CN110234333B - 利用枸杞、桑葚及大枣的用于增强免疫的组合物、用于预防或治疗退行性神经疾病的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于增强免疫的组合物或用于预防或改善退行性神经疾病的组合物,其包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物,作为有效成分。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于增强免疫的组合物、用于预防或治疗退行性神经疾病的组合物,其包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物。
背景技术
巨噬细胞(macrophage),作为在吞噬、消灭细菌或异物的过程中分泌各种物质来调节免疫现象,在抗原的免疫应答中发挥中枢作用的细胞,关系到抗原呈递和淋巴球的非特异性免疫应答,对于肿瘤细胞表现出直接损伤活性。另外,已知Toll样受体(toll likereceptor,TLR)的反应物质(LPS或天然产物)活化巨噬细胞,产生如IL-1、IL-6、IL-10、IL-12及TNF-α的细胞因子,所述细胞因子能够调节T细胞和B细胞的增殖、吞噬作用的巨噬细胞的活化以及防止微生物感染等继发性免疫反应。已知IL-6及TNF-α作为由巨噬细胞诱导的典型的细胞因子,其在细菌感染引起的炎症反应中起中枢作用,在炎症病灶所述细胞因子的量会增加。据报道,已知IL-6与IL-1的协同作用参与T细胞和B细胞的分化且具有抗癌效果,TNF-α对特定癌细胞具有细胞毒性和抗病毒作用,在急性及慢性炎症疾患中发生的各种活体反应中也起重要作用。一方面,已知IL-12作为诱导NK细胞(NK cell)活化及诱导Th1型免疫反应的细胞因子,具有增强对如癌细胞等细胞外来物质的反应性的作用。
一方面,随着人的寿命增加,脑中风、中风、记忆力丧失、记忆力损伤、痴呆症、健忘症、帕金森病、阿尔茨海默病、皮克(pick)病、克罗伊茨费尔特-雅各布(Creutzfeld-Kacob)病、亨廷顿舞蹈症及肌萎缩性侧索硬化症等退行性神经疾病增加。退行性神经疾病是指脑组织中的称作β-淀粉样蛋白(beta-amyloid,Aβ)的老年斑(senile plaque)蓄积,脑细胞中出现构成神经元纤维缠结(neurofibrillary tangle,NFT),由此导致整个脑组织的退行性萎缩,出现与此相关的各种症状。
正在积极开展为显现通过这些巨噬细胞的免疫增强功效的研究或预防、治疗或改善退行性神经疾病的研究,但没有关于该症状,以枸杞、桑葚及大枣为原料进行的研究。
发明内容
发明要解决的问题
本发明作为具有免疫增强功效的同时,预防、治疗或改善退行性神经疾病的组合物,提供一种包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物,作为有效成分的组合物等。
然而,本发明要解决的技术问题不限于上述所提及问题,本领域技术人员从以下记载中可以明确地理解到未提及的其他问题。
用于解决问题的手段
本发明提供一种用于增强免疫的药学组合物,其包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物,作为有效成分。
所述枸杞:桑葚:大枣的重量比可以为1~3:1~3:0.5~1.5。
所述混合萃取物或萃取混合物可以为冻结干燥或喷雾干燥的状态。
所述混合萃取物或萃取混合物可以增加巨噬细胞来源TNF-α表达。
所述混合萃取物或萃取混合物的总浓度可以为1μg/mL至10mg/mL。
作为本发明的一实施例,提供一种用于记忆力改善的健康功能食品,其包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物,作为有效成分。
作为本发明的另一实施例,提供一种用于预防或治疗退行性神经疾病的药学组合物,其包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物,作为有效成分。
所述枸杞:桑葚:大枣的重量比可以为1~3:1~3:0.5~1.5。
所述混合萃取物或萃取混合物可以为冻结干燥或喷雾干燥的状态。
