CN110274941A - 利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法 - Google Patents
利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110274941A CN110274941A CN201910647121.8A CN201910647121A CN110274941A CN 110274941 A CN110274941 A CN 110274941A CN 201910647121 A CN201910647121 A CN 201910647121A CN 110274941 A CN110274941 A CN 110274941A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- probe
- electrode
- sequence
- dna
- microrna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 108091027757 Deoxyribozyme Proteins 0.000 title claims abstract description 15
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 94
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 claims abstract description 34
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims abstract description 30
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 claims abstract description 12
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 48
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 20
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 19
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 17
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 15
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 14
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 14
- 238000000835 electrochemical detection Methods 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 12
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 8
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 8
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 claims description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 6
- 241000252506 Characiformes Species 0.000 claims description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 238000004365 square wave voltammetry Methods 0.000 claims description 4
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 claims description 3
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052593 corundum Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 3
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 claims description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000012458 free base Substances 0.000 claims description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000005498 polishing Methods 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 229910001845 yogo sapphire Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000007599 discharging Methods 0.000 claims description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 abstract description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 229910021607 Silver chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M silver monochloride Chemical compound [Cl-].[Ag+] HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- GTKRFUAGOKINCA-UHFFFAOYSA-M chlorosilver;silver Chemical compound [Ag].[Ag]Cl GTKRFUAGOKINCA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
