CN109580833B - 一种西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物分析技术领域，具体来说，涉及到一种西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法。所述测定方法步骤如下：选择手性冠醚硅胶为填充剂；以高氯酸溶液和乙腈的混合溶液为流动相；样品配制用水溶解西格列汀原料及制剂。与现有技术相比，本发明所述西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法可以将西格列汀或其盐与西格列汀的对映异构体进行分离，有效控制西格列汀原料药及其制剂的质量；其专属性强、准确性强、精密度高、耐用性好，且操作方便，在实际生产中能够有效控制原料药及制剂的质量。

Description

一种西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体来说，涉及到一种西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法。

背景技术

磷酸西格列汀(Sitagliptin)是一类被称为二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂的口服抗高血糖药物，在2型糖尿病患者中可通过增加活肠促胰岛激素的水平而改善血糖控制。西格列汀能够防止DPP-4水解肠促胰岛激素，从而增加活性形式的GLP-1和GIP的血浆浓度。通过增加活性肠促胰岛激素水平，西格列汀能够以葡萄糖依赖的方式增加胰岛素释放并降低胰高糖素水平。对于存在高血糖症的2型糖尿病患者，胰岛素和胰高糖素水平发生的上述变化可降低糖化血红蛋白A1c(HbA1c)并降低空腹血糖和餐后血糖水平。西格列汀的葡萄糖依赖性作用机制与磺酰脲类药物的作用机制不同，即使在葡萄糖水平较低时，磺酰脲类药物也可增加胰岛素分泌，从而在2型糖尿病患者和正常受试者人体中导致低血糖。西格列汀是一种有效和高度选择性的DPP-4酶抑制剂，在治疗浓度下不会抑制与DPP-4密切相关的DPP-8或DPP-9。

手性药物(Chiral drug)是指药物分子的结构中引入手性中心后，得到的一对互为实物与镜像的对映异构体。这些对映异构体的理化性质基本相似，仅仅是旋光性有所差别。含有手性因素的化学药物的对映体在人体内的药理活性、代谢过程及毒性存在着显著的差异。因此，往往两种异构体中仅有一种是有效的，另一种无效甚至是有害的。

磷酸西格列汀的对映异构体杂质(S型)化学结构如下：

USP39中收载了该品种对映异构体的检测方法，但在实际检测中仍存在问题，对映异构体和主峰的分离度不好，不能达到基线分析，会影响对映异构体的检测。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种高分离度的西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法。

本发明所述的一种西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法，所述测定方法具体步骤如下：

1)色谱柱：手性冠醚硅胶为填充剂；流速：0.2～0.5mL/min；检测波长：250～280nm；柱温：20～30℃；流动相：高氯酸溶液:乙腈＝(90:10)～(70:30)，高氯酸溶液由16.3g高氯酸，用水稀释成pH1.0所得；

2)样品溶液的配制：将待检测样品用水配制1mg/ml的溶液；将该溶液直接放入-80℃放置2h，然后在25-28℃下放置1h，得样品溶液；

3)分离分析：将样品溶液1～10μL，注入高效液相色谱仪，完成西格列汀原料药及制剂中对映异构体杂质的测定。

本发明所述的西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法，所述对映异构体杂质的存在形式为7-[(3R)-3-氨基-1-氧-4-(2,4,5-三氟苯基)丁基]-5,6,7,8-四氢-3-(三氟甲基)-1,2,4-***酮[4,3-a]吡嗪及其药学上可接受的盐。

本发明所述的西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法，所述柱温为20～25℃；所述检测波长为260～270nm；所述流动相含有甲酸、乙酸、丙酸、冰醋酸、三氟乙酸或高氯酸。

本发明所述的西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法，所述药学上可接受的盐是磷酸盐；所述色谱柱为

CR-I(-)色谱柱；所述流动相的流速为0.2mL/min；所述柱温为20℃；所述检测波长为268nm；所述流动相含有高氯酸；所述高氯酸溶液与乙腈的比例为80:20；所述进样量为5μL。

本发明所述的西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法，所述制剂为普通片剂、包衣片剂、分散片、胶囊剂或颗粒剂。

与现有技术相比，本发明所述西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法可以通过改变西格列汀的对映异构体的晶形，将西格列汀或其盐与西格列汀的对映异构体进行分离，有效控制西格列汀原料药及其制剂的质量；其专属性强、准确性强、精密度高、耐用性好，且操作方便，在实际生产中能够有效控制原料药及制剂的质量。

附图说明

图1为西格列汀混标中对映异构体杂质含量测定色谱图；图2为磷酸西格列汀原料中对映异构体杂质含量测定色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明所述西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法作进一步说明，但是本发明的保护范围并不限于此。

