CN104584821B - 一种含红景天苷的植物的栽培方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种含红景天苷的植物的栽培方法，所述方法包括以下步骤：向生长的植物叶片喷洒对羟基苯乙醇，采收，即得含红景天苷的植物。本发明提供的方法步骤简单，红景天苷的合成前体对羟基苯乙醇直接由外界供给，以植物本身所含的尿苷二磷酸葡萄糖和葡萄糖基转移酶为原料，在植物体内合成红景天苷。本发明进一步保护栽培所得的含红景天苷植物的应用。

Description

一种含红景天苷的植物的栽培方法及应用

技术领域

本发明涉及生物转化技术领域，具体地涉及一种含红景天苷的植物的栽培方法。

背景技术

红景天苷(salidroside)是景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodiola L.)植物最重要的药效成分，具有抗疲劳、增强免疫力、保护心血管、抗缺氧、抗衰老、保护神经细胞、保护肝脏、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射等多种特异功效。在军事、航天、运动及保健医学等方面具有极其重要的应用价值。近年来，以其作为主要原料生产的药剂、饮料、食品以及化妆品等产品的种类越来越多，人们对红景天苷的需求在不断增加。

红景天属植物是提取红景天苷的主要来源，但野生资源匮乏，且红景天苷含量很低，如最常用的高山红景天和大花红景天，其植株中红景天苷的含量只有0.5％～0.8％。尽管目前在人工栽培方面取得了进展，但由于红景天种子成熟度差、发芽率低，且需生长在环境适宜的高海拔山区，人工栽培的红景天成本较高而有效成分含量低，尚难以保证红景天原料的大量供应。

自然界中红景天苷的生物合成是以酪醇(即对羟基苯乙醇)为底物，由植物体内的葡萄糖基转移酶催化，转移一个葡萄糖基到酪醇上，形成红景天苷。但自然界中多数植物均不能合成酪醇，因而不含有红景天苷。

红景天苷的合成方法主要有植物组织培养、植物细胞培养、生物酶法和化学方法合成。其中组织培养和细胞培养采用的均是红景天属植物，通过优化培养基条件和添加苷元酪醇等方法，来提高产量和收率。如韩爱明等人对高山红景天细胞悬浮培养过程中的培养基进行了优化，干细胞中红景天苷含量为5.66mg/g，另外在红景天悬浮培养细胞的指数生长期每隔24h重复3次添加3mmol/L酪醇，红景天苷的产量可达516μmol/L。采用组织培养和细胞培养来生产红景天苷，由于周期长，成本高，尚未在生产中得到大规模应用。

红景天苷是一种由葡萄糖与酪醇以苷键结合而成的糖苷，酪醇为其苷元，可采用酶法进行合成。有文献报道提及，可利用植物种子中提取的β-糖苷酶合成红景天苷，例如从苹果种子中得到的β-糖苷酶，能使4-取代苯甲醇和红景天苷元与葡萄糖在水-二噁烷单相介质中发生糖基化作用，糖苷产率约13.1～23.1％，其中红景天苷约15.8％。但β-糖苷酶在生物体内的主要作用是催化糖苷键的水解，合成红景天苷利用的是其逆反应，该反应受热力学控制和反应平衡限制，收率较低。

红景天苷还可用化学法合成，但由于化学合成过程需要经过多步的保护和去保护措施，过程复杂且成本高，副产物较多且难于分离，对环境危害较大，因此未见大规模生产。

综上所述，目前红景天苷的合成方法由于生产成本高、产量低、合成步骤复杂等原因，均未见在工业上推广应用。虽然现有技术中有关于在植物生长的水体或土壤中加入特定原料，通过生物转化生成红景天苷的报道，但是这种添加方式需要对水体或土壤中的物质实时监测并不断补充，操作复杂，且大量添加的原料损耗多，大部分无法被吸收，转化效率不高，并对植物根系有一定的毒害作用，影响根系生长。

目前，随着人们对于健康生活的不断追求，采用安全的方法在具有药用价值或食用价值的植物中合成红景天苷，栽培得到含红景天苷的植物，具有良好的开发和应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简便、高效、安全栽培含红景天苷的植物的方法。