- C12Q1/6825—Nucleic acid detection involving sensors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
- G01N27/3275—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
- G01N27/3276—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction being a hybridisation with immobilised receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
- G01N27/3275—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
- G01N27/3277—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction being a redox reaction, e.g. detection by cyclic voltammetry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57496—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving intracellular compounds
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法,利用了DNA与RNA碱基互补配对原则,首先,设计了具有发夹结构的功能探针,当目标物(待测样品microRNA)存在时,特异性核酸内切酶(DSN酶)切割DNA‑RNA杂交体的DNA部分得到8‑17DNAzyme。然后,8‑17DNAzyme能特异性识别固定在电极表面的H2序列中腺嘌呤核糖核苷酸rA位点进行切割。最后,电极表面被DNAzyme特异性切割后与电极表面相连的DNA序列依次与序列Link1、Link2、H3和H4自组装形成电化学生物传感器用于目标检测。所建立的方法灵敏度高,可用于复杂体系的microRNA的直接检测。
Description
技术领域
本发明涉及电化学检测技术领域,具体提供了一种利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法。
背景技术
microRNA是一种小的非蛋白编码RNA分子,通过与靶mRNA中的合成序列结合,从而抑制转录后基因表达。microRNA在许多生物学过程中发挥着重要的作用,并与各种疾病,尤其是癌症相关。microRNA被认为是癌症诊断、预后和治疗监测的潜在生物标志物。因此,开发灵敏度高、选择性好的检测策略是生物医学研究的迫切需求,尤其是对癌症的早期诊断和药物新靶点的发现有重要意义。
目前,microRNA的传统检测方法主要有三种,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、诺瑟杂交(Northern blot)和高通量测序。qRT-PCR方法基于基因扩增阳离子技术,具有较高的检测灵敏度,但由于抑制剂、热误差和标本间交叉污染等直接影响检测结果的准确性,限制了qRT-PCR的进一步应用。而northern blotting和高通量测序,则需要进行一系列复杂的操作,耗时长,且检测灵敏度较低。
本发明公开了一种超灵敏的检测方法,利用双特异性核酸内切酶及和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法,并将其应用于肿瘤标志物microRNA的检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用双特异性核酸内切酶(DSN酶)和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法,并将其应用于肿瘤标志物microRNA的检测方法。所述方法是通过便捷,灵敏的信号放大策略,利用特异性核酸内切酶(DSN酶)和DNAzyme的特异性切割后进行DNA自组装形成电化学生物传感器用于目标检测。所建立的方法具有高的灵敏度,可用于复杂体系的microRNA的直接检测。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
包括以下步骤:首先设计能与目标microRNA碱基互补配对且含8-17DNAzyme序列的双功能探针H1;双特异性核酸内切酶特异性切割DNA-RNA杂交的DNA部分,H1探针被切割得到8-17DNAzyme序列,而microRNA被释放出来继续与未反应的H1探针杂交循环切割,实现第一次目标循环;然后将发夹探针H2固定在金电极上;当金属离子存在时,前述8-17DNAzyme会特异性识别H2 序列中腺嘌呤核糖核苷酸rA位点并特异性切割,H2探针被切断成两部分,一部分与电极相连,一部分为游离的碱基序列,同时释放8-17DNAzyme继续切割未反应的电极表面的H2探针实现第二次循环放大;电极表面的H2被DNAzyme切断后,依然有部分碱基序列固定在电极表面上,这部分碱基序列会与连接探针Link1和Link2、杂交探针H3和H4进行自组装,形成一条dsDNA链;最后,六氨合钌通过静电作用吸附在dsDNA骨架上,通过检测六氨合钌的电化学信号,实现对microRNA的超灵敏检测。
具体步骤为:
(1)针对目标microRNA设计功能探针H1,所述探针为发夹结构的DNA探针,序列结构为从5'端到3'端依次为颈部1、环部1、环部2、环部3、颈部2序列。所述的第一部分为自由序列颈部1和环部1序列,所述的第二部分环部2为能特异性识别目标microRNA并与之杂交的序列,所述第三组成部分环部3和颈部2碱基序列为8-17DNAzyme,能在金属Mg2+离子存在时,特异性识别固定在电极表面的捕获探针H2(该发夹探针5'端修饰巯基)并切割序列中腺嘌呤核糖核苷酸rA位点。
