CN110029107B - 靶向snhg17治疗乳腺癌的寡核苷酸 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种靶向SNHG17治疗乳腺癌的寡核苷酸，所述寡核苷酸包括反义寡核苷酸与小干扰RNA中的至少一种，其中，反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示，小干扰RNA的序列如SEQ ID NO.2‑4所示。该寡核苷酸能够通过靶向沉默三阴性乳腺癌细胞中SNHG17基因或者下调SNHG17基因的表达来调控三阴性乳腺癌细胞的增殖、转移和侵袭能力，最终改善或治疗三阴性乳腺癌。

Description

靶向SNHG17治疗乳腺癌的寡核苷酸

技术领域

本发明涉及基因治疗技术领域，尤其涉及一种靶向SNHG17治疗乳腺癌的寡核苷酸。

背景技术

乳腺癌(Breast cancer)是最常见的女性癌症之一。在中国，患有乳腺癌的平均年龄为45-55岁，比西方女性要早，新诊断的乳腺癌病例占全部癌症的12.2％；截止到2008年，乳腺癌是中国女性死于癌症的第6位死因，排在肺癌、胃癌、肝癌、食管癌及结直肠癌之后，年龄标化比率(ASR)为5.7/10万女性，占全球乳腺癌死亡人数的9.6％；与此同时，由于多重原因，很多新药无法获得限制了乳腺癌的***治疗进展；同时新辅助化疗比较普遍，约81.4％的浸润性乳腺癌患者会进行化疗，然而化疗的效果不是很理想。

由于近年来分子靶向药物的开发，如芳香化酶药物、Tamoxifen、Fulvestrant、Trastuzumab以及与CDK4/6、PI3K/Akt/mTOR相关抑制剂联合应用可有效地控制受体型乳腺癌发生发展。然而，三阴性乳腺癌(Triple negative breast cancer，TNBC)是乳腺癌分型中最为恶性的一种，由于TNBC细胞表面不表达***受体(Estrogen receptor，ER)、孕激素受体(Progesterone receptor，PR)和人类表皮生长因子受体2(Human epidermalgrowth factor receptor-2,HER-2)，导致至今仍无有效靶点药物被应用，使TNBC患者具有很差的预后。TNBC患者被诊断后2年内会由于局部侵袭、血管内渗与外渗及远端存活定植导致其转移复发，再次应用化疗药物会致使患者肿瘤细胞产生耐药性，从而导致治疗失败。因此，多种基因通路参与TNBC的转移，根据TNBC转移耐药特性，通过多组学手段筛选转移耐药靶点基因，开发新的靶点治疗单药和/或联合化疗，对临床TNBC患者药物受益性提供治疗前预测，使患者受益。

小核RNA(small nucleolar RNAs，snoRNAs)被认为是蛋白质合成机制中重要的组成部分。这些非编码RNA在调控细胞命运和肿瘤发生方面发挥关键作用；同时，也有报道证明snoRNAs的宿主基因也能促进癌症的发展，它们贮存于长链非编码RNA(long non-codingRNA，lncRNA)和非蛋白编码基因的内含子区，小核RNA宿主基因17(small nucleolar RNAhost gene17，SNHG17)是这些宿主基因中的一员。SNHG17基因定位于20号染色体p12上，ensembl数据库显示SNHG17基因有9条转录本，主要定位在细胞核内。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种靶向SNHG17治疗乳腺癌的寡核苷酸。

为实现以上发明目的，本发明第一方面提供一种靶向SNHG17治疗乳腺癌的寡核苷酸，所述寡核苷酸包括反义寡核苷酸与小干扰RNA中的至少一种，其中，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示，所述小干扰RNA的序列如SEQ ID NO.2-4所示。

