CN109988229A

CN109988229A - 蜡梅CpFT基因及其应用

Info

Publication number: CN109988229A
Application number: CN201910181359.6A
Authority: CN
Inventors: 李志能; 刘宁; 江英杰; 眭顺照; 李名扬; 李先源
Original assignee: Southwest University
Current assignee: Southwest University
Priority date: 2019-03-11
Filing date: 2019-03-11
Publication date: 2019-07-09
Anticipated expiration: 2039-03-11
Also published as: CN109988229B

Abstract

本发明提供蜡梅CpFT基因及其在花期调控中的应用。本发明提供的蜡梅CpFT的基因序列如SEQ ID No.1所示。本发明首次克隆获得蜡梅CpFT基因，并通过转基因技术，在植物拟南芥中验证了该基因的功能。结果表明，蜡梅CpFT基因表达量越高，转基因拟南芥的莲座叶数越少，抽葶时间、第一朵花开放时间、第一个果荚形成时间越短。由于植株由营养生长向生殖生长转化的时间提前，导致营养生长时间缩短，莲座叶数减少，开花时间提前。表明蜡梅CpFT基因能够促进植株开花，同时对植株的营养生长具有抑制作用,并且该基因在低温打破蜡梅花蕾休眠导致花朵膨大、开放过程中起重要作用。

Description

蜡梅CpFT基因及其应用

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地说，涉及蜡梅CpFT基因的克隆及其应用。

背景技术

蜡梅(Chimonanthus praecox(L.)Link)，属于蜡梅科(Calycanthaceae)蜡梅属(Chimonanthus Lindl.)，又称金梅、腊梅、黄梅花等，是我国特有的名贵观赏花木。蜡梅是丛生灌木，可高达3至4米。落叶，叶对生，半革质；花着生于叶腋；最外轮的花被片成褐色鳞片状，向内过渡为黄色；花期12月至翌年3月；果期8月至9月，属于聚合瘦果。蜡梅是少有的冬季开花植物，先花后叶，花朵甜美，花色金黄，花瓣蜡质，花香馥郁，具有较高经济和观赏价值。蜡梅被广泛应用于园林绿化及制作盆景等，其药用和食用价值也得到了开发和利用，且近年来蜡梅作为一种新兴的切花材料深受人们喜爱。

随着现代分子生物学的发展，生物技术已经广泛的应用于植物、动物和微生物的研究中。眭順照(2006)等人利用EST技术构建了第一个蜡梅花的cDNA文库，且对蜡梅开花过程中的基因进行了表达分析，在其基础上先后克隆出不同功能相关的基因，并对其进行了***的研究：CpAP3与蜡梅的花器官发育有关，推测其与花被片形成和发育有关；CpPEX22与抗衰老、抗氧化存在一定关系；CpAGL6转入拟南芥中与野生型的拟南芥相比出现提前开花、植株矮化、雄蕊的形态及数目都发生了变化；CpKTI胰蛋白酶抑制基因，通过将其转入烟草超量表达，发现使烟草的抗虫性提高；CpPR-4(秦华，2012)为病程相关蛋白基因等。上述蜡梅基因功能的初步研究，为以后蜡梅分子生物学研究做出一定贡献。

目前，蜡梅花发育方面的分子研究已取得一定成果。雷兴华(2007)将蜡梅CpAP3基因转入烟草，发现转基因烟草出现雄蕊瓣化现象；张琼(2011)等发现CpAP3基因在矮牵牛中超表达导致矮牵牛的花瓣和雄蕊出现异常。刘道凤(2012)对蜡梅CpMADS1基因功能进行了探索，发现CpMADS1基因转入矮牵牛后，部分株系出现雄蕊瓣化现象。罗登攀(2014)将蜡梅CpAGL2基因转入拟南芥导致拟南芥的雄蕊缺失，推测CpAGL2基因可能参与雄蕊的发育。王蓓果(2011)将CpAGL6转入拟南芥后引起拟南芥花期提前，同时转基因拟南芥出现雄蕊退化、缺失、瓣化以及心皮伸长等现象。敬帆(2015)在对CpAGL6基因启动子的研究时发现其在花和绿色器官中有较高活性，说明CpAGL6基因不仅参与花的形态建成，还参与叶片等绿色器官的生长发育；同时还发现CpAGL6基因启动子的调控作用受低温、赤霉素等诱导。李婷(2017)研究发现CpSOC1基因能够促进拟南芥的开花和生长。张弈将CpVIN3基因转入拟南芥引起植株早花。江英杰(2017)发现CpWOX13基因能够促使拟南芥开花提前、植株高度增加、侧根分枝增多。

