CN110300589A

CN110300589A - 作为cftr增效剂的双环异杂芳基衍生物

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Publication number: CN110300589A
Application number: CN201780086700.9A
Authority: CN
Inventors: 约瑟夫·沃尔特·斯特罗巴赫; 大卫·克里斯多夫·林伯格; 约翰·保罗·马提亚斯; 阿特利·托拉伦森; 詹姆斯·约翰·穆苏; 拉吉亚·阿尔德林·丹尼; 克里斯托夫·沃尔夫冈·查普夫; 伊凡·维克托罗维奇·叶夫列莫夫
Original assignee: Cystic Fibrosis Foundation Therapeutics Inc
Current assignee: Cystic Fibrosis Foundation
Priority date: 2016-12-16
Filing date: 2017-12-14
Publication date: 2019-10-01
Anticipated expiration: 2037-12-14
Also published as: RU2019120990A3; US10377762B2; AU2021277702B2; SG10201911221RA; JP7150721B2; AU2017378324B2; US20190016728A1; EP3554506A1; AU2021277702A1; US10766904B2; EP3554506B1; MX2019007135A; BR112019012335A2; AU2017378324A1; RU2753056C2; WO2018112149A1; CN110300589B; US20180170938A1; JP2020502103A; RU2019120990A

Abstract

本发明涉及1,3‑二取代‑1H‑吡唑并[3,4‑d]嘧啶‑4‑胺衍生物、5,7‑二取代‑吡咯并[2,1‑f][1,2,4]三嗪‑4‑胺衍生物或5,7‑二取代‑咪唑并[5,1‑f][1,2,4]三嗪‑4‑胺衍生物及其药学上可接受的盐。所述化合物是囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的增效剂。本发明还公开了包含该化合物，任选与其他治疗剂组合的药物组合物，以及通过施用所述化合物加强在哺乳动物(包括人)中的CFTR的方法。这些化合物可用于治疗囊性纤维化(CF)、哮喘、支气管扩张、慢性阻塞性肺病(COPD)、便秘、糖尿病、干眼症、胰腺炎、鼻窦炎、干燥综合征和其他CFTR相关疾病。

Description

作为CFTR增效剂的双环异杂芳基衍生物

技术领域

本发明涉及囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的小分子增效剂。本发明还涉及包含增效剂的药物组合物，其任选地与其他治疗剂组合，以及通过施用小分子CFTR增效剂在哺乳动物(包括人)中增强CFTR的功效的方法。本发明还涉及用CFTR增效剂治疗哺乳动物(包括人)的囊性纤维化和其他疾病。更具体地，本发明涉及1,3-二取代-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺、5,7-二取代-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺或5,7-二取代咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺，其用于治疗囊性纤维化(CF)、哮喘、支气管扩张、慢性阻塞性肺病(COPD)、便秘、糖尿病、干眼症、胰腺炎、鼻窦炎、干燥综合征和其他CFTR相关疾病。

背景技术

囊性纤维化(CF)是影响高加索人最常见的致死性遗传疾病。CF是一种常染色体隐性遗传疾病，发病率介于2000个活产婴儿中1个和3000个活产婴儿中1个(Cutting,G.R.,Accurso,F.,Ramsey,B.W.,and Welsh,M.J.,Online Metabolic&Molecular Bases ofInherited Disease,McGraw-Hill,2013)。全球有超过70,000人受到影响，其中大约33,000人在美国(www.cff.org/What-is-CF/About-Cystic-Fibrosis/)。CF的标志是导致气道阻塞、感染和炎症的粘液分泌过多和粘液清除缺陷；胰腺功能不全；和汗液氯化物浓度升高。CF是一种影响肺、胰腺和胃肠道、肝胆和生殖道的多***疾病(R.D.Coakley et al.,inCystic Fibrosis,Eds.Hodson,M.,Geddes,D.,and Bush,A.,Edward Arnold,Third Ed.,2007,pp.59-68)。

对于大多数患者而言，对于不能解决疾病根本原因的支持疗法的护理负担很大。支持疗法包括物理气道清除技术、吸入药物(粘液溶解剂，抗生素和高渗盐水)、口服抗炎药物、胰酶替代物和营养补充剂(Cystic Fibrosis Foundation Patient Registry2011Annual Data Report to the Center Directors,Cystic Fibrosis Foundation,Bethesda,Maryland,2012)。囊性纤维化患者存活的中位年龄是进入生命的第四个十年。

囊性纤维化是由CFTR(囊性纤维化跨膜传导调节因子)基因的突变引起的，其是一种在上皮细胞和其他组织中发现的离子通道。CFTR存在于气道、肠、胰腺和汗腺中的上皮细胞的顶膜上(G.R.Cutting,Accurso,F.,Ramsey,B.W.,and Welsh,M.J.,OnlineMetabolic&Molecular Bases of Inherited Disease,McGraw-Hill,2013)。CFTR中的突变被分为六种类型(Welsh,M.J.,and Smith,A.E.,Cell,1993,73,1251-1254and Sloane,P.A.,and Rowe,S.M.,Curr.Opin.Pulm.Med.,2010,16,591-597)：1)由于缺失、无意义或移码突变导致的过早终止，2)由于折叠不当导致的有缺陷的转运出内质网，3)门控不当，4)由于通道孔的变化而导致的电导减少，5)由于剪接改变导致的通道产生减少，和6)来自质膜的胞吞作用增加。

已知CFTR中近2000种不同的突变会引起CF。CFTR的Phe508的缺失(F508del)发生在约70％的CFTR等位基因中(Bobadilla,J.L.et al.,Human Mutation,2002,19,575-606)。大约50％的患者是F508del纯合子并且大约40％是杂合子，使得在约90％的患者中存在至少一个F508del拷贝。G551D是第三种最常见的突变，并且在约4％的患者中存在(Cystic Fibrosis Foundation Patient Registry 2011Annual Data Report to theCenter Directors,Cystic Fibrosis Foundation,Bethesda,Maryland,2012)。

由于通道密度降低和通道门控受损两者，F508del突变导致CFTR功能丧失。由于蛋白质错误折叠，顶膜处的通道密度降低。错误折叠的CFTR被细胞质量控制机制识别并降解(Ward,C.L.and Kopito,R.R.,J.Biol.Chem.,1994,269,25710-25718)。F508del功能进一步降低，因为它具有显著降低的通道开放概率(门控缺陷)(Dalemans,W.et al.,Nature,1991,354,526-528)。G551D突变导致蛋白质具有正常折叠但受损的门控(Illek,B.et al.,Am.J.Physiol.,1999,277,C833–C839)。

被称为“校正剂”的小分子已被证明可逆转F508del CFTR的折叠/转运缺陷并增加质膜上的CFTR通道的密度(Pedemonte,N.et al.,J.Clin.Invest.,2005,115,2564-2571,Van Goor,F.et al.,Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.,2006,290,L1117-1130,VanGoor,F.et al.,Proc.Nat.Acad.Sci.USA,2011,108,18843-18848)。“增效剂”是小分子，其可增加突变CFTR的通道开放概率，从而逆转门控缺陷。F508del的药理学修复被认为至少需要校正剂和增效剂来解决折叠和门控缺陷，而G551D可能仅从增效剂中受益。

(ivacaftor，VX-770)是一种市售增效剂，其可改善G551D的门控特性。在G551D患者中，它显著改善肺功能(预测的FEV₁的百分比增加10-13％)，允许体重增加，并减少肺部恶化的频率(Ramsey,B.W.et al.,New Eng.J.Med.,2011,365,1663-1672,Davies,J.C.et al.,Am.J.Resp.Crit.Care Med.,2013,187,1219-1225)。也被批准用于G1244E、G1349D、G178R、G551S、S1251N、S1255P、S549N和S549R突变的人群，并且正在研究对包括那些具有部分功能的突变在内的其他突变的应用。

虽然使用进行单药治疗并未导致F508del纯合子患者有任何明显改善(Flume,P.A.et al.,Chest,2012,142,718-724)，但校正剂(VX-809,lumacaftor或VX-661,tezacaftor)与的组合导致肺功能适度改善(预测FEV₁的百分比增加3-4％)(Wainwright,C.E.et al.,N.Engl.J.Med.,2015,373,220-231,Pilewski,J.M.et al.,J.Cystic Fibrosis,2015,14,Suppl.1,S1)。VX-809和组合(称为)是对于F508del纯合子患者的上市疗法。

对于G551D和F508del患者群体，预期改进的疗法将为患者提供进一步的益处。大多数G551D患者是G551D/F508del复合杂合子，并且使用校正剂VX-661和的组合治疗导致肺功能比单独使用治疗进一步增强(Pilewski,J.M.et al.,J.Cystic Fibrosis,2015,14,Suppl.1,S1)。

与中度CFTR功能障碍相关的CFTR突变在患有与囊性纤维化共享某些疾病表现但不符合囊性纤维化诊断标准的病症的患者中也是明显的。在这些患者中，可发生上皮细胞层的CFTR功能障碍，并产生异常的粘液和内分泌分泌物，其类似于表征囊性纤维化的那些。也可以获得CFTR功能障碍。慢性吸入微粒刺激物，包括香烟烟雾、污染和灰尘，可导致CFTR离子通道活性降低。

CFTR活性的调节也会有益于不直接由CFTR突变引起的其他疾病，例如由CFTR介导的分泌性疾病和其他蛋白质折叠疾病。CFTR调节许多细胞上皮细胞的氯化物和碳酸氢盐通量，以控制流体运动、蛋白质溶解、粘液粘度和酶活性。CFTR的缺陷会导致许多器官(包括肝脏和胰腺)的气道或导管堵塞。增效剂是增强细胞膜中存在的CFTR的门控活性的化合物。任何涉及粘液增稠、流体调节受损、粘液清除受损或导致炎症和组织破坏的导管阻塞的疾病都可能成为增效剂的候选者。因此，存在对作为CFTR增效剂的新颖小分子的显著治疗需求。

除了囊性纤维化，CFTR相关疾病或其他可能受益于CFTR活性调节的疾病包括但不限于哮喘、支气管扩张、慢性阻塞性肺病(COPD)、便秘、糖尿病、干眼症、胰腺炎、鼻窦炎和干燥综合征。

发明内容

本发明第一方面的第一实施方案是式I化合物

或其药学上可接受的盐；其中，

Y是含有1至4个杂原子的5元杂芳基，所述杂原子中的每一个独立地选自N、O和S(O)_n；其中所述杂芳基任选被1-3个取代基取代，所述取代基中的每一个独立地选自卤素、C₁-C₆烷基和C₁-C₆卤代烷基；

Z是苯基，其任选被1-3个卤素取代；

R^1a和R^1b各自独立地选自：

-H，

-OH，

卤素，

任选被1-3个取代基取代的C₁-C₆烷基，所述取代基中的每一个独立地选自卤素、-OH、C_1-C₃烷氧基、C₃-C₇环烷基和包含1-3个杂原子的4-7元杂环烷基，所述杂原子中的每一个独立地选自N、O和S(O)_n，

任选被1-3个取代基取代的C₃-C₇环烷基，所述取代基中的每一个独立地选自-OH、卤素和C₁-C₆烷基，和

包含1-3个杂原子的4-7元杂环烷基，所述杂原子中的每一个独立地选自N、O和S(O)_n；并且其中所述4-7元杂环烷基任选被1-3个取代基取代，所述取代基中的每一个独立地选自-OH、卤素和C₁-C₆烷基；

或R^1a和R^1b与它们所连接的碳一起形成C₃-C₇环烷基或包含1-3个杂原子的4-7元杂环烷基，所述杂原子中的每一个独立地选自N、O和S(O)_n；并且其中所述C₃-C₇环烷基或4-7元杂环烷基任选被1-3个取代基取代，所述取代基中的每一个独立地选自-OH、卤素和C₁-C₆烷基；并且

n每次出现时独立地为0、1或2。

本发明第一方面的第二实施方案是第一实施方案所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^1a和R^1b中的一者是C₁-C₆烷基，另一者是-H。

本发明第一方面的第三实施方案是第二实施方案所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y-Z部分选自：

本发明第一方面的第四实施方案是第三实施方案所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z是任选被一个或两个氟或氯取代的苯基。

本发明第二方面的第一实施方案是一种式II化合物，

或其药学上可接受的盐；其中，

W是含有1至3个杂原子的5至6元杂芳基，所述杂原子中的每一个独立地选自N、O和S(O)_n；并且其中所述杂芳基任选被1至3个R³取代；

Z是C₁-C₆烷基或苯基；其中所述苯基任选被1至3个卤素取代；

R^1a和R^1b各自独立地选自：

-H，

-OH，

卤素，

任选被1-3个取代基取代的C₁-C₆烷基，所述取代基中的每一个独立地选自卤素、-OH、C_1-C₃烷氧基、C₃-C₇环烷基和包含1-3个杂原子的4-7元杂环烷基，每一个杂原子独立地选自N、O和S(O)_n，

任选被1-3个取代基取代的C₃-C₇环烷基，所述取代基中的每一个独立地选自-OH、卤素和C₁-C₆烷基；和

4-7元杂环烷基，所述4-7元杂环烷基任选被1-3个取代基取代，所述取代基中的每一个独立地选自-OH、卤素和C₁-C₆烷基；

或R^1a和R^1b与它们所连接的碳一起形成C₃-C₇环烷基或包含1-3个杂原子的4-7元杂环烷基，所述杂原子中的每一个独立地选自N、O和S(O)_n；并且其中所述C₃-C₇环烷基或4-7元杂环烷基任选被1-3个取代基取代，所述取代基中的每一个独立地选自-OH、卤素和C₁-C₆烷基；

R²选自-H、-CN、卤素和C₁-C₃烷基；

R³每次出现时独立地选自C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、卤素和C₁-C₆卤代烷基；并且

n每次出现时独立地为0、1或2。

本发明第二方面的第二实施方案是本发明第二方面的第一实施方案所述的化合物，其中W是嘧啶基或吡嗪基，并且其中所述嘧啶基或吡嗪基任选被1个、2个或3个R³取代。

本发明第二方面的第三实施方案是本发明第二方面的第一实施方案所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y-Z部分选自：

本发明第三方面的第一实施方案是一种式III化合物

或其药学上可接受的盐；其中，

W选自苯基和含有1至3个杂原子的5至6元杂芳基，所述杂原子中的每一个独立地选自N、O和S(O)_n；其中所述苯基和所述杂芳基任选被1至3个R³取代；

R^1a和R^1b各自独立地选自：

-H，

-OH，

卤素，

n每次出现时独立地为0、1或2。

本发明第三方面的第二实施方案是本发明第三方面的第一实施方案所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中W是苯基，其任选地被1个或2个卤素取代。

本发明第三方面的第三实施方案是本发明第三方面的第二实施方案所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是5-(4-氯苯基)-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。

本发明第一方面的第五实施方案是本发明第一方面的第一实施方案所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

1-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

1-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；和

1-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺。

本发明第二方面的第四实施方案是本发明第二方面的第一实施方案所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

7-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-(4-甲氧基嘧啶-5-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；

7-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f]的[1,2,4]三嗪-4-胺；

7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f]的[1,2,4]三嗪-4-胺；

4-氨基-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

7-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；

4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

7-{(1R)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；

7-{(1R)-1-[1-(2,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；

7-{(1S)-1-[1-(3,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；

4-氨基-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]甲基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(2,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(3,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

