CN109566543A - 一种提高蠋蝽产卵量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种提高蠋蝽产卵量的方法，包括如下步骤：1)将新产蠋蝽卵放入到离心管中；2)向步骤1)中的离心管中加入乙醇溶液后，将离心管放入震荡器中进行三次震荡处理；3)向步骤2)中的离心管加入甲醛溶液后，将离心管放入振荡器中进行的震荡处理；4)向步骤3)中的离心管中乙醇溶液后，将离心管放入振荡器中进行震荡处理；5)将步骤4)中得到的蠋蝽卵用灭菌去离子水进行冲洗干净后，用灭菌滤纸上吸干表面水分。本发明通过上述实验步骤处理的蠋蝽卵，在孵化形成成虫后，在实验室常规饲养条件下，有效增加产卵量，从而有助于蠋蝽种群的扩繁，节省了蠋蝽饲养的经济、时间及人工成本。
Description
技术领域
本发明涉及昆虫人工饲养领域，尤其涉及一种提高蠋蝽产卵量的方法。
背景技术
长期的化学农药的使用严重地威胁到我国食品及生态安全，也极大地影响到了国民健康，这里农作物害虫的防治问题尤为重要。目前，以天敌昆虫运用为核心的生物防治可有效控制害虫的数量，减少农药的使用。而做好天敌昆虫的室内扩繁工作是其应用于有害生物防治的首要工作。蠋蝽属于半翅目蝽科，是一种捕食范围广的天敌昆虫，可捕食叶甲、棉铃虫、银纹夜蛾、刺蛾、金龟子、蚜虫等40余种农林害虫的幼虫或成虫。由于蠋蝽经过室内多代饲养之后，往往会出现产卵量下降、卵重降低等不利于其生长发育及扩繁的现象。产卵量往往会影响蠋蝽种群的扩繁和饲养的经济、时间及人工成本，如何提高蠋蝽的产卵量成为蠋蝽饲养过程的首要问题。
发明内容
与现有技术相比，本发明提供了一种提高蠋蝽产卵量的方法，以解决现有技术问题中的至少一种技术问题。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种提高蠋蝽产卵量的方法，包括如下步骤：1)将新产蠋蝽卵放入到离心管中；
2)向步骤1)中的离心管中加入乙醇溶液后，将离心管放入震荡器中进行三次震荡处理；相邻两次所述震荡处理之间静置离心管2.5～3.5min；随后将离心管中的乙醇溶液吸出；
3)向步骤2)中的离心管加入甲醛溶液后，将离心管放入振荡器中进行的震荡处理；静置4～5min后，将所述离心管中的甲醛溶液吸出；
4)向步骤3)中的离心管中乙醇溶液后，将离心管放入振荡器中进行震荡处理；静置3～4min后，将所述离心管中的乙醇溶液吸出；
5)将步骤4)中得到的蠋蝽卵用灭菌去离子水进行冲洗干净后，用灭菌滤纸吸干蠋蝽卵表面水分。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：
优选的，步骤1)中所述新产蠋蝽卵的体积占离心管体积的1/3～2/5；步骤2)中，向步骤1)中的离心管中加入没过蠋蝽卵的体积浓度为75％的乙醇溶液后，将离心管放入震荡器中进行三次震荡处理，每次以转速为 500-1000rpm震荡13～17s，相邻两次震荡处理之间静置离心管2.5～3.5min；随后将离心管中的乙醇试剂吸出。
优选的，步骤3)中，向步骤2)中的离心管加入没过蠋蝽卵的体积浓度为4％甲醛溶液后，将离心管放入振荡器中进行13～17s，转速为 500-1000rpm的震荡处理，静置4～5min后，将所述离心管中的甲醛溶液吸出。
优选的，步骤4)中，向步骤3)中的离心管中加入没过蠋蝽卵的体积浓度为75％的乙醇溶液后，将所述离心管放入振荡器中进行13～17s，转速为 500-1000rpm的震荡处理，静置3～4min后，将所述离心管中的乙醇溶液吸出。
