CN110248936A - 化合物 - Google Patents

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    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
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Abstract

本发明涉及抑制LRRK2激酶活性的新化合物、它们的制备方法、含有它们的组合物及它们在治疗或预防与LRRK2激酶活性相关或以LRRK2激酶活性为特征的疾病中的用途，例如，帕金森病、阿尔茨海默病和肌萎缩侧索硬化(ALS)。

Description

化合物
技术领域
本发明涉及抑制LRRK2激酶活性的新化合物、它们的制备方法、含有它们的组合物及它们在治疗与LRRK2激酶活性相关或以LRRK2激酶活性为特征的疾病中的用途，例如，帕金森病、阿尔茨海默病和肌萎缩侧索硬化 (ALS)。
背景技术
帕金森氏病(PD)是一种神经变性疾病，其特征在于在脑黑质区域的多巴胺能神经元的选择性变性和细胞死亡。帕金森氏病通常被认为是散发性的且病因不明，但是，在过去的15年中，对这一疾病的遗传基础和相关致病机制的理解已经有了重要的发展。该研发的一个领域是了解富含亮氨酸的重复激酶2(LRRK2)蛋白。在家族性研究中，LRRK2基因中的一些错义突变与常染色体显性帕金森氏病密切相关(参见WO2006068492和WO2006045392；Trinh 和Farrer 2013，Nature Reviews in Neurology 9：445-454；Paisan-Ruiz等人，2013，J.Parkinson’s Disease 3：85-103)。LRRK2中的G2019S突变是最常见的错义突变并且与临床表型相关，其非常类似于散发性帕金森氏病。所述 LRRK2 G2019S突变也存在于大约1.5％的散发性帕金森氏病病例中(参见 Gilks等人，2005，Lancet，365：415-416)。除了在LRRK2中已知的致病编码突变，已鉴定了额外的LRRK2氨基酸编码变体，其也与发展帕金森氏病的风险有关(参见Ross等人，2011Lancet Neurology 10：898-908)。此外，全基因组关联研究(GWAS)已将LRRK2确定为帕金森氏病易感基因座，这表明 LRRK2可能也与不具有导致LRRK2蛋白中氨基酸置换的突变的散发性帕金森氏病的病例有关。(参见Satake等人，2009Nature Genetics 41:1303-1307； Simon-Sanchez等人2009Nature Genetics 41:1308-1312)。
LRRK2是ROCO蛋白家族的一个成员且该家族的所有成员共享5个保守结构域。最常见的致病突变G2019S发生在LRRK2的高度保守的激酶结构域。这一突变在重组LRRK2蛋白的体外酶测试(参见Jaleel等人，2007，Biochem J，405：307-317)以及在从G2019S PD患者来源的细胞中纯化的LRRK2蛋白(参见Dzamko等人，2010Biochem.J.430：405-413)中使得LRRK2激酶活性升高。使得在不同的残基(R1441)上氨基酸置换的不太常见的LRRK2致病突变也已显示出通过降低LRRK2的GTP酶结构域水解GTP的速率来提高LRRK2 激酶活性(参见Guo等人，2007Exp Cell Res.313：3658-3670；West等人，2007 Hum.Mol Gen.16：223-232)。此外，LRRK2的Rab蛋白生理底物的磷酸化已被证明通过LRRK2的一系列帕金森病致病突变而增加(参见Steger等人，2016 eLife 5e12813)。因此，该证据表明，所述激酶以及LRRK2的GTP酶活性对于发病机制至关重要，且所述LRRK2激酶结构域可调节整体LRRK2的功能 (参见Cookson，2010Nat.Rev.Neurosci.11：791-797)。
有证据表明，增加的LRRK2激酶活性与细胞培养模型中的神经元毒性相关(参见Smith等人，2006Nature Neuroscience 9：1231-1233)并且激酶抑制剂化合物防止LRRK2介导的细胞死亡(参见Lee等人，2010Nat.Med.16： 998-1000)。据报道，LRRK2可作为小胶质细胞介导的α-突触核蛋白清除的负调节因子(参见Maekawa等，2016BMC Neuroscience 17:77)，提示LRRK2 抑制剂可能有助于清除神经毒性形式的α-突触核蛋白以治疗帕金森病。
已经发现，来源于LRRK2 G2019S帕金森氏病患者的诱导性多功能干细胞(iPSC)呈现在轴突生长(neurite outgrowth)上的缺陷和对鱼藤酮增加的易感性，其可通过G2019S突变的遗传校正或用LRRK2激酶活性的小分子抑制剂处理细胞进行改善(参见Reinhardt等人，2013Cell Stem Cell 12：354-367)。已经报道线粒体DNA损伤作为死后帕金森氏病样本的黑质中易受攻击的多巴胺神经元的分子标记(参见Sanders等2014Neurobiol.Dis.70：214-223)。与 iSPC中LRRK2 G2019S突变相关的增加水平的这种线粒体DNA损伤通过G2019S突变的遗传校正得以阻止(参见Sanders等人，2014Neurobiol.Dis.62： 381-386)。
额外的证据将LRRK2功能与自噬溶酶体通路的功能障碍相联系(参见 Manzoni和Lewis，2013Faseb J.27:3234-3429)。LRRK2蛋白导致在侣伴蛋白介导的自噬方面的缺陷，其消极影响了细胞降解α-突触核蛋白的能力 (Orenstein等人，2013Nature Neurosci.16394-406)。在其他细胞模型中，选择性LRRK2抑制剂已经显示出刺激大自噬(macroautophagy)(参见Manzoni等人，2013BBA Mol.Cell Res.1833：2900-2910)。这些数据表明，LRRK2激酶活性的小分子抑制剂可能在治疗以细胞蛋白质稳态的缺陷为特征的疾病中有效，所述疾病由异常自噬/溶酶体降解通路引起，包括以下形式：与GBA 突变有关的帕金森氏病(参见Swan和Saunders-Pullman 2013Curr.Neurol. Neurosci Rep.13：368)、其他α-突触核蛋白病、Tau蛋白病、阿尔茨海默氏病 (参见Li等人，2010Neurodegen.Dis.7：265-271)和其他神经变性疾病(参见 Nixon 2013Nat.Med.19：983-997)和戈谢病(参见Westbroek等人，2011Trends. Mol.Med.17：485-493)。作为自噬的启动子，LRRK2激酶的小分子抑制剂也可用于治疗其他疾病，包括糖尿病，肥胖症，运动神经元疾病，癫痫和一些癌症(参见Rubinsztein等人，2012Nat.Rev.Drug Discovery 11：709-730)，肺部疾病，如慢性阻塞性肺病和特发性肺纤维化(参见Araya等人，2013Intern. Med.52：2295-2303)和自身免疫性疾病如***性红斑狼疮(参见Martinez等人，2016Nature 533：115-119)。作为自噬和吞噬过程的启动子，LRRK2激酶的小分子抑制剂也可用于增加宿主在一系列细胞内细菌感染、寄生虫感染和病毒感染的治疗中的反应，包括疾病，如结核病(See Rubinsztein等人,2012 Nat.Rev.Drug Discovery 11:709-730；Araya et al.,2013Intern.Med.52:2295-2303；Gutierrez,Biochemical Society Conference；Leucine rich repeat kinase2:ten years along the road to therapeutic intervention,Henley BusinessSchool,UK 12July 2016)、HIV、西尼罗河病毒和基孔肯雅病毒(参见 Shoji-Kawata等，2013Nature 494：201-206)。LRRK2抑制剂可单独用于治疗这些疾病，或与直接靶向感染因子的药物组合使用。此外，相比于正常受试者的成纤维细胞，在尼曼-皮克C型(NPC)疾病患者的成纤维细胞中也已观察到显著升高的LRRK2 mRNA水平，这表明，异常LRRK2功能可能在溶酶体疾病中起作用(参见Reddy等人，2006PLOS One 1(1):e19doi： 10.1371/journal.pone.0000019–supporting information Dataset S1)。这一观察结果表明，LRRK2抑制剂可能在治疗NPC中有效。
所述LRRK2的PD相关的G2019S突变形式也已经报道提高了微管蛋白相关的Tau的磷酸化(参见Kawakami等人，2012PLoS ONE 7：e30834，doi 10.1371)，且已提出了疾病模型，其中LRRK2作用于Tau和α-突触核蛋白的致病作用的上游(参见Taymans&Cookson，2010，BioEssays 32：227-235)。为了支持这点，在转基因小鼠模型中，LRRK2的表达已与增加的不溶性Tau 的聚集和增加的Tau磷酸化相关(参见Bailey等人，2013Acta Neuropath. 126:809-827)。据报道，PD致病突变蛋白LRRK2 R1441G的过表达导致在转基因小鼠模型中帕金森氏病症状和Tau的高度磷酸化(参见Li，Y.等人2009， Nature Neuroscience 12：826-828)。因此，这些数据表明，激酶催化活性的 LRRK2抑制剂可用于治疗以Tau的高度磷酸化为特征的tau蛋白病，例如嗜银颗粒病、皮克氏病、皮质基底节变性、进行性核上性麻痹以及与17号染色体相关的遗传性额颞性痴呆及帕金森综合症(FTDP-17)(参见Goedert，M 和Jakes，R(2005)Biochemica et Biophysica Acta 1739，240-250)。此外，LRRK2 抑制剂可能在治疗以降低的多巴胺水平为特征的其他疾病(例如与药物成瘾性相关的戒断症状/复发)中有效(参见Rothman等人，2008，Prog.Brain Res， 172：385)。
其他研究也显示了LRRK2的G2019S突变型的过表达导致在转基因小鼠模型中脑室下区(SVZ)神经祖细胞的细胞增殖和迁移的缺陷(参见Winner 等人，2011Neurobiol.Dis.41：706-716)并减少轴突长度和分支的细胞培养模型(参见Dachsel等人，2010Parkinsonism&Related Disorders 16：650-655)。此外，据报道，在中风的啮齿动物模型中，在局部缺血损伤之后，促进SVZ 神经祖细胞细胞增殖和迁移的试剂也提高神经***预后(参见Zhang等人， 2010J.Neurosci.Res.88：3275-3281)。这些结果表明，抑制LRRK2异常活性的化合物可在神经元损伤(如缺血性中风、外伤性脑损伤、脊髓损伤)后用于旨在刺激中枢神经***功能的恢复的治疗。
在LRRK2上的突变也已经得到确定，其在临床上与从轻度认知损伤 (MCI)到阿尔茨海默氏病的转变有关(参见WO2007149798)。这些数据表明， LRRK2激酶活性的抑制剂可用于治疗疾病，例如阿尔茨海默氏病、其他痴呆和相关的神经变性疾病。
在一些疾病组织和疾病模型中也观察到了正常的LRRK2蛋白的异常调节。miR-205对LRRK2的翻译控制的正常机制在一些散发性PD病例中被扰乱，其中在PD脑样品中miR-205水平的显著降低与这些样品中升高的 LRRK2蛋白水平同时发生(参见Cho等人，(2013)Hum.Mol.Gen.22： 608-620)。因此，LRRK2抑制剂可用于治疗具有升高的正常LRRK2蛋白水平的散发性PD患者。
在狨猴的帕金森氏病试验模型中，LRRK2 mRNA的升高是以与诱导运动障碍的L-多巴的水平相关的方式观察到的(参见Hurley，M.J等人，2007Eur. J.Neurosci.26：171-177)。这表明，LRRK2抑制剂可用于改善这种运动障碍。
已经报道了在ALS患者肌活检样品中显著升高的LRRK2 mRNA水平 (参见Shtilbans等人，2011Amyotrophic Lateral Sclerosis 12：250-256)。提出 LRRK2激酶活性的升高水平可以是ALS特有的特征。因此，该观察结果表明，LRRK2抑制剂可用于治疗ALS。
还有证据表明，LRRK2激酶活性可能在介导小神经胶质促炎症反应中发挥作用(参见Moehle等人，2012，J.Neuroscience 32:1602-1611)。这一观察结果表明了LRRK2抑制剂在治疗导致一系列神经变性疾病(包括帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、多发性硬化、HIV-诱导的痴呆、肌萎缩侧索硬化、缺血性发作、外伤性脑损伤和脊髓损伤)的异常神经炎症机制中可能的效用。一些证据还表明，LRRK2在体外调节神经元祖分化中发挥作用(参见Milosevic，J.等人，2009Mol.Neurodegen.4：25)。该证据表明，LRRK2 的抑制剂可在体外生成神经元祖细胞中具有效用，其用在CNS障碍的基于细胞的治疗的后续治疗应用中。
据报道，具有LRRK2 G2019S突变的帕金森氏病患者表现出增加的患非皮肤癌的频率，包括肾癌、乳腺癌、肺癌、***癌以及急性髓性白血病 (AML)。因为有证据显示在LRRK2中的G2019S突变提高LRRK2激酶结构域的催化活性，因此，LRRK2的小分子抑制剂可用于治疗癌症，例如肾癌、乳腺癌、肺癌、***癌(例如实体瘤)和血液癌症(参见AML；Saunders-Pullman等人，2010，Movement Disorders，25:2536-2541；Inzelberg 等人，2012Neurology 78：781-786)。在***状肾癌和甲状腺癌中还报道了 LRRK2的扩增和过表达，其中LRRK2与MET癌基因之间的协同效应可能促进肿瘤细胞生长和存活(参见Looyenga等人，2011PNAS 108：1439-1444)。
一些研究表明，常见的LRRK2的遗传关联性随着对强直性脊柱炎(参见 Danoy P，等人，2010.PLoS Genet.；6(12):e1001195；和麻风病感染.(参见 Zhang FR，等人2009，NEngl J Med.361:2609-18.)的敏感性变化。这些发现表明，LRRK2的抑制剂可用于治疗强直性脊柱炎和麻风病感染。
对克罗恩病的三个全基因组相关扫描的荟萃分析确定了许多与该疾病相关的基因座，包括含有LRRK2基因的基因座(参见Barrett等人，2008， Nature Genetics，40：955-962)。也已出现了以下证据，即LRRK2是IFN-γ靶基因，其可参与与克罗恩病的发病机制相关的信号传导通路(参见Gardet 等人，2010，J.Immunology，185：5577-5585)。这些发现表明，LRRK2的抑制剂可用于治疗克罗恩病。
作为IFN-γ靶基因，LRRK2也在T细胞机制中发挥作用，所述机制是其他免疫***疾病(例如多发性硬化和类风湿关节炎)的基础。LRRK2抑制剂的其他潜在效用来自以下所报道的发现：B淋巴细胞构成LRRK2表达细胞的主要群体(参见Maekawa等人2010，BBRC 392：431-435)。这表明，LRRK2 抑制剂可有效治疗免疫***疾病，其中B细胞耗竭在例如以下疾病中是(或可能是)有效的：例如淋巴瘤、白血病、多发性硬化(参见Ray等人，2011 J.Immunol.230：109)、类风湿关节炎、***性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血、单纯红细胞再生障碍、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、埃文斯综合征 (Evans syndrome)、血管炎、大疱性皮肤病、I型糖尿病、干燥综合征、德维克病和炎性肌病(参见Engel等人，2011Pharmacol.Rev.63：127-156；Homam 等人，2010J.Clin.Neuromuscular Disease 12：91-102)。
WO2016036586和WO2017012576公开了一系列描述为LRRK2激酶抑制剂的化合物及其在治疗疾病中的用途，尤其包括帕金森氏病。新的治疗方法存在未满足的需求，这些治疗将停止或减缓疾病进展，该疾病进展涉及运动 (例如控制步态功能障碍、冷冻和姿势失衡)和非运动症状(例如PD相关性痴呆)，减少升级使用有症状的药物的需要和目前可用治疗的相关长期不良反应(例如运动障碍和开/关波动)，保持更长时间的独立性。
发明内容
本发明提供，在第一方面，式(I)的化合物及其盐：
其中
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
R3选自:
a)N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1、2、3或4个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-6烷基，任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和环丙基，和
C1-6烷氧基，该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，
其中当该N-连接的4-6元杂环基环包含可取代的氮原子时，取代基基团还包括任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基的4-6元杂环基环：卤素、羟基和C1-3烷氧基，并且该4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子；
b)NHR7；和
c)OR7；
R4和R5独立地选自H、羟基和卤素；
X1为CR6，其中R6为C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：羟基、卤素和C1-3烷氧基；
R7独立地选自:
C4-6环烷基，该环烷基任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2 或3个卤素或羟基基团，和
含氮或含氧的4-6元杂环基，其任选取代有一个或多个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团；且
R8为氢或C1-3烷基。
在本发明的其他方面，本发明提供了药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
本发明的另一方面提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)。
发明详述
本发明的前述和其他方面现就本文所提供的说明和方法进行详细描述。应理解，本发明可以不同形式体现并且不应解释为仅限于本文所提及的实施方案。相反地，提供这些实施方案使得本公开充分且完整并将本发明的范围充分传达给本领域技术人员。
在本文中用于本发明描述中的术语仅是为了描述具体实施方案而不旨在限制本发明。如在本发明实施方案和所附权利要求的描述中所用，单数形式的“一”、“一个”和“该”旨在包括复数形式，除非上下文中另外明确提及。此外，如本文所用，“和/或”是指和包括一或多个相关的所列项目的任意和所有可能的组合。将进一步理解，当用于本说明书时，术语“包含”和/或“包括”指定所述特征、整数、步骤、操作、元素和/或成分的存在，但不排除一或多个其他特征、整数、步骤、操作、元素、成分和/或它们的组的存在或添加。
通常，本文所用命名和在本文所述的有机化学、药物化学、生物学中的实验室操作是本领域熟知的和常用的。除非另外提及，本文所用的全部技术和科学术语与本领域所属技术领域的一般技术人员通常所理解的具有相同的含义。在本文所用术语存在多个定义的情况下，除非另外提及，否则以本节中的那些为准。
A.定义
如本文所用，“烷基”是指具有指定碳原子数的一价饱和烃链。例如，C1-3烷基是指具有1-3个碳原子的烷基。烷基可为直链或支链的。在一些实施方案中，支链烷基可能具有一个、两个或三个分支。示例性烷基包括，但不限于，甲基、乙基和丙基(正丙基和异丙基)。
如本文所用，“烷氧基”是指基团-O-烷基。例如，C1-6烷氧基含有1-6个碳原子。C1-3烷氧基含有1-3个碳原子。示例性的烷氧基包括，但不限于，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己基氧基。
如本文所用，“环烷基”是指具有指定数量碳原子的饱和单环烃环。例如， C3-6环烷基含有3-6个作为环成员的碳原子。C3-6环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
如本文所用，“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。“卤”是指卤素基团：氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)或碘(-I)。
如本文所用，“卤代烷基”是指本文所定义的烷基，其具有选自F、Cl、 Br或I的一或多个卤素原子，其通过替代与碳原子相连的氢原子取代在该烷基的任意或全部碳原子上，该卤素原子可相同或不同。例如，C1-3卤代烷基是指被一个或多个卤素原子取代的C1-3烷基。在一些实施方案中，“卤代烷基”是指被一个或多个独立地选自F或Cl的卤素原子取代的烷基。示例性的卤代烷基包括，但不限于，氯甲基、溴乙基、三氟甲基和二氯甲基。
如本文所用，“杂环基”或“杂环基环”是通过从饱和单环中除去氢原子衍生的一价基团，该环由环碳原子和1个或多个独立地选自氮、氧或硫的环杂原子组成。在一个实施方案中，该环由环碳原子和1至3个独立选自氮、氧或硫的环杂原子组成。在一个实施方案中，所述环杂原子独立地选自氮或氧。可以指定环原子数。例如，“4-6元杂环基”是指由4-6个环原子组成的如上定义的杂环基。术语N-连接的4-6元杂环基是指如上定义的4-6元杂环基环，其含有至少一个氮环原子，通过该氮原子环与核连接。还可以存在其它环杂原子(氮、氧或硫)。术语含氮杂环基是指含有至少一个氮环原子的如上定义的杂环基环。还可以存在其他环杂原子(氮、氧或硫)。术语含氧杂环基应以类似方式解释。杂环基环的实例包括，但不限于，氮杂环丁烷基，四氢呋喃基(包括，例如，四氢呋喃-2-基和四氢呋喃-3-基)、吡咯烷基(包括，例如，吡咯烷-1-基和吡咯烷-3-基)、哌啶基(包括，例如，哌啶-3-基和哌啶-4- 基)、吗啉基(包括，例如，吗啉-2-基和吗啉-4-基)。
如本文所用，提及基团中的“取代的”是指在基团中与成员原子(例如，碳原子)相连的一或多个氢原子被取代基所替代，所述取代基选自所定义的取代基的基团。应理解，术语“取代的”包括隐含的规定，即这种取代依照取代的原子和取代基允许的化合价并且该取代形成稳定的化合物(即不会自发进行转化的化合物，例如通过重排、环化或消除，且其足够稳定到从反应混合物中分离出来)。当提及一个基团可含有一个或多个取代基时，该基团中的一个或多个(根据需要)成员原子可被取代。此外，在基团中单一成员原子可被超过一种取代基取代，只要这种取代符合该原子允许的化合价。取代的杂环基环的实例包括，但不限于， 和
如本文所述，"任选取代的"表示特定基团可为未取代的，或可如进一步定义所取代。
如本文所用，术语“疾病”是指身体状态或一些器官的任意改变，中断或干扰其功能的实施和/或引起症状，例如被折磨的人或与人有接触的那些人的不适、功能障碍、疼痛或甚至死亡。疾病还可包括愠怒、病痛、不安、弊病、障碍、不健康、生病、抱怨、interdisposition和/或做作(affectation)。
如本文所用，针对疾病的“治疗”或“处理”是指：(1)改善疾病或该疾病的一种或多种生物表现，(2)干扰(a)引起疾病或对该疾病负责的生物学级联的一个或多个点，或(b)该疾病的一种或多种生物表现，(3)减轻一种或多种症状或与该疾病相关的影响，(4)减缓该疾病的进展或该疾病的一种或多种生物表现，和/或(5)降低疾病或该疾病生物表现的严重程度的可能性。对症治疗是指第(1)、(3)和(5)点涉及的治疗。疾病改变治疗是指第(2)和(4)点定义的治疗。
如本文所用，“预防”或“防止”是指预防性给药以降低疾病或其生物表现发作的可能性或延迟该疾病或其生物表现的发作。
如本文所用，“受试者”是指哺乳动物受试者(例如，狗、猫、马、牛、绵羊、山羊、猴等)和人受试者，包括男性和女性受试者且包括新生儿、婴儿、少年、青少年、成人和老年受试者且还包括各种种族和族裔，包括，但不限于，白人、黑人、亚洲人、美洲印第安人和西班牙裔。
如本文所用，“药学上可接受的盐”是指保留目标化合物的所需生物活性并表现出最小的不希望的毒理学效应的盐。这些药学上可接受的盐可在该化合物的最终分离和纯化过程中原位制备或者通过单独地将其游离酸或游离碱形式的纯化的化合物分别与合适的碱或酸反应进行制备。
如本文所用，提及本发明化合物或其他药物活性剂的“治疗有效量”是指在合理的医学判断范围内，足以治疗或预防患者疾病但足够低地避免严重副作用(在合理的利益/风险比)的量。化合物的治疗有效量将根据所选择的具体化合物(例如考虑化合物的效力、有效性和半衰期)；所选择的给药途径；所治疗的疾病；所治疗的疾病的严重性；所治疗的患者的年龄、大小、体重和身体疾病；所治疗的患者的医疗史；治疗持续时间；并行疗法的性质；所需的治疗效果；和类似因素而变化，但仍可由本领域技术人员进行常规确定。
B.化合物
本发明提供，在第一方面，式(I)的化合物及其盐：
其中
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
R3选自:
a)N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1、2、3或4个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-6烷基，任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和环丙基，和
C1-6烷氧基，该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，
其中当该N-连接的4-6元杂环基环包含可取代的氮原子时，取代基基团还包括任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基的4-6元杂环基环：卤素、羟基和C1-3烷氧基，并且该4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子；
b)NHR7；和
c)OR7；
R4和R5独立地选自H、羟基和卤素；
X1为CR6，其中R6为C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：羟基、卤素和C1-3烷氧基；
R7独立地选自:
C4-6环烷基，该环烷基任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2 或3个卤素或羟基基团，和
含氮或含氧的4-6元杂环基，其任选取代有一个或多个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团；且
R8为氢或C1-3烷基。
在本发明另一方面，本发明提供包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物组合物。
在另一方面，本发明提供式(I-A)的化合物及其盐:
其中
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
R3选自:
a)N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-6烷基，任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和环丙基，和
C1-6烷氧基，该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，
其中当该N-连接的4-6元杂环基环包含可取代的氮原子时，取代基基团还包括任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基的4-6元杂环基环：卤素、羟基和C1-3烷氧基，并且该4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子；
b)NHR7；和
c)OR7；
R4和R5独立地选自H、羟基和卤素；
X1为CR6，其中R6为C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：羟基、卤素和C1-3烷氧基；且
R7独立地选自:
C4-6环烷基，该环烷基任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2 或3个卤素或羟基基团，和
含氮或含氧的4-6元杂环基，其任选取代有一个或多个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团。
在本发明另一方面，本发明提供药物组合物，其包含式(I-A)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
在一个实施方案中，R1选自C1-3烷基和C1-3烷氧基。在一个实施方案中， R1选自甲基和甲氧基。在一个实施方案中，R1为甲基。
在一个实施方案中，R2选自H、卤素和C1-3烷基。在一个实施方案中， R2为C1-3烷基。在一个实施方案中，R2选自H、卤素和甲基。在一个实施方案中，R2选自H、氟、氯和甲基。在一个实施方案中，R2选自H、氯和甲基。在一个实施方案中，R2选自氯和甲基。在一个实施方案中，R2为甲基。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1 或2个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-6烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和环丙基，和
C1-6烷氧基，该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，
其中当该N-连接的4-6元杂环基环包含可取代的氮原子时，取代基基团还包括任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基的4-6元杂环基环：卤素、羟基和C1-3烷氧基，条件是该4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1 或2个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，和
C1-3烷氧基，该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其选自吗啉基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基和哌嗪基，它们任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，和
C1-3烷氧基，该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其选自吗啉基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基和哌嗪基，它们任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
羟基,
C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，和
C1-3烷氧基，该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基。
在一个实施方案中，R3为N-连接的吗啉基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
羟基,
C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，和
C1-3烷氧基，该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基。