7-{(1R)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；

4-氨基-7-{(1S)-1-[3-(2-氟苯基)-1,2-噁唑-5-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[3-(2-氟苯基)-1,2-噁唑-5-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-5-[2-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]甲基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{[3-(2-氟苯基)-1,2-噁唑-5-基]甲基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；和

4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈。

本发明第二方面的第五实施方案是本发明第二方面的第一实施方案所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

本发明第一方面的第六实施方案是化合物1-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺或其药学上可接受的盐。

本发明第二方面的第六实施方案是化合物4-氨基-5-[2-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]甲基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

本发明第二方面的第七实施方案是化合物4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

本发明第二方面的第八实施方案是化合物4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

本发明第二方面的第九实施方案是化合物4-氨基-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]甲基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

本发明第四方面的第一实施方案是一种治疗需要治疗的患者的囊性纤维化、哮喘、支气管扩张、慢性阻塞性肺病(COPD)、便秘、糖尿病、干眼病、胰腺炎、鼻窦炎或干燥综合征的方法，该方法包括向所述需要治疗的患者施用治疗有效量的根据第一方面的第一至第六实施方案中的任一个、或者第二方面的第一至第九实施方案中的任一个、或者第三方面的第一至第三实施方案中的任一个所述的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。

本发明第四方面的第二实施方案是一种治疗需要治疗的患者的囊性纤维化的方法，该方法包括向所述需要治疗的患者施用治疗有效量的根据第一方面的第一至第六实施方案中的任一个、或者第二方面的第一至第九实施方案中的任一个、或者第三方面的第一至第三实施方案中的任一个所述的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。

本发明第五方面的第一实施方案是根据第一方面的第一至第六实施方案中的任一个、或者第二方面的第一至第九实施方案中的任一个、或者第三方面的第一至第三实施方案中的任一个所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗囊性纤维化。

本发明第六方面的第一实施方案是一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据第一方面的第一至第六实施方案中的任一个、或者第二方面的第一至第九实施方案中的任一个、或者第三方面的第一至第三实施方案中的任一个所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。

本发明第六方面的第二实施方案是第六方面的第一实施方案的药物组合物，其还包含一种或多种另外的治疗剂。

本发明第六方面的第三实施方案是第六方面的第二实施方案的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂选自CFTR增效剂、CFTR校正剂、上皮钠通道(ENaC)抑制剂、CFTR放大器、CFTR稳定剂、通读剂(read-through agent)、寡核苷酸贴剂、自噬诱导剂和蛋白质稳定调节剂。

本发明第六方面的第四实施方案是第六方面的第三实施方案的药物组合物，其中所述CFTR增效剂在每次出现时选自VX-770(Ivacaftor)、GLPG-1837、GLPG-2451、QBW-251、FDL-176、FDL-129、CTP656和PTI-P271。

本发明第六方面的第五实施方案是第六方面的第三实施方案的药物组合物，其中所述CFTR校正剂在每次出现时选自VX809(lumacaftor)、VX-661(tezacaftor)、VX-983、VX-152、VX-440、VX-659、GLPG2737、P247-A、GLPG-2222、GLPG-2665、GLPG-2851、FDL-169和PTIC1811。

本发明第六方面的第六实施方案是第六方面的第三实施方案的药物组合物，其中所述上皮钠通道(ENaC)抑制剂在每次出现时选自SPX-101、QBW-276和VX-371。

本发明第六方面的第七实施方案是第六方面的第三实施方案的药物组合物，其中所述CFTR放大器在每次出现时选自PTI428和PTI-130。

本发明第六方面的第八实施方案是第六方面的第三实施方案的药物组合物，其中所述CFTR稳定剂是N-91115(Cavosonstat)。

本发明第六方面的第九实施方案是第六方面的第三实施方案的药物组合物，其中所述通读剂是阿他卢仑(ataluren)(PTC124)。

本发明第六方面的第十实施方案是第六方面的第三实施方案的药物组合物，其中所述自噬诱导剂在每次出现时选自半胱胺与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的组合和CX-4945。

本发明第七方面的第一实施方案是一种用于治疗需要治疗的患者的囊性纤维化的方法，该方法包括将根据第七方面的第一至第十实施方案中任一项所述的药物组合物施用给所述需要治疗的患者。

本发明第八方面的第一实施方案是根据第六方面的第一至第十实施方案中任一项所述的药物组合物，其用于治疗囊性纤维化。

具体实施方式

定义

术语“烷基”是指直链或支链饱和烃基取代基(即由烃通过除去氢而得到的取代基)；在一实施方案中，为一至六个碳原子(即，C_1-C₆烷基)。这些取代基的实例包括甲基、乙基、丙基(包括正丙基和异丙基)、丁基(包括正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基)、戊基、异戊基、己基等。

术语“卤代烷基”是指其中烷基上的至少一个氢被卤素原子取代的这样的烷基。术语“C_1-C₆卤代烷基”是指如本文所定义的C_1-C₆烷基，其中一个、两个、三个、四个，五个或六个氢原子被卤素取代。在其中两个或多个氢原子被卤素原子取代的某些实施方案中，卤素原子彼此全部相同。在其中两个或多个氢原子被卤素原子取代的其他实施方案中，卤素原子彼此不完全相同。卤代烷基的实例包括：氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、1,1-二氟乙基、2-氟乙基、2,2-二氟乙基、2-氯-3-氟戊基等。

术语“烷氧基”是指进而与氧原子连接的直链或支链饱和烃基取代基(即通过除去氢而从烃获得的取代基)；在一实施方案中，其有一至六个碳原子(即，C_1-C₆烷氧基)。这样的取代基的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)、丁氧基(包括正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基)、戊氧基等。

术语“环烷基”是指通过从饱和碳环分子中除去氢原子而获得的并具有指定碳原子数的碳环取代基。在一实施方案中，环烷基取代基具有三至七个碳原子(即，C_3-C₇环烷基)。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。术语“环烷基”包括单环、双环和三环饱和碳环，以及桥连和稠合环碳环，以及螺环稠合环系。

如本文所使用的，术语“杂环烷基”是指含有指定的杂原子N、O或S(O)_n的单环环系。术语“杂环烷基”是指通过从含有指定数目的环原子的饱和的或部分饱和的环结构中除去氢而得到的取代基，其中环原子中的至少一个是杂原子(即氧、氮或硫)，其余的环原子独立地选自碳、氧、氮和硫。如果杂环烷基取代基又被基团或取代基取代，则该基团或取代基可以与氮杂原子结合，或者它可以适当地与环碳原子结合。在一些情况下，含有一个或多个杂原子的环状取代基(即，杂芳基或杂环烷基)中的原子的数量是由前缀“x至y元”表示，其中x是形成取代基的环状部分的原子的最小数目和y是其最大数目。因此，例如，“四至七元杂环烷基”是指在杂环烷基的环状部分中含有4-7个原子(包括一个或多个杂原子)的杂环烷基。单环杂环烷基的实例包括氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、二氢噻吩基(dihydrothiophenyl)、四氢噻吩基(tetrahydrothiophenyl)、吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、噻唑啉基、异噻唑啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基、二氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环庚三烯基(azepinyl)、氧杂环庚三烯基(oxepinyl)和二氮杂基(diazepinyl)。

术语“杂芳基”是指含有指定数目环原子的芳环结构，其中至少一个环原子是杂原子(即氧、氮或硫)，其余环原子独立地选自由碳、氧、氮和硫组成的组。五至六元杂芳基是芳环***，其具有五个或六个环原子，其中至少一个环原子为N、O或S(O)_n。

杂芳基取代基的实例包括六元环取代基，例如吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基；五元环取代基，例如吡咯基、噻吩基(theinyl)、呋喃基、***基、咪唑基、呋喃基、苯硫基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基或1,3,4-噁二唑基和异噻唑基。在具有杂芳基取代基的基团中，与该基团键合的杂芳基取代基的环原子可以是至少一个杂原子，或者它可以是环碳原子，其中环碳原子可以与至少一个杂原子在相同的环中或其中环碳原子可以与至少一个杂原子在不同的环中。类似地，如果杂芳基取代基又被基团或取代基取代，则该基团或取代基可以与至少一个杂原子结合，或者它可以与环碳原子结合，其中环碳原子可以与至少一个杂原子在相同的环中，或其中环碳原子可以与至少一个杂原子在不同的环中。术语“杂芳基”还包括吡啶基N-氧化物和含有吡啶N-氧化物环的基团。上述基团在衍生自上面列出的基团时，在可能的情况下可以是C-连接的或N-连接的。例如，衍生自吡咯的基团可以是吡咯-1-基(N-连接的)或吡咯-3-基(C-连接的)。此外，衍生自咪唑的基团可以是咪唑-1-基(N-连接的)或咪唑-2-基(C-连接的)。

术语“卤代”或“卤素”是指氟(可以描述为-F)、氯(可以描述为-Cl)、溴(可以描述为-Br)或碘(可以描绘为-I)。

术语“氢”是指氢取代基，并且可以描述为-H。

术语“羟基”("hydroxy")或“羟基”("hydroxyl")是指-OH。带有与一个或多个羟基取代基连接的碳的化合物包括，例如，醇、烯醇和苯酚。

术语“苯基”是指具有基团-C₆H₅的芳环，其由苯通过除去氢原子而衍生得到。苯基如果如此规定的话，则可任选与五元或六元环烷基或杂环烷基环稠合以形成双环化合物。这些双环化合物的实例包括1,2,3,4-四氢化萘、2,3-二氢苯并[1,4]噁嗪、2,3-二氢-1H-茚、异吲哚啉和2,3-二氢苯并[1,4]]二氧杂环己烯。

如果取代基被描述为“独立地选自”基团，则取代基的每个实例独立于其他的选择。因此，每个取代基可以与其他取代基相同或不同。

如本文所使用的，术语“式I”("formula I")、“式(I)”(“formula(I)”)、“式(I)”(“Formula(I)”)或“式I”("Formula I")；“式II”("formula II")、“式(II)”(“formula(II)”)、“式(II)”(“Formula(II)”)；或“式III”("Formula III")；或“式III”("formulaIII")、“式(III)”“formula(III)”)、“式(III)”“Formula(III)”)或“式III”("FormulaIII")可以是指“本发明的化合物”。这些术语也定义为包括式I化合物的所有形式，包括水合物、溶剂化物、异构体、结晶和非结晶形式、同形体(isomorph)、多晶型物和其代谢物。例如，本发明化合物或其药学上可接受的盐可以以非溶剂化和溶剂化形式存在。当溶剂或水紧密结合时，复合物将具有明确的化学计量，与湿度无关。然而，当溶剂或水弱结合时，如在通道溶剂化物和吸湿性化合物中，水/溶剂含量将取决于湿度和干燥条件。在这种情况下，非化学计量将是常态。

本发明化合物可以作为包合物或其他复合物存在。包括在本发明范围内的是复合物，例如包合物，药物-宿主包合复合物，其中药物和宿主以化学计量或非化学计量的量存在。还包括含有两种或更多种有机和/或无机组分的本发明化合物的复合物，所述有机和/或无机组分可以是化学计量或非化学计量的量。得到的复合物可以是电离的、部分电离的或非电离的。关于此类复合物的综述，参见J.Pharm.Sci.,64(8),1269-1288,Haleblian,J.K.(August1975)。

本发明的化合物可具有不对称碳原子。本发明的化合物的碳-碳键可以使用实线实心楔形或点状楔形来描述。使用实线描述连接不对称碳原子的键意味着表明包括该碳原子上的所有可能的立体异构体(例如，特定的对映异构体、外消旋混合物等)。使用实心楔形或点状楔形来描绘连接不对称碳原子的键意味着表示仅包括所示的立体异构体。可能的是，式I、II或III化合物可能含有一个以上的不对称碳原子。在这些化合物中，使用实线描述连接不对称碳原子的键意味着表示包括所有可能的立体异构体。例如，除非另有说明，否则式I、II或III化合物可以意指作为对映异构体和非对映异构体或作为外消旋物及其混合物存在。使用实线描述连接式I、II或III化合物中的一个或多个不对称碳原子的键，并使用实心或点状楔形描述连接同一化合物中的其他不对称碳原子的键，意味着表示存在非对映异构体混合物。

式I、II或III的立体异构体包括本发明化合物的顺式和反式异构体，光学异构体，如R和S对映异构体，非对映异构体，几何异构体，旋转异构体，构象异构体和互变异构体，其包括表现出多于一种异构的化合物；及其混合物(如外消旋体和非对映体对)。还包括酸加成盐或碱加成盐，其中抗衡离子是光学活性的，例如D-乳酸盐或L-赖氨酸，或外消旋的，例如DL-酒石酸盐或DL-精氨酸。

当任何外消旋体结晶时，两种不同类型的晶体是可能的。第一类是上面提到的外消旋化合物(真正的外消旋物)，其中产生一种均相形式的晶体，其含有等摩尔量的两种对映体。第二种类型是外消旋混合物或外消旋聚集体(conglomerate)，其中两种形式的晶体以等摩尔量产生，每种晶体包含单一对映体。

本发明包括本发明化合物的互变异构形式。当结构异构体通过低能垒可相互转化时，可发生互变异构现象(“互变异构”)。这可以采取在含有例如亚氨基、酮基或肟基的本发明化合物中的质子互变异构的形式，其或在含有芳族部分的化合物中的所谓的价互变异构的形式。因此，单一化合物可能表现出一种以上的异构现象。固体和液体形式的互变异构体的各种比例取决于分子上的各种取代基以及用于分离化合物的特定结晶技术。

由本发明化合物显示的潜在互变异构的类型的实例包括

本发明化合物可以以衍生自无机或有机酸的盐的形式使用。根据具体化合物，化合物的盐可能由于盐的一种或多种物理性质(例如在不同温度和湿度下的增强的药物稳定性，或在水或油中的所期望的溶解度)而是有利的。在一些情况下，化合物的盐也可用作分离、纯化和/或拆分化合物的辅助剂。当打算向患者施用盐(与例如在体外环境中使用相反)时，盐优选是药学上可接受的。术语“药学上可接受的盐”是指通过将式I、II或III化合物与酸或碱结合而制备的盐，所述酸的阴离子或所述碱的阳离子通常被认为适合人类食用。药学上可接受的盐特别可用作本发明方法的产物，因为它们相对于母体化合物具有更高的水溶性。对于在医药中使用，本发明化合物的盐是无毒的“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”中包括的盐是指本发明化合物的无毒盐，其通常通过使游离碱与合适的有机或无机酸反应制备。

在可能的情况下，本发明化合物的合适的药学上可接受的酸加成盐包括衍生自无机酸的盐，例如盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硼酸、氟硼酸、磷酸、偏磷酸、硝酸、碳酸、磺酸和硫酸，和有机酸的盐，如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、乙醇酸、异硫羰酸(isothionic)、乳酸、乳糖酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、琥珀酸、甲苯磺酸、酒石酸和三氟乙酸。合适的有机酸通常包括，例如，脂族酸、脂环族酸、芳族酸、芳脂族酸、杂环酸、羧酸和磺酸类有机酸。合适的有机酸的具体实例包括乙酸盐、三氟乙酸盐、甲酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、二葡糖酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、葡糖醛酸盐、马来酸盐、富马酸盐、丙酮酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐、苯甲酸盐、邻氨基苯甲酸、硬脂酸盐、水杨酸盐、对羟基苯甲酸盐、苯乙酸盐、扁桃酸盐、恩波酸盐(双羟萘酸盐)、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、泛酸盐、甲苯磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、磺胺酸盐、环己基氨基磺酸盐、对羟基丁酸盐、半乳糖酸盐、半乳糖醛酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、十二烷基硫酸盐、葡庚糖酸盐(glycoheptanoate)、甘油磷酸盐、庚酸盐、己酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、硫氰酸盐和十一酸盐。

