CN103333240B - 从组分ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法 - Google Patents
从组分ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103333240B CN103333240B CN201310307858.8A CN201310307858A CN103333240B CN 103333240 B CN103333240 B CN 103333240B CN 201310307858 A CN201310307858 A CN 201310307858A CN 103333240 B CN103333240 B CN 103333240B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- component
- precipitate
- liquid
- fraction
- pressure filter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Abstract
本发明公开了从组分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法。现有技术中从组分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法均是热处理法，热处理法回收率低，在回收过程中除白蛋白外的所有蛋白均变性，不能从中提取其他物质，使得提取成本增高。本发明通过组分Ⅳ沉淀溶解、纯化、组分Ⅴ沉淀的制备、组分V精制纯化、超滤、半成品配制、巴氏灭活等步骤有效的从组分Ⅳ沉淀中分离出组分Ⅴ进而配制成人血白蛋白成品，本发明用低温乙醇沉淀法能够去除杂蛋白，减少人血白蛋白的共沉，提高成品收率，减小蛋白质的变性，增加成品的稳定性。本发明在提取了人血白蛋白后，仍然可以提取其他组分，提高血浆的综合利用，是提取人血白蛋白方法上的创新。
Description
技术领域
本发明涉及的是从组分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法。属于血液制品的制备技术领域。
背景技术
人血白蛋白是一种血液制品，从人血浆中提取，能够增加患者的血容量和维持血浆胶体渗透压，在治疗因烧伤等原因引起了体液大量流失方面具有非常重要的作用，此外，人血白蛋白还起着营养供给、运输及解毒和对其它血浆蛋白的胶体保护和稳定的作用。
目前世界上各血液制品生产厂家均参照Cohn6法或Kistler-Nitchmann 低温乙醇法适当改进生产人血白蛋白，此类技术为低温乙醇分级沉淀技术，通过有效控制蛋白质沉淀的五个因素：pH值、温度、蛋白质浓度、离子强度、乙醇浓度来逐级沉淀血浆中的不同蛋白质，一般分离人血白蛋白的步骤为先从血浆中去除组分Ⅰ，再去除组分Ⅱ＋Ⅲ，然后去除组分Ⅳ，最后沉淀提取组分Ⅴ即人血白蛋白。在人血白蛋白生产过程中产生的组分Ⅳ一般作为杂质被废弃，但是由于分级沉淀过程中的影响因素很多，传统的生产工艺中，组分Ⅳ沉淀中夹杂有一定量未能被分离的人血白蛋白，也被同时弃去，造成材料的浪费，也为制造人血白蛋白原料造成紧缺，因此，从废弃的沉淀中回收人血白蛋白，缓解国内原料血浆供应紧张的局面显得十分重要，为此，公告号是CN1305903C，名称是：一种从沉淀组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中回收白蛋白的方法，以及公告号是CN102311497A，名称是：一种用低温乙醇法从组份Ⅳ沉淀中回收白蛋白的方法，均提供了从沉淀组份Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中回收白蛋白的方法，具有一定的积极意义，然而，所提供的方法均是热处理法，将沉淀组份Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ稀释后加热至68℃这一临界点，使除了白蛋白外所有蛋白质均变性，从而与白蛋白分离开，提取出白蛋白，但热处理法一方面回收率低，另一方面在回收过程中除白蛋白外的所有蛋白均变性，不能从中提取其他物质，使得提取成本增高。