本发明提供了一种含红景天苷的植物的栽培方法，所述方法包括以下步骤：向生长的植物叶片喷洒对羟基苯乙醇，采收，即得含红景天苷的植物。

所述被喷洒的植物应处于生长阶段，喷洒的起始时间优选为植物正常采收前1～2个月范围内的任意时间。

所述植物为具有药用价值或食用价值的常见植物，包括粮食作物、蔬菜、果树、茶树、药用植物(包括自然条件下含有红景天苷的植物)，例如益母草、烟草、凤眼莲、杜仲、绞股蓝、女贞树、杜鹃、棉花、葡萄树、草莓、苹果树、橘树、橙、柚、梨树、桃树、杏树、枣树、水稻、玉米、小麦、马铃薯、大豆、香茅草等。本发明所述植物优选为：益母草(拉丁学名Leonurusartemisia(Laur.)S.Y.Hu F)、烟草(Nicotiana tabacum L.)、水稻(Oryza sativa)、杜仲(Eucommia ulmoides)、银杏(Ginkgo biloba L.)、马铃薯(Solanum tuberosum)、甘薯(Ipomoea batatas Lam)、葡萄(Vitis vinifera)、凤眼莲(Eichhornia crassipes)、小麦(Triticum aestivumLinn)、女贞(Ligustrum lucidum)、小叶女贞(Ligustrum quihouiCarr.)、杜鹃(Rhododendron simsii Planch.)、香茅草(Cymbopogon citratus.)。

所述对羟基苯乙醇，是以对羟基苯乙醇为溶质配制而成的浓度0.01～10％的溶液、乳浊液或悬浊液，优选为浓度0.1～5％的溶液、乳浊液或悬浊液，进一步优选为浓度0.2～2％的溶液、乳浊液或悬浊液；所述浓度为溶质与溶剂的质量体积比，百分比的含义为g/100ml。

所述喷洒的次数可以为1次，也可以为多次，所述多次为2～10次，优选为2～6次，进一步优选为3～5次；当喷洒次数大于1次时，各次喷洒的时间间隔为1～30天，优选为1～15天，进一步优选为2～5天。

所述采收的时间为喷洒后第1～15天，优选为2～7天，进一步优选为2～3天；当喷洒次数大于1次时，所述采收时间为最后一次喷洒后的天数。

具体的，本发明提供的方法包括以下步骤：向生长的植物叶片喷洒浓度0.01～10％的对羟基苯乙醇溶液、乳浊液或悬浊液，喷洒后第1～15天采收，即得。

优选地，本发明提供的方法包括以下步骤：向生长的植物叶片喷洒2～10次浓度0.01～10％的对羟基苯乙醇溶液、乳浊液或悬浊液，各次喷洒的时间间隔为1～30天，最后一次喷洒后第1～15天采收，即得。

更优选地，本发明提供的方法包括以下步骤：向生长的植物叶片喷洒2～6次浓度0.1～5％的对羟基苯乙醇溶液、乳浊液或悬浊液，各次喷洒的时间间隔为1～15天，最后一次喷洒后第2～7天采收，即得。

进一步优选地，本发明提供的方法包括以下步骤：向生长的植物叶片喷洒3～5次浓度0.2～2％的对羟基苯乙醇溶液，各次喷洒的时间间隔为2～5天，最后一次喷洒后第2～3天采收，即得。

作为一种优选方案，本发明提供的方法包括以下步骤：向生长的植物叶片喷洒3次浓度0.8％的对羟基苯乙醇水溶液，各次喷洒的时间间隔为5天，最后一次喷洒后第2天采收，即得。

本发明所述喷洒应使对羟基苯乙醇溶液、乳浊液或悬浊液覆盖植物叶片表面。

本发明所述对羟基苯乙醇的溶剂可以是水、任意一种油或有机溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐、表面活性剂等配成的溶剂。

本发明所述对羟基苯乙醇可由对羟基苯乙胺或对羟基苯乙酸中的一种或几种代替。所述对羟基苯乙胺、对羟基苯乙酸、或对羟基苯乙醛被喷洒在叶片表面，进而被植物吸收后，在相关酶的作用下，可转化为对羟基苯乙醇参与后续反应。当所述对羟基苯乙胺或对羟基苯乙酸浓度较高时，溶解性较差，需加助溶剂，形成乳浊液或悬浊液。

为了促进外源性对羟基苯乙醇的吸收、分布，进一步提高植物中红景天苷的含量，本发明提供的方法可以进一步包括如下步骤：在第一次喷洒的同时，向植物生长的水体或土壤中加入对羟基苯乙醇。所述在水体中加入的对羟基苯乙醇使其终浓度为0.1～10mmol/L，优选为0.5～5mmol/L；在土壤中加入的对羟基苯乙醇终浓度为每公斤土壤中0.1～30g，优选为每公斤土壤中1～10g。

