CN109988133A

CN109988133A - 一种丹酚酸y的制备方法

Info

Publication number: CN109988133A
Application number: CN201810005980.2A
Authority: CN
Inventors: 罗学军; 阎红; 田介峰; 李淑明; 宋兆晖; 何毅; 李伟; 岳洪水; 周水平; 鞠爱春
Original assignee: Tianjin Tasly Zhijiao Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Tianjin Tasly Zhijiao Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2018-01-03
Filing date: 2018-01-03
Publication date: 2019-07-09

Abstract

本发明涉及一种丹酚酸Y的制备方法，所述方法包括以下步骤：步骤1、丹酚酸Y的富集：取丹参酚酸提取物，用水溶解，加入到MCI‑GEL色谱柱中，用10‑20％乙醇水溶液洗脱，下接液调节pH值，再次加入到MCI‑GEL色谱柱中，用70‑95％乙醇洗脱，回收溶剂，浓缩至干得到丹酚酸Y富集物；步骤2、精细分离：丹酚酸Y富集物用1‑3倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向加压制备液相分离，流动相为乙腈和含0.01％甲酸的水溶液，用HPLC法检测并合并含有丹酚酸Y的洗脱液，减压浓缩得到丹酚酸Y单体。

Description

一种丹酚酸Y的制备方法

技术领域

本发明涉及一种医药化工领域，具体涉及一种丹酚酸Y的制备方法。

背景技术

丹酚酸Y(salvianolic acid Y)，化学名称为(2R,3S)-4-[(1E)-3-[(1R)-1-羧基-2-(3,4-二羟基苯基)乙氧基]-3-氧-1-丙烯-1-基]-2-(3,4-二羟基苯基)-2,3-二氢-7-羟基-3-苯骈呋喃基甲酸-[(1R)-1-羧基-2-(3,4-二羟基苯基)]乙酯，是从丹参多酚酸提取物中分离得到的丹酚酸B的一个差向异构体，具有较强的清除自由基作用，其结构见式Ⅰ：

CN105218495A(申请号为201410226328.5)公开了丹酚酸Y及其制备方法，其制备方法为：丹参药材，加水煎煮提取3次，每次加3-6倍量水，煎煮0.5-2小时，合并煎液，冷却至8-14℃，用盐酸溶液调pH值至1.0-2.0，静置4-8小时，取上清液，滤过；滤液过聚酰胺柱，用7倍柱体积的纯化水冲洗，弃去流出液，再用7倍柱体积的0.1％碳酸氢钠溶液洗脱，收集洗脱液，用盐酸溶液调pH值至2.5-3.5；过AB-8型大孔吸附树脂柱，用2-3倍柱体积的纯化水冲洗，弃去水洗液，再用约2.5倍柱体积95％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，调节至30℃条件下相对密度1.02-1.06，2-10℃冷藏12-24小时，滤过，滤液用10％氢氧化钠溶液调pH值至5.0-6.5，冷冻干燥，得提取物，将提取物用适量水溶解，通过两次半制备RP-HPLC纯化，得到纯品。

丹参酚酸提取物，包括符合2015版中国药典标准的市售丹参总酚酸提取物(《中国药典》2015年版第1部中397-398页)和现有市场上销售的注射用丹参多酚酸的制剂原料丹参多酚酸提取物(其方法很多种，例如CN105588885A，申请号为201410572435.3背景技术中提到的制备方法)，其中符合2015版中国药典标准的市售丹参总酚酸提取物制备方法为：取丹参、切成小段，加水于80℃提取两次，合并提取液，滤过，滤液于60℃减压浓缩至相对密度为1.18-1.22(50℃)的浸膏，放冷，加乙醇使得含醇量为70％，静置12小时，取上清液，减压回收乙醇，并浓缩至稠膏，干燥，即得。

经过进一步分析发现丹参酚酸提取物指纹图谱的建立方法见实验例2，丹参酚酸提取物的指纹图谱见图1，丹参酚酸提取物包括原儿茶醛、丹酚酸D、丹酚酸B、迷迭香酸、丹酚酸Y、紫草酸和(7'S,8'R,8"R)-epi-紫草酸等。丹参总酚酸提取物和注射用丹参多酚酸的原料(即丹参多酚酸提取物)二者的图谱特征及共有峰均一致。