因此，寻求一种更理想的不需加热的从沉淀组份Ⅳ中回收白蛋白的方法，就具有了十分重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的就是提供从组分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，克服现有技术热处理法所存在的不足，有效地解决从组分Ⅳ中提取人血白蛋白，以满足人们对人血白蛋白制品的需求问题。
为实现上述目的，本发明采取了下述技术方案，从组分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，包括以下具体技术步骤：
（1）组分Ⅳ沉淀溶解
将组分Ⅳ沉淀放入2倍重量的1～2℃，8～10g/L的氯化钠中，搅拌溶解，保持溶液温度-1～-2℃,搅拌溶解5～6小时，即为组分Ⅳ沉淀溶解液。
（2）纯化
①将组分Ⅳ沉淀溶解液打入稀释液中稀释，稀释液的量为组分Ⅳ沉淀溶解液的3～4倍，稀释后将制品搅拌降温到-2~-3℃，按0.8~1.2L/分钟的速度缓慢加入1mol/L碳酸氢钠，调整制品pH值至6.1～6.4，-2～-3℃条件下搅拌6～8小时，得到组分Ⅳ溶解液备用；
其中稀释液的配制是：含氯化钠0.15mol/L ,乙醇浓度27～30％（V/V），搅拌降温到-2~-3℃；
②于组分Ⅳ溶解液中加入-20℃以下95%的乙醇，使组分Ⅳ溶解液中乙醇浓度达到40～42％（V/V），乙醇加入速度保持到70～80L/h，加入过程中保持溶液温度-2～-3℃，乙醇加毕，用1mol/L的碳酸氢钠调整溶液pH值至6.6～6.7，降温使组分Ⅳ溶解液的温度至-5.5～-6℃，恒温搅拌6～8小时得到组分Ⅳ稀释液备用；
③向组分Ⅳ稀释液中加入硅藻土，加入量为每100Kg组分Ⅳ沉淀用3～5Kg硅藻土，搅拌30-40分钟后用压滤机压滤，压滤结束后用冷压缩空气吹尽压滤机腔内液体，到出气泡为止，收集滤液，得到组分Ⅳ压滤液备用，沉淀弃丢；
（3）组分Ⅴ沉淀的制备
①计量组分Ⅳ压滤液体积，开启搅拌，降温，制品降温到-6～-7℃，缓慢加入2mol/L HAC，加入速度为50-60ml/min，调整溶液pH至5.2～5.5，调整完pH后将制品降温至-8～-9℃并搅拌2小时，静放6～8小时；
②开启搅拌，向组分Ⅳ压滤液中加入硅藻土，加入量以每100Kg 组分Ⅳ沉淀加1～2Kg硅藻土，搅拌30-40分钟后开始压滤，滤液弃丢或收集后进行乙醇回收处理；收集组分Ⅴ沉淀备用；
（4） 组分V精制纯化
① 组分V沉淀用5倍体积的8%（V/V）乙醇溶液搅拌溶解，沉淀完全溶解后，测量溶液pH应在pH至4.50～4.70，制品最终温度控制为-3.0℃±0.5℃，继续搅拌2~3小时压滤；
② 压滤：压滤过程中搅拌不停，压滤完后，用低温冷空气吹出滤器内液体，至出气泡后停止，后用FV精制平衡液冲洗滤板，冲洗液并入到过滤液中得到纯化液备用；
其中FV精制平衡液的配制：含乙醇12%（V/V），溶液pH值4.50~4. 70，降温至-3.0℃±0.5℃。
（5）超滤
① 开启搅拌，用1M碳酸氢钠调整纯化液pH值至7.0～7.2；
② 将纯化液首次超滤浓缩至蛋白浓度100～150g/L，用5倍的9g/L的氯化钠溶液等体积透析，再用3倍的注射用水等体积透析得到白蛋白原液，将白蛋白原液最终超滤浓缩至蛋白质含量210g/L以上，用适量注射用水洗涤超滤膜，收集洗膜液，并入上述蛋白液中即为人血白蛋白原液，取样做进行原液检测；
（6）半成品配制
根据原液检定进行稀释配制：根据原液蛋白质含量进行配制，按每克蛋白质160毫摩尔称取辛酸钠，按每克蛋白质120～130毫摩尔称取氯化钠，称取后以少量注射用水溶解，加入人血白蛋白原液，再将人血白蛋白原液稀释至蛋白质浓度195～200g/L，调整pH值在6.8～7.0；
（7）巴氏灭活：将制品进行60℃10小时灭活病毒，灭活后除菌分装。
