CN109674039B - 生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷d2的方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物转化技术领域，公开了一种生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法及应用，其中，所述方法为向含益母草悬浮细胞的培养液中添加对羟基苯乙醇，经过一定的转化时间，使所述益母草悬浮细胞中含有红景天苷和淫羊藿次苷D2，使其培养液中也含红景天苷和淫羊藿次苷D2。本发明将对羟基苯乙醇直接添加到含益母草悬浮细胞的培养液中，将对羟基苯乙醇转化合成为红景天苷和淫羊藿次苷D2，大大减少了对羟基苯乙醇的损耗，转化率高，且益母草悬浮细胞培养所需时间较短，易于获得，操作非常简便、安全。
Description
技术领域
本发明涉及生物转化技术领域，具体涉及一种生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法及应用。
背景技术
红景天苷(salidroside)是景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodiola L.) 植物最重要的药效成分，具有抗疲劳、增强免疫力、保护心血管、抗缺氧、抗衰老、保护神经细胞、保护肝脏、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射等多种特异功效。在军事、航天、运动及保健医学等方面具有极其重要的应用价值。近年来，以其作为主要原料生产的药剂、饮料、食品以及化妆品等产品的种类越来越多，人们对红景天苷的需求在不断增加。
红景天属植物是提取红景天苷的主要来源，但野生资源匮乏，且红景天苷含量很低，如最常用的高山红景天和大花红景天，其植株中红景天苷的含量只有0.5％～0.8％。尽管目前在人工栽培方面取得了进展，但由于红景天种子成熟度差、发芽率低，且需生长在环境适宜的高海拔山区，人工栽培的红景天成本较高而有效成分含量低，尚难以保证红景天原料的大量供应。
自然界中红景天苷的生物合成是以酪醇(即对羟基苯乙醇)为底物，由植物体内的葡萄糖基转移酶催化，转移一个葡萄糖基到酪醇上，形成红景天苷。但自然界中多数植物均不能合成酪醇，因而不含有红景天苷。
红景天苷是一种由葡萄糖与酪醇以苷键结合而成的糖苷，酪醇为其苷元，可采用酶法进行合成。有文献报道提及，可利用植物种子中提取的β- 糖苷酶合成红景天苷，例如从苹果种子中得到的β-糖苷酶，能使4-取代苯甲醇和红景天苷元与葡萄糖在水-二噁烷单相介质中发生糖基化作用，糖苷产率约13.1～23.1％，其中红景天苷约15.8％。但β-糖苷酶在生物体内的主要作用是催化糖苷键的水解，合成红景天苷利用的是其逆反应，该反应受热力学控制和反应平衡限制，收率较低。
红景天苷还可用化学法合成，但由于化学合成过程需要经过多步的保护和去保护措施，过程复杂且成本高，副产物较多且难于分离，对环境危害较大，因此未见大规模生产。
虽然现有技术中有关于在植物生长的水体、土壤或叶片中加入特定原料，通过生物转化生成红景天苷的报道，但是这种添加方式原料损耗多，大部分无法被吸收利用，红景天苷的转化率较低。淫羊藿次苷D2在红景天中含量较红景天苷更低，也没有任何合成方法的报道。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种简便、高效的生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法。
为了实现上述目的，本发明提供一种生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法，向含益母草悬浮细胞的培养液中添加对羟基苯乙醇，经过一定的转化时间，使所述益母草悬浮细胞中含有红景天苷和淫羊藿次苷D2，使其培养液中也含红景天苷和淫羊藿次苷D2。
所述对羟基苯乙醇的初始浓度为0.1～30mmol/L；所述对羟基苯乙醇的初始浓度优选为0.5～10mmol/L；所述对羟基苯乙醇的初始浓度进一步优选为1～5mmol/L。
所述转化时间为1～720h；所述转化时间优选为5～160h；所述转化时间进一步优选为20～65h。
所述对羟基苯乙醇的添加次数为1～15次；所述对羟基苯乙醇的添加次数优选为1～8次；所述对羟基苯乙醇的添加次数进一步优选为1～4次。
当所述对羟基苯乙醇的添加次数大于1次时，相邻两次之间的时间间隔为24～240h；相邻两次之间的时间间隔优选为24～120h；相邻两次之间的时间间隔进一步优选为48～72h。
所述对羟基苯乙醇由对羟基苯乙胺、对羟基苯乙酸和对羟基苯乙醛中的任意一种或其至少两种的组合在所述益母草悬浮细胞内转化而成。所述对羟基苯乙胺、对羟基苯乙酸和对羟基苯乙醛添加至益母草悬浮细胞培养液中后，被益母草悬浮细胞吸收后，在相关酶的作用下，可转化为对羟基苯乙醇参与后续反应。
本发明还提供了一种含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞或培养液的用途，采用上述方法得到的含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞或培养液作为红景天苷或淫羊藿次苷D2的提取原料，以及一种含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞的用途，采用上述方法得到的含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞制备食品、保健食品、食品添加剂或药物。