此外，当本发明化合物带有酸性部分时，其合适的药学上可接受的盐可包括碱金属盐，即钠盐或钾盐；碱土金属盐，例如钙盐或镁盐；和与合适的有机配体形成的盐，例如季铵盐。在另一实施方案中，碱盐由形成无毒盐的碱形成，其包括铝、精氨酸、苄星青霉素(benzathine)、胆碱、二乙胺、二胺、甘氨酸、赖氨酸、葡甲胺、醇胺、氨丁三醇和锌盐。

有机盐可以由仲胺、叔胺或季胺盐制成，例如由氨丁三醇(tromethamine)、二乙胺、N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因。碱性含氮基团可以用试剂季铵化，试剂诸如低级烷基(C_1-C₆)卤化物(例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸盐(即二甲基、二乙基、二丁基和二烷基硫酸盐)、长链卤化物(例如、癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)，芳基烷基卤化物(例如，苄基和苯乙基溴化物)等。

在一实施方案中，还可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。

在本发明范围内的还有本发明化合物的所谓“前药”。因此，本发明化合物的某些衍生物(其本身可具有很少或没有药理学活性)当被施用到身体内或身体上时，可以例如通过水解裂解转化成具有所需活性的本发明化合物。这些衍生物被称为“前药”。关于前药使用的进一步信息可以在"Pro-drugs as Novel Delivery Systems”,Vol.14,ACSSymposium Series(T.Higuchi and V.Stella,Eds.),American Chemical Society,1975Washington,D.C.and"Bioreversible Carriers in Drug Design",Pergamon Press,1987(E.B.Roche,Ed.)American Pharmaceutical Association中找到。根据本发明的前药可以例如通过用本领域技术人员已知的称为例如在Bundgaard,H.1985.Design ofProdrugs.New York:Elsevier中描述的“前体部分(pro-moieties)”的某些部分取代任何式I、II或III化合物中存在的适当官能团来制备。

本发明还包括同位素标记的化合物，其除了一个或多个原子被原子质量或质量数不同于通常在自然界发现的原子质量或质量数的原子取代之外，与式I中所述的那些相同。可以掺入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，例如分别为²H、³H、¹³C、¹¹C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸0、¹⁷0、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。含有上述同位素和/或其他原子的其他同位素的本发明化合物、其前药和所述化合物或所述前药的药学上可接受的盐属于本发明的范围。某些同位素标记的本发明化合物，例如掺入放射性同位素如³H和¹⁴C的那些化合物，可用于药物和/或底物组织分布测定。氚(即³H)和碳-14(即¹⁴C)同位素因其易于制备和可检测性而特别优选。此外，用较重的同位素例如氘(即²H)取代可以提供某些治疗优势，这是因为代谢稳定性更高，例如体内半衰期延长或剂量需求减少，因此在某些情况下可能是优选的。同位素标记的本发明的式I、II或III化合物及其前药通常可以通过用易于获得的同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂，通过进行以下方案和/或实施例和制备中公开的方法来制备。

本发明的详细描述

通常，本发明化合物以有效治疗本文所述病症的量施用。本发明化合物通过任何合适的途径，以适合于这种途径的药物组合物的形式，并且对于预期的治疗有效的剂量施用。本领域普通技术人员使用医学领域熟悉的临床前和临床方法可以容易地确定治疗医学病症进展所需的治疗有效剂量的化合物。

除非另有说明，否则本文所用的术语“治疗”("treating")是指逆转、减轻、抑制该术语所适用的疾病或病症、或这种病症或病症的一种或多种症状的进展，或对其进行预防。除非另有说明，否则当如上所述定义“治疗”("treating")时，所用的术语“治疗”("treatment")是指治疗(treating)的行为。术语“治疗”("treating")还包括受试者的佐剂和新辅助治疗。本发明化合物可以口服给药。口服给药可以包括吞咽，使得化合物进入胃肠道，或者可以使用口腔或舌下给药，由此，化合物直接从口腔进入血流。

在另一实施方案中，本发明化合物还可以直接施用于血流、肌肉或内脏器官中。用于肠胃外给药的合适方式包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内和皮下。用于肠胃外给药的合适装置包括针(包括微针)注射器、无针注射器和输注技术。在另一实施方案中，本发明化合物还可以局部施用于皮肤或粘膜，即皮肤或透皮施用。在另一实施方案中，本发明化合物还可以鼻内或通过吸入施用。在另一实施方案中，本发明化合物可以直肠或***施用。在另一实施方案中，本发明化合物还可以直接施用于眼睛或耳朵。

所述化合物和/或含有所述化合物的组合物的剂量方案基于多种因素，包括基于患者的类型、年龄、体重、性别和医学状况；病情的严重程度；给药途径；和所用特定化合物的活性。因此，剂量方案可以广泛变化。量级为每天每千克体重约0.01mg至约100mg的剂量水平可用于治疗上述病症。在一实施方案中，本发明化合物的总日剂量(以单剂量或分剂量给药)通常为约0.01mg/kg至约100mg/kg。在另一实施方案中，本发明化合物的总日剂量为约0.1mg/kg至约50mg/kg，在另一实施方案中，为约0.5mg/kg至约30mg/kg(即，mg本发明化合物/kg体重)。在一实施方案中，剂量为0.01mg/kg/天至10mg/kg/天。在另一实施方案中，剂量为0.1mg/kg/天至1.0mg/kg/天。剂量单位组合物可含有此量或其约数以构成日剂量。在许多情况下，化合物的给药将在一天内重复多次(通常不超过4次)。如果需要，通常可以使用每天多剂量来增加总日剂量。

对于口服给药，组合物可以以含有约0.01mg至约500mg活性成分的片剂形式提供，或在另一实施方案中，以含有约1mg至约100mg活性成分的片剂形式提供。静脉内，在恒定速率输注期间，剂量可以为约0.1mg/kg/分钟至约10mg/kg/分钟。

根据本发明的合适受试者包括哺乳动物受试者。根据本发明的哺乳动物包括但不限于犬、猫、牛、山羊、马、绵羊、猪、啮齿动物、兔类动物、灵长类动物等，并且包括尚未出生的哺乳动物。在一实施方案中，人是合适的受试者。人类受试者可以是任何性别的，并且可以在任何发育阶段。

在另一实施方案中，本发明包括一种或多种本发明化合物在制备用于治疗本文所述病症的药物中的用途。

为了治疗上述病症，本发明化合物可以作为化合物本身给药。替代地，药学上可接受的盐适用于医学应用，因为它们相对于母体化合物具有更高的水溶性。

在另一实施方案中，本发明包含药物组合物。此类药物组合物包含用药学上可接受的载体呈递(present)的本发明化合物。载体可以是固体、液体或两者，并且可以与化合物一起配制成单位剂量组合物，例如片剂，其可以含有0.05重量％至95重量％的活性化合物。本发明化合物可与作为靶向药物载体的合适的聚合物偶联。也可存在其他药理活性物质。

本发明化合物可以通过任何合适的途径给药，优选以适合于这种途径的药物组合物的形式，以及对预期治疗有效的剂量给药。例如，活性化合物和组合物可以口服、直肠、肠胃外或局部给药。

固体剂型的口服给药可以例如以分开的单元存在，例如硬或软胶囊、丸剂、扁囊剂(cachet)、锭剂或片剂，各自含有预定量的至少一种本发明化合物。

在另一实施方案中，口服给药可以是粉末或颗粒形式。在另一实施方案中，口服给药可以是喷雾干燥的分散体。在另一实施方案中，口服剂型是舌下剂型，例如锭剂。在这种固体剂型中，式I、II或III化合物通常与一种或多种佐剂组合。这种胶囊或片剂可含有控释制剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂或可以用肠溶包衣制备。

在另一实施方案中，口服给药可以是液体剂型。用于口服给药的液体剂型包括，例如，药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂，其含有本技术领域常用的惰性稀释剂(例如水)。此类组合物还可包含佐剂，例如润湿剂、乳化剂、悬浮剂、调味剂(例如，甜味剂)和/或芳香剂。

在另一实施方案中，本发明包括肠胃外剂型。“肠胃外给药”包括例如皮下注射、静脉内注射、腹膜内注射、肌内注射、胸骨内注射和输注。可根据已知技术，使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制可注射制剂(例如，无菌可注射水性或油性悬浮液)。

在另一实施方案中，本发明包括局部剂型。“局部给药”包括，例如，透皮给药，例如通过透皮贴剂或离子电渗疗法装置给药、眼内给药、或鼻内或吸入给药。用于局部给药的组合物还包括例如局部凝胶、喷雾剂、软膏和乳膏。局部制剂可包括增强活性成分通过皮肤或其他受影响区域的吸收或渗透的化合物。当本发明化合物通过透皮装置给药时，使用储库和多孔膜类型的贴剂或固体基质品种的贴剂进行给药。

用于该目的的典型制剂包括凝胶、水凝胶、洗剂、溶液、乳膏、软膏、撒粉剂(dusting powder)、敷料、泡沫剂、膜剂、皮肤贴剂、薄片(wafer)、植入物、海绵(sponge)、纤维、绷带和微乳液。也可以使用脂质体。典型的载体包括醇、水、矿物油、液体凡士林、白凡士林、甘油、聚乙二醇和丙二醇。可以加入渗透促进剂；例如，参见J.Pharm.Sci.,88(10),955-958,by Finnin and Morgan(October 1999)。

适于眼睛局部给药的制剂包括例如滴眼剂，其中本发明化合物溶解或悬浮在合适的载体中。适用于眼部或耳部给药的典型制剂可以是微粉化悬浮液或等渗、pH调节的无菌盐水溶液的液滴形式。适用于眼部和耳部给药的其它制剂包括软膏、可生物降解的(例如，可吸收的凝胶海绵、胶原)和不可生物降解的(例如硅酮)植入物、薄片、镜片和微粒或囊泡***，例如类脂囊泡(niosomes)或脂质体。聚合物，如交联聚丙烯酸，聚乙烯醇，透明质酸，纤维素聚合物，例如(羟丙基)甲基纤维素，羟乙基纤维素或甲基纤维素，或杂多糖聚合物，例如，结兰胶(gelan gum)，可以与防腐剂(如苯扎氯铵(benzalkonium chloride))结合在一起。此类制剂也可通过离子电渗疗法递送。

对于鼻内给药或通过吸入给药，本发明的活性化合物可方便地以溶液或悬浮液的形式从由患者挤压或泵送的泵喷雾容器中递送或使用合适的推进剂从加压容器或喷雾器作为气溶胶喷雾递送。适于鼻内给药的制剂通常以干粉形式(单独，作为混合物，例如，具有乳糖的干混合物，或混合组分颗粒，例如，与磷脂混合，例如磷脂酰胆碱)从干粉吸入器给药，或者作为气溶胶喷雾，使用或不使用合适的推进剂(例如1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷)，从加压容器、泵、喷雾器、雾化器(优选使用电流体动力学以产生细雾的雾化器)或喷雾装置给药。对于鼻内使用，粉末可包含生物粘附剂，例如壳聚糖或环糊精。

在另一实施方案中，本发明包括直肠剂型。这种直肠剂型可以是例如栓剂的形式。可可脂是一种传统的栓剂基质，但可以酌情使用各种替代品。

也可以使用药学领域中已知的其他载体材料和给药方式。本发明的药物组合物可以通过任何公知的药学技术制备，例如有效的制剂和给药方法。关于有效制剂和给药程序的上述考虑因素是本领域公知的并且在标准教科书中有所描述。药物的配方在例如Hoover,John E.,Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania,1975；Lieberman et al.,Eds.,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Dekker,New York,N.Y.,1980；以及Kibbe et al.,Eds.,Handbook ofPharmaceutical Excipients(3rd ed.),American Pharmaceutical Association,Washington,2000中描述。

本发明化合物可在治疗各种病症或疾病状态中单独使用或与其它治疗剂组合使用。本发明的化合物和其他治疗剂可以同时给药(以相同的剂型或不同的剂型)或依次给药。

两种或更多种化合物可以同时、一起或依次施用。另外，可以通过在给药前混合化合物或通过在相同时间点但在不同解剖部位或使用不同给药途径施用化合物来进行同时给药。

短语“一起给药”、“联合给药”，“同时给药”和“同时给药的”是指化合物联合给药。

本发明包括式I、II或III中提供的CFTR增效剂化合物与一种或多种另外的药物活性剂的组合的用途。如果施用活性剂的组合，则它们可以以分开的剂型顺序或同时施用，或组合在单一剂型中。因此，本发明还包括药物组合物，其包含一定量的：(a)包含式I、II或III化合物或该化合物的药学上可接受的盐的第一剂；(b)第二药物活性剂；(c)任选的第三药物活性剂；(d)药学上可接受的载体、载剂或稀释剂。

根据待治疗的疾病、病症或病况，可选择各种药物活性剂与式I、II或III化合物联合使用。例如，用于治疗囊性纤维化的药物组合物可包含式I、II或III化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种剂，该一种或多种剂为例如CFTR调节剂，例如另一种CFTR增效剂，CFTR校正剂，包括CAL(CFTR相关配体)抑制剂，CFTR生产校正剂或通读剂，CFTR稳定剂，包括CFTR-Dab2(残疾基因同源物2(Disabled homolog 2))抑制剂，或CFTR放大器；上皮钠通道(ENaC)抑制剂/阻断剂；寡核苷酸贴片；自噬诱导剂；蛋白质稳定调节剂，包括组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂；或支持性疗法，例如粘液溶解剂，支气管扩张剂，抗生素，抗感染剂，抗炎剂，抗胆碱能药，肥大细胞稳定剂，皮质类固醇，营养剂或酶替代物。

组合可以包括来自特定类别剂的多个剂；例如，式I、II或III化合物与两种或更多种CFTR校正剂的组合。可与式I、II或III化合物及其组合物组合使用的药物活性剂包括但不限于：

(i)CFTR增效剂，例如VX-770(ivacaftor)、GLPG-1837、GLPG-2451、QBW-251、GLPG-3067、FDL-129、CTP-656、FDL-176、PTI-P271,和CTP-656；

(ii)CFTR校正剂,如VX-809(lumacaftor)、VX-661(tezacaftor)、VX-983VX-152、VX-440、VX-659、GLPG-2737、P247-A、FDL-169、FDL-304、FDL-304、GLPG-2222、GLPG-2665、GLPG-2851、PTI-C1811、NU-001和NU-002；