所述硅藻土指的是经过180℃干烤2.5小时，降温至0℃以下的硅藻土。
采取上述措施的本发明，采用多步乙醇沉淀法并通过调整离子强度、pH值、蛋白质含量、温度等参数去除杂蛋白，提纯人血白蛋白。低温乙醇沉淀法能够有效的去除杂蛋白，减少人血白蛋白的共沉，提高成品收率，减小蛋白质的变性，增加成品的稳定性。本发明与现有的回收方法热处理法相比，其具有明显优势，（1）本发明所采用的低温乙醇法与现在国内外生产人血白蛋白所采用生产设备相似，因此在大规模回收时不需要新增设备；（2）回收率高，传统的热处理法，其回收率为0.4～0.8Kg白蛋白/吨血浆，而本发明的回收率为1.0～1.2Kg白蛋白/吨血浆，回收率提高了100%。（3）传统回收方法中，均从FIV加热法后，再进行低温乙醇法提取，其FIV经过加热后已经变性，不能从中提取其他物质，而本发明利用经典的低温乙醇法，FIV提取了人血白蛋白后，仍然可以提取其他组分，这是本发明比传统方法先进的地方。本发明能有效的降低血液制品生产中的原料血浆的成本，提高血浆的综合利用，是提取人血白蛋白上的创新，具有巨大的经济和社会效益。
本发明可以有效的从组分Ⅳ沉淀中分离出组分Ⅴ进而配制成人血白蛋白成品，对缓解国内原料血浆供应紧张的局面具有十分重要的现实意义，既充分实现了对原料的充分利用，又防止了对环境的污染。
本发明制备的人血白蛋白原液，经过半成品配制和病毒灭活后即可分装为人血白蛋白成品，作为生产人血白蛋白的最重要的中间品，其质量符合以下要求：
①纯度：按《中国药典》2010年版三部附录中醋酸纤维薄膜电泳法检测，其纯度应不低于96%；
②蛋白质含量：按《中国药典》2010年版三部附录中双缩法脲法检测，应大于210g/L；
③pH值：用生理氯化钠溶液将供试品蛋白质含量稀释成10g/L，pH值应为6.4～7.4。
④残余乙醇含量：按《中国药典》2010年版三部附录中康卫扩散皿法测定，应不高于0.025%。
⑤热原检查：组分Ⅴ沉淀溶解后，按《中国药典》2010年版三部附录ⅩⅡE“细菌内毒素检查法”进行，其细菌内毒素限值应小于1.67EU/ml。
四、具体实施方式
实施例1
本发明实施例1的技术步骤如下：
⑴将组分Ⅳ沉淀放入2倍重量的1～2℃，9g/L的氯化钠溶液中，搅拌溶解，保持溶液温度-1～-2℃，搅拌溶解6小时，即为组分Ⅳ沉淀溶解液。
⑵将组分Ⅳ沉淀溶解液加入稀释液中稀释，稀释液的量为组分Ⅳ沉淀溶解液的3.2倍，稀释后将制品搅拌降温到-2~-3℃，按1L/分钟的速度缓慢加入1mol/L碳酸氢钠，调整制品pH值至6.25，-2～-3℃条件下搅拌7小时得到组分Ⅳ沉淀稀释液；
稀释液的配制：含氯化钠0.15mol/L ,乙醇浓度28％（V/V），搅拌降温到-2~-3℃。
⑶于组分Ⅳ沉淀稀释液中加入-20℃以下95%的乙醇，使组分Ⅳ沉淀稀释液中乙醇浓度达到40.5％（V/V），乙醇加入速度保持到70～80L/h，加入过程中保持溶液温度-2～-3℃。乙醇加毕，调整溶液pH值至6.65，降温使组分Ⅳ沉淀稀释液温度至-5.5～-6℃，搅拌6小时得到组分Ⅳ沉淀乙醇稀释液。
⑷向组分Ⅳ沉淀乙醇稀释液中加入硅藻土，加入量为每100Kg组分Ⅳ沉淀用4Kg硅藻土，搅拌30分钟后用压滤机压滤。压滤结束后用冷压缩空气吹尽压滤机腔内液体，到出气泡后停。泵入-6~-7℃ FIV平衡液冲洗压滤机，每台冲洗150L，最后用冷压缩空气吹尽压滤机腔内制品。收集滤液，得到组分Ⅳ压滤液，沉淀弃。
硅藻土的准备：180℃干烤2.5小时，降温至0℃以下备用。
FIV平衡液的配制：配制量为每台压滤机600L。配制方法：含40%（V/V）的乙醇，2g/L的 氯化钠，4.8g/L的无水乙酸钠，用醋酸调整pH值至6.0，溶液温度-6～-7℃。
压滤机的准备：每100Kg组分Ⅳ沉淀装25张滤板，安装滤板后，用注射用水冲洗压滤机至细菌内毒素为阴性。以每台压滤机5Kg的量向FIV平衡液中加入硅藻土，搅拌后将其泵入压滤机进行循环冷却，压滤机出口温度到-3℃以下时，停止循环，冷空气吹出压滤机腔内平衡液备用。