作为上述技术方案的进一步改进，所述寡核苷酸采用核酸锁修饰技术或核酸链骨架修饰技术修饰过。

本发明第二方面提供一种如上所述的寡核苷酸的用途，包括将如上所述的寡核苷酸用于靶向沉默癌细胞中SNHG17基因或者下调癌细胞中SNHG17基因的表达的用途。

作为上述技术方案的进一步改进，所述癌细胞为三阴性乳腺癌细胞。

作为上述技术方案的进一步改进，包括用于抑制癌细胞的增殖、转移与侵袭能力的用途。

本发明第三方面还提供一种靶向SNHG17治疗乳腺癌的药物组合物，包括如上所述的寡核苷酸与可药用载体。

作为上述技术方案的进一步改进，所述可药用载体包括糖、聚胺、氨基酸、肽、脂质中的至少一种。

本发明第四方面还提供一种药物组合物的用途，包括将如上所述的药物组合物用于靶向沉默乳腺癌细胞中SNHG17基因或者下调乳腺癌细胞中SNHG17基因的表达的用途。

作为上述技术方案的进一步改进，所述乳腺癌细胞为三阴性乳腺癌细胞。

作为上述技术方案的进一步改进，包括用于抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖、转移与侵袭能力的用途。

本发明的有益效果：

本发明提供一种靶向SNHG17治疗乳腺癌的寡核苷酸。寡核苷酸包括反义寡核苷酸与小干扰RNA中的至少一种，其中，反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示，小干扰RNA的序列如SEQ ID NO.2-4所示。该寡核苷酸能够通过靶向沉默三阴性乳腺癌细胞中SNHG17基因或者下调SNHG17基因的表达从而调控三阴性乳腺癌细胞增殖、转移和侵袭能力，最终改善或治疗三阴性乳腺癌。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对本发明范围的限定。

图1为本发明的实施例1中TNBC患者的肿瘤组织、癌旁组织和***组织的SNHG17RNA表达水平的影响；

图2为本发明的实施例2中NC ASO和SNHG17 ASO干扰模型对MDA-MB-231细胞的SNHG17RNA表达水平的影响；

图3为本发明的实施例2中NC ASO和SNHG17 ASO处理MDA-MB-231细胞0h、24h、48h和72h后，使用CCK8方法检测MDA-MB-231细胞增殖的变化图；

图4示出了本发明的实施例2中NC ASO和SNHG17 ASO干扰模型中BT549细胞的SNHG17RNA的表达水平；

图5为本发明的实施例2中NC ASO和SNHG17 ASO处理BT549细胞0h、24h、48h和72h后，使用CCK8方法检测干扰SNHG17后BT549细胞增殖的变化图；

图6为本发明的实施例3中NC ASO、SNHG17 ASO转染MDA-MB-231细胞48h后的细胞迁移与侵袭的电镜图；

图7为本发明的实施例3中NC ASO、SNHG17 ASO转染MDA-MB-231细胞48h后针对图6的细胞迁移电镜图的细胞数量统计图；

图8为本发明的实施例3中NC ASO、SNHG17 ASO转染MDA-MB-231细胞48h后针对图6的细胞侵袭电镜图的细胞数量统计图；

图9为本发明的实施例3中NC ASO、SNHG17 ASO转染BT549细胞48h后的细胞迁移与侵袭的电镜图；

图10为本发明的实施例3中NC ASO、SNHG17 ASO转染BT549细胞48h后针对图9的细胞迁移电镜图的细胞数量统计图；

图11为本发明的实施例3中NC ASO、SNHG17 ASO转染BT549细胞48h后针对图9的细胞侵袭电镜图的细胞数量统计图；

图12示出了本发明的实施例4中NC ASO和SNHG17 ASO干扰模型中MDA-MB-231细胞的转移相关因子的表达水平；

图13示出了本发明的实施例5中siNC、siSNHG17_1、siSNHG17_2与siSNHG17_3干扰模型中MDA-MB-231细胞的SNHG17RNA表达水平。

具体实施方式

如本文所用之术语：

“由……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。

当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。

“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a：b。或者，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量份数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。

“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)；

此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。

如本文所用，术语“反义寡核苷酸”、“antisense-oligonucleotides”、“AS-Ons”、“ASO”含义相同。

术语“小干扰RNA”、“Small interfering RNA”及“siRNA”含义相同。

反义寡核苷酸是指那些能与特定的DNA、RNA以碱基互补配对的方式结合，并阻止其转录与翻译的短核苷酸片段。小干扰RNA可以通过RNA干扰，高效、特异性地阻断体内同源基因的表达，促使同源mRNA降解，诱使细胞细胞表现出特定基因缺失的表型。

在本发明的一个实施方案中，提供一种靶向SNHG17治疗乳腺癌的寡核苷酸，所述寡核苷酸包括反义寡核苷酸与小干扰RNA中的至少一种，其中，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示，所述小干扰RNA的序列如SEQ ID NO.2-4所示。

