CN109562168A - 抗cd98抗体及抗体药物偶联物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗CD98抗体及抗体药物偶联物(ADC)，包括组合物和使用所述抗体和ADC的方法。

Description

抗CD98抗体及抗体药物偶联物
相关申请
本申请主张2016年6月8日申请的美国临时申请第62/347,483号的优先权，其全部内容以引用的方式并入本文中。
序列表
本申请含有序列表，该序列表已以ASCII格式以电子方式提交且其全部内容通过引用并入本文。所述ASCII复本创建于2017年6月1日，命名为117813-10720_SL.txt且大小为173,828字节。
发明背景
CD98(也称为CD98重链；4F2重链；4F2hc；SLC3A2)是80kDa II型跨膜糖蛋白链，已知其在各种类型的癌细胞中高度表达。CD98通过二硫键形成约40kDa的具有氨基酸转运蛋白活性的蛋白质的杂二聚体，并在细胞膜上表达。特别地，CD98通过二硫键与若干种轻链(LAT1(SLC7A5)、SLC7A6、SLC7A7、SLC7A8、SLC7A10或SLC7A11)之一共价地连接，其中这些轻链是L型氨基酸转运蛋白。这种相互作用是轻链的细胞表面表达和氨基酸转运功能所要求的。CD98还与整合素β亚基相关，从而调节控制细胞增殖、存活、迁移和上皮粘附及极性的整合素信号(Cai等人,J.Cell Sci.[细胞科学杂志](2005)1 18:889-899；Haynes B.F.等人,J.Immunol.[免疫学杂志],(1981),126,1409-1414；Lindsten T.等人,Mol.Cell.Biol.[分子与细胞生物学],(1988),8,3820-3826；Teixeira S.等人,Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志],(1991),202,819-826；L.A.Diaz Jr.等人,J Biol Regul Homeost Agents[生物性药物调节杂志],(1998)12,25-32)。CD98在调节氨基酸转运和整合素信号传导中的作用可促进淋巴细胞和肿瘤细胞的快速增殖和克隆扩增(Cantor,等人(2012)J.Cell Sci.[细胞科学杂志]125:1373-82)。
无论组织来源如何，CD98在几乎所有肿瘤细胞的细胞表面均过表达，并且L型氨基酸转运蛋白1(LAT 1；也称为SLC7A5)的表达增加发生在许多类型的人癌症中，包括乳腺癌、结肠癌、口腔癌、卵巢癌、食道癌、胶质瘤和白血病(Cantor(2012)J Cell Sci[细胞科学杂志]2012；125:1373-82)。LAT1与CD98形成复合物，并以钠离子非依赖性方式转运具有大侧链的中性氨基酸，如亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、组氨酸。此外，除脑，胎盘，骨髓和睾丸外，LAT1在大多数正常组织中表达很差或不表达，但在若干种人恶性肿瘤组织中其表达与CD98一起增加(Yanagida等人,Biochem.Biophys.Acta[生物化学和生物物理学报](2001),1514,291-302)。
CD98已经与癌症有关，参见，例如，Estrach等人(2014)Cancer Res[癌症研究]74(23):6878)及Cantor和Ginsberg(2012)J Cell Sci[细胞科学杂志]125(6):1373。CD98的表达在人癌症的转移部位显著高于原发部位，表明LAT1/CD98的过表达可能对人癌症的进展和转移具有重要意义(Hayes,等人International Journal of Cancer[国际癌症杂志](2015)137,710-720)。例如，LAT1/CD98过表达似乎是结肠癌患者肿瘤转移所必需的(Kaira等人,Cancer Sci.[癌症科学](2008)99:2380-2386)。此外，CD98的阳性表达是预测切除的非小细胞肺癌预后不良的独立因素(Kaira等人,Ann.Surgical Oncol.[外科肿瘤学年鉴](2009)16(12):3473-81)，并且LAT1和CD98的过表达被发现是预测可切除的I期肺腺癌患者预后的病理因素(Kaira等人,Lung Cancer[肺癌](2009)66:1,120-126)。
抗体药物偶联物(ADC)代表相对一类治疗剂，其包含通过化学接头与细胞毒性药物偶联的抗体。ADC的治疗概念是结合抗体与药物的结合能力，其中抗体用于通过结合靶表面抗原将药物递送至肿瘤细胞。
因此，本领域仍然需要可用于治疗癌症的治疗目的的抗CD98抗体和ADC。
发明内容
在某些方面，本发明提供了特异性结合CD98的抗CD98抗体和抗体药物偶联物(ADC)。
在本发明的某些实施例中，如表面等离子体共振所确定的，抗体或其抗原结合部分与CD98(SEQ ID NO:124)或CD98的细胞外结构域(SEQ ID NO:125)结合，Kd介于约1×10- 6M和约1×10-11M之间。
在本发明的又其他实施例中，抗CD98抗体药物偶联物(ADC)，例如与Bcl-xL抑制剂偶联的抗CD98抗体，在体内人非小细胞肺癌(NSCLC)异种移植测定中抑制肿瘤生长。
在一些实施例中，结合人CD98的抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ IDNO:17的氨基酸序列的CDR3的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的CDR2的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR1的重链可变区及包含具有任一SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区。
在一些实施例中，结合人CD98的抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQID NO:17的氨基酸序列的CDR3的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ IDNO:90的氨基酸序列的CDR2的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR1的重链可变区及包含具有任一SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区。
在一些实施例中，结合人CD98的抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ IDNO:97的氨基酸序列的CDR3的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的CDR2的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的CDR1的重链可变区及包含具有任一SEQ ID NO:83的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区。
在一些实施例中，结合人CD98的抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ IDNO:97的氨基酸序列的CDR3的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的CDR2的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的CDR1的重链可变区及包含具有任一SEQ ID NO:83的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区。
在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:87中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ IDNO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:108中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:108中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:107具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:90中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ IDNO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:110具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，和/或包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:107具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:92中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ IDNO:95中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:112中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:115具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，和/或包含SEQ ID NO:112中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:112具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:104中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:102中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:118具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，和/或包含SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:117具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一些实施例中，结合人CD98的抗体包含：包含具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR3的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区。在其他实施例中，抗体包含：包含具有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的CDR2的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体包含：包含具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR1的重链可变区及包含具有任一SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区。
在一些实施例中，结合人CD98的抗体包含：包含具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的CDR3的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体包含：包含具有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的CDR2的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体包含：包含具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR1的重链可变区及包含具有任一SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区。
在一些实施例中，结合人CD98的抗体包含：包含具有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的CDR3的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体包含：包含具有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的CDR2的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体包含：包含具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的CDR1的重链可变区及包含具有任一SEQ IDNO:83的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区。
在一些实施例中，结合人CD98的抗体包含：包含具有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的CDR3的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体包含：包含具有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的CDR2的重链可变区及包含具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体包含：包含具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的CDR1的重链可变区及包含具有任一SEQ IDNO:83的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区。