⑸计量组分Ⅳ压滤液体积，开启搅拌，降温，制品降温到-6～-7℃，缓慢加入2mol/L HAC，加入速度为50ml/min，调整溶液pH至5.35，调整完pH后将组分Ⅳ压滤液降温至-8～-9℃，搅拌2小时，静放6小时得到冷冻组分Ⅳ压滤液；
⑹开启搅拌，向冷冻组分Ⅳ压滤液中加入硅藻土，加入量以每100Kg组分Ⅳ沉淀加1Kg硅藻土，搅拌30分钟后开始压滤。过滤液弃或收集后进行乙醇回收处理；压滤完毕后，松开压滤机，刮取组分Ⅴ沉淀。
硅藻土的准备：180℃干烤2.5小时，降温至0℃以下备用。
压滤机的准备：每100Kg组分Ⅳ沉淀安装滤板6张，安装滤板后用注射用水冲洗至细菌内毒素为阴性。在FV平衡液中加入硅藻土，加入量为每台压滤机3Kg，加完后用FV平衡液的配制循环压滤机，保证压滤机出口温度应达到-5℃以下，冷压缩空气吹尽压滤机内平衡液，出气泡后停止，备用。
FV平衡液的配制：配制量为每台压滤机400L。配制方法：注射用水230L，加95％乙醇170L，降温到-8～-9℃。
⑺组分V沉淀用5倍体积的8%乙醇溶液搅拌溶解，沉淀完全溶解后，调整pH至4.50，制品最终温度控制为-3.0℃±0.5℃，继续搅拌2小时得到组分V沉淀溶解液。
⑻压滤：取组分V沉淀溶解液压滤，过程中搅拌不停，压滤完后，用低温冷空气吹出滤器内液体，至出气泡后停止，后用FⅤ精制平衡液冲洗滤板，冲洗液并入到过滤液中得到组分V沉淀过滤液。
压滤机的准备：每100Kg组分Ⅴ沉淀安装滤板15张，安装滤板后用注射用水冲洗至细菌内毒素为阴性。使用前用FⅤ精制纯化平衡液循环压滤机，使压滤机出口温度应达到-2℃以下备用。
FⅤ精制平衡液配制：配制量：每台压滤机250L。配制方法为：含乙醇12%，溶液pH值4.50，降温至-3.0℃±0.5℃。
⑼开启搅拌，用1M碳酸氢钠调整组分V沉淀过滤液pH值至7.05得到组分V沉淀纯化液。
⑽将组分V沉淀纯化液首次浓缩至蛋白浓度100g/L，先用5倍的9g/L的氯化钠溶液等体积透析，再用3倍的注射用水等体积透析得到白蛋白原液，将白蛋白原液最终浓缩至蛋白质含量210g/L以上。用适量注射用水洗涤超滤膜，收集洗膜液，并入上述白蛋白液浓缩液中即为人血白蛋白原液，取样进行原液检测。
⑾半成品配制：根据人血白蛋白原液检定进行稀释配制：根据人血白蛋白原液蛋白质含量进行配制，按每克蛋白质160毫摩尔称取辛酸钠，按每克蛋白质120毫摩尔称取氯化钠，称取后以少量注射用水溶解，加入人血白蛋白原液中，再将人血白蛋白原液稀释至蛋白质浓度196g/L，调整pH值在6.85得到人血白蛋白溶液。
⑿巴氏灭活：将人血白蛋白溶液进行60℃10小时灭活病毒，灭活后除菌分装。
实施例2
本发明实施例2的技术步骤如下：
⑴将组分Ⅳ沉淀放入2倍重量的1～2℃，10g/L的氯化钠溶液中，搅拌溶解，保持溶液温度-1～-2℃,搅拌溶解5小时，得到组分Ⅳ沉淀溶解液。
⑵将组分Ⅳ沉淀溶解液加入稀释液中稀释，稀释液的量为组分Ⅳ沉淀溶解液的3倍，稀释后将制品搅拌降温到-2~-3℃，按1L/分钟的速度缓慢加入1mol/L碳酸氢钠，调整组分Ⅳ沉淀溶解液pH值至6.4，-2～-3℃条件下搅拌6小时组分Ⅳ沉淀稀释液；
稀释液的配制：含氯化钠0.15mol/L ,乙醇浓度29％（V/V），搅拌降温到-2~-3℃。
⑶于组分Ⅳ沉淀稀释液中加入-20℃以下95%的乙醇，使组分Ⅳ沉淀稀释液的乙醇浓度达到41.5％（V/V），乙醇加入速度保持到70～80L/h，加入过程中保持溶液温度-2～-3℃。乙醇加毕，调整溶液pH值至6.7，降温使制品温度至-5.5～-6℃，搅拌8小时得到组分Ⅳ沉淀乙醇稀释液。
⑷向组分Ⅳ沉淀乙醇稀释液中加入硅藻土，加入量为每100Kg组分Ⅳ沉淀用5Kg硅藻土，搅拌30分钟后用压滤机压滤。压滤结束后用冷压缩空气吹尽压滤机腔内液体，到出气泡后停。泵入-6~-7℃ FIV平衡液冲洗压滤机，每台冲洗200L，最后用冷压缩空气吹尽压滤机腔内制品。收集滤液，得到组分Ⅳ压滤液，沉淀弃。
硅藻土的准备：180℃干烤2.5小时，降温至0℃以下备用。
FIV平衡液的配制：配制量为每台压滤机600L。配制方法：含40%（V/V）的乙醇， 2.5g/L的 氯化钠，4.5g/L的无水乙酸钠，用醋酸调整pH值至6.1，溶液温度-6～-7℃。