具体的，所述反义寡核苷酸与小干扰RNA均具有在体内靶向沉默SNHG17基因或者下调SNHG17基因的表达。

可选的，在本发明中，所述寡核苷酸采用核酸锁修饰技术或核酸链骨架修饰技术修饰过。所述的修饰基本不改变寡核苷酸的活性，更佳地，所述修饰可提高寡核苷酸的稳定性、活性或治疗效果。

核酸锁(locked nucleic acid，LNA)通常是指通过一个亚甲基桥将核糖的2'氧原子和4'碳原子连接起来的修饰技术。LNA能延长寡核苷酸的血清半衰期，提高对靶标亲和性，减少脱靶作用的范围和程度。

基于核酸链骨架的修饰技术发展出的药物在可溶性，抗核酸酶降解等方面大有改善，且易于大量合成。寡核苷酸的核酸链骨架修饰方法有多种，包括硫代法，例如将脱氧核苷酸链硫代修饰为硫代脱氧核苷酸链。该方法是将DNA骨架上的磷酸键的氧原子用硫原子替代，可抵抗核酸酶降解。

应理解，任何能够保持所述寡核苷酸的大部分或全部活性的修饰都包含在本发明中。

将本发明所述的寡核苷酸转移到人体内后，它们能够明显下调相关SNHG17基因的表达。

在本发明另一个实施方式中，提供一种寡核苷酸的用途，所述寡核苷酸可用于靶向沉默癌细胞中SNHG17基因或者下调癌细胞中SNHG17基因的表达的用途，所述寡核苷酸包括反义寡核苷酸与小干扰RNA，其中，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示，所述小干扰RNA的序列如SEQ ID NO.2-4所示。

具体的，所述寡核苷酸的用途包括用于抑制癌细胞的增殖、转移与侵袭能力。

更具体的，所述癌细胞为三阴性乳腺癌细胞。

KTN1为驱动结合蛋白，其与癌症增殖相关；N-Cadherin、β-Catenin和Vimentin为肿瘤转移相关因子；上述相关因子控制三阴性乳腺癌细胞的增殖、转移与侵袭能力。在本实施方式中，上述的寡核苷酸可通过靶向下调SNHG17基因的表达从而抑制KTN1、N-Cadherin、β-Catenin和Vimentin的表达，最终抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖、转移与侵袭能力。

通常，所述的寡核苷酸在本发明通常以药物组合物的形式使用。因此，在又一个实施方式中，提供一种靶向SNHG17治疗乳腺癌的药物组合物，包括寡核苷酸与可药用载体，寡核苷酸包括反义寡核苷酸与小干扰RNA，其中，反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示，小干扰RNA的序列如SEQ ID NO.2-4所示。

可选的，该寡核苷酸可与各种可药用载体分子配制成药用制剂。当前描述的寡核苷酸可与增强其进入靶细胞能力的可药用载体分子复合。这种可药用载体分子包括但不限于糖、聚胺、氨基酸、肽、脂质和其它对细胞生长不可或缺的分子。例如，寡核苷酸可与脂质体组合，即包含于脂质体中形成药用制剂。

该药物组合物可以用运输寡核苷酸到期望部位如乳腺的任意方式给予。

可选的，该药物组合物的用途包括靶向沉默乳腺癌细胞中SNHG17基因或者下调乳腺癌细胞中SNHG17基因的表达的用途。

具体的，所述乳腺癌细胞为三阴性乳腺癌细胞。

具体的，该药物组合物具有抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖、转移与侵袭的用途。

该药物组合物通过靶向沉默SNHG17基因或者下调SNHG17基因的表达，从而抑制KTN1、N-Cadherin、β-Catenin和Vimentin的表达，最终达到抑制三阴性乳腺癌的增殖、转移与侵袭能力。

下面结合实验，进一步说明本发明的技术方案。

材料与方法：

(1)细胞组织材料：

选取人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231和BT549，温度为37℃、质量浓度为5％的CO₂孵箱条件下，采用质量浓度为10％的FBS DMEM培养基在10cm培养皿中传代培养。

