CN110045039A - 一种枣仁安神液的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种枣仁安神液的质量检测方法，该检测方法采用高效液相色谱法测定枣仁安神液中酸枣仁中斯皮诺素、丹参中丹酚酸B、五味子中五味子醇甲的含量，实现对枣仁安神液质量进行全面地评价和控制，从而为枣仁安神液的内在质量检测提供全面、可靠的依据，保证了产品质量的稳定性及临床用药的安全性、有效性。

Description

一种枣仁安神液的质量检测方法

技术领域

本发明公开涉及中药质控的技术领域，尤其涉及一种枣仁安神液的质量检测方法。

背景技术

枣仁安神液现收载于《***药品标准》中药成方制剂第18册，标准号为WS3-B-3429-98，有补心养肝，安神益智之功效，临床用于心肝血虚、神经衰弱引起的失眠健忘、头晕、头痛等症。方中重用酸枣仁养心阴，益肝血以宁心安神为君药；丹参清心凉血，养血安神；五味子滋肾养阴，宁心安神，共为臣药。三药合用，具有补心养肝，安神益智之功。

现行标准质控项目为TLC法鉴别处方中五味子及丹参(以原儿茶醛为指标性成分)。复方中成药整体作用的特点决定了中药质量标准研究应积极地进行中成药多组分定性定量的研究工作，这也是目前《中国药典》标准的发展方向。

目前，对于枣仁安神液没有明确的质量检测方法，如果采用传统的薄层鉴别、高效液相色谱含量测定等方法，均需前处理及相对较长的分析时间，而且每次仅能测定枣仁安神液中的一种或两种成分，因此存在检测速度慢、可靠性差等问题。

因此，如何研发一种专用于枣仁安神液的高效、快速的质量检测方法，成为人们亟待解决的问题。

发明内容

鉴于此，本发明提供了一种枣仁安神液的质量检测方法，以至少解决现有的检测方法具有检测速度慢、可靠性差等问题。

本发明提供的技术方案，具体为，一种枣仁安神液的质量检测方法，该检测方法采用高效液相色谱法同时测定所述枣仁安神液中斯皮诺素、丹酚酸B以及五味子醇甲三种有效成分的含量。

优选，所述枣仁安神液的质量检测方法，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取枣仁安神液混匀，量取摇匀后枣仁安神液置于容量瓶中，加甲醇-水混合溶液适量，充分振摇使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：称取斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲对照品，置于容量瓶中，加甲醇-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液，取所述母液置于容量瓶中，加甲醇-水混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，作为对照品溶液；

测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪测定，即得；

其中，所述高效液相色谱仪对应的色谱条件为：以乙腈(A)-0.1％冰醋酸溶液(B)为流动相、梯度洗脱、检测波长为250nm、流速1mL/min。

进一步优选，所述供试品溶液的制备和所述对照品溶液的制备中甲醇-水混合溶液中甲醇的体积浓度为70％。

进一步优选，所述色谱条件中的梯度洗脱具体为：0～16min，16％A；16～30min，16％A→25％A；30～40min，25％A；40～41min，25％A→48％A；41～60min，48％A→35％A。

进一步优选，所述对照品溶液中每1mL分别含30μg取斯皮诺素、20μg丹酚酸B、10μg五味子醇甲。

本发明提供的枣仁安神液的质量检测方法，采用高效液相色谱法测定枣仁安神液中酸枣仁中斯皮诺素、丹参中丹酚酸B、五味子中五味子醇甲的含量，实现对枣仁安神液质量进行全面地评价和控制，从而为枣仁安神液内在质量检测提供全面、可靠的依据，保证了产品质量的稳定性及临床用药的安全性、有效性。

通常而言，当枣仁安神液斯皮诺素含量≥100μg/ml，丹酚酸b含量≥80μg/ml，五味子醇甲含量≥40μg/ml时，属于合格的枣仁安神液。

应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本发明的公开。

附图说明

此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本发明的实施例，并与说明书一起用于解释本发明的原理。

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为混合对照品溶液的色谱图，其中，1为斯皮诺素、2为丹酚酸B、3为五味子醇甲；