压滤机的准备：每100Kg组分Ⅳ沉淀装25张滤板，安装滤板后，用注射用水冲洗压滤机至细菌内毒素为阴性。以每台压滤机5Kg的量向FIV平衡液中加入硅藻土，搅拌后将其泵入压滤机进行循环冷却，压滤机出口温度到-3℃以下时，停止循环，冷空气吹出压滤机腔内平衡液备用。
⑸计量组分Ⅳ压滤液体积，开启搅拌，降温，组分Ⅳ压滤液降温到-6～-7℃，缓慢加入2mol/L HAC，加入速度为50ml/min，调整溶液pH至5.45，调整完pH后将组分Ⅳ压滤液降温至-8～-9℃，搅拌2小时，静放7小时得到冷冻组分Ⅳ压滤液；
⑹开启搅拌，向冷冻组分Ⅳ压滤液中加入硅藻土，加入量以每100Kg 组分Ⅳ沉淀加2Kg硅藻土，搅拌30分钟后开始压滤。过滤液弃或收集后进行乙醇回收处理；压滤完毕后，松开压滤机，刮取组分Ⅴ沉淀。
硅藻土的准备：180℃干烤2.5小时，降温至0℃以下备用。
压滤机的准备：每100Kg组分Ⅳ沉淀安装滤板8张，安装滤板后用注射用水冲洗至细菌内毒素为阴性。在FV平衡液中加入硅藻土，加入量为每台压滤机3Kg，加完后用FV平衡液的配制循环压滤机，保证压滤机出口温度应达到-5℃以下，冷压缩空气吹尽压滤机内平衡液，出气泡后停止，备用。
FV平衡液的配制：配制量为每台压滤机400L。配制方法：注射用水230L，加95％乙醇170L，降温到-8～-9℃。
⑺组分V沉淀用5倍体积的8%乙醇溶液搅拌溶解，沉淀完全溶解后，调pH至4.70，最终温度控制为-3.0℃±0.5℃，继续搅拌3小时压滤得到组分V沉淀溶解液。
⑻压滤：取组分V沉淀溶解液压滤，过程中搅拌不停，压滤完后，用低温冷空气吹出滤器内液体，至出气泡后停止，后用FⅤ精制平衡液冲洗滤板，冲洗液并入到过滤液中，得到组分V沉淀过滤液。
压滤机的准备：每100Kg组分V沉淀安装滤板20张，安装滤板后用注射用水冲洗至细菌内毒素为阴性。使用前用FⅤ精制平衡液循环压滤机，使压滤机出口温度应达到-2℃以下备用。
FV精制平衡液配制：配制量：每台压滤机250L。配制方法为：含乙醇12%，溶液pH值4. 70，降温至-3.0℃±0.5℃。
⑼开启搅拌，用1M碳酸氢钠调整组分V沉淀过滤液pH值至7.15得到组分V沉淀纯化液。
⑽将组分V沉淀纯化液首次浓缩至蛋白浓度150g/L，先用5倍的9g/L的氯化钠溶液等体积透析，再用3倍的注射用水等体积透析得到白蛋白原液，将白蛋白原液最终浓缩至蛋白质含量210g/L以上。用适量注射用水洗涤超滤膜，收集洗膜液，并入上述白蛋白浓缩液中即为人血白蛋白原液，取样进行原液检测。
⑾半成品配制：根据人血白蛋白原液检定进行稀释配制：根据人血白蛋白原液蛋白质含量进行配制，按每克蛋白质160毫摩尔称取辛酸钠，按每克蛋白质130毫摩尔称取氯化钠，称取后以少量注射用水溶解，加入人血白蛋白原液中，再将人血白蛋白原液稀释至蛋白质浓度200g/L，调整pH值在6.95得到人血白蛋白溶液。
⑿巴氏灭活：将人血白蛋白原液进行60℃10小时灭活病毒，灭活后除菌分装。
Claims (1)
1.从组分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，其特征在于所述方法包括以下具体技术步骤：
（1）组分Ⅳ沉淀溶解
将组分Ⅳ沉淀放入2 倍重量的1 ～ 2℃，8 ～ 10g/L 的氯化钠中，搅拌溶解，保持溶液温度-1 ～ -2℃ , 搅拌溶解5 ～ 6 小时，即为组分Ⅳ沉淀溶解液；
（2）纯化
①将组分Ⅳ沉淀溶解液打入稀释液中稀释，稀释液的量为组分Ⅳ沉淀溶解液的3 ～ 4倍，稀释后将制品搅拌降温到-2~-3℃，按0.8~1.2L/ 分钟的速度缓慢加入1mol/L 碳酸氢钠，调整制品pH 值至6.1 ～ 6.4，-2 ～ -3℃条件下搅拌6 ～ 8 小时，得到组分Ⅳ溶解液备用；
其中稀释液的配制是：含氯化钠0.15mol/L , 乙醇浓度27 ～ 30％（V/V），搅拌降温
到-2~-3℃ ；