开花是高等植物由营养生长向生殖生长转变的重要过程(莫正海等，2013)。FT基因作为整合因子，位于植物不同开花途径的交汇节点，对植物开花调控起关键作用(Martina et al.,2015)。多项研究表明FT基因具有促进植物开花的功能，过量表达FT类基因均在不同程度上引起转基因植株提前开花。水稻中Hd3a为FT的同源基因，在水稻及拟南芥中过量表达Hd3a均使转化植株出现早花表型(Tamaki et al.,2007；Kojima et al.,2002)。过量表达大麦HvFT1和HvFT2基因均可使水稻的开花时间显著提前(Kikuchi etal.,2009)。苹果MdFT在苹果、杨树中的组成型表达以及在拟南芥韧皮筛管特异表达启动子SUC2作用下的特异表达均可有效促进转化植株开花，甚至在组织培养阶段已表现出明显的开花促进作用(Trankner et al.,2010)。此外，FT基因作为生长因子，还参与调控植物的多种生物学进程，包括植物的生长、休眠，块茎的形成，果实产量的控制，侧分枝的形成及气孔运动等，影响着植物的多种形态结构。在番茄和烟草中过表达SFT及FT，均使植株复叶上的小叶减少、节间变短、茎变细(Lifschitz et al.,2006)。玉米中FT的同源基因ZCN8对植物的生长起抑制作用，抑制该基因的表达可使植株叶片变大、茎***(Danilevskaya et al.,2011)。水稻的Hd3a基因能够促进侧分枝的形成(Tsuji et al.,2015)。在积壳中过量表达FT基因，转基因植株出现矮化、分枝多及刺少的现象(Endo et al.,2005)。

目前已克隆了多个FT的同源基因，但蜡梅中还未有相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供蜡梅CpFT基因及其应用。

为了实现本发明目的，本发明的蜡梅CpFT蛋白，其为：

1)由SEQ ID No.2所示的氨基酸组成的蛋白质；或，

2)在SEQ ID No.2所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由1)衍生的蛋白质。

蜡梅CpFT蛋白与莲NuFTL2、NuFTL4NuFTL3、和NuFTL5(Nelumbo nucifera)同源性分别为84％、85％、92％和95％，与互叶梅AtrFTL1、葡萄VvFT同源性均为93％，与拟南芥FT同源性为87％。

本发明还提供编码蜡梅CpFT蛋白的基因，序列如SEQ ID No.1所示。

本发明还提供含有CpFT基因的载体、宿主细胞及工程菌。

本发明还提供CpFT基因在调控植物花期中的应用。

具体地，将所述CpFT基因转入植物基因组中，并在转基因植物中超量表达，使转基因植物营养生长受到抑制，促进植物提前开花。

本发明还提供CpFT基因在制备转基因植物中的应用。

本发明进一步提供一种转基因植株的构建方法，采用农杆菌介导的方法，将含有CpFT基因的载体转入植物基因组中，筛选获得转基因植株。

本发明具有以下优点：

本发明首次克隆获得蜡梅CpFT基因，并通过转基因技术，在植物中验证了该基因的功能。结果表明，转基因拟南芥提前开花，营养生长受到抑制。

附图说明

图1为蜡梅CpFT基因编码的氨基酸序列***进化树。

图2为蜡梅CpFT基因在蜡梅不同组织中的相对表达量(A)和蜡梅CpFT基因在蜡梅开花各时期花朵中的相对表达量(B)。

图3为转录组测序3组样品两两比较维恩图(a)、a交集6440与154个花发育基因维恩图(b)、b交集中26个unigene的RNA-seq热图(c)。

图4为pCAMBIA2301g-CpFT载体示意图。

图5为转基因拟南芥中CpFT基因的PCR检测。M：DNAmaker DL2000；1～12：抗性株系；WT：野生型；CK：阴性对照。

图6为实时荧光定量PCR检测转基因拟南芥T2代不同单株CpFT基因的相对表达量，Actin作为内参。

图7为蜡梅CpFT转基因拟南芥T2代植株内源基因的相对表达量：FT(7A)、AP1(7B)、SOC1(7C)、SEP3(7D)、LFY(7E)。三个重复，Actin作为内参。