图2为供试品溶液的色谱图，其中，1为斯皮诺素、2为丹酚酸B、3为五味子醇甲；

图3为缺酸枣仁阴性样品溶液的色谱图，其中，2为丹酚酸B、3为五味子醇甲；

图4为缺丹参阴性样品溶液的色谱图，其中，1为斯皮诺素、3为五味子醇甲；

图5为缺五味子阴性样品溶液的色谱图，其中，1为斯皮诺素、2为丹酚酸B。

具体实施方式

下面结合具体的实施方式对本发明进行进一步解释，但是并不用于限制本发明的保护范围。

1、仪器与试药

岛津20A高效液相色谱仪，由LC-20AT四元泵、SPD-M20A二极管阵列检测器(DAD)、SIL-20A自动进样器和CTO-20A柱温箱组成。对照品斯皮诺素(批号111869-201704)、丹酚酸B(批号111562-201716)、五味子醇甲(批号110857-201714)均购自中国食品药品检定研究院。甲醇、乙腈均为色谱纯，水为重蒸水，其他所用试剂均为分析纯。

2、色谱条件及***适用性试验

色谱柱：安捷伦Zorbax Eclipse Plus C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-0.1％冰醋酸溶液(B)，梯度洗脱(0～16min，16％A；16～30min，16％A→25％A；30～40min，25％A；40～41min，25％A→48％A；41～60min，48％A→35％A；；流速1.0mL·min-1；检测波长：250nm；进样量：10μL。理论板数按斯皮诺素计算应不低于5000，各色谱峰的分离度均大于1.5。

3、混合对照品溶液的制备

取斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲的对照品适量，加70％甲醇溶液分别制成每1mL含0.3mg、0.2mg、0.1mg的对照品储备溶液。分别取斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲对照品储备溶液10ml置100ml容量瓶，加70％甲醇溶液制成每1mL分别含30μg取斯皮诺素、20μg丹酚酸B、10μg五味子醇甲的混合对照品溶液。

4、供试品溶液的制备

取枣仁安神液10支混匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加70％甲醇适量，充分振摇使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。

5、阴性样品溶液及专属性试验

按处方比例分别制备缺酸枣仁，缺丹参，缺五味子的阴性样品溶液。按“供试品溶液”项下方法制备溶液，即得。

按处方比例及枣仁安神液制法工艺制备缺酸枣仁，缺丹参，缺五味子的阴性样品。精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照样品溶液各10μl，注入液相色谱仪。所述对照品溶液、供试品溶液、缺酸枣仁的阴性样品溶液、缺丹参的阴性样品溶液以及缺五味子的阴性样品溶液的检测谱图见图1～图5，在上述色谱条件下，样品中其他成分对斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲的测定无干扰。

6、线性关系考察

取斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲的对照品适量，加70％甲醇溶液分别制成每1mL含0.2877mg、0.1942mg、0.0986mg的对照品储备溶液。分别取斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲对照品储备溶液10ml置100ml容量瓶，加70％甲醇溶液制成每1mL分别含28.77μg、19.42μg、9.86μg的混合对照品溶液Ⅰ；分别取斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲对照品储备溶液15ml置100ml容量瓶，加70％甲醇溶液制成每1mL分别含43.16μg、29.13μg、14.79μg的混合对照品溶液Ⅱ；分别取斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲对照品储备溶液5ml置100ml容量瓶，加70％甲醇溶液制成每1mL分别含14.38μg、9.71μg、4.93μg的混合对照品溶液Ⅲ。

分别精密吸取1μL、2μL、5μL、10μL、15μL混合对照品溶液Ⅰ，15μL、20μL混合对照品溶液Ⅱ，依次按上述液相色谱条件进样分析测定。结果表明：斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲的进样量分别在0.02877～0.8631μg，0.01942～0.5827μg，0.00986～0.2958μg范围内与峰面积呈良好线性关系，回归方程分别为：Y＝1.205×10³X+113.4，r＝0.9999；Y＝1.080×10³X-9.129×10³，r＝0.9992；Y＝1.870×10³X-245.2，r＝0.9999。