②于组分Ⅳ溶解液中加入-20℃以下95% 的乙醇，使组分Ⅳ溶解液中乙醇浓度达到40 ～ 42％（V/V），乙醇加入速度保持到70 ～ 80L/h，加入过程中保持溶液温度-2 ～ -3℃，乙醇加毕，用1mol/L 的碳酸氢钠调整溶液pH 值至6.6 ～ 6.7，降温使组分Ⅳ溶解液的温度至-5.5 ～ -6℃，恒温搅拌6 ～ 8 小时得到组分Ⅳ稀释液备用；
③向组分Ⅳ稀释液中加入硅藻土，加入量为每100Kg 组分Ⅳ沉淀用3 ～ 5Kg 硅藻土，搅拌30-40 分钟后用压滤机压滤，压滤结束后用冷压缩空气吹尽压滤机腔内液体，到出气泡为止，收集滤液，得到组分Ⅳ压滤液备用，沉淀弃丢；其中，所述硅藻土指的是经过180℃干烤2.5 小时，降温至0℃以下的硅藻土；
（3）组分Ⅴ沉淀的制备
①计量组分Ⅳ压滤液体积，开启搅拌，降温，制品降温到-6 ～ -7℃，缓慢加入2mol/L HAC，加入速度为50-60ml/min，调整溶液pH 至5.2 ～ 5.5，调整完pH 后将制品降温至-8 ～ -9℃并搅拌2 小时，静放6 ～ 8 小时；
②开启搅拌，向组分Ⅳ压滤液中加入硅藻土，加入量以每100Kg 组分Ⅳ沉淀加1 ～ 2Kg硅藻土，搅拌30-40 分钟后开始压滤，滤液弃丢或收集后进行乙醇回收处理；收集组分Ⅴ沉淀备用；其中，所述硅藻土指的是经过180℃干烤2.5 小时，降温至0℃以下的硅藻土；
（4） 组分V 精制纯化
① 组分V 沉淀用5 倍体积的8%（V/V）乙醇溶液搅拌溶解，沉淀完全溶解后，测量溶液pH 应在pH 至4.50 ～ 4.70，制品最终温度控制为-3.0℃±0.5℃，继续搅拌2~3 小时压滤；
② 压滤：压滤过程中搅拌不停，压滤完后，用低温冷空气吹出滤器内液体，至出气泡后停止，后用FV 精制平衡液冲洗滤板，冲洗液并入到过滤液中得到纯化液备用；
其中FV 精制平衡液的配制：含乙醇12%（V/V），溶液pH 值4.50~4. 70，降温至-3.0℃ ±0.5℃ ；
（5）超滤
① 开启搅拌，用1M 碳酸氢钠调整纯化液pH 值至7.0 ～ 7.2 ；
② 将纯化液首次超滤浓缩至蛋白浓度100 ～ 150g/L，用5 倍的9g/L 的氯化钠溶液等体积透析，再用3 倍的注射用水等体积透析得到白蛋白原液，将白蛋白原液最终超滤浓缩至蛋白质含量210g/L 以上，用适量注射用水洗涤超滤膜，收集洗膜液，并入上述蛋白液中即为人血白蛋白原液，取样进行原液检测；
（6）半成品配制
根据原液检定进行稀释配制：根据原液蛋白质含量进行配制，按每克蛋白质160 毫摩尔称取辛酸钠，按每克蛋白质120 ～ 130 毫摩尔称取氯化钠，称取后以少量注射用水溶解，加入人血白蛋白原液，再将人血白蛋白原液稀释至蛋白质浓度195 ～ 200g/L，调整pH 值在6.8 ～ 7.0 ；
（7）巴氏灭活：将制品进行60℃ 10 小时灭活病毒，灭活后除菌分装。
2. 根据权利要求1 所述的从组分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，其特征在于制备过程中压滤时，压滤机的准备是：每100Kg 组分Ⅳ沉淀装6-25 张滤板，安装滤板后，用注射用水冲洗压滤机至冲洗液细菌内毒素为阴性，以每台压滤机3-5Kg 的量向FIV 平衡液或FV 平衡液中加入硅藻土，搅拌后将其泵入压滤机进行循环冷却，压滤机出口温度到-3℃以下时，停止循环，冷空气吹出压滤机腔内平衡液；所述FIV 平衡液的配制方法是：含40%（V/V）的乙醇，1.5 ～ 2.5g/L 的 氯化钠，4.5 ～ 5.1g/L的无水乙酸钠，用醋酸调整pH 值至6.0 ～ 6.1，溶液温度-6 ～ -7℃，配制量为每台压滤机600L；所述FV平衡液的配制方法是：注射用水230L，加95％乙醇170L，降温到-8 ～ -9℃，配制量为每台压滤机400L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310307858.8A CN103333240B (zh) | 2013-07-22 | 2013-07-22 | 从组分ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310307858.8A CN103333240B (zh) | 2013-07-22 | 2013-07-22 | 从组分ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103333240A CN103333240A (zh) | 2013-10-02 |
