n＝10)
与模型对照组比较，*为P<0.05，**为P<0.01。
6)LW33对模型大鼠脑组织HE染色的影响
如图5、图6的HE染色结果所示：假手术组大鼠脑组织切片HE染色光镜下可见海马CA1区以及皮层区神经元细胞数目较多，排列整齐且形态结构完整。核仁明显且胞浆着色均匀，包膜完整。而模型组大鼠海马CA1区以及皮层区正常神经元细胞明显减少，神经元椎体细胞排列稀疏散乱，且皮层区出现明显的神经元坏死和空泡状。LW33高剂量组和多奈哌齐组大鼠海马CA1区及皮层区神经元损伤有所改善，正常神经元数量较模型组有所增加。
结论：在PAT(被动回避测试)试验中，高剂量(9mg/kg)的LW33及尼莫地平(9.3mg/kg)可以改善被动回避任务中大鼠的记忆巩固；在Morris水迷宫试验中，随着训练时间的增加，高剂量的LW33及尼莫地平可以提高模型大鼠的潜伏期、增加穿越目标象限平台的次数以及目标象限停留时间，对模型大鼠的学***也可以升高血清中SOD活性并降低MDA、IL-1β、IL-6含量，这提示LW33可能具有抗氧化应激、抗炎等作用。
本技术领域技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有与本发明所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除非像这里一样定义，不会用理想化或过于正式的含义来解释。
最后所应说明的是：以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解：依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围。

Claims (9)

1.一种由下述化合物(Ⅰ)表示的磷酸二酯酶9A抑制剂LW33，或其药学上可接受的盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备用于预防或/和治疗血管性痴呆疾病药物的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，在制备预防和/或治疗血管性痴呆疾病药物时，所述LW33缓解LPS诱导BV2炎症反应的作用浓度为0.1～1μM。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，在用于治疗血管性痴呆时，所述LW33在降低炎症因子TNF-α、IL1-β和IL-6的mRNA表达浓度为0.1～1μM。
4.根据权利要求1所述的LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备影响单侧颈总动脉结扎模型小鼠脑组织病理结构药物中的用途。
5.根据权利要求1所述的LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备改善单侧颈总动脉结扎模型小鼠学习记忆功能障碍药物的用途，其特征在于，所述LW33的使用剂量为10～20mg/kg。
6.根据权利要求1所述的LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备改善血管性痴呆模型大鼠学习记忆功能障碍的用途，其特征在于，所述LW33的使用剂量为1～9mg/kg。
7.根据权利要求1所述的LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备用于降低血管性痴呆模型大鼠血清中MDA含量、升高血清中SOD含量的药物中的用途。
8.根据权利要求1所述的LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备降低血管性痴呆模型大鼠血清中IL-1β、IL-6药物中的用途。
9.根据权利要求1所述的LW33或其药学上可接受盐或含有它们任何一种的药物组合物在制备影响血管性痴呆模型大鼠脑组织病理结构药物中的用途。
CN201910551371.1A 2019-06-24 2019-06-24 一种防治血管性痴呆的磷酸二酯酶9a抑制剂的用途 Pending CN110339197A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910551371.1A CN110339197A (zh) 2019-06-24 2019-06-24 一种防治血管性痴呆的磷酸二酯酶9a抑制剂的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910551371.1A CN110339197A (zh) 2019-06-24 2019-06-24 一种防治血管性痴呆的磷酸二酯酶9a抑制剂的用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110339197A true CN110339197A (zh) 2019-10-18