所述混合萃取物或萃取混合物可以增加mBDNF(mature BDNF)相对于海马神经元细胞来源总BDNF之比。
所述混合萃取物或萃取混合物的总浓度可以为1μg/mL至10mg/mL。
所述退行性神经疾病可以选自由脑中风、中风、记忆力丧失、记忆力损伤、痴呆症、健忘症、帕金森病、阿尔茨海默病、皮克病、克罗伊茨费尔特-雅各布病、亨廷顿舞蹈症及肌萎缩性侧索硬化症组成的组。
作为本发明的又一实施例,提供一种用于记忆力改善的健康功能食品,其包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物,作为有效成分。
发明效果
本发明的组合物包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物,作为有效成分,由于所述组合物无细胞毒性,通过枸杞、桑葚及大枣的组合,具有对免疫增强功效的提升效果,能够有效地用作药学组合物。尤其,当枸杞:桑葚:大枣的重量比为1~3:1~3:0.5~1.5的情况下,或者对所述混合萃取物或萃取混合物进行冻结干燥的情况下,能够进一步提高免疫增强功效。
不仅如此,本发明的组合物无细胞毒性,通过枸杞、桑葚及大枣的组合,具有对预防、治疗或改善退行性神经疾病的提升效果,能够有效地用作预防或治疗退行性神经疾病的药学组合物,并且,还具有记忆力改善效果,能够有效地用作记忆力改善的健康功能食品。尤其,当枸杞:桑葚:大枣的重量比为1~3:1~3:0.5~1.5的情况下,或者对所述混合萃取物或萃取混合物进行喷雾干燥的情况下,能够进一步提高药物组合物对于退行性神经疾病的预防、治疗或改善作用,且能够进一步提高健康功能食品对于记忆力改善的作用。
附图说明
图1是示出实施例1~2及比较例1~3中制备的组合物的细胞毒性评价结果的图表。
图2是比较实施例1~2及比较例1~3中制备的组合物的巨噬细胞来源TNF-α表达量测定结果的图表。
图3是示出对实施例1~2及比较例1~3中制备的组合物的mBDNF(mature BDNF)相对于海马神经元细胞来源总BDNF之比测定结果进行比较的结果的图表。
具体实施方式
本发明人等在以植物果实为对象,执行开发具有免疫增强功效的同时用于预防、治疗或改善退行性精神疾病的组合物的研究时,确认到组合枸杞、桑葚及大枣的情况下,对该症状具有提升效果,并完成了本发明。
以下,对本发明进行详细说明。
用于增强免疫的药学组合物
本发明提供一种用于增强免疫的药学组合物,其包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物,作为有效成分。
本说明书中“枸杞(Goji Berry)”属茄科植物,是小且红的果实,又称枸杞子。枸杞的维生素C的含量超过橙子的500倍,抗氧化作用、抑制有害氧气、有益于皮肤健康的β-胡萝卜素也比胡萝卜多,贫血、甲状腺等必不可少的铁含量也高。枸杞具有改善消化,保护肝细胞,缓解更年期症状,缓解关节及肌肉疼痛的效果。不仅抗衰老还改善睡眠障碍,有效预防心血管疾病。不仅如此,还促进荷尔蒙分泌,有助于减少体脂和控制体重。
本说明书中“桑葚(Mulberry)”是桑树的果实,又称桑果。成分包括葡萄糖、果糖、柠檬酸、苹果酸、单宁、果胶以及维生素(A、B1、B2、D)、钙、磷、铁等。已知桑葚为滋补品,改善内脏,尤其改善肝脏和肾脏的功能。桑葚缓解口渴,软化关节,分解酒精,安心定志,对失眠症和健忘症也有效。此外,它可以防止头发变白,具有造血作用,还用于治疗风湿病,并具有降低血糖和胆固醇的效果。
本说明书中“大枣(Jujube)”是植物果实的一种,其表面为红棕色,椭圆形,长达1.5~2.5cm,成熟时有甜味。果实不仅可以生吃,还可以采摘后充分干燥作为干果用于糕点、料理及药用。另外,大枣还在生活中进行加工,用于大枣酒、大枣茶、大枣醋、大枣粥等。作为加工产品的蜜枣,在中国、日本、欧洲等地备受欢迎。中药中大枣用于利尿、滋补、润肤剂等。
本说明书中“混合萃取物”是指混合原料之后,同时萃取来制备的物质,本说明书中“萃取混合物”是指分别萃取原料之后,同时混合来制备的物质。
本说明书中“免疫增强”是指增强或提高免疫活性,免疫是为保护身体免受细菌、病毒、癌细胞、其他人或动物的血液或组织等外来物质抗原的一系列体内反应。