丹酚酸Y作为丹参酚酸提取物的一种成分，具有良好的药物活性和重要的丹参组分，获得高纯度的丹参酚Y可以制备标准物质，也可以进行新的药物研究，而现有技术中获得丹参酚Y的方法，成本高昂，纯度不高，资源浪费，为此，需要提高效率。本发明提供了一种新的从丹参酚酸提取物中提取分离得到丹酚酸Y的方法。

发明内容

本发明提供一种丹酚酸Y的制备方法，所述方法是从丹参酚酸提取物中将丹酚酸Y进行分离得到，为此，本发明提供一种丹酚酸Y的制备方法，所述方法包括以下步骤：

步骤1、丹酚酸Y的富集

取丹参酚酸提取物，用水溶解，加入MCI-GEL色谱柱中，用10-20％乙醇水溶液洗脱，下接液调节pH值，再次用MCI-GEL色谱柱固相萃取，用70-95％乙醇洗脱，回收溶剂，浓缩至干得到丹酚酸Y富集物；

步骤2、精细分离

丹酚酸Y富集物用1-3倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向加压制备液相分离，流动相为乙腈和含0.01％甲酸的水溶液，用HPLC法检测并合并含有丹酚酸Y的洗脱液，减压浓缩得到丹酚酸Y单体。

上述方法中：

所述步骤1中：

丹参酚酸提取物为按照药典方法制备的丹参总酚酸提取物，或按照现有技术制备的注射用丹参多酚酸的原料，或丹参的水提物。

所述丹参酚酸提取物水溶液的pH值为5.0-6.5，如果其pH值不在此范围内，需要调节为5.0-6.5；

两次过柱，第一次提取物质量与填料体积的比为1：60-1：20，第二次提取物质量与填料体积的比为1：3-1：10，另外两次可以使用同一根色谱柱，也可以用两个相同规格和填料的色谱柱。

调pH值到2.5-4，优选为2.8-3.2；

调节pH值的调节剂为甲酸或盐酸。

步骤2中流动相乙腈和含0.01％甲酸的水溶液的体积比为23-25：77-75。

本发明步骤1-3中，成分的收集，分别是用HPLC法检测，并与丹参酚酸提取物指纹图谱(见图1，建立方法见实验例2)对照，收集含有丹酚酸Y的洗脱液。

优选地，所述制备方法包括以下步骤：

步骤1、丹酚酸Y的富集：取丹参酚酸提取物，用水溶解，加入到MCI-GEL色谱柱中，用10-20％乙醇水溶液洗脱，下接液调节pH值，再次加入到MCI-GEL色谱柱中，用70-95％乙醇洗脱，回收溶剂，浓缩至干得到丹酚酸Y富集物；

步骤2、精细分离：丹酚酸Y富集物用1-3倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向加压制备液相分离，流动相为乙腈和含0.01％甲酸的水溶液，用HPLC法检测并合并含有丹酚酸Y的洗脱液，减压浓缩得到丹酚酸Y单体。

本发明进一步包括将步骤2所得丹酚酸Y单体进行干燥的步骤，优选60℃减压干燥10-15小时。

进一步优选，所述制备方法包括以下步骤：

步骤1、丹酚酸Y的富集：取丹参酚酸提取物，用1-3倍量的水溶解，加入MCI Gel色谱柱中，提取物质量与色谱柱填料体积的比为1：60-1：20，上样速度为1-3BV/h，然后用10-20％乙醇水溶液洗脱，流速为1-3BV/h，用HPLC法检测，并与丹参酚酸提取物指纹图谱对照，收集含有丹酚酸Y的洗脱液，调节pH值2.5-4，再次用MCI Gel色谱柱吸附富集，初始提取物质量与色谱柱填料体积的比为1：3-1：10，用3-5BV的水洗脱，脱酸，弃去，最后用70-95％乙醇洗脱，流速1-3BV/h，收集洗脱液，浓缩至干得到丹酚酸Y富集物；

步骤2、精细分离：丹酚酸Y富集物用1-3倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向加压制备液相分离，每次进样流动相：乙腈-0.01％甲酸水溶液23-25：77-75，流速5-7BV/h，用HPLC法检测并合并含有丹酚酸Y的洗脱液，减压浓缩得到丹酚酸Y单体；