具体的，本发明提供的方法可以包括以下步骤：向水培生长的植物叶片喷洒3～5次浓度0.2～0.8％的对羟基苯乙醇水溶液，各次喷洒的时间间隔为2～5天；在第一次喷洒的同时向其生长的水中加入对羟基苯乙醇使其浓度为0.5～5mmol/L；最后一次喷洒后第2～5天采收，即得。

作为一种优选方案，本发明提供的方法可以包括以下步骤：向水培生长的凤眼莲叶片喷洒3次浓度0.8％的对羟基苯乙醇水溶液，各次喷洒的时间间隔为5天；在第一次喷洒的同时向其生长的水中加入对羟基苯乙醇使其浓度为0.5mmol/L；最后一次喷洒后第2天采收，即得。

本发明提供的方法可以包括以下步骤：向土培生长的植物叶片喷洒3～5次浓度0.2～0.8％的对羟基苯乙醇水溶液，各次喷洒的时间间隔为2～5天；在第一次喷洒的同时向其生长的土壤中加入对羟基苯乙醇使其浓度为每公斤土壤中1～10g；最后一次喷洒后第2～5天采收，即得。

作为一种优选方案，本发明提供的方法可以包括以下步骤：向土壤栽培生长的马铃薯叶片喷洒4次浓度0.6％的对羟基苯乙醇水溶液，各次喷洒的时间间隔为5天；在第一次喷洒的同时向其生长的土中加入对羟基苯乙醇使其浓度为每公斤土壤中5g；最后一次喷洒后第2天采收，即得。

本发明提供的方法基于以下反应原理：以植物本身所含的尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)为底物，利用植物本身所含的葡萄糖基转移酶，将尿苷二磷酸葡萄糖上的葡萄糖基转移至对羟基苯乙醇上，从而将外源的对羟基苯乙醇转化生成红景天苷。所述转化可以在植物体内自然发生，无需施加其它催化物质或改变外部条件，且外源的对羟基苯乙醇对植物的正常生长基本无干扰。上述机理可用以下反应式表示：

本发明发现通过大量实验发现，通过将对羟基苯乙醇喷洒在植物叶面上，植物可通过叶片将对羟基苯乙醇吸收进入体内，在糖基转移酶的作用下与UDPG反应，合成红景天苷。由于UDPG是葡萄糖的活性形式，植物细胞本身会持续不断产生UDPG，因为淀粉等糖类物质的合成均需要UDPG的参与，因此UDPG的含量及分布不会成为本发明所述红景天苷生物合成的限制因素。

在自然状态下，绝大部分植物体内不含有红景天苷。本发明提供的方法选择了将对羟基苯乙醇喷洒在叶片表面这一简便、高效的操作方式，并优选了对羟基苯乙醇的浓度以及施加的时间、次数、间隔等一系列参数，由于红景天苷的合成前体对羟基苯乙醇直接由外界供给，因此可以利用植物本身所含的尿苷二磷酸葡萄糖和葡萄糖基转移酶为原料，在植物体内合成红景天苷，所述方法安全可靠。

本发明进一步保护所述方法生产得到的植物的应用，包括以所述植物为食材直接食用，或作为原料提取红景天苷、或制备保健食品、食品添加剂、药物等。

本发明提供技术方案操作非常简便、安全，与现有技术相比具有显著的进步。本发明提供的方法，将对羟基苯乙醇直接喷洒在植物的地上部位，与向植物生长的水体或土壤中添加对羟基苯乙醇的技术方案相比，叶面喷施具有显著的优势，操作方便，可随时喷洒，且大大减少了对羟基苯乙醇的使用量，损耗少，如果采用在植物培养过程中加入营养液或土壤中的方式，则需要对对羟基苯乙醇的浓度实时监控、不断添加，且对羟基苯乙醇损耗多，大部分无法被吸收，此外，对羟基苯乙醇等对植物根系有一定的毒害作用，影响根系生长，而通过叶面吸收，对植物生长基本无不利影响。采用本发明的方法可以使得自然条件下难以产生红景天苷的植物，能够在体内转化和积累红景天苷，从而获得红景天苷所具有的生理药理活性，如抗疲劳、增强免疫力、保护心血管、抗缺氧、抗衰老、保护神经细胞、保护肝脏、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射等功效，可作为植物直接食用，亦可作为红景天苷提取的原料。