本发明的用于增强免疫的药学组合物包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物,作为有效成分,所述混合萃取物或萃取混合物无细胞毒性,能够增加巨噬细胞来源TNF-α的表达,可以说具有免疫增强功效。
一方面,在枸杞单独萃取物、桑葚单独萃取物及大枣单独萃取物的情况下,相对对照组的巨噬细胞来源TNF-α的表达水平提高程度微乎其微,因此不能说具有免疫增强功效。
所述混合萃取物及萃取混合物是以枸杞、桑葚及大枣为原料使用,优选所述枸杞:桑葚:大枣的重量比为1~3:1~3:0.5~1.5,更优选所述枸杞:桑葚:大枣的重量比为1.5~2.5:1.5~2.5:0.5~1.5,但不限定于此。此时,超出所述枸杞:桑葚:大枣的重量比的情况下,会使相对对照组的巨噬细胞来源TNF-α的表达水平增加程度减小,具有免疫增强功效低下的问题。
首先,所述混合萃取物,通过混合枸杞、桑葚及大枣,作为原料后,同时萃取来制备,优选在所述枸杞、桑葚及大枣混合物中添加所述枸杞、桑葚及大枣混合物的2倍至20倍的水、C1至C4的低级醇或其混合物并进行萃取,更优选添加3倍至10倍进行萃取,但不限定于此。优选萃取温度为30℃至100℃,更优选为70℃至100℃,但不限定于此。优选萃取时间为1小时至20小时,更优选为3小时至10小时,但不限定于此。萃取方法均可利用冷浸、超声波萃取或回流冷却萃取方法,但不限定于此。优选萃取次数为1次至5次,更优选反复萃取2次至3次,但不限定于此。进一步地,所述混合萃取物可稀释、浓缩,或稀释或浓缩后干燥使用。
接着,所述萃取混合物,通过同时混合单独萃取枸杞的枸杞单独萃取物、单独萃取桑葚的桑葚单独萃取物及单独萃取大枣的大枣单独萃取物来制备,优选在所述枸杞、桑葚及大枣中添加所述枸杞、桑葚及大枣的2倍至20倍的水、C1至C4的低级醇或其混合物并进行萃取,更优选添加3倍至10倍进行萃取,但不限定于此。优选萃取温度为30℃至100℃,更优选为70℃至100℃,但不限定于此。优选萃取时间为1小时至20小时,更优选为3小时至10小时,但不限定于此。萃取方法均可利用冷浸、超声波萃取或回流冷却萃取方法,但不限定于此。优选萃取次数为1次至5次,更优选为反复萃取2次至3次,但不限定于此。进一步地,所述萃取混合物可稀释、浓缩,或稀释或浓缩后干燥使用。
所述混合萃取物或萃取混合物可以为冻结干燥或喷雾干燥的状态。
首先,所述冻结干燥又称冷冻干燥,所述冻结干燥能够通过急剧降低容器温度来冷冻欲干燥的所述混合萃取物或萃取混合物后,使容器内的压力接近于真空,将所述混合萃取物或萃取混合物中所含的固化溶剂直接升华为水蒸气,使其干燥来执行。具体地,所述冻结干燥可在-30℃至-50℃的温度下进行48小时至168小时。
接着,所述喷雾干燥是能够通过将欲干燥的所述混合萃取物或萃取混合物在热风中进行喷雾,以1mm以下的细微的水滴状态伴随在气流中进行干燥来执行。具体地,所述喷雾干燥可通过添加糊精(dextrin),来提高干燥强度。
所述混合萃取物或萃取混合物为冻结干燥或喷雾干燥状态的情况下,虽然细胞毒性程度没有太大差异,但所述混合萃取物或萃取混合物为冻结干燥状态的情况下,与为喷雾干燥状态的情况相比,相对于对照组的巨噬细胞来源TNF-α的表达水平大幅增加,因此可以认为免疫增强功效优异。
优选所述混合萃取物或萃取混合物的总浓度为1μg/mL至10mg/mL,更优选为1μg/mL至1mg/mL,但不限定于此。即,即使在所述组合物中所含的所述混合萃取物或萃取混合物浓度低,也具有能够充分地增强免疫的功效的优点。此时,所述混合萃取物或萃取混合物的总浓度小于所述范围的情况下,存在难以发挥充分地增强免疫的功效的问题,所述混合萃取物或萃取混合物的总浓度超过所述范围的情况下,可能存在包括细胞毒性在内的毒性问题。
本发明的用于增强免疫的药学组合物,可以分别按照通常的方法制成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮剂、乳液、糖浆、气雾剂等口服剂型、外用剂、栓剂及灭菌注射溶液的形态来使用,为了进行剂型化,可以使用通常用于制备药学组合物的适合的载体、赋形剂或稀释剂。