更进一步优选，所述制备方法包括以下步骤：

步骤1、丹酚酸Y的富集：取丹参酚酸提取物，2倍质量体积的水溶解，加入MCIGel色谱柱中，每次上样提取物量-MCI-Gel填料体积的比1:60～1:20，流速2BV/h，上样结束后用10％～20％乙醇水溶液洗脱，流速2BV/h，调节洗脱液pH值至2.8-3.2，再次加入已再生的以上MCI Gel色谱柱中，用水洗涤5BV，脱酸，洗脱液弃去，流速：2BV/h，之后用80-95％乙醇洗脱，流速：2BV/h，收集洗脱液2BV，回收溶剂，浓缩至干得到丹酚酸Y富集物；

步骤2、精细分离：丹酚酸Y富集物用2倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向加压制备液相分离，每次进样流动相：乙腈-0.01％甲酸水溶液23-25：77-75，流速6BV/h，每1/4BV接一个样品，用HPLC法检测并合并含有丹酚酸Y的洗脱液，减压浓缩得到丹酚酸Y单体；

以下是对名词术语的解释：

脱酸，第一遍MCI上收集的馏分被再次加入MCI-GEL柱中后用水洗脱既可以将多余的酸洗脱下来，保留丹酚酸Y，之后用乙醇洗脱，再浓缩，就会避免浓缩过程酸浓度加大导致的降解。

BV/h为柱床体积/小时，比如2BV/h为2倍柱床体积/小时；

BV为柱床体积，比如1/10BV为1/10柱床体积；

再生：第一遍使用后的MCI色谱柱用5BV的95％乙醇洗脱，再用5BV的水洗脱，完成再生，用于第二遍固相萃取。

本发明提供的方法具有以下优点：

1、丹酚酸Y属于酚酸类化合物，其结构中酚羟基较多，采用树脂进行分离和提取时，如CN105218495A(申请号为201410226328.5，简称丹酚酸Y化合物专利)专利中的方法，酚羟基与聚酰胺中的酰胺基结合，用碳酸氢钠溶液洗脱，形成钠盐被洗脱下来，之后用盐酸溶液调节pH值，使酚酸盐转化为游离态酚酸，从而更好的被大孔吸附树脂吸收，也因此，调成酸性是采用树脂吸附必不可少、不可或缺的步骤。同时，该专利方法为了得到丹酚酸Y，还采用10％氢氧化钠溶液调pH值至5.0-6.5，这个过程中，酚酸类很容易与强碱反应，在中和盐酸的的同时，又有一部分丹酚酸Y被降解。再通过两次半制备RP-HPLC纯化，得到纯品。

发明人采用上述方法进行富集发现，通过树脂柱制备的丹酚酸Y富集物含量仅为1.0％左右，且采用半制备RP-HPLC纯化，工作量极大，制备100mg需要5-10天，而且很难实现放大制备。

为了将丹酚酸Y富集到一定纯度(30-50％)，发明人选择了使用正相填料用于富集丹酚酸Y，初步确定了方案比如对照例1，即：先用硅胶柱分离，再用ODS(C18填料)色谱柱分离，最后可以得到少量丹酚酸Y。通过正相硅胶色谱分离得到中间体，丹酚酸Y归一化百分含量可以达到50％以上，收率也略有增加，但是该方法分离周期长，使用的有机溶剂有乙酸乙酯、石油醚、乙腈等，另外酚酸类成分在硅胶柱上与硅羟基结合较为紧密，导致拖尾严重而不利于分离，因此同样需要使用有机酸防止拖尾，经TLC实验研究发现，在展开剂中加入甲酸的量达到10％时，丹酚酸Y的薄层斑点才能从竖条带斑点变为圆形斑点，经过摸索和妥协，对照例中最终采用2％的甲酸。大量有机溶剂和有机酸的使用对操作人员的安全及环境带来隐患。

发明人研究发现，当采用反向色谱柱进行制备时，不会使用过多的酸，也不用反复调节中间料液的pH值，降低了降解损失。

为了解决以上问题。发明人通过筛选，最后采用MCI-GEL分离(流动相采用低浓度的乙醇水溶液，无需加酸)得到含有丹酚酸Y的洗脱液，为了防止丹酚酸Y在低浓度的乙醇水溶液中浓缩时分解，发明人再次使用MCI-GEL固相萃取法富集得到少量丹酚酸Y的高浓度乙醇的洗脱液，再经过较短时间浓缩即可以得到丹酚酸Y的粗品。