在一些实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:87中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:108中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:108中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:107具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一些实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:90中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗CD98抗体包含：SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:110具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，和/或包含SEQID NO:107中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:107具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一些实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:92中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:95中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQID NO:112中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗CD98抗体包含：SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:115具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，和/或包含SEQID NO:112中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:112具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一些实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:104中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:102中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗CD98抗体包含：SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:118具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，和/或包含SEQID NO:117中所阐述的氨基酸序列或与SEQ ID NO:117具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一些实施例中，抗体包含抗人CD98(hCD98)抗体，该hCD98抗体包含：包含SEQ IDNO:158中所阐述的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO:159中所阐述的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，抗体包含抗人CD98(hCD98)抗体，该hCD98抗体包含：包含SEQ IDNO:160中所阐述的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO:161中所阐述的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，抗体包含抗人CD98(hCD98)抗体，该hCD98抗体包含：包含SEQ IDNO:162中所阐述的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO:163中所阐述的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，抗体包含抗人CD98(hCD98)抗体，该hCD98抗体包含：包含SEQ IDNO:164中所阐述的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO:165中所阐述的氨基酸序列的轻链。
在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分是IgG同种型。在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分是IgG1或IgG4同种型。
在其他实施例中，如表面等离子体共振所确定，抗CD98抗体或其抗原结合部分具有1.5×10-8或更低的KD。
在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分结合食蟹猴CD98。
在其他实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分具有选自下组的对CD98的解离常数(KD)，该组由以下组成：最多约10-7M；最多约10-8M；最多约10-9M；最多约10-10M；最多约10-11M；最多约10-12M；以及最多约10-13M。
在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含人IgM恒定域、人IgG1恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域、人IgG4恒定域、人IgA恒定域或人IgE恒定域的重链免疫球蛋白恒定域。
在其他实施例中，重链免疫球蛋白恒定区结构域是人IgG1恒定域。在一些实施例中，人IgG1恒定域包含SEQ ID NO:154或SEQ ID NO:155的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分是IgG1抗体并且包含人Igκ恒定域或人Igλ恒定域。
在其他实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分与本文所述的任何一种抗体(例如，huAb102、huAb104、huAb108和huAb110)的抗体或抗原结合部分竞争。
一方面，本发明包括药物组合物，其包含抗CD98抗体或其抗原结合部分(例如huAb102、huAb104、huAb108和huAb110)以及药学上可接受的载体。
在某些实施例中，本发明还提供了编码如本文所述的抗体或其抗原结合部分的分离的核酸。
在其他实施例中，本发明包括抗hCD98抗体或其抗原结合片段，该抗hCD98抗体或其抗原结合片段包含选自下组的重链CDR组(CDR1、CDR2、和CDR3)，该组由以下组成：SEQ IDNO:16、87、和17；16、90、和17；79、92、和97；以及79、104、和97，以及选自下组的轻链CDR组(CDR1、CDR2、和CDR3)，该组由以下组成：SEQ ID NO:13、7、和19；83、45、和95；以及83、45、和102。在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:108中所阐述的氨基酸序列的重链恒定区和/或包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列的重链恒定区和/或包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列的重链恒定区和/或包含SEQ ID NO:112中所阐述的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含如SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列的重链恒定区及包含如SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列的轻链恒定区。
在其他实施例中，本发明包括抗hCD98抗体，该抗hCD98抗体包含选自下组的重链CDR组(CDR1、CDR2、和CDR3)，该组由以下组成：SEQ ID NO:16、87、和17；16、90、和17；79、92、和97；以及79、104、和97，以及选自下组的轻链CDR组(CDR1、CDR2、和CDR3)，该组由以下组成：SEQ ID NO:13、7、和19；83、45、和95；以及83、45、和102。在一些实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:108中所阐述的氨基酸序列的重链恒定区和/或包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列的重链恒定区和/或包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列的重链恒定区和/或包含SEQ ID NO:112中所阐述的氨基酸序列的轻链恒定区。在一些实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列的重链恒定区和/或包含SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列的轻链恒定区。
在本发明的一些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含选自人IgG恒定域、人IgM恒定域、人IgE恒定域和人IgA恒定域的重链免疫球蛋白恒定域。在一些实施例中，IgG恒定域选自下组，该组由以下组成：IgG1恒定域，IgG2恒定域，IgG3恒定域和IgG4恒定域。在其他实施例中，抗体是多特异性抗体。
在本发明的其他实施例中，抗体的抗原结合部分是，例如，Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、单结构域抗体和双功能抗体。
在一些实施例中，本发明的抗CD98抗体是具有4条多肽链(两条重链和两条轻链)的IgG。
在另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分与澳瑞他汀偶联。在另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分与Bcl-xL抑制剂偶联。
在本发明的又其他实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分与显像剂偶联。在本发明的某些实施例中，显像剂选自下组，该组由以下组成：放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记和生物素。在本发明的其他实施例中，放射性标记是铟。在又其他实施例中，本发明包括包含抗体或其抗原结合部分以及药学上可接受的载体的药物组合物。
在一些实施例中发明还包括包含如本文所述的与至少一种药物偶联的抗CD98抗体或其抗原结合部分的抗CD98抗体药物偶联物(ADC)。在某些实施例中，抗CD98抗体与Bcl-xL抑制剂偶联形成抗hCD98 ADC。
在一些实施例中，本发明的抗CD98 ADC包含具有4条多肽链(两条重链和两条轻链)的IgG抗体。
在本发明的一个实施例中，至少一种药物选自下组，该组由以下组成：抗凋亡剂、有丝***抑制剂、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂、基因治疗用核酸、烷化剂、抗血管生成剂、抗代谢物、含硼剂、化学保护剂、激素剂、抗激素剂、皮质类固醇、光活性治疗剂、寡核苷酸、放射性核素剂、放射增敏剂、拓扑异构酶抑制剂和激酶抑制剂。在某些实施例中，有丝***抑制剂是多拉司他汀、澳瑞他汀、美登木素生物碱和植物碱。在某些实施例中，药物是多拉司他汀、澳瑞他汀、美登木素生物碱和植物碱。澳瑞他汀的一个实例是单甲基澳瑞他汀F(MMAF)(monomethylaurisatin F)或单甲基澳瑞他汀E(MMAE)。美登木素生物碱的实例包括但不限于DM1、DM2、DM3和DM4。在某些实施例中，抗肿瘤抗生素选自下组，该组由以下组成：放线菌素、蒽环、卡奇霉素和多卡米新。在某些实施例中，放线菌素是吡咯苯并二吖庚因(PBD)。