本发明将对羟基苯乙醇直接添加到含益母草悬浮细胞的培养液中，将对羟基苯乙醇转化合成为红景天苷和淫羊藿次苷D2，大大减少了对羟基苯乙醇的损耗，转化率高，且益母草悬浮细胞培养所需时间较短，易于获得，操作非常简便、安全。采用本发明的方法得到的含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞和/或培养液可以作为红景天苷和淫羊藿次苷D2的提取原料，采用本发明的方法得到的含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞还可以制成食品、保健食品、食品添加剂或药物。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明提供一种生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法，向含益母草悬浮细胞的培养液中添加对羟基苯乙醇，经过一定的转化时间，使所述益母草悬浮细胞中含有红景天苷和淫羊藿次苷D2，使其培养液中也含红景天苷和淫羊藿次苷D2。
其中，最初的培养液中不含红景天苷和淫羊藿次苷D2，但随着细胞死亡，溶胞破裂，细胞内的红景天苷和淫羊藿次苷D2可释放到培养液中，因此，培养液中也含有红景天苷和淫羊藿次苷D2。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
实施例1
1、益母草悬浮细胞培养：取5g纯化后生长旺盛的益母草疏松愈伤组织，接入含有100mL培养液(MS培养基+0.5mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸+2.0mg/L6- 苄氨基腺嘌呤)的250mL摇瓶中。按照新液:旧液＝3:1，每隔5天换液。培养前期，换液时每次剔除大的细胞团。培养一段时间，有充分的较小细胞团后，换液时将悬浮细胞液过50目筛网，收获滤液，静置片刻待细胞下沉，以新液、旧液比3:1弃去上液，补足新液，继续摇床培养。反复过50目筛培养一段时间后，建立起益母草悬浮细胞系。此后间歇性地过50目筛网以维持悬浮细胞的分散性。
以5g/100mL接入益母草悬浮细胞种子液，于转速110r/min，光照12h/ 天，25℃培养，即得益母草悬浮细胞转化体系。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙醇水溶液使其初始浓度为3mmol/L，添加后每隔12h收获，共收获12次，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙醇水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：分别取含本实施例及空白组益母草悬浮细胞培养液，抽滤，滤液置-80℃保存，细胞残渣用水清洗3遍加入 10倍量70％甲醇，于80℃下热回流1h。冷却后补足减失的重量，过0.45μm 滤膜；培养液即滤液直接解冻后过0.45μm滤膜，即得13组供试品溶液。另取红景天苷标准品，加50％甲醇制成每1mL中含0.05mg的溶液，作为标准品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(12:88)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按红景天苷峰计算应不低于3000。分别精密吸取13组供试品溶液及标准品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，计算转化率。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中60h最高，红景天苷总转化率(细胞内58.92％+培养液4.15％)为63.07％、淫羊藿次苷 D2总转化率(细胞内6.69％+培养液1.97％)为8.66％；12h最低，红景天苷总转化率(细胞内14.48％+培养液0.10％)为14.58％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内3.02％+培养液0.12)为3.14％；144h时红景天苷总转化率(细胞内24.91％+培养液10.35％)为35.26％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内 4.12％+培养液1.12％)为5.24％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
实施例2
1、益母草悬浮细胞培养：培养方法同实施例1。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙醇水溶液使其初始浓度为5mmol/L，分别于添加后24h、48h收获，共收获2次，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙醇水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：检测方法同实施例1。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中24h红景天苷总转化率(细胞内29.78％+培养液5.71％)为35.49％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内5.03％+培养液1.02％)为6.05％；48h红景天苷总转化率(细胞内35.39％+培养液7.25％)为42.64％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内 5.76％+培养液1.97％)为7.73％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
实施例3