自然条件下能够产生红景天苷的植物，如女贞树、红景天等，采用本发明的方法可在树叶、果实等部位更多地合成和积累红景天苷。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒0.5％对羟基苯乙醇水溶液，第3天采收益母草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：将本实施例和对照组所得益母草叶清洗、切碎，作为两组待测样品；采用高效液相色谱方法，分别取5g待测样品，加入50％甲醇25ml，称定重量，加热回流60分钟，放冷，补足减失的重量，滤过，作为两组供试品溶液。另取红景天苷标准品，加50％甲醇制成每1ml中含0.05mg的溶液，作为标准品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(12:88)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按红景天苷峰计算应不低于3000。分别精密吸取各组供试品溶液及标准品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.052％，对照组检测不到红景天苷。

实施例2：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒10％对羟基苯乙醇水溶液，第15天采收益母草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.028％，对照组检测不到红景天苷。

实施例3：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒5％对羟基苯乙醇水溶液，第7天采收益母草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.032％，对照组检测不到红景天苷。

实施例4：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒2％对羟基苯乙醇水溶液，第3天采收益母草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.055％，对照组检测不到红景天苷。

实施例5：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒0.1％对羟基苯乙醇水溶液，第2天采收益母草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.020％，对照组检测不到红景天苷。

实施例6：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒0.01％对羟基苯乙醇水溶液，第2天采收益母草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.004％，对照组检测不到红景天苷。

实施例7：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒1％对羟基苯乙醇水溶液，隔15天后再喷洒1％对羟基苯乙醇水溶液，最后一次喷洒后的第3天采收益母草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.058％，对照组检测不到红景天苷。

实施例8：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒0.8％对羟基苯乙醇水溶液，每隔5天喷洒一次，共喷洒三次，最后一次喷洒后的第2天采收益母草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.065％，对照组检测不到红景天苷。

实施例9：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒0.2％对羟基苯乙醇水溶液，每隔2天喷洒一次，共喷洒四次，最后一次喷洒后的第2天采收益母草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.056％，对照组检测不到红景天苷。

实施例10：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒0.01％对羟基苯乙醇水溶液，每隔1天喷洒一次，共喷洒五次，最后一次喷洒后的第2天采收益母草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.032％，对照组检测不到红景天苷。

实施例11：含有红景天苷的烟草

1、栽培方法：向在土壤中生长的烟草的叶片喷洒0.4％对羟基苯乙醇水溶液，每隔3天喷洒一次，共喷洒四次，最后一次喷洒后的第2天采收烟草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得烟草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.048％，对照组检测不到红景天苷。

实施例12：含有红景天苷的烟草

1、栽培方法：向在土壤中生长的烟草的叶片喷洒10％对羟基苯乙醇水溶液，每隔10天喷洒一次，共喷洒两次，最后一次喷洒后的第4天采收烟草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得烟草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.056％，对照组检测不到红景天苷。

实施例13：含有红景天苷的水稻

1、栽培方法：向在土壤中生长的水稻的叶片喷洒0.3％对羟基苯乙醇水溶液，每隔4天喷洒一次，共喷洒三次，最后一次喷洒后的第2天采收水稻叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得水稻叶中红景天苷含量(鲜重)为0.064％，对照组检测不到红景天苷。

实施例14：含有红景天苷的杜仲

1、栽培方法：向在土壤中生长的杜仲的叶片喷洒0.6％对羟基苯乙醇水溶液，每隔7天喷洒一次，共喷洒三次，最后一次喷洒后的第2天采收杜仲叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得杜仲叶中红景天苷含量(鲜重)为0.096％，对照组检测不到红景天苷。

实施例15：含有红景天苷的银杏

1、栽培方法：向在土壤中生长的银杏的叶片喷洒0.5％对羟基苯乙醇水溶液，每隔5天喷洒一次，共喷洒五次，最后一次喷洒后的第3天采收银杏叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得银杏叶中红景天苷含量(鲜重)为0.027％，对照组的叶或根中均检测不到红景天苷。

