CN109929896A - 一种熊去氧胆酸的生产工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种熊去氧胆酸的生产工艺，它以鹅去氧胆酸为底物，经过7α‑类固醇脱氢酶和/或含有7α‑类固醇脱氢酶的菌体进行催化反应，所得的产物经过陶瓷膜过滤，去除酶蛋白或菌体，得到7‑酮石胆酸；再以得到的7‑酮石胆酸为底物，经过7β‑类固醇脱氢酶和/或含有7β‑类固醇脱氢酶的菌体进行催化反应，所得的产物经过陶瓷膜过滤，去除酶蛋白或菌体，得到熊去氧胆酸粗品，再将粗品通过超滤膜去除小分子蛋白杂质，得到熊去氧胆酸超滤膜清液，再经过纳滤膜浓缩、树脂脱色、浓缩、干燥。与现有技术相比，本发明能提高熊去氧胆酸的品质和收率，降低生产成本。

Description

一种熊去氧胆酸的生产工艺

技术领域

本发明属于化学领域，具体涉及一种熊去氧胆酸的生产工艺。

背景技术

熊去氧胆酸，主要成分是3a，7β-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸，为有机化合物，无臭，味苦，乙醇中易溶，在氯仿中不溶；在冰醋酸中易溶，在氢氧化钠试液中溶解。医学上用于增加胆汁酸分泌，并使胆汁成分改变，降低胆汁中胆固醇及胆固醇脂，有利于胆结石中的胆固醇逐渐溶解。熊去氧胆酸是名贵中药熊胆的主要有效成分,《中国药典》版二部将其归为胆石溶解药,《国家基本药物目录(基层医疗卫生机构配备使用部分)》2009版归类为肝胆疾病用药，常用片剂。

熊去氧胆酸是动物胆汁酸类的一种，其它常见的胆酸类化合物还有胆酸石胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸和猪去氧胆酸等。其中，熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸互为差向异构体，两者唯一的区别就是7-位羟基结构构型不同。熊去氧胆酸7-位羟基为β构型，而鹅去氧胆酸7-位羟基为a构型。鹅去氧胆酸7-位羟基可经氧化为酮基，即7-酮石胆酸，其7-位酮基再通过还原反应转换为β羟基，即熊去氧胆酸。熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸和7-酮石胆酸三者分子结构式如图1所示。

目前，在临床上熊去氧胆酸主要应用于治疗各种肝胆、消化道疾病。随着分子生物学、以及熊去氧胆酸基础和临床研究的不断进步，人们发现熊去氧胆酸在促进免疫调节、治疗冠心病等方面也有积极作用。因此，随着研究的深入，熊去氧胆酸的利用价值越来越被认识和受到人们的重视，对熊去氧胆酸的需求量也在逐年升高。

但是，天然熊胆的来源日益减少，人们一直在努力寻求除以天然熊胆获取熊去氧胆酸之外的替代方法。早期，熊去氧胆酸是通过从牛、羊胆汁中分离提取的胆酸为起始原料，然后经过复杂的化学方法生产的，其中，制成鹅去氧胆酸后需经氧化还原生成熊去氧胆酸。但是，这一方法步骤多、生产时间长、成本高。上世纪80年代后，酶学、微生物发酵方法发展起来。用酶学、微生物发酵方法将鹅去氧胆酸异构化，或通过石胆酸β-羟基化生产熊去氧胆酸，但是，这种方法仍然具有步骤多、生产时间长、成本高的缺陷。