所述载体或赋形剂或稀释剂,可以举出包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、***胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油等多种化合物或混合物。
进行制剂化的情况下,可使用通常使用的填充剂、增量剂、结合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂来制备。
用于口服给药的固体制剂,可以在所述混合萃取物或萃取混合物中至少包含例如淀粉、碳酸钙、蔗糖或乳糖、明胶等并进行混合来制备。另外,除了单纯的赋形剂以外,也可以使用硬脂酸镁、滑石之类的润滑剂。
作为用于口服的液态制剂,除了悬浮液、内溶液剂、乳剂、糖浆剂等,除了常用的单纯稀释剂水、液体石蜡以外,还可以包含各种赋形剂,例如润湿剂、甜味剂、芳香剂、保存剂等。
作为用于非口服给药的制剂,可包括灭菌的水溶液、非水溶性剂、悬浮剂、乳剂、冻结干燥制剂、栓剂等。作为非水性溶剂、悬浮剂,可使用例如丙二醇、聚乙二醇、橄榄油等植物油,例如油酸乙酯等可注射的酯等。作为栓剂的基质,可使用威泰索尔(witepsol)、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可豆酯、月桂酸甘油酯、甘油明胶等。
本发明的用于增强免疫的药学组合物的优选给药量根据患者的状态、体重、疾病的程度、药物形态、给药途径及时期不同,可由本领域技术人员适当选择。但是为了优选效果,一日给药量可以为0.0001至2000mg/kg,优选以0.001至2000mg/kg给药。可以一日一次或多次给药。但是,所述给药量并非限定本发明的范围。
本发明的用于增强免疫的药学组合物可以对老鼠、家鼠、家畜、人等哺乳动物按多种途径进行给药。给药的所有方式,例如可通过口服、直肠或静脉、肌肉、皮下、子宫内硬膜或脑血管内(intracerebroventricular)注射来进行给药。
用于预防或治疗退行性神经疾病的药学组合物
本发明提供一种用于预防或治疗退行性神经疾病的药学组合物,包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物,作为有效成分。
对所述“枸杞”、“桑葚”、“大枣”、“混合萃取物”及“萃取混合物”已进行说明,因此省略重复说明。
本说明书中“退行性神经疾病”是指选自由脑中风、中风、记忆力丧失、记忆力损伤、痴呆症、健忘症、帕金森病、阿尔茨海默病、皮克(pick)病、克罗伊茨费尔特-雅各布(Creutzfeld-Kacob)病、亨廷顿舞蹈症及肌萎缩性侧索硬化症组成的组中的一个以上。
本发明的用于预防或治疗退行性神经疾病的药学组合物包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物作为有效成分,所述混合萃取物或萃取混合物无细胞毒性,能够增加mBDNF(mature BDNF)相对于海马神经元细胞来源总BDNF之比,可以认为能够预防或治疗或改善退行性神经疾病。
一方面,在枸杞单独萃取物、桑葚单独萃取物及大枣单独萃取物的情况下,在特定浓度下,相对于对照组,mBDNF(mature BDNF)相对于海马神经元细胞来源总BDNF之比增加程度仅为微乎其微的水平,因此不能认为能够有效预防、治疗或改善退行性神经疾病。
所述混合萃取物或萃取混合物使用枸杞、桑葚及大枣作为原料,优选所述枸杞:桑葚:大枣的重量比为1~3:1~3:0.5~1.5,更优选所述枸杞:桑葚:大枣的重量比为1.5~2.5:1.5~2.5:0.5~1.5,但不限定于此。此时,超出所述枸杞:桑葚:大枣的重量比的情况下,会使相对于对照组,mBDNF(mature BDNF)相对于比海马神经元细胞来源总BDNF之比增加程度降低,存在无法有效预防、治疗或改善退行性神经疾病的问题。
首先,所述混合萃取物,通过混合枸杞、桑葚及大枣,作为原料之后,并同时萃取而制备,优选在所述枸杞、桑葚及大枣混合物中添加所述枸杞、桑葚及大枣混合物的2倍至20倍的水、C1至C4的低级醇或其混合物并进行萃取,更优选添加3倍至10倍进行萃取,但不限定于此。优选萃取温度为30℃至100℃,更优选为70℃至100℃,但不限定于此。优选萃取时间为1小时至20小时,更优选为3小时至10小时,但不限定于此。萃取方法均可利用冷浸、超声波萃取或回流冷却萃取方法,但不限定于此。优选萃取次数为1次至5次,更优选反复萃取2次至3次,但不限定于此。进一步地,所述混合萃取物可稀释、浓缩,或稀释或浓缩后干燥使用。