在一些实施例中，本发明还包括包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗CD98抗体的ADC，其中该抗CD98抗体包含：包含CDR3结构域(包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列)的重链可变区，包含SEQ ID NO:87中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:108中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本发明还包括包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗CD98抗体的ADC，其中该抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:90中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ IDNO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本发明还包括包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗CD98抗体的ADC，其中该抗体包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ IDNO:92中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:95中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:112中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本发明还包括包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗CD98抗体的ADC，其中该抗体包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ IDNO:104中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:102中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本发明还包括包含与至少一种药物(包括但不限于Bcl-xL抑制剂)偶联的抗CD98抗体的ADC，其中与抗体偶联的药物分子介于1至8个之间。在一个实施例中，1至4个药物分子与ADC的抗体偶联。在一个实施例中，2至4个药物分子与ADC的抗体偶联。
在一些实施例中，本发明还包括包含与至少一种药物偶联的抗CD98抗体的ADC，其中药物通过马来酰亚胺己酰基、缬氨酸-瓜氨酸接头偶联。在另一实施例中，药物通过马来酰亚胺基己酰基、缬氨酸-瓜氨酸、p-氨基苄氧基氨基甲酰(PABA)接头与抗体偶联。
在一些实施例中，本发明还包括包含通过接头与Bcl-xL抑制剂共价连接的抗CD98IgG1抗体的ADC。在某些实施例中，抗体包含：包含SEQ ID NO:108、110、115或118中所阐述的氨基酸序列的重链可变区和/或包含SEQ ID NO:107、112、117中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。在某些实施例中，1至4个Bcl-xL抑制剂分子与抗体连接。在某些实施例中，2至4个Bcl-xL抑制剂分子与抗CD98抗体连接。
在一些实施例中，本发明还包括CD98指导的ADC，其包含对人CD98特异的IgG1抗体、Bcl-xL抑制剂和将Bcl-xL抑制剂与抗体共价连接的接头。在某些实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:87中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:108中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。在其他实施例中，抗体包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:90中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ IDNO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:92中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:95中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ IDNO:115中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:112中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。在其他实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:104中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:102中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在又其他实施例中，本发明包括药物组合物，其包含ADC混合物和药学上可接受的载体，所述ADC混合物包含多种本文所述的ADC。在某些实施例中，ADC混合物具有2至4的平均药物/抗体比率(DAR)。在其他实施例中，ADC混合物包含各自具有2至8的DAR的ADC。在某些实施例中，ADC混合物的平均药物/抗体(DAR)是约2.4至约3.6。
在某些实施例中，本发明包括用于治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者给予本文所述的药物组合物来治疗患有癌症的受试者。在一个实施例中，该癌症选自下组，该组由以下组成：乳腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤、***癌、胰腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、及血液癌症(如，多发性骨髓瘤、急性髓性白血病或淋巴瘤)。在一个实施例中，该癌症选自下组，该组由以下组成：乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胶质母细胞瘤、***癌、胰腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、头颈癌、间皮瘤、肾癌、鳞状细胞癌、三阴性乳腺癌、小细胞肺癌、及非小细胞肺癌。在一个实施例中，该癌症是乳腺癌。在一个实施例中，该癌症是肺癌。在一个实施例中，该癌症是***癌。在一个实施例中，该癌症是胰腺癌。在一个实施例中，该癌症是结肠癌。在一个实施例中，该癌症是头颈癌。在一个实施例中，该癌症是肾癌。在一个实施例中，该癌症是血液癌症。在某些实施例中，该血液癌症是多发性骨髓瘤。在某些实施例中，该血液癌症是急性髓性白血病。在其他实施例中，该血液癌症是淋巴瘤。在一个实施例中，该癌症是结肠直肠癌。在一个实施例中，该癌症是间皮瘤。在一个实施例中，该癌症是鳞状细胞癌。在一个实施例中，该癌症是三阴性乳腺癌。在一个实施例中，该癌症是非小细胞肺癌。在某些实施例中，该鳞状细胞癌是鳞状肺癌或鳞状头颈癌。在某些实施例中，该癌症的特征在于具有EGFR过表达。在其他实施例中，该癌症的特征在于具有激活性EGFR突变，例如，激活EGFR信号传导通路的一个或多个突变和/或导致EGFR蛋白过表达的一个或多个突变。在特定的示例性实施例中，激活性EGFR突变可能是EGFR基因的突变。在特定实施例中，激活性EGFR突变是外显子19缺失突变、外显子21中的单点取代突变L858R、T790M点突变、和/或其组合。
在又另一个实施例中，该癌症包含CD98的扩增或过表达CD98。在某些实施例中，该癌症的特征在于具有CD98过表达。在某些实施例中，该癌症的特征在于具有CD98扩增。
在某些实施例中，本发明还包括：在具有实体瘤的受试者中抑制或减少实体瘤生长的方法，其包括将本文所述的药物组合物给予患有实体瘤的受试者，使得实体瘤生长被抑制或减少。在某些实施例中，实体瘤的特征在于具有CD98过表达。在某些实施例中，实体瘤的特征在于具有CD98扩增。
在本发明的一个实施例中本发明提供了在具有实体瘤的受试者中抑制或减少实体瘤生长的方法，其包括向患有实体瘤的受试者给予有效量的本文所述的抗体或ADC，使得实体瘤生长被抑制或减少。
在某些实施例中，实体瘤是表达CD98的实体瘤。在其他实施例中，实体瘤是非小细胞肺癌或胶质母细胞瘤。在其他实施例中，实体瘤是鳞状细胞癌。
在本发明的一个实施例中，本发明提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法，其包括：给予有效量的包含与至少一种Bcl-xL抑制剂偶联的抗CD98抗体的ADC，其中抗CD98抗体是IgG同种型并包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:87中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ IDNO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:108中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在本发明的一个实施例中，本发明提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法，其包括：给予有效量的包含与至少一种Bcl-xL抑制剂偶联的抗CD98抗体的ADC，其中抗CD98抗体或其抗原结合部分是IgG同种型并包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:90中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在本发明的一个实施例中，本发明提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法，其包括：给予有效量的包含与至少一种Bcl-xL抑制剂偶联的抗CD98抗体的ADC，其中抗CD98抗体或其抗原结合部分是IgG同种型并包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:92中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:95中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:112中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在本发明的一个实施例中，本发明提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法，其包括：给予有效量的包含与至少一种Bcl-xL抑制剂偶联的抗CD98抗体的ADC，其中抗CD98抗体或其抗原结合部分是IgG同种型并包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:104中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:102中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在某些实施例中，本发明包括用于治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者给予与额外的药剂或额外的治疗组合的本文所述的药物组合物。在某些实施例中，额外的药剂选自下组，该组由以下组成：抗PD1抗体(例如，派立珠单抗)、抗PD-L1抗体(例如，阿特唑单抗)、抗CTLA-4抗体(例如，伊匹单抗)、MEK抑制剂(例如，曲美替尼)、ERK抑制剂、BRAF抑制剂(例如，达拉菲尼)、奥斯替尼、埃罗替尼、吉非替尼、索拉非尼、CDK9抑制剂(例如，迪那西利)、MCL-1抑制剂、替莫唑胺、Bcl-xL抑制剂、Bcl-2抑制剂(例如，维奈托克)、依鲁替尼、mTOR抑制剂(例如，依维莫司)、PI3K抑制剂(例如，布帕利昔)、度维利塞(duvelisib)、艾代拉里斯(idelalisib)、AKT抑制剂、HER2抑制剂(例如，拉帕替尼)、紫杉烷(例如，多西他赛、紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇(nab-紫杉醇))、包含澳瑞他汀的ADC、包含PBD(例如，罗武匹妥珠-特西林(rovalpituzumab tesirine))的ADC、包含美登木素生物碱(例如，TDM1)的ADC、TRAIL激动剂、蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米)、和烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)抑制剂。在某些实施例中，额外的药剂是抗CTLA-4抗体(例如，伊匹单抗)。在某些实施例中，额外的药剂是依鲁替尼。在某些实施例中，额外的药剂是度维利塞(duvelisib)。在某些实施例中，额外的药剂是艾代拉里斯(idelalisib)。在某些实施例中，额外的药剂是维奈托克。在某些实施例中，额外的药剂是替莫唑胺。
在某些实施例中，本发明还提供了编码如本文所述的抗体或其抗原结合部分的分离的核酸。此外，本发明包括包含核酸的载体，和包含载体的宿主细胞，例如原核或真核细胞(例如动物细胞、保护细胞(protest cell)、植物细胞和真菌细胞)。在本发明的实施例中，动物细胞选自下组，该组由以下组成：哺乳动物细胞、昆虫细胞和禽细胞。在一个实施例中，哺乳动物细胞选自下组，该组由以下组成：CHO细胞、COS细胞、和Sp2/0细胞。