在一个实施方案中，R3为任选取代有一个C1-3烷基取代基的N-连接的吗啉基环，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基。
在一个实施方案中，R3为(2-羟基甲基)-吗啉-4-基。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其包含可取代的氮原子，且取代有另一4-6元杂环基环，该另一4-6元杂环基环任选取代有 1、2或3个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，且条件是该另一4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其包含可取代的氮原子，且在所述可取代的氮原子上取代有氧杂环丁烷基。
在一个实施方案中，R4和R5独立地选自H和卤素。在一个实施方案中， R4和R5独立地选自H和氟。在一个实施方案中，R4和R5都为氢。
在一个实施方案中，R6为未取代的C1-3烷基。在一个实施方案中，R6为甲基。
在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其盐，其中R1、R2、 R4、R5、X1和R6如上定义，且R3为N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷基(该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基)和C1-3烷氧基 (该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基)。在该实施方案中，R1、R2、R4、R5、X1和R6可进一步如上述实施方案任一个所定义。例如，R1可选自C1-3烷基和C1-3烷氧基和R2可选自H、卤素和C1-3烷基。
在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐为实施例1至 4任一个的化合物，或其盐。
在一个实施方案中，式(I)的化合物或其盐为(4-(2-甲基-6-(5-甲基 -6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基) 甲醇或(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H- 吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或这些化合物任一种的盐。在一个实施方案中，式(I)的化合物为(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基) 哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基 -6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基) 甲醇。
在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐为(R)-(4-(2- 甲基-6-(5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶 -4-基)吗啉-2-基)甲醇或其盐。在一个实施方案中，式(I)的化合物为(R)-(4-(2- 甲基-6-(5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶 -4-基)吗啉-2-基)甲醇。
在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐为(S)-(4-(2- 甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或其盐。在一个实施方案中，式(I)的化合物为 (S)-(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑 -1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇。
在一个实施方案中，本发明提供式(I-A)的化合物或其药学上可接受的盐，其为实施例A-1至A-4任一个的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，本发明提供式(I-A)的化合物，其为实施例A-1至A-4任一个的化合物。
本发明提供，在另一方面，式(I-B)的化合物及其盐：
其中
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
RR1、RR2和RR3独立地为氢或C1-3烷基；
R8为氢或C1-3烷基；且
n为1或2；
条件是当n为1且R8为氢时，RR2、RR1和RR3不都为氢。
在本发明另一方面，本发明提供药物组合物，其包含式(I-B)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
在一个实施方案中，R1选自C1-3烷基和C1-3烷氧基。在一个实施方案中， R1选自甲基或甲氧基。在一个实施方案中，R1为甲基。
在一个实施方案中，R2选自H、卤素和C1-3烷基。在一个实施方案中， R2为C1-3烷基。在一个实施方案中，R2选自H、卤素和甲基。在一个实施方案中，R2选自H、氟、氯和甲基。在一个实施方案中，R2选自H、氯和甲基。在一个实施方案中，R2选自氯和甲基。在一个实施方案中，R2为甲基。
在一个实施方案中，n为1或2，RR1为甲基，RR2为氢，且RR3为氢。在一个实施方案中，n为1，RR1为甲基，RR2为氢，且RR3为氢。
在一个实施方案中，n为1或2，RR1为氢，RR2为甲基，且RR3为氢。在一个实施方案中，n为1，RR1为氢，RR2为甲基，且RR3为氢。
在一个实施方案中，n为1或2，RR1为氢，RR2为氢，且RR3为甲基。在一个实施方案中，n为1，RR1为氢，RR2为氢，且RR3为甲基。
在一个实施方案中，n为2且RR1、RR2和RR3为氢。
在一个实施方案中，R8为氢或甲基。在一个实施方案中，R8为氢。
在一个实施方案中，本发明提供式(I-B)的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1。在该实施方案中，R1、R2、RR2、RR1、RR3和R8可进一步如上述实施方案任一个所定义。例如，R2可为甲基。
在一个实施方案中，本发明提供式(I-B)的化合物，其选自:
(6-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇；
(5-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇；
2-(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇；
(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-5-甲基吗啉-2-基)甲醇；
(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉-2-基)甲醇；
(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(2-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇；
(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(2-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇；
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供式(I-B)的化合物或其药学上可接受的盐，其为实施例B-1至B-28任一个的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，本发明提供式(I-B)的化合物，其为实施例B-1至B-28任一个的化合物。
本发明进一步提供式(I-C)的化合物及其盐：
其中
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
R3为氢或羟基；
R8为氢或C1-3烷基；
RR1、RR2和RR3独立地为氢或C1-3烷基；
RR4为氢或羟基；且
n为1或2。
在本发明另一方面，本发明提供药物组合物，其包含式(I-C)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
在一个实施方案中，R1选自C1-3烷基和C1-3烷氧基。在一个实施方案中， R1选自甲基或甲氧基。在一个实施方案中，R1为甲基。
在一个实施方案中，R2选自H、卤素和C1-3烷基。在一个实施方案中， R2选自C1-3烷基。在一个实施方案中，R2选自H、卤素和甲基。在一个实施方案中，R2选自H、氟、氯和甲基。在一个实施方案中，R2选自H、氯和甲基。在一个实施方案中，R2选自氯和甲基。在一个实施方案中，R2为甲基。
在一个实施方案中，RR1为氢，RR2为氢，RR3为氢，且R8为氢。
在一个实施方案中，RR1为氢，RR2为氢，RR3为C1-3烷基，且R8为氢。
在一个实施方案中，RR1为氢，RR2为氢，RR3为甲基，且R8为氢。
在一个实施方案中，n为1。
在一个实施方案中，RR4为氢。
在一个实施方案中，RR4为羟基。
在一个实施方案中，本发明提供式(I-C)的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1。在该实施方案中，R1、R2、RR1、RR2、RR3、RR4和R8可进一步如上述实施方案任一个所定义。例如，RR1、RR2、RR3和R8可为氢。
在一个实施方案中，本发明提供式(I-C)的化合物或其药学上可接受的盐，其为实施例C-1至6任一个的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，本发明提供式(I-C)的化合物，其为实施例C-1至C-6任一个的化合物。
除了本文所述化合物的游离碱形式，该化合物的盐形式也在本发明的范围内。本文所述化合物的盐或药学上可接受的盐可在该化合物的最终分离和纯化过程中原位制备或者通过单独地将其游离碱形式的纯化的化合物分别与合适的碱或酸反应进行制备。有关合适的药用的盐的综述参见Berge等人， J.Pharm，Sci.，66，1-19，1977；P L Gould，International Journal of Pharmaceutics，33(1986)，201-217；和Bighley等人，Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，Marcel Dekker Inc，New York 1996，Volume 13， page 453-497。
某些式(I)的化合物含有碱性基团并因此能够通过用合适的酸处理形成药学上可接受的酸加成盐。合适的酸包括药学上可接受的无机酸和药学上可接受的有机酸。示例性的药学上可接受的酸加成盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、甲基硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、氨基磺酸盐、磷酸盐、乙酸盐、羟基乙酸盐、苯基乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、异丁酸盐、戊酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙烯酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、水杨酸盐、对氨基水杨酸盐、乙醇酸盐、乳酸盐、庚酸盐、邻苯二甲酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、扁桃酸盐、鞣酸盐、甲酸盐、硬脂酸盐、抗坏血酸盐、棕榈酸盐、油酸盐、丙酮酸盐、双羟萘酸盐、丙二酸盐、月桂酸盐、戊二酸盐、谷氨酸盐、丙酸酯月桂硫酸盐(estolate)、甲磺酸盐(methanesulfonate，mesylate)、乙磺酸盐(ethanesulfonate，esylate)、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate，besylate)、对氨基苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐(p-toluenesulfonate，tosylate)和萘-2-磺酸盐。在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐包括L-酒石酸盐、乙二磺酸盐(ethanedisulfonate，edisylate)、硫酸盐、磷酸盐、对甲苯磺酸盐 (p-toluenesulfonate，tosylate)、盐酸盐、甲磺酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、苯磺酸盐、马来酸盐、氢溴酸盐、L-乳酸盐、丙二酸盐和S-樟脑-10-磺酸盐。在一些实施方案中，这些盐中的一些形成溶剂合物。在一些实施方案中，这些盐中的一些是结晶的。
某些式(I)化合物或其盐可以以立体异构形式存在(例如，它们可以含有一个或多个不对称碳原子)。单独的立体异构体(对映异构体和非对映异构体)及其混合物包括在本发明的范围内。可以通过常规方法将不同的异构形式彼此分离或拆分，或者可以通过常规合成方法或通过立体特异性或不对称合成获得任何给定的异构体。
本发明还包括同位素标记的化合物和盐，其与式(I)化合物或其盐相同，除了以下事实不同：一个或多个原子被具有与自然界中最常见的原子质量或质量数不同的原子替代。可掺入式(I)化合物或其盐的氢、碳、氮、氟的同位素的实例，例如3H、11C、14C和18F。这种同位素标记的式(I)化合物或其盐用于药物和/或底物组织分布测定。例如，11C和18F同位素用于PET(正电子发射断层扫描)。PET用于脑部成像。同位素标记的式(I)化合物及其盐通常可通过进行下文公开的操作制备，用易得的同位素标记试剂替代非同位素标记的试剂。在一个实施方案中，式(I)化合物或其盐不是同位素标记的。
一些式(I)化合物或其盐可以固体或液体形式存在。在固体状态下，式(I) 化合物或盐可以结晶或非结晶形式或其混合物的形式存在。对于结晶形式的式(I)化合物或盐，本领域技术人员将理解，可形成药学上可接受的溶剂合物，其中在结晶过程中溶剂分子被掺入晶格中。溶剂合物可包括非水溶剂，例如乙醇、异丙醇、DMSO、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯，或它们可包括水作为掺入该晶格中的溶剂。其中水是被掺入到该晶格的溶剂的溶剂合物通常被称为“水合物”。水合物包括化学计量的水合物以及含有可变量的水的组合物。
本领域技术人员还将理解，以结晶形式存在的一些式(I)化合物、其药学上可接受的盐或其溶剂合物(包括其各种溶剂合物)可呈现多态性(即能够以不同的晶体结构存在)。这些不同的结晶形式通常被称为“多晶型物”。多晶型物具有相同的化学组成，但是在堆积、几何排列和结晶固态的其他描述性性质上不同。因此，多晶型物可具有不同的物理性质，例如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶出性质。多晶型物通常呈现出不同的熔点、IR光谱和X射线粉末衍射图，其可用于鉴定。本领域技术人员将理解，例如通过改变或调整在制备化合物中所用的反应条件或试剂，可产生不同的多晶型物。例如，温度、压力或溶剂的改变可导致多晶型物。此外，一种多晶型物可在一定条件下自发地转化成另一多晶型物。
本领域技术人员也理解，本发明可含有式(I)化合物或其药学上可接受的盐的各种氘代形式。与碳原子相连的各可用氢原子可独立地被氘原子替代。本领域技术人员将知道如何合成式(I)化合物或其药学上可接受的盐的氘代形式。市售可得的氘代起始原料可用于制备式(I)化合物或其药学上可接受的盐的氘代形式，或它们可使用采用了氘代试剂(例如氘代氢化锂铝)的常规技术进行合成。
C.使用方法
式(I)化合物或其药学上可接受的盐是LRRK2激酶活性抑制剂并因此被认为在治疗或预防以下神经性疾病中具有潜在用途：帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、痴呆(包括路易体痴呆和血管性痴呆、HIV-诱导的痴呆)、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、年龄相关的记忆功能障碍、轻度认知损伤、嗜银颗粒病、皮克氏病、皮质基底节变性、进行性核上性麻痹、与17号染色体有关的遗传性额颞性痴呆及帕金森综合症(FTDP-17)、药物成瘾相关的戒断症状/复发、 L-多巴诱导的运动障碍、缺血性发作、外伤性脑损伤、脊髓损伤和多发性硬化。其它潜在可通过抑制LRRK2治疗的疾病包括，但不限于，溶酶体疾病(例如，尼曼-皮克C型疾病、戈谢病)、克罗恩病、癌症(包括甲状腺癌、肾癌(包括***状肾癌)、乳腺癌、肺癌和***癌、白血病(包括急性髓性白血病(AML))和淋巴瘤)、类风湿关节炎、***性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血、单纯红细胞再生障碍、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、埃文斯综合征、血管炎、大疱性皮肤病、I型糖尿病、肥胖症、癫痫、肺部疾病如慢性阻塞性肺疾病、特发性肺纤维化、Sjogren综合征、Devic疾病、炎性肌病、强直性脊柱炎、细菌感染(包括麻风)、病毒感染(包括结核病、HIV、西尼罗河病毒和基孔肯雅病毒)和寄生虫感染。
本发明的一个方面提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防上述疾病(即神经病和以上列出的其它疾病)。在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防帕金森病。在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗帕金森病。在另一实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防阿尔茨海默病。在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗阿尔茨海默病。在另一实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗其用于治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)。
在一个实施方案中，本发明提供式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物，或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)。
在另一实施方案中，本发明提供式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物，或其药学上可接受的盐，其用于治疗帕金森病。
本发明的另一方面提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防上述疾病(即神经病和以上列出的其它疾病)的药物中的用途。本发明的另一方面提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防帕金森病的药物中的用途。本发明的另一方面提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。在另一实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防阿尔茨海默病的药物中的用途。在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗阿尔茨海默病的药物中的用途。在另一实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)的药物中的用途。
在一个实施方案中，本发明提供式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物，或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)的药物中的用途。
在另一实施方案中，本发明提供式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物、其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防帕金森病的药物中的用途。
在另一实施方案中，本发明提供式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物，或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。
本发明的另一方面提供治疗或预防以上列出的疾病的方法(即选自神经病和以上列出的其它疾病)，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I) 的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的另一方面提供治疗或预防帕金森病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的另一方面提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的另一方面提供治疗或预防阿尔茨海默病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的另一方面提供治疗阿尔茨海默病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I) 的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的另一方面提供治疗结核病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，所述受试者为人。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)的方法，其包括向需要的人给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的人给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的上下文，帕金森病的治疗是指散发性帕金森病和/或家族性帕金森病的治疗。在一个实施方案中，帕金森病的治疗是指家族性帕金森病的治疗。家族性帕金森病患者为经历以下一种或多种LRRK2激酶突变的患者： G2019S突变、N1437H突变、R1441G突变、R1441C突变、R1441H突变、Y1699C 突变、S1761R突变、或I2020T突变。在另一实施方案中，家族性帕金森病患者在与帕金森病相关的LRRK2位点表达其它编码突变(如G2385R)或非编码单核苷酸多态性。在一个更具体实施方案中，家族性帕金森病包括表达 LRRK2激酶中的G2019S突变或R1441G突变的患者。在一个实施方案中，帕金森病的治疗是指家族性帕金森病的治疗，包括表达具有G2019S突变的 LRRK2激酶的患者。在另一实施方案中，家族性帕金森病患者表达异常高水平的正常LRRK2激酶。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的表达LRRK2激酶中的G2019S突变的人给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括测试人的 LRRK2激酶中的G2019S突变且向需要的表达LRRK2激酶中的G2019S突变的人给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
治疗帕金森氏病可以是对症的或可为缓和疾病的。在一个实施方案中，治疗帕金森氏病是指对症治疗。在一个实施方案中，治疗帕金森氏病是指缓和疾病的治疗。
本发明化合物也可用于治疗根据以下的一种或多种与疾病进展相关的精细特征被确定为易于进展成重症帕金森病的患者：例如家族史、嗅觉障碍、便秘、认知缺陷、步态或从分子、生化、免疫或成像技术中获得的疾病进展的生物指示。在上下文中，治疗可以是对症的或缓和疾病的。
在本发明的上下文中，治疗阿尔茨海默氏病是指治疗散发性阿尔茨海默氏病和/或家族性阿尔茨海默氏病。治疗阿尔茨海默氏病可以是对症的或可以是缓和疾病的。在一个实施方案中，治疗阿尔茨海默氏病是指对症治疗。
在本发明的上下文，痴呆(包括路易体痴呆和血管性痴呆、HIV-诱导的痴呆)、肌萎缩侧索硬化(ALS)、年龄相关的记忆功能障碍、轻度认知缺损、嗜银颗粒疾病、皮克氏病、皮质基底节变性、进行性核上性麻痹、与17号染色体有关的遗传性额颞性痴呆及帕金森综合症(FTDP-17)、多发性硬化、溶酶体疾病(例如、尼曼-皮克C型疾病、戈谢病)、克罗恩病、癌症(包括甲状腺癌、肾(包括***状肾)、乳腺癌、肺癌和***癌、白血病(包括急性骨髓性白血病(AML))和淋巴瘤)、类风湿性关节炎、***性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血、单纯红细胞再生障碍、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、埃文斯综合征、血管炎、大疱性皮肤疾病、1型糖尿病、肥胖症、癫痫、肺部疾病如慢性阻塞性肺疾病、特发性肺纤维化、Sjogren综合征、Devic疾病、炎性肌病、强直性脊柱炎的治疗，可为对症的或改变疾病的。在某些实施方案中，这些疾病的治疗是指对症治疗。
本发明还提供了LRRK2抑制剂在体外生成神经元祖细胞中的用途，其用在CNS障碍的基于细胞的治疗的后续治疗应用中。
当式(I)化合物或其药学上可接受的盐旨在用于治疗帕金森氏病时，其可与宣称用于对症治疗帕金森氏病的药物组合使用。这种其他治疗剂的合适的实例包括L-多巴和多巴胺激动剂(例如普拉克索、罗匹尼罗)。
当式(I)化合物或其药学上可接受的盐旨在用于治疗阿尔茨海默氏病时，其可与宣称用于缓和疾病的或对症治疗阿尔茨海默氏病的药物组合使用。这种其他治疗剂的合适的实例可以是对症药物，例如已知改变胆碱能传递的那些，例如M1毒蕈碱性受体激动剂或变构调节剂、M2毒蕈碱性拮抗剂、乙酰胆碱酯酶抑制剂(如四氢氨基吖啶、多奈哌齐盐酸盐、利伐斯的明和加兰他敏)、烟碱性受体激动剂或变构调节剂(例如α7激动剂或变构调节剂或α4β2激动剂或变构调节剂)、PPAR激动剂(例如PPARγ激动剂)、5-HT4受体部分激动剂、5-HT6受体拮抗剂例如SB-742457或5HT1A受体拮抗剂和NMDA受体拮抗剂或调节剂或疾病缓和剂(例如β或γ-分泌酶抑制剂例如司马西特)、线粒体稳定剂、微管稳定剂或Tau病理的调节剂，例如Tau聚集抑制剂(例如亚甲基蓝和 REMBERTM)，NSAIDS，例如tarenflurbil，tramiprosil；或抗体例如巴匹珠单抗或索拉珠单抗；蛋白聚糖例如tramiprosate。
当式(I)的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗细菌感染、寄生虫感染或病毒感染时，它可与声称可用作直接针对传染因子的对症治疗的药物组合使用。
当式(I)化合物或其药学上可接受的盐与其他治疗剂组合使用时，所述化合物可以任意方便的途径依次或同时给药。
在其他方面，本发明还提供了组合，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及其他治疗剂或药剂。
上文提及的组合可方便地用在药物制剂的形式中并因此包含上述组合以及药学上可接受的载体或赋形剂的药物制剂构成了本发明的其他方面。这种组合的单一组分可在单独或组合的药物制剂中依次或同时给药。
当式(I)化合物或其药学上可接受的盐与治疗同一疾病状态的第二治疗活性剂组合使用时，各化合物的剂量可能与该化合物单独使用时的量不同。适当的剂量将由本领域技术人员容易地理解。
D.组合物
式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可在给药于受试者之前配制为药物组合物。根据一方面，本发明提供包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。根据另一方面，本发明提供制备药物组合物的方法，其包括将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的赋形剂混合。
药物组合物可以每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂型存在。这种单位可含有，例如，0.1mg、0.5mg或1mg-50mg、100mg、200mg、250 mg、500mg、750mg或1g的本发明化合物，其取决于所治疗的疾病、给药途径和受试者的年龄、体重和症状，或者药物组合物可以每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂型存在。在另一实施方案中，所述单位剂量组合物是含有本文所述的每日剂量或亚剂量或其适当分数的活性成分的那些。此外，这种药物组合物可通过本领域技术人员熟知的任意方法制备。
式(I)的化合物的治疗有效量将取决于许多因素，包括，例如，预期接受者的年龄和体重、需要治疗的精确症状及其严重性、制剂的性质和给药途径且最终将由开具药品处方的医务人员决定。但是，用于治疗本发明所述疾病的式(I)的化合物的治疗有效量通常将在每天0.1至100mg/kg接受者体重的范围内和更通常在每天1-10mg/kg体重的范围内。因此，对于70kg成人哺乳动物，每日的实际量通常为70至700mg且该量以每天单一剂量进行给药或以每天若干亚剂量进行给药，例如每天给药2、3、4、5或6个剂量。或者所述给药可间歇进行，例如每隔一天一次、每周一次或每月一次。药学上可接受的盐或溶剂合物等的治疗有效量可确定为式(I)化合物本身的治疗有效量的比例。可以设想，类似的剂量将适用于治疗上文提及的其他疾病。
本发明的药物组合物可含有一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药物组合物可含有一种以上的本发明化合物。例如，在一些实施方案中，所述药物组合物可含有两种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。此外，所述药物组合物可任选地还包含一种或多种额外的活性药物成分(API)。
如本文所用，“药学上可接受的赋形剂”是指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，其参与提供药物组合物形状和硬度。混合时，各赋形剂可与该药物组合物的其他成分相容，使得避免当给药至受试者时显著降低本发明化合物功效的相互作用和将形成不是药学上可接受的药物组合物的相互作用。
可将本发明化合物和药学上可接受的赋形剂或赋形剂配制成适于以所需给药途径给药至受试者的剂型。例如，剂型包括适于以下的那些：(1)口服给药(包括口腔或舌下)，例如片剂、胶囊剂、小胶囊剂、丸剂、锭剂、粉剂、糖浆剂、酏剂、混悬液、溶液、乳液、囊剂和扁囊剂；(2)胃肠外给药(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)，例如无菌溶液、混悬液和用于重构的粉剂； (3)经皮给药，例如透皮贴剂；(4)直肠给药，例如栓剂；(5)经鼻吸入，例如干粉、气雾剂、混悬液和溶液；和(6)局部给药(包括口腔、舌下或透皮)，例如乳膏剂、软膏剂、洗剂、溶液、糊剂、喷雾剂、泡沫剂和凝胶剂。这种组合物可以本领域已知的任意方法进行制备，例如通过将式(I)化合物与载体或赋形剂结合。
适于口服给药的药物组合物可作为离散单元存在，例如胶囊剂或片剂；粉剂或颗粒剂；在水性或非水液体中的溶液或混悬液；可食用泡沫剂或搅打剂(whip)；或水包油液体乳液或油包水液体乳液。