(2)双特异性核酸内切酶(DSN酶)特异性切割:将6μL含有不同浓度microRNA的DSN缓冲液加入装有4μL 5μM的双功能探针H1溶液的微量离心管中反应120min(其中DSN缓冲液包含:0.2U DSN,50 mM Tris-HCl,10mM MgCl2,1 mM DTT,pH 8.0),使双特异性核酸内切酶特异性切割DNA-RNA杂交的DNA部分,得到8-17DNAzyme序列,并释放microRNA继续与其余未反应的H1探针杂交循环切割,实现目标循环放大。
(3)电极预处理:将直径为2mm的金电极在新配制的食人鱼溶液(98%硫酸和30%双氧水按3:1的体积混合)浸泡,然后依次用0.3μm和0.05 μm的Al2O3粉末在抛光绒布打磨,然后用超纯水冲洗干净,分别在乙醇和超纯水中超声清洗5min,然后将电极置于0.5M的H2SO4溶液中,在-0.35-1.6V电位下扫描,直到在0.95V左右出现一个尖锐的还原峰,在0.12-0.14V范围内出现三个小的、连续的氧化峰,用超纯水冲洗电极,氮气吹干,备用。
(4)捕获探针H2的固定:在9μL含有500mM NaCl、1mM EDTA、10mM TCEP的pH 8.0、10mM Tris-HCl缓冲液中加入1μL 10μM捕获探针H2溶液,得到捕获探针H2固定液。将捕获探针H2固定液滴加到金电极表面,室温孵育120min,H2可通过S-Au键固定在电极表面,再用10mM pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗电极表面,氮气吹干。
(5)电极表面空白位点封闭:将10μL 2μM的疏基己醇溶液滴加到步骤(4)所得电极表面,室温孵育120min,封闭电极表面的非特异性活性位点,用10mM pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗电极表面,氮气吹干。
(6)8-17DNAzyme的切割循环:将步骤(2)微量离心管中的溶液滴加于步骤(5)处理好的电极表面,孵育90min,用10mM pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗,氮气吹干。步骤(2)反应得到的8-17DNAzyme序列可以在金属Mg2+离子存在时,特异性识别固定在电极表面的H2探针形成杂交体,切割H2序列中腺嘌呤核糖核苷酸rA位点, H2探针被切断成两部分,一部分与电极相连,一部分为游离的碱基序列,不再与8-17DNAzyme结合,游离的8-17DNAzyme继续切割未反应的电极表面H2探针,实现第二次循环放大。
(7)DNA自组装电化学生物传感器的构建:电极表面的H2被DNAzyme切断后,依然有部分碱基序列固定在电极表面上,这部分碱基序列会与连接探针Link1和Link2、杂交探针H3和H4进行自组装,形成一条dsDNA链。具体操作是将步骤(6)得到的电极用10mM pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗吹干后,依次在电极表面滴加10μL含有1μM连接探针Link1缓冲液,10μL 1μM的连接探针Link2缓冲液,10μL含有0.5μM H3和0.5μM H4的杂交探针缓冲液,分别反应90min、90min和120min,超纯水冲洗,氮气吹干。
(8)电化学检测microRNA信号:将含有10μM六氨合钌的电化学检测液通氮气,步骤(7)所得电极置于电化学工作检测液中,电化学工作站在-0.6-0V电势范围内用方波伏安法扫描。
DNA预处理:所有探针在使用前要经过预处理。处理方法为将装有DNA序列的微量离心管在离心机中5000rpm,离心5min,加入适量默克水,得到DNA浓度为100μM的溶液,再用pH为8.0的Tris-HCl缓冲液稀释至10μM。具有发夹结构的DNA均在95℃加热5min,然后***冰中半小时,使探针形成发夹结构。
双功能探针H1溶液的制备:5μL 10μM的H1探针溶液溶于5μL 的含200mM NaCl的pH8.0 100 mM Tris-HCl缓冲液。疏基己醇溶液的制备:取疏基己醇加至超纯水中,制成2mM的疏基己醇封闭剂,冰箱4℃保存,备用。
杂交探针缓冲液的制备:将0.5μL 10μM、的H3探针溶液和0.5μL 10μM的H4探针溶液溶于9μL 的含500mM NaCl、1mM MgCl2 的 pH 8.0 10mM Tris-HCl缓冲液。
连接探针Link1缓冲液的制备:将1μL 10μM的Link1探针溶液溶于9μL 的含500mMNaCl、1mM MgCl2的pH 8. 0 10mM Tris-HCl缓冲液。
连接探针Link2缓冲液的制备:将1μL 10μM的Link2探针溶液溶于9μL 的含500mMNaCl、1mM MgCl2 的 pH 8.0 10mM Tris-HCl缓冲液。
DSN缓冲液:0.2U DSN (DSN酶溶于50% DSN storage buffer和50%甘油 )、50 mMTris-HCl,10mM MgCl2,1 mM DTT,pH 8.0。
电化学检测液的制备:pH 8.0的10mM Tris-HCl中含有10μM六氨合钌,混匀,冰箱4℃保存,备用。
电化学工作站为CHI660C,采用三电极***,工作电极是金电极,对电极是铂丝电极,参比电极是银/氯化银电极。冲洗电极所用缓冲液为Tris-HCl缓冲液。
本发明所用试剂均市售可得。
本发明适用于肿瘤细胞中microRNA-141的检测。
本发明的优点在于:
本发明提供的一种利用双特异性核酸内切酶(DSN酶)和DNAzyme切割循环的DNA自组装电化学生物传感器制备方法,巧妙设计实验方案,将生物信号转化为电化学信号,实现对目标物检测信号的多次放大,microRNA的检测限低至1fmol,实现了对肿瘤标志物microRNA-141的高灵敏检测。该检测方法具有高度的选择性,具有广阔的应用前景,具有高度特异性。
附图说明
图1.为本发明的构建流程示意图。
图2.为实施例中不同浓度目标物的电流响应。
图3.为实施例中不同浓度目标物的电流响应标准曲线图。
图4.为分析方法的特异性(a)空白、 (b) microRNA-200a、 (c) microRNA-429、(d)单碱基错配的microRNA -141和(e) microRNA-141的选择性。
具体实施方式