接着,所述萃取混合物,通过同时混合单独萃取枸杞的枸杞单独萃取物、单独萃取桑葚的桑葚单独萃取物及单独萃取大枣的大枣单独萃取物来制备,优选在所述枸杞、桑葚及大枣中添加所述枸杞、桑葚及大枣的2倍至20倍的水、C1至C4的低级醇或其混合物并进行萃取,更优选添加3倍至10倍进行萃取,但不限定于此。优选萃取温度为30℃至100℃,更优选为70℃至100℃,但不限定于此。优选萃取时间为1小时至20小时,更优选为3小时至10小时,但不限定于此。萃取方法均可利用冷浸、超声波萃取或回流冷却萃取方法,但不限定于此。优选萃取次数为1次至5次,更优选反复萃取2次至3次,但不限定于此。进一步地,所述萃取混合物可稀释、浓缩,或稀释或浓缩后干燥使用。
所述混合萃取物或萃取混合物可以为冻结干燥或喷雾干燥的状态。
首先,所述冻结干燥又称冷冻干燥,所述冻结干燥能够通过急剧降低容器的温度来冷冻欲干燥的所述混合萃取物或萃取混合物后,使容器内的压力接近于真空将所述混合萃取物或萃取混合物中所含的固化溶剂直接升华为水蒸气,使其干燥来执行。具体地,所述冻结干燥可在-30℃至-50℃的温度下进行48小时至168小时。
接着,所述喷雾干燥是能够通过将欲干燥的所述混合萃取物或萃取混合物喷雾在热风中进行喷雾,以1mm以下的细微的水滴状态伴随在气流中进行干燥来执行。具体地,所述喷雾干燥可通过添加糊精(dextrin),来提高干燥强度。
所述混合萃取物或萃取混合物为冻结干燥或喷雾干燥的状态的情况下,虽然在细胞毒性程度上没有太大差异,但所述混合萃取物或萃取混合物为喷雾干燥状态的情况下,与为冻结干燥状态的情况相比,mBDNF(mature BDNF)相对于海马神经元细胞来源总BDNF之比增加程度大幅提高,因此可以认为能够有效预防、治疗或改善退行性神经疾病。
优选所述混合萃取物或萃取混合物的总浓度为1μg/mL至10mg/mL,更优选为1μg/mL至1mg/mL,但不限定于此。即,即使在所述组合物中所含的所述混合萃取物或萃取混合物浓度低,也具有能够充分地预防、治疗或改善退行性神经疾病的优点。此时,所述混合萃取物或萃取混合物的总浓度小于所述范围的情况下,存在难以充分地预防、治疗或改善退行性神经疾病的问题,所述混合萃取物或萃取混合物的总浓度超过所述范围的情况下,可能存在包括细胞毒性在内的毒性问题。
本发明的用于预防或改善退行性神经疾病的药学组合物的制剂化的相关事项,有效剂量、给药方法相关事项,可以与所述用于增强免疫的药学组合物中记载相同地操作。
用于记忆力改善的健康功能食品
本发明提供一种用于记忆力改善的健康功能食品,包含枸杞、桑葚及大枣的混合萃取物或萃取混合物,作为有效成分。
对所述“枸杞”、“桑葚”、“大枣”、“混合萃取物”、“萃取混合物”及“退行性神经疾病”已进行过说明,因此省略重复说明。
本发明的用于记忆力改善的健康功能食品中,使用所述混合萃取物(或萃取混合物)作为健康功能食品的添加物的情况下,可以直接添加或者可以与其他食品或食品成分一起使用,可以根据常规方法适宜地使用。有效成分的混合量可根据保健等各使用目的适当决定。
健康功能食品的剂型可以是散剂、颗粒剂、丸、片剂、胶囊剂以及一般食品或饮料中任意形态。
所述食品的种类没有特别限定,作为可以添加所述物质的食品例,有肉类、香肠、面包、巧克力、糖类、点心类、饼干类、比萨、拉面、其他面类、口香糖类、包括冰淇淋类在内的乳农产品、各种汤羹、饮料、茶、口服液、酒精饮料及维生素复合剂等,均可包括通常意义中的所有食物。
通常,制作食品或饮料时,所述混合萃取物(或萃取混合物)相对于每100重量份的原料,可添加15重量份以下,优选添加10重量份以下的量。但是,用于保健及卫生目的或用于健康调节目的的长期摄取的情况下,所述量可以为所述范围以下,另外,由于本发明使用天然物,不存在安全性方面的问题,因此可以使用所述范围以上的量。
本发明的健康功能食品中的饮料与通常的饮料相同,可以包含香味剂或天然碳水化合物等作为附加成分。所述天然碳水化合物可以为如葡萄糖、果糖等单糖,如麦芽糖、蔗糖等二糖,如糊精、环糊精等多糖,木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等糖醇。作为甜味剂,可以使用如索马甜、甜菊萃取物的天然甜味剂或如糖精、阿斯巴甜的合成甜味剂等。所述天然碳水化合物的比例相对于每100mL本发明的饮料,可以为约0.01至0.04g,优选为约0.02至0.03g。