现有工艺如CN102241574A(申请号为201010169711.3)公开了一种原儿茶醛的制备方法，其中使用了MCI-GEL分离，其原料为碱提取醇沉的丹参浸膏，然后层析法去除极性小的丹参成分、层析法分离原儿茶醛，除酸脱色、精制纯化、干燥。与丹酚酸Y化合物专利相似，均用了大孔吸附树脂进行吸附，也用了大量的酸。

相比现有技术和筛选的方法，这样操作，可以避免使用有机溶剂和有机酸的使用，最主要的是可以有效防止丹酚酸Y的分解，提高收率。丹酚酸Y的粗品再使用ODS纯化分离得到丹酚酸Y的纯品。

2、得到丹酚酸Y的富集物后，为了更好的与未知杂质分离(见图2)，发明人通过摸索，发现采用手动加压的方式利用50微米粒径的C18填料分离，很难达到分离，而且流速不理想，分离周期很慢。最后选择分离度与HPLC比较接近的轴向加压制备色谱仪，并借助HPLC法筛选流动相。结果显示，不同比例的甲醇：水(0.02％甲酸)分离度并不理想，而20％～25％的乙腈-0.01％甲酸水溶液分离效果较好，实践到动态轴向加压制备色谱上，23％乙腈-0.01％甲酸水溶液是最为理想的比例。

3、现有技术采用聚酰胺、大孔吸附树脂柱、2次ODS-HPLC制备液相色谱分离得到少量丹酚酸Y，该方法仅适合于mg级样品的制备，可以用于化合物鉴定需求等。如果需要进一步研究该化合物的药理活性等，需要g级样品，现有技术则无法实现。

4、本发明采用丹参酚酸为原料，经过2步反相填料分离，可以得到98.5％以上的丹酚酸Y单体，步骤少，纯度高，操作简单，可以用于心脑血管***新药的开发。

附图说明

图1：丹参酚酸提取物的指纹图谱；

图2：丹酚酸Y富集物(批号20140530)的HPLC检测图；

图3：丹酚酸Y单体(批号20140620)的HPLC检测图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的药物做进一步说明，下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。

实施例1：一种丹酚酸Y的制备方法

步骤1、丹酚酸Y的富集

取丹参酚酸提取物500g，用1000ml水(提取物与水的重量体积比为1：2)溶解，用pH计检测pH值为5.5，每次上样100ml，加入填装有3L MCI Gel玻璃色谱柱中(提取物质量与填料体积比为1：60)，流速：100ml/min。上样结束后用10％乙醇水溶液洗脱，流速：100ml/min，从下接液有颜色起每300ml接一个样品，用HPLC法检测，同时与丹参酚酸提取物指纹图谱对照，收集并合并含有丹酚酸Y的洗脱液。

调节洗脱液pH值至3.0，再次加入填装有3LMCI Gel玻璃色谱柱(提取物质量与填料体积比为1：6)中，用水洗涤15L，洗脱液弃去，流速：100ml/min。之后用95％乙醇洗脱，流速：100ml/min，收集洗脱液6L，回收溶剂，浓缩至干得到丹酚酸Y富集物。平行操作以上步骤完成所有样品的分离，共得到富集物24g，批号20140530。

步骤2、精细分离

丹酚酸Y富集物20g用40ml流动相完全溶解，采用动态轴向加压制备液相分离，每次进样10ml，流动相：乙腈-0.01％甲酸的溶液23:77，流速200ml/min，每500ml接一个样品。用HPLC法检测，同时与丹参酚酸提取物的指纹图谱对照，合并含有丹酚酸Y的洗脱液。减压浓缩得到丹酚酸Y单体，平行以上操作完成所有样品的分离，得到4.1g丹酚酸Y，归一化法百分含量为99.5％，批号20140620。

步骤3、干燥

60℃减压干燥12小时。

实施例2：丹酚酸Y的扩大制备方法

步骤1、丹酚酸Y的富集

取丹参酚酸提取物1000g，用2000ml水溶解，用pH计检测pH值为5.5，每次上样100ml，加入填装有3L MCI Gel玻璃色谱柱(提取物质量与填料体积比为1：60)中，流速：100ml/min。上样结束后用10％乙醇水溶液洗脱，流速：100ml/min，从下接液有颜色起每300ml接一个样品。用HPLC法检测，同时与丹参酚酸提取物的指纹图谱对照，合并第15-25瓶含有丹酚酸Y的洗脱液。