| CN103333240B true CN103333240B (zh) | 2015-01-28 |
Family
ID=49241459
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310307858.8A Active CN103333240B (zh) | 2013-07-22 | 2013-07-22 | 从组分ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103333240B (zh) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103833844A (zh) * | 2014-03-05 | 2014-06-04 | 贵州中泰生物科技有限公司 | 一种人血白蛋白的生产方法 |
| CN104086645A (zh) * | 2014-07-03 | 2014-10-08 | 成都蓉生药业有限责任公司 | 人血白蛋白和球蛋白的制备方法 |
| CN104086646B (zh) * | 2014-07-03 | 2018-10-09 | 成都蓉生药业有限责任公司 | 血液制品中fv沉淀的制备方法 |
| CN104558156A (zh) * | 2015-01-23 | 2015-04-29 | 郑州莱士血液制品有限公司 | 一种从血浆中提取人血白蛋白提高得率的方法 |
| CN105367651B (zh) * | 2015-12-22 | 2018-11-27 | 郑州莱士血液制品有限公司 | 一种低温乙醇法去除人免疫球蛋白热原质的方法 |
| CN106008698B (zh) * | 2015-12-25 | 2019-05-07 | 北海开元生物科技有限公司 | 一种利用低温乙醇法去除人血白蛋白热原质的方法 |
| CN111589199B (zh) * | 2020-06-02 | 2023-10-27 | 国药集团贵州血液制品有限公司 | 一种人血白蛋白超低铝离子残留量的分离装置及方法 |
| CN112062833A (zh) * | 2020-10-09 | 2020-12-11 | 国药集团武汉血液制品有限公司 | 一种从血浆组分ⅳ沉淀中提取人血白蛋白的方法 |
| CN116589559B (zh) * | 2023-06-05 | 2024-02-27 | 广东丹霞生物制药有限公司 | 一种人血白蛋白制备工艺 |
| CN117185300B (zh) * | 2023-09-26 | 2024-04-05 | 中南大学 | 基于黑滑石制备氟硅酸盐晶体的方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101792490A (zh) * | 2010-01-19 | 2010-08-04 | 广东卫伦生物制药有限公司 | 回收Cohn氏组分Ⅳ沉淀中白蛋白的方法 |
-
2013
- 2013-07-22 CN CN201310307858.8A patent/CN103333240B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101792490A (zh) * | 2010-01-19 | 2010-08-04 | 广东卫伦生物制药有限公司 | 回收Cohn氏组分Ⅳ沉淀中白蛋白的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 国内外FIV沉淀回收白蛋白工艺调查与分析;刘力;《中国输血杂志》;20101231;第1091页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103333240A (zh) | 2013-10-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103333240B (zh) | 从组分ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法 | |