除上述以外,本发明的用于记忆力改善的健康功能食品可以包含各种营养剂、维生素、电解质、风味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精、以及用于碳酸饮料的碳酸剂。除此之外,本发明的用于记忆力改善的组合物可以包含为天然果汁、制作果汁饮料及蔬菜饮料的果肉。这种成分可以单独或混合使用。这种添加剂的比例没有限制,但通常相对于100重量份的本发明的健康功能食品,在0.01~0.1重量份的范围内选择。
不仅如此,本发明的组合物无细胞毒性,通过枸杞、桑葚及大枣的组合,对预防、治疗或改善退行性神经疾病具有提升效果,可以有效地用作预防或治疗退行性神经疾病的药学组合物,并且,还具有记忆力改善效果,能够有效地用作记忆力改善的健康功能食品。尤其,当所述枸杞:桑葚:大枣的重量比为1~3:1~3:0.5~1.5的情况下,或对所述混合萃取物或萃取混合物进行喷雾干燥的情况下,能够进一步提高药物组合物对于退行性神经疾病的预防、治疗或改善作用,且能够进一步提高健康功能食品对于记忆力改善的作用。
以下,为了便于理解本发明,示出优选实施例。然而,为了更容易理解本发明而提供以下实施例,并非通过以下实施例限定本发明的内容。
[实施例]
实施例1
准备混合枸杞(原产地:中国)约40g、桑葚(原产地:巴基斯坦)约40g及大枣(原产地:韩国)约20g的混合物。在准备好的混合物中混合10(v/w)倍的水之后,在95℃下回流萃取4小时后,进行减压过滤,使用旋转真空浓缩机浓缩制备混合萃取物。之后,在-40℃冻结干燥72小时。
实施例2
准备混合枸杞(原产地:中国)约40g、桑葚(原产地:巴基斯坦)约40g及大枣(原产地:韩国)约20g的混合物。在准备好的混合物中混合10(v/w)倍的水之后,在95℃下回流萃取4小时后,进行减压过滤,使用旋转真空浓缩机浓缩制备混合萃取物。之后,混合50重量%的糊精并进行喷雾干燥。
比较例1
在枸杞(原产地:中国)中混合10(v/w)倍的水之后,在95℃下回流萃取4小时。之后,进行减压过滤后,使用旋转真空浓缩机浓缩制备单独萃取物。之后,混合50重量%的糊精并进行喷雾干燥。
比较例2
在桑葚(原产地:巴基斯坦)中混合10(v/w)倍的水之后,在95℃下回流萃取4小时。之后,进行减压过滤后,使用旋转真空浓缩机浓缩制备单独萃取物。之后,混合50重量%的糊精并进行喷雾干燥。
比较例3
在大枣(原产地:韩国)中混合10(v/w)倍的水之后,在95℃下回流萃取4小时。之后,进行减压过滤后,使用旋转真空浓缩机浓缩制备单独萃取物。之后,混合50重量%的糊精并进行喷雾干燥。
实验例1:细胞毒性的评价
为评价实施例1~2及比较例1~3中制备的组合物的细胞毒性,测定了细胞存活率。
首先,使用含有青霉素(penicillin)(100IU/mL)、链霉素(streptomycin)(100μg/mL)以及10%的FBS的RPMI 1640培养基,在100mm细胞培养皿(cell culture dish)中将小鼠巨噬细胞系RAW264.7培养成70-80%的密度。
之后,利用MTT(3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四氮唑鎓溴化物,3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide)分析法(MTT assay法)进行分析。使用RPMI 1640培养基将培养的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的密度调节至1×106cell/mL之后,接种到96孔板(well plate),在5%CO2及37℃孵育18小时。之后,去除培养基,通过使用含有各图中制备的浓度的培养基培养试验物质。24小时后,添加10μL的MTT溶液(原液浓度:5mg/mL)诱导附加反应3小时。为使反应结束及甲臜结晶(formazancrystal)溶解,在每孔中还添加100μL的DMSO。细胞存活率通过OD值计算,所述OD值通过在570nm波长处对MTT还原为甲臜(formazan)的量测定光吸收值来得到,其结果示于图1。