合适的药学上可接受的赋形剂将根据所选具体的剂型而变化。此外，可根据在组合物中所起的具体功能来选择合适的药学上可接受的赋形剂。例如，可根据促进制备均一剂型的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。可根据促进制备稳定的剂型的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。可根据在给药至受试者后促进本发明的一种或多种化合物从身体的一个器官或部分携带或运输至身体的另一器官或部分的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。某些药学上可接受的赋形剂可根据其提高患者顺应性的能力进行选择。
合适的药学上可接受的赋形剂包括下列赋形剂类型：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、粒化剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、增甜剂、调味剂、掩味剂、着色剂、防结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域技术人员将理解，某些药学上可接受的赋形剂可以以多于一种功能和以替代性功能来使用，取决于所述赋形剂在制剂中存在多少和在制剂中存在何种其它成分。
具有本领域的知识和技术的技术人员能够选择出以适当量用于本发明的合适的药学上可接受的赋形剂。此外，有许多本领域技术人员可用的资源，这些资源描述了药学上可接受的赋形剂且其可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)，The Handbook of Pharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited)，和The Handbook of Pharmaceutical Excipients(the American Pharmaceutical Association and thePharmaceutical Press)。
本发明的药物组合物使用本领域技术人员已知的技术和方法制备。通常用于本领域的一些方法描述在Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack PublishingCompany)中。
一方面，本发明涉及固体口服剂型，例如片剂或胶囊剂，其包含治疗有效量的本发明化合物以及稀释剂或填充剂。合适的稀释剂和填充剂包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶化淀粉)、纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)、硫酸钙和磷酸氢钙。口服固体剂型还可包含粘合剂。合适的粘合剂包括淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶化淀粉)、明胶、***胶、海藻酸钠、海藻酸、西黄蓍胶、瓜尔胶、聚维酮和纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)。口服固体剂型还可包含崩解剂。合适的崩解剂包括交聚维酮、淀粉羟乙酸钠、交联羧甲基纤维素、海藻酸和羧甲基纤维素钠。口服固体剂型还可包含润滑剂。合适的润滑剂包括硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙和滑石。
在一些实施方案，本发明涉及药物组合物，其包含0.01至1000mg的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和0.01至5g一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在另一实施方案中，本发明涉及用于治疗神经变性疾病的药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。在另一实施方案中，本发明涉及用于治疗帕金森病的药物组合物，其包含式(I) 的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
E.制备化合物的方法
在制备式(I)的化合物或其盐中所用的方法取决于所需化合物。作为选择特定取代基以及特定取代基的各种可能的位点的这种因素在制备本发明特定化合物所遵循的路径中均发挥作用。本领域技术人员很容易鉴定出那些因素。
一般而言，本发明化合物可通过本领域已知的标准技术和已知的类似方法进行制备。用于制备式(I)的化合物的一般方法如下所述。下文中总的实验方案中所述的起始原料和试剂是市售可得的或可通过本领域技术人员已知的方法进行制备。
本领域技术人员将理解，如果本文所述取代基与本文所述的合成方法不相容，则可将该取代基用对该反应条件稳定的合适的保护基进行保护。所述保护基可在该反应顺序的合适的点脱除，得到所需的中间体或目标化合物。使用这种合适的保护基来保护和脱保护不同的取代基的合适的保护基和方法是本领域技术人员熟知的；其实例可见于T.Greene和P.Wuts，Protecting Groups in Chemical Synthesis(第3版)，John Wiley&Sons，NY(1999)。在一些情况下，可特异性地选择在所用反应条件下反应性的取代基。在这些情况下，该反应条件将所选取代基转化成另一取代基，其可用作中间体化合物或为目标化合物的所需取代基。
一般方案A-1提供制备本发明化合物的示例性合成方法。
一般方案A-1
一般方案A-1提供制备代表式(I-A)的化合物的化合物3的示例性合成。在方案A-1中，R1、R2、R3、R4、R5和X1如式(I-A)中定义。
步骤(i)可为取代反应，其通过将化合物1与化合物2使用合适的碱如 Cs2CO3在合适的溶剂如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中在合适的温度如约100 ℃反应以提供化合物3。
步骤(i)也可为偶合反应，其使用合适的试剂如CuI和N,N'-二甲基-环己烷-1,2-二胺在合适的碱如K3PO4的存在下在合适的溶剂如甲苯中在合适的温度如回流条件以提供化合物3。
步骤(i)也可为偶合反应，其使用合适的试剂如Pd2dba3和二-叔丁基 (2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯]-2-基)膦在合适的碱如叔丁醇钠的存在下在合适的溶剂如甲苯中在合适的温度如100℃以提供化合物3。
一般方案A-2
一般方案A-2提供制备中间体1的示例性合成。保护基P1，可为任何合适的保护基例如，四氢-2H-吡喃-2-基(THP)、(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基 (SEM)或乙酰基(Ac)。
中间体5可在步骤(i)中获得，其通过将起始材料4与合适的试剂如DHP 在合适的酸如TsOH的存在下在合适的溶剂如DCM中在合适的温度如20℃至40℃反应。
步骤(ii)为中间体5和硼酸或酯的交叉偶合反应，其使用合适的钯催化剂如Pd(dppf)Cl2在合适的碱如Na2CO3的存在下在合适的溶剂如1,4-二噁烷中在合适的温度如60℃至100℃。
步骤(iii)涉及在合适的溶剂如THF中在合适的温度如-60℃至-10℃与合适的氧化试剂如H2O2反应以提供中间体7。
步骤(iv)为在合适的催化剂如Pd/C的存在下在极性溶剂如MeOH中在合适的温度如25℃至80℃与合适的还原试剂如氢的反应。
步骤(v)可为在合适的溶剂如DCM中在合适的温度如0℃至25℃与氧化剂如DMP的氧化反应以得到中间体8。
步骤(vi)和(vii)涉及在合适的溶剂如DCM中在合适的温度如-78℃至0 ℃与氟化剂如DAST的反应。
步骤(viii)(ix)和(x)为脱保护反应。通常，中间体与合适的酸如HCl在合适的溶剂如1,4-二噁烷中在合适的温度如25℃至40℃反应以得到中间体1。
步骤(xi)涉及在合适的还原剂如NaBH3CN存在下在合适的溶剂如 MeOH和CH2Cl2中在合适的温度如室温与取代的氧杂环丁烷-3-酮的反应。
一般方案A-3
一般方案A-3提供制备中间体2的示例性合成。
当R3为N-连接的4-6元杂环基环或NHR7时；步骤(i)可为使用合适的碱如TEA在合适的溶剂如EtOH中在合适的温度如25℃至100℃与不同胺的反应以提供中间体2。
当R3为OR7，步骤(i)为偶合反应。(R7OH)的醇通过合适的碱如氢化钠在合适的溶剂如THF中在合适的温度如0℃脱质子化以得到过渡的中间体。然后中间体13与过渡中间体在合适的溶剂如THF中在合适的温度如室温反应。
***
一般方案B-1提供制备式(I-B)的化合物的合成的示例性方法。
一般方案B-1
一般方案B-1提供制备式(I-B)的化合物的示例性合成。在方案1中， R1、R2、RR1、RR2、RR3和R8和n如式(I-B)定义。
步骤(i)可为取代反应，其通过使用合适的碱如Cs2CO3在合适的溶剂如 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中在合适的温度如约100℃将化合物1与化合物 2反应以提供式(I-B)的化合物。
步骤(i)也可为偶合反应，其使用合适的试剂如CuI和N,N'-二甲基-环己烷-1,2-二胺在合适的碱如K3PO4的存在下在合适的溶剂如甲苯中在合适的温度如回流条件以提供式(I-B)的化合物。
步骤(i)也可为偶合反应，其使用合适的试剂如Pd2dba3和二-叔丁基 (2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯基]-2-基)膦在合适的碱如叔丁醇钠的存在下在合适的溶剂如甲苯中在合适的温度如100℃以提供式(I-B)的化合物。
一般方案B-2
一般方案B-2提供制备中间体1的示例性合成。保护基P1可为氢或任何合适的保护基例如，四氢-2H-吡喃-2-基(THP)、(三甲基甲硅烷基)乙氧基) 甲基(SEM)或乙酰基(Ac)。
中间体4可在步骤(i)中获得，其通过在合适的酸如TsOH的存在下在合适的溶剂如DCM中在合适的温度如20℃至40℃将起始材料3与合适的试剂如DHP反应。
步骤(ii)可为使用合适的钯催化剂如Pd(dppf)Cl2在合适的碱如Na2CO3的存在下在合适的溶剂如1,4-二噁烷中在合适的温度如60℃至100℃将中间体4与合适的试剂如硼酸或酯反应的交叉偶合反应。
步骤(iii)为在合适的溶剂如THF中在合适的温度如-60℃至-10℃与合适的氧化试剂如H2O2的反应。
步骤(iv)可为涉及在合适的溶剂如DCM中在合适的温度如0℃至25℃将中间体6与氧化剂如DMP反应以得到中间体7的氧化反应。
步骤(v)和(vi)涉及在合适的溶剂如DCM在合适的温度如-78℃至0℃与氟化剂如DAST的反应。
步骤(viii)为在合适的催化剂如Pd/C的存在下在极性溶剂如MeOH中在合适的温度如25℃至80℃与合适的还原试剂如氢的反应。
步骤(vii)、(ix)和(x)为脱保护反应，通常涉及在合适的溶剂如1,4-二噁烷中在合适的温度如25℃至40℃与合适的酸如HCl的反应。
步骤(xi)为使用合适的试剂在合适的碱如NaBH3CN的存在下在催化剂例如AcOH的存在下，在合适的溶剂如DCM或DCE中在合适的温度如室温与氧杂环丁烷-3-酮的偶合反应。
一般方案B-3
一般方案B-3提供制备中间体2的示例性合成，其中R1、RR1、RR2、 RR3和n如式(I-B)的化合物中所示。
步骤(i)可为中间体12与不同胺如吗啉的反应，其使用合适的碱如TEA 在合适的溶剂如EtOH中在合适的温度如25℃至100℃以提供中间体2。
中间体2也可在步骤(xx)中通过中间体12与合适的试剂如硼酸的偶合反应获得，其在催化剂如Pd(PPh3)2Cl2的存在下在合适的溶剂如1,4-二噁烷中在25℃至130℃。
一般方案B-4
一般方案B-4提供制备式(I-B)的化合物的替代示例性合成。在方案4中， R1、R2、RR1、RR2、RR3和R8和n如式(I-B)定义。
步骤(i)可为使用合适的碱如Cs2CO3在合适的溶剂如N,N-二甲基甲酰胺 (DMF)中在合适的温度如约100℃的取代反应。
步骤(i)也可为偶合反应，其使用合适的试剂如CuI和N,N'-二甲基-环己烷-1,2-二胺在合适的碱如K3PO4的存在下在合适的溶剂如甲苯中在合适的温度如回流条件。
步骤(ii)可为偶合反应，其使用合适的试剂在合适的碱如NaBH3CN的存在下在催化剂例如AcOH的存在下，在合适的溶剂如DCM或DCE在合适的温度如室温以提供式(I-B)的化合物。
***
一般方案C-1提供制备式(I-C)的化合物的合成的示例性方法。
一般方案C-1
一般方案C-1提供制备式(I-C)的化合物的示例性合成。在方案C-1中， R1、R2、RR1、RR2、RR3、RR4、R8和n如式(I-C)定义。
步骤(i)可为取代反应，其通过使用合适的碱如Cs2CO3在合适的溶剂如 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中在合适的温度如约100℃将化合物1与化合物 2反应以提供式(I-C)的化合物。
步骤(i)也可为偶合反应，其使用合适的试剂如CuI和N,N'-二甲基-环己烷-1,2-二胺在合适的碱如K3PO4的存在下在合适的溶剂如甲苯中在合适的温度如回流条件以提供式(I-C)的化合物。
步骤(i)也可为偶合反应，其使用合适的试剂如Pd2dba3和二-叔丁基(2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯基]-2-基)膦在合适的碱如叔丁醇钠的存在下在合适的溶剂如甲苯中在合适的温度如100℃以提供式(I-C)的化合物。
一般方案C-2
一般方案C-2提供制备式(I-C)的化合物的替代示例性合成。在方案C-2 中，R1、R2、RR1、RR2、RR3、RR4、R8和n如式(I-C)定义。
步骤(i)可为偶合反应，其使用合适的试剂在合适的碱如NaBH3CN的存在下在催化剂例如AcOH的存在下，在合适的溶剂如DCM或DCE在合适的温度如室温以提供式(I-C)的化合物。
一般方案C-3
一般方案C-3提供制备中间体1或3的示例性合成，其中B为H(对于中间体3)或氧杂环丁烷基(对于中间体1)。保护基PG1可为任何合适的保护基例如，四氢-2H-吡喃-2-基(THP)、(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基(SEM)或乙酰基(Ac)。
步骤(i)为在合适的酸如TsOH的存在下在合适的溶剂如DCM中在合适的温度如20℃至40℃与合适的试剂如DHP的反应。
步骤(ii)为与合适的试剂如硼酸或酯的交叉偶合反应，其使用合适的钯催化剂如Pd(dppf)Cl2在合适的碱如Na2CO3的存在下在合适的溶剂如1,4-二噁烷中在合适的温度如60℃至100℃。
步骤(iii)为在合适的溶剂如THF中在合适的温度如-60℃至-10℃与合适的氧化的试剂如H2O2的反应以提供中间体1d。
步骤(iv)为氧化反应，包括在合适的溶剂如DCM中在合适的温度如0℃至25℃与氧化剂如DMP的反应。
步骤(v)和(vii)涉及在合适的溶剂如DCM中在合适的温度如-78℃至0 ℃与氟化剂如DAST的反应。
步骤(ix)为在合适的催化剂如Pd/C的存在下在极性溶剂如MeOH中在合适的温度如25℃至80℃与合适的还原试剂如氢的反应。
步骤(vi)、(viii)和(x)为脱保护反应。通常，在合适的溶剂如1,4-二噁烷中在合适的温度如25℃至40℃中间体与合适的酸如HCl反应以得到中间体1。
一般方案C-4
一般方案C-4提供制备中间体2的示例性合成，其中R1、RR1、RR2、 RR3和RR4如式(I-C)定义。
步骤(i)为中间体12与合适的胺的反应，其使用合适的碱如TEA在合适的溶剂如EtOH中在合适的温度如25℃至100℃。
步骤(i)也可为与合适的试剂如硼酸的偶合反应，其在催化剂如 Pd(PPh3)2Cl2的存在下在合适的溶剂如1,4-二噁烷中在25℃至130℃。
实施例
一般实验方法
以下描述和实施例阐明了本发明。这些实施例不旨在限制本发明的范围，而是为本领域技术人员制备和使用本发明化合物、组合物和方法提供指导。尽管描述了本发明的具体实施方案，但是本领域技术人员将理解，在不脱离本发明的精神和范围的前提下可作出各种变化和修改。
本申请中描述的化合物的化学名称通常从ChemDraw Ultra (ChambridgeSoft)和生成/或通常遵循IUPAC命名法的原理。
用微波照射加热反应混合物是在Smith Creator(购自Personal Chemistry，Forboro/MA，现属于Biotage)、Emrys Optimizer(购自Personal Chemistry)或Explorer(由CEM Discover提供，Matthews/NC)微波上实现的。
常规技术可在本文中用于反应的后处理和实施例产品的纯化。
提及有关有机层或有机相的干燥的下述实施例可以是指用硫酸镁或硫酸钠干燥所述溶液并根据常规技术过滤掉所述干燥剂。产品通常可通过减压蒸发除去溶剂而获得。
在实施例中化合物的纯化可通过常规方法实现，例如色谱法和/或使用合适的溶剂进行重结晶。色谱方法是本领域技术人员已知的且包括例如柱色谱、快速色谱、HPLC(高效液相色谱)和MDAP(质量定向的自动制备，也称为质量定向的LCMS纯化)。MDAP描述于例如W.Goetzinger等人，Int.J. Mass Spectrom.，2004，238、153-162。
Analtech Silica Gel GF和E.Merck Silica Gel 60F-254薄层板用于薄层色谱。无论快速色谱还是重力色谱均是在E.Merck Kieselgel 60(230-400目)硅胶上进行的。制备型HPLC使用Gilson制备***进行，其使用Luna 5u C18(2) 100A反相柱，用10-80梯度(0.1％FA的乙腈溶液/0.1％的FA水溶液)或10-80 梯度(乙腈/水)洗脱。在本申请中用于纯化的CombiFlash***购自Isco，Inc。 CombiFlash纯化使用预填充的SiO2柱、具有在254nm处UV波长的检测器和混合的溶剂来实施。
本文所用术语“CombiFlash”、“Biotage75”和是指市售可得的使用预填充的硅胶筒的自动化纯化***。
最终化合物用LCMS(下文所列条件)或NMR进行表征。1H NMR或19FNMR谱使用BrukerAvance 400MHz光谱仪记录。CDCl3是氘代氯仿， DMSO-d6是六氘代二甲亚砜，和CD3OD(或MeOD)是四氘代甲醇。化学位移以内标物四甲基硅烷(TMS)或NMR溶剂的低磁场百万分之一(ppm)记录。 NMR数据的缩写如下：s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，dd＝双二重峰，dt＝双三重峰，app＝表观，br＝宽峰。J是指 NMR偶合常数，以赫兹计量。
所有的温度以摄氏度记录。所有其他的缩写描述于ACS Style Guide(AmericanChemical Society，Washington，DC，1986)中。
绝对立体化学可通过本领域技术人员已知的方法测定，例如X射线或振动圆二色性(VCD)。
当描述对映异构体或非对映异构体并且手性中心的绝对立体化学未知时，在手性中心使用“*”表示手性中心的绝对立体化学未知，即所绘制的化合物可能是单一R对映体或单一S对映体。当已知对映异构体或非对映异构体的手性中心的绝对立体化学时，适当地使用粗体楔形符号或散列楔形符号而不在手性中心使用“*”。
当描述几何或顺式反式异构体并且异构体的绝对构型未知时，在与几何或顺式-反式异构相关的原子之一上使用“*”表示在该原子或其周围的绝对构型是未知的，即所绘制的化合物可以是单一顺式异构体或单一反式对映异构体。
在后续的操作中，各起始原料之后，通常提供所涉及的中间体。这仅仅是为本领域技术人员提供帮助。该起始原料未必是从所提及的批次制备的。
LCMS条件：
1)酸性方法：
a.仪器：HPLC：Waters UPC2和MS：Qda
流动相：水，包含0.1％FA/0.1％MeCN
柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm 2.1x 50mm和1.7μm 2.1x 100mm
检测：MS和光电二极管阵列检测器(PDA)
b.仪器：HPLC：Shimadzu和MS：2020
流动相：水，包含0.1％FA/0.1％MeCN
柱：Sunfire C18 5μm 50x 4.6mm和Sunfire C18 5μm 150x 4.6mm
检测：MS和光电二极管阵列检测器(PDA)
2)碱性条件：
仪器：HPLC：Agilent 1260和MS：6120
流动相：0.1％NH4OH于H2O中/0.1％NH4OH于ACN中
柱：Xbridge C18 5μm 50x 4.6mm和Xbridge C18 5μm 150x 4.6mm
检测：MS和光电二极管阵列检测器(DAD)
Prep-HPLC条件
仪器：Waters仪器
柱：Xbridge Prep C18柱OBD(10μm，19x 250mm),Xbrige prep C18 10 μm OBD TM19x 150mm，Sunfire Prep C1810x 250mm 5μm，XBRIDGE Prep C18 10x 150mm 5μm等
酸性方法:
流动相：水，包含0.1％TFA/乙腈.
碱性方法:
流动相：水，包含0.1％NH4OH/乙腈.
手性prep-HPLC:
Thar SFC Prep 80(TharSFC ABPR1，TharSFC SFC Prep 80 CO2泵， TharSFC共溶剂泵，TharSFC冷却热交换器和循环浴，TharSFC质量流量计， TharSFC静态混合器，TharSFC注射模块，Gilson紫外检测器，TharSFC馏分收集模块
手性HPLC分析：
仪器：Thar SFC Prep 80(TharSFC ABPR1，TharSFC SFC Prep 80 CO2Pump，TharSFC共溶剂泵，TharSFC冷却热交换器和循环浴，TharSFC 质量流量计，TharSFC静态混合器，TharSFC注射模块，Gilson紫外检测器， TharSFC馏分收集模
手性-HPLC分析:
柱和流动相：描述于以下实施例。
缩写和资源来源
以下缩写和资源在下文使用：
Ac-乙酰基
MeCN-乙腈
Atm–气氛
Aq.–水性
BINAP–2,2'-二(二苯基膦基)-1,1'-联萘
Boc--叔丁基氧基羰基
Boc2O–焦碳酸二叔丁基酯
Bn–苄基
t-Bu–叔丁基
conc.–浓
DAST-N,N-二乙基氨基三氟化硫
DCE-1,2-二氯乙烷
DCM–二氯甲烷
DEA-二乙醇胺
DMEDA–N,N′-二甲基乙二胺
Dess-Martin–1,1,1-三(乙酰基氧基)-1,1-二氢-1,2-苯并二氧杂环戊烯(benziodoxol)-3-(1H)-酮
DHP–3,4-二氢-2H-吡喃
DIBAL-H–氢化二异丁基铝
DIEA–N,N-二异丙基乙基胺
DIPEA–N,N-二异丙基乙基胺
DMA–N,N-二甲基乙酰胺
DMAP–4-二甲基氨基吡啶
DMEDA—N,N'-二甲基乙二胺
DMF–N,N-二甲基甲酰胺
DMP–Dess–Martin高碘烷
DMSO–二甲基亚砜
DPPF–1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁
EA–乙酸乙酯
EDC–1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐
EDCI–3-(乙基亚氨基亚甲基氨基)-N,N-二甲基丙-1-胺
EtOH/EtOH–乙醇
Et2O–***
EtOAc–乙酸乙酯
Et3N–三乙胺
FA–甲酸
HEP-庚烷
Hex-己烷
HOAc—乙酸
HATU–2-(1H-7-氮杂苯并***-1-基)-1,1,3,3-四甲基铀六氟磷酸盐
HOBT–羟基苯并***
IPA–异丙醇
iPrOH/iPrOH–异丙醇
m-CPBA–间氯过苯甲酸
MOMCl—单氯二甲基醚
Me-甲基
MeOH-甲醇
MsCl–甲磺酰氯
NaHMDS–二(三甲基甲硅烷基)酰胺钠
NIS–N-碘代琥珀酰亚胺
NMP–1-甲基-2-吡咯烷酮
NMO–4-甲基吗啉4-氧化物
PE–石油醚
PMB–对甲氧基苄基
Pd2(dba)3–三(二亚苄基丙酮)二钯
Pd(dppf)Cl2–1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷复合物
Ph3P–三苯基膦
PhNTf2–N,N-二-(三氟甲磺酰基)苯胺
PPTS–吡啶鎓对甲苯磺酸盐
PTSA–对甲苯磺酸
rt/RT–室温
Rt–保留时间
sat.–饱和
SEM-Cl–2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物
SFC–超临界流体色谱法
TBAI–四丁基碘化铵
TBDPSCl—叔丁基(氯)二苯基硅烷
TEA–三乙胺
TFA–三氟乙酸
TFAA–三氟乙酸酐
THF–四氢呋喃
TLC–薄层色谱法
TsCl-4-甲苯磺酰氯
TsOH–对甲苯磺酸
描述A-1
(S)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐(DA-1)
向(S)-2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(500mg，2.30mmol)在二噁烷(4 mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，5mL)且在室温搅拌2小时。TLC显示反应完成。将反应混合物浓缩以得到标题化合物(粗的，430mg，产率 >100％)，其为白色固体。
描述A-2
4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(DA-2)
向NaI(11.9g，79.7mmol)在HI(55％，50mL)中的溶液中分批添加4,6- 二氯-2-甲基嘧啶(10.0g，61.3mmol)。所得悬浮液加热至40℃且搅拌1小时。将反应混合物冷却且过滤。将固体用水洗涤，然后用甲醇(50mL)洗涤。将混合物过滤以得到标题化合物(9.0g，产率42％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.07(s，1H)，2.67(s，3H)。
LCMS(流动相：5-95％乙腈，以2.5min)：Rt＝1.59分钟，MS计算值： 346；MS实测值：347[M+H]+.
描述A-3
(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(DA-3)
向(S)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐(430mg粗物质，2.80mmol)在CH3OH(5 mL)中的溶液中添加4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(1.10g，3.10mmol)和TEA(850 mg，8.40mmol)。所得混合物温热至60℃保持2小时。TLC显示反应完成。反应混合物用水(20mL)稀释且用EtOAc(20mL×2)萃取。将合并的有机层浓缩。粗物质通过硅胶柱纯化(PE:EA＝5:1)以得到标题化合物(760mg，产率81％)，其为白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.79(s，1H)，4.18-4.01(m，3H)，3.79-3.58 (m，4H)，3.08-2.99(m，1H)，2.92-2.84(m，1H)，2.46(s，3H)，1.97-1.90(m， 1H)。
描述A-4
6-溴-5-甲基-1H-吲唑(DA-4)
在冰浴中向5-溴-2,4-二甲基苯胺(15.0g，75.0mmol)在氯仿(150mL) 中的溶液中添加Ac2O(15.0，150mmol)、KOAc(8.00g，82.5mmol)、18-冠 -6(10.0g，37.5mmol)和亚硝酸异戊酯(26.3g，225mmol)。将反应混合物回流36小时，然后浓缩以去除溶剂。将残余物溶于EtOAc(500mL)，用水洗涤(100mL)，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。将残余物溶于THF(100mL) 且添加NaOH(4M，40.0mL，160mmol)。将混合物在室温搅拌1h。真空去除溶剂且残余物在EtOAc(400mL)和水(200mL)之间分配。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc 从10:1至5:1)以得到标题化合物(5.1g，产率32％)，其为橙色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ10.20(br s，1H)，7.99(s，1H)，7.75(s， 1H)，7.61(s，1H)，2.50(s，3H)。
描述A-5
6-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(DA-5)
在室温向6-溴-5-甲基-1H-吲唑(5.10g，24.2mmol)在无水DCM(120mL) 中的溶液中添加DHP(4.10g，48.4mmol)、TsOH(0.800g，4.80mmol)和 Mg2SO4(5.0g)。将反应混合物加热至35℃且搅拌1小时。将反应混合物过滤且滤液用Na2CO3溶液(10％，100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE：EtOAc＝50/1至20/1)以得到标题化合物(6.0g，产率84％)，其为橙色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.90(s，1H)，7.84(s，1H)，7.55(s，1H)， 5.63(dd，J＝9.6，3.0Hz，1H)，4.05-4.00(m，1H)，3.78-3.70(m，1H)，2.58-2.44 (m，4H)，2.20-2.02(m，2H)，1.78-1.65(m，3H)。
LCMS(流动相：5-95％CH3CN)：Rt＝2.19分钟，以3min；MS计算值： 294；MS实测值：295[M+H]+.
描述A-6
4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸 叔丁酯(DA-6)
向6-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(5.50g，18.6mmol)、 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(6.90g，22.3mmol)和Na2CO3(4.90g，46.5mmol)在二噁烷(150mL) 和水(130mL)中的悬浮液中添加Pd(dppf)Cl2(658mg，0.900mmol)。混合物用N2脱气3次，然后在80℃搅拌过夜。真空去除溶剂且残余物在EtOAc(300 mL)和水(200mL)之间分配。分离的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc＝10:1)以得到标题化合物 (7.3g，产率99％)，其为浅棕色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.92(s，1H)，7.48(s，1H)，7.28(s，1H)， 5.67(dd，J＝9.6，2.8Hz，1H)，5.63(br s，1H)，4.07-4.01(m，3H)，3.78-3.70 (m，1H)，3.67-3.64(m，2H)，2.62-2.53(m，1H)，2.45-2.39(m，2H)，2.34(s， 3H)，2.18-2.12(m，1H)，2.07-2.02(m，1H)，1.81-1.73(m，2H)，1.69-1.61(m， 1H)，1.52(s，9H)。
描述A-7
4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D A-7)
在H2下向4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶 -1(2H)-甲酸叔丁酯(80g，粗物质)在MeOH(2L)中的溶液中添加Pd/C(10g，12％/W)。反应混合物脱气3次，在室温搅拌2天，过滤且浓缩以得到粗产物，其为白色固体。(65.8g)
LC-MS[流动相：流动相：从30％水(0.1％FA)和70％CH3CN(0.1％FA) 至5％水(0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.63min； MS计算值：399.2，MS实测值：400.5[M+H]+.