(iii)CFTR增强剂，如PTI-428和PTI-130；

(iv)通读剂(Read-through agent)，例如ataluren；

(v)CFTR稳定剂，如N91115(cavosonstat，一种S-亚硝基谷胱甘肽还原酶“GSNOR”抑制剂)；

(vi)上皮钠通道(ENaC)抑制剂，如SPX-101、QBW-276和VX-371；

(vii)寡核苷酸贴片，例如QR-010；

(viii)自噬诱导剂，如CX-4945，半胱胺和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的组合，胱胺和雷帕霉素；

(ix)蛋白质稳态调节剂，如组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂，包括4-苯基丁酸酯(4-PBA)；

(x)支持疗法，如沙丁胺醇、沙美特罗、环丙沙星、氟替卡松，***、异丙托溴铵、脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶。

本发明还包括适用于实施上述治疗方法的试剂盒。在一实施方案中，所述试剂盒包含第一剂型，所述第一剂型包含一种或多种本发明化合物，任选与一种或多种另外的治疗剂组合；和用于所述剂量的容器，其量足以实施本发明的方法。在另一实施方案中，本发明的试剂盒包含一种或多种本发明化合物，任选地含有一种或多种另外的治疗剂。

一般合成方案

本发明化合物可通过本领域已知的任何制备类似结构化合物的方法制备。特别地，本发明的化合物可以通过参考下面的方案描述的程序，或通过实施例中描述的具体方法，或通过与两者中任一种类似的工艺制备。

技术人员将理解，以下方案中所述的实验条件说明了实现所示转化的合适条件，并且可能需要或希望改变用于制备式(I)化合物的精确条件。还应理解，可能需要或希望以与方案中描述的顺序不同的顺序进行转化，或修饰一种或多种转化，以提供本发明的所需化合物。

式I、II和III的所有衍生物可以通过下面给出的一般方法中描述的程序或通过其常规修改方案来制备。除了其中使用的任何新的中间体之外，本发明还包括制备式I、II和III的衍生物的这些工艺中的任何一种或多种。本领域技术人员应理解，可以在热或在微波辐射下加热以下反应。

以下途径，包括实施例和制备中提及的那些，说明了合成式I、II和III化合物的方法。技术人员应理解，本发明化合物及其中间体可以通过除本文具体描述的方法之外的方法制备，例如，通过经修改的本文所述的方法制备，例如通过本领域已知的方法制备。合适的合成指导、官能团互变、保护基团的使用等是例如：“Comprehensive OrganicTransformations”by RC Larock,VCH Publishers Inc.(1989)；Advanced OrganicChemistry”by J.March,Wiley Interscience(1985)；“Designing Organic Synthesis”byS Warren,Wiley Interscience(1978)；“Organic Synthesis–The DisconnectionApproach”by S Warren,Wiley Interscience(1982)；“Guidebook to OrganicSynthesis”by RK Mackie and DM Smith,Longman(1982)；“Protective Groups inOrganic Synthesis”by TW Greene and PGM Wuts,John Wiley and Sons,Inc.(1999)；and“Protecting Groups”by PJ Kocienski,Georg Thieme Verlag(1994)；以及所述标准操作的任何更新版本。

此外，本领域技术人员应理解，在合成本发明化合物的任何阶段可能需要或希望保护一个或多个敏感基团，以防止不希望的副反应。特别是，可能需要或希望保护氨基或羧酸基团。用于制备本发明化合物的保护基可以常规方式使用。参见，例如，通过引用并入本文的'Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis'by Theodora W Greene andPeter GM Wuts,fifth edition,(John Wiley and Sons,2014)中描述的那些，其也描述了用于除去这样的基团的方法。

在下面的一般合成方法中，除非另有说明，否则取代基如上文参照上述式(I)化合物所定义。在给出溶剂比例的情况下，除非另有说明，否则比例是按体积计的。

本发明化合物可通过本领域已知的任何制备类似结构化合物的方法制备。特别地，本发明化合物可以通过参考下面的方案描述的程序，或通过实施例中描述的具体方法，或通过与任一者类似的方法制备。

技术人员应理解，以下方案中所述的实验条件说明了实现所示转化的合适条件，并且可能需要或希望改变用于制备式I化合物的精确条件。

以下一般方法描述了如下所示的式(I)和(II)和(III)化合物的制备。

根据第一种方法，式(IIC)化合物(其中R²为CN的式II化合物)可如方案1所示由式(IIA)化合物和式(IIB)化合物(其中R²为Hal的式II化合物)制备，其中Hal是氯，溴或碘，优选溴。

方案1

在方案1中，在适当的温度如0℃下，在合适的溶剂(例如DCM或DMF)中通过用合适的卤化剂(如N-(Hal)琥珀酰亚胺，优选NBS(其中Hal是溴))处理，将式(IIA)化合物转化为式(IIB)化合物。本领域技术人员还知道，使用替代试剂、溶剂和温度可以实现用于特异性引入合适的卤素基团如Br的替代方法。在合适的温度下，通过在合适的催化剂存在下，如在合适的溶剂(例如DMF或NMP)中的Pd(dppf)Cl₂(或Pd₂(dba)₃加dppf)存在下，用合适的有机金属氰化物源(如Zn(CN)₂或CuCN)处理，将式(IIB)化合物转化为式(IIC)化合物。本领域技术人员还知道可以使用替代的有机金属偶联策略，其包括替代的偶联配偶体、金属和溶剂组合。本领域技术人员充分理解，如上所述制备和分离式(IIB)化合物，或原位制备式(IIB)化合物，无需在顺序反应策略中分离，而得到式(IIC)化合物。

根据第二种方法，式(II)化合物可以由式(IID)、(IIE)和(V)化合物制备，如方案2所示，其中Hal是氯、溴或碘。

方案2

在方案2中，式(II)化合物可以使用合适的有机金属交叉偶联反应(例如Suzuki交叉偶联反应，必要时先进行硼酸或酯形成)由式(IIE)和(V)的化合物制备。典型的Suzuki交叉偶联条件包括含有合适的膦配体的钯催化剂，在无机碱存在下，在含水二氧六环中，在加热或微波辐射下升高的温度下。优选的条件包括在含水二氧六环或甲醇中的Pd(OAc)₂、Pd(dppf)Cl₂或Pd(PPh₃)₄与碳酸钠、碳酸铯或碳酸钾，在室温至120℃下。如果需要，可以使用典型的硼酸酯形成条件与式(XXXIII)化合物(其中Hal＝Cl、Br或I)在二氧六环中回流制备典型的式(V)化合物，典型的硼酸酯形成条件包括Pd(dppf)Cl₂和乙酸钾与双联频哪醇基二硼。式(IIE)化合物还可以使用合适的卤化反应如NBS(当Hal是溴时)，在合适的溶剂如DCM中，在合适的温度如0℃至室温下，由式(IID)化合物制备。

根据第三工艺，式(III)化合物可以由式(IIIA)化合物制备，如方案3所示，其中LG是合适的离去基团，例如OH或Hal(其中Hal是氯、溴或碘)。

方案3

在方案3中，式(III)化合物可以由式(IIIA)化合物(其中LG是OH)使用合适的官能团相互转化反应制备，例如先使用合适的卤化反应，随后适当的胺化反应的两步法制备。优选的氯化条件包括在密封管中，在0℃至70℃的合适温度下的合适的溶剂(如DCM)中，优选在70℃下的DCM中，用***、三氯氧化磷和合适的碱如Et₃N处理式(IIIA₎化合物。中间体式(IIIB)化合物(其中LG＝Hal)可以在密封管中，在有或没有微波辐射的情况下，在合适的温度例如120℃下，通过用在二氧六环中的氨和/或在合适的溶剂中的氢氧化铵水溶液处理持续适当的时间(例如1-18小时)而转化为式(III)化合物。方案3中描述的反应步骤可以单独进行或组合成单次制备。

根据第四种方法，式(I)化合物可以由式(IA)、(IB)和(IX)化合物制备，并且如方案4所示，其中Hal是氯、溴或碘。

方案4

在方案4中，式(I)化合物可以使用合适的有机金属交叉偶联反应，如Suzuki交叉偶联反应，由式(IB)化合物和2-三氟甲基嘧啶基硼酸酯制备。典型的Suzuki交叉偶联条件包括含有合适的膦配体的钯催化剂，在无机碱存在下，在含水二氧六环中，在热或微波辐射下升高的温度下。优选的条件包括在含水二氧六环或甲醇中的Pd(OAc)₂、Pd(dppf)Cl₂或Pd(PPh₃)₄与碳酸钠、碳酸铯或碳酸钾，在室温至120℃下。式(IB)化合物可以在室温到100℃下的合适温度下，在合适的碱(例如Cs₂CO₃)存在下，在合适的溶剂(例如DMF)中，通过使用式(IA)和(IX)的化合物的合适的烷基化反应来制备。式(IA)化合物可以商购获得或通过类似于本文所述的方法获得。

根据第五种方法，式(IIA')化合物可由式(IIG)、(IIF)、(IID”)、(IID')、(IIE')、(V)和(XII)化合物制备，并且如方案5所示，其中Hal是氯、溴或碘。

方案5

在方案5中，式(IIA')化合物可以通过与方案2中类似的方式，使用合适的卤化和有机金属交叉偶联反应，例如Suzuki交叉偶联反应，(如果需要，先进行硼酸或酯形成反应)由式(IID')、(IIE')和(V)化合物制备。式(IID')化合物可以由式(IID”)化合物，使用合适的试剂，例如Et₃SiH，在TFA的存在下，在合适的溶剂如DCM中，在合适的温度，如0℃至室温下，保持1-18小时的适当时间制备。替代地，式(IID”)化合物可由式(IIF)化合物和合适的醛(XII)(其中R^1a＝H)制备。式(IID”)化合物可以使用合适的烷基化反应由式(XI)化合物和(XII)醛制备。式(IIF)化合物可以在合适的溶剂如THF中，在-30℃至室温的合适温度下，使用合适的有机金属试剂(如格利雅(Grignard)试剂，如异丙基氯化镁氯化锂络合物)进行合适的卤素-金属交换反应，然后加入合适的式(XII)羰基化合物。式(IIF)化合物可以由式(IIG)化合物和过量二甲基甲酰胺二甲基缩醛在合适的温度如90℃下持续合适的时间，例如2-18小时制备。式(IIG)化合物可以商购获得或通过类似于本文所述的方法获得。

根据第六种方法，式(IXA)和(XII)化合物可以由式(XIII)和(XIV)化合物制备，如方案6所示。

方案6

在方案6中，式(XIV)化合物可以使用合适的式(XV)亲核-碳化合物，例如合适的格利雅(Grignard)试剂(其中M是Mg，L是Hal)，在合适的温度如0℃至室温下，在合适的溶剂如THF中，由式(XIII)化合物制备。式(XII)化合物可以通过使用合适的试剂如MnO₂，在合适的溶剂如DCM中，在合适的温度如室温至回流下，由式(XIV)化合物通过氧化来制备。式(IXA)化合物可以使用合适的卤化试剂如亚硫酰氯(Hal＝Cl)，在合适的溶剂如DCM中，在合适的温度如室温下，由式(XIV)化合物制备。式(XIII)化合物可以商购获得或通过类似于本文所述的方法获得。

根据第七种方法，式(IIA”)化合物(式(II)化合物，其中R^1b＝OH)可由式(IID”)，(IIE”)和(V)的化合物制备，如方案7中所示，其中Hal是氯，溴或碘。

方案7

在方案7中，式(IIA”)化合物可以以与在方案2中的方法类似的方式，使用合适的卤化和有机金属交叉偶联反应，如Suzuki交叉偶联反应，如果需要，先通过硼酸或酯形成反应，从式(IID”)、(IIE”)和(V)化合物制备。

根据第八种方法，式(IIIA')化合物可由式(XVI)、(XVII)、(XVIII)、(XIX)、(XX)、(XXI)和(XXII)化合物制备，如方案8中所示，其中Hal是氯、溴或碘，R_x是合适的烷基，如甲基或乙基。

方案8

在方案8中，式(IIIA')化合物可以在密封管中，在微波辐射下，在合适的温度如130℃下，通过加热式(XXII)化合物、甲酰胺和甲脒乙酸盐持续合适的时间如2小时来制备。本领域技术人员应理解，存在引发杂环形成的替代合适方法。式(XXII)化合物可以由式(XXI)化合物和O(二苯基氧膦基)羟胺在合适的碱如LiHMDS存在下，在合适的溶剂如DMF中，在合适的温度如0℃至室温下，持续适当的时间(如18小时)制备。式(XXI)化合物可以在密封管中，在微波辐射下，在合适的温度如130℃下，通过加热在乙酸中的式(XX)化合物和乙酸铵来制备。式(XX)化合物可以使用酰胺键形成步骤由式(XVIII)和(XIX)化合物制备，所述酰胺键形成步骤由酰胺键偶联剂和有机碱的合适组合介导。优选的条件包括HATU与NMM，在合适的溶剂如DMF中，在室温或升高的温度下。式(XVIII)化合物可以在合适的碱如KO^tBu存在下，在合适的溶剂如THF中，在合适的温度如-70℃至-50℃，由式(XVI)和(XVII)的化合物反应，然后用浓盐酸处理制备。式(XVI)、(XVII)和(XIX)化合物可以商购获得或类似于本文所述的方法获得。

根据第九种方法，式(IID”')化合物可由式(XV)、(XXIII)、(XXIV)、(XXV)、(XXVI)、(XXVII)、(XXVIII)和(XXIX)化合物制备，并且如方案9中所示，其中PG是合适的氮保护基团(例如^tBoc)。

方案9

在方案9中，式(IID”')化合物可以由式(XXIX)化合物，使用合适的试剂，例如Et₃SiH，在合适的溶剂(例如DCM)中，在TFA存在下，在合适的温度(例如0℃至室温)下持续适宜的时间为1-18小时制备。式(XXIX)化合物可以在合适的温度，例如0℃至室温下，使用合适的式(XV)亲核-碳化合物，例如合适的格氏试剂(其中M是Mg，L是Hal)，在合适的溶剂(如THF)中，由式(XXVIII)的化合物制备。式(XXVIII)化合物可以在合适的温度如室温至回流下，在合适的溶剂如DCM中，使用合适的试剂如MnO₂，使用合适的氧化，由式(XXVII)化合物制备。式(XXVII)化合物可以在合适的碱如DIPEA存在下，在合适的溶剂如甲苯和^tBuOH中，在合适的温度如室温下，由式(XXV)和(XXVI)化合物制备。式(XXV)化合物可以在合适的非质子溶剂如THF中，在合适的温度如0℃至室温下，由式(XXIV)化合物和乙炔基溴化镁制备。式(XXIV)化合物可以在DMAP存在下，在合适的溶剂如DCM中，在合适的温度如室温下，由式(XXIII)化合物和(Boc)₂O制备。式(XV)、(XXIII)和(XXVI)化合物可以商购获得或通过类似于本文所述的方法获得。

根据第十种方法，式(I')化合物可以由式(IA)、(XXX)、(XXXI)和(IB')化合物和2-三氟甲基嘧啶基硼酸酯制备，如方案10中所示，其中Hal是氯、溴或碘。