实施例1、检测待测样品中是否含有microRNA-141
图1为本发明的构建流程示意图
下面实施例采用microRNA-141为待测microRNA,microRNA-141的核苷酸序列为UAACACUGUCUGGUAAAGAUGG。
一、待测样品
本发明的实施例采用的是浓度为1fM至10pM的一系列溶液作为待测样本,本发明的待测样本也可以来源于血浆或血清,具体方法如下:
所有电化学检测均在 CHI660C 电化学工作站上进行。三电极***包括:完成 DNA 自组装的金电极(工作电极),铂丝电极(对电极),银-氯化银(Ag/AgCl)参比电极。电化学检测在六氨合钌(RuHex)溶液中进行。先将 RuHex 溶液通氮除氧 15 min,再将完成组装的电极浸泡其中2 min,使溶液中带正电的 RuHex通过静电作用吸附到带负电荷的 DNA 磷酸骨架上。然后用方波伏安法进行扫描,扫描电位范围-0.6 ~ 0 V,脉冲幅度 0.05 V,脉冲宽度0.05 s。
二、一种利用双特异性核酸内切酶(DSN酶)和DNAzyme切割循环的DNA自组装电化学生物传感器制备检测microRNA-141的方法
(1)针对目标microRNA设计双功能探针H1,所述探针为发夹结构的DNA探针;设计固定在电极表面的探针H2,该发夹探针5'端修饰巯基;
(2)双特异性核酸内切酶(DSN酶)特异性切割:将6μL含有不同浓度microRNA的DSN缓冲液加入装有4μL 5μM的双功能探针H1溶液的微量离心管中反应120min;使双特异性核酸内切酶特异性切割DNA-RNA杂交的DNA部分,得到8-17DNAzyme序列,并释放microRNA继续与其余未反应的H1探针杂交循环切割,实现目标循环放大;其中DSN缓冲液包含:0.2U DSN,50mM Tris-HCl,10mM MgCl2,1 mM DTT,pH 8.0;
(3)电极预处理:将直径为2mm的金电极在新配制的食人鱼溶液浸泡,然后依次用0.3μm和0.05 μm的Al2O3粉末在抛光绒布打磨,然后用超纯水冲洗干净,分别在乙醇和超纯水中超声清洗5min,然后将电极置于0.5M的H2SO4溶液中,在-0.35-1.6V电位下扫描,直到在0.95V出现一个尖锐的还原峰,在0.12-0.14V范围内出现三个小的、连续的氧化峰,用超纯水冲洗电极,氮气吹干,备用;食人鱼溶液为98%硫酸和30%双氧水按3:1的体积混合;
(4)捕获探针H2的固定:在9μL含有500mM NaCl、1mM EDTA、10mM TCEP、pH 8.0的10mMTris-HCl缓冲液中加入1μL 10μM捕获探针H2溶液,得到捕获探针H2固定液;将捕获探针H2固定液滴加到金电极表面,室温孵育120min,H2可通过S-Au键固定在电极表面,再用10mMpH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗电极表面,氮气吹干;
(5)电极表面空白位点封闭:将10μL 2μM的疏基己醇溶液滴加到步骤(4)所得电极表面,室温孵育120min,封闭电极表面的非特异性活性位点,用10mM pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗电极表面,氮气吹干;
(6)8-17DNAzyme的切割循环:将步骤(2)微量离心管中的溶液滴加于步骤(5)处理好的电极表面,孵育90min,用10mM pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗,氮气吹干;
(7)DNA自组装电化学生物传感器的构建:将步骤(6)得到的电极用10mM pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗吹干后,依次在电极表面滴加10μL含有1μM连接探针Link1缓冲液,10μL 1μM的连接探针Link2缓冲液,10μL含有0.5μM H3和0.5μM H4的杂交探针缓冲液,分别反应90min、90min和120min,超纯水冲洗,氮气吹干;
(8)电化学检测microRNA信号:将含有10μM六氨合钌的电化学检测液通氮气,再将步骤(7)所得电极置于电化学检测液中,电化学工作站在-0.6-0V电势范围内用方波伏安法扫描检测。
DNA预处理:所有探针在使用前要经过预处理。处理方法为:将装有DNA序列的微量离心管在离心机中5000rpm,离心5min,加入适量默克水,得到DNA浓度为100μM的溶液,再用pH为8.0的Tris-HCl缓冲液稀释至10μM。具有发夹结构的DNA均在95℃加热5min,然后***冰中半小时,使探针形成发夹结构。
双功能探针H1溶液的制备:5μL 10μM的H1探针溶液溶于5μL 的含200mM NaCl的pH8.0 100 mM Tris-HCl缓冲液。
捕获探针H2固定液的制备:将含有1μL10μM的H2探针溶液溶于9μL 的含500mMNaCl、1mM EDTA、10mM TCEP的 pH 8.0 10mM Tris-HCl缓冲液。
疏基己醇溶液的制备:取疏基己醇加至超纯水中,制成2mM的疏基己醇封闭剂,冰箱4℃保存,备用。
杂交探针缓冲液的制备:将0.5μL 10μM的H3探针溶液和0.5μL 10μM的H4探针溶液溶于9μL 的含500mM NaCl、1mM MgCl2 的 pH 8.0 10mM Tris-HCl缓冲液。
连接探针Link1缓冲液的制备:将1μL 10μM的Link1探针溶液溶于9μL 的含500mMNaCl、1mM MgCl2的pH 8. 0 10mM Tris-HCl缓冲液。
连接探针Link2缓冲液的制备:将1μL 10μM的Link2探针溶液溶于9μL 的含500mMNaCl、1mM MgCl2 的 pH 8.0 10mM Tris-HCl缓冲液。
DSN缓冲液:0.2U DSN (DSN酶溶于50% DSN storage buffer和50%甘油 )、50 mMTris-HCl,10mM MgCl2,1 mM DTT,pH 8.0。
所述探针H1序列为:CACCCACTACCCATCTTTACCAGACAGTGTTACATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGGGTG;
所述探针H2为:SHCH2CH2CH2CH2CH2CH2TTTTTCCACCACATTCAAATTCACCAACTATrAGGAAGAGATGTTACGAGGCGGTGGTGG;