如图1所示,处理实施例1~2及比较例1~3中制备的组合物的情况下,确认到细胞存活率均在80%以上,可以认为没有细胞毒性。
实验例2:巨噬细胞来源TNF-α表达量的测定
为比较实施例1~2及比较例1~3中制备的组合物的免疫增强功效,测定TNF-α的表达量。
首先,将在实验例1中培养的小鼠巨噬细胞系RAW264.7使用RPMI1640培养基调节密度至1×106cell/mL后,接种到96孔板(well plate),在5%CO2及37℃下孵育18小时。之后,去除培养基,通过处理含有各图中制备的浓度的培养基来培养试验物质。24小时后将每100μL上清液移至另一个96孔板(well plate),利用R&D systems公司的酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒(kit),根据制造商的指示测定巨噬细胞来源TNF-α的表达量,其结果示于图2中。
如图2所示,在处理实施例1~2中制备的组合物的情况下,确认到巨噬细胞来源TNF-α的表达量均为100.00pg/mL以上,可以认为免疫增强功效优异。尤其,在处理实施例1~2中制备的组合物(枸杞:桑葚:大枣重量比=2:2:1)的情况下,确认到巨噬细胞来源TNF-α的表达量均为160.00pg/mL以上,可以认为免疫增强功效显著优异。
此时,分别比较在实施例1~2中制备的组合物的免疫增强功效与枸杞、桑葚及大枣的总浓度相同的对应的比较例1~3中制备的组合物的免疫增强功效时,处理实施例1~2中制备的组合物的情况,与处理比较例1~3中制备的组合物的情况相比,确认到巨噬细胞来源TNF-α的表达量提高,可以认为这是通过枸杞、桑葚及大枣的组合具有使免疫增强功效提升的效果。
实验例3:mBDNF相对于海马神经元细胞来源总BDNF之比的测定
为比较实施例1~2及比较例1~3中制备的组合物的退行性神经疾病预防、治疗或改善的功效,测定总BDNF(Total BDNF)和mBDNF(Mature BDNF)的表达量。
首先,将在实验例1中培养的小鼠海马神经元细胞系HT22使用DMEM培养基调节密度至1×104cell/mL后,接种到96孔板,在5%CO2及37℃下孵育18小时。之后,去除培养基,通过处理含有各图中制备的浓度的培养基培养试验物质。24小时后将每100μL上清液移至另一个96孔板(well plate),利用R&D systems公司的酶联免疫吸附测定试剂盒,根据制造商的指示测定了总BDNF(Total BDNF)和mBDNF(Mature BDNF)的浓度,换算出总BDNF(TotalBDNF)中mBDNF(Mature BDNF)的比例,其结果示于图3中。
如图3所示,在处理实施例1~2中制备的组合物的情况下,确认到相对于总BDNF的mBDNF之比相对于控制为300%以上,可以说预防、治疗或改善退行性神经疾病的功效优异。
此时,分别对在实施例1~2中制备的组合物的预防、治疗或改善退行性神经疾病的功效与枸杞、桑葚及大枣的总浓度相同的对应的比较例1~3中制备的组合物的预防、治疗或改善退行性神经疾病的功效进行比较时,对处理实施例1~2中制备的组合物的情况与处理比较例1~3中制备的组合物的情况进行比较时,确认到mBDNF相对于海马神经元细胞来源总BDNF之比提高,可以认为这是通过枸杞、桑葚及大枣的组合具有提升预防、治疗或改善退行性神经疾病的功效的效果。
以下,对包含本发明的混合萃取物(或萃取混合物)的组合物的制剂例进行说明,但是本发明仅用于具体说明而非限定本发明。
制剂例1:散剂的制备
混合萃取物(或萃取混合物)20mg
乳糖水合物 100mg
滑石 10mg
将所述成分混合并装入密封袋中以制备散剂。
制剂例2:片剂的制备
混合萃取物(或萃取混合物)10mg
玉米淀粉 100mg
乳糖水合物 100mg
硬脂酸镁 2mg
混合所述成分后,按照常规的片剂制备方法通过压片来制备片剂。
制剂例3:胶囊剂的制备
混合萃取物(或萃取混合物)10mg
微晶纤维素3mg
乳糖水合物14.8mg
硬脂酸镁0.2mg