优选的，步骤5)中，将步骤4)中得到的蠋蝽卵用灭菌去离子水进行冲洗干净后，再将蠋蝽卵体放置在灭菌滤纸上吸干表面水分。
优选的，所述提高蠋蝽产卵量的方法还包括步骤6)，将步骤5)中得到的蠋蝽卵均匀的放置在灭菌培养皿中，设置培养环境的温度为25～27、℃湿度为60～70％、光周期为15L:9D～17L:7D；所述培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿内喷一次灭菌蒸馏水，直至蠋蝽卵孵化。
优选的，将步骤6)中得到的孵化后的蠋蝽若虫进行实验室常规饲养，所述实验室常规饲养方法包括饲喂蒸馏水及柞蚕蛹和/或粘虫。
优选的，步骤6)中培养蠋蝽卵的环境的光周期为16L:8D。
优选的，步骤2)、步骤3)和步骤4)的振荡器均为涡旋振荡器；步骤 2)、步骤3)和步骤4)中将离心管中的试剂吸出的工具均为移液管。
优选的，步骤1)将3～5克新产蠋蝽卵放入到50ml离心管中；步骤2)、步骤3)和步骤4)中将离心管放入振荡器进行震荡的时间分别为15s；步骤 2)、步骤3)和步骤4)中振荡器的转速分别为700～800rpm；步骤2)和步骤4)中的乙醇溶液可替换为体积浓度为70％的异丙醇溶液。
综上所述，本发明的有益效果是：通过上述实验步骤处理的蠋蝽卵，在孵化形成成虫后，在实验室常规饲养条件下，有效增加产卵量，从而有助于蠋蝽种群的扩繁，节省了蠋蝽饲养的经济、时间及人工成本。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
本发明涉及一种提高蠋蝽产卵量的方法，包括如下步骤：1)将新产蠋蝽卵放入到离心管中；2)向步骤1)中的离心管中加入乙醇溶液后，将离心管放入震荡器中进行三次震荡处理；相邻两次所述震荡处理之间静置离心管 2.5～3.5min；随后将离心管中的乙醇试剂吸出；3)向步骤2)中的离心管加入甲醛溶液后，将离心管放入振荡器中进行的震荡处理；静置4～5min，随后将所述离心管中的甲醛溶液吸出；4)向步骤3)中的离心管中乙醇溶液后，将离心管放入振荡器中进行震荡处理；静置3～4min后，随后将所述离心管中的乙醇溶液吸出；5)将步骤4)中得到的蠋蝽卵用灭菌去离子水进行冲洗干净后，用灭菌滤纸吸干蠋蝽卵表面水分。本发明通过上述实验步骤处理的蠋蝽卵，在孵化形成成虫后，在实验室常规饲养条件下，有效增加产卵量，从而有助于提高蠋蝽种群的扩繁，节省了蠋蝽饲养的经济、时间及人工成本。本申请保护的方法可以继续应用在一代产生的卵体中，不断提高蠋蝽的产卵量。
在一些实施例中，一种提高蠋蝽产卵量的方法，包括如下步骤：1)将新产蠋蝽卵放入到离心管中；新产蠋蝽卵的体积占离心管体积的1/3～2/5；2) 向步骤1)中的离心管中加入没过蠋蝽卵的体积浓度为75％的乙醇溶液后，将离心管放入震荡器中进行三次震荡处理，每次以转速为500-1000rpm震荡 13～17s，相邻两次震荡处理之间静置离心管2.5～3.5min；随后将离心管中的乙醇试剂吸出；3)向步骤2)中的离心管加入没过蠋蝽卵的体积浓度为4％甲醛溶液后，将离心管放入振荡器中进行13～17s，转速为500-1000rpm的震荡处理，静置4～5min后，随后将所述离心管中的甲醛溶液吸出；4)向步骤 3)中的离心管中加入没过蠋蝽卵的体积浓度为75％的乙醇溶液后，将所述离心管放入振荡器中进行13～17s，转速为500-1000rpm的震荡处理，静置 