图8为蜡梅CpFT转基因拟南芥T2代植株表型观察结果。A：抽葶约1cm时莲座叶数；B：开花时间情况(30d)；C：果梗长度；D：植株高度。标尺：10cm(A、B、D)，1cm(C)。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular cloning:a laboratory manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。

实施例1蜡梅CpFT基因的克隆

1引物设计

依照本实验室构建的蜡梅花cDNA文库注释信息，检测得到包含完整ORF框的FT基因的cDNA序列。该cDNA文库实验材料为校内种植的磬口蜡梅，取其的不同时期的花为材料构建。依照所得cDNA序列设计特异性引物，上下游引物包含完整ORF序列，引物序列如下：

CpFT-F CGTAGTCATCCAAGTATCTCAATC

CpFT-R TGGAACTGCTGTTGGACCTAT

以蜡梅cDNA为模板，用上述引物进行PCR扩增，扩增得到580bp左右的片段。

将目的片段进行回收，连接到T载体，构建出克隆载体，转化大肠杆菌感受态细胞，重组质粒的筛选和测序。经测定，蜡梅CpFT cDNA序列如SEQ ID No.1所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。蜡梅CpFT的***进化树如图1所示。

实施例2蜡梅CpFT基因表达分析

取素心蜡梅(Chimonanthus praecox)根、茎、子叶、幼叶、成熟叶(均采自两年生蜡梅幼苗，种植于西南大学花卉研究所的组培室内，常规养护管理)和各花器官材料(均采自成年蜡梅植株，种植于西南大学校园内，常规养护管理)。

1实时荧光定量PCR引物的设计与合成

选用蜡梅的Actin与Tublin基因作为蜡梅CpFT基因实时荧光定量的双内参基因，运用Primer Premier 5.0软件设计内参基因和目标基因CpFT的荧光定量特异性引物，后送至北京六合华大基因科技股份有限公司合成。本研究中所有引物均由Primer Premier5.0软件进行设计、北京六合华大基因科技股份有限公司合成。引物名称及序列如下：

2 CpFT基因表达特性分析

以反转录获得的蜡梅cDNA第一链为模板，反应体系及反应程序如下所示，对蜡梅CpFT基因在蜡梅不同组织及不同开花时期花器官中的表达情况进行实时荧光定量PCR分析。

反应体系和反应程序如下：

试验数据通过Bio-Rad ManagerTM Software(Version 1.1)软件进行分析，用2-^△△CT法获得目的基因的相对表达量。

3蜡梅CpFT基因在蜡梅不同组织中的表达特性分析

通过实时荧光定量PCR对蜡梅CpFT基因在蜡梅不同组织中的表达特性分析，发现该基因在蜡梅幼年期除根中有少量表达外，其他组织中均几乎不表达；在花器官中，以雌蕊中的表达量相对最高，外瓣中的表达量次之，而在内瓣和雄蕊中的表达量基本一致，且雌蕊中的表达量是雄蕊中的2.8倍，外瓣中的表达量约为内瓣中的2倍(图2A)。

4 CpFT在蜡梅不同开花时期花朵中的表达特性分析

通过实时荧光定量PCR对蜡梅CpFT基因在蜡梅开花各时期花朵中的表达特性进行分析，结果显示该基因在萌动期表达量最低，而蕾期表达量最高，约为萌动期的11倍；之后，在露瓣期其表达量迅速下降，约为蕾期的1/3；但由露瓣期开始其在花朵中的表达逐渐增强，至衰败期表达量基本接近最高水平；其中，初开期与露瓣期的表达量基本一致，盛开期表达量为蕾期的1/2(图2B)。

实施例2低温打破蜡梅花蕾休眠导致冬季开花转录测序维恩图及热图分析

维恩图、热图均在基迪奥公司在线平台完成(http://www.omicshare.com/tools/)。三个转录组为FB.Nov为11月份低温诱导处理的对照；F.12为12℃条件下花朵可以膨大并盛开的始花阶段蜡梅花蕾；nF.16为16℃处理不能开花的蜡梅花蕾。3组样品转录组两两比较维恩图(图3a)及图3a交集6440与154个花发育基因维恩图(图3b)及热图(图3c)。结果表明：Unigene0043357FT/Hd3a可能在低温打破蜡梅花蕾休眠导致冬季开花过程中起着重要作用。