调节洗脱液pH值至3.0，再次加入填装有3L MCI Gel玻璃色谱柱(提取物质量与填料体积比为1：3)中，用水洗涤15L，洗脱液弃去，流速：100ml/min。之后用95％乙醇洗脱，流速：100ml/min，收集洗脱液6L，回收溶剂，浓缩至干得到丹酚酸Y富集物。平行操作以上步骤完成所有样品的分离，共得到富集物35g，批号20150604。

步骤2、精细分离

丹酚酸Y富集物用35g用70ml流动相完全溶解，采用动态轴向加压制备液相分离，每次进样10ml，流动相：乙腈-0.01％甲酸水溶液23:77，流速200ml/min，每500ml接一个样品。用HPLC法检测，同时与丹参酚酸提取物的指纹图谱对照，合并含有丹酚酸Y的洗脱液。减压浓缩得到丹酚酸Y单体，平行以上操作完成所有样品的分离，得到10.3g丹酚酸Y，归一化法百分含量为99.5％，批号20151113。

步骤3、干燥

60℃减压干燥12小时。

实验例1：丹酚酸Y的含量测定

1、采用高效液相色谱法，具体条件如下

仪器：安捷伦1100高效液相色谱仪，四元泵，紫外检测器。

色谱柱：Agilent C18分析柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：采用梯度洗脱，见表1；流速：1mL·min-1；检测波长280nm；柱温：30℃。

表1色谱条件梯度

溶剂时间(min)

0

8

15

35

40

50

A：80％乙腈+20％B

10％

22％

26％

39％

10％

B：0.02％磷酸水溶液

90％

78％

74％

61％

90％

2、待测样品溶液的配制：取丹酚酸Y10mg,精密称定，置25ml容量瓶中，用甲醇溶解，并定溶至刻度，待测。

3、含量测定：取样品溶液各10μL，进行测定，每个样品平行进两针。

4、含量测定结果，见表2、图2和图3。

表2丹酚酸Y样品含量测定结果

样品名称	百分含量(％)
		丹酚酸Y富集物20140530	21％
丹酚酸Y富集物20150620	22％
		高纯度丹酚酸Y20140604	99.5％
高纯度丹酚酸Y20151113	98.4％

对比例1：筛选实验

步骤一、丹酚酸Y的硅胶柱层析分离

取丹参酚酸提取物100g，溶于200ml水中，用等体积的乙酸乙酯萃取3次，收集乙酸乙酯萃取液减压回收溶剂，加入原料的180g 100-200目硅胶进行拌样。

硅胶柱填装：取原料1000g的200-300目硅胶，用乙酸乙酯-石油醚1：1(2％甲酸)浸泡30min，装柱，用乙酸乙酯-石油醚1：1平衡3BV。

分离：将样品干法上样，用乙酸乙酯-石油醚1：1(2％甲酸)洗脱，约0.2BV为单位收集馏分，TLC检测，用5％硫酸乙醇为显色剂进行显色。

馏分合并：将与丹酚酸Y对照品斑点Rf值一致的馏分合并，减压浓缩至干，得到含有丹酚酸Y的粗品1.83g。

步骤二、精细分离

丹酚酸Y粗品1.83g用10ml 23％乙腈水溶液完全溶解，采用动态轴向加压制备液相(填装有反相C18填料)分离，每次进样10ml，流动相：乙腈-0.01％甲酸水溶液23：77，流速200ml/min，每500ml接一个样品。用HPLC法检测，同时与丹参酚酸提取物的指纹图谱对照，合并含有富集物的洗脱液。减压浓缩得到丹酚酸Y 0.4g。

采用该方法可以得到丹酚酸Y，但是一批制备周期长，大概需要10天；其次制备过程中用到大量有机试剂和有机酸，对制备人员安全和环境造成比例影响；另外，由于后期浓缩时由于酸的浓度不断加大，导致洗脱液中的丹酚酸Y快速降解，从而收率很低。对比例2：

参考CN102212003A(申请号为201010143666.4)专利公开的方法，区别在于收集丹酚酸Y(通过实验例2的方法监测)。

取丹参多酚酸100g，水溶液加入MCI-GEL(3L MCI-GEL)柱中，用20％乙醇水溶液洗脱，从有色带下滴开始接样，每300ml接一个馏分，总共接2.5L，再用35％乙醇溶液洗脱，共收集6L。