3～4min后，随后将所述离心管中的乙醇溶液吸出；5)将步骤4)中得到的蠋蝽卵用灭菌去离子水进行冲洗干净后，再将蠋蝽卵体放置在灭菌滤纸上吸干表面水分；6)将步骤5)中得到的蠋蝽卵均匀的放置在灭菌培养皿中，设置培养环境的温度为25～27、℃湿度为60～70％、光周期为15L:9D～17L：7D；所述培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿内喷一次灭菌蒸馏水，直至蠋蝽卵孵化。新产蠋蝽卵一般为产后12到24小时之内的卵体。
上述的提高蠋蝽产卵量的方法中，步骤1)中新产蠋蝽卵的体积占离心管体积的1/3～2/5，可保证单次处理的蠋蝽卵的最大数量，提高处理效率；
步骤2)中，向步骤1)中的离心管中加入体积浓度为75％的乙醇溶液，用于对蠋蝽卵表面进行消毒，由于过多的乙醇溶液可能造成对蠋蝽卵的损害，因此加入的乙醇溶液没过蠋蝽卵即可，本申请对加入离心管的乙醇溶液量不做过多限制。将离心管放入震荡器中进行震荡处理可以有效促进卵体表面与试剂充分接触，方法中选择500～1000rpm转速，在这一震荡强度范围内进行卵体处理可以达到良好的清洗效果，同时不会使卵体破裂；每次震荡时长设置为13～17s，同时重复进行多次震荡，可以达到更好地清洗效果，有效避免出现位于离心管上方的卵被清洗干净，而底部的卵却没达到清洗效果；在每两次震荡处理之间设置一段时间的静置，有效避免长时间震荡对卵体带来机械损伤。
步骤3)中，向步骤2)中的离心管中加入体积浓度为4％的甲醛溶液，用于对蠋蝽卵表面进行消毒，由于过多的甲醛溶液可能造成对蠋蝽卵的损害，因此加入的甲醛溶液没过蠋蝽卵即可，本申请对加入离心管的甲醛溶液量不做过多限制。将离心管放入震荡器中进行震荡处理可以有效促进卵体表面与试剂充分接触，方法中选择500～1000rpm转速，在这一震荡强度范围内进行卵体处理可以达到良好的清洗效果，同时不会使卵体破裂；震荡时长设置为13～17s，可以较好的清洗卵体；在震荡之后设置一段时间的静置，有效恢复震荡对卵体带来机械损伤。需要说明的是，步骤3)中选用甲醛溶液，有效避免步骤2)卵体上的微生物在短时间形成的对于乙醇的抗性，有效增加消毒杀菌的作用；由于乙醇容易使生物组织变脆，长时间的浸泡可能会给卵壳带来伤害，影响孵化，这里选用甲醛溶液可以减少这种风险。
步骤4)中，向步骤3)中的离心管中加入体积浓度为75％的乙醇溶液，用于对蠋蝽卵表面进行消毒，由于过多的乙醇溶液可能造成对蠋蝽卵的损害，因此加入的乙醇溶液没过蠋蝽卵即可，本申请对加入离心管的乙醇溶液量不做过多限制。将离心管放入震荡器中进行震荡处理可以有效促进卵体表面与试剂充分接触，方法中选择500～1000rpm转速，在这一震荡强度范围内进行卵体处理可以达到良好的清洗效果，同时不会使卵体破裂；震荡时长设置为13～17s，可以较好的清洗卵体；在震荡之后设置一段时间的静置，有效恢复震荡对卵体带来机械损伤。
步骤5)中，将步骤4)中得到的蠋蝽卵用灭菌去离子水进行冲洗干净后，再将蠋蝽卵体放置在灭菌滤纸上吸干表面水分；再次用灭菌去离子水将卵体进行冲洗，可以去除残留的乙醇溶液；
步骤6)中，将步骤5)中得到的蠋蝽卵均匀的放置在灭菌培养皿中，设置培养环境的温度为25～27、℃湿度为60～70％、光周期为15L:9D～17L： 7D；所述培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿内喷一次灭菌蒸馏水，直至蠋蝽卵孵化。