实施例3蜡梅CpFT基因拟南芥遗传转化及功能分析

1 CpFT基因植物超表达载体构建

从克隆载体中酶切下CpFT基因，然后连接到植物表达载体pCAMBIA2301G中，构建了蜡梅CpFT基因的植物超表达载体pCAMBIA2301g-CpFT(或35S::CpFT)，载体示意图如图4所示。

2花芽侵染法转化拟南芥

转基因受体拟南芥(Arabidopsis thaliana(L.)Heynh)是野生的哥伦比亚型WT(Col-0)，其种子由西南大学花卉研究所保存。

2.1拟南芥的培养

取适量野生型拟南芥WT种子于1.5mL离心管中，加入浓度为17％的次氯酸钠(NaClO)溶液，充分振荡消毒7min，然后于超净工作台上用无菌水冲洗5-6次后用移液枪均匀播种在MS固体培养基平板上，于4℃冰箱春化2-3d后置于光照16h/黑暗8h的光周期、2000Lux照明条件和22℃、70％湿度的环境下培养，约2周后移栽至培养基质中(草炭土:蛭石＝1:1)并置于相同培养条件下培养。在基质中培养3周左右，至花葶长度5cm左右时，可对拟南芥进行农杆菌侵染。

2.2花序侵染法转化拟南芥

a.将转化有植物超表达载体质粒pCAMBIA2301g-CpFT的农杆菌于含有抗生素(Gen：50mg/L，Kan：50mg/L)的YEB固体培养基上划线，于28℃暗培养36～48h以活化菌体；

b.用无菌牙签挑取单菌落，接种至800μL含有抗生素(Gen：50mg/L，Kan：50mg/L)的YEB液体培养基中，28℃、200rpm避光振荡培养24～36h；

c.对培养的农杆菌菌液用蜡梅CpFT基因特异引物CpFTM-F和CpFTM-R进行PCR鉴定，验证正确后取500μL上述菌液接种于50mL含有抗生素(Gen：50mg/L，Kan：50mg/L)的YEB液体培养基中，28℃、200rpm避光振荡培养至菌液OD₆₀₀在0.8～1.2之间备用；

d.用50mL的无菌离心管收集上述菌液，5000rpm离心15min，弃上清液，收集沉淀，沉淀用现配侵染液(无菌水+5％蔗糖+0.5‰L-77)重悬，稀释至OD₆₀₀≈0.8；

e.初次侵染时剪去拟南芥花葶上已开放的花朵，仅保留未露白的花蕾，并提前一天浇水保持基质湿润，将花蕾浸入侵染液8～10s，后快速取出并置于22℃、相对湿度大于80％的环境下，暗培养24h后转至正常的生长环境中；

f.拟南芥侵染1周后根据其生长状态可再次侵染以提高转化效率，新花蕾长出后也可继续侵染，增加侵染量。

3转基因拟南芥的筛选和鉴定

3.1转基因拟南芥Kan抗性筛选

将通过农杆菌花序侵染获得的转基因拟南芥T₀代种子播种在含50mg/L kan的MS固体培养基上进行阳性植株筛选，成功转入目的基因的拟南芥能够在抗性培养基上正常生长，而未成功转入的则在子叶期黄化死亡，经筛选共获得12个蜡梅CpFT转基因拟南芥株系。将筛选出的抗性植株进行移栽，分别收获种子后继续进行抗性筛选，将表现出分离比接近3:1的株系各单株分别移栽收种，并继续进行抗性筛选，最终在T₂代获得4个株系8个纯合体转基因单株。

3.2转基因拟南芥PCR阳性检测

分别提取T₀代Kan抗性筛选出的拟南芥和野生型拟南芥WT植株的叶片基因组DNA，以蜡梅CpFT基因特异引物qCpFT-F和qCpFT-R进行PCR检测。结果表明，野生型拟南芥WT及T₀代抗性植株中2号株系没有扩增出条带外，其余抗性株系均扩增出与目的片段大小一致的条带，说明目的基因CpFT已成功***到拟南芥基因组中(图5)。引物名称及序列如下所示：

