CN110317261A - 改进的两步超滤法生产人血白蛋白 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种人血白蛋白的超滤工艺改进,可以有效的去除人血白蛋白产品中的高分子杂蛋白及多聚体分子。在巴氏病毒灭活前后分别采用分子截留量较高(80KD至100KD)、较小(10KD至30KD)的超滤膜进行2‑3次的超滤生产。收集含有人血白蛋白的滤过液、浓缩液作为产品。由于减少了高分子杂蛋白、蛋白多聚体的干扰,保证了产品有效期内的产品品质,使用疗效更有保障。
Description
技术领域
本专利属于生物制药领域,提供了一种改进的人血白蛋白生产的超滤法工艺,可以有效的去除人血白蛋白产品中的高分子杂蛋白及多聚体分子。
背景技术
《中国药典》(2015年版)中关于人血白蛋白的指标如下:成品检定项下3.3.3.7 多聚体含量,按3121人血白蛋白多聚体测定法测试,应不高于5%。多年来,该指标的法定标准没有变化。
由于含多聚体的白蛋白制品被注入人体后,可导致血液中白蛋白胶体渗透压下降,在体内***加快,正常人体血液中并不存在白蛋白多聚体。所以有必要有效的控制和减少人血白蛋白产品中的多聚体含量,目前采用的低温乙醇法生产工艺,人血白蛋白产品中多聚体含量一般为2.5%至3.5%之间。
吴敬林的研究文章“不同条件巴氏消毒和热稳定试验对人血白蛋白多聚体的影响”(医学文选,2000年06期)指出:人血白蛋白巴氏消毒过程和人血白蛋白成品贮存过程中的蛋白浓度时导致多聚体的含量增加的重要原因,在生产中应采用10%蛋白浓度进行巴氏消毒和分装,当采用20%浓度时,选用pH6.6,辛酸钠浓度为0.18mmol/克蛋白为最佳。
目前的生产工艺中没有针对于控制多聚体含量的方法,为此,有必要开发一种专门控制人血白蛋白产品中多聚体含量的方法。
发明内容
本专利的人血白蛋白超滤生产明确进行了多个超滤步骤的超滤生产,主要目的是去除人血白蛋白生产过程中可能形成的多聚体分子及大分子的杂蛋白。
本专利以目前人血白蛋白的超滤工艺(超滤膜截留分子量为10KD至30KD的超滤生产9遍)为基础,在超滤前及别是病毒灭活后在进行针对高分子杂蛋白及人血白都加了多聚体分离的超滤生产步骤,采用的超滤截留分子量为80KD至100KD。本专利的人血白蛋白的超滤生产过程如下:
第一步超滤分离为(去除高分子杂蛋白):采用高分子截留量(如80KD至100KD)超滤除去高分子杂蛋白,按照超滤的平均速度计算,将拟去除的高分子溶液超滤1至10遍,确保高分子蛋白溶液中几乎没有人血白蛋白分子。
第二步超滤分离为(去除小分子蛋白及乙醇等小分子物质):采用低分子截留量(如10KD至30KD)超滤除去小分子杂蛋白及小分子如乙醇及铝残留物,前3至6次为相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液超滤,后3至6次为相同温度等体积的注射用水超滤,超滤完成后,进行超滤浓缩,浓缩至所需要的蛋白质浓度,如人血白蛋白浓度为20至30%。
第三步超滤分离(去除多聚体)为:巴氏病毒灭活后再次超滤去除多聚体分子,超滤完成并搅拌均匀后除菌灌装。
由于第一次超滤和第三次超滤是针对高分子及多聚体之类的分子量较正常白蛋白分子大的物质,所以可以将第一步超滤生产与第三步超滤生产合并,在白蛋白巴氏病毒灭活后进行超滤,超滤完成并搅拌均匀后除菌灌装。
采用本专利的超滤工艺,可以有效的去除人血白蛋白产品中的高分子杂蛋白及白蛋白的多聚体,提高人血白蛋白的稳定性,有效的保证产品有效期内的产品质量和使用疗效。
实施实例
实施实例1:三步超滤法生产人血白蛋白
以人血白蛋白生产的组分V沉淀纯化液为开始,组织人血白蛋白的超滤生产。
第一步超滤分离为(去除高分子杂蛋白):采用高分子截留量(如80KD至100KD)超滤除去高分子杂蛋白,按照超滤的平均速度计算,将拟去除的高分子溶液用里一个罐体收集,超滤后补充相同温度的注射用水连续超滤1至10遍,确保高分子蛋白溶液中几乎没有人血白蛋白分子。用一个密闭的罐体收集超滤的滤过液。
超滤的浓缩液、滤过液可以分别用不同的罐体收集,也可以将浓缩液返回至超滤出罐,超滤至一定浓度后补充相同温度的注射用水继续进行超滤,连续2至10遍。