实施例16：含有红景天苷的马铃薯

1、栽培方法：向在土壤中生长的马铃薯的叶片喷洒0.6％对羟基苯乙醇水溶液，每隔6天喷洒一次，共喷洒四次，最后一次喷洒后的第3天采收马铃薯叶和茎。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得马铃薯叶中红景天苷含量(鲜重)为0.058％，马铃薯茎中红景天苷含量(鲜重)为0.011％，对照组的叶或茎中均检测不到红景天苷。

实施例17：含有红景天苷的马铃薯

1、栽培方法：向在土壤中生长的马铃薯的叶片喷洒0.3％对羟基苯乙醇水溶液，每隔4天喷洒一次，共喷洒六次，最后一次喷洒后的第2天采收马铃薯叶和块根。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得马铃薯叶中红景天苷含量(鲜重)为0.052％，马铃薯块根中红景天苷含量(鲜重)为0.010％，对照组的叶或块根中均检测不到红景天苷。

实施例18：含有红景天苷的甘薯

1、栽培方法：向在土壤中生长的甘薯的叶片喷洒2％对羟基苯乙醇水溶液，隔30天后再喷洒一次，第二次喷洒后的第3天采收甘薯叶和块根。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得甘薯叶中红景天苷含量(鲜重)为0.047％，甘薯块根中红景天苷含量(鲜重)为0.006％，对照组的叶或块根中均检测不到红景天苷。

实施例19：含有红景天苷的甘薯

1、栽培方法：向在土壤中生长的甘薯的叶片喷洒1％对羟基苯乙醇水溶液，每隔20天喷洒一次，共喷洒三次，最后一次喷洒后的第2天采收甘薯叶和块根。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得甘薯叶中红景天苷含量(鲜重)为0.050％，甘薯块根中红景天苷含量(鲜重)为0.007％，对照组的叶或块根中均检测不到红景天苷。

实施例20：含有红景天苷的葡萄

1、栽培方法：在土壤中生长的葡萄开始挂果后，向葡萄的叶片喷洒0.3％对羟基苯乙醇水溶液，每隔5天喷洒一次，共喷洒4次，最后一次喷洒后第3天采收葡萄叶和果实。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得葡萄叶中红景天苷含量为0.038％，葡萄果实中红景天苷含量为0.008％，对照组的叶或果实中均检测不到红景天苷。

实施例21：含有红景天苷的葡萄

1、栽培方法：在土壤中生长的葡萄开始挂果后，向葡萄的叶片喷洒0.6％对羟基苯乙醇水溶液，每隔3天喷洒一次，共喷洒6次，最后一次喷洒后第4天采收葡萄叶和果实。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得葡萄叶中红景天苷含量为0.042％，葡萄果实中红景天苷含量为0.009％，对照组的叶或果实中均检测不到红景天苷。

实施例22：含有红景天苷的葡萄

1、栽培方法：在土壤中生长的葡萄开始挂果后，向葡萄的叶片喷洒0.8％对羟基苯乙醇水溶液，每隔4天喷洒一次，共喷洒4次，最后一次喷洒后第3天采收葡萄叶和果实。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得葡萄叶中红景天苷含量为0.048％，葡萄果实中红景天苷含量为0.008％，对照组的叶或果实中均检测不到红景天苷。

实施例23：含有红景天苷的凤眼莲

1、栽培方法：向在水中生长的凤眼莲的叶片喷洒0.1％对羟基苯乙醇水溶液，同时向其生长的水中加入对羟基苯乙醇使其浓度为10mmol/L，第5天采收凤眼莲叶。

同时设置对照组A和B；其中，对照组A与本实施例的区别仅在于，凤眼莲生长的水中不含对羟基苯乙醇；对照组B与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的水中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得凤眼莲叶中红景天苷含量(鲜重)为0.042％；对照组A所得凤眼莲中红景天苷含量(鲜重)为0.031％；对照组B所得凤眼莲中红景天苷含量(鲜重)为0.015％。

实施例24：含有红景天苷的凤眼莲

1、栽培方法：向在水中生长的凤眼莲的叶片喷洒0.2％对羟基苯乙醇水溶液，每隔5天喷洒一次，共喷洒三次；在第一次喷洒的同时向其生长的水中加入对羟基苯乙醇使其浓度为5mmol/L；最后一次喷洒后第2天采收凤眼莲叶。

同时设置对照组A和B；其中，对照组A与本实施例的区别仅在于，凤眼莲生长的水中不含对羟基苯乙醇；对照组B与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的水中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得凤眼莲叶中红景天苷含量(鲜重)为0.046％；对照组A所得凤眼莲中红景天苷含量(鲜重)为0.038％；对照组B所得凤眼莲中红景天苷含量(鲜重)为0.012％。