方案10

在方案10中，式(I')化合物可以使用合适的有机金属交叉偶联反应如Suzuki交叉偶联反应，由式(IB')化合物和合适的2-三氟甲基嘧啶基硼酸酯制备。典型的Suzuki交叉偶联条件包括含有合适的膦配体的钯催化剂，在无机碱存在下，在含水二氧六环中，在热或微波辐射下升高的温度下。优选的条件包括在含水二氧六环或甲醇中的Pd(OAc)₂、Pd(dppf)Cl₂或Pd(PPh₃)₄与碳酸钠、碳酸铯或碳酸钾，在室温至120℃下。式(IB')化合物可以在合适的碱如DIPEA存在下，在合适的溶剂如甲苯和^tBuOH中，在合适的温度如室温下，由式(XXXI)和(XXVI)化合物制备。式(XXXI)化合物可以在合适的碱如Cs₂CO₃存在下，在合适的溶剂如DMF中，在合适的温度如室温下，由式(XXX)和(IA)化合物制备。式(IA)和(XXVI)化合物可以商购获得或通过类似于本文所述的方法获得。

在所有前述一般方法方案中描述的导致存在手性中心的化合物(其中R^1a和R^1b是不同的基团(例如其中R^1a是(C₁-C₃)烷基并且R^1b是H))的情况下，本领域技术人员充分理解，单个对映体可以使用合适的分离方法如SFC色谱法获得，以提供这些化合物的(+)对映体和(-)对映体。本领域技术人员充分理解，前述一般方法方案中描述的化合物的单个对映异构体如上所述制备和分离，或使用替代分离技术如HPLC分离，该HPLC使用合适的手性固定相，用确定为分离所需对映体所必需的合适的移动相洗脱。

以下非限制性制备和实施例说明了本发明化合物和盐的制备。在下面以及在前述方案中列出的实施例和制备中，可以参考以下缩写、定义和分析程序。还使用本技术领域常见的其他缩写。已使用标准IUPAC命名法。

可以使用以下缩写：AcOH是乙酸；Ar是氩气；aq是水溶液；Bn是苄基；Boc是叔丁氧基羰基；Boc₂O是二碳酸二叔丁酯；br是宽峰；tBu是叔丁基；tBuOH是叔丁醇；n-BuLi是正丁基锂；Bu₄NCl是四丁基氯化铵；℃是摄氏度；CDCl₃是氘代氯仿；Cs₂CO₃是碳酸铯；CsF是氟化铯；CuCN是氰化铜；CuI是碘化铜；δ是化学位移；d是双重的；DCM是二氯甲烷(dichloromethane)或二氯甲烷(methylene chloride)；DIAD是偶氮二羧酸二异丙酯；DIPEA是N-乙基二异丙胺或N,N-二异丙基乙胺；DMA是N,N-二甲基乙酰胺；DMAP是4-二甲基氨基吡啶；DMF是N,N-二甲基甲酰胺；DMF-DMA是N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛；DMSO是二甲基亚砜；DPPA是二苯基磷酰基叠氮化物；Dppf是1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁；EDA是乙二胺；Et₂O是***；EtOAc是乙酸乙酯；EtOH是乙醇；Et₃N是三乙胺；Et₃SiH是三乙基硅烷；g是克；HATU是1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-***并[4,5-b]吡啶-3-氧化六氟磷酸盐；HCl是盐酸；HCO₂H是甲酸；HPLC是高压液相色谱；H₂是氢；H₂O是水；Hr是小时，Hrs是小时；K₂CO₃是碳酸钾；KHSO₄是硫酸氢钾；KOAc是乙酸钾；K₃PO4是磷酸钾；L是升；LCMS是液相色谱质谱；LDA是二异丙基氨基锂；LiAlH₄或LAH是氢化铝锂；LiCl是氯化锂；LiHMDS是双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂；LiOH·H₂O是氢氧化锂一水合物；Li-是三仲丁基硼氢化锂；m是多重的；M是摩尔浓度；MeCN是乙腈；MeMgBr是甲基溴化镁；MeOH是甲醇；2-MeTHF是2-甲基四氢呋喃；mg是毫克；MgSO₄是硫酸镁；MHz是兆赫兹；min是分钟；mL是毫升；mmol是毫摩尔；MnO₂是二氧化锰；mol是摩尔；MS m/z是质谱峰；MTBE是叔丁基甲基醚；MsCl是甲磺酰氯；NaCN是***；NaBH₄是硼氢化钠；Na₂CO₃是碳酸钠；NaH是氢化钠；NaHCO₃是碳酸氢钠；NaHSO₄是硫酸氢钠；NaHMDS是双(三甲基甲硅烷基)氨基钠；NaOH是氢氧化钠；NaOAc是乙酸钠；NaOMe是甲醇钠；Na₂SO₄是硫酸钠；Na₂S₂O₃是硫代硫酸钠；NBS是N-溴琥珀酰亚胺；NCS是N-氯代琥珀酰亚胺；NH₃是氨；NH₄Cl是氯化铵；NH₄HCO₃是碳酸氢铵；NH₂NH₂.H₂O是水合肼；NH₂OH·HCl是盐酸羟胺；NH₄OH是氢氧化铵；NH₄OAc是乙酸铵；NiI是碘化镍；NIS是N-碘代琥珀酰亚胺；nM是纳摩尔；NMP是1-甲基-2-吡咯烷酮；NMR是核磁共振；Pd/C是钯碳；Pd₂(dba)₃是三(二亚苄基丙酮)二钯；Pd(dppf)Cl₂是[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)；Pd(OH)₂是氢氧化钯；Pd(OAc)₂是乙酸钯；PPh₃是三苯基膦；Pd(PPh₃)₄是四(三苯基膦)钯(0)；Pet.Ether是石油醚；pH是酸碱度；ppm是百万分之一；PtO₂是铂(IV)氧化物；q是四重峰；rt是室温；RT是保留时间；s是单峰；SCX是强阳离子交换；SEM-Cl是2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯；SFC是超临界流体色谱；SM是原料；S-Phos是2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯；SOCl₂是亚硫酰氯；t是三重峰；T3P是丙基膦酸酐；TBAF是叔丁基氟化铵；TBD是1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]癸-5-烯；TBME是叔丁基二甲醚；TFA是三氟乙酸；TFP是三(2-呋喃基)膦；THF是四氢呋喃；Ti(OiPR)₄是异丙醇钛(IV)；TPTU是2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐；μL是微升；μmol是微摩尔；XPhos是2-二环己基膦基-2',4',6'-三丙基联苯；Zn(CN)₂是氰化锌。

在所有情况下，¹H和¹⁹F核磁共振(NMR)光谱与提出的结构一致。特征化学位移(δ)以四甲基硅烷(用于¹H-NMR)的低场和三氯氟甲烷(用于¹⁹F NMR)的高场按百万分率给出，使用常规缩写来表示主峰：例如，s，单峰；d，双重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽峰。以下缩写用于常用溶剂：CDCl₃，氘代氯仿；DMSO-d₆，氘代二甲基亚砜；和MeOH-d₄，氘代甲醇。在适当的情况下，互变异构体可以记录在NMR数据中；并且可能看不到一些可交换的质子。

使用电喷雾电离(ESI)或大气压化学电离(APCI)记录质谱MS(m/z)。

如果相关并且除非另有说明，否则提供的m/z数据是同位素¹⁹F、³⁵Cl、⁷⁹Br和¹²⁷I。

其中已经使用制备型TLC或硅胶色谱法，本领域技术人员可以选择适当溶剂的任何组合来纯化所需化合物。

以下是用于分析和纯化本发明的中间体和化合物的分析和制备色谱方法。

制备型SFC方法

SFC方法F1：柱：CHIRALPAKID，5.0cm I.D.×25cm长；等度流动相：己烷/EtOAc/DEA，60/40/0.1(v/v/v)；流速：60mL/min；温度：35℃。

分析型SFC方法

SFC方法F2：柱：CHIRALPAK ID，0.46cm I.D.×15℃长；流动相：己烷/EtOAc/DEA，60/40/0.1(v/v/v)；流速：1.0mL/min；波长：UV 214nm；温度：35℃。

制备型HPLC方法

HPLC方法B2：柱：CHIRALCELOJ-H 2.5cm I.D.×25cm长；等度流动相：MeOH/DEA，100/0.1(v/v)；流速：30mL/min；温度：35℃.

HPLC方法C20A:柱:CHIRALPAK IC,2.5cm I.D.x 25cm长；等度流动相:DCM/MeOH,95/5(v/v)；流速:30mL/min；温度:35℃.

HPLC方法C20B:柱:CHIRALPAK IC,5.0cm I.D.x 25cm长；等度流动相:DCM/MeOH,95/5(v/v)；流速:60mL/min；温度:35℃.

HPLC方法C22A:柱:CHIRALPAK IC,2.5cm I.D.×25cm长；等度流动相:DCM/MeOH/DEA,95/5/0.1(v/v/v)；流速:30mL/min；温度:35℃.

HPLC方法C22B:柱:CHIRALPAK IC,5.0cm I.D.×25cm长；等度流动相:DCM/MeOH/DEA,95/5/0.1(v/v/v)；流速:30mL/min；温度:35℃.

HPLC方法C23A:柱:CHIRALPAK IC,5.0cm I.D.×25cm长；等度流动相:DCM/EtOH,90/10(v/v)；流速:60mL/min；温度:35℃.

HPLC方法C23B:柱:CHIRALPAK IC,2.5cm I.D.×25cm长；等度流动相:DCM/EtOH,90/10(v/v)；流速:60mL/min；温度:35℃.

HPLC方法C24A:柱:CHIRALPAK IC,5.0cm I.D.×25cm长；等度流动相:DCM/EtOH,95/5(v/v)；流速:60mL/min；温度:35℃.

HPLC方法C24B:柱:CHIRALPAK IC,2.5cm I.D.×25cm长；等度流动相:DCM/EtOH,95/5(v/v)；流速:60mL/min；温度:35℃。

HPLC方法C27:柱:CHIRALPAK IC,5.0cm I.D.×25cm长；等度流动相:己烷/EtOAc/DEA,60/40/0.1(v/v/v)；流速:60mL/min；温度:35℃。

HPLC方法C28:柱:CHIRALPAK IC,2.5cm I.D.×25cm长；等度流动相:己烷/EtOH,85/15(v/v)；流速:30mL/min。

HPLC方法D4:柱:CHIRALPAK AD-H,25cm I.D.×250cm长；等度流动相:EtOH/MeCN,80/20(v/v)；流速:20mL/min；温度:35℃。

HPLC方法D5:柱:CHIRALPAK AD-H,2.5cm I.D.×25cm长；等度流动相:己烷/EtOH,70/30(v/v),流速:30mL/min；温度:35℃。

HPLC方法D6:柱:CHIRALPAK AD-H,2.5cm I.D.×25cm长；等度流动相:MeOH/MeCN,90/10(v/v)；流速:30mL/min。

HPLC方法D7:柱:CHIRALPAK AD-H,5.0cm I.D.×25cm长；等度流动相:己烷/IPA,70/30(v/v)；流速:60mL/min。

HPLC方法E3:柱:CHIRALPAK IE,2.5cm I.D.×25cm长；等度流动相:己烷/EtOH,70/30(v/v)；流速:60mL/min；温度:35℃。

HPLC方法E4:柱:CHIRALPAK IE,5.0cm I.D.×25cm长；等度流动相:DCM/EtOH,95/5(v/v)；流速:55mL/min；温度:35℃。

HPLC方法E5:柱:CHIRALPAK IE,5.0cm I.D.×25cm长；等度流动相:己烷/EtOH,80/20(v/v)；流速:60mL/min；温度:35℃。

HPLC方法G1：柱：Waters Sunfire C18(19×100mm，5μ)；流动相：MeCN(0.05％TFA)-水(0.05％TFA)；梯度：在8.5分钟内20％-60％MeCN，在0.5分钟内60％-100％MeCN，在100％MeCN下保持1分钟；流速：25mL/min。

分析型HPLC方法

HPLC方法A:柱:Acquity BEH C18 50×2.1mm,1.7μ；流动相:MeCN(0.05％TFA)-水(0.05％TFA)；梯度:5％-95％MeCN持续2min,保持在95％MeCN持续0.5min.；重新平衡回5％MeCN直到2.7min.；流速:0.8mL/min；温度:45℃。

HPLC方法B1:柱:CHIRALCEL OJ-H,0.46cm I.D.×15cm长；注射:20.0ul；流动相:MeOH/MeCN,90/10(v/v)；流速:1.0mL/min；波长:UV 254nm；温度:35℃。

HPLC方法C1:柱:CHIRALPAK IC,0.46cm I.D.×25cm长；流动相:DCM/EtOH,95/5(v/v)；流速:1.0mL/min；波长:UV 214nm；温度:25℃。

HPLC方法C2:柱:CHIRALPAK IC,0.46cm I.D.×15cm长；流动相:DCM/EtOH,95/5(v/v)；流速:1.0mL/min；波长:UV 214nm；温度:25℃。

HPLC方法C4:柱:CHIRALPAK IC,0.46cm I.D.×25cm长；流动相:DCM/MeOH,95/5(v/v)；流速:1.0mL/min；温度:25℃。

HPLC方法C5:柱:CHIRALPAK IC,0.46cm I.D.×15cm长,5μ；流动相:DCM/MeOH,95/5(v/v)；流速:1.0mL/min；波长:UV 254nm；温度:35℃。

HPLC方法C10:柱:CHIRALPAK IC,0.46cm I.D.×15cm长；流动相:DCM/EtOH/DEA,90/10/0.1(v/v)；流速:1.0mL/min；波长:UV 254nm；温度:25℃。

HPLC方法C12:柱:CHIRALPAK IC,0.46cm I.D.×15cm长；流动相:己烷/EtOH,85/15(v/v)；流速:1.0mL/min；波长:UV 214nm；温度:35℃。

HPLC方法C13:柱:CHIRALPAK IC,0.46cm I.D.×15cm长；流动相:己烷/EtOAC/DEA,60/40/0.1(v/v/v)；流速:1.0mL/min；波长:UV 214nm；温度:35℃。

HPLC方法C14:柱:CHIRALPAK IC,0.46cm I.D.×15cm长；流动相:己烷/EtOH,80/20(v/v)；流速:1.0mL/min；波长:UV 214nm；温度:35℃。

方法D1:柱:CHIRALPAK AD-H,0.46cm I.D.×15cm长；流动相EtOH/MeCN,80/20(v/v)；流速1.0mL/min；波长UV 214nm；温度:35℃。

方法D2:柱:CHIRALPAK AD-H,0.46cm ID x 15cm长；流动相:己烷/EtOH,70/30(v/v)；流速:1.0mL/min；波长:UV 214nm；温度:35℃。

方法E1:柱:CHIRALPAK IE,0.46cm I.D.×15cm长；流动相:己烷/EtOH,70/30(v/v)；流速:1.0mL/min；波长:UV 214nm；温度:25℃。

HPLC方法G2：柱：Waters Atlantis dC18(4.6×50mm，5μ)；流动相：MeCN(0.05％TFA)-水(0.05％TFA)；梯度：4分钟内5％-95％MeCN，在95％MeCN下保持1分钟；流速：2mL/min。

中间体的制备

制备1：

5-溴-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

在0℃下向7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(制备45，1.2g，3.88mmol)的DCM(35mL)溶液中分批加入NBS(0.76g，4.27mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌1小时。将混合物倒入水中，滤出所得白色固体，并在真空下干燥，得到标题产物，为白色固体(1.3g，86％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):4.47(s,2H),6.19(br s,2H),6.64(s,1H),7.27-7.33(m,2H),7.43(m,1H),7.92-7.98(m,3H).LCMSm/z＝388.0[MH]⁺