第二步超滤分离为(去除小分子蛋白及乙醇等小分子物质):采用低分子截留量(如10KD至30KD)超滤除去小分子杂蛋白及小分子如乙醇及铝残留物,前3至6次为相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液超滤,后3至6次为相同温度等体积的注射用水超滤,超滤完成后,进行超滤浓缩,浓缩至所需要的蛋白质浓度,如人血白蛋白浓度为20至30%。
这一步的超滤过程在一个密闭罐体内完成,超滤生产至超滤前蛋白溶液体积的50%后补充相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液或者注射用水后再次启动超滤生产,连续进行不少于6次的超滤。
第三步超滤分离(去除多聚体)为:巴氏病毒灭活后再次超滤,采用高分子截留量(如80KD至100KD)超滤除去高分子的蛋白多聚体,超滤完成并搅拌均匀后除菌灌装。
用一个密闭的罐体收集超滤的滤过液,搅拌均匀后续复测产品的钾、钠离子含量及渗透压摩尔浓度。
上述产率过程涉及到病毒灭活前后的两个生产阶段,需注意病毒灭活前后的设备设施严格分开,最好是分区域进行。
实施实例2:两步超滤法生产人血白蛋白
以人血白蛋白生产的组分V沉淀纯化液为开始,组织人血白蛋白的超滤生产。
第一步超滤分离为(去除小分子蛋白及乙醇等小分子物质):采用低分子截留量(如10KD至30KD)超滤除去小分子杂蛋白及小分子如乙醇及铝残留物,前3至6次为相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液超滤,后3至6次为相同温度等体积的注射用水超滤,超滤完成后,进行超滤浓缩,浓缩至所需要的蛋白质浓度,如人血白蛋白浓度为20至30%。
这一步的超滤过程在一个密闭罐体内完成,超滤生产至超滤前蛋白溶液体积的50%后补充相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液或者注射用水后再次启动超滤生产,连续进行不少于6次的超滤。
这一步超滤是目前的人血白蛋白生产的常规超滤工序控制。
第二步超滤分离(去除高分子杂蛋白及多聚体)为:巴氏病毒灭活后再次超滤,采用高分子截留量(如80KD至100KD)超滤除去高分子杂蛋白及高分子的蛋白多聚体,超滤完成并搅拌均匀后除菌灌装。
用一个密闭的罐体收集超滤的滤过液,搅拌均匀后续复测产品的钾、钠离子含量及渗透压摩尔浓度。
上述产率过程涉及到病毒灭活前后的两个生产阶段,需注意病毒灭活前后的设备设施严格分开,最好是分生产区域进行。
Claims (3)
1.本专利提供了一种人血白蛋白的超滤分离法,其特征在于:分别采用分子截留量较高(80KD至100KD)、较小(10KD至30KD)的超滤膜进行2-3次的超滤生产,以有效的去处人血白蛋白生产中的高分子杂蛋白及热处理过程中形成的多聚体。
2.按权利要求1,人血白蛋白两步超滤法生产的第一步超滤分离为:采用高分子截留量(如80KD至100KD)超滤除去高分子杂蛋白,按照超滤的平均速度计算,将拟去除的高分子溶液超滤1至10遍,确保高分子蛋白溶液中几乎没有人血白蛋白分子;第二步超滤分离为:采用低分子截留量(如10KD至30KD)超滤除去小分子杂蛋白及小分子如乙醇及铝残留物,前3至6次为相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液超滤,后3至6次为相同温度等体积的注射用水超滤,超滤完成后,进行超滤浓缩,浓缩至所需要的蛋白质浓度,如人血白蛋白浓度为20至30%;第三步超滤分离为:巴氏病毒灭活后再次超滤去除多聚体分子,超滤完成并搅拌均匀后除菌灌装。
3.按权利要求1,以去除人血白蛋白产品中多聚体含量为目的的人血白蛋白两步超滤法生产的第一步超滤分离为:采用低分子截留量(如10KD至30KD)超滤除去小分子杂蛋白及小分子如乙醇及铝残留物,前3至6次为相同温度等体积的0.9%氯化钠溶液超滤,后3至6次为相同温度等体积的注射用水超滤,超滤完成后,进行超滤浓缩,浓缩至所需要的蛋白质浓度,如人血白蛋白浓度为20至30%,第二步超滤分离为:60℃10小时巴氏病毒灭活后采用高分子截留量(如80KD至100KD)超滤除去高分子杂蛋白,按照超滤的平均速度计算,将拟去除的高分子溶液超滤1至10遍,确保高分子蛋白溶液中几乎没有人血白蛋白分子,之后再次进行人血白蛋白产品的配制,配制完成后进行除菌灌装。
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