1、益母草悬浮细胞培养：培养方法同实施例1。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙醇水溶液使其初始浓度为7mmol/L，分别于添加后1h、48h收获，共收获2次，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙醇水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：检测方法同实施例1。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中1h红景天苷总转化率(细胞内3.40％+培养液1.09％)为4.49％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内1.08％+培养液0.76％)为1.84％；48h红景天苷总转化率(细胞内26.08％+培养液9.76％)为35.84％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内 4.62％+培养液3.09％)为7.71％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
实施例4
1、益母草悬浮细胞培养：培养方法同实施例1。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙醇水溶液使其初始浓度为1mmol/L，分别于添加后36h、120h收获，共收获2次，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙醇水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：检测方法同实施例1。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中36h红景天苷总转化率(细胞内32.50％+培养液0.56％)为33.06％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内5.67％+培养液0.15％)为5.82％；120h红景天苷总转化率 (细胞内26.50％+培养液5.37％)为31.87％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内5.02％+培养液1.12)为6.14％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
实施例5
1、益母草悬浮细胞培养：培养方法同实施例1。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙醇水溶液使其初始浓度为2mmol/L，对羟基苯乙醇共添加2次，相邻两次之间的时间间隔为240h，于第一次添加后300h收获，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙醇水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：检测方法同实施例1。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中红景天苷总转化率(细胞内41.6％+培养液10.5％)为52.1％、淫羊藿次苷D2总转化率 (细胞内7.3％+培养液1.5％)为8.8％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
实施例6
1、益母草悬浮细胞培养：培养方法同实施例1。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙醇水溶液使其初始浓度为6mmol/L，对羟基苯乙醇共添加4次，相邻两次之间的时间间隔为120h，于第一次添加后420h收获，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙醇水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：检测方法同实施例1。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中红景天苷总转化率(细胞内37.2％+培养液9.2％)为46.4％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内6.2％+培养液1.2％)为7.4％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
实施例7
1、益母草悬浮细胞培养：培养方法同实施例1。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙醇水溶液使其初始浓度为8mmol/L，对羟基苯乙醇共添加3次，相邻两次之间的时间间隔为24h，于第一次添加后100h收获，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙醇水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：检测方法同实施例1。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中红景天苷总转化率(细胞内35.2％+培养液7.3％)为42.5％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内4.5％+培养液0.9％)为5.4％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
实施例8