所述Link1序列为:CCA ACTAAC CCCATATAGTTGGTGAAT;
所述Link2序列为:ATGGGGTTAGTT GGATCGCCT CATACTGTCTCAAGG ACCACCGCAT;
所述H3序列为:TCTCAAGGACCACCGCAT CTCTAC ATGCGGTGGTCCTTGAGA CAGTATGAG GCGA;
所述H4序列为:GTAGAG ATGCGGTGGTCCTTGAGA TCGCCT CATACTG TCTCAAGGACCACCGCAT。
电化学检测液的制备:pH 8.0的10mM Tris-HCl中含有10μM的六氨合钌,混匀,冰箱4℃保存,备用。
电化学工作站为CHI660C,采用三电极***,工作电极是金电极,对电极是铂丝电极,参比电极是银/氯化银电极。冲洗电极所用缓冲液为Tris-HCl缓冲液。
检测结果如图2所示,在1fM到10pM范围内,随着目标物浓度的增大,电化学信号增强,电流响应值增大。图3为本实施例的电流响应标准曲线。
实施例2
为了评估本发明方法的特异性,用相同的实施例1实验步骤对几条不同序列的microRNA(包含(a)空白 (b) microRNA-200a(序列UAACACUGUCUGGUAACGAUGU), (c)microRNA-429(序列UAAUACUGUCUGGUAAAACCGU),(d)单碱基错配microRNA-141(序列UAACACUGUCUCGUAAAGAUGG), (e) microRNA-141。microRNA-141的浓度为10pM 进行检测。
检测结果如图4所示, 10pM microRNA-141(e)产生的电化学信号明显高于其他样品。该结果表明,此方法具有很高的序列特异性,有望用于识别不同的microRNA序列。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰,皆应属本发明的涵盖范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 福州大学
<120> 利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法
<130> 6
<160> 6
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
cacccactac ccatctttac cagacagtgt tacatctctt ctccgagccg gtcgaaatag 60
tgggtg 66
<210> 2
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
tttttccacc acattcaaat tcaccaacta traggaagag atgttacgag gcggtggtgg 60
<210> 3
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ccaactaacc ccatatagtt ggtgaat 27
<210> 4
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
atggggttag ttggatcgcc tcatactgtc tcaaggacca ccgcat 46
<210> 5
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
tctcaaggac caccgcatct ctacatgcgg tggtccttga gacagtatga ggcga 55
<210> 6
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
gtagagatgc ggtggtcctt gagatcgcct catactgtct caaggaccac cgcat 55
Claims (5)
1.一种利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:首先设计能与目标microRNA碱基互补配对且含8-17DNAzyme序列的双功能探针H1;双特异性核酸内切酶特异性切割DNA-RNA杂交的DNA部分, H1探针被切割得到游离的8-17DNAzyme序列,而microRNA被释放出来继续与未反应H1探针杂交循环切割,实现第一次目标循环;然后将发夹探针H2固定在金电极上;当金属离子存在时,前述8-17DNAzyme会特异性识别H2 序列中腺嘌呤核糖核苷酸rA位点并特异性切割,H2探针被切断成两部分,一部分与电极相连,一部分为游离的碱基序列,同时释放8-17DNAzyme继续切割未反应的电极表面的H2探针实现第二次循环放大;电极表面的H2被DNAzyme切断后,依然有部分碱基序列固定在电极表面上,这部分碱基序列会与连接探针Link1和Link2、杂交探针H3和H4进行自组装,形成一条dsDNA链;最后,六氨合钌通过静电作用吸附在dsDNA骨架上,通过检测六氨合钌的电化学信号,实现对microRNA的超灵敏检测。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
(1)针对目标microRNA设计双功能探针H1,所述探针为发夹结构的DNA探针;设计固定在电极表面的探针H2,该发夹探针5'端修饰巯基;
(2)双特异性核酸内切酶(DSN酶)特异性切割:将6μL含有不同浓度microRNA的DSN缓冲液加入装有4μL 5μM的双功能探针H1溶液的微量离心管中反应120min;使双特异性核酸内切酶特异性切割DNA-RNA杂交的DNA部分,得到8-17DNAzyme序列,并释放microRNA继续与其余未反应的H1探针杂交循环切割,实现目标循环放大;其中DSN缓冲液包含:0.2U DSN,50mM Tris-HCl,10mM MgCl2,1 mM DTT,pH 8.0;
(3)电极预处理:将直径为2mm的金电极在新配制的食人鱼溶液浸泡,然后依次用0.3μm和0.05 μm的Al2O3粉末在抛光绒布打磨,然后用超纯水冲洗干净,分别在乙醇和超纯水中超声清洗5min,然后将电极置于0.5M的H2SO4溶液中,在-0.35-1.6V电位下扫描,直到在0.95V出现一个尖锐的还原峰,在0.12-0.14V范围内出现三个小的、连续的氧化峰,用超纯水冲洗电极,氮气吹干,备用;食人鱼溶液为98%硫酸和30%双氧水按3:1的体积混合;