Family

ID=68182939

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910551371.1A Pending CN110339197A (zh) 2019-06-24 2019-06-24 一种防治血管性痴呆的磷酸二酯酶9a抑制剂的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110339197A (zh)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101983199A (zh) * 2008-04-02 2011-03-02 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 1-杂环基-1，5-二氢-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮衍生物及其作为pde9a调节剂的用途
CN102365285A (zh) * 2009-03-31 2012-02-29 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 1-杂环基-1，5-二氢-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮衍生物及其作为pde9a调节剂的用途
CN102786525A (zh) * 2012-08-08 2012-11-21 中山大学 N-取代吡唑并[3,4-d]嘧啶酮类化合物、其制备方法及其应用
CN103459397A (zh) * 2011-02-14 2013-12-18 勃林格殷格翰国际有限公司 6-环丁基-1,5-二氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮衍生物及其作为PDE9A抑制剂的用途
CN106604747A (zh) * 2014-08-26 2017-04-26 基础应用医学研究基金会 用于治疗和预防伴随认知缺陷或缺损的神经障碍以及神经变性疾病的产品
CN108137602A (zh) * 2015-10-13 2018-06-08 勃林格殷格翰国际有限公司 吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的环醚衍生物
CN108218874A (zh) * 2016-12-21 2018-06-29 南京药捷安康生物科技有限公司 一种磷酸二酯酶抑制剂及其用途
CN109180679A (zh) * 2018-07-31 2019-01-11 中山大学 一类N-取代吡唑并[3,4-d]嘧啶酮类化合物及其制备方法和应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101983199A (zh) * 2008-04-02 2011-03-02 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 1-杂环基-1，5-二氢-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮衍生物及其作为pde9a调节剂的用途
CN102365285A (zh) * 2009-03-31 2012-02-29 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 1-杂环基-1，5-二氢-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮衍生物及其作为pde9a调节剂的用途
CN103459397A (zh) * 2011-02-14 2013-12-18 勃林格殷格翰国际有限公司 6-环丁基-1,5-二氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮衍生物及其作为PDE9A抑制剂的用途
CN102786525A (zh) * 2012-08-08 2012-11-21 中山大学 N-取代吡唑并[3,4-d]嘧啶酮类化合物、其制备方法及其应用
CN106604747A (zh) * 2014-08-26 2017-04-26 基础应用医学研究基金会 用于治疗和预防伴随认知缺陷或缺损的神经障碍以及神经变性疾病的产品
CN108137602A (zh) * 2015-10-13 2018-06-08 勃林格殷格翰国际有限公司 吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺的环醚衍生物
CN108218874A (zh) * 2016-12-21 2018-06-29 南京药捷安康生物科技有限公司 一种磷酸二酯酶抑制剂及其用途
CN109180679A (zh) * 2018-07-31 2019-01-11 中山大学 一类N-取代吡唑并[3,4-d]嘧啶酮类化合物及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HU, JINHUI等: "Design, Synthesis, and Biological Evaluation of Dual-Target Inhibitors of Acetylcholinesterase (AChE) and Phosphodiesterase 9A (PDE9A) for the Treatment of Alzheimer"s Disease", 《ACS CHEMICAL NEUROSCIENCE》 *
MANNA HUANG等: "Structural asymmetry of phosphodiesterase-9A and a unique pocket for selective binding of a potent enantiomeric inhibitor", 《MOL PHARMACOL》 *
WU, YINUO等: "Discovery of Potent, Selective, and Orally Bioavailable Inhibitors against Phosphodiesterase-9, a Novel Target for the Treatment of Vascular Dementia", 《JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69821011T3 (de) Verfahren zur Modulierung der Neovaskularisierung und/oder des Wachstums kollateraler Arterien und/oder anderer Arterien aus bestehenden arteriolären Verbindungen
CN102548571A (zh) 用于预防和治疗脑部疾病和疾病状态的组合物和方法
US20170224623A1 (en) Application of andrographolide in the preparation of a pharmaceutical for treatment of inflammatory bowel disease, andrographolide enteric targeting micropellet, and method for preparation thereof
US20160129077A1 (en) Use of recombinant ganoderma immunoregulatory protein (rLZ-8) in preparation of drug for treating melanoma
US10220019B2 (en) Method for treating pulmonary fibrosis comprising application of dimethylamino micheliolide
CN104800858B (zh) Hsp90抑制肽偶联物及其在肿瘤治疗中的应用
Jin et al. Traditional Chinese drug ShuXueTong facilitates angiogenesis during wound healing following traumatic brain injury
US11524021B2 (en) Use of ginsenoside M1 for manufacturing medicament for treating oral cancer
CN110339197A (zh) 一种防治血管性痴呆的磷酸二酯酶9a抑制剂的用途
CN1986543A (zh) 癌症化学治疗
CN106038534A (zh) 冬凌草甲素在制备抗抑郁症药物中的用途
ES2426174T3 (es) Composición herbácea para trastornos inflamatorios
US9265755B2 (en) Stem cell administration to reduce TNF-α level in CSF of an autism spectrum disorder or pervasive development disorder patient
CN113082014A (zh) 丹酚酸b复合物及其制剂与应用
CN116019818B (zh) 一种用于预防、改善和/或治疗耳蜗突触损伤的组合物及其应用
CN115192569B (zh) Sphaeropsidin A在制备预防或治疗炎症诱发疾病药物中的应用
CN113425723B (zh) Pim1小分子抑制剂在制备防治强直性脊柱炎产品中的应用
US7846901B2 (en) Method for inhibiting or treating intestinal damage caused by radiotherapy or chemotherapy comprising administering substance-P
CN103622988B (zh) 虫草素在制备抗抑郁症的药物中的用途及其制备而得的快速抗抑郁症药物
CN115998845A (zh) 血小板反应蛋白1在制备预防和/或治疗视网膜损伤的药物中的应用
CN117243953A (zh) PD1-PDL1 inhibitor 2在筛选治疗PD-1/PD-L1靶向抑制引起的心脏毒性的药物中的用途
Saeedi et al. Research Article Efficacy of Acacia nilotica Linn. Pod’s Sitz Bath plus Vaginal Pessary in Syndromic Management of Abnormal Vaginal Discharge: A Randomized Controlled Trial
CN111035758A (zh) 药物组合物及其应用、无菌容器和试剂盒
CN116036102A (zh) 曼那斯汀降低xelox联合治疗方案导致的肠道损伤的应用
CN104027349A (zh) 泊洛沙姆188在制备预防和/或治疗帕金森症的药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20191018

RJ01 Rejection of invention patent application after publication