1、益母草悬浮细胞培养：培养方法同实施例1。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙醇水溶液使其初始浓度为10mmol/L，对羟基苯乙醇共添加2次，相邻两次之间的时间间隔为24h，于第一次添加后80h收获，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙醇水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：检测方法同实施例1。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中红景天苷总转化率(细胞内31.0％+培养液3.2％)为34.2％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内3.9％+培养液0.7％)为4.6％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
实施例9
1、益母草悬浮细胞培养：培养方法同实施例1。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙醇水溶液使其初始浓度为20mmol/L，于添加后5h收获，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙醇水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：检测方法同实施例1。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中红景天苷总转化率(细胞内3.6％+培养液0.6％)为4.2％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内1.7％+培养液0.2％)为1.9％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
实施例10
1、益母草悬浮细胞培养：培养方法同实施例1。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙醇水溶液使其初始浓度为30mmol/L，于添加后1h收获，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙醇水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：检测方法同实施例1。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中红景天苷总转化率(细胞内3.5％+培养液0.0％)为3.5％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内1.3％+培养液0.3％)为1.6％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
实施例11
1、益母草悬浮细胞培养：培养方法同实施例1。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙胺水溶液使其初始浓度为0.5mmol/L，对羟基苯乙胺共添加8次，相邻两次之间的时间间隔为72h，于第一次添加后580h收获，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙胺水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：检测方法同实施例1。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中红景天苷总转化率(细胞内9.1％+培养液1.1％)为10.2％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内1.4％+培养液0.7％)为2.1％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
实施例12
1、益母草悬浮细胞培养：培养方法同实施例1。
转化方法：向益母草悬浮细胞转化体系中添加对羟基苯乙酸和对羟基苯乙醛的混合水溶液，使对羟基苯乙酸和对羟基苯乙醛的初始浓度均为 0.1mmol/L，共添加15次，相邻两次之间的时间间隔为48h，于第一次添加后720h收获，即得。
同时设置空白组，空白组与本实施例的区别仅在于，空白组不添加对羟基苯乙酸和对羟基苯乙醛的混合水溶液。
2、红景天苷和淫羊藿次苷D2的检测：检测方法同实施例1。
由检测结果可知，本实施例所得益母草悬浮细胞转化体系中红景天苷总转化率(细胞内10.9％+培养液1.5％)为12.4％、淫羊藿次苷D2总转化率(细胞内1.7％+培养液0.8％)为2.5％，而空白组所得益母草悬浮细胞中未检测出红景天苷和淫羊藿次苷D2。
上述实施例的具体参数如下表所示：
通过表格内的数据可以看出，采用本发明的生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法，操作非常简便、安全，将对羟基苯乙醇直接添加到益母草悬浮细胞中，使得对羟基苯乙醇能够直接被益母草悬浮细胞吸收转化，可大大减少对羟基苯乙醇的损耗，从而有效提高红景天苷和淫羊藿次苷D2的转化率。
本发明还提供了一种含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞或培养液的用途，采用上述方法得到的含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞或培养液作为红景天苷或淫羊藿次苷D2的提取原料，以及一种含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞的用途，采用上述方法得到的含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞制备食品、保健食品、食品添加剂或药物。
实施例13：提取红景天苷
将实施例1所获得益母草悬浮细胞作为红景天苷提取原料。