(2)构建SNHG17 ASO干扰模型：

当MDA-MB-231和BT549细胞汇合度长至70％时，随机将细胞分别分为两组：NC ASO细胞组和SNHG17 ASO细胞组。将两组细胞分别用PBS洗两遍；使用15μl lipofectamine2000脂质体分别包裹50nM的NC ASO和SNHG17 ASO，其中，SNHG17 ASO的序列为:5'-TATTTCCGCCGGCGCGAAAC-3'；NC ASO细胞组为阴性对照组，NC ASO由广州市锐博生物科技有限公司提供，其产品名称为RiboTM lncRNA ASO Negative Control，产品编号为lnc3N0000001-1-5。所述NC ASO和SNHG17 ASO的体积分别为15μL，用无血清无抗生素DMEM培养基进行稀释得到两组混合液，稀释后的每组混合液总体积为400μl，将该混合液室温放置15-20min。随后每个培养有细胞的10cm培养皿中加入体积为4.4ml的无血清无抗生素DMEM培养基，将脂质体包裹后的NC ASO混合液滴加进培养NC ASO细胞组的培养皿中，将脂质体包裹后的SNHG17 ASO混合液滴加进培养SNHG17 ASO细胞组的培养皿中，培养3-5h后将每个培养皿中液体弃掉，加入含有血清和抗生素的DMEM培养基，在温度为37℃、质量浓度为5％的CO₂培养条件下继续培养。

(3)反转录及qRT-PCR反应：

培养48h后收集细胞，使用PBS洗两遍，每个培养皿加入1mlPBS，使用细胞刮刮下细胞后，用Trizol法提取细胞内总RNA，测定浓度后进行反转录反应。反转录反应体系如下所示：

试剂	使用量
		Total RNA	1μg
Anchored Oligo(dT)	1μl
		2×ES Reaction Mix	10μl
EasyScript RT/TI Enzyme Mix	1μl
		gDNA Remover	1μl
Total volume	20μl

在温度为42℃条件下孵育15min后，再在85℃加热5s失活反应体系中的酶混合物，最后在温度为4℃条件下孵育直至冷却。SNHG17引物序列如SEQ ID NO.5-6所示，具体为：

hSNHG17_FP_1：5'-CCCCAGGTGACGTGTCTTCA-3'；

hSNHG17_RP_1：5'-GCAACAGCCACTGAAAGCAT-3'。

(4)蛋白免疫印迹分析：

每个培养皿加入100μl-130μl的RIPA蛋白裂解液和25×PIC蛋白酶抑制剂，置于冰上10min后在-80℃温度下冻存裂解。次日，样品在转速为12000rpm，4℃温度条件下离心15min，然后收集上清液，即蛋白裂解液，测定浓度，进行Western blot蛋白免疫印迹分析。

(5)统计学分析：使用SPSS21.0版本软件，执行独立样本单因素方差分析，所有数据均采用双尾检测及方差齐性分析，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001具有统计学意义。

实施例1

本实施例涉及三阴性乳腺癌(TNBC)患者肿瘤组织中SNHG17RNA表达水平的影响：

收集3组临床TNBC患者的癌组织(Cancer)、癌旁组织(Peritumorial)和前哨***组织(Sentinel node)，分别提取RNA，反转录后进行qRT-PCR检测，结果如图1所示(图1中，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)，TNBC肿瘤组织中SNHG17RNA的表达量远远高于癌旁组织和前哨***组织中SNHG17RNA的表达量。

结论：SNHG17基因与TNBC的发生相关。

实施例2

本实施例涉及检测反义寡核苷酸对TNBC患者肿瘤组织中的MDA-MB-231和BT549细胞的增殖与SNHG17 RNA表达水平的调控能力。

在TNBC细胞系MDA-MB-231和BT549内通过上述实验方法建立NC ASO和SNHG17 ASO干扰模型。

使用qRT-PCR方法分别检测转染NC ASO和SNHG17 ASO后的MDA-MB-231细胞的SNHG17RNA表达水平的变化，具体如图2所示，转染SNHG17 ASO后的MDA-MB-231细胞的SNHG17RNA表达水平远低于对照组(NC ASO)，SNHG17 ASO干扰模型建立成功；图3表示NCASO和SNHG17 ASO处理MDA-MB-231细胞后0h、24h、48h和72h后，使用CCK8方法检测干扰SNHG17后MDA-MB-231细胞增殖的变化图(图3中，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)，通过图3可知，转染SNHG17 ASO后，随着培养时间的延长，MDA-MB-231细胞的增殖能力减弱。