在某些实施例中，本发明的特征在于包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗hCD98抗体的抗hCD98抗体药物偶联物(ADC)，其中该抗体包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:87中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:108中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施例中，本发明的特征在于包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗hCD98抗体的抗hCD98抗体药物偶联物(ADC)，其中该抗体包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:90中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施例中，本发明的特征在于包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗hCD98抗体的抗hCD98抗体药物偶联物(ADC)，其中该抗体包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:92中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:95中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:112中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施例中，本发明的特征在于包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗hCD98抗体的抗hCD98抗体药物偶联物(ADC)，其中该抗体包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:104中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:102中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含IgG重链免疫球蛋白恒定域。在另一实施例中，IgG是IgG1或IgG4重链免疫球蛋白恒定域。
在一个实施例中，本发明包括：包含与澳瑞他汀偶联的抗hCD98抗体的ADC，其中澳瑞他汀是单甲基澳瑞他汀F(MMAF)(monomethylaurisatin F)或单甲基澳瑞他汀E(MMAE)。在一个实施例中，本发明包括ADC，其中澳瑞他汀是单甲基澳瑞他汀F(MMAF)(monomethylaurisatin F)。在一个实施例中，本发明包括ADC，其中澳瑞他汀是单甲基澳瑞他汀E(MMAE)。在本发明的另一个实施例中，抗CD98抗体通过包含马来酰亚胺基己酰基、缬氨酸-瓜氨酸、p-氨基苄基醇(mc-vc-PABA)的接头共价地与澳瑞他汀连接。
在一个实施例中，本发明包括：包含抗CD98和放射性标记(例如，铟)的ADC。
在一个实施例中，如本文所述的抗CD98抗体与至少一个吡咯苯并二吖庚因(PBD)共价地连接。在某些实施例中，如本文所披露的抗CD98抗体与如图4所述的PBD(即，SGD-1882)连接。
在一些实施例中，本发明的特征在于包含本文所述的ADC和药学上可接受的载体的药物组合物。在某些实施例中，本发明的特征在于包括包含本文所述的ADC的ADC混合物的药物组合物，其中ADC混合物中的平均药物/抗体比率(DAR)范围是2至4。在某些实施例中，ADC混合物中的平均药物/抗体比率(DAR)范围是2.4至3.6。
在一个实施例中，本发明的特征在于药物组合物，其包含ADC混合物(该ADC混合物包含抗hCD98抗体药物偶联物(ADC))以及药物上可接受的载体，其中该ADC混合物具有2至4的平均药物/抗体比率(DAR)并且所述ADC包含与抗hCD98抗体偶联的Bcl-xL抑制剂，该抗hCD98抗体包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ IDNO:87中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQID NO:108中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在另一个实施例中，本发明的特征在于药物组合物，其包含ADC混合物(该ADC混合物包含抗hCD98抗体药物偶联物(ADC))以及药物上可接受的载体，其中该ADC混合物具有2至4的平均药物/抗体比率(DAR)并且所述ADC包含与抗hCD98抗体偶联的Bcl-xL抑制剂，该抗hCD98抗体包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQID NO:90中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在又另一个实施例中，本发明的特征在于药物组合物，其包含ADC混合物(该ADC混合物包含抗hCD98抗体药物偶联物(ADC))以及药物上可接受的载体，其中所述ADC混合物具有2至4的平均药物/抗体比率(DAR)并且所述ADC包含与抗hCD98抗体偶联的Bcl-xL抑制剂，该抗hCD98抗体包含：包含SEQ ID NO:92中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:95中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:112中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在另一实施例中，本发明的特征在于药物组合物，其包含ADC混合物(该ADC混合物包含抗hCD98抗体药物偶联物(ADC))以及药物上可接受的载体，其中所述ADC混合物具有2至4的平均药物/抗体比率(DAR)并且所述ADC包含与抗hCD98抗体偶联的Bcl-xL抑制剂，该抗hCD98抗体包含：包含SEQ ID NO:104中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:102中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在又另一个实施例中，抗CD98抗体包含：包含SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在本发明的其他实施例中，抗体包含IgG重链免疫球蛋白恒定域。在其他实施例中，本发明包括具有IgG1或IgG4重链免疫球蛋白恒定域的抗体。在一个实施例中，本发明包括是IgG1同种型的抗体。
在又另一个实施例中，本发明包括抗体，其包含：包含SEQ ID NO:108、110、115、或118中所阐述的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO:107或112中所阐述的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，本发明的特征在于具有通过接头与抗体偶联的Bcl-xL抑制剂。
在本发明的一个实施例中，本发明提供了用于治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者给予包含本文所述的抗体与ADC的药物组合物从而治疗患有癌症的受试者。在一个实施例中，该癌症选自下组，该组由以下组成：乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胶质母细胞瘤、***癌、胰腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、和血液癌症(如，多发性骨髓瘤、淋巴瘤、和急性髓性白血病)。在一个实施例中，该癌症选自下组，该组由以下组成：乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胶质母细胞瘤、***癌、胰腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、头颈癌、间皮瘤、肾癌、鳞状细胞癌、三阴性乳腺癌、小细胞肺癌、及非小细胞肺癌。在又另一个实施例中，该癌症包含过表达CD98。在一个实施例中，该鳞状细胞癌是鳞状肺癌或鳞状头颈癌。在一个实施例中，该癌症是CD98过表达癌症。在一个实施例中，该癌症是乳腺癌。在一个实施例中，该癌症是肺癌。在一个实施例中，该癌症是***癌。在一个实施例中，该癌症是胰腺癌。在一个实施例中，该癌症是结肠癌。在一个实施例中，该癌症是头颈癌。在一个实施例中，该癌症是肾癌。在一个实施例中，该癌症是血液癌症。在某些实施例中，该血液癌症是多发性骨髓瘤。在某些实施例中，该血液癌症是急性髓性白血病。在其他实施例中，该血液癌症是淋巴瘤。在一个实施例中，该癌症是结肠直肠癌。在一个实施例中，该癌症是间皮瘤。在一个实施例中，该癌症是鳞状细胞癌。在一个实施例中，该癌症是三阴性乳腺癌。在一个实施例中，该癌症是非小细胞肺癌。在某些实施例中，该鳞状细胞癌是鳞状肺癌或鳞状头颈癌。在某些实施例中，该癌症的特征在于具有EGFR过表达。在其他实施例中，该癌症的特征在于具有激活性EGFR突变，例如，激活EGFR信号传导通路的一个或多个突变和/或导致EGFR蛋白过表达的一个或多个突变。在特定的示例性实施例中，激活性EGFR突变可能是EGFR基因的突变。在特定实施例中，激活性EGFR突变是外显子19缺失突变、外显子21中的单点取代突变L858R、T790M点突变、和/或其组合。
另外，在某些实施例中，本发明提供了在具有实体瘤的受试者中用于抑制或减少实体瘤生长的方法，所述方法包括将本文所述的药物组合物给予患有实体瘤的受试者，使得实体瘤生长被抑制或减少。在一个实施例中，实体瘤是非小细胞肺癌或胶质母细胞瘤。在又另一个实施例中，实体瘤是过表达CD98的实体瘤。在又另一个实施例中，实体瘤是CD98扩增的肿瘤。在一个实施例中，实体瘤是具有扩增的CD98的非小细胞肺癌。在一个实施例中，实体瘤是具有CD98过表达的非小细胞肺癌。在一个实施例中，实体瘤是具有扩增的CD98胶质母细胞瘤。在一个实施例中，实体瘤是具有CD98过表达的胶质母细胞瘤。
在某些实施例中，本发明提供组合疗法，其中将本文所述的药物组合物给予有需要的受试者(例如，具有癌症或实体瘤的受试者)。本文所述的药物组合物可以在给予额外的药剂或额外的治疗的同时，之前或之后给予。在某些实施例中，额外的药剂选自下组，该组由以下组成：抗PD1抗体(例如，派立珠单抗)、抗PD-L1抗体(例如，阿特唑单抗)、抗CTLA-4抗体(例如，伊匹单抗)、MEK抑制剂(例如，曲美替尼)、ERK抑制剂、BRAF抑制剂(例如，达拉菲尼)、奥斯替尼、埃罗替尼、吉非替尼、索拉非尼、CDK9抑制剂(例如，迪那西利)、MCL-1抑制剂、替莫唑胺、Bcl-xL抑制剂、Bcl-2抑制剂(例如，维奈托克)、依鲁替尼、mTOR抑制剂(例如，依维莫司)、PI3K抑制剂(例如，布帕利昔)、度维利塞(duvelisib)、艾代拉里斯(idelalisib)、AKT抑制剂、HER2抑制剂(例如，拉帕替尼)、紫杉烷(例如，多西他赛、紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇(nab-紫杉醇))、包含澳瑞他汀的ADC、包含PBD(例如，罗武匹妥珠-特西林(rovalpituzumab tesirine))的ADC、包含美登木素生物碱(例如，TDM1)的ADC、TRAIL激动剂、蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米)、和烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)抑制剂。在又其他实施例中，额外的药剂是化学治疗剂。在某些实施例中，额外的治疗是辐射。在其他实施例中，额外的药剂是依鲁替尼(费马赛克公司(Pharmacyclics))。在其他实施例中，额外的药剂是度维利塞(duvelisib)。在其他实施例中，额外的药剂是艾代拉里斯(idelalisib)(吉利德科技公司(Gilead Sciences,Inc.))。在其他实施例中，额外的药剂是维奈托克(ABT-199/GDC-0199，艾伯维公司(AbbVie,Inc.))。在某些实施例中，额外的药剂是抗PD1抗体(例如，派立珠单抗或纳武单抗)。在某些实施例中，额外的药剂是抗PD-L1抗体(例如，阿特唑单抗)。在某些实施例中，额外的药剂是抗CTLA-4抗体(例如，伊匹单抗)。在某些实施例中，额外的药剂是替莫唑胺。
在某些实施例中，本发明的特征在于嵌合抗原受体(CAR)，其包含本文所述抗体的抗原结合区(例如CDR)或本文所述scFv。在某些实施例中，本发明的特征在于CAR，其包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:87中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在某些实施例中，本发明的特征在于CAR，其包含：包含SEQ IDNO:108中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施例中，本发明的特征在于CAR，其包含：包含SEQ ID NO:17中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:90中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:16中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:19中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:7中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:13中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在其他实施例中，本发明的特征在于CAR，其包含：包含SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施例中，本发明的特征在于CAR，其包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:92中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ ID NO:95中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在其他实施例中，本发明的特征在于CAR，其包含：包含SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:112中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施例中，本发明的特征在于CAR，其包含：包含SEQ ID NO:97中所阐述的氨基酸序列的重链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:104中所阐述的氨基酸序列的重链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:79中所阐述的氨基酸序列的重链CDR1结构域；以及包含SEQ IDNO:102中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。在其他实施例中，本发明的特征在于CAR，其包含：包含SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，本发明提供一种抗CD98抗体药物偶联物(ADC)，其包含通过接头与药物偶联的本发明的抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108、huAb110)。在一些实施例中，该药物是澳瑞他汀或吡咯苯并二吖庚因(PBD)。在一些实施例中，该药物是Bcl-xL抑制剂。在一些实施例中，该接头是可裂解接头。在一些实施例中，该接头是不可裂解的接头。在一些实施例中，该接头是马来酰亚胺基己酰基、缬氨酸-瓜氨酸、p-氨基苄基醇(mc-vc-PABA)。