实施例25：含有红景天苷的凤眼莲

1、栽培方法：向在水中生长的凤眼莲的叶片喷洒0.8％对羟基苯乙醇水溶液，每隔5天喷洒一次，共喷洒三次；在第一次喷洒的同时向其生长的水中加入对羟基苯乙醇使其浓度为0.5mmol/L；最后一次喷洒后第2天采收凤眼莲叶。

同时设置对照组A和B；其中，对照组A与本实施例的区别仅在于，凤眼莲生长的水中不含对羟基苯乙醇；对照组B与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的水中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得凤眼莲中红景天苷含量(鲜重)为0.061％；对照组A所得凤眼莲中红景天苷含量(鲜重)为0.056％；对照组B所得凤眼莲中红景天苷含量(鲜重)为0.010％。

实施例26：含有红景天苷的凤眼莲

1、栽培方法：向在水中生长的凤眼莲的叶片喷洒0.5％对羟基苯乙醇水溶液，每隔3天喷洒一次，共喷洒四次；在第一次喷洒的同时向其生长的水中加入对羟基苯乙醇使其浓度为2mmol/L；最后一次喷洒后第2天采收凤眼莲叶。

同时设置对照组A和对照组B；其中，对照组A与本实施例的区别仅在于，凤眼莲生长的水中不含对羟基苯乙醇；对照组B与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的水中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得凤眼莲中红景天苷含量(鲜重)为0.056％；对照组A所得凤眼莲中红景天苷含量(鲜重)为0.041％；对照组B所得凤眼莲中红景天苷含量(鲜重)为0.012％。

实施例27：含有红景天苷的马铃薯

1、栽培方法：向在土壤中生长的马铃薯的叶片喷洒0.6％对羟基苯乙醇水溶液，每隔5天喷洒一次，共喷洒四次；在第一次喷洒的同时向其生长的土壤中加入对羟基苯乙醇使其浓度为每公斤土壤中5g；最后一次喷洒后第2天采收马铃薯叶和块根。

同时设置对照组A和B；其中，对照组A与本实施例的区别仅在于，马铃薯生长的土壤中不含对羟基苯乙醇；对照组B与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的水中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得马铃薯叶中红景天苷含量(鲜重)为0.058％，马铃薯块根中红景天苷含量(鲜重)为0.013％；对照组A所得马铃薯叶中红景天苷含量(鲜重)为0.051％，马铃薯块根中红景天苷含量(鲜重)为0.011％；对照组B所得马铃薯叶中红景天苷含量(鲜重)为0.012％，马铃薯块根中红景天苷含量(鲜重)为0.004％。

实施例28：含有红景天苷的马铃薯

1、栽培方法：向在土壤中生长的马铃薯的叶片喷洒0.4％对羟基苯乙醇水溶液，每隔3天喷洒一次，共喷洒7次；在第一次喷洒的同时向其生长的土壤中加入对羟基苯乙醇使其浓度为每公斤土壤中10g；最后一次喷洒后第3天采收马铃薯叶和块根。

同时设置对照组A和B；其中，对照组A与本实施例的区别仅在于，马铃薯生长的土壤中不含对羟基苯乙醇；对照组B与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的水中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得马铃薯叶中红景天苷含量(鲜重)为0.056％，马铃薯块根中红景天苷含量(鲜重)为0.014％；对照组A所得马铃薯叶中红景天苷含量(鲜重)为0.048％，马铃薯块根中红景天苷含量(鲜重)为0.010％；对照组B所得马铃薯叶中红景天苷含量(鲜重)为0.015％，马铃薯块根中红景天苷含量(鲜重)为0.006％。

实施例29：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒0.5％对羟基苯乙酸溶液，每隔5天喷洒一次，共喷洒5次，最后一次喷洒后第3天采收益母草叶，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙酸。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.018％，对照组检测不到红景天苷。

实施例30：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒10％对羟基苯乙酸悬浊液，每隔30天喷洒一次，共喷洒2次，最后一次喷洒后第2天采收益母草叶，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙酸。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.008％，对照组检测不到红景天苷。

实施例31：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒2％对羟基苯乙酸悬浊液，每隔15天喷洒一次，共喷洒3次，最后一次喷洒后第10天采收益母草叶，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙酸。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.010％，对照组检测不到红景天苷。