制备2：

5-溴-7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

在0℃下向搅拌的7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(制备17，220mg，0.68mmol)在DMF(2mL)和DCM(10mL)的溶液中分批加入NBS(115mg，0.64mmol)，并将所得反应物在0℃下搅拌20分钟。将混合物用5％Na₂S₂O₃水溶液(10mL)淬灭，分离各层，并用DCM(10mL×2)萃取水层。将合并的有机萃取液干燥(Na₂SO₄)，过滤并将滤液真空浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，用MeCN：H₂O(0.1％TFA)(40:60至50:50)洗脱，得到标题化合物，其为白色固体(260mg，98％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):1.69(d,3H),4.88(q,1H),6.68(s,1H),6.70-6.80(br s,1H),7.40(m,1H),7.52-7.62(m,2H),7.78(m,1H),7.95(s,1H),7.98-8.15(br s,1H),8.41(s,1H).LCMS m/z＝402.1,404.1[MH]⁺

制备3：5-溴-7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

按照与制备2中所述类似的方法，从7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(制备20)得到标题化合物，为白色固体(310mg，52％)，¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):0.87(t,3H),2.10(m,2H),4.72(m,1H),6.81(br s,1H),7.31(m,1H),7.64(m,1H),7.85-7.95(m,2H),8.46(s,1H).LCMS m/z＝434.1,436.1[MH]⁺

制备4至16

将NBS(0.9-1.0当量)分批加入到冰冷却的适当原料(1当量)在DCM中的溶液中，并将所得混合物在0℃下搅拌15-60分钟，直至所有原料已被消耗。混合物通过添加5％Na₂S₂O₃溶液淬灭并用DCM(3x)萃取。将合并的有机萃取液干燥(Na₂SO₄)，过滤，减压蒸发滤液。通过柱色谱法纯化残余物，用EtOAc：石油醚或DCM：MeOH以合适的梯度洗脱，得到所需化合物。

^a使用DMF代替DCM作为反应溶剂，^b使用THF作为反应溶剂

制备17：7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

1-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙醇(制备31，400mg，1.2mmol)在Et₃SiH(2mL)和TFA(6mL)中的混合物在室温下搅拌16小时。将混合物真空浓缩，加入NaHCO₃水溶液(25mL)，用EtOAc(20mL×3)萃取混合物。将合并的有机萃取液干燥(Na₂SO₄)，过滤并将滤液真空浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，用EtOAc：石油醚(0：100至70:30)洗脱，得到标题化合物，为白色固体(220mg，57％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):1.72(d,3H),4.88(q,1H),6.58(d,1H),7.05(s,1H),7.40(m,1H),7.54-7.58(m,2H),7.75(m,1H),7.97(s,1H),8.10-8.25(br s,2H),8.37(s,1H).LCMS m/z＝324.1[MH]⁺

制备18：7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

在0℃下，向1-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙醇(制备32，1.5g，4.2mmol)的DCM(10mL)溶液中缓慢加入Et₃SiH(5mL)和TFA(5mL)。将反应物在室温下搅拌16小时，然后真空浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：EtOAc(34:66)洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(1.2g，84％)。LCMS m/z＝342.1[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.445min。

制备19：7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

在0℃下将TFA(3mL)缓慢加入到(7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]-1-羟丙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(制备44，1.3g，2.87mmol)的DCM(5mL)溶液中。缓慢加入Et₃SiH(3mL)并将反应混合物搅拌16小时，然后真空浓缩。将残余物溶于DCM(15mL)中并通过加入NaHCO₃水溶液将pH调节至8。将有机相干燥(Na₂SO₄)，减压除去溶剂，粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用DCM：MeOH(91：9)洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(0.6g，80％)％)。LCMS m/z＝338.1,339.1[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.364min。

制备20至29

按照与制备19中的方法类似的方法，由适当的醇原料制备下列化合物。

^a EtOAc/石油醚用作柱洗脱液

制备30：7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

将1-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙醇(制备38，6.5g，19.2mmol)在Et₃SiH(15mL)和TFA(45mL)中的混合物在室温下搅拌14小时。减压除去溶剂，加入NaHCO₃水溶液(100mL)，用EtOAc(50mL×3)萃取混合物。将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并将滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用EtOAc：石油醚(0：100至60:40)洗脱，得到标题化合物，其被7-(1-(1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺污染，为油状物。将油状物溶于MeOH(20mL)中，加入Pd/C(500mg)并将混合物在N₂下脱气，然后用H₂吹扫。将反应物在室温下搅拌2小时，然后通过过滤，用MeOH洗涤。减压蒸发合并的滤液，得到标题化合物，其为灰白色固体(5g，83％)。LCMS m/z＝323.1[MH]⁺

制备31：1-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙醇

在N₂下，在-30℃下，向搅拌的N'-(7-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-N,N-二甲基亚胺甲酰胺(制备50，1g，3.73mmol)的THF(30mL)溶液中加入iPrMgCl(LiCl络合物)(1.3M，在THF溶液中)(11.5mL，14.9mmol)，并将混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物在冰中冷却，加入冰冷却的1-(1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基)乙酮(918mg，4.5mmol)的THF溶液(20mL)并将反应物在室温下搅拌2小时。使用NH₄Cl水溶液(10mL)淬灭混合物，并且减压除去溶剂。将残余物在H₂O(50mL)和EtOAc(40mL)之间分配，分离各层，水相用EtOAc(40mL×2)萃取。将合并的有机萃取液干燥(Na₂SO₄)，过滤并将滤液真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用EtOAc：石油醚(0：100至90:10)洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(400mg，31％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):2.05(s,3H),6.09(s,1H),6.64(d,1H),6.85(d,1H),7.40(m,1H),7.50-7.70(m,5H),7.78(m,1H),8.31(s,1H).LCMS m/z＝340.1[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.224min。

制备32至44

按照与制备31中所述的方法类似的方法，由N'-(7-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-N,N-二甲基亚胺甲酰胺(制备50)和适当的酮或醛制备下列化合物。

制备44：(7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]-1-羟丙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯

在0℃，将乙基溴化镁(8.84mmol，8.84mL)加入到(7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]羰基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(制备46，1.5g，3.53mmol)的THF(30mL)溶液中，加完后，将反应物在0℃下搅拌30分钟。缓慢加入NH₄Cl溶液，用EtOAc(100mL×2)萃取混合物。将合并的有机萃取物真空浓缩，得到标题化合物，其无需进一步纯化即可使用(1.7g，定量)。LCMS m/z＝454.1[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.712min。

制备45：7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

向冰冷却的(7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]羰基}吡咯并[2,1-f][1]2,4-三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(制备46，5.01g，11.79mmol)的DCM(40mL)溶液中加入Et₃SiH(10mL)和TFA(10mL)，并将反应物在室温下搅拌18小时。将混合物真空浓缩，将残余物悬浮在EtOAc(100mL)中，用饱和NaHCO₃溶液和盐水(2×100mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，用MeOH：DCM(5:95至9:91)洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(1.2g，25％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d₄):4.55(s,2H),6.81(m,1H),7.38-7.44(m,3H),7.60(m,1H),7.85(m,1H),8.04(s,1H),8.31(s,1H).LCMS m/z＝310.1[MH]⁺

制备46：(7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]羰基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯

将MnO₂(4.09g，47mmol)加入到(7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基](羟基)甲基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(制备47，4.0g，9.4mmol)的DCM(50mL)溶液中，并将混合物加热回流32小时。过滤冷却的混合物，滤液用DCM(100mL×3)洗涤并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，用石油醚：EtOAc(50:50)洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(1.5g，37％)。LCMS m/z＝426.1[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.684min

制备47：(7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基](羟基)甲基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯

将1-叠氮基-2-氟苯(2.28g，16.67mmol)、CuI(1.5g，8.33mmol)和DIPEA(3.22g，24.99mmol)加入到[7-(1-羟基丙-2-炔-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基]氨基甲酸叔丁酯(制备48，2.4g，8.33mmol)在甲苯(30mL)和t-BuOH(15mL)中的溶液中，并将反应物在室温下在N₂下搅拌16小时。将混合物真空浓缩，并且粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用DCM：MeOH(97：3)洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(2.6g，73.4％)。LCMS m/z＝426.1[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.604min。

制备48：[7-(1-羟基丙-2-炔-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基]氨基甲酸叔丁酯

将乙炔基溴化镁(42mL，0.5M的THF溶液，21mmol)缓慢加入到冰冷的(7-甲酰基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(制备49，2.5g，9.54mmol)的THF(40mL)溶液中，将反应物在室温下搅拌2小时。将饱和NH₄Cl水溶液缓慢加入到反应物中，并将混合物用EtOAc(50mL×2)萃取，将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用石油醚：EtOAc(50:50)洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(2.4g，87％)。LCMSm/z＝233.1[M-(C₃HO)]⁺

制备49：(7-甲酰基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯

先将(Boc)₂O(12g，56mmol)，然后将DMAP(4.5g，37mmol)缓慢加入到4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-甲醛(WO2007064931，6.0g，37mmol)在DCM(100mL)中的溶液中，并将反应物搅拌30分钟。将反应物用水稀释，并将混合物用DCM(100mL×2)萃取，合并有机萃取物，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：EtOAc(77:23)洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(2.5g，25％)。LCMS m/z＝285.1[MNa]⁺

制备50：N'-(7-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-N,N-二甲基亚胺甲酰胺

将7-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(40g，0.19mmol)和N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(2L)的混合物加热至90℃持续2小时。将冷却的混合物真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用DCM：EtOAc(91：9)洗脱，得到标题化合物(100g，69％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):3.19(s,3H),3.25(s,3H),6.90(m,2H),8.16(s,1H),8.95(s,1H).LCMS m/z＝268.0[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝0.934min。

制备51：1-[-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙-1-酮

向戊-1-炔-3-酮(1.3g，15.84mmol)的MeOH/H₂O(30mL/5mL)溶液中加入1-叠氮基-2,4-二氟苯(2.95g，19mmol)，L-抗坏血酸钠(1.57g，7.92mmol)和CuSO₄(1.27g，7.92mmol)并将反应在室温下搅拌12小时。减压除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，用EtOAc：石油醚(0：100至20：80)洗脱，得到标题化合物，为灰白色固体(2.5g，67％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):1.27(t,3H),3.22(q,2H),7.12(m,2H),7.94(m,1H),8.53(s,1H).LCMS m/z＝238.1[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.605min。

制备52：1-[-(2,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙-1-酮

按照制备51中所述的方法，从戊-1-炔-3-酮和2-叠氮基-1,4-二氟苯中得到标题化合物，为灰白色固体(1.75g，61％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):1.25(t,3H),3.21(q,2H),7.20(m,1H),723-7.33(m,1H),7.79(m,1H),8.64(s,1H).LCMS m/z＝238.1[MH]⁺

制备53：1-[-(3,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙-1-酮

按照制备51中所述的方法，从戊-1-炔-3-酮和4-叠氮基-1,2-二氟苯制备得到标题化合物，为灰白色固体(1.70g，59％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):1.27(t,3H),3.22(q,2H),7.26-7.39(m,1H),7.51(m,1H),7.70(m,1H),8.45(s,1H).LCMS m/z＝238.1[MH]⁺

制备54：1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙-1-酮

在室温下向1-[5-氨基-1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙-1-酮(制备56，5g，21.44mmol)在THF(150mL)中的混合物中滴加亚硝酸叔丁酯(4.1g，39.8mmol)并将反应物在65℃下搅拌4小时。将溶剂减压蒸发，通过硅胶柱色谱纯化，用石油醚：EtOAc(10：1至1：1)洗脱，得到标题化合物，为黄色油状物(2g，42.75％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d₄):1.08(t,3H),2.82(q,2H),7.24-7.31(m,2H),7.36-7.40(m,1H),7.71(m,1H),8.09(s,1H),8.57(d,1H).LCMS m/z＝219.1[MH]⁺

制备55：1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙-1-酮

按照制备54中描述的方法从1-[5-氨基-1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙-1-酮(制备57)得到标题化合物(2g，42％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d₄):1.19(t,3H),2.92(q,2H),7.17(m,1H),7.27(m,1H),7.84(m,1H),8.22(s,1H),8.65(d,1H).LCMS m/z＝237.1[MH]⁺

制备56：1-[5-氨基-1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙-1-酮

(E)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代戊腈(6g，39.17mmol)、Et₃N(11.89g，117.5mmol)和(2-氟苯基)肼盐酸盐(9.55g，58.75mmol)在EtOH(200mL)中的脱气混合物在N₂气氛下在回流下搅拌2小时。将冷却的反应物真空浓缩，残余物用硅胶柱色谱纯化，用石油醚：EtOAc(10：1至1：1)洗脱，得到标题化合物，为黄色油状物(5g，54.74％)。LCMS m/z＝234.1[MH]⁺

制备57：1-[5-氨基-1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙-1-酮

按照制备56中所述的方法，由(E)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代戊腈和(2,4-二氟苯基)肼盐酸盐得到标题化合物，为黄色油状物(5g，51％)。LCMS m/z＝252.1[MH]⁺

制备58：1-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.9g，3.78mmol)的DMF(30mL)溶液中加入4-(1-氯丙基)-1-(2-氟苯基)-1H-吡唑(制备61，1.08g，4.54mmol)和Cs₂CO₃(6.16g，18.9mmol)，并将反应物在90℃和N₂下搅拌18小时。将冷却的混合物用水稀释，然后用EtOAc萃取，将有机层用盐水洗涤，干燥并蒸发。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，用DCM：MeOH(95：5)洗脱，得到标题化合物(0.5g，28％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):0.75(t,3H),2.18-2.29(m,1H),2.33-2.39(m,1H),5.84(m,1H),7.32(m,1H),7.40-7.48(m,2H),7.74(m,2H),8.19(s,1H),8.26(s,1H).LCMS m/z＝463.9[MH]⁺

制备59：1-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向搅拌的3-碘-1-(戊-1-炔-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(制备60，7g，21.40mmol)在甲苯(25mL)中的溶液中加入1-叠氮基-2-氟苯(5.87g，42.80mmol)，DIPEA(13.8g，107.0mmol)和t-BuOH(100mL)。加入CuI(2.45g，12.84mmol)并将反应物在室温下在N₂下搅拌16小时。将混合物减压浓缩，通过硅胶柱色谱纯化，用DCM：MeOH(97：3)洗脱，得到标题化合物(5.4g，54％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):0.79(t,3H),2.46(m,2H),6.03(m,1H),7.41(m,1H),7.45-7.60(m,2H),7.83(m,1H),8.28(s,1H),8.61(s,1H).LCMS m/z＝464.9[MH]⁺

制备60：3-碘-1-(戊-1-炔-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

将3-溴戊-1-炔(8.6g，58.5mmol)加入到3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10.2g，39mmol)和Cs₂CO₃(38g，117mmol)在DMF(200mL)中的溶液中，并将反应物在室温下搅拌16小时。将混合物真空浓缩，将残余物用水稀释并用EtOAc(300mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(300ml×2)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并浓缩，得到标题化合物，为棕色固体(7g，55％)。LCMS m/z＝327.9[MH]⁺