经过对比检测，第一个色带共9瓶收集液中，丹酚酸Y主要集中在1-3瓶，与色素和大量杂质并存。

对第1-3瓶内的丹酚酸Y进行分离，发现由于无法达到富集效果，因此不会继续进行下一步分离。

实验例2：现有丹参酚酸提取物中各成分的检测

1、采用方法为超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)法，具体色谱条件如下：

仪器：Waters UPLC-PDA

色谱柱：Waters Acquity HSS T3 1.8um

流动相：A：0.1％甲酸水，B：乙腈

流速：0.4mL·min-1；检测波长280nm；柱温：30℃。

梯度洗脱见表3：

表3：梯度洗脱表

T(min)	A(％)	B(％)
			0	93	7
6.4	86	14
			16.0	84	16
22.0	83	17
			28.0	82	18
32.0	78	22
			35.0	20	80
35.5	93	7
			40	93	7

2、供试品溶液的制备方法：

称取丹参酚酸提取物50mg，置25ml容量瓶中，用甲醇溶解，并定溶至刻度，待测。

3、检测：取样品溶液2μL，进样测定。

结果见图1，丹参酚酸提取物中含有原儿茶醛、丹酚酸D、丹酚酸B、迷迭香酸、丹酚酸Y、紫草酸和(7'S,8'R,8"R)-epi-紫草酸，丹参总酚酸提取物和注射用丹参多酚酸的原料(即丹参多酚酸提取物)二者的图谱及共有峰均一致。

Claims

1.一种丹酚酸Y的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1、丹酚酸Y的富集

步骤2、精细分离

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1，其中，所述丹参酚酸提取物用水溶解，其溶液的pH值需要调节到5.0-6.5。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1，其中，两次加入到MCI-GEL色谱柱中，第一次提取物质量与填料体积的比为1：60-1：20，第二次提取物质量与填料体积的比为1：3-1：10。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1，其中，所述下接液调节pH值，调pH值到2.5-4，优选为2.8-3.2；调节pH值的调节剂为甲酸或盐酸。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1，步骤2中流动相乙腈和含0.01％甲酸的水溶液的体积比为23-25：77-75。

6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤2、精细分离：丹酚酸Y富集物用1-3倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向加压制备液相进行分离，得到含有丹酚酸Y的洗脱液，使用的流动相洗脱液为体积比为23-25：77-75的乙腈和含0.01％甲酸的水溶液的混合物，将含有丹酚酸Y的洗脱液浓缩干燥浓缩得到丹酚酸Y单体。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤2、精细分离：丹酚酸Y富集物用1-3倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向加压制备液相分离，每次进样流动相：乙腈-0.01％甲酸水溶液23-25：77-75，流速5-7BV/h，用HPLC法检测并合并含有丹酚酸Y的洗脱液，减压浓缩得到丹酚酸Y单体。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1、丹酚酸Y的富集：取丹参酚酸提取物，2倍质量体积的水溶解，加入MCI Gel色谱柱中，每次上样提取物量-MCI-Gel填料体积的比1:60～1:20，流速2BV/h，上样结束后用10％～20％乙醇水溶液洗脱，流速2BV/h，调节洗脱液pH值至2.8-3.2，再次加入已再生的以上MCI Gel色谱柱中，用水洗涤5BV，脱酸，洗脱液弃去，流速：2BV/h，之后用80-95％乙醇洗脱，流速：2BV/h，收集洗脱液2BV，回收溶剂，浓缩至干得到丹酚酸Y富集物；

步骤2、精细分离：丹酚酸Y富集物用2倍质量体积的流动相完全溶解，采用动态轴向加压制备液相分离，每次进样流动相：乙腈-0.01％甲酸水溶液23-25：77-75，流速6BV/h，每1/4BV接一个样品，用HPLC法检测并合并含有丹酚酸Y的洗脱液，减压浓缩得到丹酚酸Y单体。

9.根据权利要求1-8任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1，其中，丹参酚酸提取物为按照药典方法制备的丹参总酚酸提取物，或按照现有技术制备的注射用丹参多酚酸的原料，或丹参的水提物。

10.根据权利要求1-8任一项所述的制备方法，其特征在于，所述方法进一步包括将步骤2所得丹酚酸Y单体进行干燥的步骤，所述干燥为60℃减压干燥10-15小时。