文献报道其转化路线主要有3种。①以鹅去氧胆酸为原料，经甲酯化、选择性保护羟基、Jones试剂氧化、金属钠和二氯化镍还原得熊去氧胆酸，总收率42％。②以鹅去氧胆酸为原料，在800℃、选用高专一性复合型Ni-α-Al2O3，催化剂、高压、加氢还原制得熊去氧胆酸，总收率65％。③以7-酮石胆酸为原料，用氢气-Raney镍高压还原或电化学还原得到熊去氧胆酸，收率大于90％。其中7-酮石胆酸的合成可以鹅去氧胆酸为原料，丙酮和水为介质，经N-溴代丁二酰亚胺(NBS)氧化制得，收率达89％。路线①反应步骤较多，路线长，收率较低；路线②和③反应条件苛刻，需要高压，对设备要求高，且路线③中产物纯度仅为92.5％。

目前采用的化学方法生产熊去氧胆酸，主要有以下缺陷：

(1)、投资成本高，生产成本高；

(2)、化学合成需要高温、高压等条件，且用到大量有机溶剂，生产过程不安全；

(3)、反应步骤多，路线长，产品的收率不高；

(4)、污染严重，环保问题严峻。

目前也有相关科研机构提出用全细胞催化合成熊去氧胆酸，但是在催化合成中，目的产物和催化剂全细胞的分离是一个难以逾越的障碍，因为催化产物的粘度很高，不适宜用传统的板框压滤，且会带来较多污水，自动化程度也低；且没有使用超滤膜去除蛋白，会给后期提纯带来大量杂质，产品质量纯度不高，且需要消耗大量的有机溶剂。

有鉴于此，依然有待于提出一种生产成本低，工艺安全、可靠，投资小，产品品质和收率高的新工艺。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种以膜分离技术提取熊去氧胆酸的工艺，从而提供一种纯度高、产率高的熊去氧胆酸的生产工艺。

为了达到上述的发明目的，本发明采取的技术方案如下：

一种熊去氧胆酸的生产工艺，它包括如下步骤：

(1)将鹅去氧胆酸经过7α-类固醇脱氢酶或含有7α-类固醇脱氢酶的菌体进行催化，得到催化产物A；

(2)将步骤(1)得到的催化产物A经微滤膜过滤，得到含7-酮石胆酸的透过液；

(3)向步骤(2)得到的含7-酮石胆酸的透过液中，加入7β-类固醇脱氢酶或含有7β-类固醇脱氢酶的菌体，进行催化反应，得到催化产物B；

(4)将步骤(3)得到的催化产物B经微滤膜过滤，得到含熊去氧胆酸的透过液；

(5)将步骤(4)得到的含熊去氧胆酸的透过液经过超滤膜过滤，得到含熊去氧胆酸的超滤膜透过液；

(6)将步骤(5)得到的含熊去氧胆酸的超滤膜透过液经纳滤膜过滤，得到含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液；

(7)将步骤(6)得到的含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液经离子交换树脂脱色，得到含熊去氧胆酸的树脂洗脱液；

(8)将步骤(7)得到的含熊去氧胆酸的树脂洗脱液经蒸发、结晶，即得熊去氧胆酸。

具体地，步骤(1)中，所述的7α-类固醇脱氢酶或含有7α-类固醇脱氢酶的菌体的用量，与鹅去氧胆酸的体积比为体积比为0.001％～2％，催化所用的温度为10-60℃，时间为0.5～5h。7α-类固醇脱氢酶的作用是催化鹅去氧胆酸转化为7-酮石胆酸。

步骤(2)中，所述的微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为500nm，过滤温度为80℃，过滤压力为0.1MPa。微滤膜过滤的作用是去除7α-类固醇脱氢酶酶蛋白或含有7α-类固醇脱氢酶的菌体。在微滤过程中，当微滤膜过滤精度为5nm时，其通量仅为500nm过滤精度微滤膜的40％，且需要0.8MPa压力作为膜设备运行的驱动力；微滤膜过滤精度为500nm时，起始通量比50nm大25％，比200nm过滤精度的微滤膜通量大20％，但是通量衰减比较快，且会有3％左右的大分子蛋白和色素透过微滤膜，降低滤液质量。过滤温度为10～80℃，温度优选为50～70℃，过滤压力为0.1～0.8MPa，优选为0.25～0.4MPa。进一步的，在温度为60℃，压力为0.35MPa，微滤膜过滤精度为50～200nm时，过滤通量较大，通量下降缓慢，且可浓缩近5倍，酶蛋白或菌体去除率99.9％以上，滤液质量很好。

步骤(3)中，所述的7β-类固醇脱氢酶或含有7β-类固醇脱氢酶的菌体的用量，与含7-酮石胆酸的透过液的体积比为0.001％～2％，催化所用的温度为10-60℃，时间为0.5～5h。7β-类固醇脱氢酶的作用是催化7-酮石胆酸转化为熊去氧胆酸。

步骤(4)中，所述的微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为5～500nm，过滤温度为10～80℃，过滤压力为0.1～0.8MPa。微滤膜过滤的作用是去除7β-类固醇脱氢酶酶蛋白或含有7β-类固醇脱氢酶的菌体。

步骤(5)中，所述的超滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为1000～40000Da，温度为10～60℃，压力为0.5～2.5MPa。超滤膜的作用是去除催化产物中的大分子蛋白、色素等杂质，提高熊去氧胆酸的纯度。在超滤过程中，当超滤截留分子量为1000Da时，其通量仅为20000Da时的68％，且需要1.8MPa压力作为膜设备运行的驱动力，且会截留熊去氧胆酸产品30％；当超滤截留分子量为40000Da时，会有2.5％左右的小分子蛋白和色素透过微滤膜，降低滤液质量。过滤温度为10～60℃，温度优选为30～50℃，过滤压力为0.5～2.5MPa，优选为0.6～1.0MPa。进一步的，在温度为35℃，压力为0.7MPa，超滤膜截留分子量为8000～10000Da时，过滤通量稳定，可浓缩近20倍，小分子蛋白去除率99.9％以上，滤液液质量很好，产品回收率可达96.7％。

步骤(6)中，所述的纳滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为100～800Da，温度为10～60℃，压力为0.5～2.5MPa。纳滤膜过滤的作用是提高进离子交换树脂的熊去氧胆酸的浓度，减少树脂进料量，提高树脂的工作效率。在纳滤过程中，当纳滤膜截留分子量为100Da时，其通量仅为800Da分子量纳滤膜的40％，且需要2.5MPa压力作为膜设备运行的驱动力；纳滤膜分子量为800Da时，通量比300Da大25％，比150Da分子量的纳滤膜通量大40％，但是会有5％左右的产品透过纳滤膜，产品收率下降。温度为10～50℃，温度优选为30～50℃，压力为0.5～2.5MPa，优选为1.0～2.0MPa。进一步的，在温度为30℃，压力为1.5MPa，纳滤膜截留分子量为150～300Da时，过滤通量稳定，可浓缩近10倍，产品的截留率99.5％以上。

步骤(7)中，所述的离子交换树脂为丙烯酸型强碱性阴离子交换树脂，流速为2～6BV/h，优选流速为3～5BV/h，温度为20-80℃，优选温度为40～50℃。在流速为4BV/h，温度为50℃时，料液的粘度较小，脱色的效果最佳，既能保证脱色效果，又能保证较高的生产效率，同时能耗相对较低，且熊去氧胆酸的收率超过99.6％。

有益效果：

1、本发明在熊去氧胆酸的生产工艺采用陶瓷膜过滤，可有效去除大分子蛋白或菌体细胞，提高产品质量。陶瓷膜可以耐受高温、高压、化学腐蚀，且使用寿命较长；另一方面也避免了固体废弃物对环境的污染。

2、本发明在熊去氧胆酸的生产工艺采用超滤膜过滤，可以有效去除大分子蛋白，大幅提高产品的纯度，减小后面离子交换树脂的进料负荷，同时降低了有机溶剂的用量。

3、本发明在熊去氧胆酸的生产工艺采用纳滤膜预浓缩，且大幅减少树脂的用量，同时减少80％以上的蒸发水量，降低了生产能耗，同时也降低了生产成本。纳滤膜精度高，可以提高熊去氧胆酸的收率。

4、本发明工艺采用膜分离设备和离子交换设备，减小了设备的占地面积，降低了基建成本，对新设备和传统工艺的参数做了大量的优化工作，得到最优的生产工艺参数，保证了生产的高效节能的运行，同时产品的品质较高。该生产工艺比较节能，相比较传统生产工艺，自动化程度高，可节省50％的人工费用，经济效益显著。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。

图1为熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸和7-酮石胆酸分子结构式。

图2为本发明熊去氧胆酸的生产工艺流程图。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。

以下实施例中，7α-类固醇脱氢酶的酶活测定以鹅去氧胆酸为底物，在一个3mL的反应混合物中包含:2.89mL的0.2mMNAD+(50mM磷酸钾缓冲液，pH8.0中配制)，10μL的150mM鹅去氧胆酸，100μL稀释的酶液，在340nm处测定吸光值增加。酶活性单位(单位/mL)计算公式为：[△A340/分钟×3(mL)×粗酶稀释倍数]/[6.22×0.1(mL)]。测定的酶活为205u/mg。

7β-类固醇脱氢酶的酶活测定以熊去氧胆酸为底物，在一个3mL的反应混合物中包含:2.89mL的0.2mMNADP+(50mM磷酸钾缓冲液，pH8.0中配制)，10μL的150mM熊去氧胆酸，100μL稀释的酶液，在340nm处测定吸光值增加。酶活性单位(单位/mL)计算公式为：[△A340/分钟×3(mL)×粗酶稀释倍数]/[6.22×0.1(mL)]。测定的酶活为205u/mg。

实施例1

按照如图1所示的流程图制备熊去氧胆酸：

(1)将鹅去氧胆酸经过7α-类固醇脱氢酶进行催化，添加量为鹅去氧胆酸体积的0.001％，催化温度为20℃，得到催化产物A；

(2)将步骤(1)得到的催化产物A经微滤膜过滤(微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为5nm，过滤温度为20℃，过滤压力为0.8MPa)，得到含7-酮石胆酸的透过液；

(3)向步骤(2)得到的含7-酮石胆酸的透过液中，加入7β-类固醇脱氢酶，添加量为含7-酮石胆酸的透过液体积的0.001％，催化温度为20℃，进行催化反应，得到催化产物B；

(4)将步骤(3)得到的催化产物B经微滤膜过滤(微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为5nm，过滤温度为20℃，过滤压力为0.8MPa)，得到含熊去氧胆酸的透过液；

(5)将步骤(4)得到的含熊去氧胆酸的透过液经过超滤膜过滤(超滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为40000Da，温度为10～60℃，压力为0.5MPa)，得到含熊去氧胆酸的超滤膜透过液；

(6)将步骤(5)得到的含熊去氧胆酸的超滤膜透过液经纳滤膜过滤(纳滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为800Da，温度为10℃，压力为2.5MPa)，得到含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液；

(7)将步骤(6)得到的含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液经罗门哈斯AMBERLITEFPA98Cl离子交换树脂脱色(丙烯酸型强碱性阴离子交换树脂，流速为2BV/h，温度为20℃)，得到含熊去氧胆酸的树脂洗脱液；

(8)将步骤(7)得到的含熊去氧胆酸的树脂洗脱液经蒸发、结晶，即得熊去氧胆酸。

本实施例得到的熊去氧胆酸的收率为98.6％，熊去氧胆酸的纯度为96.6％，产品中蛋白的含量为3.1％，色素含量为0.3％，陶瓷膜因过滤精度高，且温度低，通量较小，过滤时间较长。因蛋白含量较高，造成纳滤膜的通量也较小。

实施例2

按照如图1所示的流程图制备熊去氧胆酸：

(1)将鹅去氧胆酸经过含有7α-类固醇脱氢酶的菌体进行催化，添加量为鹅去氧胆酸体积的2％，催化温度为60℃，得到催化产物A；

(2)将步骤(1)得到的催化产物A经微滤膜过滤(过滤精度为500nm，过滤温度为80℃，过滤压力为0.1MPa)，得到含7-酮石胆酸的透过液；

(3)向步骤(2)得到的含7-酮石胆酸的透过液中，加入含有7β-类固醇脱氢酶的菌体，添加量为含7-酮石胆酸的透过液体积的2％，催化温度为60℃，进行催化反应，得到催化产物B；

(4)将步骤(3)得到的催化产物B经微滤膜过滤(微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为50nm，过滤温度为80℃，过滤压力为0.1MPa)，得到含熊去氧胆酸的透过液；

(5)将步骤(4)得到的含熊去氧胆酸的透过液经过超滤膜过滤(超滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为1000Da，温度为60℃，压力为2.5MPa)，得到含熊去氧胆酸的超滤膜透过液；

(6)将步骤(5)得到的含熊去氧胆酸的超滤膜透过液经纳滤膜过滤(纳滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为100Da，温度为10℃，压力为2.5MPa)，得到含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液；

(7)将步骤(6)得到的含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液经罗门哈斯AMBERLITEFPA98Cl离子交换树脂脱色(丙烯酸型强碱性阴离子交换树脂，流速为6BV/h，温度为60℃)，得到含熊去氧胆酸的树脂洗脱液；

(8)将步骤(7)得到的含熊去氧胆酸的树脂洗脱液经蒸发、结晶，即得熊去氧胆酸。

本实施例得到的熊去氧胆酸的收率为90.1％，熊去氧胆酸的纯度为99.6％，产品中蛋白的含量为0.2％，色素含量为0.2％；陶瓷膜的通量较大，但是因超滤膜截留分子量较小，截留一部分熊去氧胆酸，造成收率较低。

实施例3

按照如图1所示的流程图制备熊去氧胆酸：

(1)将鹅去氧胆酸经过7α-类固醇脱氢酶进行催化，添加量为鹅去氧胆酸体积的0.05％，催化温度为20℃，得到催化产物A；

(2)将步骤(1)得到的催化产物A经微滤膜过滤(微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为200nm，过滤温度为20℃，过滤压力为0.2MPa)，得到含7-酮石胆酸的透过液；

(3)向步骤(2)得到的含7-酮石胆酸的透过液中，加入7β-类固醇脱氢酶，添加量为含7-酮石胆酸的透过液体积的0.05％，催化温度为20℃，进行催化反应，得到催化产物B；

(4)将步骤(3)得到的催化产物B经微滤膜过滤(微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为200nm，过滤温度为20℃，过滤压力为0.2MPa)，得到含熊去氧胆酸的透过液；

(5)将步骤(4)得到的含熊去氧胆酸的透过液经过超滤膜过滤(超滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为20000Da，温度为40℃，压力为0.8MPa)，得到含熊去氧胆酸的超滤膜透过液；

(6)将步骤(5)得到的含熊去氧胆酸的超滤膜透过液经纳滤膜过滤(纳滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为300Da，温度为40℃，压力为2.0MPa)，得到含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液；

(7)将步骤(6)得到的含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液经罗门哈斯AMBERLITEFPA98Cl离子交换树脂脱色(丙烯酸型强碱性阴离子交换树脂，流速为4BV/h，温度为40℃)，得到含熊去氧胆酸的树脂洗脱液；

(8)将步骤(7)得到的含熊去氧胆酸的树脂洗脱液经蒸发、结晶，即得熊去氧胆酸。

本实施例得到的熊去氧胆酸的收率为99.3％，熊去氧胆酸的纯度为98.3％，产品中蛋白的含量1.5％，色素含量为0.2％；陶瓷膜的过滤温度和压力较低，造成过滤通量偏低，超滤膜截留分子量较大，有部分小分子蛋白透过，造成后端纳滤膜通量较低，最终产品的蛋白含量较高。

实施例4

按照如图1所示的流程图制备熊去氧胆酸：

(1)将鹅去氧胆酸经含有7α-类固醇脱氢酶的菌体进行催化，添加量为鹅去氧胆酸体积的0.5％，催化温度为50℃，得到催化产物A；

(2)将步骤(1)得到的催化产物A经微滤膜过滤(微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为50nm，过滤温度为50℃，过滤压力为0.6MPa)，得到含7-酮石胆酸的透过液；

(3)向步骤(2)得到的含7-酮石胆酸的透过液中，加入含有7β-类固醇脱氢酶的菌体，添加量为含7-酮石胆酸的透过液体积的0.5％，催化温度为50℃，进行催化反应，得到催化产物B；

(4)将步骤(3)得到的催化产物B经微滤膜过滤(微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为50nm，过滤温度为50℃，过滤压力为0.6MPa)，得到含熊去氧胆酸的透过液；

(5)将步骤(4)得到的含熊去氧胆酸的透过液经过超滤膜过滤(超滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为10000Da，温度为30℃，压力为1.0MPa)，得到含熊去氧胆酸的超滤膜透过液；

(6)将步骤(5)得到的含熊去氧胆酸的超滤膜透过液经纳滤膜过滤(纳滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为300Da，温度为30℃，压力为2.5MPa)，得到含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液；

(7)将步骤(6)得到的含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液经罗门哈斯AMBERLITEFPA98Cl离子交换树脂脱色(丙烯酸型强碱性阴离子交换树脂，流速为2BV/h，温度为50℃)，得到含熊去氧胆酸的树脂洗脱液；

(8)将步骤(7)得到的含熊去氧胆酸的树脂洗脱液经蒸发、结晶，即得熊去氧胆酸。

本实施例得到的熊去氧胆酸的收率为99.3％，熊去氧胆酸的纯度为99.7％，产品中蛋白的含量为0.15％，色素含量为0.05％；该产品的陶瓷膜的通量较大，产品的蛋白和色素含量很低，品质较高，但陶瓷膜的过滤压力较高，纳滤膜的截留分子量较低，造成过滤压力也高，树脂的流速低，单位产能的树脂消耗量大，生产能耗较高。

实施例5

按照如图1所示的流程图制备熊去氧胆酸：

(1)将鹅去氧胆酸经过含有7α-类固醇脱氢酶的菌体进行催化，添加量为鹅去氧胆酸体积的1％，催化温度为40℃，得到催化产物A；

(2)将步骤(1)得到的催化产物A经微滤膜过滤(微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为50nm，过滤温度为60℃，过滤压力为0.35MPa)，得到含7-酮石胆酸的透过液；

(3)向步骤(2)得到的含7-酮石胆酸的透过液中，加入含有7β-类固醇脱氢酶的菌体，添加量为含7-酮石胆酸的透过液体积的1％，催化温度为40℃，进行催化反应，得到催化产物B；

(4)将步骤(3)得到的催化产物B经微滤膜过滤(微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为50nm，过滤温度为60℃，过滤压力为0.35MPa)，得到含熊去氧胆酸的透过液；

(5)将步骤(4)得到的含熊去氧胆酸的透过液经过超滤膜过滤(超滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为10000Da，温度为35℃，压力为0.7MPa)，得到含熊去氧胆酸的超滤膜透过液；

(6)将步骤(5)得到的含熊去氧胆酸的超滤膜透过液经纳滤膜过滤(纳滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为150Da，温度为30℃，压力为1.5MPa)，得到含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液；

(7)将步骤(6)得到的含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液经离子交换树脂脱色(丙烯酸型强碱性阴离子交换树脂，流速为4BV/h，温度为50℃)，得到含熊去氧胆酸的树脂洗脱液；

(8)将步骤(7)得到的含熊去氧胆酸的树脂洗脱液经蒸发、结晶，即得熊去氧胆酸。

本实施例得到的熊去氧胆酸的收率为99.7％，熊去氧胆酸的纯度为99.8％，产品中蛋白的含量为0.08％，色素含量为0.07％；该产品的陶瓷膜的通量较大，产品的蛋白和色素含量很低，品质较高。

对比例1

将7-酮去氧胆酸、醇类溶剂和纳米Pd/C催化剂，搅拌均匀，将反应釜内充满氢气，在压强20MPa、温度90℃条件下反应8h，即得反应液再经过蒸发，浓缩得到熊去氧胆酸产品，其收率为78.3％，熊去氧胆酸的纯度为95.2％，产品中蛋白的含量为4.2％，色素含量为0.6％；。该生产工艺需要在20MPa下进行加氢催化反应，生产条件比较苛刻，不安全，且污染环境严重。

本发明提供了一种熊去氧胆酸的生产工艺的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

Claims (8)

1.一种熊去氧胆酸的生产工艺，其特征在于，它包括如下步骤：

(1)将鹅去氧胆酸经过7α-类固醇脱氢酶和/或含有7α-类固醇脱氢酶的菌体进行催化，得到催化产物A；

(2)将步骤(1)得到的催化产物A经微滤膜过滤，得到含7-酮石胆酸的透过液；

(3)向步骤(2)得到的含7-酮石胆酸的透过液中，加入7β-类固醇脱氢酶和/或含有7β-类固醇脱氢酶的菌体，进行催化反应，得到催化产物B；

(4)将步骤(3)得到的催化产物B经微滤膜过滤，得到含熊去氧胆酸的透过液；

(5)将步骤(4)得到的含熊去氧胆酸的透过液经过超滤膜过滤，得到含熊去氧胆酸的超滤膜透过液；

(6)将步骤(5)得到的含熊去氧胆酸的超滤膜透过液经纳滤膜过滤，得到含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液；

(7)将步骤(6)得到的含熊去氧胆酸的纳滤膜浓缩液经离子交换树脂脱色，得到含熊去氧胆酸的树脂洗脱液；

(8)将步骤(7)得到的含熊去氧胆酸的树脂洗脱液经蒸发、结晶，即得熊去氧胆酸。

2.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的生产工艺，其特征在于，步骤(1)中，所述的7α-类固醇脱氢酶用量与鹅去氧胆酸的体积比为0.001％～2％，催化所用的温度为10-60℃，时间为0.5～5h。

3.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的生产工艺，其特征在于，步骤(2)中，所述的微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为5～500nm，过滤温度为10～80℃，过滤压力为0.1～0.8MPa。

4.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的生产工艺，其特征在于，步骤(3)中，所述的7β-类固醇脱氢酶用量与含7-酮石胆酸的透过液的体积比为0.001％～2％，催化所用的温度为10-60℃，时间为0.5～5h。

5.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的生产工艺，其特征在于，步骤(4)中，所述的微滤膜为陶瓷膜，过滤精度为5～500nm，过滤温度为10～80℃，过滤压力为0.1～0.8MPa。

6.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的生产工艺，其特征在于，步骤(5)中，所述的超滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为1000～40000Da，温度为10～60℃，压力为0.5～2.5MPa。

7.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的生产工艺，其特征在于，步骤(6)中，所述的纳滤膜为卷式超滤膜，截留分子量为100～800Da，温度为10～60℃，压力为0.5～2.5MPa。

8.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的生产工艺，其特征在于，步骤(7)中，所述的离子交换树脂为丙烯酸型强碱性阴离子交换树脂，流速为2～6BV/h，温度为20-80℃。