在一些实施例中，抗人CD98(hCD98)抗体药物偶联物(ADC)包含通过接头与抗-人CD98(hCD98)抗体连接的药物，其中该药物为根据结构式(IIa)、或(IIb)的Bcl-xL抑制剂：
其中：
Ar1选自 并且任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基；
Ar2选自 并任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基，其中式(IIb)的#-N(R4)-R13-Z2b-取代基在Ar2的任何能够被取代的原子处附接至Ar2；
Z1选自N、CH、C-卤基和C-CN；
Z2a、Z2b、和Z2c各自彼此独立地选自键、NR6、CR6aR6b、O、S、S(O)、SO2、NR6C(O)、NR6aC(O)NR6b、和NR6C(O)O；
R1选自氢、甲基、卤基、卤代甲基、乙基和氰基；
R2选自氢、甲基、卤基、卤代甲基和氰基；
R3选自氢、低级烷基和低级杂烷基；
R4选自氢、低级烷基、单环环烷基、单环杂环基、和低级杂烷基，或与R13的原子一起形成具有在3与7个环原子之间的环烷基环或杂环基环，其中该低级烷基、单环环烷基、单环杂环基、和低级杂烷基任选地被一个或多个以下基团取代：卤基、氰基、羟基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、C(O)NR6aR6b、S(O)2NR6aR6b、NHC(O)CHR6aR6b、NHS(O)CHR6aR6b、NHS(O)2CHR6aR6b、S(O)2CHR6aR6b或S(O)2NH2基团；
R6、R6a和R6b各自彼此独立地选自氢、
低级烷基、低级杂烷基、任选地取代的单环环烷基和单环杂环基，或与来自R13的原子一起形成具有3至7个环原子的环烷基或杂环基环；
R10选自氰基、OR14、SR14、SOR14、SO2R14、SO2NR14aR14b、NR14aR14b、NHC(O)R14和NHSO2R14；
R11a和R11b各自彼此独立地选自氢、卤基、甲基、乙基、卤代甲基、羟基、甲氧基、CN、和SCH3；
R12选自氢、卤基、氰基、低级烷基、低级杂烷基、环烷基、和杂环基，其中该烷基、杂烷基、环烷基、和杂环基任选地被一个或多个以下基团取代：卤基、氰基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、NHC(O)CHR6aR6b、NHS(O)CHR6aR6b、NHS(O)2CHR6aR6b或S(O)2CHR6aR6b基团；
R13选自键、任选地取代的低级亚烷基、任选地取代的低级杂亚烷基、任选地取代的环烷基、或任选地取代的杂环基；
R14选自氢、任选地取代的低级烷基、和任选地取代的低级杂烷基；
R14a和R14b各自彼此独立地选自氢、任选地取代的低级烷基、和任选地取代的低级杂烷基，或与它们所键合的氮原子一起形成任选地取代的单环环烷基或单环杂环基环；
R15选自氢、卤基、C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、和C1-4卤代烷基和C1-4羟烷基，条件是当R15存在时，R4不是C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基或C1-4羟烷基，其中R4C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基和C1-4羟烷基任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：OCH3、OCH2CH2OCH3、和OCH2CH2NHCH3；以及
#代表与接头的附接点；以及
其中抗hCD98抗体选自由以下组成的组：
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO:17中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO:87中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO:19中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQID NO:7中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO:17中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO:90中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO:19中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQID NO:7中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO:97中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO:92中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:79中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO:95中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQID NO:45中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:83中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；和。
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO:97中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO:104中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:79中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；包含SEQ ID NO:102中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO:45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO:83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。
在一些实施例中，ADC包含根据结构式(I)的化合物:
其中：
D是式(IIa)或(IIb)的Bcl-xL抑制剂药物；
L是接头；
Ab是抗hCD98抗体；
LK代表将接头(L)连接至抗hCD98抗体(Ab)的共价键；以及
m是范围从1至20的整数。
在一些实施例中，Ar1是未取代的。
在一些实施例中，Ar1是
在一些实施例中，Ar2是未取代的。
在一些实施例中，Ar2是其在5-位任选地被选自羟基、C1-4烷氧基、和氰基的基团取代；或
Ar2是或
Ar2是或
Ar2是
在一些实施例中，Z1是N。在一些实施例中，Z2a是O。在一些实施例中，R1是甲基或氯。在一些实施例中，R2是氢或甲基。在一些实施例中，R2是氢。在一些实施例中，R4是氢或低级烷基，其中该低级烷基任选地被C1-4烷氧基或C(O)NR6aR6b取代。
在一些实施例中,
Z1是N，Z2a是O，R1是甲基或氯，R2是氢，并且Ar2是 其中该在5-位被选自羟基、C1-4烷氧基、和氰基的基团任选地取代。
在一些实施例中，药物是根据结构式(IIa)的Bcl-xL抑制剂。
在一些实施例中，药物是根据结构式(IIa)的Bcl-xL抑制剂。
在一些实施例中，Z2a是CH2或O。
在一些实施例中，R13选自低级亚烷基或低级杂亚烷基。
在一些实施例中，该基团是
在一些实施例中，该基团是
在一些实施例中，基团选自
在一些实施例中，该基团是
在一些实施例中，Z2a是氧，R13是CH2CH2，R4是氢或任选地被C1-4烷氧基或C(O)NR6aR6b取代的低级烷基。
在一些实施例中，ADC包含根据结构式(IIb)的化合物。
在一些实施例中，Z2b是键、O、或NR6，或者并且R13是亚乙基或任选地取代的杂环基。
在一些实施例中，Z2c是O，并且R12是任选地被一个或多个卤基或C1-4烷氧基取代的低级烷基。
在一些实施例中，Bcl-xL抑制剂选自由以下化合物组成的组，对这些化合物的修饰在于：对应于结构式(IIa)或(IIb)的#位置的氢不存在，从而形成单价基团：
6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-([1,3]噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-([1,3]噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(氧杂环丁烷-3-基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[6-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3,5-二甲基-7-{2-[(2-氨磺酰基乙基)氨基]乙氧基}三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-{甲基[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]吡啶-2-甲酸；
6-[5-氨基-8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-[3-(甲基氨基)丙-1-炔-1-基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]吡啶-2-甲酸；
6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-甲基-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3,5-二甲基-7-(2-{[1-(甲磺酰基)哌啶-4-基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3,5-二甲基-7-(2-{[1-(甲磺酰基)氮杂环丁-3-基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲唑-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((2-(N,N-二甲基氨磺酰基)乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(3-羟丙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{[3-(二甲基氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3,5-二甲基-7-(2-{[3-(甲基氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙酰氨基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3-[(2-氨基乙基)硫烷基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(3-氨基丙基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；以及
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{5-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]喹啉-3-基}吡啶-2-甲酸。
在一些实施例中，接头是可被溶酶体酶裂解的。在一些实施例中，溶酶体酶是组织蛋白酶B。
在一些实施例中，接头包含根据结构式(IVa)、(IVb)、(IVc)、或(IVd)的区段：
其中：
肽代表可被溶酶体酶裂解的肽(示例为N→C，其中肽包括氨基和羧基“末端”)；
T代表包含一个或多个乙二醇单元或亚烷基链或其组合的聚合物；
Ra选自氢、C1-6烷基、SO3H和CH2SO3H；
Ry是氢或C1-4烷基-(O)r-(C1-4亚烷基)s-G1或C1-4烷基-(N)-[(C1-4亚烷基)-G1]2；
Rz是C1-4烷基-(O)r-(C1-4亚烷基)s-G2；
G1是SO3H、CO2H、PEG4-32、或糖部分；
G2是SO3H、CO2H、或PEG4-32部分；
r是0或1；
s是0或1；
p是从0至5的整数；
q是0或1；
x是0或1；
y是0或1；
代表该接头与该Bcl-xL抑制剂的附接点；以及
*代表与该接头其余部分的附接点。
在一些实施例中，肽选择下组，该组由以下组成：Val-Cit；Cit-Val；Ala-Ala；Ala-Cit；Cit-Ala；Asn-Cit；Cit-Asn；Cit-Cit；Val-Glu；Glu-Val；Ser-Cit；Cit-Ser；Lys-Cit；Cit-Lys；Asp-Cit；Cit-Asp；Ala-Val；Val-Ala；Phe-Lys；Lys-Phe；Val-Lys；Lys-Val；Ala-Lys；Lys-Ala；Phe-Cit；Cit-Phe；Leu-Cit；Cit-Leu；Ile-Cit；Cit-Ile；Phe-Arg；Arg-Phe；Cit-Trp；和Trp-Cit。
在一些实施例中，溶酶体酶是β-葡糖醛酸糖苷酶或β-半乳糖苷酶。
在一些实施例中，接头包含根据结构式(Va)、(Vb)、(Vc)、(Vd)、或(Ve)的区段：
其中：
q是0或1；
r是0或1；
X1是CH2、O或NH；
代表该接头与该药物的附接点；以及
*代表与该接头的其余部分的附接点。
在一些实施例中，接头包含根据结构式(VIIIa)、(VIIIb)、或(VIIIc)的区段：
或其水解衍生物，其中：
Rq是H或-O-(CH2CH2O)11-CH3；
x是0或1；
y是0或1；
G3是-CH2CH2CH2SO3H或-CH2CH2O-(CH2CH2O)11-CH3；
Rw是-O-CH2CH2SO3H或-NH(CO)-CH2CH2O-(CH2CH2O)12-CH3；
*代表与该接头的其余部分的附接点；以及
代表该接头与该抗体的附接点，其中当处于水解形式时，可以位于其旁的羧酸的α位或β位。
在一些实施例中，接头包含具有从1至6个乙二醇单元的聚乙二醇区段。
在一些实施例中，m是2、3或4。
在一些实施例中，接头L包含根据结构式IVa或IVb的区段。
在一些实施例中，接头L选自下组，该组由以下组成：处于封闭或开放形式的IVa.1-IVa.8、IVb.1-IVb.19、IVc.1-IVc.7、IVd.1-IVd.4、Va.1-Va.12、Vb.1-Vb.10、Vc.1-Vc.11、Vd.1-Vd.6、Ve.1-Ve.2、VIa.1、VIc.1-V1c.2、VId.1-VId.4、VIIa.1-VIIa.4、VIIb.1-VIIb.8、VIIc.1-VIIc.6。
在一些实施例中，接头L选自下组，该组由以下组成：IVb.2、IVc.5、IVc.6、IVc.7、IVd.4、Vb.9、Vc.11、VIIa.1、VIIa.3、VIIc.1、VIIc.4、和VIIc.5，其中每个接头的马来酰亚胺与抗体Ab反应，形成呈琥珀酰亚胺(封闭形式)或琥珀酰胺(开放形式)的共价附接。
在一些实施例中，接头L选自下组，该组由以下组成：IVb.2、IVc.5、IVc.6、IVd.4、Vc.11、VIIa.1、VIIa.3、VIIc.1、VIIc.4、VIIc.5，其中每个接头的马来酰亚胺与抗体Ab反应，形成呈琥珀酰亚胺(封闭形式)或琥珀酰胺(开放形式)的共价附接。
在一些实施例中，接头L选自下组，该组由以下组成：IVb.2、Vc.11、VIIa.3、IVc.6、和VIIc.1，其中是与药物D的附接点，并且@是与LK的附接点，其中当该接头处于如以下所示的开放形式时，@可以位于其旁的羧酸的α位或β位：
在一些实施例中，LK是与抗hCD98抗体上的氨基基团形成的键。在一些实施例中，LK是酰胺或硫脲。在一些实施例中，LK是与在抗hCD98抗体上的巯基基团形成的键。在一些实施例中，LK是硫醚。
在一些实施例中，LK选自下组，该组由以下组成：酰胺、硫脲和硫醚；并且m是范围从1至8的整数。
在一些实施例中，D是本文所定义的Bcl-xL抑制剂；L选自下组，该组由以下组成：接头IVa.1-IVa.8、IVb.1-IVb.19、IVc.1-IVc.7、IVd.1-IVd.4、Va.1-Va.12、Vb.1-Vb.10、Vc.1-Vc.11、Vd.1-Vd.6、Ve.1-Ve.2、VIa.1、VIc.1-V1c.2、VId.1-VId.4、VIIa.1-VIIa.4、VIIb.1-VIIb.8、和VIIc.1-VIIc.6，其中每个接头已与该抗体Ab反应形成共价附接；LK是硫醚；并且m是范围从1至8的整数。
在一些实施例中，D是选自由以下化合物组成的组的Bcl-xL抑制剂，对这些化合物的修饰在于：对应于结构式(IIa)或(IIb)的#位置的氢不存在，从而形成单价基团：
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；以及
3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
L选自下组，该组由以下组成：处于封闭或开放形式的接头IVb.2、IVc.5、IVc.6、IVc.7、IVd.4、Vb.9、Vc.11、VIIa.1、VIIa.3、VIIc.1、VIIc.4、和VIIc.5；
LK是硫醚；以及
m是范围从2至4的整数。
在一些实施例中，ADC选自由以下组成的组：huAb102-ZT、huAb102-ZZ、huAb102-XW、huAb102-SE、huAb102-SR、huAb102-YG、huAb102-KZ、huAb104-ZT、huAb104-ZZ、huAb104-XW、huAb104-SE、huAb104-SR、huAb104-YG、huAb104-KZ、huAb108-ZT、huAb108--ZZ、huAb108--XW、huAb108--SE、huAb108--SR、huAb108--YG、huAb108—KZ、huAb110-ZT、huAb110-ZZ、huAb110-XW、huAb110-SE、huAb110-SR、huAb110-YG、和huAb110-KZ，其中huAb102、huAb104、huAb108、和huAb110是抗hCD98抗体并且KZ、SR、SE、XW、YG、ZT和ZZ是表5中披露的合成子，并且其中这些合成子处于开放或封闭形式。
在一些实施例中，ADC选自下组，该组由以下组成：式i-xiv：
其中m是从1到6的整数。在一个特定的实施例中，m是2。在一个特定的实施例中，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb102的重链和轻链CDR。在另一个特定的实施例中，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb104的重链和轻链CDR。在一个特定的实施例中，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb108的重链和轻链CDR。在另一个特定的实施例中，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb110的重链和轻链CDR。
在一些实施例中，m是从2到6的整数。
在一些实施例中，抗体包含：包含SEQ ID NO:108中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗体包含：包含SEQ ID NO:110中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:107中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗体包含：包含SEQ ID NO:115中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:112中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗体包含：包含SEQ ID NO:118中所阐述的氨基酸序列的重链可变区及包含SEQ ID NO:117中所阐述的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施例中，抗体是单克隆IgG1抗体。在一些实施例中，该抗体包含κ轻链。
在一些实施例中，ADC选自下组，该组由以下组成：huAb102-ZT、huAb102-ZZ、huAb102-XW、huAb102-SE、huAb102-SR、huAb102-YG、huAb102-KZ、huAb104-ZT、huAb104-ZZ、huAb104-XW、huAb104-SE、huAb104-SR、huAb104-YG、huAb104-KZ、huAb108-ZT、huAb108--ZZ、huAb108--XW、huAb108--SE、huAb108--SR、huAb108--YG、huAb108—KZ、huAb110-ZT、huAb110-ZZ、huAb110-XW、huAb110-SE、huAb110-SR、huAb110-YG、和huAb110-KZ。
在一些实施例中，本发明提供包含有效量的本发明的ADC和药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施例中，本发明提供包含ADC混合物和药学上可接受的载体的药物组合物，该ADC混合物包含多种本发明的ADC。
在一些实施例中，ADC混合物具有2至4的平均药物/抗体比率(DAR)。在一些实施例中，ADC混合物包含各自具有2至8的DAR的ADC。
在一些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者给予治疗有效量的本发明的ADC。在一些实施例中，该癌症是选自下组，该组由以下组成：小细胞肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胶质母细胞瘤、***癌、胰腺癌、结肠癌、头颈癌、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、和急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、慢性白细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、急性髓性白血病和肾癌。
在一些实施例中，该癌症是鳞状细胞癌。在一些实施例中，该鳞状细胞癌是鳞状肺癌或鳞状头颈癌。在一些实施例中，该癌症是三阴性乳腺癌。在一些实施例中，该癌症是多发性骨髓瘤。在一些实施例中，该癌症是急性髓性白血病。在一些实施例中，该癌症是非小细胞肺癌。
在一些实施例中，本发明提供了在具有实体瘤的受试者中用于抑制或减少实体瘤生长的方法，所述方法包含将治疗有效量的本发明的ADC给予患有实体瘤的受试者，使得实体瘤生长被抑制或减少。
在一些实施例中，实体瘤是非小细胞肺癌。
在一些实施例中，ADC与额外的药剂或额外的治疗组合给予。在一些实施例中，额外的药剂选自下组，该组由以下组成：抗PD1抗体(例如，派立珠单抗)、抗PD-L1抗体(例如，阿特唑单抗)、抗CTLA-4抗体(例如，伊匹单抗)、MEK抑制剂(例如，曲美替尼)、ERK抑制剂、BRAF抑制剂(例如，达拉菲尼)、奥斯替尼、埃罗替尼、吉非替尼、索拉非尼、CDK9抑制剂(例如，迪那西利)、MCL-1抑制剂、替莫唑胺、Bcl-xL抑制剂、Bcl-2抑制剂(例如，维奈托克)、依鲁替尼、mTOR抑制剂(例如，依维莫司)、PI3K抑制剂(例如，布帕利昔)、度维利塞(duvelisib)、艾代拉里斯(idelalisib)、AKT抑制剂、HER2抑制剂(例如，拉帕替尼)、紫杉烷(例如，多西他赛、紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇(nab-紫杉醇))、包含澳瑞他汀的ADC、包含PBD(例如，罗武匹妥珠-特西林(rovalpituzumab tesirine))的ADC、包含美登木素生物碱(例如，TDM1)的ADC、TRAIL激动剂、蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米)、和烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)抑制剂。在一些实施例中，该额外的治疗是辐射。在一些实施例中，该额外的药剂是化学治疗剂。
在一些实施例中，该癌症或肿瘤的特征在于具有CD98过表达。
在一些实施例中，该癌症或肿瘤的特征在于具有激活性EGFR突变。在一些实施例中，激活性EGFR突变选自下组，该组由以下组成：外显子19缺失突变、外显子21中的单点取代突变L858R、T790M点突变、及其组合。
一方面，本发明提供了用于制备根据结构式(I)的ADC的方法：
其中：
D是如本文所披露的式(IIa)或(IIb)的Bcl-xL抑制剂药物；
L是如本文披露的接头；
Ab是CD98抗体，其中该CD98抗体包含huAb102、huAb014、huAb108、或huAb110的重链和轻链CDR；
LK代表将接头L连接至抗体Ab的共价键；以及
m是范围从1至20的整数；
该方法包括：
将水溶液中的抗体用有效量的二硫化物还原剂在30℃-40℃处理至少15分钟，并且然后将该抗体溶液冷却至20℃-27℃；
向该还原的抗体溶液中添加水/二甲基亚砜溶液，该溶液包含选自2.1至2.31和2.34至2.72的组的合成子(表5)；
将该溶液的pH调节为pH 7.5至8.5；
允许该反应运行48至80小时，以形成ADC；
其中如通过电喷雾质谱法测量的，对于琥珀酰亚胺每次水解为琥珀酰胺，质量偏移18±2amu；以及
其中任选地将该ADC通过疏水作用色谱纯化。
在一个实施例中，m是2。
在另一方面，本发明提供了通过权利要求125或126的方法制备的ADC。
附图说明
图1描绘了抗体还原、用马来酰亚胺衍生物修饰以得到硫代琥珀酰亚胺中间体，随后水解硫代琥珀酰亚胺部分。
图2描述了偶联之前，2)与马来酰亚胺衍生物偶联以得到硫代琥珀酰亚胺中间体之后，和3)硫代琥珀酰亚胺环的pH 8-介导的水解后，huAb108的轻链和重链的MS表征。
图3提供了Ab-马来酰亚胺基己酰基-vc-PABA-MMAEADC(本文称为“Ab-vcMMAE”)的结构。