步骤2)～5)中进行了多次洗涤、震荡，有助于将清洗产生的微生物杂质及时清理，以达到更好的实验效果。之后将步骤6)中得到的孵化后的蠋蝽若虫进行实验室常规饲养。
在一些实施例中，所述实验室常规饲养方法包括饲喂蒸馏水及柞蚕蛹和 /或粘虫。步骤6)中将蠋蝽卵光滑的一面朝下放置在12cm灭菌玻璃培养皿中。需要说明的是，蠋蝽卵的卵体形状为卵形结构，蠋蝽卵的一端端面周圈长有向外的小毛刺，与之相对的一段端面光滑，没有另外长出其他结构，长有毛刺的一端端面有孵化的破卵的开口，蠋蝽若虫的开卵器会刺破小刺那一圈出来，因此光滑面朝下，有助于蠋蝽卵的孵化，可以提高卵的孵化率。步骤2)、步骤3)和步骤4)的振荡器均为涡旋振荡器。涡旋振荡器易于操作和调控，当然，本申请不限于涡旋震荡器；步骤2)、步骤3)和步骤4)中将离心管中的试剂吸出的工具为移液管，移液管易于操作和调控，当然，本申请不限于移液管。
在一个或多个实施例中，步骤2)、步骤3)和步骤4)中将离心管放入振荡器进行震荡的时间为15s，在多次试验后，振荡时间较长或较短都不能很好的满足混合消毒的需要，振荡时间为15s时间较佳；优选的，步骤2)、步骤3)和步骤4)中振荡器的转速为700～800rpm，在多次试验后，振荡强度较小或过大都不能很好的满足混合清洗的需要，振荡转速为700～800rpm 时间较佳。
在一些实施例中，由于试剂特性相近，步骤2)和步骤4)中的乙醇溶液可替换为体积浓度为70％的异丙醇溶液。
在至少一个实施例中，步骤6中培养蠋蝽卵的环境的光周期为16L：8D，卵体的光照周期对卵体发育非常重要，经多次试验得出，光周期为 15L:9D～17L：7D范围内，蠋蝽孵化率较高，而光周期为16L：8D时候，孵化率最佳。
通过上述实验步骤处理的蠋蝽卵，在孵化形成成虫后，在实验室常规饲养条件下，有效增加产卵量，从而提高蠋蝽种群的扩繁，节省了蠋蝽饲养的经济、时间及人工成本。
以下通过具体实施例进行说明：
实施例1
一种提高蠋蝽产卵量的方法，包括如下步骤：1)将3～5克新产蠋蝽卵放入到50ml离心管中；2)向步骤1)中的离心管中加入没过蠋蝽卵的体积浓度为75％的乙醇溶液后，将离心管放入震荡器中进行三次震荡处理，每次以转速为700～800rpm震荡15s，相邻两次震荡处理之间静置离心管3min；随后将离心管中的乙醇溶液吸出；3)向步骤2)中的离心管加入没过蠋蝽卵的体积浓度为4％甲醛溶液后，将离心管放入振荡器中进行15s，转速为 700～800rpm的震荡处理，静置4min后，随后将所述离心管中的甲醛溶液吸出；4)向步骤3)中的离心管中加入没过蠋蝽卵的体积浓度为75％的乙醇溶液后，将所述离心管放入振荡器中进行15s，转速为700～800rpm的震荡处理，静置4min后，随后将所述离心管中的乙醇溶液吸出；5)将步骤4)中得到的蠋蝽卵用灭菌去离子水进行冲洗干净后，再将蠋蝽卵体放置在灭菌滤纸上吸干表面水分；6)将步骤5)中得到的蠋蝽卵均匀的放置在12cm灭菌培养皿中，设置培养环境的温度为25～27、℃湿度为60～70％、光周期为 16L:6D；所述培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿内喷一次灭菌蒸馏水，直至蠋蝽卵孵化。这里设置经过上述方法处理过的卵体设为EG组。
对比例1
包括如下步骤：1)将3～5克新产蠋蝽卵放入到50ml离心管中；2)向步骤1)中的离心管中加入没过蠋蝽卵灭菌去离子水后，将离心管放入震荡器中进行三次震荡处理，每次以转速为700～800rpm震荡15s，相邻两次震荡处理之间静置离心管3min；随后将离心管中的灭菌去离子水吸出；3)向步骤2)中的离心管加入没过蠋蝽卵的灭菌去离子水后，将离心管放入振荡器中进行15s，转速为700～800rpm的震荡处理，静置4min后，随后将所述离心管中的灭菌去离子水吸出；4)向步骤3)中的离心管中加入没过蠋蝽卵的灭菌去离子水后，将所述离心管放入振荡器中进行15s，转速为700～800rpm 的震荡处理，静置4min后，随后将所述离心管中的灭菌去离子水吸出；5) 将步骤4)中得到的蠋蝽卵用灭菌去离子水进行冲洗干净后，再将蠋蝽卵体放置在灭菌滤纸上吸干表面水分；6)将步骤5)中得到的蠋蝽卵均匀的放置在12cm灭菌培养皿中，设置培养环境的温度为25～27、℃湿度为60～70％、光周期为16L:6D；所述培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿内喷一次灭菌蒸馏水，直至蠋蝽卵孵化。这里设置经过上述方法处理过的卵体设为PG组。
对比例2
取未经处理的新产蠋蝽卵3～5g，均匀的放置在12cm灭菌培养皿中，设置培养环境的温度为25～27、℃湿度为60～70％、光周期为16L:6D；所述培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿内喷一次灭菌蒸馏水，直至蠋蝽卵孵化。这里设置经过上述方法处理过的卵体设为CG组。
每天向EG组、PG组和CG组培养皿喷一次灭菌蒸馏水，直至卵孵化，孵化后的蠋蝽若虫及成虫进行实验室内常规饲养，常规饲养方法包括给蠋蝽提供蒸馏水和柞蚕蛹，蒸馏水每天加一次、柞蚕蛹3～5天更换一次；若虫单头饲养，成虫一雌一雄配对饲养等过程，由于常规饲养方法为公知技术，这里不再进行赘述。实施例1、对比例1和对比例2的实验分别进行了5个重复实验，充分避免了实验操作偶然性，各组各配对蠋蝽四百余对，随机抽取 100对记录其产卵情况如表1。
表1蠋蝽卵经不同处理后蠋蝽成虫产卵情况统计表
由表1可看出：PG的产卵量较CG有显著上升，EG的产卵量较CG、 PG都有显著上升(F2,297＝14.93，P<0.0001)，产卵次数也呈现的同样趋势(F2,297＝14.56，P<0.0001)，单次产卵量无显著差异。EG产卵量相对于 CG提高了56.15％，卵孵化率有小幅度下降但无显著差异(F2,297＝2.878， P＝0.0578)。证明该方法能很好地提高蠋蝽产卵量,且不会影响蠋蝽的单次产卵量。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种提高蠋蝽产卵量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将新产蠋蝽卵放入到离心管中；
2)向步骤1)中的所述离心管中加入乙醇溶液后，将所述离心管放入震荡器中进行三次震荡处理；相邻两次所述震荡处理之间静置离心管2.5～3.5min；随后将所述离心管中的乙醇溶液吸出；
3)向步骤2)中的所述离心管加入甲醛溶液后，将所述离心管放入振荡器中进行的震荡处理；静置4～5min后，将所述离心管中的甲醛溶液吸出；
4)向步骤3)中的所述离心管中乙醇溶液后，将所述离心管放入振荡器中进行震荡处理；静置3～4min后，将所述离心管中的乙醇溶液吸出；
5)将步骤4)中得到的蠋蝽卵用灭菌去离子水进行冲洗干净后，用灭菌滤纸吸干蠋蝽卵表面水分。
2.根据权利要求1所述一种提高蠋蝽产卵量的方法，其特征在于，步骤1)中所述新产蠋蝽卵的体积占离心管体积的1/3～2/5；步骤2)中，向步骤1)中的所述离心管中加入没过蠋蝽卵的体积浓度为75％的乙醇溶液后，将所述离心管放入震荡器中进行三次震荡处理，每次以转速为500-1000rpm震荡13～17s，相邻两次震荡处理之间静置所述离心管2.5～3.5min；随后将离心管中的乙醇溶液吸出。
3.根据权利要求1所述一种提高蠋蝽产卵量的方法，其特征在于，步骤3)中，向步骤2)中的所述离心管加入没过蠋蝽卵的体积浓度为4％甲醛溶液后，将所述离心管放入振荡器中进行13～17s，转速为500-1000rpm的震荡处理，静置4～5min后，将所述离心管中的甲醛溶液吸出。
4.根据权利要求1所述一种提高蠋蝽产卵量的方法，其特征在于，步骤4)中，向步骤3)中的所述离心管中加入没过蠋蝽卵的体积浓度为75％的乙醇溶液后，将所述离心管放入振荡器中进行13～17s，转速为500-1000rpm的震荡处理，静置3～4min后，将所述离心管中的乙醇溶液吸出。
5.根据权利要求1所述一种提高蠋蝽产卵量的方法，其特征在于，步骤5)中，将步骤4)中得到的蠋蝽卵用灭菌去离子水进行冲洗干净后，再将蠋蝽卵体放置在灭菌滤纸上吸干表面水分。
6.根据权利要求1所述一种提高蠋蝽产卵量的方法，其特征在于，所述提高蠋蝽产卵量的方法还包括步骤6)，将步骤5)中得到的蠋蝽卵均匀的放置在灭菌培养皿中，设置培养环境的温度为25～27℃、湿度为60～70％、光周期为15L:9D～17L:7D；所述培养皿里放有喷施了灭菌蒸馏水的灭菌滤纸，每天向培养皿内喷一次灭菌蒸馏水，直至蠋蝽卵孵化。
7.根据权利要求2所述一种提高蠋蝽产卵量的方法，其特征在于，将步骤6)中得到的孵化后的蠋蝽若虫进行实验室常规饲养，所述实验室常规饲养方法包括饲喂蒸馏水及柞蚕蛹和/或粘虫。
8.根据权利要求2所述一种提高蠋蝽产卵量的方法，其特征在于，步骤6)中培养蠋蝽卵的环境的光周期为16L:8D。
9.根据权利要求1所述一种提高蠋蝽产卵量的方法，其特征在于，步骤2)、步骤3)和步骤4)的振荡器均为涡旋振荡器；步骤2)、步骤3)和步骤4)中将离心管中的试剂吸出的工具均为移液管。
10.根据权利要求1所述一种提高蠋蝽产卵量的方法，其特征在于，步骤1)将3～5克新产蠋蝽卵放入到50ml离心管中；步骤2)、步骤3)和步骤4)中将离心管放入振荡器进行震荡的时间分别为15s；步骤2)、步骤3)和步骤4)中振荡器的转速分别为700～800rpm；步骤2)和步骤4)中的乙醇溶液可替换为体积浓度为70％的异丙醇溶液。
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|---|---|---|---|---|
| CN110476901A (zh) * | 2019-09-17 | 2019-11-22 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一种延长蠋蝽卵货架期的方法 |
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2018
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