制备61：4-(1-氯丙基)-1-(2-氟苯基)-1H-吡唑

向1-(1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)丙-1-醇(制备62，1g，4.54mmol)的DCM(30mL)溶液中滴加SOCl₂(5mL)并将反应物在室温下搅拌反应2小时。减压蒸发混合物，得到标题化合物(1.08g，定量)。

制备62：1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙-1-醇

在0℃下，向1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-甲醛(3g，15.8mmol)的THF(50mL)溶液中滴加EtMgBr(31.6mL，31.6mmol)，将反应物在室温下搅拌2小时。加入水以淬灭反应，并将混合物用EtOAc萃取。收集有机层，用盐水洗涤，干燥并蒸发。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，用DCM：MeOH(95：5)洗脱，得到标题化合物(3g，86％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):1.00(t,3H),1.74(br s,1H),1.88(m,2H),4.71(t,1H),7.19-7.27(m,3H),7.71(s,1H),7.88(m,1H),7.96(d,1H).LCMS m/z＝221.2[MH]⁺

制备63：5-(4-氯苯基)-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-醇

将1-氨基-4-(4-氯苯基)-2-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}-1H-咪唑-5-甲酸乙酯(制备64，72mg，0.16mmol)、甲酰胺(1.63mL，0.6M)和甲脒乙酸盐(42.5mg，0.408mmol)的混合物脱气2分钟，然后在微波辐射下于130℃加热2小时。加入另外的甲脒乙酸盐(50mg，0.48mmol)并将反应物加热至150℃再保持2小时。将冷却的混合物过滤并干燥，得到标题化合物，为褐色固体(42mg，62％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):4.53(s,2H),7.40-7.63(m,5H),7.80(m,1H),7.98(s,1H),8.38(d,2H),8.50(s,1H),11.95(br s,1H).LCMS m/z＝422.2[MH]⁺

制备64：1-氨基-4-(4-氯苯基)-2-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}-1H-咪唑-5-甲酸乙酯

将LiHMDS(1.0M的THF溶液，0.181mL，0.181mmol)滴加到冰冷的4-(4-氯苯基)-2-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}-1H-咪唑-5-甲酸乙酯(制备65，70mg，0.16mmol)的DMF(1.1mL)溶液中。分两部分加入邻-(二苯基氧膦基)-羟胺(53.7mg，0.23mmol)，同时保持内部温度在0℃。将得到的白色悬浮液用DMF(5mL)稀释，并将溶液在室温下搅拌18小时。将反应物用水稀释并用DCM(4×50mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用EtOAc：庚烷(0：100至100：0)洗脱，得到标题化合物(35mg，50％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):1.26(t,3H),4.32(q,2H),4.50(s,2H),6.18(brs,2H),7.25-8.23(m,9H).LCMS m/z＝441.2[MH]⁺

制备65：4-(4-氯苯基)-2-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}-1H-咪唑-5-甲酸乙酯

将3-(4-氯苯基)-2-{2-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙酰氨基}-3-氧代丙酸乙酯(制备66，281mg，0.632mmol)和乙酸铵(300mg，3.89mmol)在乙酸(3.16mL)中的混合物在微波辐射下，在150℃加热2小时。将冷却的混合物减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱纯化，用EtOAc：庚烷(0：100至100：0)洗脱，得到标题化合物(72mg，27％)。LCMS m/z＝426.3[MH]⁺

制备66：3-(4-氯苯基)-2-{2-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙酰氨基}-3-氧代丙酸乙酯

将2-氨基-3-(4-氯苯基)-3-氧代丙酸乙酯(制备67，246mg，1.02mmol)、2-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙酸(150mg，0.678mmol)、NMM(0.261mL，2.37mmol)、HATU(387mg，1.02mmol)在DMF(4.52mL)中的混合物在室温下搅拌18小时。将混合物用NH₄Cl稀释，用3×100mL EtOAc萃取，并将合并的有机溶液用饱和LiCl溶液洗涤，干燥(Na₂SO₄)并过滤。减压蒸发滤液，通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用MeOH：DCM(0：100至20:80)洗脱，得到标题化合物(311mg，x％)。LCMS m/z＝445.3[MH]⁺

制备67：2-氨基-3-(4-氯苯基)-3-氧代丙酸乙酯

在-78℃下，通过套管在30分钟内将2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸乙酯(5g，18.7mmol)的THF(35mL)溶液加入到叔丁醇钾(15mL，在THF中)的溶液中，并将溶液搅拌35分钟。逐滴加入4-氯苯甲酰氯(2.57mL，20mmol)的THF(10mL)溶液，将反应物在-78℃下搅拌25分钟，然后将其温热至-50℃，并搅拌40分钟。用在1mL水中的浓HCl溶液(2.15mL，25.2mol)淬灭反应，并将混合物温热至室温。过滤反应浆液以除去无机盐，蒸发滤液并共沸以除去残留的水。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，用MeOH：DCM(0：100至10:90)洗脱，得到标题化合物，为白色固体(1.01g，22％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):1.07(t,3H),4.15(q,2H),6.28(s,1H),7.72 9d,2H),8.20(d,2H),9.05(br s,2H).LCMS m/z＝242.3[MH]⁺

实施例

实施例1至19

使用先前描述的HPLC方法通过手性分离相应的外消旋原料获得以下化合物。

实施例20和实施例21：4-氨基-7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈，对映体1和2

向6-溴-7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(实施例47，250mg，0.442mmol)、Pd₂(dba)₃(202.4mg，0.22mmol)和dppf(245mg，0.44mmol))在NMP(10mL)中的混合物加入Zn(CN)₂(208mg，1.768mmol)并在N₂下在MW照射下在160℃下将反应物搅拌3小时。将冷却的混合物过滤，用EtOAc洗涤，将滤液倒入水中并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压蒸发。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，用EtOAc：石油醚(30：70至100：0)洗脱，得到黄色固体(75mg，33.18％)。通过HPLC方法D5进一步纯化该固体，得到实施例20，对映体1。¹HNMR(400MHz,MeOD-d₄):1.91(d,3H),5.14(q,1H),7.10(m,1H),7.17(m,1H),7.72(m,2H),8.05(s,1H),8.09(s,1H),9.10(s,2H).LCMS m/z＝512.0[MH]⁺；RT[HPLC方法D2]＝9.308min。

进一步洗脱得到实施例21，对映体2。¹HNMR(400MHz,MeOD-d₄):1.91(d,3H),5.14(q,1H),7.10(m,1H),7.17(m,1H),7.72(m,2H),8.05(s,1H),8.09(s,1H),9.10(s,2H).LCMSm/z＝512.0[MH]⁺；RT[HPLC方法D2]＝12.255min。

实施例22至31

向适当的溴化物原料(1当量)的DMF(10mL/mmol SM)溶液中缓慢加入Zn(CN)₂(1.5-3当量)、dppf(0.1-0.2当量)和Pd₂(dba)₃(0.1当量)，并在微波辐射下将反应物在140-150℃下搅拌1.5-2小时。过滤反应物，将残余物在EtOAc和H₂O之间分配，分离各层，水相用EtOAc萃取，将合并的有机物干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，用EtOAc：石油醚以合适的梯度洗脱，得到所需化合物。

^a使用DCM：MeOH作为柱溶剂，^b使用NMP作为反应溶剂，^c使用Pd(dppf)Cl₂代替Pd₂(dba)₃。

实施例32：4-氨基-7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-F][1,2,4]三嗪-6-甲腈

向在微波小瓶中的6-溴-7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(实施例46，270mg，0.49mmol)的NMP(15mL)溶液中加入Zn(CN)₂(173mg，1.47mmol)、dppf(56mg，0.1mmol)和Pd₂(dba)₃(46mg，0.05mmol)。将密封的小瓶在微波中在140℃下照射2小时。将冷却的混合物用水(10mL)稀释，并用DCM(15mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水(60mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压蒸发。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用EtOAc：石油醚(10:90至90:10)洗脱，得到标题化合物，为白色固体(170mg，收率70％)。LCMS m/z＝494.1[MH]⁺

实施例33：4-氨基-7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-F][1,2,4]三嗪-6-甲腈

按照与实施例32中所述类似的方法，由6-溴-7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(实施例48)制备标题化合物，为黄色固体(50mg，收率66％)。LCMS m/z＝508.1[MH]⁺

实施例34：4-氨基-7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈

向6-溴-7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(实施例49，250mg，0.43mmol)、Pd₂(dba)₃(197mg，0.215mmol)和dppf(238mg，0.43mmol)在NMP(10mL)中的混合物加入Zn(CN)₂(202mg，1.72mmol)，并在N₂下在微波辐射下在160℃下将反应物搅拌3小时。将冷却的混合物过滤，用EtOAc洗涤，将滤液倒入水中并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机萃取液干燥(Na₂SO₄)，过滤并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，用EtOAc：石油醚(30:70至0:100)洗脱，得到所需化合物，为黄色固体(90mg，39.83％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d₄):1.02(t,3H),2.34-2.41(m,1H),2.43-2.52(m,1H),4.90(m,1H),7.10(m,1H),7.21(m,1H),7.70-7.77(m,2H),8.07(d,2H),9.12(s,2H).LCMS m/z＝526.1[MH]⁺

实施例35：4-氨基-7-{[3-(2-氟苯基)-1,2-噁唑-5-基]甲基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-F][1,2,4]三嗪-6-甲腈

向6-溴-7-{[3-(2-氟苯基)-1,2-噁唑-5-基]甲基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(实施例51，120mg，0.225mmol)的DMF(5mL)溶液中缓慢加入CuCN(20mg，0.45mmol)并在微波辐射下，在160℃下搅拌反应物4小时。将EtOAc(100mL)加入到冷却的混合物中，并用NH₃水溶液(50mL)洗涤溶液、干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，用DCM：MeOH(91：9)洗脱，得到标题化合物，为白色固体(11.2mg，10％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):4.79(s,2H),6.82(s,1H),7.32-7.42(m,2H),7.54(m,1H),7.84(m,1H),8.20(s,1H),9.20(s,2H).LCMS m/z＝481.0[MH]⁺

实施例36：4-氨基-7-{1-[3-(2-氟苯基)-1,2-噁唑-5-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈

向6-溴-7-{1-[3-(2-氟苯基)-1,2-噁唑-5-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(实施例52，1.0g，1.83mmol)的NMP(15mL)溶液中加入Zn(CN)₂(0.32g，2.74mmol)和Pd(PPh₃)₄(0.2g，0.183mmol)并在微波辐射下在160℃下搅拌反应2小时。过滤冷却的混合物，加入水和EtOAc(100mL)，分离各层，有机相用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：EtOAc(34:66)洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(135mg，15％)。LCMS m/z＝495.0[MH]⁺

实施例37至52

在0℃下，向适当的三嗪-4-胺原料(1当量)在DCM中的溶液中滴加NBS(1.05-2.0当量)，并将混合物温热至室温且搅拌直至所有原料均已消耗。将混合物用Na₂S₂O₃水溶液淬灭，并用EtOAc萃取。将有机层用盐水(2×)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物，用合适的溶剂洗脱，得到标题化合物。

^a使用DMF作为反应溶剂，^b使用DMF/DCM作为反应溶剂，^c使用THF作为反应溶剂

实施例53至68

^a通过制备型HPLC使用Gemini-C18150*21.2mm，5μm柱进一步纯化；用MeCN：H₂O(0.1TFA％)洗脱

实施例69：7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

向5-溴-7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(制备2，260mg，0.65mmol)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二杂氧戊硼烷-2-基)-2-(三氟甲基)嘧啶(266mg，0.97mmol)在1,4-二氧六环(9mL)和H₂O(3mL)中的的混合物加入PdCl₂(dppf)(48mg，0.065mmol)和Na₂CO₃(138mg，1.3mmol)，并且将反应物在N₂下在95℃下搅拌2小时。将冷却的混合物减压浓缩，并将残余物在H₂O(30mL)和EtOAc(30mL)之间分配。分离各层，水相用EtOAc(30mL×3)萃取，将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，过滤并将滤液真空浓缩。通过HPLC纯化残余物，用MeCN：H₂O(0.1％TFA)(45:55至55:45)洗脱，得到标题化合物，为白色固体(130mg，42％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):1.77(d,3H),4.97(q,1H),6.90(s,1H),7.15-7.25(m,2H),7.48-7.62(m,4H),8.05(s,1H),8.45(s,1H),9.05(s,2H).LCMSm/z＝470.2[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.658min。

实施例70至79按照与实施例69中所述类似的方法，由适当的溴化物原料和硼酸酯制备以下实施例，并使用硅胶柱色谱法纯化，用合适的溶剂洗脱。

^a用硅胶柱色谱纯化，用石油醚：EtOAc洗脱，^b将DMF用作柱溶剂，而不是二氧六环，^cK₂CO₃用作碱

实施例80：7-{[3-(2-氟苯基)-1,2-噁唑-5-基]甲基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

向5-溴-7-{[3-(2-氟苯基)-1,2-噁唑-5-基]甲基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(制备14，250mg，0.644mmol)在1,4-二氧六环(10mL)中的溶液中缓慢加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二杂氧戊硼烷-2-基)-2-(三氟甲基)嘧啶(1.3g，4.86mmol)、Pd(dppf)Cl₂(0.26g，0.324mmol)和Na₂CO₃(0.69g，6.48mmol)的H₂O(2mL)溶液，在N₂下在100℃将反应物搅拌16小时。将冷却的混合物真空浓缩，粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用DCM：MeOH(91：9)洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(150mg，51％)。LCMS m/z＝456.0[MH]⁺

实施例81：7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

向5-溴-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(制备1，500mg，1.27mmol)的1,4-二氧六环(10mL)的溶液中缓慢加入2-(三氟甲基)嘧啶-5-基硼酸(867mg，4.52mmol)、K₂CO₃(356mg，2.58mmol)在H₂O(5mL)和Pd(dppf)Cl₂(105mg，0.129mmol)中的溶液，并在N₂下且在105℃下将反应物搅拌2小时。将冷却的混合物真空浓缩，粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用DCM：MeOH(91：9)洗脱，得到标题化合物，为黄色固体(260mg，44％)。LCMS m/z＝456.1[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.717min。

实施例82：7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

按照实施例80中所述的方法，由5-溴-7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(制备5)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二杂氧戊硼烷-2-基)-2-(三氟甲基)嘧啶得到标题化合物，为白色固体(7.5g，72％)，¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):0.93(t,3H),2.20(m,2H),4.82(m,1H),6.97(s,1H),7.15-7.30(br s,2H),7.44(m,1H),7.55(m,2H),7.82(m,1H),8.04(s,1H),8.50(s,1H),9.05(s,2H).LCMS m/z＝484.1[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.743min。

实施例83：7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-(4-甲氧基嘧啶-5-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

按照实施例81中描述的方法，由5-溴-7-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(制备5)和4-甲氧基嘧啶-5-基硼酸得到标题化合物，为黄色固体(160mg，50％)。¹HNMR(400MHz,MeOD-d₄):1.05(t,3H),2.35(m,2H),4.08(s,3H),4.91(q,1H),7.00(s,1H),7.38-7.45(m,2H),7.60(m,1H),7.82(m,1H),8.09(s,1H),8.40(d,1H),8.58(s,1H),8.87(s,1H).RT[HPLC方法A]＝1.288min。