图4描绘了通过马来酰亚胺基己酰基-缬氨酸-丙氨酸接头(统称为SGD-1910)与抗体(Ab)偶联的PBD二聚体(SGD-1882)的结构。
具体实施方式
本发明的各个方面涉及抗CD98抗体和抗体片段，抗CD98及其药物组合物，以及用于制备此类抗体和片段的核酸、重组表达载体和宿主细胞。使用本文所述的抗体和ADC检测人CD98，抑制人CD98活性(体外或体内)和治疗癌症的方法也被本发明涵盖，这些癌症是例如上皮癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、头颈癌(例如，胶质母细胞瘤)、喉癌、食道癌、肺癌、肾癌、胰腺癌、间皮瘤、鳞状细胞癌(例如，鳞状肺癌或鳞状头颈癌)、三阴性乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、血液癌症(例如，多发性骨髓瘤、急性髓性白血病、或淋巴瘤)和***癌。
下面提供了具体实施方式的梗概：
I.定义
II.抗CD98抗体
II.A.抗CD98嵌合抗体
II.B.人源化抗CD98抗体
III.抗CD98抗体药物偶联物(ADC)
III.A.抗CD98/Bcl-xL抑制剂ADC
III.A.1.Bcl-xL抑制剂
III.A.2.Bcl-xL接头
可裂解接头
不可裂解的接头
用于将接头附接至抗CD98抗体的基团
接头选择考虑
III.A.3.Bcl-xL ADC合成子
III.A.4.Bcl-xL ADC的合成方法
III.A.5.合成Bcl-xL抑制剂的通用方法
III.A.6.合成抗CD98 ADC的通用方法
III.B.抗CD98 ADC：用于偶联的其他示例性药物
III.C.抗CD98 ADC：其他示例性接头
IV.抗CD98 ADC的纯化
V.抗CD98抗体和抗CD98 ADC的用途
VI.药物组合物
I.定义
为了更容易理解本发明，首先定义某些术语。另外，应当注意，每当列举参数的值或值范围时，所列举值中间的值和范围也旨在成为本发明的一部分。
如此处所用，术语“抗CD98抗体”是指特异性结合CD98的抗体。“结合”目标抗原即CD98的抗体是能够以足够的亲和力结合该抗原(例如CD98的细胞外结构域)的抗体，使得该抗体可用于靶向表达抗原的细胞。在一个优选的实施例中，抗体特异性结合人CD98(hCD98)，例如hCD98的细胞外结构域。抗CD98抗体的实例披露于以下实例中。除非另有说明，否则术语“抗CD98抗体”是指与野生型CD98(包括CD98的细胞外结构域或CD98的任何变体)结合的抗体。
CD98(也称为(也称为CD98重链；4F2重链；4F2hc；SLC3A2)是由630氨基酸残基组成的II型跨膜糖蛋白。该蛋白质包含75个氨基酸的N-末端细胞内细胞质结构域、单个跨膜结构域和425个氨基酸的C-末端细胞外结构域(Parmacek等人(1989)Nucleic Acids Res[核酸研究].17:1915-1931)。野生型人CD98的示例性氨基酸序列在下文作为SEQ ID NO:124提供。CD98的细胞外结构域(ECD)(SEQ ID NO:125；下划线)包括SEQ ID NO:124的氨基酸206-630。
如本文所用，“CD98的生物活性”是指CD98的所有固有生物学特性，包括但不限于细胞增殖、存活和/或生长的调节；整合素信号传导的调节；以及氨基酸转运的调节。
如本文关于抗体或ADC与第二化学物质的相互作用所用的术语“特异性结合”或“特异性地结合”意指该相互作用视化学物质上特定结构(例如，抗原决定簇或表位)的存在而定；例如，抗体识别且与特定蛋白质结构结合而不是一般地与蛋白质结合。若抗体或ADC对表位“A”具有特异性，则在含经标记“A”及该抗体的反应中，含表位A(或未经标记的游离A)的分子的存在将减少结合至该抗体或ADC的经标记A的量。举例来说，如果抗体在被标记时可以通过相应的非标记抗体与其靶标竞争分离，则抗体“特异性结合”靶标(抗原)。在一个实施例中，如果抗体对靶标的KD为至少约10-4M、10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、或更低(更低意指小于10-12的数，例如10-13)，则抗体特异性结合靶标，例如，CD98。在一个实施例中，本文使用的术语“与CD98特异性结合”或“特异性结合至CD98”是指与CD98结合且如通过表面等离子体共振测量的，解离常数(KD)为1.0×10-7M或更低的抗体或ADC。然而，应该理解，抗体或ADC能够特异性结合序列上相关的两种或更多种抗原。例如，在一个实施例中，抗体可以特异性结合CD98的人和非人(例如，小鼠或非人灵长类动物)直系同源物。
术语“抗体”或“Ab”是指与抗原特异性结合的、并包含一条或多条重链(H)和一条或多条轻链(L)的免疫球蛋白分子。每个重链由重链可变区(在此缩写成HCVR或VH)和重链恒定区构成。重链恒定区由三个结构域(CH1、CH2及CH3)构成。各轻链由轻链可变区(本文中简写为LCVR或VL)及轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个结构域CL构成。VH及VL区可进一步再分成高变区，称为互补决定区(CDR)，穿插有称为框架区(FR)的较保守区。各VH及VL由三个CDR及四个FR构成，自氨基端至羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。抗体可为任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)和类别(例如，IgG1、IgG 2、IgG3、IgG 4、IgA1及IgA2)或子类。虽然术语“抗体”不旨在包括抗体的抗原结合部分(以下定义的)，但在某些实施例中其旨在描述包含来自一条或多条重链的羧基端的少量氨基酸缺失的抗体。因此，在一个实施例中，抗体包含具有在重链的羧基端1-5个氨基酸缺失的重链。在一个实施例中，抗体是结合hEGFR的、为IgG的单克隆抗体，具有四条多肽链，该四条多肽链为两条重(H)链和两条轻(L)链。在一个实施例中，抗体是包含λ或κ轻链的单克隆IgG抗体。
如本文使用的，术语抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合片段”(或简称为“抗体部分”或“抗体片段”)是指抗体中保留与抗原(例如，hIL-13)特异性结合的能力的一或多个片段。已显示，抗体的抗原结合功能可由全长抗体的片段来执行。此类抗体实施例还可为双特异性、双重特异性或多特异性形式；特异性结合至两个或更多个不同抗原。术语抗体的“抗原结合部分”内所涵盖的结合片段的实例包括(i)Fab片段，这是一种由VL、VH、CL及CH1域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，这是一种包含两个通过铰链区的二硫桥键连接的Fab片段的二价片段；(iii)由VH及CH1域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)包含单个可变域的dAb片段(Ward等人,(1989)Nature[自然]341:544-546,Winter等人,PCT公开WO 90/05144 A1，其通过引用并入本文)；及(vi)经分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域(VL及VH)由独立基因编码，但其可使用重组方法借由合成接头连接，合成接头能够将其制造成VL与VH区配对形成单价分子的单一蛋白质链(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等人(1988)Science[科学]242:423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]85:5879-5883)。此类单链抗体还意欲涵盖在术语抗体的“抗原结合部分”内。在本发明的某些实施例中，scFv分子可以掺入融合蛋白中。还涵盖其他形式的单链抗体，诸如双功能抗体。双功能抗体为二价双特异性抗体，其中VH及VL域在单一多肽链上表达，但使用过短以致于不允许同一条链上的两个结构域之间进行配对的接头，由此迫使这些结构域与另一条链的互补结构域配对且产生两个抗原结合位点(参见例如，Holliger,P.等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]90:6444-6448；Poljak,R.J.,等人(1994)Structure[结构]2:1121-1123)。此类抗体结合部分为本领域中已知的(Kontermann及Dubel编,Antibody Engineering[抗体工程化](2001)Springer-Verlag.[施普林格出版社]纽约第790页.(ISBN 3-540-41354-5))。
IgG(免疫球蛋白G)是包含以Y形排列的两条重链和两条轻链的抗体的类型。IgG恒定域是指重链或轻链恒定域。示例性人IgG重链及轻链恒定域氨基酸序列为本领域中已知的且呈现于以下。
人IgG重链恒定域及轻链恒定域的序列
如本文使用的，“分离的抗体”意指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合CD98的分离的抗体基本上不含特异性结合除CD98以外的抗原的抗体)。然而，特异性结合CD98的分离的抗体可以与其他抗原，诸如来自其他物种的CD98分子具有交叉反应性。另外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
术语“嵌合抗体”是指包含来自一个物种的重链及轻链可变区序列及来自另一物种的恒定区序列的抗体，诸如具有连接至人恒定区的鼠重链及轻链可变区的抗体。
术语“人源化抗体”是指包含来自非人物种(例如小鼠)的重链和轻链可变区序列的抗体，但其中至少一部分VH和/或VL序列已被改变为更“类人的”，即更类似于人种系可变序列。特别地，术语“人源化抗体”为免疫特异性结合至相关抗原且包含基本上具有人类抗体的氨基酸序列的框架(FR)区及基本上具有非人类抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变异体、衍生物、类似物或片段。如本文使用的，术语“基本上”在CDR的情况下是指CDR的氨基酸序列与非人类抗体CDR的氨基酸序列至少80％、优选至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％同一。人源化抗体基本上包含所有至少一个且通常两个可变域(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人类免疫球蛋白(即，供体抗体)的CDR区且所有或基本上所有框架区为具有人类免疫球蛋白共有序列的框架区。优选地，人源化抗体还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常为人类免疫球蛋白的恒定区。在一些实施例中，人源化抗体含有轻链以及重链的至少可变域。抗体还可包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3及CH4区。在一些实施例中，人源化抗体仅含人源化轻链。在其他实施例中，人源化抗体仅含人源化重链。在特定实施例中，人源化抗体仅含轻链和/或人源化重链的人源化可变域。
人源化抗体可选自任何类别的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA及IgE；及任何同种型，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。人源化抗体可以包含来自一种以上类别或同种型的序列，且可以使用本领域中熟知的技术选择特定恒定域以使所需效应功能优化。
术语“Kabat编号”、“Kabat定义”及“Kabat标记”在本文中可互换地使用。这些术语为本领域中公认的，是指给比抗体或其抗原结合部分的重链及轻链可变区中的其他氨基酸残基可变(即，高变)的氨基酸残基编号的***(Kabat等人(1971)Ann.NYAcad,Sci.[纽约科学院年报]190:382-391和,Kabat,E.A.,等人(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest[免疫学重要性蛋白质序列],第五版,U.S.Department ofHealth and Human Services[美国健康与公共事业部],NIH出版编号91-3242)。就重链可变区而言，高变区范围就CDR1而言是自氨基酸位置31至35，就CDR2而言是自氨基酸位置50至65，且就CDR3而言是自氨基酸位置95至102。就轻链可变区而言，高变区范围就CDR1而言是自氨基酸位置24至34，就CDR2而言是自氨基酸位置50至56，且就CDR3而言是自氨基酸位置89至97。
如本文使用的，术语“CDR”是指在抗体可变序列内的互补决定区。重链(HC)及轻链(LC)的可变区中各自存在三个CDR，针对各可变区，命名为CDR1、CDR2及CDR3(或具体地，HCCDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2、和LC CDR3)。如本文所用的术语“CDR组”是指存在于能够结合抗原的单可变区中的一组三个CDR。这些CDR的精确边界已根据不同***不同地加以限定。由Kabat(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫学重要性蛋白质序列](National Institutes of Health,Bethesda,Md.[国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达](1987)及(1991))所述的***不仅提供适用于抗体的任何可变区的明确的残基编号***，且还提供限定三个CDR的精确残基边界。这些CDR可称为KabatCDR。Chothia及同事(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]196:901-917(1987)及Chothia等人,Nature[自然]342:877-883(1989))发现，Kabat CDR内的某些子部分采用几乎相同的肽主链构象，即使在氨基酸序列层面具有极大差异。这些子部分称为L1、L2及L3或H1、H2及H3，其中“L”及“H”分别表示轻链区及重链区。这些区可称为Chothia CDR，其具有与Kabat CDR重叠的边界。限定与Kabat CDR重叠的CDR的其他边界已由Padlan(FASEB J.9:133-139(1995))及MacCallum(J Mol Biol 262(5):732-45(1996))描述。其他CDR边界限定可不严格遵循以上***中的一者，但仍然将与Kabat CDR重叠，但其可根据特定残基或残基组或甚至全部CDR不显著影响抗原结合的预测或实验发现而缩短或延长。本文中所用的方法可利用根据这些***中任一者限定的CDR，但优选实施例使用Kabat或Chothia限定的CDR。