| CN102488713B (zh) | 一种制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液的方法 | |
| CN101974070B (zh) | 一种人凝血酶原复合物的制备工艺 | |
| CN104342040A (zh) | 一种高胶融温度鱼鳞明胶的制备方法 | |
| CN104672328A (zh) | 一种人抗凝血酶ⅲ的生产方法 | |
| CN101972479A (zh) | 一种静注人免疫球蛋白的制备工艺 | |
| CN101974589A (zh) | 一种酶解和膜分离制备免疫活性大豆肽的方法 | |
| CN109875009A (zh) | 一种臭黄荆叶果冻的制备方法 | |
| CN102807511A (zh) | 一种从贻贝中提取牛磺酸的方法 | |
| CN104558156A (zh) | 一种从血浆中提取人血白蛋白提高得率的方法 | |
| CN104004084B (zh) | 一种人血白蛋白的生产方法 | |
| CN112480243B (zh) | 一种规模化水蛭素分离纯化生产工艺方法及设备 | |
| CN104341539B (zh) | 一种酶法结合膜技术一步制备精品肝素钠的方法 | |
| CN106119328A (zh) | 一种适合工业化生产的优质虾低聚肽粉制备方法 | |
| CN112521487A (zh) | 一种改进的人血白蛋白生产工艺 | |
| CN103103170B (zh) | 牛或羊玻璃酸酶的生产方法 | |
| CN106834399A (zh) | 一种来源于厚壳贻贝闭壳肌的降压肽 | |
| CN108101980B (zh) | 一种高纯度藻蓝色素的制备方法 | |
| CN103462166B (zh) | 一种葛根黄酮功能饮料及其制备方法 | |
| CN112442136A (zh) | 一种银耳功能性成分的提取方法 | |
| CN106318995A (zh) | 一种利用菊粉制备果聚糖及葡萄糖酸的方法 | |
| CN205258363U (zh) | 一种高品质栀子黄色素的制备装置 | |
| CN108042569A (zh) | 一种分离胶类中药中杂质的方法 | |
| CN107383185A (zh) | 一种高纯度牛血清白蛋白的提取方法 | |
| CN113735963A (zh) | 一种重组人血清白蛋白纯化过程去除色素的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20170605 Address after: 450001 No. 22 Yulan street, Zhengzhou hi tech Development Zone, Henan, Zhengzhou Patentee after: ZHENGZHOU RAAS BLOOD PRODUCTS CO., LTD. Address before: 536000 No. 126 Beihai Avenue, Haicheng District, the Guangxi Zhuang Autonomous Region, Beihai 804 Patentee before: Beihai Kaiyuan Biological Technology Co., Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |