CN109567188A - 一种含蜂胶提取物的保健食品组合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种含蜂胶提取物的保健食品组合物,其特征在于,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物15~25份、枸杞提取物4~12份以及酸枣仁提取物5~15份,并采用现代化工艺制备了上述组合物中的各提取物,提取效率高,将上述药物组合物用在制备预防老年痴呆的膳食营养补充剂中,效果较好。
Description
技术领域
本发明涉及食品领域,尤其涉及一种含保健食品组合物及其制备方法和用途。
背景技术
阿尔茨海默症是老年人中常见的一种原发性退行性脑部疾病,临床表现为智力下降、言语交流困难、情感障碍和行动障碍等,据统计,我国>65岁老年痴呆症年发病率约为24%,全球老年痴呆症患者总数约3560 万例,且随着老年人口的快速增长,老年痴呆的发病也必然增加,严重影响老年人的身心健康,同时也增加社会和家庭的负担,阿尔茨海默症患者大幅剧增,成为老龄化社会一个突出的社会问题目前市场上针对老年人改善记忆的中药保健食品,或配方不合理、或提取方法不恰当,或剂型服用不方便,导致人体吸收效果不好,以致对记忆力的改善效果不明显。因此,亟待需研发一种组方配伍合理、活性成分含量较高的保健食品组合物。
发明内容
(一)发明目的:
本发明的目的旨在提供一种组方合理有效、以现代提取工艺为依托,具有增强记忆力、提高认知作用的保健食品组合物。
一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物15~25份、枸杞提取物5~15份以及酸枣仁提取物5~15份。
优选的,一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物16~24份、枸杞提取物6~12份以及酸枣仁提取物6~12份。
进一步优选的,一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物18~20份、枸杞提取物8~10份以及酸枣仁提取物8~10份。
如上所述的任一种保健食品组合物,还含有药学上可接受的载体。
一种保健食品组合物的制备方法,按比例称取上述提取物,分别粉碎、过筛,混合均匀后,填充胶囊即得;
其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;
(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在30~50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:(5~10),所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3~5%,所述的复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为(2~8):1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2~4小时;
(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量20~30倍的去离子水进行提取,重复1-3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为 4-10Mpa、温度为100-200℃、时间为5-20min;
(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在 800-1500r/min 条件下离心
10-30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在40~60℃、转速为400~600r/min、真空度为0.1~0.5Mpa条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物;
优选的,所述步骤(2)中,酶解温度为45℃,蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为6:1;所述酶解时间为3小时;
优选的,所述步骤(3)中,去离子水质量为蜂胶颗粒质量的25倍,萃取压力为 6Mpa、温度为 160℃、时间为12 min;
优选的,所述步骤(4)中,离心转速为1400r/min,离心时间20min;浓缩温度为 50℃、转速为 500r/min、真空度为 0.3Mp。
上述组合物中,所述枸杞提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:将枸杞置于阴凉处,自然晾干,将其粉碎成颗粒并过80目筛;
(2)复合酶水解:向步骤(1)所述枸杞颗粒中加入一定量的复合酶水溶液,在30~50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述枸杞颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:(5~10),所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.5~1%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为(3~5):1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为1~3小时;
(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入枸杞颗粒质量15~30倍的去离子水进行提取,重复1-3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为 2~10Mpa、温度为 100-200℃、时间为5-30min;
(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在 800~1500r/min 条件下离心
10~30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在 40~60℃、转速为 400~600r/min、真空度为 0.1~0.5Mpa 条件下,浓缩至干并粉碎,即得枸杞提取物。
优选的,所述步骤(2)中,酶解温度为45℃;枸杞颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8;复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.6%;所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为4:1:1;所述酶解时间为2小时;
优选的,所述步骤(3)中,去离子水质量为枸杞颗粒的20倍,重复萃取2次,萃取压力为4Mpa、温度为 180℃、时间为20 min;
优选的,所述步骤(4)中,离心转速为1400r/min、时间为20min;浓缩温度为50℃、转速为500r/min、真空度为 0.3Mp。
上述组合物中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步
骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量5~15倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为60~80%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为15~25 mg/mL,超声提取的功率为200W、温度50~70℃、提取时间为1~2 h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作2~4次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置10~15h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物;
优选的,所述提取用乙醇的用量为酸枣仁质量的10倍量;乙醇浓度为70%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为20 mg/mL,超声提取的温度60℃,提取时间为1.5 h;重复上述提取、过滤的操作3次;萃取静置的时间为12h。
本发明还提供一种用途,上述任一种保健食品组合物用在制备预防老年痴呆膳食营养补充剂中。
有益效果
与现有技术相比,本发明体现的技术优点体现在以下几个方面:
(1)本发明采用蜂胶、枸杞、酸枣仁复配的组合物,通过实验筛选出最
为合适的组合比例,达到了较好的延缓脑部衰老、增强记忆力的保健功效。
蜂胶(propolis)是蜜蜂从植物芽孢或树干破皮伤处采集来的树脂(树胶),并混入蜜蜂上颚腺的分泌物,与蜂蜡、少量花粉等加工而成的一种具有芳香气味和黏性的胶状固体物质。蜂胶是蜜蜂用于维持整个群体健康的有效物质,一个5~6万只的蜂群一年只能生产蜂胶100~150g,因此被誉为“紫色黄金”。近年来的研究证明,蜂胶所含有的丰富而独特的生物活性物质,使其具有抗菌、消炎、止痒、抗氧化、抗衰老、增强记忆力、免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种功能,对人体有着广泛的医疗、保健作用,是一种具有较高保健功能的产品。
枸杞(Lycium barbarum L.)以果实入药,以其较高的营养学和药理学价值,在食品和中医药领域得到广泛应用。研究表明枸杞果实中的功能成分主要是枸杞多糖、黄酮、类胡萝卜素、酚酸、甜菜碱、维生素、不饱和脂肪酸、牛磺酸、莨菪亭、甾醇类及萜类化合物,这些功能成分与枸杞果实的抗氧化活性密切相关,也是枸杞果实调节机体免疫力、抑制肿瘤生长、延缓衰老、抗疲劳、降血压、保肝、改善不育、改善视力的主要成分。随着枸杞产业的发展,枸杞功能性食品的研究和开发急需加强,特别是枸杞作为抗氧化食品基本材料的应用,有广阔的发展前景。
酸枣仁为鼠李科植物酸枣(Ziziphus jujube Mill)的干燥成熟种子,主产于河北、陕西、辽宁、河南等地。酸枣仁是中医安神之要药,用于虚烦、失眠、心悸、体虚多汗诸症有显著疗效,而且具有补肝、宁心、敛汗、生津的作用,《神农本草经》将其列为上品,《本草纲目》将其列为本部类,《中药学》列为养心安神类药。现代医学研究也表明,酸枣仁有镇静催眠作用。
本发明通过对数十种中药材进行组方和筛选,选出较为合适的上述三种药物进行组方,功效彼此增益,达到协同增效,具有良好的防治记忆力减退、安神健脑的功效。
(2)本发明采用酶解辅助亚临界水萃取法提取蜂胶、枸杞中的活性成分。首先,酶解方法温和,不使用过多的有机溶剂,提取效率较高,仅使用较少的酶就能达到破壁的作用,不引入过多杂质,环保清洁。另外,本发明筛选出最为恰当的复合酶组合物和比例,能够显著提高提取效率。 其次,蜂胶中的主要活性成分为黄酮,枸杞中的主要活性成分为多糖,均属于极性较大的成分,现有技术中多采用溶剂提取法,使用大量的有机溶剂,提取效率低下且不环保;近年来,也有采用超临界CO2萃取技术提取,但是面对极性成分,并未获得良好的收效。
亚临界水萃取技术是近年来新兴的技术,亚临界水 (Sub-critical water,SCW)也称之为高温水、超加热水、高压热水或热液态水,是指在一定压力下,将水加热到 100℃以上临界温度以下的高温,水体仍然保持在液体状态。研究发现它成为很多传统氧化反应的一种可能的溶剂,这些反应包括碳碳键的形成、异构化、脱氢、水解、部分氧化以及氢和氚的交换反应等等。通过对亚临界水温度和压力的控制可以改变水的极性、表面张力和粘度。温度升高,极性降低,亚临界水对有机物的溶解能力大大增加。以亚临界水为环境友好型溶剂,可以改变萃取体系的相行为、加速溶剂化效应,变传统溶剂条件下的多相反应为单反应,增大扩散系数,较低传质和传热阻力,可以在更短时间内达到萃取平衡,缩短处理时间,还能通过亚临界体系的温度与压力来控制提取产物的分布,并且仅使用环保的水作为溶剂,对于工业扩大化生产具有十分显著的经济效益。
(3)酸枣仁提取液中加入表面活性剂可以增加活性成分皂苷的溶解度,有助于提高溶剂的提取率。本发明通过实验,筛选出最适合组分的表面活性剂及其用量。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了,下面结合具体实施方式,对本发明进一步详细说明。应该理解,这些描述只是示例性的,而并非要限制本发明的范围。显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
(一)实施例
1、实施例1
一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物19克、
枸杞提取物9克以及酸枣仁提取物9克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎成颗粒、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得;
其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为6:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为3小时,得复合酶解液;
(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量25倍的去离子水,合并提取液,获得萃取液,所述的压力为6Mpa、温度为 160℃、时间为12min;
(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在 1400r/min 条件下离心20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在 50℃、转速为 500r/min、真空度为 0.3Mpa 条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物。
其中,所述枸杞提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:将枸杞置于阴凉处,自然晾干,将其粉碎成颗粒并过80目筛;
(2)复合酶水解:向步骤(1)所述枸杞颗粒中加入一定量的复合酶水溶液,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述枸杞颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.6%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为4:1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2小时;
(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入枸杞颗粒质量20倍的去离子水进行提取,重复萃取2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为4Mpa、温度为 180℃、时间为20min;
(4)精制 :将步骤(3)获得的萃取液在 1400r/min 条件下离心
20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在 50℃、转速为 500r/min、真空度为 0.3Mpa 条件下,浓缩至干并粉碎,即得枸杞提取物。
上述组合物中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步
骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量10倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为70%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为20 mg/mL,超声提取的功率为200W、温度60℃、提取时间为1.5 h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作3次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置12h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物。
2、实施例2
一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物18克、
枸杞提取物8克以及酸枣仁提取物8克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。
其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在30℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:5,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为2:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量20倍的去离子水进行提取,重复1次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为 4Mpa、温度为100℃、时间为5min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在800r/min 条件下离心10min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在40℃、转速为400r/min、真空度为 0.1Mpa 条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物。
其中,所述枸杞提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:将枸杞置于阴凉处,自然晾干,将其粉碎成颗粒并过80目筛;(2)复合酶水解:向步骤(1)所述枸杞颗粒中加入一定量的复合酶水溶液,在30℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述枸杞颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:5,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.5%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为3:1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为1小时;
(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入枸杞颗粒质量15倍的去离子水进行提取,重复1次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为2Mpa、温度为100℃、时间为5min;
(4)精制 :将步骤(3)获得的萃取液在 800r/min 条件下离心10min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在 40℃、转速为 400r/min、真空度为 0.1Mpa 条件下,浓缩至干并粉碎,即得枸杞提取物。
其中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量5倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为60%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为15mg/mL,超声提取的功率为200W、温度50℃、提取时间为1h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作2次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置10h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物。
3、实施例3
一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物20克、
枸杞提取物10克以及酸枣仁提取物10克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。
上述组合物中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:10,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为5%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为8:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为4小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量30倍的去离子水进行提取,重复3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为 8Mpa、温度为180℃、时间为20min;(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在 1500r/min 条件下离心30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在60℃、转速为600r/min、真空度为0.5Mpa 条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物。
上述组合物中,所述枸杞提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:将枸杞置于阴凉处,自然晾干,将其粉碎成颗粒并过80目筛;(2)复合酶水解:向步骤(1)所述枸杞颗粒中加入一定量的复合酶水溶液,在50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述枸杞颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:10,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为1%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为5:1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为3小时;(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入枸杞颗粒质量30倍的去离子水进行提取,重复3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为10Mpa、温度为 180℃、时间为30 min;(4)精制 :将步骤(3)获得的萃取液在1500r/min 条件下离心30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在60℃、转速为600r/min、真空度为 0.5Mpa 条件下,浓缩至干并粉碎,即得枸杞提取物。
上述组合物中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步
骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量15倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为80%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为25 mg/mL,超声提取的功率为200W、温度70℃、提取时间为2 h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作4次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置15h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物。
4、实施例4
一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物16克、
枸杞提取物6克以及酸枣仁提取物6克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。其中,所述蜂胶、枸杞、酸枣仁提取物的制备方法同实施例1。
5、实施例5
一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物24克、
枸杞提取物12克以及酸枣仁提取物12克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。其中,所述蜂胶、枸杞、酸枣仁提取物的制备方法同实施例1。
6、对比例1
一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物19克、
枸杞提取物18克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。
其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为6:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为3小时,得复合酶解液;
(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量25倍的去离子水,合并提取液,获得萃取液,所述的压力为6Mpa、温度为 160℃、时间为12min;
(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在 1400r/min 条件下离心20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在 50℃、转速为 500r/min、真空度为 0.3Mpa 条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物。
其中,所述枸杞提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:将枸杞置于阴凉处,自然晾干,将其粉碎成颗粒并过80目筛;
(2)复合酶水解:向步骤(1)所述枸杞颗粒中加入一定量的复合酶水溶液,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述枸杞颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.6%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为4:1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2小时;
(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入枸杞颗粒质量20倍的去离子水进行提取,重复萃取2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为4Mpa、温度为 180℃、时间为20min;
(4)精制 :将步骤(3)获得的萃取液在 1400r/min 条件下离心
20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在 50℃、转速为 500r/min、真空度为 0.3Mpa 条件下,浓缩至干并粉碎,即得枸杞提取物。
7、对比例2
一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物19克、酸枣仁提取物18克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。
其中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在45℃下进行酶解,其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3.5%,所述的复合酶中脂肪酶:果胶酶组成二者质量比为6:1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为3小时,得复合酶解液;
(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量25倍的去离子水,合并提取液,获得萃取液,所述的压力为6Mpa、温度为 160℃、时间为12min;
(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在 1400r/min 条件下离心20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在 50℃、转速为 500r/min、真空度为 0.3Mpa 条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物。
上述组合物中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步
骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量10倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为70%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为20 mg/mL,超声提取的功率为200W、温度60℃、提取时间为1.5 h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作3次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置12h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物。
8、对比例3
一种保健食品组合物,由以下重量份数的组分制成:枸杞提取物18克
以及酸枣仁提取物18克。按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过80目筛,混合均匀后,填充胶囊即得。
其中,所述枸杞提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:将枸杞置于阴凉处,自然晾干,将其粉碎成颗粒并过80目筛;
(2)复合酶水解:向步骤(1)所述枸杞颗粒中加入一定量的复合酶水溶液,在45℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述枸杞颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:8,所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.6%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为4:1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2小时;
(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入枸杞颗粒质量20倍的去离子水进行提取,重复萃取2次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为4Mpa、温度为 180℃、时间为20min;
(4)精制 :将步骤(3)获得的萃取液在 1400r/min 条件下离心
20min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在 50℃、转速为 500r/min、真空度为 0.3Mpa 条件下,浓缩至干并粉碎,即得枸杞提取物。
上述组合物中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量10倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为70%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为20 mg/mL,超声提取的功率为200W、温度60℃、提取时间为1.5 h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作3次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置12h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物。
技术效果测试
(一)含量测定
1 材料与方法
1.1 试验材料:实施例1中蜂胶、枸杞、酸枣仁提取物以及实施例1-5以及对比例1-3组合物
1.2 主要试剂及仪器
芦丁、葡萄糖、酸枣仁皂苷A对照品均购自中国药品生物制品检定所;
其它设备、以及分析纯以及色谱纯级试剂均为市售。
1.3总黄酮含量的测定
标准曲线的绘制以及空白测定:精密吸取芦丁对照品使用溶液(0.2mg/m1)1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml,分别置于50mL容量瓶中。加无水乙醇至总体积为15mL,依次加入硝酸铝溶液(100mg/m1) 1m1,醋酸钾溶液(9.8mg/m1g/L) 1mL,摇匀,加水至刻度,摇匀。静置lh。用1cm比色杯于415nm处,以0.5ml 30%乙醇溶液为空白,测定吸光度。以50ml中芦丁质量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线或按直线回归方程计算。线性工作范围0mg-1.2mg (50mL)。
样品溶液的测定:精密称待测实施例1~4样品0.5g,置于50mL容量瓶中,加无水乙醇至总体积为15mL,依次加入硝酸铝溶液(100mg/m1) 1m1,醋酸钾溶液(9.8mg/m1)1mL,摇匀,加水至刻度,摇匀。静置1h。以空白试液作参比,用1 cm比色杯,在波长415二处测定试料溶液的吸光度。查标准曲线或通过回归方程计算,求出蜂胶中的黄酮类化合物含量(mg)。
1.4总多糖含量测定准确称取100mg葡萄糖对照品,以去离子水溶解并定容至100mL,精确量取葡萄糖标准工作液(1mg/mL) 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,分别置于试管中,各加去离子水使成2mL,各管中葡萄糖的质量浓度分别为0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mg/mL。吸取上述各管中的葡萄糖溶液0.5mL至于干净试管中,加5%苯酚试剂1.0mL摇匀。迅速滴加浓硫酸5.0mL,并迅速摇匀。静置5min,沸水浴15min取出。流动水冷却至室温。另以0.5mL去离子水同样操作,作空白对照,在490nm波长处测定吸光度。以葡萄糖质量浓度C为横坐标、吸光度A为纵坐标,制作标准曲线并得其回归方程为A=9.75C-1.09(R=0.9995)。多糖含量=(C1×V)/(m×D)×100%;式中:C1为样品溶液的质量浓度;V是样品溶液总体积;m为样品总质量;D为样品稀释倍数。样品溶液的制备:取实施例1中的枸杞提取物0.5g,加10ml无水乙醇定容,取0.5ml,在490nm波长处测定吸光度。
1.5总皂苷含量测定
色谱条件与***适应性实验:色谱柱( 色谱柱与设备均来自Aglient公
司,4.6 mm×250 mm,5μm ) ,流动相乙腈-水( 32∶ 68), 柱温 25℃,检测波长 281nm,流速1 mL·min -1,进样量10μL。酸枣仁皂苷 A的理论塔板数均>5000,分离度均>1.5,拖尾因子均符合测定需求。
对照品溶液的制备:分别取对照品酸枣仁皂苷A 2.4 mg置于10 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度。精密量取各对照品溶液5.0 mL置同一10 mL量瓶中,摇匀,得混合对照品溶液。
供试品溶液的制备:取实施例1制备的酸枣仁总皂苷提取物,加甲醇溶解并定容至10 mL,摇匀,经0. 45μm 微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
含量测定结果如下表1所示:
表1实施例1-3中各提取物含量测定结果(质量百分数)
组别 | 总黄酮含量(%) | 总多糖含量(%) | 总皂苷含量(%) |
实施例1 | 67.8 | 60.5 | 54.6 |
实施例2 | 64.5 | 54.6 | 51.3 |
实施例3 | 66.2 | 58.5 | 53.2 |
(二)药理实验活性测定
1.主要实验材料与仪器 阳性对照药盐酸为多奈哌齐片(卫材( 中国) 药业有限公司);治疗药物为实施例1-5获得的保健品组合物以及对比例6-8获得的保健品组合物,D-半乳糖、单胺氧化酶-B (MAOB)、超氧化物歧化酶( SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px ) 试剂盒以及其它常规设备均为市售。
2.实验动物 昆明种健康小鼠(雌雄各半, 体重22~25 g ) 由中国农业科学院蜜蜂研究所蜂产品室提供。3.方法 将110只小鼠随机分为11组: 正常组,模型组,阳性对照组,治疗组(实施例1~5以及对比例6~8), 每组10只。正常组以普通饮食喂养, 其余组小鼠腹腔注射 D-半乳糖100 mg · k g -1· d -1, 连续 6w , 建立小鼠 AD模型。同时,治疗组和对比例组每天分别灌胃药物100mg/kg , 阳性对照组每天灌胃50 mg /kg, 模型组灌胃等体积的生理盐水。第43天断头处死小鼠,开颅取脑,称重,从断头至称重在5 min内完成。根据公式计算脑指数, 脑指数=(脑重/体重)×100%。按重量体积比(1:9) 加生理盐水制成10%脑组织匀浆液,以3000 r /min,离心10mi n,4℃,取上清液, 用进行分析。4.统计学处理 应用 SPSS 17.0统计软件进行方差分析及t检验, 全部数据用x±s 表示。5.实验结果5.1对脑指数的影响
如表2所示模型组小鼠脑指数较低,与正常组比较, 差异有显著性 (P<0. 05); 阳性对照组以及实施例1~5实验组脑指数较高,与模型组比较差异显著(P<0. 05),与正常组比较, 无显著性差异;对比例1~3组脑指数介于二者中间,与实施例1~5实验组比较差异显著(P<0. 05) 。
表2各组脑指数数值
组别 | 脑指数(%) |
正常组 | 5.20 ±0.21 |
模型组 | 4.18±0.32 |
阳性对照组 | 5.22 ±0.40 |
实施例1 | 5.21 ±0.15 |
实施例2 | 5.04 ±0.36 |
实施例3 | 5.16 ±0.05 |
实施例4 | 5.20 ±0.03 |
实施例5 | 5.18 ±0.70 |
对比例6 | 4.75±0.36 |
对比例7 | 4.68±0.03 |
对比例8 | 4.72±0.23 |
5.2对脑中MAO-B、SOD、GSH-Px的影响
如表2所示,治疗组脑中MAO-B的含量明显低于模型组,与正常组和阳性对照组持平,而模型组MAO-B的含量显著高于正常组;对比例组略低于模型组,但是仍高于正常组。正常组脑中SOD的含量明显高于模型组;治疗组中SOD含量明显高于模型组,与正常组接近;对照组略高于模型组,低于治疗组和正常组。与正常组和模型组相比,各治疗组的GSH-Px含量明显升高,且略高于正常组。
表2 提取物组合物对AD模型小鼠脑中MAO-B、SOD、GSH-Px的影响
组别 | 剂量(mg/kg) | MAO-B(U·h<sup>-1</sup>·m<sup>-1</sup>) | SOD(U/mgProt) | GSH-Px(mmol) |
正常组 | - | 25.04±1.25 | 5.40±2.60 | 208.1±136.1 |
模型组 | - | 37.05±2.44 | 4.29±1.01 | 95.6±62.4 |
阳性对照组 | 50 | 24.99±2.04 | 5.42±1.26 | 288.3±32.5 |
实施例1 | 100 | 24.60±1.45 | 5.68±0.58 | 289.4±33.3 |
实施例2 | 100 | 25.40±1.80 | 5.50±0.23 | 285.0±25.3 |
实施例3 | 100 | 25.56±3.0 | 5.66±0.2 | 288.0±30.3 |
实施例4 | 100 | 25.05±2.11 | 5.60±0.48 | 288.1±20.3 |
实施例5 | 100 | 25.06±4.11 | 5.55±0.10 | 286.8±25.3 |
对比例6 | 100 | 31.03±1.24 | 4.50±1.26 | 195.5±39.1 |
对比例7 | 100 | 30.20±4.20 | 4.48±2.45 | 192.8±23.5 |
对比例8 | 100 | 30.43±1.20 | 4.78±0.65 | 196.5±20.5 |
由此可见,采用本发明方法提取的提取物,组方制备成组合物,具有显著的提高认知、治疗老年痴呆的作用,并且与提取物两两组合相比,蜂胶、枸杞、酸枣仁这三者组合,取得了较好的技术效果。
应当理解的是,本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释本发明的原理,而不构成对本发明的限制。因此,在不偏离本发明的精神和范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。此外,本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。
Claims (6)
1.一种保健食品组合物,其特征在于,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物15~25份、枸杞提取物5~15份以及酸枣仁提取物5~15份。
2.根据权利要求1所述的保健食品组合物,其特征在于,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物16~24份、枸杞提取物6~12份以及酸枣仁提取物6~12份。
3.根据权利要求2所述的保健食品组合物,其特征在于,由以下重量份数的组分制成:蜂胶提取物18~20份、枸杞提取物8~10份以及酸枣仁提取物8~10份。
4.根据权利要求1-3任一项所述的保健食品组合物,其特征在于,还含有食品上可接受的载体。
5.根据权利要求1-3任一项所述保健食品组合物的制备方法,其特征在于,按比例称取上述各提取物,分别粉碎、过筛,混合均匀后,填充胶囊即得;
上述组合物中,所述蜂胶提取物采用如下方法制备而成,包括以下步
骤:
(1)原料的预处理:蜂胶经过风选除杂后,放入冷藏柜,进行冷冻,将冷冻后的蜂胶粉碎成颗粒,并过80目筛;
(2)复合酶解:将步骤(1)所得蜂胶颗粒与一定量的复合酶水溶液混合,在30~50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述蜂胶颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:(5~10),所述复合酶水溶液的质量百分比浓度为3~5%,所述的复合酶由脂肪酶和果胶酶组成,二者质量比为(2~8):1;所述脂肪酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为2~4小时;
(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入蜂胶颗粒质量20~30倍的去离子水进行提取,重复1-3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为 4-10Mpa、温度为100-200℃、时间为5-20min;
(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在 800-1500r/min 条件下离心
10-30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在40~60℃、转速为400~600r/min、真空度为0.1~0.5Mpa条件下,浓缩至干,即得蜂胶提取物;
上述组合物中,所述枸杞提取物采用如下方法制备而成,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:将枸杞置于阴凉处,自然晾干,将其粉碎成颗粒并过80目筛;
(2)复合酶水解:向步骤(1)所述枸杞颗粒中加入一定量的复合酶水溶液,在30~50℃下进行酶解,得复合酶解液;其中,所述枸杞颗粒与复合酶水溶液的质量比为1:(5~10),所述的复合酶水溶液的质量百分比浓度为0.5~1%,所述的复合酶由脂酶、纤维素酶和果胶酶组成,三者质量比为(3~5):1:1;所述脂酶、纤维素酶和果胶酶酶活力分别为40IU/mg、45IU/mg、60IU/mg,所述酶解时间为1~3小时;
(3)水萃取:取步骤(2)所得的酶解液放入萃取釜中,向萃取釜加入枸杞颗粒质量15~30倍的去离子水进行提取,重复1-3次,将所有提取液合并即为萃取液,所述的萃取压力为 2~10Mpa、温度为 100-200℃、时间为5-30min;
(4)精制:将步骤(3)获得的萃取液在 800~1500r/min 条件下离心
10~30min,取上清液,将所述上清液放入旋转蒸发器中,在 40~60℃、转速为 400~600r/min、真空度为 0.1~0.5Mpa 条件下,浓缩至干并粉碎,即得枸杞提取物;
上述组合物中,所述酸枣仁提取物采用如下方法制备而成,包括以下步
骤:酸枣仁经过风选除杂后,将其粉碎成80目的颗粒,然后加入酸枣仁质量5~15倍量乙醇和十二烷基硫酸钠混合液进行超声提取;其中,乙醇浓度为60~80%(V/V),十二烷基硫酸钠浓度为15~25 mg/mL,超声提取的功率为200W、温度50~70℃、提取时间为1~2 h;然后过滤,然后重复上述提取、过滤的操作2~4次,合并滤液、减压浓缩后,用水饱和正丁醇溶液萃取,静置10~15h;分离出正丁醇相,经减压浓缩、冷冻干燥后得酸枣仁提取物。
6.权利要求1-3任一项所述保健食品组合物用在制备预防老年痴呆膳食营养补充剂中。
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