表1斯皮诺素线性范围考察结果

表2.丹酚酸B线性范围考察结果

表3.五味子醇甲线性范围考察结果

7、稳定性试验

精密吸取批号20190301的供试品溶液，在0，3，6，9，15，20h分别进样10μL，结果斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲峰面积的RSD分别为0.12％，0.30％，0.30％。测定结果见表4。

表4.稳定性试验考察结果

试验结果表明：供试液制备后20小时内测定，RSD值小于2.0％，供试品溶液中斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲含量基本稳定。

8、精密度试验

取批号20190301的样品，按[含量测定]项下供试品溶液制备方法试验，精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪中，连续进样6次，测定色谱峰面积，测定结果见表5。

表5精密度试验结果

结果表明，RSD值均小于2.0％，所用仪器具有良好的精密性。

9、重复性试验

取批号20190301的样品6份，按[含量测定]项下供试品溶液制备方法试验，测定样品中斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲的含量，测定结果见表6。

表6供试品含量测定重复性试验结果

结果表明，RSD值小于2.0％，本法重复性良好。

10、准确度试验

采用加样回收实验方法，精密量取已测知含量的枣仁安神液供试品9份(分成低、中、高浓度3组，每组3份，含斯皮诺素163.30μg/ml，含丹酚酸B114.52μg/ml，含五味子醇甲56.86μg/ml)，每份精密量取5ml供试品置50ml容量瓶中，分别加入混合对照品溶液Ⅲ、Ⅰ、Ⅱ各25mL，按“4、供试品溶液的制备”项下方法制备回收率试验用供试溶液，按上述色谱条件分别进样10μL，计算回收率。结果斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲的平均回收率(n＝9)分别95.1％，100.8％，95.2％；RSD分别为1.9％，3.2％，2.5％，具体见表7。

表7回收率试验结果

以上试验测定结果表明，测得枣仁安神液中斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲的回收率在分别91.8％～97.9％、95.2％～104.7％、90.3％～98.4％之间，RSD分别为1.9％、3.2％、2.5％，回收率良好，方法可行。

本领域技术人员在考虑说明书及实践这里公开的发明后，将容易想到本发明的其它实施方案。本申请旨在涵盖本发明的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本发明的一般性原理并包括本发明未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本发明的真正范围和精神由下面的权利要求指出。

应当理解的是，本发明并不局限于上面已经描述的内容，并且可以在不脱离其范围进行各种修改和改变。本发明的范围仅由所附的权利要求来限制。

Claims (5)

1.一种枣仁安神液的质量检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法同时测定所述枣仁安神液中斯皮诺素、丹酚酸B以及五味子醇甲三种有效成分的含量。

2.根据权利要求1所述枣仁安神液的质量检测方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

供试品溶液的制备：取枣仁安神液混匀，量取摇匀后枣仁安神液置于容量瓶中，加甲醇-水混合溶液适量，充分振摇使溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：称取斯皮诺素、丹酚酸B、五味子醇甲对照品，置于容量瓶中，加甲醇-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液，取所述母液置于容量瓶中，加甲醇-水混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，作为对照品溶液；

测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪测定，即得；

其中，所述高效液相色谱仪对应的色谱条件为：以乙腈(A)-0.1％冰醋酸溶液(B)为流动相、梯度洗脱、检测波长为250nm、流速1mL/min。

3.根据权利要求2所述枣仁安神液的质量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备和所述对照品溶液的制备中甲醇-水混合溶液中甲醇的体积浓度为70％。

4.根据权利要求2所述枣仁安神液的质量检测方法，其特征在于，所述色谱条件中的梯度洗脱具体为：0～16min，16％A；16～30min，16％A→25％A；30～40min，25％A；40～41min，25％A→48％A；41～60min，48％A→35％A。

5.根据权利要求2所述枣仁安神液的质量检测方法，其特征在于，所述对照品溶液中每1mL分别含30μg取斯皮诺素、20μg丹酚酸B、10μg五味子醇甲。