使用qRT-PCR方法分别检测转染NC ASO和SNHG17 ASO后的BT549细胞的SNHG17RNA表达水平的变化，如图4所示，转染SNHG17 ASO后的BT549细胞的SNHG17RNA表达水平远低于对照组(NC ASO)，SNHG17ASO干扰模型建立成功；图5表示NC ASO和SNHG17 ASO处理BT549细胞后0h、24h、48h和72h后，使用CCK8方法检测干扰SNHG17后BT549细胞增殖的变化图(图5中，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)，通过图5可知，转染SNHG17 ASO后，随着培养时间的延长，BT549细胞的增殖能力减弱。

结论：SNHG17基因能够调控TNBC细胞系MDA-MB-231和BT549细胞的增殖能力；且沉默SNHG17基因能够抑制TNBC细胞系MDA-MB-231和BT549细胞的增殖能力。

实施例3

本实施例涉及检测反义寡核苷酸对TNBC患者肿瘤组织中MDA-MB-231和BT549细胞的迁移和侵袭能力的影响。

本实施例使用Transwell技术检测了SNHG17 ASO干扰模型中MDA-MB-231和BT549细胞的迁移和侵袭能力，具体步骤为：

在MDA-MB-231细胞中转染NC ASO、SNHG17 ASO，转染48h后，将处理后的MDA-MB-231转种在Transwell小室(检测侵袭能力的小室内含有基质胶)中，12-16h收集细胞在显微镜下观察，请参考图6、图7与图8，图6为NC ASO、SNHG17 ASO转染MDA-MB-231细胞48h后的细胞迁移与侵袭的电镜图，图7为NC ASO、SNHG17 ASO转染MDA-MB-231细胞48h后针对图6的细胞迁移电镜图的细胞数量统计图，图8为NC ASO、SNHG17 ASO转染MDA-MB-231细胞48h后针对图6的细胞侵袭电镜图的细胞数量统计图，图6、图7与图8中*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。从图6中，电镜图下观察发现，SNHG17 ASO转染SNHG17后MDA-MB-231细胞的迁移能力降低，同时侵袭能力也降低；从图7与图8可以发现，SNHG17 ASO转染MDA-MB-231细胞与对照组NC ASO转染SNHG17 48h后相比，细胞数减少约5-6倍。

同样地，在BT549细胞中转染NC ASO、SNHG17 ASO，转染48h后，将处理后的BT549细胞转种在Transwell小室(检测侵袭能力的小室内含有基质胶)中，12-16h收集细胞在显微镜下观察，请参考图9、图10与图11，图9为NC ASO、SNHG17 ASO转染BT549细胞48h后的细胞迁移与侵袭的电镜图，图10为NC ASO、SNHG17 ASO转染BT549细胞48h后针对图9的细胞迁移电镜图的细胞数量统计图，图11为NC ASO、SNHG17 ASO转染BT549细胞48h后针对图9的细胞侵袭电镜图的细胞数量统计图；图9、图10与图11中*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。从图9中可以发现，SNHG17 ASO转染SNHG17后BT549细胞的迁移能力降低，同时侵袭能力也降低；从图10与图11可以发现，SNHG17 ASO转染BT549细胞与对照组NC ASO转染SNHG17 48h后相比，细胞数降低9-10倍。

结论：沉默SNHG17基因能够显著抑制TNBC细胞系MDA-MB-231和BT549细胞的迁移及侵袭。

实施例4

本实施例涉及检测反义寡核苷酸对TNBC患者肿瘤组织中转移相关因子的相关表达的影响。

KTN1为驱动结合蛋白，其与癌症增殖相关；N-Cadherin、β-Catenin和Vimentin为肿瘤转移相关因子；β-Actin为内参因子。在MDA-MB-231细胞中分别转染NC ASO与SNHG17ASO，然后使用蛋白免疫印迹分析检测方法检测KTN1、N-Cadherin、β-Catenin、Vimentin与β-Actin的蛋白质表达。请参考图12，图12示出了NC ASO和SNHG17 ASO干扰模型中MDA-MB-231细胞的转移相关因子的表达水平，可知SNHG17 ASO能够直接靶向KTN1、N-Cadherin、β-Catenin和Vimentin的表达来调控TNBC的增殖、迁移、侵袭能力。