(4)捕获探针H2的固定:在9μL含有500mM NaCl、1mM EDTA、10mM TCEP、pH 8.0的10mMTris-HCl缓冲液中加入1μL 10μM捕获探针H2溶液,得到捕获探针H2固定液;将捕获探针H2固定液滴加到金电极表面,室温孵育120min,H2可通过S-Au键固定在电极表面,再用10mMpH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗电极表面,氮气吹干;
(5)电极表面空白位点封闭:将10μL 2μM的疏基己醇溶液滴加到步骤(4)所得电极表面,室温孵育120min,封闭电极表面的非特异性活性位点,用10mM pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗电极表面,氮气吹干;
(6)8-17DNAzyme的切割循环:将步骤(2)微量离心管中的溶液滴加于步骤(5)处理好的电极表面,孵育90min,用10mM pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗,氮气吹干;
(7)DNA自组装电化学生物传感器的构建:将步骤(6)得到的电极用10mM pH 8.0的Tris-HCl缓冲液冲洗吹干后,依次在电极表面滴加10μL含有1μM连接探针Link1缓冲液,10μL 1μM的连接探针Link2缓冲液,10μL含有0.5μM H3和0.5μM H4的杂交探针缓冲液,分别反应90min、90min和120min,超纯水冲洗,氮气吹干;
(8)电化学检测microRNA信号:将含有10μM六氨合钌的电化学检测液通氮气,再将步骤(7)所得电极置于电化学检测液中,电化学工作站在-0.6-0V电势范围内用方波伏安法扫描检测。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述探针H1序列为:CACCCACTACCCATCTTTACCAGACAGTGTTACATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGGGTG;
所述探针H2为:SHCH2CH2CH2CH2CH2CH2TTTTTCCACCACATTCAAATTCACCAACTATrAGGAAGAGATGTTACGAGGCGGTGGTGG;
所述Link1序列为:CCA ACTAAC CCCATATAGTTGGTGAAT;
所述Link2序列为:ATGGGGTTAGTT GGATCGCCT CATACTGTCTCAAGG ACCACCGCAT;
所述H3序列为:TCTCAAGGACCACCGCAT CTCTAC ATGCGGTGGTCCTTGAGA CAGTATGAG GCGA;
所述H4序列为:GTAGAG ATGCGGTGGTCCTTGAGA TCGCCT CATACTG TCTCAAGGACCACCGCAT。
4.如权利要求1或2所述方法制备获得电化学生物传感器。
5.如权利要求4所述电化学生物传感器用于microRNA的检测。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910647121.8A CN110274941B (zh) | 2019-07-17 | 2019-07-17 | 利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910647121.8A CN110274941B (zh) | 2019-07-17 | 2019-07-17 | 利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110274941A true CN110274941A (zh) | 2019-09-24 |
CN110274941B CN110274941B (zh) | 2020-07-07 |
Family
ID=67964621
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910647121.8A Expired - Fee Related CN110274941B (zh) | 2019-07-17 | 2019-07-17 | 利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110274941B (zh) |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110591904A (zh) * | 2019-09-25 | 2019-12-20 | 福州大学 | 一种用于miRNA检测的装置 |
CN110951842A (zh) * | 2019-11-07 | 2020-04-03 | 浙江大学 | 基于电化学检测人血清中miR-100的探针及方法 |
CN110982878A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-04-10 | 华南师范大学 | CRISPR/Cas13a结合电化学发光***检测microRNA的方法与应用 |
CN113061649A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-07-02 | 福州大学 | 检测microRNA的表面增强拉曼光谱传感器及其制备方法 |
CN113237936A (zh) * | 2021-05-08 | 2021-08-10 | 贵州省人民医院 | 基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法 |
CN113897418A (zh) * | 2021-06-28 | 2022-01-07 | 华中科技大学 | 检测dna点突变的探针、试剂盒及应用 |
CN113960142A (zh) * | 2021-10-25 | 2022-01-21 | 福州大学 | 一种回文核酸纳米片超灵敏电化学生物传感器的制备方法 |
CN114216947A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-03-22 | 福州大学 | 一种基于dna纳米四合体的氧化铟锡场效应晶体管生物传感器及其应用 |