CpFT-F(5'-3')：ATGCCCAGGGAAAGAGATCCT

CpFT-R(5'-3')：TGGAACTGCTGTTGGACCTAT

PCR反应体系和反应程序如下：

实施例4转基因拟南芥的实时荧光定量PCR检测

为了进一步检测分析CpFT基因在转基因拟南芥中的表达水平，根据转基因拟南芥Kan抗性筛选和PCR阳性检测结果，分别提取在含相应抗生素的MS固体培养基上播种后生长约14天左右的T₂代纯合体转基因拟南芥和野生型拟南芥WT幼苗整株总RNA。以反转录后的cDNA作为模板，拟南芥AtActin基因为内参，野生型拟南芥WT为对照，进行实时荧光定量PCR检测和分析(图6)。

结果显示，野生型拟南芥WT中几乎没有检测到CpFT基因的表达，在所检测的4个株系8个T₂代纯合体转基因拟南芥单株中，CpFT基因的表达水平各不相同，4号株系表达量最高，其中以4-5单株中表达量最高，5号株系与6号株系中表达量基本一致，8号株系中表达量最低且基本为零。

在后期对转基因的拟南芥分析时，根据荧光定量结果，分别选取表达量最高的4-5、表达量中等的6-5和表达量稍低的5-7单株，用于后期对CpFT转基因拟南芥的研究分析及表型观察。

表1实时荧光定量PCR引物

实施例5转基因拟南芥内源基因的表达分析

为了进一步分析蜡梅CpFT基因转入拟南芥后超表达对拟南芥内源FT基因及其下游相关基因的影响，分别提取转基因植株和野生型拟南芥RNA，进行实时荧光定量PCR检测和分析各内源基因的表达情况。结果表明，蜡梅CpFT基因转入拟南芥后会引起FT及其下游基因AP1、SOC1、LFY、SEP3等表达量不同程度的上升(图7)。拟南芥开花过程受FT、AP1、SOC1、LFY、SEP3等基因的共同调节，且FT通过上调AP1、SOC1、LFY、SEP3等基因的表达以促进拟南芥开花。以上结果显示蜡梅CpFT基因在拟南芥中的超量表达促使其转基因拟南芥内源AP1、SOC1、LFY、SEP3等基因的表达增强，故表明蜡梅CpFT基因具有促进植物提前开花的功能。

实施例6转基因拟南芥表型观察

以野生型拟南芥(WT)为对照，对蜡梅CpFT转基因拟南芥T₂代纯合体株系进行表型观察(表2)，结果发现，蜡梅CpFT转基因拟南芥各单株的抽葶时间、第一朵花开放时间和第一个果荚出现时间均比野生型拟南芥WT早，且均达到显著水平，同时莲座叶数均显著少于野生型拟南芥，转基因拟南芥平均长至8.22片莲座叶时已转入生殖生长阶段，而野生型WT则平均生长至12.47片莲座叶时才进入生殖生长；其中，各转基因拟南芥单株的抽葶时间彼此差异显著，对于第一朵花开放时间和第一个果荚形成时间，CpFT5-7与CpFT 6-5之间差异不显著，但均显著晚于CpFT 4-5，而三者的莲座叶数彼此之间差异不显著；此外，在生长后期，与野生型拟南芥WT相比，各转基因植株的果梗变短，高度变矮，说明植株的营养生长受到抑制(图8)。

结果表明，蜡梅CpFT基因表达量越高，转基因拟南芥的莲座叶数越少，抽葶时间、第一朵花开放时间、第一个果荚形成时间越短。由于植株由营养生长向生殖生长转化的时间提前，导致营养生长时间缩短，莲座叶数减少，开花时间提前。表明推测蜡梅CpFT基因能够促进植株开花，同时对植株的营养生长具有抑制作用。

表2 CpFT转基因拟南芥T₂代株系表型统计

每组数据均为“平均值±标准差”；a、b、c、d表示P＜0.05水平上差异显著；各株系均为3次重复，每重复12棵植株

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 西南大学

<120> 蜡梅CpFT基因及其应用

<160> 24

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 586

<212> DNA

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 1

cgtagtcatc caagtatctc aatctatata acatttcatc ctcaatgccc agggaaagag 60

atcctttggt tgttggccgt gtgatagggg atgttttaga cctcttcacc agatccatac 120

caattagagt caccttcaac aacagggaag tcaccaatgg ttgtgagctc agaccttcac 180

aagtggtcaa ccaaccaagg gttgagatag gaggaaatga cctgaggaca ttttacactc 240

tggtcatggt agaccctgat gctccaagcc caagtgatcc atacttgagg gaatatttgc 300

attggttggt gacagatata ccggcgacaa ctggtgcaag tttcgggcaa gagatcgtgt 360

gctatgagaa tcccaggccg acggttggga ttcaccgatt tgtattggtg ttattccagc 420

agctcggaag acagaccgtc tatgctccgg ggtggcgcca gaatttcatc accagggact 480

ttgctgagct ctacaacctg ggaccgccag tcgccgccct ctatttcaac tgtcagaggg 540

agacgggttc cggtggccgc cgacgatagg tccaacagca gttcca 586

<210> 2

<211> 174

<212> PRT

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 2

Met Pro Arg Glu Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Arg Val Ile Gly Asp