描述A-8
5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(D A-8)
向4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(55.4g，139mmol)在MeOH(150mL)中的溶液中添加HCl/MeOH(5M，200 mL)。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩，用Na2CO3aq.处理且用NaOH 水溶液碱化至pH>12。将混合物过滤以得到所需产物，其为白色固体。(29.3 g，产率＝98％)
LC-MS[流动相：流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA) 至5％水(0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.85min； MS计算值：215，MS实测值：216[M+H]+.
描述A-9
3-((苯基磺酰基)亚甲基)氧杂环丁烷(D A-9)
在0℃向(甲基磺酰基)苯(2.2g，13.9mmol)在THF(38mL)中的溶液中经10分钟滴加n-BuLi(2.5M在己烷中，12.2mL，30.6mmol)。将混合物搅拌 30分钟后，将膦酸氯代二乙基酯(2.4mL，16.7mmol)滴加至反应。30分钟或，在-78℃将氧杂环丁烷-3-酮(1.0g，13.9mmol)在THF(2mL)中的溶液滴加至反应混合物。将反应混合物在-78℃搅拌2小时，然后用NH4Cl水溶液 (100mL)稀释且用EtOAc(100mL x 2)萃取。将合并的有机层浓缩且残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝3/1)以得到标题化合物(2.4g，82％)，其为无色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.90-7.88(m，2H)，7.68-7.64(m，1H)， 7.57(t，J＝7.6Hz，2H)，6.13-6.11(m，1H)，5.66-5.64(m，2H)，5.30-5.27(m， 2H)。
描述A-10
5-甲基-6-(1-(3-((苯基磺酰基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D A-10)
向3-((苯基磺酰基)亚甲基)氧杂环丁烷(630mg，2.99mmol)在MeOH(5 ml)中的搅拌溶液中添加5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(500mg，2.32mmol)。将反应混合物在50℃搅拌过夜，然后浓缩。通过柱色谱法纯化得到所需产物，其为白色固体(816mg，产率：82％)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝1.31min；MS计算值： 425，MS实测值：426[M+H]+.
描述A-11
5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D A-11)
向5-甲基-6-(1-(3-((苯基磺酰基)甲基)氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H- 吲唑(400mg，0.940mmol)在MeOH/THF(12ml/2.4ml)中的搅拌溶液中添加 Mg(114mg，4.70mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜。添加另一部分的Mg (152mg，6.27mmol)。将反应混合物在40℃搅拌过夜，然后冷却至室温，用 Et2O稀释，用Na2SO4.10H2O处理，搅拌1小时且过滤。将滤液浓缩且通过柱色谱法纯化(洗脱液：PE:EtOAc＝1:1，然后是CH2Cl2:MeOH＝30:1至15:1) 得到所需产物，其为白色固体(114mg，产率：42％)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.92min；MS计算值： 285，MS实测值：286[M+H]+.
描述A-12
(R)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐(D A-12)
向(R)-2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(500mg，2.30mmol)的溶液添加HCl/二噁烷(4M，10mL)且在室温搅拌1h。TLC显示反应完成。将反应浓缩以得到标题化合物(420mg，产率>100％)，其为白色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ9.67(s，1H)，9.38(s，1H)，3.94-3.88 (m，1H)，3.77-3.67(m，2H)，3.45-3.33(m，2H)，3.13(t，J＝12.6Hz，2H)， 2.95-2.87(m，1H)，2.78-2.67(m，1H)。
描述A-13
(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D A-13)
向(R)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐(423mg粗物质，2.30mmol)在CH3OH(10 mL)中的溶液中添加4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(954mg，2.75mmol)和TEA(835 mg，8.25mmol)。所得混合物温热至70℃且搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物浓缩以去除溶剂，倒入水(40mL)中且用EtOAc(40mL ×2)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过柱纯化(PE:EA＝2:1)以得到标题化合物(639mg，产率83％)，其为白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.79(s，1H)，4.22-4.01(m，3H)，3.79-3.56 (m，4H)，3.08-2.98(m，1H)，2.88-2.84(m，1H)，2.46(s，3H)，2.09-2.04(m， 1H)。
描述A-14
4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(D A-14)
向NaI(1.10g，7.34mmol)在HI(55％，7.5mL)中的溶液中添加4,6-二氯-2-甲氧基嘧啶(1.00g，5.59mmol)。将反应混合物加热至40℃且搅拌10 h，然后倒入冰水(50mL)中且过滤以得到粗固体。残余物通过柱色谱纯化 (PE:EtOAc＝10:1)以得到标题产物(640mg，产率31.7％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.85(s，1H)，4.00(s，3H)。
描述A-15
(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D A-15)：
标题化合物通过类似于D A-3所述的步骤制备，起始于4,6-二碘代-2- 甲氧基嘧啶和(R)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐在iPrOH和DIPEA中的溶液。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.6min]：Rt＝0.92min；MS计算值： 351.1，MS实测值：352.0[M+H]+.
描述A-16
(S)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D A-16)：
标题化合物通过类似于D A-3所述的步骤制备，起始于4,6-二碘代-2- 甲氧基嘧啶和(S)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐在iPrOH和DIPEA中的溶液。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.6min]：Rt＝0.91min；MS计算值：351.1，MS实测值：352.0[M+H]+.
描述B-1
6-溴-5-甲基-1H-吲唑(D B-1)
在冰浴中向5-溴-2,4-二甲基苯胺(15.0g，75.0mmol)在氯仿(150mL) 中的溶液中添加Ac2O(15.0，150mmol)。添加KOAc(8.00g，82.5mmol)、 18-冠-6(10.0g，37.5mmol)和亚硝酸异戊酯(26.3g，225mmol)。将混合物回流36小时。将反应混合物浓缩且将残余物溶于EtOAc(500mL)。有机溶液用水洗涤(100mL)，用Na2SO4干燥且浓缩。将残余物溶于THF(100mL)且添加NaOH(4M，40.0mL，160mmol)。将混合物在室温搅拌1h。真空去除溶剂且残余物在EtOAc(400mL)和水(200mL)之间分配。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc从10:1 至5:1)以得到标题化合物(5.1g，产率32％)，其为橙色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ10.20(br，1H)，7.99(s，1H)，7.75(s， 1H)，7.61(s，1H)，2.50(s，3H)。
描述B-2
6-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(D B-2)
在室温向6-溴-5-甲基-1H-吲唑(5.10g，24.2mmol)在无水DCM(120mL) 中的溶液中添加DHP(4.10g，48.4mmol)、TsOH(0.800g，4.80mmol)和 Mg2SO4(5.0g)。将反应混合物加热至35℃且搅拌1小时。将反应混合物过滤且滤液用Na2CO3的溶液(10％，100mL)洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc从50:1至20:1)以得到标题化合物(6.0g，产率84％)，其为橙色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.90(s，1H)，7.84(s，1H)，7.55(s，1H)， 5.63(dd，J＝9.6，3.0Hz，1H)，4.05-4.00(m，1H)，3.78-3.70(m，1H)，2.58-2.44 (m，4H)，2.20-2.02(m，2H)，1.78-1.65(m，3H)。
LCMS(流动相：5-95％CH3CN)：Rt＝2.19分钟，以3min；MS计算值： 294；MS实测值：295[M+H]+.
描述B-3
4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(D B-3)
向6-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(5.50g，18.6mmol)， 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(6.90g，22.3mmol)和Na2CO3(4.90g，46.5mmol)在二噁烷(150mL) 和水(130mL)中的悬浮液中添加Pd(dppf)Cl2(658mg，0.900mmol)。混合物用N2脱气3次，然后在80℃搅拌过夜。真空去除溶剂且残余物在EtOAc(300 mL)和水(200mL)之间分配。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc＝10:1)以得到标题化合物(7.3g，产率99％)，其为浅棕色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.92(s，1H)，7.48(s，1H)，7.28(s，1H)， 5.67(dd，J＝9.6，2.8Hz，1H)，5.63(br s，1H)，4.07-4.01(m，3H)，3.78-3.70 (m，1H)，3.67-3.64(m，2H)，2.62-2.53(m，1H)，2.45-2.39(m，2H)，2.34(s，3H)，2.18-2.12(m，1H)，2.07-2.02(m，1H)，1.81-1.73(m，2H)，1.69-1.61(m， 1H)，1.52(s，9H)。
描述B-4
4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D B-4)
在H2下向4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶 -1(2H)-甲酸叔丁酯(80g，粗物质)在MeOH(2L)中的溶液中添加Pd/C(10g， 12％/W)。反应混合物脱气3次且在室温搅拌2天。将混合物过滤且将滤液浓缩以得到粗产物，其为白色固体(65.8g)。
LC-MS[流动相：从30％水(0.1％FA)和70％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.63min；MS计算值： 399.2，MS实测值：400.5[M+H]+.
描述B-5
5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(D B-5):
将HCl/MeOH(5M，200mL)添加至4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2- 基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(55.4g，139mmol)在MeOH(150mL) 中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩，用Na2CO3aq.处理且用NaOH水溶液碱化至pH>12。将混合物过滤以得到所需产物，其为白色固体。(29.3g，产率＝98％)
LC-MS[流动相：流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA) 至5％水(0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.85min； MS计算值：215，MS实测值：216[M+H]+.
描述B-6
5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D B-6):
在室温将NaBH3CN(9.40g，149mmol)添加至5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H- 吲唑(16.0g，74.3mmol)、氧杂环丁烷-3-酮(13.4g，223mmol)、沸石(13.4 g)和AcOH(1.56g，1.63mmol)在CH2Cl2/MeOH(320mL/80mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌过夜，过滤且滤饼用CH2Cl2洗涤。滤液用NaHCO3水溶液和盐水洗涤。有机部分用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过柱纯化(PE:EtOAc＝1:1至CH2Cl2:MeOH＝50:1)以得到所需产物，其为白色固体(11.9g，产率＝59％)
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.87min；MS计算值： 271，MS实测值：272[M+H]+.
描述B-7和B-8
(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-6-甲基吗啉-2-基)甲醇(异构体1，D B-7)和 (4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-6-甲基吗啉-2-基)甲醇(异构体2，D B-8):
将DIPEA(886mg，6.90mmol)添加至4,6-二碘代-2-甲基嘧啶_(792mg， 2.29mmol)和(6-甲基吗啉-2-基)甲醇(300mg，2.29mmol)在THF/EtOH(7 mL/7mL)中的溶液中。反应混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩以得到残余物。残余物通过硅胶色谱法纯化(洗脱液：PE:EtOAc＝5:1)得到异构体1白色固体(207mg，产率：25％)和异构体2白色固体(172mg，产率：21％)。
异构体1:
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝1.51min；MS计算值：349，MS实测值：350[M+H]+.
异构体2：
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝1.23min；MS计算值：349，MS实测值：350[M+H]+.
描述B-9和B-10
(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1，D B-9；单一未知异构体2，D B-10)
向4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(792mg，2.29mmol)和(6-甲基吗啉-3-基)甲醇(300mg，2.3mmol)在i-PrOH(10mL)中的溶液中添加DIPEA(886mg， 6.9mmol)。将反应混合物在90℃搅拌过夜，然后浓缩以得到残余物。通过硅胶色谱法纯化(洗脱液：PE:EtOAc＝5:1)得到异构体1，黄色固体(371mg，产率：46％)和异构体2，光亮油状物(80mg，产率：21％)。
异构体1:
LC-MS[流动相：从95％水(0.1％FA)和5％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝3.76min；MS计算值：349，MS实测值：350[M+H]+.
异构体2:
LC-MS[流动相：从95％水(0.1％FA)和5％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝3.66min；MS计算值：34，MS实测值：350[M+H]+.
描述B-11
2-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇(D B-11)
向4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(500mg，1.4mmol)和3-氧杂-1,8-二氮杂螺 [4.5]癸-2-酮(220mg，1.3mmol)在EtOH/THF(7mL/7mL)中的溶液中添加 DIPEA(508mg，3.9mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。去除溶剂且残余物通过硅胶色谱法纯化(PE:EtOAc＝5:1)以得到所需产物，其为白色固体 (371mg，产率：81％)。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.29min；MS计算值： 349.0，MS实测值：350.2[M+H]+.
描述B-12
(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基吗啉-2-基)甲醇(D B-12)
在室温向4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(300mg，0.8mmol)和(5-甲基吗啉 -2-基)甲醇(109mg，0.8mmol)在THF/EtOH＝1/1(30mL)中的溶液中添加 DIEA(320mg，2.5mmol)。将反应在60℃搅拌48h。将反应混合物浓缩且残余物通过硅胶色谱法纯化，用PE:EtOAc＝1:2洗脱以得到产物，其为白色固体(253mg)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.6min]：Rt＝1.01min；MS计算值： 365，MS实测值：366[M+H]+.
描述B-13
4-(1-(6-(2-(羟基甲基)-5-甲基吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D B-13)
将4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.58mmol)和(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基吗啉-2-基)甲醇(637mg，1.75mmol)、 N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(224mg，1.58mmol)、CuI(150mg，0.79mmol) 和K3PO4(670mg，3.16mmol)在甲苯(10mL)中的溶液在100℃搅拌6小时。将混合物浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝1/1)以得到标题化合物(507mg，给出产率)，其为白色固体。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 05-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝2.236min；MS计算值：552，MS实测值：553[M+H]+.
描述B-14
3-(苄基氨基)-2-羟基丁酸甲酯(D B-14)
在0℃向3-氨基-2-羟基丁酸甲酯盐酸盐(25.0g，147mmol)在MeOH (500mL)中的溶液中添加TEA(37.1mL，368mmol)。搅拌10分钟后，将苯甲醛(18.7g，176mmol)添加至反应。将混合物在0℃搅拌10分钟，然后添加NaBH4(8.4g，221mmol)。将混合物在0℃至室温搅拌过夜。该反应用 200mL饱和NH4Cl淬灭。将混合物用EtOAc(500mL x 2)萃取。将有机层浓缩。粗产物通过色谱法使用石油醚/EtOAc＝10:1至2:1纯化以得到标题化合物(10g，31％)，其为黄色油状物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)：δ7.39-7.31(m，5H)，4.70(s，2H)，3.87-3.66 (m，5H)，1.19(d，J＝4.5Hz，3H)。
描述B-15
3-(N-苄基-2-氯乙酰氨基)-2-羟基丁酸甲酯(D B-15)
向3-(苄基氨基)-2-羟基丁酸甲酯(10g，44.8mmol)在DCM(200mL)中的混合物添加DIPEA(11.6g，89.6mmol)，然后添加2-氯乙酰氯(6.07g，54 mmol)。将混合物在0℃搅拌1小时。将混合物用水(200mL)洗涤，用DCM (200mL)萃取。将有机层浓缩。粗产物通过色谱法使用石油醚/EtOAc＝4:1 至1:1纯化以得到化合物(5.1g，38％)，其为棕色油状物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)：δ7.45-7.28(m，5H)，4.75(s，1H)，4.41-4.12 (m，2H)，4.17-4.12(m，2H)，3.76-3.62(m，4H)，1.29-1.18(m，3H)。
描述B-16
4-苄基-3-甲基-5-氧代吗啉-2-甲酸甲酯(D B-16)
在0℃向3-(N-苄基-2-氯乙酰氨基)-2-羟基丁酸甲酯(5.1g，17.0mmol) 在THF(60mL)中的混合物中添加NaH(1.36g，34mmol，60％在矿物油中)。将混合物在0℃至室温搅拌过夜。该反应用20mL饱和NH4Cl淬灭。将混合物用EtOAc(200mL)萃取。有机层用水(100mL)洗涤，且浓缩。粗产物通过色谱法使用石油醚/EtOAc＝4:1至1:1纯化以得到标题化合物(3.4g，77％)，其为黄色油状物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)：δ7.37-7.25(m，5H)，5.50(d，J＝15.0Hz， 1H)，4.34-4.19(m，3H)，3.82-3.71(m，5H)，1.25-1.19(m，3H)。
描述B-17
(4-苄基-3-甲基吗啉-2-基)甲醇(D B-17)
在0℃向4-苄基-3-甲基-5-氧代吗啉-2-甲酸甲酯(3.4g，12.9mmol)在 THF(50mL)中的混合物中添加LiAlH4(980mg，25.8mmol)。将混合物在0℃搅拌30分钟，然后将混合物在室温搅拌1小时。该反应相继用10mL MeOH 和饱和酒石酸钾钠(20mL)淬灭。将混合物用20mLEtOAc稀释且在室温搅拌1小时。将Na2SO4添加至混合物。将混合物过滤且浓缩。粗产物通过色谱法使用石油醚/EtOAc＝2:1至1:1纯化以得到化合物(1.6g，82％)，其为黄色油状物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)：δ7.38-7.29(m，5H)，4.20(d，J＝13.2Hz， 1H)，4.07(dd，J＝12.3，3.3Hz，1H)，3.80-3.71(m，2H)，3.61-3.53(m， 2H)，3.15(d，J＝13.2Hz，1H)，2.82(brs，1H)，2.70(dd，J＝11.7，0.3Hz， 1H)，2.37(dt，J＝11.7，3.3Hz，1H)，2.15(dd，J＝9.6，2.7Hz，1H)，1.29 (d，J＝6.3Hz，3H)。
描述B-18
(3-甲基吗啉-2-基)甲醇盐酸盐(D B-18)
向(4-苄基-3-甲基吗啉-2-基)甲醇(1.6g，7.2mmol)、Pd/C(320mg， 20％W)在MeOH(10mL)中的混合物中添加浓HCl(3滴)。将混合物在50℃在H2(50psi)下搅拌过夜。将混合物过滤且浓缩以得到标题化合物(1.0g， 86％)，其为黄色油状物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ3.87(dd，J＝4.0，1.6Hz，1H)，3.84-3.69 (m，1H)，3.62(dt，J＝10.4，3.6Hz，1H)，3.55-3.51(m，1H)，3.48(s，1H)， 3.46-3.39(m，1H)，3.03-2.94(m，2H)，2.62-2.57(m，1H)，1.17(d，J＝6.4 Hz，3H)。
描述B-19
(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉-2-基)甲醇(D B-19)
在30℃向4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(978mg，3mmol)、(3-甲基吗啉-2- 基)甲醇盐酸盐(500mg，3mmol)和TEA(909mg，9mmol)在i-PrOH(10mL) 中的溶液中搅拌过夜。将混合物用H2O(50mL)稀释，用EtOAc(30mL x 3) 萃取。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝1/1)以得到标题化合物(605mg，55％)，其为无色油状物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ6.68(s，1H)，4.18-4.08(m，2H)，3.99-3.90 (m，7H)，3.71-3.67(m，1H)，3.35-3.30(m，1H)，2.05-2.02(m，1H)，1.36(d， J＝6.8Hz，3H)。
描述B-20
4-(1-(6-(2-(羟基甲基)-3-甲基吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D B-20)
在100℃将4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(476mg，1.51 mmol)和(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉-2-基)甲醇(605mg，1.66 mmol)、N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(214mg，1.51mmol)、CuI(143mg， 0.75mmol)和K3PO4(640mg，3.02mmol)在甲苯(3mL)中的溶液搅拌5小时。将混合物用50mL EtOAc稀释且用NH3H2O(30mL x 3)洗涤。有机层用 Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝ 1/1)以得到标题化合物(540mg，65％)，其为白色固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.70(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)，6.89(s，1H)，4.40-4.35(m，3H)，4.29(s，3H)，4.10-3.93(m，4H)，3.42(t， J＝12.8Hz，1H)，2.98(t，J＝12.4Hz，1H)，2.85-2.80(m，2H)，2.47(s， 3H)，1.88-1.85(m，2H)，1.75-1.65(m，4H)，1.50(s，9H)，1.38(d，J＝6.8 Hz，3H)。
描述B-21
(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉-2-基)甲醇(D B-21)
向4-(1-(6-(2-(羟基甲基)-3-甲基吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(540mg，0.98mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。将混合物在室温搅拌1小时。将饱和NaHCO3添加至混合物以调节pH>7。将混合物用H2O(50mL)稀释，用EtOAc(30mL x 3)萃取。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题化合物(442mg，99％)，其为白色固体。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 10-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝1.679min；MS计算值：452，MS实测值：453[M+H]+.
描述B-22
(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-5-甲基吗啉-2-基)甲醇(D B-22)
4-(1-(6-(2-(羟基甲基)-5-甲基吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(507mg，0.92mmol)在DCM(4mL)和TFA(4 mL)中的溶液。将混合物在室温搅拌2小时。将混合物浓缩。残余物通过 prep-TLC纯化(DCM/MeOH＝10/1)以得到标题化合物(400mg，96％)，其为黄色固体。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 05-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝1.756min；MS计算值：452，MS实测值：353[M+H-100]+.
描述B-23
6-甲基-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯和 2-甲基-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯的混合物(D B-23)
在-70℃向2-甲基-4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(12.5g，58.7mmol)在THF (200mL)中的溶液中添加LiHMDS(65mL，64.5mmol，1.0mol/L在THF中)。将混合物在-70℃搅拌1小时。然后将N,N-二(三氟甲基磺酰基)苯胺(23g， 64.5mmol)在THF(40mL)中的溶液添加至反应。将混合物在-70℃至室温搅拌过夜。该反应用200mL饱和NH4Cl(200mL)淬灭。将混合物用EtOAc(500 mL)萃取。有机层用H2O(200mL)、盐水(100mL)洗涤且浓缩。粗产物通过色谱法使用石油醚/EtOAc＝100:1至10:1纯化以得到化合物(20.3g，100％)，其为黄色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 10-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝2.161min；MS计算值：345，MS实测值：290[M–56+H]+.
描述B-24
6-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶 -1(2H)-甲酸叔丁酯和2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯的混合物(D B-24)
在N2下将6-甲基-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯和2-甲基-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(20.3g，58.8mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(14.4g，58.8mmol)、Pd(dppf)Cl2(4.8g，5.88mol)和KOAc(11.5g，117.7 mmol)在1,4-二噁烷(300mL)中的混合物在100℃搅拌4小时。将混合物用硅胶浓缩且通过色谱法使用石油醚/EtOAc＝20:1至10:1纯化以得到标题化合物(19g，100％)，其为黄色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 40-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝2.279min；MS计算值：323，MS实测值：268[M–56+H]+.
描述B-25
2-甲基-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯和6- 甲基-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯的混合物(D B-25)
将6-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯和2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(9.5g，29.2mmol)、6-溴-5-甲基-1H-吲唑(4.1g，19.5mmol)、Pd(dppf)Cl2(1.59g，1.95mmol)和K2CO3(8.07g，58.5 mmol)在120mL 1,4-二噁烷/水(v/v＝5/1)中的混合物在N2下在100℃搅拌 4小时。将混合物用硅胶浓缩且通过色谱法使用石油醚/EtOAc＝10/1至4/1 纯化以得到标题化合物(5.0g，52％)，其为黄色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 10-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝2.311min；MS计算值：327，MS实测值：328[M+H]+.
描述B-26
2-甲基-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D B-26)
在H2(50psi)下将2-甲基-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)- 甲酸叔丁酯和6-甲基-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(5.0g，15.3mmol)和Pd/C(1.0g，20％W)在MeOH(100mL)中的混合物在50℃搅拌7天。将混合物用硅胶浓缩且通过色谱法使用石油醚/EtOAc＝2:1 至1:1纯化以得到标题化合物(2.65g，53％)，其为黄色油状物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ10.12(br s，1H)，7.95(s，1H)，7.52(d， J＝8.0Hz，1H)，7.30(d，J＝6.8Hz，1H)，4.67-4.20(m，1H)，4.02-3.81(m， 1H)，3.32-3.01(m，2H)，2.44(d，J＝9.2Hz，3H)，1.75-1.66(m，4H)，1.51 (s，9H)，1.27-1.26(m，3H)
描述B-27
4-(1-(6-((S)-2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将2-甲基-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.52 mmol)、(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(559mg，1.67mmol)、 N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(216mg，1.52mmol)、CuI(144mg，0.76mmol) 和K3PO4(644mg，3.04mmol)在甲苯(5mL)中的混合物在100℃搅拌3小时。将混合物用EtOAc(60mL)稀释，用NH3H2O(30mL)和盐水(30mL)洗涤，用 Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝1:1)以得到标题化合物(285mg，35％)，其为黄色油状物。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.78(s，1H)，8.10(s，1H)，7.53(s，1H)， 6.99(s，1H)，4.37-4.30(m，2H)，4.12-4.09(m，2H)，3.84-3.69(m，5H)， 3.53(s，1H)，3.18-3.11(m，1H)，3.01-2.95(m，3H)，2.66(s，3H)，2.53-2.42 (m，3H)，1.81-1.56(m，4H)，1.52(s，9H)，1.35-1.32(m，3H)。
描述B-28
(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D B-28)
向(R)-吗啉-2-基甲醇(300mg，2.56mmol)和DIEA(992mg，7.68mmol) 在EtOH(10mL)中的溶液中添加4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(885mg，2.56 mmol)。将反应在室温搅拌过夜。真空去除溶剂且残余物通过硅胶色谱法纯化(用PE/EtOAc＝4:1洗脱)以得到产物(470mg，产率54.8％)，其为淡黄色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.79(s，1H)，4.16～4.06(m，2H)，4.06～4.02 (m，1H)，3.79～3.73(m，1H)，3.70～3.57(m，3H)，3.04(td，J＝13.2，3.6Hz， 1H)，2.91(dd，J＝12.8，10.4Hz，1H)，2.47(s，3H)，1.94(t，J＝6.0Hz， 1H)。
描述B-29
(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D B-29)
向(S)-吗啉-2-基甲醇(300mg，2.56mmol)和DIEA(992mg，7.68mmol) 在EtOH(10mL)和THF(20mL)中的溶液中添加4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(885 mg，2.56mmol)。将反应在室温搅拌过夜。真空去除溶剂且残余物通过硅胶色谱法纯化(用PE/EtOAc＝4:1洗脱)以得到产物(420mg，产率48.8％)，其为淡黄色固体。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.25min；MS计算值： 335.1MS实测值：336.0[M+H]+.