结论：采用反义寡核苷酸靶向下调SNHG17基因的表达，可以抑制影响三阴性乳腺癌细胞增殖、转移、侵袭能力的KTN1、N-Cadherin、β-Catenin和Vimentin等转移相关因子的表达，最终改善或治疗三阴性乳腺癌。

实施例5

本实施例涉及检测siRNA对TNBC患者肿瘤组织中的MDA-MB-231和BT549细胞的SNHG17表达水平的调控能力。

在TNBC细胞系MDA-MB-231内通过与构建SNHG17 ASO干扰模型相同的实验方法建立siNC(对照组)和siSNHG17_1、siSNHG17_2、siSNHG17_3干扰模型。其中siSNHG17_1的序列为5'-GGTGACGTGTCTTCAAGAA-3'，如SEQ ID NO.2所示；siSNHG17_2的序列为5'-CGGATCCACTGTTCAATCT-3'，如SEQ ID NO.3所示；siSNHG17_3的序列为5'-GCCTGGAATGACTTTAATA-3'，如SEQ ID NO.4所示；siNC由广州市锐博生物科技有限公司提供，其产品名称为siR NC#1，产品编号为siN0000001-1-5。

使用qRT-PCR方法分别检测转染siNC和siSNHG17_1、siSNHG17_2、siSNHG17_3后的MDA-MB-231细胞的SNHG17RNA表达水平的变化，具体如图13所示，转染siSNHG17_1、siSNHG17_2、siSNHG17_3后的MDA-MB-231细胞的SNHG17RNA表达水平远低于对照组(siNC)，siSNHG17_1、siSNHG17_2、siSNHG17_3干扰模型建立成功。

结论：siSNHG17_1、siSNHG17_2、siSNHG17_3均能够抑制MDA-MB-231细胞的SNHG17RNA的表达水平。

由于本发明中所涉及的各工艺参数的数值范围在上述实施例中不可能全部体现，但本领域的技术人员完全可以想象到只要落入上述该数值范围内的任何数值均可实施本发明，当然也包括若干项数值范围内具体值的任意组合。此处，出于篇幅的考虑，省略了给出某一项或多项数值范围内具体值的实施例，此不应当视为本发明的技术方案的公开不充分。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式选择等，落在本发明的保护范围内。

SEQUENCE LISTING

<110> 深圳市人民医院

<120> 靶向SNHG17治疗乳腺癌的寡核苷酸

<130> 2019

<160> 6

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

tatttccgcc ggcgcgaaac 20

<210> 2

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 2

ggtgacgtgt cttcaagaa 19

<210> 3

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 3

cggatccact gttcaatct 19

<210> 4

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 4

gcctggaatg actttaata 19

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ccccaggtga cgtgtcttca 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

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Claims (4)

1.一种寡核苷酸的用途，其特征在于，包括将所述寡核苷酸用于制备靶向沉默三阴性乳腺癌细胞中SNHG17基因或者下调三阴性乳腺癌细胞中SNHG17基因的药物的用途；

所述寡核苷酸包括反义寡核苷酸与小干扰RNA中的至少一种，其中，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示，所述小干扰RNA的序列如SEQ ID NO.2-4所示；

所述寡核苷酸通过靶向沉默SNHG17基因或者下调SNHG17基因的表达，从而抑制KTN1、N-Cadherin、β-Catenin和Vimentin的表达，进而抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖、转移与侵袭能力。

2.如权利要求1所述的寡核苷酸的用途，其特征在于，所述寡核苷酸采用核酸锁修饰技术或核酸链骨架修饰技术修饰过。

3.一种药物组合物的用途，其特征在于，包括将所述药物组合物用于制备靶向沉默三阴性乳腺癌细胞中SNHG17基因或者下调三阴性乳腺癌细胞中SNHG17基因的药物的用途；

所述药物组合物包括寡核苷酸与可药用载体；

所述寡核苷酸包括反义寡核苷酸与小干扰RNA中的至少一种，其中，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示，所述小干扰RNA的序列如SEQ ID NO.2-4所示；

所述寡核苷酸通过靶向沉默SNHG17基因或者下调SNHG17基因的表达，从而抑制KTN1、N-Cadherin、β-Catenin和Vimentin的表达，进而抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖、转移与侵袭能力。

4.如权利要求3所述的药物组合物的用途，其特征在于，所述可药用载体包括糖、聚胺、氨基酸、肽、脂质中的至少一种。

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