CN116732211A (zh) * | 2023-08-09 | 2023-09-12 | 湖南工程学院 | 基于8-17脱氧核酶与CRISPR-Cas13a反式切割检测牛结核分枝杆菌的探针组及方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108426932A (zh) * | 2018-06-04 | 2018-08-21 | 福州大学 | 一种基于三链连环dna的电化学生物传感器及制备方法 |
CN108519417A (zh) * | 2018-04-16 | 2018-09-11 | 湖南文理学院 | 一种检测两种肿瘤标志物的适体探针、电化学生物传感器及其制备方法和用途 |
-
2019
- 2019-07-17 CN CN201910647121.8A patent/CN110274941B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108519417A (zh) * | 2018-04-16 | 2018-09-11 | 湖南文理学院 | 一种检测两种肿瘤标志物的适体探针、电化学生物传感器及其制备方法和用途 |
CN108426932A (zh) * | 2018-06-04 | 2018-08-21 | 福州大学 | 一种基于三链连环dna的电化学生物传感器及制备方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
DR. TIAN TIAN ET AL.: "Sensitive and Convenient Detection of microRNAs Based on Cascade Amplification by Catalytic DNAzymes", 《CHEM. EUR. J.》 * |
GUANGMING ZENG ET AL.: "Electrochemical DNA sensing strategy based on strengthening electronic conduction and a signal amplifier carrier of nanoAu/MCN composited nanomaterials for sensitive lead detection", 《ENVIRONMENTAL SCIENCE: NANO》 * |
LAN LIU ET AL.: "Branched Hybridization Chain Reaction Circuit for Ultrasensitive Localizable Imaging of mRNA in Living Cells", 《ANAL. CHEM.》 * |
XI ZHANG ET AL.: "An ultrasensitive label-free electrochemical biosensor for microRNA-21 detection based on a 2′-O-methyl modified DNAzyme and duplex-specific nuclease assisted target recycling", 《CHEMICAL COMMUNICATIONS》 * |
陈宪 等: "DNA生物传感器研究进展", 《福州大学学报(自然科学版)》 * |
Cited By (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110591904A (zh) * | 2019-09-25 | 2019-12-20 | 福州大学 | 一种用于miRNA检测的装置 |
CN110951842A (zh) * | 2019-11-07 | 2020-04-03 | 浙江大学 | 基于电化学检测人血清中miR-100的探针及方法 |
CN110982878B (zh) * | 2019-11-29 | 2023-06-13 | 华南师范大学 | CRISPR/Cas13a结合电化学发光***检测microRNA的方法与应用 |
CN110982878A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-04-10 | 华南师范大学 | CRISPR/Cas13a结合电化学发光***检测microRNA的方法与应用 |
CN113061649A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-07-02 | 福州大学 | 检测microRNA的表面增强拉曼光谱传感器及其制备方法 |
CN113237936B (zh) * | 2021-05-08 | 2023-05-05 | 贵州省人民医院 | 基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法 |
CN113237936A (zh) * | 2021-05-08 | 2021-08-10 | 贵州省人民医院 | 基于邻位触及催化发卡探针自组装和金属有机框架的靶序列lncARSR电化学检测方法 |
CN113897418A (zh) * | 2021-06-28 | 2022-01-07 | 华中科技大学 | 检测dna点突变的探针、试剂盒及应用 |
CN113897418B (zh) * | 2021-06-28 | 2023-08-22 | 华中科技大学 | 检测dna点突变的探针、试剂盒及应用 |
CN113960142A (zh) * | 2021-10-25 | 2022-01-21 | 福州大学 | 一种回文核酸纳米片超灵敏电化学生物传感器的制备方法 |
CN113960142B (zh) * | 2021-10-25 | 2023-11-10 | 福州大学 | 一种回文核酸纳米片超灵敏电化学生物传感器的制备方法 |
CN114216947A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-03-22 | 福州大学 | 一种基于dna纳米四合体的氧化铟锡场效应晶体管生物传感器及其应用 |
CN114216947B (zh) * | 2021-12-16 | 2023-11-10 | 福州大学 | 一种基于dna纳米四合体的氧化铟锡场效应晶体管生物传感器及其应用 |