实施例32：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒0.01％对羟基苯乙酸水溶液，每隔1天喷洒一次，共喷洒10次，最后一次喷洒后第2天采收益母草叶，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙酸。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.009％，对照组检测不到红景天苷。

实施例33：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒0.5％对羟基苯乙胺悬浊液，每隔4天喷洒一次，共喷洒4次，最后一次喷洒后第4天采收益母草叶，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙胺。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.016％，对照组检测不到红景天苷。

实施例34：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒10％对羟基苯乙胺悬浊液，每隔30天喷洒一次，共喷洒2次，最后一次喷洒后第3天采收益母草叶，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙胺。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.006％，对照组检测不到红景天苷。

实施例35：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒2％对羟基苯乙胺悬浊液，每隔10天喷洒一次，共喷洒4次，最后一次喷洒后第7天采收益母草叶，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙胺。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.007％，对照组检测不到红景天苷。

实施例36：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒0.01％对羟基苯乙胺悬浊液，每隔1天喷洒一次，共喷洒10次，最后一次喷洒后第2天采收益母草叶，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙胺。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.005％，对照组检测不到红景天苷。

实施例37：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒0.5％对羟基苯乙胺悬浊液，以后每隔7天喷洒一次0.5％对羟基苯乙醇溶液，共喷洒对羟基苯乙醇溶液3次，最后一次喷洒后第3天采收益母草叶，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙胺或对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.041％，对照组检测不到红景天苷。

实施例38：含有红景天苷的益母草

1、栽培方法：向水培生长的益母草的叶片喷洒含有0.5％对羟基苯乙醇和0.2％对羟基苯乙胺的混合悬浊液，以后每隔4天喷洒一次，共喷洒4次，最后一次喷洒后第4天采收益母草叶，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇和对羟基苯乙胺。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得益母草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.064％，对照组检测不到红景天苷。

实施例39：富含有红景天苷的女贞

1、栽培方法：向树龄一年以上的已开始挂果的女贞树的叶片喷洒0.5％对羟基苯乙醇溶液，每隔5天喷洒一次，共喷洒5次，最后一次喷洒后第5天采收叶子和果实，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得女贞叶中红景天苷含量(鲜重)为0.098％，女贞果实中红景天苷含量(鲜重)为0.018％；对照组所得女贞叶中红景天苷含量(鲜重)为0.051％，女贞果实中红景天苷含量(鲜重)为0.011％。

实施例40：富含有红景天苷的小叶女贞

1、栽培方法：向树龄一年以上的已开始挂果的小叶女贞树的叶片喷洒0.9％对羟基苯乙醇溶液，每隔4天喷洒一次，共喷洒4次，最后一次喷洒后第3天采收叶子和果实，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得小叶女贞叶中红景天苷含量(鲜重)为0.110％，小叶女贞果实中红景天苷含量(鲜重)为0.025％；对照组所得小叶女贞叶中红景天苷含量(鲜重)为0.061％，小叶女贞果实中红景天苷含量(鲜重)为0.014％。

实施例41：富含有红景天苷的杜鹃

1、栽培方法：向土壤栽培的杜鹃叶片喷洒1.0％对羟基苯乙醇溶液，每隔3天喷洒一次，共喷洒2次，最后一次喷洒后第3天采收叶子，即得。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得杜鹃叶中红景天苷含量(鲜重)为0.080％；对照组所得杜鹃叶中红景天苷含量(鲜重)为0.031％。

实施例42：含有红景天苷的小麦

1、栽培方法：向在土壤中生长的小麦的叶片喷洒0.6％对羟基苯乙醇水溶液，每隔5天喷洒一次，共喷洒4次，最后一次喷洒后的第3天采收小麦叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得小麦叶中红景天苷含量(鲜重)为0.044％，对照组检测不到红景天苷。