提取步骤为：取益母草悬浮细胞培养液，抽滤，弃滤液，滤渣即益母草悬浮细胞，取10Kg，加水4倍量，煎煮1h，滤过，滤液浓缩至相对密度为 1.25，放冷，用等体积正丁醇萃取2次，合并正丁醇萃取液，减压浓缩至无醇味，加3倍量水稀释后，以1BV(床体积)/h通过AB-8大孔吸附树脂柱，先用3倍床体积的水洗涤，弃去，再2倍床体积的10％乙醇洗涤，弃去，再用5倍床体积20％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至干，得粗提取物，加甲醇适量溶解后，加3倍粗提取物重量的硅胶，混匀，加入20倍粗提取物重量的硅胶柱上部，用10倍床体积甲醇-氯仿(2:8)溶液，进行洗脱，收集洗脱液，减压蒸干，用10倍体积的无水乙醇在10℃以下结晶，晶浆离心分离，无水乙醇洗涤后，真空干燥，得红景天苷；得纯度为99.1％的红景天苷，收率为26％。
实施例14：制备含有红景天苷的保健食品
将实施例1获得的益母草悬浮细胞，作为制备保健饮料的原料。
取益母草悬浮细胞培养液，抽滤，弃滤液，滤渣即益母草悬浮细胞，取 10Kg，加水4倍量，煎煮1h，煎液滤过，滤液加入2％明胶，混匀，放置过夜，滤过，滤液加水稀释5倍，再加入白砂糖12％，抗坏血酸0.02％，柠檬酸0.12％，焦糖色0.15％，香精0.15％，灭菌，分装，制成饮料。
所得饮料具有缓解运动疲劳、增强免疫力、提高缺氧耐受力、抗氧化和对肝损伤的辅助保护功能。
实施例15：制备含有红景天苷的食品添加剂
将实施例1获得的益母草悬浮细胞，作为制备食品添加剂的原料
取益母草悬浮细胞培养液，抽滤，弃滤液，滤渣即益母草悬浮细胞，取 10Kg，加水4倍量，煎煮1h，煎液滤过，滤液加入2％明胶，混匀，放置过夜，滤过，滤液浓缩成稠膏后，于60℃真空干燥得干膏，粉碎后即可作为食品添加剂使用。
在制作面包时，在小麦粉中添加上述添加剂2％，对面包的感官质量无不良影响并赋予产品特有的植物清香味感，面包中含红景天苷功能因子，具有解除疲劳的保健功能。
实施例16：制备含有红景天苷的药物
将实施例1所得益母草悬浮细胞，作为制备药物的原料。
取益母草悬浮细胞培养液，抽滤，弃滤液，滤渣即益母草悬浮细胞，取 10Kg，加水4倍量，加水煎煮1h，滤液浓缩成稠膏后，于60℃真空干燥得干膏，粉碎后，取干膏粉300g，加入药用淀粉50g，按常规制药工艺制成片剂。
所得片剂可以用于治疗和预防高原反应，或者用于治疗冠心病，脑梗塞，老年性痴呆症等疾病。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (8)
1.一种生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法，其特征在于，向含益母草悬浮细胞的培养液中添加对羟基苯乙醇，经过一定的转化时间，使所述益母草悬浮细胞中含有红景天苷和淫羊藿次苷D2，使其培养液中也含红景天苷和淫羊藿次苷D2；
所述对羟基苯乙醇的初始浓度为2～6mmol/L，所述对羟基苯乙醇的添加次数为1-4次，所述转化时间为48～420h，所述含益母草悬浮细胞的培养液通过益母草悬浮细胞种子液培养获得；
所述益母草悬浮细胞种子液通过将益母草疏松愈伤组织接入培养液中间歇性地过50目筛网培养得到，其中，所述培养液为含有0.5mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸和2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤的MS培养基。
2.根据权利要求1所述的生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法，其特征在于，所述对羟基苯乙醇的初始浓度为2～3mmol/L。
3.根据权利要求1所述的生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法，其特征在于，所述转化时间为60～300h。
4.根据权利要求1所述的生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法，其特征在于，所述对羟基苯乙醇的添加次数为1～2次。
5.根据权利要求1所述的生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法，其特征在于，当所述对羟基苯乙醇的添加次数大于1次时，相邻两次之间的时间间隔为120～240h。
6.根据权利要求1至5任一所述的生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷D2的方法，其特征在于，所述对羟基苯乙醇由对羟基苯乙胺、对羟基苯乙酸和对羟基苯乙醛中的任意一种或其至少两种的组合在所述益母草悬浮细胞内转化而成。
7.一种含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞或培养液的用途，其特征在于，采用权利要求1至6任一所述的方法得到的含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞或培养液作为红景天苷或淫羊藿次苷D2的提取原料。
8.一种含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞的用途，其特征在于，采用权利要求1至6任一所述的方法得到的含有红景天苷和淫羊藿次苷D2的益母草悬浮细胞制备食品、保健食品、食品添加剂或药物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811409983.9A CN109674039B (zh) | 2018-11-23 | 2018-11-23 | 生物转化合成红景天苷和淫羊藿次苷d2的方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
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