混合所述成分后,按照常规的胶囊制备方法将胶囊填充至明胶胶囊中来制备胶囊剂。
制剂例4:注射剂的制备
混合萃取物(或萃取混合物)10mg
甘露糖醇 180mg
注射用灭菌蒸馏水 2974mg
磷酸一氢钠 26mg
混合所述成分后,按照常规的注射剂制备方法以每安瓿(2mL)成分含量为所述成分含量的方式进行制备。
制剂例5:液剂的制备
混合萃取物(或萃取混合物)10mg
异构化乳糖 10g
甘露糖醇 5g
净化水适量
柠檬香精适量
按常规制备方法将所述成分溶于净化水中,加入适量柠檬香精,然后加入净化水调节总量至100mL,灭菌后填充到棕色瓶中来制备液剂。
制剂例6:健康功能食品的制备
混合萃取物(或萃取混合物)10mg
维生素混合物适量
维生素A醋酸酯70μg
维生素E1.0mg
维生素B1 0.13mg
维生素B2 0.15mg
维生素B6 0.5mg
维生素B12 0.2μg
维生素C10mg
生物素10μg
烟酰胺1.7mg
叶酸50μg
泛酸钙0.5mg
无机质混合物适量
硫酸亚铁1.75mg
氧化锌0.82mg
碳酸镁25.3mg
磷酸二氢钾 15mg
磷酸氢钙 55mg
柠檬酸钾 90mg
碳酸钙 100mg
氯化镁24.8mg
虽然所述维生素和矿物质混合物的组成比以适合作为健康功能食品的成分的优选实施例来混合组成,但其配比可以实施任意改变,且可以按照常规的方法,混合所述成分来制备颗粒,按照常规的方法用于制备健康功能食品。
制剂例7:健康饮料的制备
东莨菪素(Scopoletin)及芦丁(Rutin)10mg
维生素C15g
维生素E(粉末)100g
乳酸亚铁19.75g
氧化锌3.5g
烟酰胺3.5g
维生素A0.2g
维生素B1 0.25g
维生素B2 0.3g
净化水适量
按照常规的健康饮料制备方法,混合所述成分之后,在85℃下搅拌加热约1小时,之后过滤所制备溶液,装入已灭菌的2L容器内,将其密封灭菌后冷藏保管,用于本发明的健康饮料组合物制备。
所述组成比是以优选实施例混合适用于比较喜好的饮料的成分来制备,但可根据需求阶层、需求国家、使用用途等区域性、民族性喜好,任意改变配比。
上述的本发明的说明是本发明的例示,本发明所属技术领域的技术人员可以理解,不改变本发明的技术思想或必要的特征,也可以以其他具体方式容易进行变更。因此,应理解,上述的实施例是在所有方面的例示,而并非限定。
Claims (5)
1.一种枸杞、桑葚、大枣的混合提取物在制备用于预防或治疗退行性神经疾病的药学组合物中的用途,其特征在于,所述药学组合物用于增加mBDNF相对于海马神经元细胞来源总BDNF之比,
所述混合提取物通过如下制备方法制备:
以1:1:0.5的重量比混合枸杞、桑葚、大枣的步骤1);
向所述步骤1)的混合物添加所述混合物重量的3倍至10倍的水并进行热水提取1小时至20小时的步骤2);以及
进行浓缩的步骤3),
其中,在所述步骤2)中的热水提取过程中的温度为70至100℃。
2.根据权利要求1所述的枸杞、桑葚、大枣的混合提取物在制备用于预防或治疗退行性神经疾病的药学组合物中的用途,其特征在于,
所述步骤3)之后还包括:冻结干燥或喷雾干燥的步骤。
3.根据权利要求1所述的枸杞、桑葚、大枣的混合提取物在制备用于预防或治疗退行性神经疾病的药学组合物中的用途,其特征在于,
以1μg/mL至10mg/mL的总浓度制备。
4.根据权利要求1所述的枸杞、桑葚、大枣的混合提取物在制备用于预防或治疗退行性神经疾病的药学组合物中的用途,其特征在于,
所述退行性神经疾病选自由脑中风、记忆力损伤、痴呆症、帕金森病、皮克病、克罗伊茨费尔特-雅各布病、亨廷顿舞蹈症及肌萎缩性侧索硬化症组成的组。
5.一种枸杞、桑葚、大枣的混合提取物在制备用于记忆力改善的健康功能食品中的用途,其特征在于,所述健康功能食品增加mBDNF相对于海马神经元细胞来源总BDNF之比,
所述混合提取物通过如下制备方法制备:
以1:1:0.5的重量比混合枸杞、桑葚、大枣的步骤1);
向所述步骤1)的混合物添加所述混合物重量的3倍至10倍的水并进行热水提取1小时至20小时的步骤2);以及
进行浓缩的步骤3),
其中,在所述步骤2)中的热水提取过程中的温度为70至100℃。
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