描述B-30
((2S)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(2-甲基哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D B-30)
向4-(1-(6-((S)-2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑 -6-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(285mg，0.53mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。将混合物在室温搅拌2小时。将饱和NaHCO3添加至混合物以调节pH＝9～10。将混合物用H2O(30mL)稀释且用DCM(30mL x 2) 萃取。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到化合物(220mg，95％)，其为黄色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm,；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 10-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝1.758min；MS计算值：436，MS实测值：437[M+H]+.
描述B-31
(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D B-31)
在室温将4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(724mg，2.0mmol)添加至(R)-吗啉 -2-基甲醇(235mg，2.0mmol)和Et3N(0.4mL)在MeOH(15mL)中的溶液中且将反应在室温搅拌1小时直到所有固体溶解。将反应溶液浓缩且残余物通过硅胶色谱法纯化(用PE/EtOAc＝2/1～1/1洗脱)以得到产物(680mg，产率 97％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.65(s，1H)，4.15～4.01(m，3H)，3.91 (s，3H)，3.77～3.72(m，1H)，3.69～3.57(m，3H)，3.10～3.06(m，1H)，2.95～2.88 (m，1H)，1.96～1.92(m，1H)。
描述B-32
4-(1-(6-((R)-2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑 -6-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(D B-32)
将2-甲基-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.52 mmol)、(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(586mg，1.67 mmol)、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(216mg，1.52mmol)、CuI(144mg， 0.76mmol)和K3PO4(644mg，3.04mmol)在甲苯(5mL)中的混合物在100℃搅拌3小时。将混合物用EtOAc(60mL)稀释，用NH3.H2O(30mL)和盐水(30 mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝1:2)以得到化合物(315mg，37％)，其为黄色油状物。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.70(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)， 6.85(s，1H)，4.30-4.27(m，3H)，4.05-4.01(m，7H)，3.81-3.63(m，7H)， 3.26-2.88(m，5H)，2.48-2.45(m，3H)，1.97-1.92(m，2H)，1.50(s，9H)。
描述B-33
((2R)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(2-甲基哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D B-33)
向4-(1-(6-((R)-2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(315mg，0.57mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。将混合物在室温搅拌2小时。将饱和NaHCO3添加至混合物以调节pH＝9～10。将混合物用H2O(30mL)稀释且用DCM(30mL x 2)萃取。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到化合物(221mg，86％)，其为黄色油状物。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.78(s，1H)，8.08(s，1H)，7.55(s，1H)， 6.85(s，1H)，5.30(s，1H)，4.32-4.23(m，2H)，4.12(s，3H)，4.07-4.03(m， 2H)，3.79-3.55(m，5H)，3.39-3.30(m，2H)，3.17-3.11(m，2H)，2.99-2.93(m， 1H)，2.47(s，3H)，2.12-2.04(m，2H)，1.94-1.91(m，1H),1.60-1.42(m，4H)。
描述B-34
(S)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D B-34)
在室温将4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(680mg，1.9mmol)添加至(S)-吗啉-2-基甲醇(235mg，2.0mmol)和Et3N(0.4mL)在MeOH(15mL)中的溶液中且将反应在室温搅拌1小时直到所有固体溶解。然后将反应溶液浓缩且残余物通过硅胶色谱法纯化(用PE/EtOAc＝2/1～2/1洗脱)以得到产物(680mg，产率97％)，其为无色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.65(s，1H)，4.15～4.01(m，3H)，3.91 (s，3H)，3.77～3.72(m，1H)，3.69～3.57(m，3H)，3.10～3.06(m，1H)，2.95～2.88 (m，1H)，1.96～1.92(m，1H)。
描述B-35
4-(1-(6-((S)-2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑 -6-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(D B-35)
将2-甲基-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.52 mmol)、(S)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(587mg，1.67mmol)、 N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(216mg，1.52mmol)、CuI(144mg，0.76mmol) 和K3PO4(644mg，3.04mmol)在甲苯(3mL)中的混合物在100℃搅拌5小时。将混合物用EtOAc(50mL)稀释，用NH3H2O(30mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝1:1)以得到化合物(400mg，48％)，其为白色固体。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.72(d，J＝16Hz,1H)，8.07(s，1H)， 7.51(s，1H)，6.85(s，1H)，4.30-4.25(m，4H)，4.21-4.03(m，7H)，3.92-3.64 (m，6H)，3.28-2.94(m，5H)，2.48-2.45(m，3H)，1.98(s，2H)，1.50(s，9H)。
描述B-36
((2S)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(2-甲基哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D B-36)
向4-(1-(6-((S)-2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.72mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。将混合物在室温搅拌3小时。将饱和NaHCO3添加至混合物以调节pH>7。将混合物用H2O(50mL)稀释且用EtOAc(30mL x 3) 萃取。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到化合物(327mg，100％)，其为白色固体。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.78(s，1H)，8.08(s，1H)，7.55(s，1H)， 6.85(s，1H)，4.46-4.28(m，3H)，4.15(s，1H)，4.12(s，1H)，4.06-4.03(m，2H)，3.94-3.91(m，1H)，3.81-3.71(m，4H)，3.66-3.58(m，1H)，3.49-2.27(m， 2H)，3.17-3.09(m，2H)，2.99-2.95(m，1H)，2.47(s，2H),2.42(s，1H)，2.11 (s，1H)，1.94-1.86(m，2H)，1.59-1.57(m，1H)，1.43-1.41(m，1H)，1.28-1.24 (m，1H)。
描述B-37
4-(1-(6-((R)-2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(D B-37)
将2-甲基-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.52 mmol)、(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(560mg，1.67mmol)、 N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(216mg，1.52mmol)、CuI(144mg，0.76mmol) 和K3PO4(644mg，3.04mmol)在甲苯(3mL)中的混合物在100℃搅拌5小时。将混合物用EtOAc(50mL)稀释，用NH3H2O(30mL x 3)和盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝1:1)以得到化合物(562mg，69％)，其为白色固体。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.80(d，J＝16.8Hz，1H)，8.10(s，1H)，7.53(s，1H)，6.99(s，1H)，5.34(s，1H)，4.67-4.29(m，5H)，4.19-4.05(m， 4H)，3.92-3.69(m，7H)，3.19-2.96(m，5H)，2.66(s，3H)，2.53-2.42(m， 2H)，1.65(s，9H)。
描述B-38
((2R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(2-甲基哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D B-38)
向4-(1-(6-((R)-2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑 -6-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(562mg，1.05mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。将混合物在室温搅拌3小时。将饱和NaHCO3添加至混合物以调节pH>7。将混合物用H2O(50mL)稀释且用EtOAc(30mL x 3) 萃取。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到化合物(457mg，100％)，其为白色固体。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.56(s，1H)，8.11(s，1H)，7.56(s，1H)， 6.99(s，1H)，4.38-4.31(m，4H)，4.12-4.09(m，2H)，3.83-3.72(m，7H)， 3.52(s，1H)，3.42-3.39(m，2H)，3.19-2.98(m，6H)，2.68-2.65(m，3H),2.51 (s，2H)。
描述C-1
6-溴-5-甲基-1H-吲唑(D C-1)
在冰浴中向5-溴-2,4-二甲基苯胺(15.0g，75.0mmol)在氯仿(150mL) 中的溶液中添加Ac2O(15.0，150mmol)。添加KOAc(8.00g，82.5mmol)、 18-冠-6(10.0g，37.5mmol)和亚硝酸异戊酯(26.3g，225mmol)。将混合物回流36小时。将反应混合物浓缩且将残余物溶于EtOAc(500mL)。有机溶液用水洗涤(100mL)，用Na2SO4干燥且浓缩。将残余物溶于THF(100mL)且添加NaOH(4M，40.0mL，160mmol)。将混合物在室温搅拌1h。真空去除溶剂且残余物在EtOAc(400mL)和水(200mL)之间分配。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc从10：1 至5：1)以得到标题化合物(5.1g，产率32％)，其为橙色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ10.20(br s，1H)，7.99(s，1H)，7.75(s， 1H)，7.61(s，1H)，2.50(s，3H)。
描述C-2
6-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(D C-2)
在室温向6-溴-5-甲基-1H-吲唑(5.10g，24.2mmol)在无水DCM(120mL) 中的溶液中添加DHP(4.10g，48.4mmol)、TsOH(0.800g，4.80mmol)和 Mg2SO4(5.0g)。将反应混合物加热至35℃且搅拌1小时。将反应混合物过滤且滤液用Na2CO3溶液(10％，100mL)洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc从50:1至20:1)以得到标题化合物(6.0g，产率 84％)，其为橙色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.90(s，1H)，7.84(s，1H)，7.55(s，1H)， 5.63(dd，J＝9.6，3.0Hz，1H)，4.05-4.00(m，1H)，3.78-3.70(m，1H)，2.58-2.44 (m，4H)，2.20-2.02(m，2H)，1.78-1.65(m，3H)。
LCMS(流动相：5-95％ACN)：Rt＝2.19分钟，以3min；MS计算值： 294；MS实测值：295[M+H]+.
描述C-3
4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(D C-3)
向6-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(5.50g，18.6mmol)， 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(6.90g，22.3mmol)和Na2CO3(4.90g，46.5mmol)在二噁烷(150mL) 和水(130mL)中的悬浮液中添加Pd(dppf)Cl2(658mg，0.900mmol)。混合物用N2脱气3次，然后在80℃搅拌过夜。真空去除溶剂且残余物在EtOAc(300 mL)和水(200mL)之间分配。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc＝10:1)以得到标题化合物(7.3g，产率99％)，其为浅棕色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.92(s，1H)，7.48(s，1H)，7.28(s，1H)， 5.67(dd，J＝9.6，2.8Hz，1H)，5.63(br s，1H)，4.07-4.01(m，3H)，3.78-3.70 (m，1H)，3.67-3.64(m，2H)，2.62-2.53(m，1H)，2.45-2.39(m，2H)，2.34(s， 3H)，2.18-2.12(m，1H)，2.07-2.02(m，1H)，1.81-1.73(m，2H)，1.69-1.61(m， 1H)，1.52(s，9H)。
描述C-4
4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D C-4)
在H2下向4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶 -1(2H)-甲酸叔丁酯(80g，粗物质)在MeOH(2L)中的溶液中添加Pd/C(10g， 12％/W)。反应混合物脱气3次且在室温搅拌2d。将混合物过滤且将滤液浓缩以得到粗产物，其为白色固体。(65.8g)
LC-MS[流动相：从30％水(0.1％FA)和70％ACN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％ACN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.63min；MS计算值： 399.2，MS实测值：400.5[M+H]+.
描述C-5
5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(D C-5)
将HCl/MeOH(5M，200mL)添加至4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2- 基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(55.4g，139mmol)在MeOH(150mL) 中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩，用Na2CO3aq.处理且用NaOH水溶液碱化至pH>12。将混合物过滤以得到所需产物，其为白色固体。(29.3g，产率＝98％)
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％ACN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％ACN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.85min；MS计算值： 215，MS实测值：216[M+H]+.
描述C-6
5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D C-6)
在室温将NaBH3CN(9.40g，149mmol)添加至5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H- 吲唑(16.0g，74.3mmol)、氧杂环丁烷-3-酮(13.4g，223mmol)、沸石(13.4 g)和AcOH(1.56g，1.63mmol)在CH2Cl2/MeOH(320mL/80mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌过夜，过滤且滤饼用CH2Cl2洗涤。滤液用NaHCO3 aq和盐水洗涤。有机部分用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过柱纯化(PE:EtOAc＝1:1至CH2Cl2:MeOH＝50:1)以得到所需产物，其为白色固体(11.9g，产率＝59％)
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％ACN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％ACN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.87min；MS计算值： 271，MS实测值：272[M+H]+.
描述C-7
4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(D C-7)
向NaI(11.9g，79.7mmol)在HI(55％，50mL)中的溶液中分批添加4,6- 二氯-2-甲基嘧啶(10.0g，61.3mmol)。所得悬浮液加热至40℃且搅拌1小时。将反应混合物冷却且过滤。将固体用水洗涤，然后用甲醇(50mL)研磨。将混合物过滤以得到标题化合物(9.0g，产率42％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.07(s，1H)，2.67(s，3H)。
LCMS(流动相：5-95％乙腈，以2.5min)：Rt＝1.59分钟，MS计算值： 346；MS实测值：347[M+H]+.
描述C-8
(S)-4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(D C-8)
在室温将4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(1.49g，4.12mmol)、(S)-3-甲基吗啉盐酸盐(500mg，3.63mmol)和TEA(1.25g，12.36mmol)在i-PrOH(10mL) 和DMSO(10mL)中的溶液搅拌18小时。将混合物用H2O(20mL)稀释且用EtOAc(20mL x 3)萃取。有机相用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝5/1)以得到标题化合物(1.16g，95％)，其为黄色油状物。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝2.173分钟，MS计算值：335，MS实测值： 336[M+H]+
描述C-9
(S)-4-(1-(2-甲氧基-6-(3-甲基吗啉代)嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D C-9)
将5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(200mg，0.64 mmol)、(S)-4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(319mg，0.95mmol)、 N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(180mg，1.27mmol)、CuI(60mg，0.32mmol) 和K3PO4(269mg，1.27mmol)在甲苯(2mL)中的混合物在100℃搅拌2小时。将混合物用5mL H2O稀释且用EtOAc(5mL x 2)萃取。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过pre-TLC纯化(石油醚/EtOAc＝1/3)以得到标题化合物(140mg，42％)，其为黄色固体。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝3.056分钟，MS计算值：522，MS实测值： 523[M+H]+
描述C-10
(S)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(D C-10)
向(S)-4-(1-(2-甲氧基-6-(3-甲基吗啉代)嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.268mmol)在DCM(2mL)中的混合物中添加 TFA(2mL)。将混合物在室温搅拌2小时。该反应用稀释饱和NaHCO3以调节pH＝8-9且用DCM(20mL)萃取。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝20/1)以得到标题化合物(115mg，100％)，其为黄色固体。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝2.145分钟，MS计算值：422，MS实测值： 423[M+H]+.
描述C-11
4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(D C-11)
向NaI(5.5g，36.3mmol)在HI(55％在水中，30mL)中的溶液中添加4,6- 二氯-2-甲氧基嘧啶(5g，27.9mmol)。将混合物加热至40℃且搅拌14h。将反应混合物冷却至室温且倒入冰水(50mL)中。过滤物质用冰水洗涤三次以得到产物，其为白色固体(3.2g，产率32％)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％TFA)和20％ACN(0.1％TFA)至20％水(0.1％TFA)和80％ACN(0.1％TFA)，以10分钟，纯度100％]：Rt＝4.72 min；MS计算值：362，MS实测值：363[M+H]+.
描述C-12
(S)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(D C-12)
向4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(1.51g，4.17mmol)、(S)-吗啉-3-基甲醇盐酸盐(584mg，3.79mmol)在i-PrOH和DMF(20mL，V/V＝1/1)中的溶液中添加TEA(1.15g，11.37mmol)。将混合物在35℃搅拌过夜。将混合物用EtOAc(100mL)稀释，用盐水(30mL x 3)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝6:1)以得到标题化合物(580mg，44％)，其为无色油状物。
1H NMR(CDCl3，300MHz)：δ6.68(s，1H)，4.28(br s，1H)，4.10(d， J＝16.4Hz，2H)，3.92-3.80(m，6H)，3.64-3.16(m，2H)，3.30-3.28(m，1H)， 2.57(br s，1H)。
描述C-13
(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(D C-13)
在室温将4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(1.18g，3.27mmol)、(R)-吗啉-3- 基甲醇盐酸盐(500mg，3.27mmol)、TEA(991mg，9.81mmol)在i-PrOH(10 mL)和DMSO(4mL)中的溶液搅拌过夜。将混合物用H2O(50mL)稀释，用 EtOAc(50mL x 3)萃取。有机层用盐水(50mL x 2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝1:1)以得到标题化合物(500mg，42％)，其为白色固体。
1H NMR(CDCl3，300MHz)：δ6.68(s，1H)，4.14-4.06(m，2H)，4.02-3.89 (m，7H)，3.67-3.53(m，2H)，3.34-3.26(m，1H)。
描述C-14
5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑盐酸盐(D C-14)
将4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g，2.5mmol)溶于HCl/MeOH(5mol/L，10mL)。然后，将混合物搅拌6 小时。混合物在减压下浓缩以得到标题化合物(820mg，产率>100％)，其为淡黄色固体，其用于下一步而不用纯化。
LC-MS：5-95％ACN，Rt＝1.13分钟，MS计算值：215，MS实测值： 216[M+H]+.
描述C-15
4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D C-15)
在冰浴中向5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑盐酸盐(600mg，2.39mmol) 在CH3OH(10mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加KOH(268mg，4.78mmol) 和(Boc)2O(781mg，3.58mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。反应混合物用水(50mL)稀释且用EtOAc(50mL×3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过柱色谱纯化(PE:EtOAc从10:1至4:1)以得到标题化合物(353mg，产率47％)，其为黄色油状物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ10.15(br s，1H)，7.95(s，1H)，7.53(s， 1H)，7.29(s，1H)，4.34(br s，2H)，2.95-2.81(m，3H)，2.45(s，3H)，1.86-1.81 (m，2H)，1.69-1.61(m，2H)，1.51(s，9H)。
描述C-16
(R)-4-(1-(6-(3-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑 -6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D C-16)
标题化合物通过类似于描述19所述的步骤制备，起始于N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺、(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇、4-(5-甲基 -1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯、CuI和K3PO4。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4 min-05-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝2.675min；MS计算值：538，MS 实测值：539[M+H]+.
描述C-17
(R)-(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(D C-17)
向(R)-4-(1-(6-(3-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.19mmol)在DCM(2mL)中的混合物中添加TFA(2mL)。将混合物在室温搅拌3小时。反应用饱和NaHCO3(15mL) 碱化以调节pH＝9，用DCM(20mL x 3)萃取，用Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过pre-TLC纯化(DCM/MeOH＝10/1)以得到标题化合物(40mg，48％)，其为白色固体。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm,；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4 mins-05-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝1.834min；MS计算值：438，MS 实测值：439[M+H]+.
描述C-18
(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-2-甲基吗啉-3-基)甲醇(D C-18)
在60℃将4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(1.56g，4.78mmol)、(2-甲基吗啉 -3-基)甲醇(1.6g，9.55mmol)和TEA(2.89g，28.6mmol)在DMSO(20mL) 中的溶液搅拌过夜。将混合物用H2O(30mL)稀释，用EtOAc(50mL x 3)萃取。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/EtOAc＝2/1)以得到标题化合物(640mg，37％)，其为黄色油状物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ6.61(s，1H)，4.07-4.03(m，1H)，3.91(m， 3H)，3.73-3.56(m，4H)，3.31-3.30(m，1H)，1.93-1.90(m，1H)，1.58-1.56(m， 1H)，1.12(d，J＝6.0Hz，3H)。
描述C-19
4-(1-(6-(3-(羟基甲基)-2-甲基吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D C-19)
在100℃将4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(550mg，1.75 mmol)和(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-2-甲基吗啉-3-基)甲醇(640mg，1.75 mmol)、N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(249mg，1.75mmol)、CuI(166mg，0.88 mmol)和K3PO4(742mg，3.50mmol)在甲苯(10mL)中的溶液搅拌4小时。将混合物用30mL H2O和10mL NH3H2O稀释且用EtOAc(50mLx 3)萃取。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题化合物(1.0g，100％)，其为黄色固体。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 5-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝2.740min；MS计算值：552，MS实测值：553[M+H]+.
描述C-20
(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-2-甲基吗啉-3-基)甲醇(D C-20)
在室温将4-(1-(6-(3-(羟基甲基)-2-甲基吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g，1.85mmol)在DCM(10mL)和 TFA(10mL)中的溶液搅拌30分钟。将混合物用饱和NaHCO3稀释以调节pH ＝7～8。将混合物用DCM(40mL x 3)萃取。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题化合物(920mg，100％)，其为白色固体。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 5-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝1.850min；MS计算值：452，MS实测值：453[M+H]+.
实施例A-1
(R)-(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
向5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(65mg，0.228mmol)、(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(77mg，0.230 mmol)、CuI(44mg，0.23mmol)和K3PO4(98mg，0.46mmol)在无水甲苯(2 ml)中的混合物中添加N,N'-二甲基乙二胺(41mg，0.46mmol)。悬浮液用 Ar脱气且在100℃搅拌3小时。TLC显示反应完成。将冷却的反应混合物过滤且滤饼用CH2Cl2洗涤。将合并的滤液浓缩且残余物通过柱色谱纯化(洗脱液：CH2Cl2:MeOH＝15:1)以得到所需产物，其为黄色固体(62mg，产率：55％)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝5.49min；MS计算值：492.28，MS实测值：493.6[M+H]+.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.95(s，1H)，4.69(d，J＝4.8Hz，2H)，4.32-4.27(m，4H)，4.07(d，J＝9.5 Hz，1H)，3.78-3.68(m，4H)，3.18-2.70(m，6H)，2.66(s，3H)，2.45(s，3H)， 2.32(br s，2H)，1.93(br s，4H)，1.44(s，3H)。
实施例A-2
(S)-(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
向5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(65mg，0.228mmol)、(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(77mg，0.230 mmol)、CuI(44mg，0.23mmol)和K3PO4(98mg，0.46mmol)在无水甲苯(2 ml)中的混合物中添加N,N'-二甲基乙二胺(41mg，0.46mmol)。悬浮液用 Ar脱气且在100℃搅拌3小时。将冷却的反应混合物过滤且滤饼用CH2Cl2洗涤。将合并的滤液浓缩且通过柱色谱法纯化(洗脱液：CH2Cl2:MeOH＝15:1) 以得到所需产物，其为黄色固体(65mg，产率：57％)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝5.49min；MS计算值：492.28，MS实测值：493.6[M+H]+.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.95(s，1H)，4.68(br s，2H)，4.32-4.27(m，4H)，4.07(d，J＝11.2Hz，1H)， 3.78-3.68(m，4H)，3.18-2.72(m，6H)，2.66(s，3H)，2.45(s，3H)，2.32(br s，2H)，1.93(br s，4H)，1.44(s，3H)。
实施例A-3
(S)-(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4- 基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
标题化合物通过类似于E1所述的步骤制备，起始于5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑、(S)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉 -2-基)甲醇、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4在甲苯中的混合物，在100℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.78(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.85(s，1H)，4.63(d，J＝5.2Hz，2H)，4.26-4.24(m，4H)，4.17(s，3H)， 4.06(d，J＝11.6Hz，1H)，3.77-3.66(m，4H)，3.14(t，J＝14.0Hz，1H)， 2.97(t，J＝12.0Hz，1H)，2.84-2.78(m，1H)，2.67(d，J＝10.0Hz，2H)， 2.45(s，3H)，2.29(t，J＝10.0Hz，2H)，2.09(br s，1H)，1.93-1.82(m，4H)，1.69(s，3H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)：A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)，以6min]：Rt＝4.565min；MS计算值：508，MS实测值：509[M+H]+.
实施例A-4
(R)-(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4- 基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
标题化合物通过类似于E A-1所述的步骤制备，起始于5-甲基-6-(1-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑、(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4在甲苯中的混合物，在100℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.78(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.85(s，1H)，4.63(d，J＝5.6Hz，2H)，4.31-4.24(m，4H)，4.17(s，3H)， 4.06(d，J＝11.6Hz，1H)，3.78-3.66(m，4H)，3.14(t，J＝10.0Hz，1H)， 2.97(t，J＝12.8Hz，1H)，2.84-2.78(m，1H)，2.67(d，J＝11.2Hz，2H)， 2.45(s，3H)，2.29(t，J＝10.0Hz，2H)，2.07-2.04(m，1H)，1.93-1.81(m，4H)，1.67(s，3H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)：A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)，以6min]：Rt＝4.030min；MS计算值：508，MS实测值：509[M+H]+
实施例B-1和B-2
(6-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(E B-1，单一未知异构体1；E B-2，单一未知异构体2)
在Ar下向(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-6-甲基吗啉-2-基)甲醇，异构体1)(207mg，0.6mmol)、5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(161 mg，0.6mmol)、CuI(113mg，0.6mmol)和K3PO4(251mg，1.2mmol)在甲苯(8mL)中的混合物中添加N,N'-二甲基乙二胺(104mg，1.2mmol)。将反应在100℃搅拌4h。将冷却的反应混合物过滤且将滤液浓缩。残余物通过柱色谱纯化(洗脱液：PE:EtOAc＝1:1，然后是CH2Cl2:MeOH＝50:1)得到所需产物，其为黄色固体(168mg，产率：57％)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以2.0min]：Rt＝0.99min；MS计算值： 492.28，MS实测值：493.5[M+H]+.
所需产物通过手性prep-HPLC分离(方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cmL；流动相：CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液)得到(6-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1)的白色固体(80mg，产率：47％)，和(6-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶 -4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体2)的黄色固体(83mg，产率：49％)。
实施例B-1:
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝5.55min；MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.94(s，1H)，4.71(d，J＝6.4Hz，4H)，4.34(d，J＝11.2Hz，2H)，3.80-3.69 (m，4H)，3.59-3.53(m，1H)，2.97(d，J＝10.0Hz，2H)，2.90-2.75(m，2H)， 2.69-2.63(m，1H)，2.65(s，3H)，2.45(s，3H)，2.07-1.94(m，7H)，1.30(d， J＝6.0Hz，3H)。
实施例B-2:
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝5.54min；MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.94(s，1H)，4.71(d，J＝6.8Hz，4H)，4.34(d，J＝12.0Hz，2H)，3.80-3.69 (m，4H)，3.59-3.53(m，1H)，2.97(d，J＝10.4Hz，2H)，2.84-2.78(m，2H)， 2.68-2.63(m，1H)，2.65(s，3H)，2.45(s，3H)，2.07-1.94(m，7H)，1.30(d， J＝6.0Hz，3H)。
实施例B-3和B-4
(6-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(E B-3，单一未知对映异构体3；E B-4，单一未知对映异构体4)：
标题化合物通过类似于实施例1和实施例2所述的步骤制备，起始于 N,N'-二甲基乙二胺、(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-6-甲基吗啉-2-基)甲醇(异构体2)、5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑、CuI和K3PO4。
手性分离：
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：CO2:EtOH (0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：25℃； EtOH中的样品溶液。
实施例B-3:
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝5.42min；MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.93(s，1H)，4.71(d，J＝6.4Hz，4H)，4.07-4.02(m，2H)，3.99-3.87(m， 2H)，3.75-3.66(m，3H)，3.59-3.53(m，1H)，3.33(dd，J＝13.2，8.0Hz， 1H)，2.97(d，J＝10.0Hz，2H)，2.86-2.80(m，1H)，2.64(s，3H)，2.45(s， 3H)，2.07-1.93(m，7H)，1.26(d，J＝6.0Hz，3H)。
实施例B-4：
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝5.41min；MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.93(s，1H)，4.71(d，J＝6.8Hz，4H)，4.05(d，J＝3.6Hz，2H)，4.04-3.87 (m，2H)，3.74-3.66(m，3H)，3.59-3.53(m，1H)，3.32(dd，J＝13.0，7.5Hz， 1H)，2.97(d，J＝10.0Hz，2H)，2.84(t，J＝10.8Hz，1H)，2.64(s，3H)， 2.45(s，3H)，2.07-1.87(m，7H)，1.26(d，J＝6.4Hz，3H)。
实施例B-5和B-6
(5-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(E B-5，单一未知对映异构体1；E B-6,单一未知对映异构体2)
标题化合物通过类似于E B-1和E B-2所述的步骤制备，起始于N,N'- 二甲基乙二胺、(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基吗啉-2-基)甲醇(异构体1)、 5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑、CuI和K3PO4。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：CO2:EtOH (0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃； EtOH中的样品溶液
实施例B-5
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.94(s，1H)，4.73～4.70(m，4H)，3.90～3.79(m，3H)，3.80-3.54(m，4H)， 3.08-2.95(m，3H)，2.86～2.82(m，1H)，2.65(s，3H)，2.45(s，3H)，2.07-1.93 (m，8H)，1.30(d，J＝6.8Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝5.55min；MS计算值：492.28，MS实测值：493.5[M+H]+.
手性HPLC：Rt：1.892min
实施例B-6
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.94(s，1H)，4.73～4.70(m，4H)，3.90-3.54(m，7H)，3.05-2.95(m，3H)， 2.84-2.82(m，1H)，2.65(s，3H)，2.45(s，3H)，2.10-1.67(m，8H)，1.30(d， J＝6.8Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水 (0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝5.54min；MS计算值：492.28，MS实测值：493.6[M+H]+。
手性HPLC：Rt：4.966min
实施例B-7和B-8
2-(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇(E B-7，单一未知对映体1；E B-8，单一未知对映体2)
标题化合物通过类似于E B-1和E B-2所述的步骤制备，起始于 DMEDA、2-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇、5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑、CuI和K3PO4。
手性分离:
方法：柱：AD-H，柱尺寸：0.46cm I.D.x 15cm L，流动相：CO2:EtOH (0.05％NH3·H2O)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：UV 205nm，温度＝25 ℃，EtOH中的样品溶液
实施例B-7
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝5.655min；MS 计算值：492，MS实测值：493[M+H]+.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.77(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，4.71(d，J＝6.5Hz，4H)，4.33(d，J＝12.5Hz， 2H)，4.04(d，J＝11.6Hz，1H)，3.86(s，2H)，3.71(dd，J＝24.6，10.4Hz， 2H)，3.60-3.52(m，1H)，3.09(t，J＝10.9Hz，1H)，2.97(d，J＝10.2Hz， 2H)，2.85(t，J＝11.6Hz，2H)，2.65(s，3H)，2.45(s，3H)，2.09-1.99(m，2H)，1.94(s，4H)，1.85(dd，J＝12.3，6.8Hz，2H)。
实施例B-8
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以10.0min]：Rt＝5.655min；MS 计算值：492，MS实测值：493[M+H]+.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.77(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.93(s，1H)，4.71(d，J＝6.5Hz，4H)，4.33(d，J＝11.3Hz，2H)，4.04(d， J＝11.3Hz，1H)，3.86(s，2H)，3.81-3.63(m，2H)，3.57(dd，J＝12.9，6.4 Hz，1H)，3.09(t，J＝11.0Hz，1H)，2.97(d，J＝10.0Hz，2H)，2.84(t，J＝ 11.7Hz，2H)，2.65(s，3H)，2.45(s，3H)，2.08-1.98(m，2H)，1.94(s，4H)，1.85(dd，J＝12.3，6.9Hz，2H)。
实施例B-9–B-12
(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-5-甲基吗啉-2-基)甲醇(异构体1至4)
向(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-5-甲基吗啉-2-基)甲醇(400mg，0.88mmol)、氧杂环丁烷-3-酮(318mg，4.42 mmol)和1滴AcOH在DCM(20mL)中的溶液中添加NaBH3CN(110mg，1.76 mmol)。将混合物在室温搅拌18小时。将反应混合物浓缩。残余物通过 prep-TLC纯化(DCM/MeOH＝20/1)以得到标题化合物(230mg，51％)，其为黄色油状物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.76(s，0.5H)，8.74(s，0.5H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)，6.81(s，0.5H)，6.79(s，0.5H)，5.30(s，1H)，5.28-5.33 (m，1H)，4.90(t，J＝5.2Hz，2H)，4.69(d，J＝6.8Hz，2H)，4.58(t，J＝5.2 Hz，2H)，4.38-4.36(m，0.5H)，4.22-4.19(m，0.5H)，4.22(s，1.5H)，4.19(s， 1.5H)，4.07-4.00(m，1H)，3.88-3.78(m，2H)，3.62-3.52(m，2H)，2.92(d， J＝10.8Hz，2H)，2.83-2.81(m，1H)，2.39(s，3H)，2.26-2.25(m，2H)，2.01 (d，J＝10.8Hz，2H)，1.90-1.86(m，2H)，1.38(d，J＝6.4Hz，1.5H)，1.32 (d，J＝6.4Hz，1.5H)。
手性分离：柱：IDS；0.46cm×15cm；相：EtOH＝100；流速：0.5ml/min；
异构体1[手性HPLC：柱：IDS；0.46cm×15cm；相：EtOH＝100；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：35℃]：Rt＝8.382分钟。
异构体2[手性HPLC：柱：IDS；0.46cm×15cm；相：EtOH＝100；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：35℃]：Rt＝8.938分钟。
异构体3[手性HPLC：柱：IDS；0.46cm×15cm；相：EtOH＝100；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：35℃]：Rt＝9.740分钟。
异构体4[手性HPLC：柱：IDS；0.46cm×15cm；相：EtOH＝100；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：35℃]：Rt＝11.231分钟。
实施例B-13和B-14
(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉-2-基)甲醇(异构体1和2)
向(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉-2-基)甲醇(442mg，0.98mmol)、氧杂环丁烷-3-酮(352mg，4.9mmol) 和NaBH3CN(123mg，1.96mmol)在DCM(6mL)中的溶液中添加催化剂 AcOH。将混合物在30℃搅拌过夜。该反应用4滴饱和NaHCO3淬灭且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝20/1)以得到标题化合物(180 mg，36％)，其为白色固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.51(s，1H)， 6.88(s，1H)，4.70(d，J＝6.8Hz，4H)，4.36(t，J＝6.8Hz，1H)，4.15(s， 3H)，3.90-3.98(m，3H)，3.74-3.70(m，1H)，3.58(t，J＝6.4Hz，1H)，3.49 (s，2H)，3.45-3.40(m，1H)，2.95(d，J＝11.2Hz，2H)，2.85-2.81(m，1H)，2.40(s，3H)，2.09-2.03(m，2H)，1.95-1.86(m，4H)，1.39(d，J＝6.8Hz，3H)。
实施例B-13(异构体1)和实施例B-14(异构体2)通过手性HPLC分离：柱：Superchiral S-AD，2cm I.D.x 25cm，5μm；相：CO2/MeOH/NH3·H2O＝ 60/40/0.05；流速：30ml/min；波长：254nm
异构体1：
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD ID；0.46cm×15cm；相： CO2/EtOH/NH3·H2O＝55/45/0.05；流速：3.0ml/min；波长：UV 254nm；温度：35℃]：Rt＝2.791分钟。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.75(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)， 6.88(s，1H)，4.72-4.67(m，4H)，4.36(t，J＝6.4Hz，1H)，4.15-4.06(m，5H)，4.02-3.95(m，3H)，3.74-3.71(m，1H)，3.55(t，J＝6.4Hz，1H)，3.46-3.39 (m，1H)，2.93(d，J＝10.8Hz，2H)，2.86-2.81(m，1H)，2.46-2.44(m，4H)， 2.05-1.98(m，2H)，1.94-1.85(m，4H)，1.39(d，J＝6.8Hz，3H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝3.857分钟，MS计算值：508，MS实测值： 509[M+H]+.
异构体2：
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD ID；0.46cm×15cm；相： CO2/EtOH/NH3·H2O＝55/45/0.05；流速：3.0ml/min；波长：UV 254nm；温度：35℃]：Rt＝6.830分钟。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.74(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.87(s，1H)，4.70-4.69(m，4H)，4.33(t，J＝6.0Hz，1H)，4.17-4.07(m， 5H)，4.01-3.94(m，3H)，3.73-3.70(m，1H)，3.55(t，J＝6.4Hz，1H)，3.44-3.37 (m，1H)，2.93(d，J＝10.8Hz，2H)，2.86-2.79(m，1H)，2.70(s，1H)，2.45 (s，3H)，2.05-1.97(m，2H)，1.93-1.85(m，4H)，1.38(d，J＝6.8Hz，3H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝3.844分钟，MS计算值：508，MS实测值： 509[M+H]+.
实施例B-15和B-16
((2S)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(2-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(异构体1和2)
向((2S)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(2-甲基哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(220mg，0.50mmol)、氧杂环丁烷-3-酮(180mg，2.5mmol) 和催化剂AcOH(2滴，1滴AcOH在1mL DCE中)在DCE(10mL)中的溶液中添加NaBH3CN(63mg，1.0mmol)。将额外催化剂AcOH(8滴，1滴AcOH 在1mL DCE中)添加至反应，且将反应在45℃搅拌过夜。冷却后，该反应用饱和NaHCO3(4滴)淬灭且浓缩。将残余物浓缩且通过硅胶柱色谱法纯化 (石油醚/EtOAc＝1:4)以得到化合物(180mg，73％)，其为黄色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 10-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝2.200min；MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+.
((2S)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(2-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(150mg)通过手性-HPLC分离以得到异构体1和异构体2
手性prep-HPLC：
柱：Superchiral S-AD，2cm I.D.x 25cm，5μm；相：CO2/IPA/NH3·H2O ＝70/30/0.05；流速：30ml/min；波长：254nm.
异构体1：
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.2％TFA)；梯度(B％)]：Rt＝3.543分钟，MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+.
异构体2：
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.2％TFA)；梯度(B％)]：Rt＝3.638分钟，MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+.
实施例B-17–B-20
((2R)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(2-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4- 基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(异构体1至4)
向((2R)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(2-甲基哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶 -4-基)吗啉-2-基)甲醇(221mg，0.49mmol)、氧杂环丁烷-3-酮(176mg，2.45 mmol)和催化剂AcOH(2滴，1滴AcOH在1mL DCE中)在DCE(10mL)中的溶液中添加NaBH3CN(62mg，0.98mmol)。混合物在室温搅拌过夜。将额外催化剂AcOH(7滴，1滴AcOH在1mL DCE中)添加至该反应。且将该反应在45℃搅拌过夜。冷却后，该反应用饱和NaHCO3(4滴)淬灭且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝40:1)以得到混合物化合物(150 mg，60％)，其为黄色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm,；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。10-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝2.158min；MS计算值：508，MS实测值：509[M+H]+.
从手性分离获得4种异构体：
异构体1：
手性pre-HPLC：柱：Chiralpak AD；5.0cm I.D.x 25cm L；相： EtOH:NH3·H2O＝100:0.1；流速：60ml/min，波长：254nm.
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.76(s，1H)，8.07(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.85(s，1H)，5.30(s，1H)，4.79-4.57(m，4H)，4.31-4.27(m，2H)，4.16(s， 3H)，4.08-4.04(m，1H)，3.78-3.66(m，5H)，3.18-3.11(m，1H)，3.00-2.83(m， 3H)，2.45(s，3H)，2.27-2.21(m，1H)，2.04-1.79(m，5H)，0.96(d，J＝6.0 Hz，3H)。
手性-HPLC[柱：Chiralpak IG，0.46cm I.D.×25cm L；流动相： MeOH:ACN:DEA＝85:15:0.1；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：35℃]： Rt＝10.518分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝3.708分钟，MS计算值：508，MS实测值：509 [M+H]+.
异构体2：
手性pre-HPLC：柱：Chiralpak AD；5.0cm I.D.x 25cm L；相： EtOH:NH3·H2O＝100:0.1；流速：60ml/min，波长：254nm.
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.76(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)， 6.85(s，1H)，5.30(s，1H)，4.73-4.65(m，4H)，4.31-4.25(m，2H)，4.15(s， 3H)，4.08-3.97(m，2H)，3.78-3.68(m，4H)，3.24-3.11(m，3H)，3.00-2.94(m， 1H)，2.74-2.64(m，2H)，2.46(s，3H)，2.03-1.89(m，4H)，1.06(d，J＝6.8 Hz，3H)。
手性-HPLC[柱：Chiralpak IG，0.46cm I.D.×25cm L；流动相：MeOH:ACN:DEA＝85:15:0.1；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：35℃]： Rt＝12.886分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝3.709分钟，MS计算值：508，MS实测值：509 [M+H]+.
异构体3：
手性pre-HPLC：柱：Chiralpak AD；5.0cm I.D.x 25cm L；相： EtOH:NH3·H2O＝100:0.1；流速：60ml/min，波长：254nm.
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.76(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)， 6.85(s，1H)，5.30(s，1H)，4.79-4.57(m，4H)，4.36-4.27(m，2H)，4.16(s， 3H)，4.07-4.04(m，1H)，3.78-3.65(m，5H)，3.16-3.12(m，1H)，3.00-2.84(m， 3H)，2.45(s，3H)，2.26-2.21(m，1H)，2.04-1.79(m，5H)，0.96(d，J＝6.0 Hz，3H)。
手性-HPLC[柱：Chiralpak IG，0.46cm I.D.×25cm L；流动相： MeOH:ACN:DEA＝85:15:0.1；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：35℃]： Rt＝11.795分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝3.709分钟，MS计算值：508，MS实测值：509 [M+H]+.
异构体4：
手性pre-HPLC：柱：Chiralpak AD；5.0cm I.D.x 25cm L；相： EtOH:NH3·H2O＝100:0.1；流速：60ml/min，波长：254nm.
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.76(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)， 6.85(s，1H)，5.30(s，1H)，4.73-4.65(m，4H)，4.31-4.25(m，2H)，4.15(s， 3H)，4.08-3.97(m，2H)，3.78-3.66(m，4H)，3.23-3.15(m，2H)，3.00-2.94(m， 1H)，2.74-2.64(m，2H)，2.46(s，3H)，2.04-1.90(m，4H)，1.77-1.73(m， 1H)，1.06(d，J＝7.2Hz，3H)。
手性-HPLC[柱：Chiralpak IG，0.46cm I.D.×25cm L；流动相： MeOH:ACN:DEA＝85:15:0.1；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：35℃]： Rt＝21.047分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝3.712分钟，MS计算值：508，MS实测值： 509[M+H]+.
实施例B-21–B-24
((2S)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(2-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4- 基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(异构体1至4)
将((2S)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(2-甲基哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(327mg，0.72mmol)、氧杂环丁烷-3-酮(259mg，3.6 mmol)、NaBH3CN(91mg，1.4mmol)和催化剂AcOH在DCM(6mL)和 MeOH(1mL)中的溶液在室温搅拌过夜。将额外催化剂AcOH(10滴，1滴 AcOH在1mL DCM中)添加至反应，且将反应在45℃搅拌过夜。冷却后，该反应用饱和NaHCO3(4滴)淬灭且浓缩。粗物质通过硅胶色谱法纯化 (DCM/MeOH＝40:1)以得到化合物(300mg，82％)，其为黄色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm,；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 10-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝2.199min；MS计算值：508，MS实测值：509[M+H]+.
从手性分离获得4种异构体：手性HPLC：柱：IGS；0.46cm×15cm；相：己烷/IPA＝30/70；流速:1.0ml/min；波长：UV 254nm；温度：35℃
异构体1：手性HPLC：手性HPLC：柱：IGS；0.46cm×15cm；相： MeOH/CAN＝95/5；流速:1.0ml/min；波长：UV 254nm；温度：35℃；Rt＝ 8.670分钟。
异构体2：手性HPLC：手性HPLC：柱：IGS；0.46cm×15cm；相： MeOH/CAN＝95/5；流速:1.0ml/min；波长：UV 254nm；温度：35℃；Rt＝ 12.114分钟。
异构体3：手性HPLC：手性HPLC：柱：IGS；0.46cm×15cm；相： MeOH/CAN＝95/5；流速:1.0ml/min；波长：UV 254nm；温度：35℃；Rt＝13.387分钟。
异构体4：手性HPLC：手性HPLC：柱：IGS；0.46cm×15cm；相： MeOH/CAN＝95/5；流速:1.0ml/min；波长：UV 254nm；温度：35℃；Rt＝ 17.380分钟。
实施例B-25–B-28
((2R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(2-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4- 基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
将((2R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(2-甲基哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(457mg，1mmol)、氧杂环丁烷-3-酮(360mg，5mmol)、 NaBH3CN(126mg，2.0mmol)和催化剂AcOH在DCM(6mL)和MeOH(1mL) 中的溶液在室温搅拌过夜。该反应用NaHCO3(4滴)淬灭且浓缩。将残余物浓缩且通过快速色谱法纯化(DCM/MeOH＝40:1)以得到化合物(160mg， 31％)，其为白色固体。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以4分钟。 10-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝2.184min；MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+.
((2R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(2-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(160mg)通过手性-HPLC分离以得到异构体1(10mg，6％)、异构体2(20mg，13％)、异构体3(15mg，9％)和异构体4(20mg，13％)。
手性prep-HPLC：柱：Superchiral S-AD，2cm I.D.x 25cm，5μm；相： CO2/MeOH/NH3·H2O＝60/40/0.05；流速：30ml/min；波长：254nm.
异构体1：
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD ID；0.46cm×15cm；相： CO2/MeOH/DEA＝60/40/0.05；流速：3.0ml/min；波长：UV 254nm；温度： 35℃]：Rt＝2.191分钟。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.79(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.95(s，1H)，4.83-4.77(m，2H)，4.69-4.60(m，2H)，4.33-4.30(m，2H)， 4.09-4.05(m，1H)，3.81-3.66(m，5H)，3.15-3.08(m，1H)，2.98-2.90(m， 3H)，2.65(s，3H)，2.45(s，3H)，2.26(s，1H)，2.06(s，1H)，1.93(s，2H)， 1.82(d，J＝12.8Hz，2H)，1.75-1.64(m，1H)，1.00(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝3.701分钟，MS计算值：492，MS实测值： 493[M+H]+.
异构体2：
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD ID；0.46cm×15cm；相： CO2/MeOH/DEA＝60/40/0.05；流速：3.0ml/min；波长：UV 254nm；温度： 35℃]：Rt＝2.655分钟。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.81(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.95(s，1H)，4.78(t，J＝5.6Hz，2H)，4.76-4.72(m，2H)，4.32-4.30(m， 2H)，4.09-3.99(m，2H)，3.79-3.66(m，4H)，3.29(s，1H)，3.17-3.08(m， 2H)，2.97-2.91(m，1H)，2.81-2.78(m，1H)，2.70-2.61(m，2H)，2.65(s， 3H)，2.45(s，3H)，2.13-2.07(m，1H)，1.95-1.92(m，2H)，1.77(d，J＝12.8 Hz，1H)，1.07(d，J＝6.4Hz，3H)。
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD ID；0.46cm×15cm；相： CO2/MeOH/DEA＝60/40/0.05；流速：3.0ml/min；波长：UV 254nm；温度： 35℃]：Rt＝3.703分钟，MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+.
异构体3：
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD ID；0.46cm×15cm；相： CO2/MeOH/DEA＝60/40/0.05；流速：3.0ml/min；波长：UV 254nm；温度： 35℃]：Rt＝3.594分钟。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.95(s，1H)，4.83-4.77(m，2H)，4.69-4.60(m，2H)，4.33-4.30(m，2H)， 4.08-4.05(m，1H)，3.80-3.66(m，5H)，3.14-3.08(m，1H)，2.98-2.90(m， 3H)，2.65(s，3H)，2.45(s，3H)，2.26(s，1H)，2.06(s，1H)，1.93(s，2H)， 1.82(d，J＝12.8Hz，2H)，1.73-1.64(m，1H)，1.00(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝3.703分钟，MS计算值：492，MS实测值： 493[M+H]+.
异构体4：
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD ID；0.46cm×15cm；相： CO2/MeOH/DEA＝60/40/0.05；流速：3.0ml/min；波长：UV 254nm；温度： 35℃]：Rt＝5.014分钟。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.81(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)， 6.95(s，1H)，4.77(t，J＝6.0Hz，2H)，4.72-4.67(m，2H)，4.36-4.25(m， 2H)，4.09-3.99(m，2H)，3.79-3.66(m，4H)，3.29(s，1H)，3.17-3.14(m， 2H)，2.97-2.91(m，1H)，2.81-2.78(m，1H)，2.67-2.64(m，1H)，2.65(s， 3H)，2.45(s，3H)，2.09-1.95(m，4H)，1.78(d，J＝12.8Hz，1H)，1.09(d， J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)]：Rt＝3.704分钟，MS计算值：492，MS实测值： 493[M+H]+.
实施例C-1
(S)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑 -1-基)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉
向(S)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(115mg，0.27mmol)、氧杂环丁烷-3-酮(98mg，1.36mmol)和 NaBH3CN(34mg，0.54mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加AcOH(1drop)。将混合物在室温搅拌18小时。将混合物浓缩。残余物通过prep-HPLC纯化： (xbridge C18SN.24813505811206Waters，gilson-1X-bridge C185μm 19x 150 mm 40-80％B，A：H2O(0.1％NH4HCO3)，B：ACN，UV：254nm，流速：15ml/min，GT：12mins)以得到标题化合物(20mg，15％)，其为白色固体。
1HNMR(400MHz，CD3OD)：δ8.72(s，1H)，8.13(s，1H)，7.56(s， 1H)，6.85(s，1H)，4.73-4.64(m，4H)，4.48-4.42(m，1H)，4.10-3.98(m，5H)，3.82-3.71(m，2H)，3.61-3.55(m，2H)，3.36(s，1H)2.97-2.90(m，3H)， 2.45(s，3H)，2.09-2.03(m，2H)，1.90-1.85(m，4H)，1.32(d，J＝6.8Hz， 3H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸，50x 4.6mm；流动相：B(ACN)：A(0.02％ NH4OAc)；梯度(B％)，以6min]：Rt＝4.006min；MS计算值：478，MS实测值：479[M+H]+.
实施例C-2和C-3
实施例C-2和C-3通过在N2下，在CuI和K3PO4的存在下回流吲唑、碘代化合物和胺而制备。
*Phenomenex Kinetex 5μm EVO C18，50*4.6mm；流动相：B(ACN)： A(0.02％NH4OAc)；梯度(B％)，以6分钟。.
实施例C-4
(R)-(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑 -1-基)嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇
向(R)-(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(40mg，0.091mmol)和氧杂环丁烷-3-酮(26mg，0.37mmol) 在DCM(2mL)/MeOH(2mL)中的混合物中添加AcOH/DCM溶液(1滴，源于1滴HOAc在1mL DCM中的溶液)和NaBH3CN(12mg，0.18mmol)。混合物在室温搅拌过夜。将混合物浓缩。残余物通过pre-TLC纯化 (DCM/MeOH＝20/1)以得到标题化合物(17mg)，其为白色固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.74(s，1H)，8.06(s，1H)，7.51(s，1H)， 6.87(s，1H)，4.69(d，J＝6.8Hz，4H)，4.61-4.51(m，1H)，4.14(s，3H)， 4.10-3.97(m，4H)，3.71-3.53(m，3H)，3.44-3.36(m，1H)，2.95-2.92(m， 2H)，2.87-2.80(m，1H)，2.46(s，3H)，2.25-2.20(m，1H)，2.04-1.99(m， 2H)，1.94-1.85(m，4H)。
LC-MS[Phenomenex Kinetex 5μm EVO C18，50x 4.6mm；流动相：B (ACN)：A(0.02％NH4OAc)；梯度(B％)，以6min]：Rt＝4.106min；MS计算值：494，MS实测值：495[M+H]+.
实施例C-5和C-6
(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-2-甲基吗啉-3-基)甲醇
向(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-2-甲基吗啉-3-基)甲醇(920mg，2.04mmol)、氧杂环丁烷-3-酮(734mg，10.2 mmol)和NaBH3CN(257mg，4.08mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加3 滴AcOH。将混合物在室温搅拌14小时。将反应混合物浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝50/1)以得到标题化合物(417mg，40％)，其为黄色固体。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(ACN)：A1(0.02％NH4OAc+5％ACN)；梯度(B％)，以2.5mins. 5-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝1.59min；MS计算值：508，MS实测值： 509[M+H]+.
混合物(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-2-甲基吗啉-3-基)甲醇(389mg)通过手性-HPLC分离以得到异构体1(110mg，28％)和异构体2(130mg，33％)。
手性prep-HPLC:
柱：Superchiral S-AD，2cm I.D.x 25cm，5μm；相：CO2/IPE/NH3·H2O ＝60/40/0.05；流速：30ml/min；波长：254nm.
实施例C-5(异构体1)：
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD ID；0.46cm×15cm；相： CO2/IPA/DEA＝60/40/0.05；流速：3.0ml/min；波长：UV 254nm；温度：35 ℃]：Rt＝4.625分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.2％TFA)；梯度(B％)]：Rt＝3.586分钟，MS计算值：508，MS实测值：509[M+H]+.
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.76(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)， 6.81(s，1H)，4.69(t，J＝6.4Hz，4H)，4.15(s，3H)，4.08-4.05(m，1H)， 3.78-3.54(m，5H)，3.49(s，1H)，3.29(br s，1H)，2.95-2.92(m，2H)，2.88-2.79 (m，1H)，2.46(s，3H)，2.05-1.82(m，7H)，1.16(d，J＝6.8Hz，3H)。
实施例C-6
异构体2：
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD ID；0.46cm×15cm；相： CO2/IPA/DEA＝60/40/0.05；流速：3.0ml/min；波长：UV 254nm；温度：35 ℃]：Rt＝5.
177分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(ACN)A(0.2％TFA)；梯度(B％)]：Rt＝3.587分钟，MS计算值：508，MS实测值：509[M+H]+.
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.76(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)， 6.81(s，1H)，4.69(t，J＝6.8Hz，4H)，4.15(s，3H)，4.10-4.05(m，1H)， 3.80-3.54(m，5H)，3.49(s，1H)，3.30(br s，1H)，2.95-2.92(m，2H)，2.86-2.81 (m，1H)，2.46(s，3H)，2.04-1.80(m，7H)，1.16(d，J＝6.8Hz，3H)。
F.测试和数据
如上所述，本发明化合物是LRRK2激酶抑制剂并可用于治疗由LRRK2 介导的疾病。本发明化合物的生物学活性和/或性质可通过使用任意合适的测试方法测定，包括用于确定作为LRRK2激酶抑制剂的候选化合物的活性的测试以及组织和体内模型。
1.测试
a.全长G2019人LRRK2抑制质谱分析测试
这种富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)抑制的测定基于肽‘LRRKtide’ (LRRKtide：RLGRDKYKT*LRQIRQ且“*”是指磷酸化位点)和磷酸化‘LRRKtide’的直接测量，其使用高通量RapidFire质谱分析测试。抑制剂是降低LRRKtide向磷酸-LRRKtide转化的化合物。
人G2019LRRK2质粒制备
用于PCR克隆的引物:
pHTBV-F:SEQ ID No：1
LRRK2wt-F1:SEQ ID No：2
LRRK2wt-R1：SEQ ID No：3
LRRK2wt-F2：SEQ ID No：4
LRRK2wt-R2：SEQ ID No：5
LRRK2wt-F3:SEQ ID No：6
pHTBV-R：SEQ ID No：7
pHTBV1-N-Flag-hu LRRK2通过用上述引物从pcDNA3.1(+)_人_LRRK2 (NCBIReference Sequence：NP_940980.3)PCR扩增具有N末端Flag标签的全长LRRK2序列而产生，且克隆到BamHI和KpnI位点之间的pHTBV1mcs3 载体中。
G2019全长Flag-LRRK2编码序列为SEQ ID No：8。
人G2019全长N末端flag标记的LRRK2蛋白的翻译氨基酸序列为SEQ ID No：9.
昆虫细胞培养
在500-ml摇瓶(Erlenmeyer，Corning)中的SF 900II SFM中，将Sf9昆虫细胞(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA)维持在27℃。将细胞维持在指数生长期并且每周传代两次。对于更大的体积，将细胞在2升摇瓶 (Erlenmeyer，Corning)中生长，同时在27℃培养摇床上以120rpm搅拌。
BacMam病毒的产生
为了产生重组BacMam病毒，通过基因型正常的人LRRK2BacMam质粒转化DH10Bac感受态细胞(10361-012，Invitrogen)以产生重组杆状病毒 DNA。将Sf9昆虫细胞与重组杆状病毒DNA和cellfectin(10362-100， Invitrogen)的混合物共转染。在27℃温育4小时后，用含有5％HI FBS的 Sf-900III SFM培养基(10100147，Invitrogen)代替转染培养基。细胞进一步孵育4天。收集含有杆状病毒的感染的细胞培养基(P0病毒原液)并通过以 200-300ulP0进一步感染200ml Sf9细胞扩增。
通过BacPAKRapid滴度对BacMam病毒滴度进行定量
根据制造商的方案，使用BacPAK Papid Titer试剂盒(631406，Clontech) 测定作为噬菌斑形成单位(pfu)/ml测量的病毒滴度。将以3×105个细胞/孔接种于96孔板中的Sf9细胞与连续稀释的病毒原液一起在27℃孵育1小时，每孔加入50μl甲基纤维素覆盖物，随后孵育43～47h。然后将细胞固定在 4％多聚甲醛(PFA)中。用稀释的正常山羊血清封闭细胞后，将小鼠抗gp64 抗体加入到细胞中。温育30分钟后，将细胞用含有0.1％Triton-X100(PBST) 的磷酸盐缓冲液洗涤，并用山羊抗小鼠抗体/HRP缀合物再孵育30分钟。随后是蓝色过氧化物酶底物，其通过深蓝色检测单个感染的细胞和感染细胞的病灶。
蛋白质表达和纯化
a)Flag标记的全长G2019人LRRK2的表达
将HEK2936E细胞在具有5％CO2的潮湿气氛的37℃培养箱中以110 rpm旋转在定轨摇床中孵育。在转导当天，细胞活力高于98％，细胞密度在 1x106～1.5x106个细胞/ml的范围内。
将HEK2936E细胞以1,000rpm离心10分钟，然后将细胞以1×106个细胞/ml的密度重悬于含有0.1％F-68(Invitrogen:24040-032)但不含抗生素 (G418)的新鲜Freestyle293表达培养基(Invitrogen:12338)中。
具有Flag-hu LRRK2(基因型正常)基因的BacMam病毒以40,000g离心 2小时，然后重新悬浮于新鲜的Freestyle 293表达培养基中。将重悬的病毒以10的MOI加入细胞中。将细胞以110rpm旋转在定轨摇床中，在具有5％ CO2的空气中的潮湿气氛的37℃培养箱中孵育。在转导后大约48小时，通过以4,000rpm离心20分钟收集培养物，并且将沉淀物冷冻用于纯化。
b)Flag标记的全长G2019人LRRK2的纯化
将细胞沉淀物与蛋白酶抑制剂(Roche：04693132001)和benzonase(MerckMillipore：70746-3CN)一起以供应商建议的推荐浓度重新悬浮于(20mL/升细胞培养物)裂解缓冲液(50mM TrisHCl pH7.5(4℃)、500mM NaCl、0.5mM EDTA、0.1％TritonX-100、10％甘油，新鲜添加2mM DTT)中。将悬浮细胞在冰上超声破碎30分钟(2秒开/4秒关，20％幅度)，并在4℃以10,000rpm 离心30分钟。将上清液与每升1ml抗Flag磁珠(Sigma-Aldrich：M8823)的细胞培养物在4℃孵育3小时，然后用5mL(5柱体积)结合缓冲液(50mM TrispH7.5@4C、500mM NaCl、0.5mM EDTA、0.1％TritonX-100、10％甘油、新鲜添加2mM DTT)洗涤磁珠三次。用洗脱缓冲液(50mM Tris pH7.5@4C、 500mM NaCl、0.5mM EDTA、0.1％TritonX-100、10％甘油，新鲜添加2mM DTT，250ug/ml Flag肽(Sigma-Aldrich：F3290))在4℃洗脱Flag标记的LRRK2 蛋白2小时。通过Zeba Spin脱盐柱，7K MWCO(Thermo-Fisher：89893)去除Flag肽，并将洗脱的LRRK2蛋白的缓冲液交换到存储缓冲液中(50mM Tris pH7.5@4C、150mM NaCl、0.5mM EDTA、0.02％Triton X–100、2mM DTT 和50％甘油)，使用Amicon超级离心过滤装置(100kD)(Merck：UFC910096)。将含有LRRK2蛋白的级分合并、等分并在-80℃保存。通过Bradford蛋白测定确定蛋白浓度，并通过NuPAGNovex 4-12％双Tris蛋白凝胶(Invitrogen： NP0322BOX)分析蛋白纯度。
测定方案
1)将10mM测试化合物溶于100％DMSO中，并以1:4连续稀释。然后将100nL的该稀释系列加入到384孔v形底聚丙烯板中，不包括第6和18 列。将100nL DMSO加入第6和18列中作为对照孔。测定稀释度得出100μM 测试化合物的最高最终测定浓度。
2)使用多点混合分配器将50ul在实验室级水中的1％甲酸加入第18列中作为预先停止的测定对照。
3)使用多点混合分配器，将在测定缓冲液(50mM Hepes(pH 7.2)、10mM MgCl2、150mM NaCl、5％甘油、0.0025％triton X-100和1mM DTT)中的5uL 含有50nM纯化的重组全长Flag-LRRK2的‘酶溶液’添加至除了所有孔中，得到25nM LRRK2酶的最终测定浓度。这导致第6列(酶加DMSO)给出0％抑制，而第18列给出100％抑制(预先停止的对照)。然后将测试板在室温孵育30分钟。
4)使用多点混合分配器将5uL‘底物溶液’(含有50uM LRRKtide肽底物和4mMATP)加入到板的所有孔中，得到25uM LRRKtide和2mMATP的最终测定浓度。然后将测试板在室温孵育1小时。(根据不同酶批次的反应速率和线性，孵育可能会有所不同)。
5)向所有孔(除了第18列)中加入50ul在实验室级水中的1％甲酸以淬灭反应，并将板以3000rpm离心10分钟。然后在连接到AB SciexAPI 4000三重四极杆质谱仪的AgilentRapidFire高通量固相萃取***上分析测试板，具有以下设定：
RapidFire设定:
·Sip高度＝2mm，抽吸＝500ms，上样时间＝3000ms，洗脱时间＝3000ms，再平衡＝500ms，
·流速：泵1＝1.5mL/min，泵2＝1.25mL/min，泵3＝0.8mL/min 质谱仪设定
·LRRKtide检测设定：Q1质量644.8Da，Q3质量638.8，分布电势76伏特，碰撞能量37伏特，CXP 34伏特
·磷酸-LRRKtide检测设定：Q1质量671.4Da，Q3质量638.8，分布电势76伏特，碰撞能量37伏特，CXP 34伏特。
·使用C4柱，运行缓冲液为：A(水相)0.1％甲酸的水溶液B(有机相)0.1％甲酸，80％乙腈，20％水
·碰撞气体：12，气帘气：25,离子源气体(1)：60,离子源气体(2)： 60,离子喷雾电压：5500，温度：600，Interfaec Heater：ON.
·分辨力Q1：低，分辨力Q3：低。
6)使用ActivityBase软件(IDBS)分析数据。使用以下公式计算从LRRKtide转化为磷酸-LRRKtide的转化百分比：
转化％＝(磷酸-LRRKtide产物峰面积/(磷酸-LRRKtide产物峰面积+ LRRKtide底物峰面积))*100
b.重组细胞的LRRK2 AlphaScreen测定
为了确定在细胞中化合物抑制LRRK2激酶活性的活性，采用观测到的 LRRK2 Ser935磷酸化的LRRK2激酶-依赖性调节(Dzamko等人，2010， Biochem.J.430：405-413)以开发在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的 LRRK2 Ser935磷酸化的定量的基于384孔板的免疫测定，所述细胞系被设计用以过表达重组全长LRRK2蛋白。
表达全长重组LRRK2的BacMam病毒购自Invitrogen并通过在补充有 3％胎牛血清的Sf-900 III SFM培养基中以0.3的MOI培养SF-9细胞4-5天进行扩增。然后将感染的细胞培养物以2000g离心20分钟，通过抗-gp64菌斑试验确定病毒上清液滴度并在4℃储存。
通过标准方法(PerkinElmer)将亲和纯化的抗-磷酸化LRRK2Ser935羊多克隆抗体(Dzamko等人，2010，Biochem.J.430：405-413)进行生物素化。抗 -LRRK2兔多克隆抗体购自Novus Biologicals。AlphaScreen蛋白AIgG试剂盒(包含受体和供体珠粒)购自PerkinElmer。
SH-SY5Y细胞在含10％透析的胎牛血清的DMEM/F12培养基中生长并通过用0.5％胰蛋白酶-EDTA在37℃处理5分钟进行收集，然后以1000rpm 离心4分钟。将该细胞沉淀物以200,000细胞/ml再悬于Opti-MEM减血清培养基(Invitrogen)中并与BacMam LRRK2病毒以MOI＝50进行混合。然后将50μl细胞溶液分散于384孔板的各孔中并在37℃，5％CO2培养24小时。
将连续稀释的测试化合物在Opti-MEM减血清培养基(Invitrogen)中制备并将5.6ul从化合物板转移至细胞测试板以实现10uM的最高最终测试浓度。在一些孔中使用DMSO作为对照。将细胞在37℃，5％CO2培养60分钟。然后除去该培养基并将细胞通过加入20ul细胞裂解缓冲液(Cell Signaling Technology)裂解并在4℃培养20分钟。然后将10ul的抗体/受体珠粒混合物 [(1/1000生物素化-pS935LRRK2抗体，1/1000总-LRRK2抗体，1/100受体珠粒在AlphaScreen检测缓冲液(25mM Hepes(pH 7.4)，0.5％Triton X-100， 1mg/ml葡聚糖500和0.1％BSA)中]加至各孔并将板在环境温度避光培养2 小时。然后将10μl的供体珠粒溶液(1/33.3供体珠粒在AlphaScreen检测缓冲液中)加至各孔。在环境温度避光培养额外的2小时后，将该板在 EnVisionTM板读取器上在发射520-620nm和激发680nm处进行读取。剂量响应曲线数据基于S形剂量-响应模型。
c.FASSIF溶解度测试
可以在pH 6.5的禁食状态模拟肠介质(FaSSIF)中评估化合物溶解度。将一定量的试验化合物与一定体积的FaSSIF混合以制备约1mg/ml的悬浮液。将悬浮液在37℃下在水浴振荡器中温育24小时。在第4小时和第24 小时，将悬浮液以14K rpm离心15分钟。取出100μl上清液并用相同体积的50％乙腈水溶液稀释，并用UPLC(超高效液相色谱法)分析。基于测试化合物的峰面积计算FaSSIF溶解度。
FaSSIF(170ml)制剂将100mg卵磷脂和274mg(anhydequiv) NaTaurocholate溶解在约150ml pH6.5缓冲液中。用pH6.5缓冲液使溶液达到170ml的体积。
pH6.5缓冲溶液(1L)制剂将4.083g KH2PO4和7.456g KCl溶解在 800ml水中，随后加入100ml 0.1M NaOH。用水将溶液调至1L体积。测量缓冲溶液的pH值并调节至6.50±0.1。
UPLC校准和溶解度计算的标准溶液2μM、20μM和200μM DMSO(50 ％ACN水)溶液。
UPLC方法和参数
仪器：WatersACQUITYUPLC System
柱：WatersACQUITYUPLC BEH C18(1.7μm，2.1×50mm)
流动相：A：水中的0.1％TFA/B：CAN中的0.1％TFA
梯度：0分钟(A95％/B 5％)，2分钟(A 5％/B 95％)，2.5分钟(A 5％/B 95％)，2.6分钟(A95％/B 5％)，3分钟(A95％/B 5％)
流速：0.8mL/min；柱温：40℃；注射体积：1.0μL；UV检测： 280nm
d.CLND溶解度测试
基于已知方案，可以通过CLND(化学发光氮检测)溶解度测定来评估化合物的动力学溶解度(参见，例如，Bhattachar S.N.；Wesley J.A.；Seadeek C.,Evaluation of theChemiluminescent Nitrogen Detector for Solubility Determinations to SupportDrug Discovery,J.Pharm.Biomed.Anal.2006 (41):152-157；Kestranek A,Chervenek A,Logenberger J,Placko S. Chemiluminescent Nitrogen Detection(CLND)to MeasureKinetic Aqueous Solubility,CurrProtoc Chem Biol.,2013,5(4):269-80)。通常，用pH7.4磷酸盐缓冲盐水将5μl 10mM DMSO的测试化合物储备溶液稀释至100μl，在室温下平衡1小时，通过Millipore MultiscreenHTS-PCF滤板(MSSL BPC)过滤。通过适当校准的流动注射化学发光氮检测来定量滤液。
2.测试数据
在重组细胞LRRK2AlphaScreen测定中测试实施例E A-1-A-4的化合物，并显示pIC50≥6.5。在重组细胞LRRK2AlphaScreen测定中，实施例 A-1的化合物显示出pIC50为6.7。
在重组细胞LRRK2AlphaScreen测定中测试实施例EA-3和EA-4的化合物，并显示出pIC50≥7.5。在重组细胞LRRK2AlphaScreen测定中，实施例A-3的化合物显示出pIC50为7.9。
在全长G2019人LRRK2抑制质谱分析中测试实施例EA-1和EA-2的化合物，并显示pIC50≥7.0。
在重组细胞LRRK2AlphaScreen测定中测试实施例E B-1–E B-4和E B-6–E B-8的化合物，并显示pIC50≥6.5，如下所示：
在全长G2019人LRRK2抑制质谱测定中测试实施例E B-7和E B-8的化合物，并显示pIC50≥7.0。
在重组细胞LRRK2AlphaScreen测定中测试实施例E C-2和E C-3的化合物，并显示出pIC50≥7.0。
3.序列表
SEQ ID NO：1用于人G2019LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物：pHTBV-F
SEQ ID NO：2用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物： LRRK2 wt-F1
SEQ ID NO：3用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物： LRRK2 wt-R1
SEQ ID NO：4用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物： LRRK2 wt-F2
SEQ ID NO：5用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物 LRRK2 wt-R2
SEQ ID NO：6用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物： LRRK2 wt-F3
SEQ ID NO：7用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物： pHTBV-R
SEQ ID NO：8 G2019全长Flag-LRRK2编码序列
SEQ ID NO：9人G2019全长LRRK2 flag标记蛋白的翻译蛋白序列
SEQ ID NO：10：‘LRRKtide’肽
H-RLGRDKYKTLRQIRQ-OH。
序列表
<110> GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited
<120> 化合物
<130> PC66269
<150> PCT/CN2017/072587
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<150> PCT/CN2017/072610
<151> 2017-01-25
<150> PCT/CN2017/072612
<151> 2017-01-25
<160> 10
<170> PatentIn version 3.5
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gaatagtgga tctcgtgaac aag 23
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<223> G2019 全长Flag-LRRK2编码序列
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atggattaca aggatgacga cgataagatg gctagtggca gctgtcaggg gtgcgaagag 60
gacgaggaaa ctctgaagaa gttgatagtc aggctgaaca atgtccagga aggaaaacag 120
atagaaacgc tggtccaaat cctggaggat ctgctggtgt tcacgtactc cgagcacgcc 180
tccaagttat ttcaaggcaa aaatatccat gtgcctctgt tgatcgtctt ggactcctat 240
atgagagtcg cgagtgtgca gcaggtgggt tggtcacttc tgtgcaaatt aatagaagtc 300
tgtccaggta caatgcaaag cttaatggga ccccaggatg ttggaaatga ttgggaagtc 360
cttggtgttc accaattgat tcttaaaatg ctaacagttc ataatgccag tgtaaacttg 420
tcagtgattg gactgaagac cttagatctc ctcctaactt caggtaaaat caccttgctg 480
atactggatg aagaaagtga tattttcatg ttaatttttg atgccatgca ctcatttcca 540
gccaatgatg aagtccagaa acttggatgc aaagctttac atgtgctgtt tgagagagtc 600
tcagaggagc aactgactga atttgttgag aacaaagatt atatgatatt gttaagtgcg 660
ttaacaaatt ttaaagatga agaggaaatt gtgcttcatg tgctgcattg tttacattcc 720
ctagcgattc cttgcaataa tgtggaagtc ctcatgagtg gcaatgtcag gtgttataat 780
attgtggtgg aagctatgaa agcattccct atgagtgaaa gaattcaaga agtgagttgc 840
tgtttgctcc ataggcttac attaggtaat tttttcaata tcctggtatt aaacgaagtc 900
catgagtttg tggtgaaagc tgtgcagcag tacccagaga atgcagcatt gcagatctca 960
gcgctcagct gtttggccct cctcactgag actattttct taaatcaaga tttagaggaa 1020
aagaatgaga atcaagagaa tgatgatgag ggggaagaag ataaattgtt ttggctggaa 1080
gcctgttaca aagcattaac gtggcataga aagaacaagc acgtgcagga ggccgcatgc 1140
tgggcactaa ataatctcct tatgtaccaa aacagtttac atgagaagat tggagatgaa 1200
gatggccatt tcccagctca tagggaagtg atgctctcca tgctgatgca ttcttcatca 1260
aaggaagttt tccaggcatc tgcgaatgca ttgtcaactc tcttagaaca aaatgttaat 1320
ttcagaaaaa tactgttatc aaaaggaata cacctgaatg ttttggagtt aatgcagaag 1380
catatacatt ctcctgaagt ggctgaaagt ggctgtaaaa tgctaaatca tctttttgaa 1440
ggaagcaaca cttccctgga tataatggca gcagtggtcc ccaaaatact aacagttatg 1500
aaacgtcatg agacatcatt accagtgcag ctggaggcgc ttcgagctat tttacatttt 1560
atagtgcctg gcatgccaga agaatccagg gaggatacag aatttcatca taagctaaat 1620
atggttaaaa aacagtgttt caagaatgat attcacaaac tggtcctagc agctttgaac 1680
aggttcattg gaaatcctgg gattcagaaa tgtggattaa aagtaatttc ttctattgta 1740
cattttcctg atgcattaga gatgttatcc ctggaaggtg ctatggattc agtgcttcac 1800
acactgcaga tgtatccaga tgaccaagaa attcagtgtc tgggtttaag tcttatagga 1860
tacttgatta caaagaagaa tgtgttcata ggaactggac atctgctggc aaaaattctg 1920
gtttccagct tataccgatt taaggatgtt gctgaaatac agactaaagg atttcagaca 1980
atcttagcaa tcctcaaatt gtcagcatct ttttctaagc tgctggtgca tcattcattt 2040
gacttagtaa tattccatca aatgtcttcc aatatcatgg aacaaaagga tcaacagttt 2100
ctaaacctct gttgcaagtg ttttgcaaaa gtagctatgg atgattactt aaaaaatgtg 2160
atgctagaga gagcgtgtga tcagaataac agcatcatgg ttgaatgctt gcttctattg 2220
ggagcagatg ccaatcaagc aaaggaggga tcttctttaa tttgtcaggt atgtgagaaa 2280
gagagcagtc ccaaattggt ggaactctta ctgaatagtg gatctcgtga acaagatgta 2340
cgaaaagcgt tgacgataag cattgggaaa ggtgacagcc agatcatcag cttgctctta 2400
aggaggctgg ccctggatgt ggccaacaat agcatttgcc ttggaggatt ttgtatagga 2460
aaagttgaac cttcttggct tggtccttta tttccagata agacttctaa tttaaggaaa 2520
caaacaaata tagcatctac actagcaaga atggtgatca gatatcagat gaaaagtgct 2580
gtggaagaag gaacagcctc aggcagcgat ggaaattttt ctgaagatgt gctgtctaaa 2640
tttgatgaat ggacctttat tcctgactct tctatggaca gtgtgtttgc tcaaagtgat 2700
gacctggata gtgaaggaag tgaaggctca tttcttgtga aaaagaaatc taattcaatt 2760
agtgtaggag aattttaccg agatgccgta ttacagcgtt gctcaccaaa tttgcaaaga 2820
cattccaatt ccttggggcc catttttgat catgaagatt tactgaagcg aaaaagaaaa 2880
atattatctt cagatgattc actcaggtca tcaaaacttc aatcccatat gaggcattca 2940
gacagcattt cttctctggc ttctgagaga gaatatatta catcactaga cctttcagca 3000
aatgaactaa gagatattga tgccctaagc cagaaatgct gtataagtgt tcatttggag 3060
catcttgaaa agctggagct tcaccagaat gcactcacga gctttccaca acagctatgt 3120
gaaactctga agagtttgac acatttggac ttgcacagta ataaatttac atcatttcct 3180
tcttatttgt tgaaaatgag ttgtattgct aatcttgatg tctctcgaaa tgacattgga 3240
ccctcagtgg ttttagatcc tacagtgaaa tgtccaactc tgaaacagtt taacctgtca 3300
tataaccagc tgtcttttgt acctgagaac ctcactgatg tggtagagaa actggagcag 3360
ctcattttag aaggaaataa aatatcaggg atatgctccc ccttgagact gaaggaactg 3420
aagattttaa accttagtaa gaaccacatt tcatccctat cagagaactt tcttgaggct 3480
tgtcctaaag tggagagttt cagtgccaga atgaattttc ttgctgctat gcctttcttg 3540
cctccttcta tgacaatcct aaaattatct cagaacaaat tttcctgtat tccagaagca 3600
attttaaatc ttccacactt gcggtcttta gatatgagca gcaatgatat tcagtaccta 3660
ccaggtcccg cacactggaa atctttgaac ttaagggaac tcttatttag ccataatcag 3720
atcagcatct tggacttgag tgaaaaagca tatttatggt ctagagtaga gaaactgcat 3780
ctttctcaca ataaactgaa agagattcct cctgagattg gctgtcttga aaatctgaca 3840
tctctggatg tcagttacaa cttggaacta agatcctttc ccaatgaaat ggggaaatta 3900
agcaaaatat gggatcttcc tttggatgaa ctgcatctta actttgattt taaacatata 3960
ggatgtaaag ccaaagacat cataaggttt cttcaacagc gattaaaaaa ggctgtgcct 4020
tataaccgaa tgaaacttat gattgtggga aatactggga gtggtaaaac caccttattg 4080
cagcaattaa tgaaaaccaa gaaatcagat cttggaatgc aaagtgccac agttggcata 4140
gatgtgaaag actggcctat ccaaataaga gacaaaagaa agagagatct cgtcctaaat 4200
gtgtgggatt ttgcaggtcg tgaggaattc tatagtactc atccccattt tatgacgcag 4260
cgagcattgt accttgctgt ctatgacctc agcaagggac aggctgaagt tgatgccatg 4320
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acacatttgg atgtttctga tgagaagcaa cgcaaagcct gcatgagtaa aatcaccaag 4440
gaactcctga ataagcgagg gttccctgcc atacgagatt accactttgt gaatgccacc 4500
gaggaatctg atgctttggc aaaacttcgg aaaaccatca taaacgagag ccttaatttc 4560
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aaaatcattt tatcggagcg taaaaatgtg ccaattgaat ttcccgtaat tgaccggaaa 4680
cgattattac aactagtgag agaaaatcag ctgcagttag atgaaaatga gcttcctcac 4740
gcagttcact ttctaaatga atcaggagtc cttcttcatt ttcaagaccc agcactgcag 4800
ttaagtgact tgtactttgt ggaacccaag tggctttgta aaatcatggc acagattttg 4860
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gaaaaatttc tttcaaagaa aaggaaattt ccaaagaact acatgtcaca gtattttaag 4980
ctcctagaaa aattccagat tgctttgcca ataggagaag aatatttgct ggttccaagc 5040
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gttgtggaag tgtgggataa gaaaactgaa aaactctgtg gactaataga ctgcgtgcac 7200
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ggccatattt tactcctgga tctttcaact cgtcgactta tacgtgtaat ttacaacttt 7380
tgtaattcgg tcagagtcat gatgacagca cagctaggaa gccttaaaaa tgtcatgctg 7440
gtattgggct acaaccggaa aaatactgaa ggtacacaaa agcagaaaga gatacaatct 7500
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gaagtgagaa aagaattagc tgaaaaaatg agacgaacat ctgttgagta a 7611
<210> 9
<211> 2536
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人G2019全长LRRK2 flag标记蛋白的翻译蛋白序列
<400> 9
Met Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Met Ala Ser Gly Ser Cys Gln
1 5 10 15
Gly Cys Glu Glu Asp Glu Glu Thr Leu Lys Lys Leu Ile Val Arg Leu
20 25 30
Asn Asn Val Gln Glu Gly Lys Gln Ile Glu Thr Leu Val Gln Ile Leu
35 40 45
Glu Asp Leu Leu Val Phe Thr Tyr Ser Glu His Ala Ser Lys Leu Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Asn Ile His Val Pro Leu Leu Ile Val Leu Asp Ser Tyr
65 70 75 80
Met Arg Val Ala Ser Val Gln Gln Val Gly Trp Ser Leu Leu Cys Lys
85 90 95
Leu Ile Glu Val Cys Pro Gly Thr Met Gln Ser Leu Met Gly Pro Gln
100 105 110
Asp Val Gly Asn Asp Trp Glu Val Leu Gly Val His Gln Leu Ile Leu
115 120 125
Lys Met Leu Thr Val His Asn Ala Ser Val Asn Leu Ser Val Ile Gly
130 135 140
Leu Lys Thr Leu Asp Leu Leu Leu Thr Ser Gly Lys Ile Thr Leu Leu
145 150 155 160
Ile Leu Asp Glu Glu Ser Asp Ile Phe Met Leu Ile Phe Asp Ala Met
165 170 175
His Ser Phe Pro Ala Asn Asp Glu Val Gln Lys Leu Gly Cys Lys Ala
180 185 190
Leu His Val Leu Phe Glu Arg Val Ser Glu Glu Gln Leu Thr Glu Phe
195 200 205
Val Glu Asn Lys Asp Tyr Met Ile Leu Leu Ser Ala Leu Thr Asn Phe
210 215 220
Lys Asp Glu Glu Glu Ile Val Leu His Val Leu His Cys Leu His Ser
225 230 235 240
Leu Ala Ile Pro Cys Asn Asn Val Glu Val Leu Met Ser Gly Asn Val
245 250 255
Arg Cys Tyr Asn Ile Val Val Glu Ala Met Lys Ala Phe Pro Met Ser
260 265 270
Glu Arg Ile Gln Glu Val Ser Cys Cys Leu Leu His Arg Leu Thr Leu
275 280 285
Gly Asn Phe Phe Asn Ile Leu Val Leu Asn Glu Val His Glu Phe Val
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Val Lys Ala Val Gln Gln Tyr Pro Glu Asn Ala Ala Leu Gln Ile Ser
305 310 315 320
Ala Leu Ser Cys Leu Ala Leu Leu Thr Glu Thr Ile Phe Leu Asn Gln
325 330 335
Asp Leu Glu Glu Lys Asn Glu Asn Gln Glu Asn Asp Asp Glu Gly Glu
340 345 350
Glu Asp Lys Leu Phe Trp Leu Glu Ala Cys Tyr Lys Ala Leu Thr Trp
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His Arg Lys Asn Lys His Val Gln Glu Ala Ala Cys Trp Ala Leu Asn
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Asn Leu Leu Met Tyr Gln Asn Ser Leu His Glu Lys Ile Gly Asp Glu
385 390 395 400
Asp Gly His Phe Pro Ala His Arg Glu Val Met Leu Ser Met Leu Met
405 410 415
His Ser Ser Ser Lys Glu Val Phe Gln Ala Ser Ala Asn Ala Leu Ser
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Thr Leu Leu Glu Gln Asn Val Asn Phe Arg Lys Ile Leu Leu Ser Lys
435 440 445
Gly Ile His Leu Asn Val Leu Glu Leu Met Gln Lys His Ile His Ser
450 455 460
Pro Glu Val Ala Glu Ser Gly Cys Lys Met Leu Asn His Leu Phe Glu
465 470 475 480
Gly Ser Asn Thr Ser Leu Asp Ile Met Ala Ala Val Val Pro Lys Ile
485 490 495
Leu Thr Val Met Lys Arg His Glu Thr Ser Leu Pro Val Gln Leu Glu
500 505 510
Ala Leu Arg Ala Ile Leu His Phe Ile Val Pro Gly Met Pro Glu Glu
515 520 525
Ser Arg Glu Asp Thr Glu Phe His His Lys Leu Asn Met Val Lys Lys
530 535 540
Gln Cys Phe Lys Asn Asp Ile His Lys Leu Val Leu Ala Ala Leu Asn
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Arg Phe Ile Gly Asn Pro Gly Ile Gln Lys Cys Gly Leu Lys Val Ile
565 570 575
Ser Ser Ile Val His Phe Pro Asp Ala Leu Glu Met Leu Ser Leu Glu
580 585 590
Gly Ala Met Asp Ser Val Leu His Thr Leu Gln Met Tyr Pro Asp Asp
595 600 605
Gln Glu Ile Gln Cys Leu Gly Leu Ser Leu Ile Gly Tyr Leu Ile Thr
610 615 620
Lys Lys Asn Val Phe Ile Gly Thr Gly His Leu Leu Ala Lys Ile Leu
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Val Ser Ser Leu Tyr Arg Phe Lys Asp Val Ala Glu Ile Gln Thr Lys
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Gly Phe Gln Thr Ile Leu Ala Ile Leu Lys Leu Ser Ala Ser Phe Ser
660 665 670
Lys Leu Leu Val His His Ser Phe Asp Leu Val Ile Phe His Gln Met
675 680 685
Ser Ser Asn Ile Met Glu Gln Lys Asp Gln Gln Phe Leu Asn Leu Cys
690 695 700
Cys Lys Cys Phe Ala Lys Val Ala Met Asp Asp Tyr Leu Lys Asn Val
705 710 715 720
Met Leu Glu Arg Ala Cys Asp Gln Asn Asn Ser Ile Met Val Glu Cys
725 730 735
Leu Leu Leu Leu Gly Ala Asp Ala Asn Gln Ala Lys Glu Gly Ser Ser
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Leu Ile Cys Gln Val Cys Glu Lys Glu Ser Ser Pro Lys Leu Val Glu
755 760 765
Leu Leu Leu Asn Ser Gly Ser Arg Glu Gln Asp Val Arg Lys Ala Leu
770 775 780
Thr Ile Ser Ile Gly Lys Gly Asp Ser Gln Ile Ile Ser Leu Leu Leu
785 790 795 800
Arg Arg Leu Ala Leu Asp Val Ala Asn Asn Ser Ile Cys Leu Gly Gly
805 810 815
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Asp Lys Thr Ser Asn Leu Arg Lys Gln Thr Asn Ile Ala Ser Thr Leu
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Ala Arg Met Val Ile Arg Tyr Gln Met Lys Ser Ala Val Glu Glu Gly
850 855 860
Thr Ala Ser Gly Ser Asp Gly Asn Phe Ser Glu Asp Val Leu Ser Lys
865 870 875 880
Phe Asp Glu Trp Thr Phe Ile Pro Asp Ser Ser Met Asp Ser Val Phe
885 890 895
Ala Gln Ser Asp Asp Leu Asp Ser Glu Gly Ser Glu Gly Ser Phe Leu
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Val Lys Lys Lys Ser Asn Ser Ile Ser Val Gly Glu Phe Tyr Arg Asp
915 920 925
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Leu Gly Pro Ile Phe Asp His Glu Asp Leu Leu Lys Arg Lys Arg Lys
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Ile Leu Ser Ser Asp Asp Ser Leu Arg Ser Ser Lys Leu Gln Ser His
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Met Arg His Ser Asp Ser Ile Ser Ser Leu Ala Ser Glu Arg Glu Tyr
980 985 990
Ile Thr Ser Leu Asp Leu Ser Ala Asn Glu Leu Arg Asp Ile Asp Ala
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Lys Leu Glu Leu His Gln Asn Ala Leu Thr Ser Phe Pro Gln Gln
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Leu Cys Glu Thr Leu Lys Ser Leu Thr His Leu Asp Leu His Ser
1040 1045 1050
Asn Lys Phe Thr Ser Phe Pro Ser Tyr Leu Leu Lys Met Ser Cys
1055 1060 1065
Ile Ala Asn Leu Asp Val Ser Arg Asn Asp Ile Gly Pro Ser Val
1070 1075 1080
Val Leu Asp Pro Thr Val Lys Cys Pro Thr Leu Lys Gln Phe Asn
1085 1090 1095
Leu Ser Tyr Asn Gln Leu Ser Phe Val Pro Glu Asn Leu Thr Asp
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Val Val Glu Lys Leu Glu Gln Leu Ile Leu Glu Gly Asn Lys Ile
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Ser Gly Ile Cys Ser Pro Leu Arg Leu Lys Glu Leu Lys Ile Leu
1130 1135 1140
Asn Leu Ser Lys Asn His Ile Ser Ser Leu Ser Glu Asn Phe Leu
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Glu Ala Cys Pro Lys Val Glu Ser Phe Ser Ala Arg Met Asn Phe
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Leu Ala Ala Met Pro Phe Leu Pro Pro Ser Met Thr Ile Leu Lys
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Leu Ser Gln Asn Lys Phe Ser Cys Ile Pro Glu Ala Ile Leu Asn
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Leu Pro His Leu Arg Ser Leu Asp Met Ser Ser Asn Asp Ile Gln
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Tyr Leu Pro Gly Pro Ala His Trp Lys Ser Leu Asn Leu Arg Glu
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Leu Leu Phe Ser His Asn Gln Ile Ser Ile Leu Asp Leu Ser Glu
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Lys Ala Tyr Leu Trp Ser Arg Val Glu Lys Leu His Leu Ser His
1250 1255 1260
Asn Lys Leu Lys Glu Ile Pro Pro Glu Ile Gly Cys Leu Glu Asn
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Leu Thr Ser Leu Asp Val Ser Tyr Asn Leu Glu Leu Arg Ser Phe
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Ala Lys Asp Ile Ile Arg Phe Leu Gln Gln Arg Leu Lys Lys Ala
1325 1330 1335
Val Pro Tyr Asn Arg Met Lys Leu Met Ile Val Gly Asn Thr Gly
1340 1345 1350
Ser Gly Lys Thr Thr Leu Leu Gln Gln Leu Met Lys Thr Lys Lys
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Ser Asp Leu Gly Met Gln Ser Ala Thr Val Gly Ile Asp Val Lys
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Asp Trp Pro Ile Gln Ile Arg Asp Lys Arg Lys Arg Asp Leu Val
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Leu Asn Val Trp Asp Phe Ala Gly Arg Glu Glu Phe Tyr Ser Thr
1400 1405 1410
His Pro His Phe Met Thr Gln Arg Ala Leu Tyr Leu Ala Val Tyr
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Asp Leu Ser Lys Gly Gln Ala Glu Val Asp Ala Met Lys Pro Trp
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Leu Phe Asn Ile Lys Ala Arg Ala Ser Ser Ser Pro Val Ile Leu
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Val Gly Thr His Leu Asp Val Ser Asp Glu Lys Gln Arg Lys Ala
1460 1465 1470
Cys Met Ser Lys Ile Thr Lys Glu Leu Leu Asn Lys Arg Gly Phe
1475 1480 1485
Pro Ala Ile Arg Asp Tyr His Phe Val Asn Ala Thr Glu Glu Ser
1490 1495 1500
Asp Ala Leu Ala Lys Leu Arg Lys Thr Ile Ile Asn Glu Ser Leu
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Asn Phe Lys Ile Arg Asp Gln Leu Val Val Gly Gln Leu Ile Pro
1520 1525 1530
Asp Cys Tyr Val Glu Leu Glu Lys Ile Ile Leu Ser Glu Arg Lys
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Asn Val Pro Ile Glu Phe Pro Val Ile Asp Arg Lys Arg Leu Leu
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Gln Leu Val Arg Glu Asn Gln Leu Gln Leu Asp Glu Asn Glu Leu
1565 1570 1575
Pro His Ala Val His Phe Leu Asn Glu Ser Gly Val Leu Leu His
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Phe Gln Asp Pro Ala Leu Gln Leu Ser Asp Leu Tyr Phe Val Glu
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Pro Lys Trp Leu Cys Lys Ile Met Ala Gln Ile Leu Thr Val Lys
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Val Glu Gly Cys Pro Lys His Pro Lys Gly Ile Ile Ser Arg Arg
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Asp Val Glu Lys Phe Leu Ser Lys Lys Arg Lys Phe Pro Lys Asn
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Tyr Met Ser Gln Tyr Phe Lys Leu Leu Glu Lys Phe Gln Ile Ala
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Leu Pro Ile Gly Glu Glu Tyr Leu Leu Val Pro Ser Ser Leu Ser
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Asp His Arg Pro Val Ile Glu Leu Pro His Cys Glu Asn Ser Glu
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Ile Ile Ile Arg Leu Tyr Glu Met Pro Tyr Phe Pro Met Gly Phe
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Leu Ser Gly Arg Glu Arg Ala Leu Arg Pro Asn Arg Met Tyr Trp
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Arg Gln Gly Ile Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Ala Tyr Cys Leu
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Val Gly Ser Glu Val Leu Asp Asn His Pro Glu Ser Phe Leu Lys
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Ile Thr Val Pro Ser Cys Arg Lys Gly Cys Ile Leu Leu Gly Gln
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Val Val Asp His Ile Asp Ser Leu Met Glu Glu Trp Phe Pro Gly
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Leu Leu Glu Ile Asp Ile Cys Gly Glu Gly Glu Thr Leu Leu Lys
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Lys Trp Ala Leu Tyr Ser Phe Asn Asp Gly Glu Glu His Gln Lys
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Ile Leu Leu Asp Asp Leu Met Lys Lys Ala Glu Glu Gly Asp Leu
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Leu Val Asn Pro Asp Gln Pro Arg Leu Thr Ile Pro Ile Ser Gln
1850 1855 1860
Ile Ala Pro Asp Leu Ile Leu Ala Asp Leu Pro Arg Asn Ile Met
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Leu Asn Asn Asp Glu Leu Glu Phe Glu Gln Ala Pro Glu Phe Leu
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Leu Gly Asp Gly Ser Phe Gly Ser Val Tyr Arg Ala Ala Tyr Glu
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Gly Glu Glu Val Ala Val Lys Ile Phe Asn Lys His Thr Ser Leu
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Arg Leu Leu Arg Gln Glu Leu Val Val Leu Cys His Leu His His
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Pro Ser Leu Ile Ser Leu Leu Ala Ala Gly Ile Arg Pro Arg Met
1940 1945 1950
Leu Val Met Glu Leu Ala Ser Lys Gly Ser Leu Asp Arg Leu Leu
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Gln Gln Asp Lys Ala Ser Leu Thr Arg Thr Leu Gln His Arg Ile
1970 1975 1980
Ala Leu His Val Ala Asp Gly Leu Arg Tyr Leu His Ser Ala Met
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Ile Ile Tyr Arg Asp Leu Lys Pro His Asn Val Leu Leu Phe Thr
2000 2005 2010
Leu Tyr Pro Asn Ala Ala Ile Ile Ala Lys Ile Ala Asp Tyr Gly
2015 2020 2025
Ile Ala Gln Tyr Cys Cys Arg Met Gly Ile Lys Thr Ser Glu Gly
2030 2035 2040
Thr Pro Gly Phe Arg Ala Pro Glu Val Ala Arg Gly Asn Val Ile
2045 2050 2055
Tyr Asn Gln Gln Ala Asp Val Tyr Ser Phe Gly Leu Leu Leu Tyr
2060 2065 2070
Asp Ile Leu Thr Thr Gly Gly Arg Ile Val Glu Gly Leu Lys Phe
2075 2080 2085
Pro Asn Glu Phe Asp Glu Leu Glu Ile Gln Gly Lys Leu Pro Asp
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Pro Val Lys Glu Tyr Gly Cys Ala Pro Trp Pro Met Val Glu Lys
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Leu Ile Lys Gln Cys Leu Lys Glu Asn Pro Gln Glu Arg Pro Thr
2120 2125 2130
Ser Ala Gln Val Phe Asp Ile Leu Asn Ser Ala Glu Leu Val Cys
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Leu Thr Arg Arg Ile Leu Leu Pro Lys Asn Val Ile Val Glu Cys
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Met Val Ala Thr His His Asn Ser Arg Asn Ala Ser Ile Trp Leu
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Gly Cys Gly His Thr Asp Arg Gly Gln Leu Ser Phe Leu Asp Leu
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Asn Thr Glu Gly Tyr Thr Ser Glu Glu Val Ala Asp Ser Arg Ile
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Leu Cys Leu Ala Leu Val His Leu Pro Val Glu Lys Glu Ser Trp
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Ile Val Ser Gly Thr Gln Ser Gly Thr Leu Leu Val Ile Asn Thr
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Glu Asp Gly Lys Lys Arg His Thr Leu Glu Lys Met Thr Asp Ser
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Val Thr Cys Leu Tyr Cys Asn Ser Phe Ser Lys Gln Ser Lys Gln
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Glu Val Met Val Lys Glu Asn Lys Glu Ser Lys His Lys Met Ser
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Tyr Ser Gly Arg Val Lys Thr Leu Cys Leu Gln Lys Asn Thr Ala
2420 2425 2430
Leu Trp Ile Gly Thr Gly Gly Gly His Ile Leu Leu Leu Asp Leu
2435 2440 2445
Ser Thr Arg Arg Leu Ile Arg Val Ile Tyr Asn Phe Cys Asn Ser
2450 2455 2460
Val Arg Val Met Met Thr Ala Gln Leu Gly Ser Leu Lys Asn Val
2465 2470 2475
Met Leu Val Leu Gly Tyr Asn Arg Lys Asn Thr Glu Gly Thr Gln
2480 2485 2490
Lys Gln Lys Glu Ile Gln Ser Cys Leu Thr Val Trp Asp Ile Asn
2495 2500 2505
Leu Pro His Glu Val Gln Asn Leu Glu Lys His Ile Glu Val Arg
2510 2515 2520
Lys Glu Leu Ala Glu Lys Met Arg Arg Thr Ser Val Glu
2525 2530 2535
<210> 10
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 'LRRKtide'肽
<400> 10
Arg Leu Gly Arg Asp Lys Tyr Lys Thr Leu Arg Gln Ile Arg Gln
1 5 10 15

Claims (32)

1.式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
其中
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
R3选自:
a)N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1、2、3或4个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-6烷基，任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和环丙基，和
C1-6烷氧基，该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，
其中当该N-连接的4-6元杂环基环包含可取代的氮原子时，取代基基团还包括任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基的4-6元杂环基环：卤素、羟基和C1-3烷氧基，并且该4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子；
b)NHR7；和
c)OR7；
R4和R5独立地选自H、羟基和卤素；
X1为CR6，其中R6为C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：羟基、卤素和C1-3烷氧基；
R7独立地选自:
C4-6环烷基，该环烷基任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团，和
含氮或含氧的4-6元杂环基，其任选取代有一个或多个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团；且
R8为氢或C1-3烷基。
2.式(I-A)的化合物或其药学上可接受的盐：
其中
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
R3选自:
a)N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-6烷基，任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和环丙基，和
C1-6烷氧基，该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，
其中当该N-连接的4-6元杂环基环包含可取代的氮原子时，取代基基团还包括任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基的4-6元杂环基环：卤素、羟基和C1-3烷氧基，并且该4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子；
b)NHR7；和
c)OR7；
R4和R5独立地选自H、羟基和卤素；
X1为CR6，其中R6为C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：羟基、卤素和C1-3烷氧基；且
R7独立地选自:
C4-6环烷基，该环烷基任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团，和
含氮或含氧的4-6元杂环基，其任选取代有一个或多个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团。
3.化合物或其药学上可接受的盐:
其中
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
RR1、RR2和RR3独立地为氢或C1-3烷基；
R8为氢或C1-3烷基；且
n为1或2；
条件是当n为1且R8为氢时，RR2、RR1和RR3不都为氢。
4.式(I-C)的化合物或其药学上可接受的盐：
其中
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
R3为氢或羟基；
R8为氢或C1-3烷基；
RR1、RR2和RR3独立地为氢或C1-3烷基；
RR4为氢或羟基；且
n为1或2。
5.根据前述权利要求任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R1选自C1-3烷基和C1-3烷氧基。
6.根据前述权利要求任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R2选自H、卤素和C1-3烷基。
7.根据权利要求1、2、5或6任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R4和R5独立地选自H和氟。
8.根据权利要求1、2、5、6或7任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R4和R5都为H。
9.根据权利要求1、2、5、6、7或8任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R3为N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，和
C1-3烷氧基，该烷氧基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基。
10.根据权利要求1、2、5、6、7、8或9任一项的式(I)或式(I-A)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R6为H或未取代的C1-3烷基。
11.根据权利要求1、3、5、6、7或8任一项的式(I)或式(I-B)的化合物或药学上可接受的盐，其中n为1，RR1为甲基，RR2为氢，且RR3为氢。
12.根据权利要求1、3、5、6、7或8任一项的式(I)或式(I-B)的化合物或药学上可接受的盐，其中n为1，RR1为氢，RR2为氢，且RR3为甲基。
13.根据权利要求1、3、5、6、7或8任一项的式(I)或式(I-B)的化合物或药学上可接受的盐，其中n为2，RR1、RR2和RR3为氢。
14.根据权利要求1、3、5、6、7、8、11、12或13任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R8选自氢和甲基。
15.根据权利要求1、4、5、6、7或8任一项的式(I)或式(I-C)的化合物或药学上可接受的盐，其中n为1。
16.根据权利要求1、4、5、6、7、8或15任一项的式(I)或式(I-C)的化合物或药学上可接受的盐，其中RR2为氢。
17.根据权利要求1、4、5、6、7、8、15或16任一项的式(I)或式(I-C)的化合物或药学上可接受的盐，其中RR1为氢。
18.根据权利要求1、4、5、6、7、8、15、16或17任一项的式(I)或式(I-C)的化合物或药学上可接受的盐，其中R8为氢。
19.根据权利要1、4、5、6、7、8、15、16、17或18任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中RR3为氢或甲基。
20.根据权利要求1、4、5、6、7、8、15、16、17、18或19任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中RR4为氢。
21.根据权利要求1、4、5、6、7、8、15、16、17、18或19任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中RR4为羟基。
22.药物组合物，其包含根据前述权利要求任一项的式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
23.根据前述权利要求任一项的式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。
24.根据前述权利要求任一项的式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)。
25.根据前述权利要求任一项的式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗帕金森病。
26.治疗神经退行性疾病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的根据前述权利要求任一项的式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物，或药学上可接受的盐。
27.根据权利要求26的方法，其中所述神经退行性疾病为帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)。
28.根据权利要求26或27的方法，其中所述神经退行性疾病为帕金森病。
29.根据权利要求26、27或28的方法，其中所述受试者为人。
30.根据权利要求26、27、28或29的方法，其中所述受试者为表达LRRK2激酶中的G2019S突变的人。
31.根据前述权利要求任一项的式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)的药物中的用途。
32.根据前述权利要求任一项的式(I)、式(I-A)、式(I-B)或式(I-C)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。
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