实施例43：含有红景天苷的香茅草

1、栽培方法：向在土壤中生长的香茅草的叶片喷洒0.8％对羟基苯乙醇水溶液，每隔6天喷洒一次，共喷洒3次，最后一次喷洒后的第3天采收香茅草叶。

同时设置对照组，对照组与本实施例的区别仅在于，向叶片喷洒的溶剂中不含对羟基苯乙醇。

2、红景天苷的检测：检测方法同实施例1。

由检测结果可知，本实施例所得香茅草叶中红景天苷含量(鲜重)为0.075％，对照组检测不到红景天苷。

实施例44：提取红景天苷

将实施例8所获得的益母草作为红景天苷提取原料。

提取步骤为：将采收的新鲜益母草，加水5倍量，煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20，放冷，用等体积正丁醇萃取2次，合并正丁醇萃取液，减压浓缩至无醇味，加2倍量水稀释后，以1BV(床体积)/h通过AB-8大孔吸附树脂柱，先用2倍床体积的水洗涤，弃去，再2倍床体积的10％乙醇洗涤，弃去，再用4倍床体积20％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至干，得粗提取物，加甲醇适量溶解后，加3倍粗提取物重量的硅胶，混匀，加入20倍粗提取物重量的硅胶柱上部，用10倍床体积甲醇－氯仿(2:8)溶液，进行洗脱，收集洗脱液，减压蒸干，用10倍体积的无水乙醇在10℃以下结晶，晶浆离心分离，无水乙醇洗涤后，真空干燥，得红景天苷；所得纯度为99.4％的红景天苷，收率为25.5％。

实施例45：直接食用

将实施例21获得的葡萄果实，直接食用。

实施例46：制备含有红景天苷的保健食品

将实施例21获得的葡萄果实，作为制备保健饮料的原料。

取实施例21所得成熟的葡萄果实3kg，用开水烫过后，破碎、榨汁、得到葡萄汁，然后在1kg葡萄汁中添加氯化钠20g和0.5％山梨酸，溶解混匀后灭菌，含有红景天苷的葡萄汁即得。

所得葡萄汁具有缓解运动疲劳、增强免疫力、提高缺氧耐受力、抗氧化和对肝损伤的辅助保护功能。

实施例47：制备含有红景天苷的食品添加剂

将实施例25所获得的凤眼莲，作为制备食品添加剂的原料。

取实施例25所得凤眼莲，加水6倍量，煎煮1小时，煎液滤过，滤液浓缩成稠膏后，于60℃真空干燥得干膏，粉碎后即可作为食品添加剂使用。

所述食品添加剂加入饮料中，可使饮料具有红景天苷解除疲劳的保健功能。

实施例48：制备含有红景天苷的药物

将实施例25所得凤眼莲，所得作为制备药物的原料。

取实施例25所得凤眼莲，加水煎煮2次，每次加水6倍量，煎煮1小时，煎液合并滤过，滤液浓缩成稠膏后，于60℃真空干燥得干膏，粉碎后，取干膏粉350g，加入药用淀粉50g，按常规制药工艺制成片剂。

所述药物可用于治疗和预防高原反应，或者用于治疗冠心病，脑梗塞，老年性痴呆症等疾病。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (5)

1.一种含红景天苷的植物的栽培方法，其特征在于，包括以下步骤：向生长的植物叶片喷洒对羟基苯乙醇，在第一次喷洒的同时，向植物生长的水体或土壤中加入对羟基苯乙醇；采收，即得含红景天苷的植物；

所述植物的体内含有尿苷二磷酸葡萄糖和葡萄糖基转移酶；

所述方法包括以下步骤：向水培生长的植物叶片喷洒3～5次浓度0.2～0.8％的对羟基苯乙醇水溶液，各次喷洒的时间间隔为2～5天；在第一次喷洒的同时向其生长的水中加入对羟基苯乙醇使其浓度为0.5～5mmol/L；最后一次喷洒后第2～5天采收，即得；

或，所述方法包括以下步骤：向土壤栽培生长的植物叶片喷洒3～5次浓度0.2～0.8％的对羟基苯乙醇水溶液，各次喷洒的时间间隔为2～5天；在第一次喷洒的同时向其生长的土壤中加入对羟基苯乙醇使其浓度为每公斤土壤中1～10g；最后一次喷洒后第2～5天采收，即得。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对羟基苯乙醇由对羟基苯乙胺或对羟基苯乙酸中的一种或两种代替。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述植物选自粮食作物、蔬菜、果树、茶树、药用植物。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述植物为益母草、烟草、水稻、杜仲、银杏、马铃薯、甘薯、葡萄、小麦、女贞、小叶女贞、杜鹃、香茅草或凤眼莲。

5.权利要求1～4任意一项所述方法栽培得到的含红景天苷的植物的应用，其特征在于，所述植物作为食材直接食用，或作为原料提取红景天苷，或作为原料制备保健食品、食品添加剂、药物。