CN116732211A (zh) * | 2023-08-09 | 2023-09-12 | 湖南工程学院 | 基于8-17脱氧核酶与CRISPR-Cas13a反式切割检测牛结核分枝杆菌的探针组及方法 |
CN116732211B (zh) * | 2023-08-09 | 2023-10-27 | 湖南工程学院 | 基于8-17脱氧核酶与CRISPR-Cas13a反式切割检测牛结核分枝杆菌的探针组及方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN110274941B (zh) | 2020-07-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110274941A (zh) | 利用DSN酶和DNAzyme的DNA自组装电化学生物传感器的制备方法 | |
Miao et al. | MicroRNA detection based on analyte triggered nanoparticle localization on a tetrahedral DNA modified electrode followed by hybridization chain reaction dual amplification | |
WO2022095373A1 (zh) | 一种检测miRNA的自产生共反应剂信号放大电化学发光体系 | |
US5776672A (en) | Gene detection method | |
Zhang et al. | An ultrasensitive label-free electrochemical biosensor for microRNA-21 detection based on a 2′-O-methyl modified DNAzyme and duplex-specific nuclease assisted target recycling | |
CN109738503B (zh) | 一种基于核酸外切酶ⅲ的正反馈放大电化学传感器 | |
CN110106232B (zh) | 基于靶标催化的无酶无标记双尾杂交生物传感器及制备方法 | |
CN109797200A (zh) | 比率型端粒酶活性定量检测方法 | |
Deng et al. | Target-triggered cascade signal amplification for sensitive electrochemical detection of SARS-CoV-2 with clinical application | |
CN111440851A (zh) | 一种检测miRNA的电化学生物传感器及其制备方法与应用 | |
Xie et al. | A novel electrochemical aptasensor for highly sensitive detection of thrombin based on the autonomous assembly of hemin/G-quadruplex horseradish peroxidase-mimicking DNAzyme nanowires | |
CN108051492B (zh) | 一种基于可控自组装镊子结构电化学检测单链目标dna的方法 | |
Yao et al. | An enzyme free electrochemical biosensor for sensitive detection of miRNA with a high discrimination factor by coupling the strand displacement reaction and catalytic hairpin assembly recycling | |
Yang et al. | Ultrasensitive electrochemical detection of miRNA based on DNA strand displacement polymerization and Ca 2+-dependent DNAzyme cleavage | |
CN112410330A (zh) | 一种dna探针、通用电化学传感平台及其检测方法与应用 | |
Li et al. | An electrochemical microRNA biosensor based on protein p19 combining an acridone derivate as indicator and DNA concatamers for signal amplification | |
CN109613095A (zh) | 基于i-motif构型变化的末端转移酶电化学生物传感器制备方法及应用 | |
CN110408679B (zh) | 一种基于酶辅助循环信号放大的电化学急性白血病基因Pax-5a检测方法 | |
CN105567808B (zh) | 滚环扩增产物为模板的铜纳米颗粒合成方法及其在电化学检测中的应用 | |
CN108445067B (zh) | 一种双信号无酶的信号放大rna纳米生物传感器、制备方法及其应用 | |
CN117368284A (zh) | 一种检测外泌体miRNA的电化学传感器及其制备方法与应用 | |
CN110938690B (zh) | 基于目标触发的酶辅助发夹探针重塑的无标记比色传感器及其应用 | |
Alipour et al. | The development of an electrochemical DNA biosensor based on quercetin as a new electroactive indicator for DNA hybridization detection | |
CN114264712B (zh) | 基于石墨烯场效应晶体管的miRNA检测方法及应用 | |
CN107356647A (zh) | 一种灵敏定量检测atp的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20200707 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |