CN109911425A - 一种肺结核病检测试剂盒及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种肺结核病检测试剂盒及其应用，试剂盒包括盒体和盖体，盒体上方设置盖体，盒体内由隔板二分为材料区和试剂区，材料区内设有台阶状隔板，台阶状隔板上从上到下依次设置样品膜区、胶体金垫区、酸类纤维素膜区和工具区，台阶状隔板下方的盒体上设有工作台，工作台倾斜设置；使用该检测试剂盒，配合台阶状隔板能够快速完成胶体金法检测的准备工作，具备可重复操作性，利用双抗体夹心法检测血清样品中是否有结核病抗原，配合工作台的倾斜设置，具有高特异、高灵敏度、高准确性的检测性能，能快速筛选出具有结核病抗原血清的阳性样本，能快速、便捷地辅助诊断肺结核病，检测时间3‑5min，在病症检测领域具有广泛的实用性。

Description

一种肺结核病检测试剂盒及其应用

技术领域

本发明主要涉及免疫诊断的技术领域，具体地说，本发明涉及一种肺结核的免疫诊断试剂盒的技术领域。

背景技术

世界卫生组织2018年9月18日发布《2018年全球结核病报告》显示，2017年全球的结核病潜伏感染人群约为17亿，潜伏感染率为 23％。全球新发结核病患者约1000万，结核病发病率为133/10万，其中小于15岁的儿童患者和艾滋病病毒感染者分别占新发患者的10％和9％；30个结核病高负担国家的新发患者数占全球的87.2％；印度(27.4％)、中国(8.9％)、印度尼西亚(8.4％)和菲律宾(5.8％) 四国的新发患者约占全球的50％。中国的估算结核病新发患者数为 88.9万，估算结核病发病率为63/10万，在30个结核病高负担国家中估算结核病发病率排第28位。肺结核病的检测很有必要。

肺结核(pulmonarytuberculosisPTB)是一种古老的传染性疾病，由结核分枝杆菌引发的肺部感染性疾病，是严重威胁人类健康的疾病。结核分枝杆菌(简称结核菌，下同)的传染源主要是排菌的肺结核患者，通过呼吸道传播。健康人感染结核菌并不一定发病，只有在机体免疫力下降时才发病。及时检测肺结核病可以有效预防。

胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能利用到。

传统的肺结核病检测需要影像学检测配合其他检测，检测流程较长且不准确。例如，痰结核菌涂片检查：灵敏度差，阳性率低，阳性可确诊肺结核病，阴性不能排除或确定肺结核病，需多次重复检查，而且，不能把结核杆菌和其他非结核分支杆菌区分开；痰结核分枝杆菌培养：需要的周期长，通常要2-4周时间，而且非传染病医院还不能开展，阳性可确诊肺结核病，阴性不能排除或确定肺结核病，需多次重复检查并结合临床症状、体征、PPD结果综合判断；结核菌素实验(PPD)：特异性、敏感性不高，强阳性者有提示价值，但不能单独使用；结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)：肺结核包括菌阴肺结核及肺外结核患者中检测的敏感性和特异性均较高，疑似结核的菌阴肺结核及肺外结核患者进行检测对早期诊断有较大帮助意义，但是在儿童及其他免疫缺陷患者及在判断肺结核临床预后方面目前均有较大的争议；纤维支气管镜及其他内窥镜检查，和纤支镜下肺泡灌洗液PCR查结核DNA：有创检查，较少使用；CT引导下的穿刺活检：对于肺外周的不典型结核，可以CT引导下穿刺活检，进行病理学检查，敏感度和特异度均较高，较常使用，但须穿刺手术。

发明内容

针对目前传统的肺结核病检测需要影像学检测配合其他检测，检测流程较长且不准确，现有的胶体金法检测试剂盒多为一次性，未有可以重复利用的胶体金试纸检测肺结核病试剂盒的技术问题，本发明旨在于提供一种肺结核病检测试剂盒及其应用，使用该检测试剂盒，配合台阶状隔板能够快速完成胶体金法检测的准备工作，具备可重复操作性，利用双抗体夹心法检测血清样品中是否有结核病抗原，配合工作台的倾斜设置，具有高特异、高灵敏度、高准确性的检测性能，能快速筛选出具有结核病抗原血清的阳性样本，能快速、便捷地辅助诊断肺结核病，检测时间3-5min，在病症检测领域具有广泛的实用性和开发价值。

本发明通过以下技术方案实现的:

本发明同时提供一种肺结核病检测试剂盒，包括盒体和盖体，盒体上方设置盖体，盒体内由隔板二分为材料区和试剂区，材料区内设有台阶状隔板，台阶状隔板上从上到下依次设置样品膜区、胶体金垫区、酸类纤维素膜区和工具区，台阶状隔板下方的盒体上设有工作台，工作台倾斜设置，试剂区内设有隔板三，隔板三上设有封闭液瓶、抗金标抗体瓶、洗涤液瓶和抗体瓶，隔板三内活动设置温度控制盒。

本发明中，工作台上设置凹槽，凹槽内设置多组固定柱，工具区内设有工作板，工作板两端设置固定端，固定端上设置与固定柱相适应的固定孔。

本发明中，固定柱在凹槽内阵列设置，固定柱一侧设置标识，工作台与盒体呈抽屉式设置，工作台一侧设置拉手一。

本发明中，工具区内放置卫生镊子、胶条和吸水膜，酸类纤维素膜区放置酸类纤维素膜，胶体金垫区放置胶体金垫，样品膜区放置样品膜，胶条一侧设置背衬板。

本发明中，温度控制盒一端设置在盒体背面，温度控制盒外设置拉手二，温度控制盒内设置温度控制器。

本发明中，盖体内设置与隔板二相适应的隔板一，隔板一的高度与盖体内侧的深度相同，材料区上方的盖体内设置杀菌灯，盖体外侧设置电源组件，杀菌灯与电源组件电性连接。

本发明中，盒体一侧设置开口，盒体上开口一侧设置磁条，盖体上设置与开口相适应的下盖体，盖体一侧设置把手。

本发明提供一种肺结核病检测试剂盒的应用方法，具体包括以下步骤：

(1)采集检测者的静脉血液5ml，1500r/min-3000r/min离心处理5min-15min后取上层血清作为血清样品；

(2)从检测试剂盒一侧通过拉手一拉出工作台，通过把手打开盖体，从工具区取出卫生镊子、工作板和胶条，使用卫生镊子夹持工作板，使固定孔对准固定柱，放入工作板，使用卫生镊子将胶条置于工作板上表面，压平；

(3)取样按照台阶状隔板向上的顺序，首先，使用卫生镊子从工具区中取出吸水膜放置于背衬板下端，其次，从酸类纤维素膜区取出酸类纤维素膜，酸类纤维素膜底端放置在吸水膜上端下方，然后，从胶体金垫区取出胶体金垫，胶体金垫底端放置在酸类纤维素膜上端上方，最后，从样品膜区取出样品膜，样品膜底端放置在胶体金垫上端上方；

(4)将抗金标抗体瓶中的抗金标结核菌抗体和抗体瓶中的结核菌抗体分别固定于酸类纤维素膜的C线和T线，取封闭液瓶和洗涤液瓶，在酸类纤维素膜上的C线一侧、C线和T线之间、T线一侧和分别滴入1ml封闭液和洗涤液，在干燥的样品膜一端滴入60-80μl的血清样品后，由于毛细作用和工作台的倾斜设置，血清样品将沿着样品膜向吸水膜移动，经过胶体金垫形成金标血清样品，当金标血清样品移动至固定有结核菌抗体的酸类纤维素膜时，观察C线和T线上是否出现肉眼可见红色的斑点；

(5)检测结束后，使用卫生镊子从固定柱上取下工作板，使用消毒液对工作台进行消毒，消毒后工作台放回盒体内。

优选的，酸类纤维素膜采用醋酸纤维素膜，洗涤液瓶选择PBS 试剂瓶，封闭液瓶选择5％BSA封闭液瓶。

通过实施本发明的技术方案，可以达到以下有益效果:

本发明旨在于提供一种肺结核病检测试剂盒及其应用，使用该检测试剂盒，配合台阶状隔板能够快速完成胶体金法检测的准备工作，具备可重复操作性，利用双抗体夹心法检测血清样品中是否有结核病抗原，配合工作台的倾斜设置，具有高特异、高灵敏度、高准确性的检测性能，能快速筛选出具有结核病抗原血清的阳性样本，能快速、便捷地辅助诊断肺结核病，检测时间3-5min，在病症检测领域具有广泛的实用性和开发价值。

附图说明

图1显示为本发明提供的肺结核病检测试剂盒结构示意图。

图2显示为本发明提供的工作台结构示意图。

图3显示为本发明提供的肺结核病检测试剂盒后视图。

图4显示为本发明提供的工作板使用状态示意图。

图1-4中，1-盒体、11-磁条、12-工作台、121-凹槽、122-固定柱、 123-拉手一、124-标识、125-工作板、126-胶条、127-固定端、128- 固定孔、13-隔板二、2-台阶状隔板、21-工具区、211-背衬板、212- 吸水膜、22-酸类纤维素膜区、221-酸类纤维素膜、222-C线、223-T线、23-胶体金垫区、231-胶体金垫、24-样品膜区、241-样品膜、3- 盖体、31-杀菌灯、311-电源组件、32-下盖体、33-把手、34-隔板一、 4-试剂区、41-封闭液瓶、42-抗金标抗体瓶、43-洗涤液瓶、44-抗体瓶、 45-隔板三、451-温度控制盒、452-拉手二。

具体实施方式

下面结合附图1-4，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。

在本发明中，为了便于描述，肺结核病检测试剂盒中各部件的相对位置关系的描述是根据附图1的布图方式来进行描述的，如：上、下、左、右等位置关系是依据附图1的布图方向来确定的。

本发明采用的磁条11、胶条126、背衬板211、吸水膜212、酸类纤维素膜221、胶体金垫231、样品膜241、杀菌灯31、电源组件 311、封闭液、抗金标抗体、抗体、洗涤液、温度控制盒451和卫生镊子均可通过公共渠道购买或定制。

本发明中选用的所有材料、试剂和仪器都为本领域熟知的，但不限制本发明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。

实施例一：肺结核病检测试剂盒

如图1-4所示，一种肺结核病检测试剂盒，包括盒体1和盖体3，盒体1上方设置盖体3，盒体1内由隔板二13分为材料区和试剂区4，材料区内设有台阶状隔板2，台阶状隔板2上从上到下依次设置样品膜区24、胶体金垫区23、酸类纤维素膜区22和工具区21，台阶状隔板2下方的盒体1上设有工作台12，工作台12倾斜设置，试剂区 4内设有隔板三45，隔板三45上设有封闭液瓶41、抗金标抗体瓶42、洗涤液瓶43和抗体瓶44，隔板三45内活动设置温度控制盒451。

本发明中，工作台12上设置凹槽121，凹槽121内设置多组固定柱122，工具区21内设有工作板125，工作板125两端设置固定端 127，固定端127上设置与固定柱122相适应的固定孔128。

本发明中，固定柱122在凹槽121内阵列设置，固定柱122一侧设置标识124，工作台12与盒体1呈抽屉式设置，工作台12一侧设置拉手一123。

本发明中，工具区21内放置卫生镊子、胶条126和吸水膜212，酸类纤维素膜区22放置酸类纤维素膜221，胶体金垫区23放置胶体金垫231，样品膜区24放置样品膜241，胶条126一侧设置背衬板 211。

本发明中，温度控制盒451一端设置在盒体1背面，温度控制盒 451外设置拉手二452，温度控制盒451内设置温度控制器。

本发明中，盖体3内设置与隔板二13相适应的隔板一34，隔板一34的高度与盖体3内侧的深度相同，材料区上方的盖体3内设置杀菌灯31，盖体3外侧设置电源组件311，对材料区杀菌时不影响试剂区4，杀菌灯31与电源组件311电性连接。

本发明中，盒体1一侧设置开口，盒体1上开口一侧设置磁条 11，盖体3上设置与开口相适应的下盖体32，盖体3一侧设置把手 33。

实施例二：肺结核病检测试剂盒的应用

一种肺结核病检测试剂盒的应用方法，具体包括以下步骤：

(1)采集检测者的静脉血液5ml，1500r/min-3000r/min离心处理5min-15min后取上层血清作为血清样品；

(2)从检测试剂盒一侧通过拉手一123拉出工作台12，通过把手33打开盖体3，从工具区21取出卫生镊子、工作板125和胶条126，使用卫生镊子夹持工作板125，使固定孔128对准固定柱122，放入工作板125，使用卫生镊子将胶条126置于工作板125上表面，压平；

(3)取样按照台阶状隔板2向上的顺序，首先，使用卫生镊子从工具区21中取出吸水膜212放置于背衬板211下端，其次，从酸类纤维素膜区22取出酸类纤维素膜221，酸类纤维素膜221底端放置在吸水膜212上端下方，然后，从胶体金垫区23取出胶体金垫231，胶体金垫231底端放置在酸类纤维素膜221上端上方，最后，从样品膜区24取出样品膜241，样品膜241底端放置在胶体金垫231上端上方；

(4)将抗金标抗体瓶42中的抗金标结核菌抗体和抗体瓶44中的结核菌抗体分别固定于酸类纤维素膜221的C线222和T线223，取封闭液瓶41和洗涤液瓶43，在酸类纤维素膜221上的C线222一侧、C线222和T线223之间、T线223一侧和分别滴入1ml封闭液和洗涤液，在干燥的样品膜241一端滴入60-80μl的血清样品后，由于毛细作用和工作台12的倾斜设置，血清样品将沿着样品膜241向吸水膜212移动，经过胶体金垫231形成金标血清样品，当金标血清样品移动至固定有结核菌抗体的酸类纤维素膜221时，观察C线222 和T线223上是否出现肉眼可见红色的斑点；

(5)检测结束后，使用卫生镊子从固定柱122上取下工作板125，使用消毒液对工作台12进行消毒，消毒后工作台12放回盒体1内。

优选的，酸类纤维素膜221采用醋酸纤维素膜，洗涤液瓶43选择PBS试剂瓶，封闭液瓶41选择5％BSA封闭液瓶41。

实施例三：肺结核病检测试剂盒的效果实验

本次研究对象选自2017年6月-2018年6月收治的PTB患者150 例，所有患者均伴有咳嗽、咳痰症状，病程时间超过14d，结合中华医学会编著的《临床诊疗指南—结核病分册》确诊为肺结核患者；选择同期进行治疗的非结核病的其他呼吸道疾病患者30例；两组患者均排除伴有免疫***疾病患者，近期内使用免疫抑制剂类药物患者；且均签署知情同意书愿意参与本次研究。

3.1诊断灵敏度

从临床中收集到100份确诊为PTB患者的血清，用实施例一的肺结核病检测试剂盒按照实施例二的应用方法的操作步骤对上面收集到的PTB患者的血清进行检测。若C线和T线上均出现肉眼可见红色的斑点，则判断为阳性。3-5min后统计结果如下：

表1肺结核病检测试剂盒诊断灵敏度测试

根据表1的统计结果，对100份确诊的PTB患者血清的检测，可以发现有结核病抗原的阳性样本数量为93例，阴性样本数量为7 例。因此通过计算得出诊断灵敏性(％)＝93/100＝93％。

3.2诊断特异性

从临床中收集到200份健康献血者的血清，用实施例一的肺结核病检测试剂盒按照实施例二的应用方法的操作步骤对上面收集到的健康献血者的血清进行检测。若C线和T线上均出现肉眼可见红色的斑点，则判断为阳性。3-5min后统计结果如下：

表2肺结核病检测试剂盒诊断特异性测试

根据表2的统计结果，对150份健康献血者血清的检测，可以发现有结核病抗原的阳性样本数量为2例，阴性样本数量为158例。因此通过计算得出诊断灵敏性(％)＝198/200＝99％。

3.3对比试验

对上述PTB患者150例和同期进行治疗的非结核病的其他呼吸道疾病患者30例分别进行本发明提供的肺结核病检测试剂盒检测 (实施例二的方法，若C线和T线上均出现肉眼可见红色的斑点，则判断为阳性)、痰涂片检测(采集受检者口腔痰液，涂片镜使用Ziehl-Neelsen染色检查，使用酸性罗氏固体培养基进行细菌培养，阳性菌株使用对硝基苯甲酸(PNB)法进行鉴定，阳性判定标准：即每 100个视野中结核菌数量在3-9个则为阳性)和TB-SA法检测(采集所有纳入者的静脉血液4ml，离心处理(3000r/min)10min后取上层血清使用由赛普克公司提供的试剂盒进行TB-SA抗体检测，具体操作按照说明书中进行，(样本OD值)/(临界对照品OD值)≥1.2 即为阳性)。

符合率＝(诊断阳性例数+诊断阴性例数)/诊断总人数×100％；灵敏度＝诊断阳性例数/确诊为阳性的患者数量×100％；特异度＝诊断阴性例数/确诊为阴性的例数×100％。本次实验统计结果见表3。

表3肺结核病检测试剂盒的对比测试

由表3可见，本发明提供的肺结核病检测试剂盒灵敏度、诊断符合率高于其他两组，数据差异有统计学意义(P＜0.05)，3组方法的特异度数据差异无统计学意义(P＞0.05)。

综上所述本发明提供的肺结核病检测试剂盒及其应用，使用该检测试剂盒，配合台阶状隔板2能够快速完成胶体金法检测的准备工作，具备可重复操作性，利用双抗体夹心法检测血清样品中是否有结核病抗原，配合工作台12的倾斜设置，具有高特异、高灵敏度、高准确性的检测性能，能快速筛选出具有结核病抗原血清的阳性样本，能快速、便捷地辅助诊断肺结核病，检测时间3-5min，在病症检测领域具有广泛的实用性和开发价值。

如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。

Claims (9)

1.一种肺结核病检测试剂盒，包括盒体和盖体，其特征在于，盒体上方设置盖体，盒体内由隔板二分为材料区和试剂区，材料区内设有台阶状隔板，台阶状隔板上从上到下依次设置样品膜区、胶体金垫区、酸类纤维素膜区和工具区，台阶状隔板下方的盒体上设有工作台，工作台倾斜设置，试剂区内设有隔板三，隔板三上设有封闭液瓶、抗金标抗体瓶、洗涤液瓶和抗体瓶，隔板三内活动设置温度控制盒。

2.如权利要求1所述的一种肺结核病检测试剂盒，其特征在于，所述的工作台上设置凹槽，凹槽内设置多组固定柱，工具区内设有工作板，工作板两端设置固定端，固定端上设置与固定柱相适应的固定孔。

3.如权利要求2所述的一种肺结核病检测试剂盒，其特征在于，所述的固定柱在凹槽内阵列设置，固定柱一侧设置标识，工作台与盒体呈抽屉式设置，工作台一侧设置拉手一。

4.如权利要求1所述的一种肺结核病检测试剂盒，其特征在于，所述的工具区内放置卫生镊子、胶条和吸水膜，酸类纤维素膜区放置酸类纤维素膜，胶体金垫区放置胶体金垫，样品膜区放置样品膜，胶条一侧设置背衬板。

5.权利要求1所述的一种肺结核病检测试剂盒，其特征在于，所述的温度控制盒一端设置在盒体背面，温度控制盒外设置拉手二，温度控制盒内设置温度控制器。

6.权利要求1所述的一种肺结核病检测试剂盒，其特征在于，所述的盖体内设置与隔板二相适应的隔板一，隔板一的高度与盖体内侧的深度相同，材料区上方的盖体内设置杀菌灯，盖体外侧设置电源组件，杀菌灯与电源组件电性连接。

7.权利要求1所述的一种肺结核病检测试剂盒，其特征在于，所述的盒体一侧设置开口，盒体上开口一侧设置磁条，盖体上设置与开口相适应的下盖体，盖体一侧设置把手。

8.权利要求1所述的一种肺结核病检测试剂盒应用方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

（1）采集检测者的静脉血液5ml，1500 r/min-3000 r/min离心处理5min-15min后取上层血清作为血清样品；

（2）从检测试剂盒一侧通过拉手一拉出工作台，通过把手打开盖体，从工具区取出卫生镊子、工作板和胶条，使用卫生镊子夹持工作板，使固定孔对准固定柱，放入工作板，使用卫生镊子将胶条置于工作板上表面，压平；

（3）取样按照台阶状隔板向上的顺序，首先，使用卫生镊子从工具区中取出吸水膜放置于背衬板下端，其次，从酸类纤维素膜区取出酸类纤维素膜，酸类纤维素膜底端放置在吸水膜上端下方，然后，从胶体金垫区取出胶体金垫，胶体金垫底端放置在酸类纤维素膜上端上方，最后，从样品膜区取出样品膜，样品膜底端放置在胶体金垫上端上方；

（4）将抗金标抗体瓶中的抗金标结核菌抗体和抗体瓶中的结核菌抗体分别固定于酸类纤维素膜的C线和T线，取封闭液瓶和洗涤液瓶，在酸类纤维素膜上的C线一侧、C线和T线之间、T线一侧和分别滴入1ml封闭液和洗涤液，在干燥的样品膜一端滴入60-80µl的血清样品后，由于毛细作用和工作台的倾斜设置，血清样品将沿着样品膜向吸水膜移动，经过胶体金垫形成金标血清样品，当金标血清样品移动至固定有结核菌抗体的酸类纤维素膜时，观察C线和T线上是否出现肉眼可见红色的斑点；

（5）检测结束后，使用卫生镊子从固定柱上取下工作板，使用消毒液对工作台进行消毒，消毒后工作台放回盒体内。

9.权利要求8所述的一种肺结核病检测试剂盒的应用方法，其特征在于，所述的酸类纤维素膜采用醋酸纤维素膜，洗涤液瓶选择PBS试剂瓶，封闭液瓶选择5%BSA封闭液瓶。