1 5 10 15

Val Leu Asp Leu Phe Thr Arg Ser Ile Pro Ile Arg Val Thr Phe Asn

20 25 30

Asn Arg Glu Val Thr Asn Gly Cys Glu Leu Arg Pro Ser Gln Val Val

35 40 45

Asn Gln Pro Arg Val Glu Ile Gly Gly Asn Asp Leu Arg Thr Phe Tyr

50 55 60

Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro Tyr

65 70 75 80

Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr

85 90 95

Gly Ala Ser Phe Gly Gln Glu Ile Val Cys Tyr Glu Asn Pro Arg Pro

100 105 110

Thr Val Gly Ile His Arg Phe Val Leu Val Leu Phe Gln Gln Leu Gly

115 120 125

Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Ile Thr Arg

130 135 140

Asp Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Pro Pro Val Ala Ala Leu Tyr

145 150 155 160

Phe Asn Cys Gln Arg Glu Thr Gly Ser Gly Gly Arg Arg Arg

165 170

<210> 3

<211> 24

<212> DNA

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 3

cgtagtcatc caagtatctc aatc 24

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 4

tggaactgct gttggaccta t 21

<210> 5

<211> 25

<212> DNA

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 5

tagacctctt caccagatcc atacc 25

<210> 6

<211> 25

<212> DNA

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 6

gtcctcaggt catttcctcc tatct 25

<210> 7

<211> 25

<212> DNA

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 7

gttatggttg ggatgggaca gaaag 25

<210> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 8

gggcttcagt aaggaaacag ga 22

<210> 9

<211> 25

<212> DNA

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 9

tagtgacaag acagtaggtg gaggt 25

<210> 10

<211> 24

<212> DNA

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 10

gtaggttcca gtcctcactt catc 24

<210> 11

<211> 21

<212> DNA

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 11

atgcccaggg aaagagatcc t 21

<210> 12

<211> 21

<212> DNA

<213> 腊梅(Chimonanthus praecox)

<400> 12

tggaactgct gttggaccta t 21

<210> 13

<211> 18

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 13

cttcgtcttc cacttcag 18

<210> 14

<211> 19

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 14

atcataccag tctcaacac 19

<210> 15

<211> 24

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 15

ttccaagtcc tagcaaccct cacc 24

<210> 16

<211> 22

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 16

ttcttcctcc gcagccactc tc 22

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 17

tagggctcaa caggagcagt 20

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 18

cagccaaggt tgcagttgta 20

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 19

agctgcagaa aacgagaagc 20

<210> 20

<211> 22

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 20

tgaagaacaa ggtaacccaa tg 22

<210> 21

<211> 25

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 21

ccaactctat ttgaatcttt ctcac 25

<210> 22

<211> 25

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 22

acaagacaga aaacatgaga gaggt 25

<210> 23

<211> 25

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 23

ctctatttgg tatgttccaa caaag 25

<210> 24

<211> 21

<212> DNA

<213> 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400> 24

ctaataccgc caactaaagc c 21

Claims

1.蜡梅CpFT蛋白，其为：

1)由SEQ ID No.2所示的氨基酸组成的蛋白质

2.编码权利要求1所述的蜡梅CpFT蛋白的基因。

3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，序列如SEQ ID No.1所示。

4.含有权利要求2或3所述基因的载体。

5.含有权利要求4所述载体的宿主细胞。

6.含有权利要求2或3所述基因的工程菌。

7.权利要求2或3所述基因在植物花期调控中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，将所述基因转入植物基因组中，并在转基因植物中超量表达，使转基因植物营养生长受到抑制，促进植物提前开花。

9.一种转基因植株的构建方法，采用农杆菌介导的方法，将含有权利要求2或3所述基因的载体转入植物基因组中，筛选获得转基因植株。