实施例1

西格列汀中对映异构体杂质的拆分实验：将含有西格列汀及其对映异构体的对照品溶于稀释剂中并稀释至浓度各为0.1mg/mL作为供试品溶液；以手性冠醚硅胶为填充剂，以高氯酸-乙腈混合溶液为流动相，用高效液相色谱***分离；所述的稀释剂为水。所述色谱柱为

CR-I(-)色谱柱，流动相为pH1.0的高氯酸溶液(取16.3g高氯酸，用水稀释至1000ml)-乙腈(80:20)，流速为0.2ml/min，色谱柱柱温为20℃，检测波长为268nm。精密量取供试品溶液5μL注入液相色谱仪，记录色谱图，洗脱时间为15min。色谱分离结果为：西格列汀色谱峰保留时间为8.463min，西格列汀异构体色谱峰保留时间为7.682min，两者分离度为1.46。

实施例2

西格列汀中对映异构体杂质的拆分实验：将含有西格列汀及其对映异构体的对照品溶于稀释剂中并稀释至浓度各为0.1mg/mL的溶液，再将该溶液直接放入-80℃放置2h，然后在25-28℃下放置1h，得供试品溶液；以手性冠醚硅胶为填充剂，以高氯酸-乙腈混合溶液为流动相，用高效液相色谱***分离；所述的稀释剂为水。所述色谱柱为

CR-I(-)色谱柱，流动相为pH1.0的高氯酸溶液(取16.3g高氯酸，用水稀释至1000ml)-乙腈(80:20)，流速为0.2ml/min，色谱柱柱温为20℃，检测波长为268nm。精密量取供试品溶液5μL注入液相色谱仪，记录色谱图，洗脱时间为15min。色谱分离结果见附图1所示，从附图1中可以看出，西格列汀色谱峰保留时间为8.447min，西格列汀异构体色谱峰保留时间为6.346min，两者分离度为3.81。西格列汀异构体出峰时间的延后，估计与改变西格列汀的对映异构体的晶形有关。

实施例3

磷酸西格列汀原料中对映异构体杂质的含量测定实验：取磷酸西格列汀原料溶于稀释剂中并稀释至浓度1mg/mL的溶液，再将该溶液直接放入-80℃放置2h，然后在25-28℃下放置1h，得供试品溶液；以手性冠醚硅胶为填充剂，以高氯酸-乙腈混合溶液为流动相，用高效液相色谱***分离；所述的稀释剂为水。所述色谱柱为

CR-I(-)色谱柱，流动相为pH1.0的高氯酸溶液(取16.3g高氯酸，用水稀释至1000ml)-乙腈(80：20)，流速为0.2ml/min，色谱柱柱温为20℃，检测波长为268nm。精密量取供试品溶液5μL注入液相色谱仪，记录色谱图，洗脱时间为15min。色谱分离结果见附图2所示，从附图2中可以看出，西格列汀异构体与西格列汀色谱峰能够良好的分离，并能够很好的检出。

Claims (4)

1.一种西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法，其特征在于，所述测定方法具体步骤如下：

1）色谱柱：手性冠醚硅胶为填充剂；流速：0.2~0.5mL/min；检测波长：250~280 nm；柱温：20~30℃；流动相：体积比为90:10~70:30的高氯酸溶液和乙腈；高氯酸溶液由16.3g高氯酸，用水稀释成pH1.0所得；

2）样品溶液的配制：将待检测样品用水配制1mg/mL的溶液；将该溶液在-80℃下放置2h，然后在25-28℃下放置1h，得样品溶液；

3）分离分析：将样品溶液1~10μL，注入高效液相色谱仪，完成西格列汀原料药及制剂中对映异构体杂质的测定；

所述对映异构体杂质的存在形式为7-[(3R)-3-氨基-1-氧-4-(2,4,5-三氟苯基)丁基]-5,6,7,8-四氢-3-(三氟甲基)-1,2,4-***酮[4,3-a]吡嗪及其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法，其特征在于，所述柱温为20~25℃；所述检测波长为260~270nm。

3.根据权利要求1所述的西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法，其特征在于，所述药学上可接受的盐是磷酸盐；所述色谱柱为CROWNPAK® CR-I(-)色谱柱；所述流动相的流速为0.2mL/min；所述柱温为20℃；所述检测波长为268nm；所述流动相含有高氯酸；所述高氯酸溶液与乙腈的体积比为80:20；进样量为5μL。

4.根据权利要求1所述的西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法，其特征在于，所述制剂为普通片剂、包衣片剂、分散片、胶囊剂或颗粒剂。

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