实施例84：7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

在N₂下，向5-溴-7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(制备13，250mg，0.58mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二杂氧戊硼烷-2-基)-2-(三氟甲基)嘧啶(238mg，0.87mmol)和Na₂CO₃(123mg，1.16mmol)在DMF：H₂O(12mL：3mL)中的悬浮液中加入Pd(PPh₃)₄(70mg，0.06mmol)，将反应物在100℃下搅拌12小时。将冷却的混合物倒入冰水(10mL)中并用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×10mL)洗涤，干燥并减压蒸发。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用EtOAc：石油醚(0:100至80:20)洗脱，得到标题化合物，为灰白色固体(100mg，35％)。LCMS m/z＝502.2[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.718min。

实施例85：7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

按照实施例84所述的方法，不同的是，用二氧六环/H₂O作为反应溶剂，由5-溴-7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(制备11)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二杂氧戊硼烷-2-基)-2(三氟甲基)嘧啶得到标题化合物，为浅黄色固体(0.5g，43％)。LCMS m/z＝487.1[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.867min。

实施例86：7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺

按照制备84中所述的方法，不同的是使用二氧六环/H₂O作为反应溶剂，由5-溴-7-{1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(制备13)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二杂氧戊硼烷-2-基)-2-(三氟甲基)嘧啶得到标题化合物，为浅黄色固体(1.5g，5％)。LCMS m/z＝501.1[MH]⁺；RT[HPLC方法A]＝1.912min方法。

实施例87和88：1-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺，对映体1和2

1-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(实施例91，0.17g)使用HPLC方法E5纯化，得到实施例87，对映体1(52.7mg)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):0.81(t,3H),2.24-2.30(m,1H),2.41-2.50(m,1H),6.01(m,1H),7.31-7.43(m,5H),7.73(m,1H),7.89(s,1H),8.28(s,1H),8.35(s,1H),9.29(s,2H).LCMS m/z＝484.2[MH]⁺；RT[HPLC方法C14]＝4.799min。

进一步洗脱，得到实施例88，对映体2(47.6mg)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):0.81(t,3H),2.24-2.30(m,1H),2.41-2.50(m,1H),6.01(m,1H),7.31-7.43(m,5H),7.73(m,1H),7.89(s,1H),8.28(s,1H),8.35(s,1H),9.29(s,2H).LCMS m/z＝484.2[MH]⁺；RT[HPLC方法C14]＝6.068min。

实施例89和90：1-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺，对映体1和2

使用HPLC方法C23A纯化1-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(实施例92,1.6g)，得到实施例89，对映体1(504mg)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):0.85(t,3H),2.43-2.50(m,2H),6.19(m,1H),7.35-7.45(m,3H),7.55-7.65(m,2H),7.80(m,1H),8.36(s,1H),8.66(s,1H),9.28(s,2H).LCMSm/z＝485.1[MH]⁺；RT[HPLC方法C5]＝2.437min。

进一步洗脱得到实施例90，对映体2(508mg)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):0.85(t,3H),2.43-2.50(m,2H),6.19(m,1H),7.35-7.45(m,3H),7.55-7.65(m,2H),7.80(m,1H),8.36(s,1H),8.66(s,1H),9.28(s,2H).LCMS m/z＝485.1[MH]⁺；RT[HPLC方法C5]＝3.489min。

实施例91：1-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4]-d]嘧啶-4-胺

向1-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(制备58，0.3g，0.45mmol)的DMF(25mL)溶液中加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二杂氧戊硼烷-2-基)-2-(三氟甲基)嘧啶(355mg，0.90mmol)和Na₂CO₃溶液(7mL)。加入Pd(PPh₃)₄(52mg，0.045mmol)并将反应物在100℃下搅拌18小时。将冷却的混合物在EtOAc和水之间分配，分离各层。用盐水洗涤有机层，干燥并真空蒸发。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，用DCM：MeOH(95：5)洗脱，得到标题化合物(170mg，78％)。LCMS m/z＝484.1[MH]⁺

实施例92：1-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

在N₂下向搅拌的1-{1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(制备59，3g，6.46mmol)在二氧六环/H₂O(100mL/25mL)中的溶液中加入2-(三氟甲基)嘧啶-5-基硼酸(1.86g，9.69mmol)、K₂CO₃(2.67g，19.38mmol)和Pd(dppf)Cl₂(236mg，0.323mmol)，并将反应物在90℃下搅拌2小时。过滤冷却的混合物，减压浓缩滤液，残余物用水稀释，用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机萃取物真空浓缩，并通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物，为黄色固体(1.6g，51％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):0.85(t,3H),2.44(m,2H),6.18(m,1H),7.40(m,3H),7.59(m,2H),7.77(m,1H),8.35(s,1H),8.659s,1H),9.27(s,2H).LCMS m/z＝484.7[MH]⁺

实施例93：5-(4-氯苯基)-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺三氟乙酸盐

在0℃下向***(62.2mg，0.90mmol)的MeCN(5mL)溶液中加入POCl₃(0.033mL，0.36mmol)。在20分钟内逐滴加入Et₃N(0.126mL，0.90mmol)，将溶液温热至室温并搅拌30分钟。5-(4-氯苯基)-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-醇(制备63，38mg，0.09mmol)分批加入，将溶液用DCM(2mL)稀释，然后在70℃下搅拌18小时。加入0.5M NH₃的二氧六环溶液(7mL)和NH₄OH(1mL)并将反应物在微波辐射下在120℃下搅拌1小时。冷却混合物，滤出所得沉淀，减压蒸发滤液。残余物通过使用HPLC方法G1纯化，得到标题化合物，为固体(12.1mg，32％)。LCMS m/z＝421.2[MH]⁺

通过类似于先前描述的路线制备以下实施例。

实施例94：1-[1-(1-苯基-1H-1,2,3-***-4-基)丙基]-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺，对映体1；使用HPLC方法C30分离；¹HNMR(400MHz,CDCl₃):0.98(t,3H),2.50-2.63(m,2H),5.82(br s,2H),6.33(m,1H),7.45-7.52(m,3H),7.69(m,2H),8.08(s,1H),8.50(s,1H),9.28(s,2H).LCMS m/z＝467.1[MH]⁺；RT[HPLC方法C10]＝3.125min。

实施例95：1-[1-(1-苯基-1H-1,2,3-***-4-基)丙基]-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺，对映体2；使用HPLC方法C30分离；¹HNMR(400MHz,MeOD-d₄):0.95(t,3H),2.51-2.67(m,2H),6.27(m,1H),7.48(m,2H),7.52(m,3H),8.39(s,1H),8.66(s,1H),9.31(s,2H).LCMS m/z＝467.2[MH]⁺；RT[HPLC方法C10]＝2.244min。

实施例96：4-氨基-5-(2-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-7-(1-(1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)乙基)吡咯并[1,2-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈，对映体1；使用SFC方法F1分离；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):1.82(d,3H),5.02(q,1H),7.07(t,1H),7.31-7.48(m,3H),7.73-7.77(m,2H),8.15-8.16(m,2H),9.05(s,2H)；LCMS m/z＝476.2[MH]⁺；RT[SFC方法F2]＝6.049min。

实施例97：4-氨基-5-(2-(二氟甲基)嘧啶-5-基)-7-(1-(1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基)乙基)吡咯并[1,2-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈，对映体2；使用SFC方法F1分离；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):1.82(d,3H),5.02(q,1H),7.07(t,1H),7.31-7.48(m,3H),7.73-7.77(m,2H),8.15-8.16(m,2H),9.05(s,2H)；LCMS m/z＝476.2[MH]⁺；RT[SFC方法F2]＝6.599min。

实施例98：7-(1-(1-(2,5-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基)乙基)-5-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)吡咯并[1,2-f][1,2,4]三嗪-4-胺，对映体1；使用HPLC方法C24A分离；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):1.55(d,3H),4.76(q,1H),6.68(s,1H),7.04(br s,2H),7.26(m,1H),7.42(m,1H),7.59(m,1H),7.83(s,1H),8.27(d,1H),8.83(s,2H)；LCMS m/z＝488.0[MH]⁺；RT[HPLC方法C1]＝4.359min。

实施例99：1-(1-(1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基)丙基)-3-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺，对映体1；使用HPLC方法B2分离；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):0.85(t,3H),2.45(m,2H),6.18(m,1H),7.34(m,1H),7.48(br s,2H),7.68(m,1H),7.87(m,1H),8.36(s,1H),8.65(s,1H),9.28(s,2H)；LCMS m/z＝503.2[MH]⁺；RT[HPLC方法C10]＝3.734min。

用于CF支气管上皮细胞CFTR增强的尤斯室(Ussing Chamber)电生理学分析

根据公开的方法扩增和培养原代囊性纤维化人支气管上皮(CF hBE)细胞(Neuberger et al.,Ch.4of Cystic Fibrosis,Methods in Molecular Biologyvol.741,pp.39-54(2011))。将Snapwell过滤器(Corning Costar,cat.no.3801)上的分化良好的细胞(在空气/液体界面处>30天)安置在Ussing室(Physiologic Instruments,Inc.,San Diego,CA)中。在27℃下测定F508del/F508del培养物，并在35℃下测定G551D/F508del细胞。HEPES缓冲生理盐水(组合物(以mM计)：137NaCl，4KCl，1MgCl2，1.8CaCl2，10HEPES Na)用于顶端和基底外侧室。用空气鼓泡室以促进混合，并将电压钳位至零。依次加入阿米洛利(30μM)、毛喉素(10μM)、测试化合物(4个递增浓度)和CFTRinh-172(20μM)，加入之间间隔20-25分钟。使用LabScribe2获取并分析短路电流。测试化合物响应相对于对于DMSO的响应(0％)和阳性对照增强剂(100％)的最大响应进行调节。

F508del CFTR增强的FRT离子通量测定

稳定表达重组F508del V470 CFTR和卤化物敏感性黄色荧光蛋白的Fischer大鼠甲状腺(FRT)细胞系(Pedemonte et al.,J.Clin.Invest.115(9)2564-71(2005))以在50uL/孔的培养基中按25000个细胞/孔接种到黑壁、透明底部组织培养处理的384孔板中(Corning,cat.no.3712)。一天后，将细胞在27℃/5％CO₂下预温育16-24小时。然后用dPBS洗涤细胞，并通过加入20uL化合物稀释缓冲液(含有毛喉素和测试化合物的dPBS)用毛喉素(20μM)和测试化合物处理30分钟。将平板加载到FLIPR384荧光成像板读数器(MolecularDevices)中。在初始荧光读数后，加入碘化物缓冲液(25μL)(组合物(以mM计)：137NaI,1.5K₂PO₄,8.1NaH₂PO₄,2.7KCl,0.5MgCl₂,1CaCl₂)并在约21秒后进行第二次荧光读数。数据处理涉及第二次荧光读数除以初始荧光读数，然后相对于针对DMSO(0％)和阳性对照增强剂(100％)的响应调节所得标准化终点荧光。

N.D.指没有确定。

Claims

1.一种式I化合物

或其药学上可接受的盐；其中，

Z是苯基，其任选被1-3个卤素取代；

R^1a和R^1b各自独立地选自：-H，-OH，卤素，

n每次出现时独立地为0、1或2。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^1a和R^1b中的一者是C₁-C₆烷基，另一者是-H。

3.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y-Z部分选自：

4.根据权利要求3的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z是任选被一个或两个氟或氯取代的苯基。

5.一种式II化合物

或其药学上可接受的盐；其中，

R^1a和R^1b各自独立地选自：-H，-OH，卤素，

R²选自-H、-CN、卤素和C₁-C₃烷基；

n每次出现时独立地为0、1或2。

6.根据权利要求5所述的化合物，其中W是嘧啶基或吡嗪基，并且其中所述嘧啶基或吡嗪基任选被1个、2个或3个R³取代。

7.根据权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y-Z部分选自：

8.一种式III化合物

或其药学上可接受的盐；其中，

R^1a和R^1b各自独立地选自：-H，-OH，卤素，

n每次出现时独立地为0、1或2。

9.根据权利要求8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中W是苯基，其任选地被1个或2个卤素取代。

10.根据权利要求9所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是5-(4-氯苯基)-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]甲基}咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。

11.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

1-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

1-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；和

1-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺。

12.根据权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

4-氨基-7-{(1R)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-5-[2-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

4-氨基-5-[2-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-7-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；

7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；

7-{(1S)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和

7-{(1S)-1-[1-(2,4-二氟苯基)-1H-1,2,3-***-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。

13.根据权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

4-氨基-5-[2-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈；和

4-氨基-5-[2-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-7-{(1R)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈。

14.化合物1-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-3-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺或其药学上可接受的盐。

15.化合物4-氨基-5-[2-(二氟甲基)嘧啶-5-基]-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]甲基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

16.化合物4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]丙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

17.化合物4-氨基-7-{(1S)-1-[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]乙基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

18.化合物4-氨基-7-{[1-(2-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]甲基}-5-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-甲腈或其药学上可接受的盐。

19.一种治疗需要治疗的患者的囊性纤维化、哮喘、支气管扩张、慢性阻塞性肺病(COPD)、便秘、糖尿病、干眼病、胰腺炎、鼻窦炎或干燥综合征的方法，该方法包括向所述需要治疗的患者施用治疗有效量的根据权利要求1-18中任一项所述的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。

20.一种治疗需要治疗的患者的囊性纤维化的方法，该方法包括向所述需要治疗的患者施用治疗有效量的根据权利要求1-18中任一项所述的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。

21.根据权利要求1-18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗囊性纤维化。

22.一种药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种根据权利要求1-18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。

23.根据权利要求22所述的药物组合物，其还包含一种或多种另外的治疗剂。

24.根据权利要求23所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂独立地选自CFTR增效剂、CFTR校正剂、上皮钠通道(ENaC)抑制剂、CFTR放大器、CFTR稳定剂、通读剂、寡核苷酸贴剂、自噬诱导剂和蛋白质稳定调节剂。

25.根据权利要求24的药物组合物，其中所述CFTR增效剂在每次出现时选自VX-770(Ivacaftor)、GLPG-1837、GLPG-2451、QBW-251、FDL-176、FDL-129、CTP-656和PTI-P271。

26.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述CFTR校正剂在每次出现时选自VX-809(lumacaftor)、VX-661(tezacaftor)、VX-983、VX-152、VX-440、VX-659、GLPG-2737、P247-A、GLPG-2222、GLPG-2665、GLPG-2851、FDL-169和PTI-C1811。

27.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述上皮钠通道(ENaC)抑制剂在每次出现时选自SPX-101、QBW-276和VX-371。

28.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述CFTR放大器在每次出现时选自PTI-428和PTI-130。

29.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述CFTR稳定剂是N-91115(Cavosonstat)。

30.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述通读剂是阿他卢仑。

31.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述寡核苷酸贴剂是QR-010。

32.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述自噬诱导剂在每次出现时选自半胱胺与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的组合和CX-4945。

33.一种用于治疗需要治疗的患者的囊性纤维化的方法，该方法包括将根据权利要求22-32中任一项所述的药物组合物施用给所述需要治疗的患者。

34.根据权利要求22-32中任一项所述的药物组合物，其用于治疗囊性纤维化。