如本文使用的，术语“框架”或“框架序列”是指可变区减去CDR后剩余的序列。因为CDR序列的精确限定可借由不同***确定，所以框架序列的含义相对应地需要不同解释。六个CDR(轻链的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3及重链的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)还将轻链及重链上的框架区在各链上分成四个子区(FR1、FR2、FR3及FR4)，其中CDR1位于FR1与FR2之间，CDR2位于FR2与FR3之间，且CDR3位于FR3与FR4之间。在不指定具体子区为FR1、FR2、FR3或FR4的情况下，如借由其他所提及的框架区表示单一天然产生的免疫球蛋白链的可变区内的组合的FR。如本文所用，FR表示四个子区之一，且FR表示构成框架区的四个子区中的两个或更多个。
人源化抗体的框架区及CDR区不必准确对应于亲本序列，例如供体抗体CDR或共有框架可借由至少一个氨基酸残基的取代、***和/或缺失而突变诱发，使得该位点的CDR或框架残基不对应于供体抗体或共有框架。然而，在优选实施例中，此类突变不多。通常，至少80％、优选至少85％、更优选至少90％且最优选至少95％的人源化抗体残基将对应于亲本FR及CDR序列的那些残基。如本文使用的，术语“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。如本文使用的，术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如，Winnaker,From Genes to Clones[从基因到克隆](Verlagsgesellschaft,Weinheim,德国1987))。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的各位置由该家族中最频繁出现于该位置的氨基酸占据。若两个氨基酸同等频繁地出现，则共有序列中可包括任一个。
如本文使用的，术语“人受体框架”意指抗体或其抗体片段的框架，其包含衍生自人抗体或其抗体片段或人共有序列框架的VH或VL框架的氨基酸序列，其中可以并入来自非人物种的CDR。
相对于肽或多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”被定义为在比对序列并引入空位(必要的话)以实现最大百分比序列同一性之后，并且不考虑作为序列同一性的一部分的任何保守取代，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基同一的氨基酸残基的百分比。为了确定百分比氨基酸序列同一性的目的，可以用本领域技术中的多种方式来实现比对，例如使用公众可得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域普通技术人员能确定用于测定比对的适当参数，包括在所比较的序列的全长范围内实现最大比对所需的任何算法。在一个实施例中，本发明包括与SEQ IDNO:1至31、35-40、或50至85中所示氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％同一性的氨基酸序列。
术语“多价抗体”在本文中用于表示包含两个或更多个抗原结合位点的抗体。在某些实施例中，多价抗体可以被工程化为具有三个或三个以上抗原结合位点，且一般不为天然产生的抗体。
术语“多特异性抗体”是指能够结合两个或更多个不相关抗原的抗体。在一个实施例中，多特异性抗体是双特异性抗体是能够结合两个不相关抗原的抗体，例如，结合CD98和CD3的双特异性抗体。
如本文中可互换地使用的术语“双重可变域”或“DVD”为包含两个或更多个抗原结合位点且为四价或多价结合蛋白的抗原结合蛋白。此类DVD可为单特异性的，即，能够结合一个抗原；或多特异性的，即，能够结合两个或更多个抗原。包含两个重链DVD多肽及两个轻链DVD多肽的DVD结合蛋白称为DVD Ig。DVD Ig的每一半包含重链DVD多肽及轻链DVD多肽及两个抗原结合位点。各结合位点包含重链可变域及轻链可变域，其中每抗原结合位点在抗原结合时涉及总共6个CDR。在一个实施例中，在抗CD98DVD中使用本文所述的CDR。
术语“嵌合抗原受体”或“CAR”是指重组蛋白，其包含至少(1)抗原结合区，例如抗体的可变重链或轻链，(2)锚定CAR进入T细胞的跨膜域，和(3)一个或多个胞内信号传导域。
术语“活性”包括以下活性：诸如抗体或ADC对抗原的结合特异性/亲和力，例如结合至hCD98抗原的抗hCD98抗体，和/或抗体的中和效能，例如与hCD98的结合抑制hCD98的生物活性的抗hCD98抗体，例如细胞增殖，存活和/或生长的调节；整合素信号的调节；和表达CD98的细胞系中氨基酸转运的调节，例如，人肺癌细胞系A549、人肺癌细胞系NCI-H460、非小细胞肺癌细胞系EBC-1、小细胞肺癌细胞系NCI-H146、非小细胞肺癌细胞系H2170、乳腺癌细胞系HCC38、Molt-4人急性淋巴细胞白血病细胞系、或Jurkat急性T细胞白血病细胞系。
如本文使用的，术语“非小细胞肺癌(NSCLC)异种移植测定”是指用于确定抗CD98抗体或ADC是否能抑制肿瘤生长(例如，进一步生长)和/或减少由NSCLC细胞移植到免疫缺陷小鼠中引起的肿瘤生长的体内测定。NSCLC异种移植测定包括将NSCLC细胞移植到免疫缺陷小鼠中，使得肿瘤生长至期望的大小，例如200-250mm3，随后将抗体或ADC给予于小鼠以确定抗体或ADC是否可以抑制和/或减少肿瘤生长。在某些实施例中，相对于不与肿瘤细胞特异性结合的对照抗体(例如，人IgG抗体(或其集合))，根据肿瘤生长抑制百分比(％TGI)来确定抗体或ADC的活性，例如，所述对照抗体针对与癌症无关的或是从非癌症来源(例如，正常人血清)获得的抗原。在此类实施例中，抗体(或ADC)和对照抗体以相同剂量、相同频率且通过相同途径施用于小鼠。在一个实施例中，NSCLC异种移植测定中使用的小鼠是严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠和/或无胸腺CD-1裸鼠。可用于NSCLC异种移植测定的NSCLC细胞的实例包括但不限于H2170细胞(例如,NCI-H2170[H2170](CRL-5928TM)。
术语“表位”是指由抗体或ADC结合的抗原区。在某些实施例中，表位决定子包括分子的化学活性表面基团(诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基)，且在某些实施例中，可具有特定三维结构特征和/或荷质比特征。在某些实施例中，当抗体在蛋白和/或大分子复杂混合物中优先识别其靶抗原时，它被认为是特异性结合抗原。
如本文所用的术语“表面等离子共振”指允许借由例如使用BIAcore***(Pharmacia Biosensor AB,Uppsala,Sweden and Piscataway,N.J.[药物生物传感器公司，瑞典乌普萨拉和新泽西州皮斯卡塔韦])在生物传感器矩阵内检测蛋白浓度变化来分析实时生物特异性相互作用的光学现象。有关进一步的说明，参见U.,等人(1993)Ann.Biol.Clin.[临床生物学年鉴]51:19-26；U.,等人(1991)Biotechniques[生物技术]11:620-627；Johnsson,B.,等人(1995)J.Mol.Recognit.[分子识别杂志]8:125-131；和Johnnson,B.,等人(1991)Anal.Biochem.[分析生物化学]198:268-277。在一个实施例中，根据实例4中所述方法确定表面等离子体共振。
如本文所用的术语“kon”或“ka”意指抗体与抗原结合形成抗体/抗原复合物的结合速率常数。
如本文中所用的术语“koff”或“kd”意指抗体从抗体/抗原复合物解离的解离速率常数。
如本文所用的术语“KD”意指特定抗体-抗原相互作用(例如，huAb102、huAb104、huAb108或huAb110抗体和CD98)的平衡解离常数。KD是由ka/kd计算。
如本文使用的，术语“竞争性结合”是指第一抗体与第二抗体竞争第三分子(例如抗原)上的结合位点的情况。在一个实施例中，使用FACS分析确定两种抗体之间的竞争性结合。
术语“竞争性结合测定”是用于确定两种或更多种抗体是否结合相同表位的测定。在一个实施例中，竞争性结合测定是竞争性荧光激活细胞分选(FACS)测定，其用于通过确定标记抗体的荧光信号是否由于引入非标记抗体而减少来确定两种或更多种抗体是否结合相同的表位，其中相同表位的竞争将降低荧光水平。如本文使用的，术语“标记抗体”指具有掺入的标记的抗体或其抗原结合部分，所述标记为结合蛋白(例如，抗体)的鉴定作准备。优选地，标记是可检测标记，例如，掺入放射性标记的氨基酸或使生物素基(biotinyl)部分与多肽附接，所述生物素基部分可以通过标记的抗生物素蛋白(例如包含可以通过光学或比色法检测的荧光标记或酶促活性的链霉抗生物素蛋白)进行检测。关于多肽的标记的实例包括但不限于以下：放射性同位素或放射性核素(例如，3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho、或153Sm)；荧光标记(例如，FITC、罗丹明、镧系元素荧光粉)，酶标记(例如辣根过氧化物酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)；化学发光标记；生物素基基团；由次级报道子识别的预定多肽表位(例如，亮氨酸拉链对序列、关于第二抗体的结合位点、金属结合结构域、附加表位)；和磁性试剂，例如钆螯合物。
术语“抗体-药物-偶联物”或“ADC”是指与一个或多个化学药物(本文也称为一个或多个试剂)化学连接的结合蛋白(如抗体或其抗原结合片段)，其可以任选地为治疗剂或细胞毒性剂。在优选的实施例中，ADC包括抗体、细胞毒性药物或治疗药物，以及能够使药物与抗体附接或偶联的接头。ADC通常在任何地方都具有与抗体偶联的1至8个药物，包括2、4、6、或8的载药种类(drug loaded species)。可包括在ADC中的药物的非限制性实例是有丝***抑制剂、抗肿瘤抗生素免疫调节剂、用于基因治疗的载体、烷化剂、抗血管生成剂、抗代谢物、含硼剂、化学保护剂、激素、抗激素剂、皮质类固醇、光活性治疗剂、寡核苷酸、放射性核素剂、拓扑异构酶抑制剂、激酶抑制剂和放射增敏剂。在一个实施例中，药物是Bcl-xL抑制剂。在优选的实施例中，本发明的ADC包含通过接头与Bcl-xL抑制剂偶联的抗CD98单克隆IgG抗体。
本文可互换使用的术语“抗CD98抗体药物偶联物”或“抗CD98 ADC”是指包含特异性结合CD98的抗体的ADC，其中抗体与一种或多种化学试剂偶联。在优选的实施例中，抗CD98 ADC结合人CD98(hCD98)。
如本文使用的，术语“Bcl-xL抑制剂”是指拮抗细胞中Bcl-xL活性的化合物。在一个实施例中，Bcl-xL抑制剂通过抑制Bcl-xL活性促进细胞凋亡。
如本文使用的，术语“澳瑞他汀”是指抗有丝***试剂家族。澳瑞他汀衍生物也包含在术语“澳瑞他汀”的定义中。奥瑞他汀的实例包括但不限于澳瑞他汀E(AE)、单甲基澳瑞他汀E(MMAE)、单甲基澳瑞他汀F(MMAF)、以及多拉司他汀的合成类似物。在一个实施例中，本文所述的抗CD98抗体与澳瑞他汀偶联形成抗CD98 ADC。
如本文使用的，术语“mcMMAF”用于指马来酰亚胺基己酰基-单甲基澳瑞他汀F(MMAF)的接头/药物组合。
各种化学取代基定义如下。在一些情况下，取代基(例如，烷基、链烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、杂芳基、和芳基)中碳原子的数量由前缀“Cx-Cy”或“Cx-y”指示，其中x是碳原子的最小值并且y是碳原子的最大值。因此，例如，“C1-C6烷基”是指含有从1至6个碳原子的烷基。进一步说明，“C3-C8环烷基”意指含有从3至8个碳环原子的饱和烃环。如果取代基被描述为“被取代的”，则碳或氮上的氢原子被非氢基团取代。例如，被取代的烷基取代基是烷基取代基，其中烷基上的至少一个氢原子被非氢基团替代。用于说明，单氟烷基是被氟基取代的烷基，并且二氟烷基是被两个氟基取代的烷基。应该认识到，如果在取代基上存在一个以上的取代，则每个取代可以是相同的或不同的(除非另有说明)。如果取代基被描述为“任选地被取代”，则取代基可以是(1)未被取代的或(2)被取代的。可能的取代基包括但不限于C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、芳基,环烷基、杂环基、杂芳基、卤素、C1-C6卤代烷基、氧代、-CN、NO2、-ORxa、-OC(O)Rxz、-OC(O)N(Rxa)2、-SRxa、-S(O)2Rxa、-S(O)2N(Rxa)2、-C(O)Rxa、-C(O)ORxa、-C(O)N(Rxa)2、-C(O)N(Rxa)S(O)2Rxz、-N(Rxa)2、-N(Rxa)C(O)Rxz、-N(Rxa)S(O)2Rxz、-N(Rxa)C(O)O(Rxz)、-N(Rxa)C(O)N(Rxa)2、-N(Rxa)S(O)2N(Rxa)2、-(C1-C6亚烷基)-CN、-(C1-C6亚烷基)-ORxa、-(C1-C6亚烷基)-OC(O)Rxz、-(C1-C6亚烷基)-OC(O)N(Rxa)2、-(C1-C6亚烷基)-SRxa、-(C1-C6亚烷基)-S(O)2Rxa、-(C1-C6亚烷基)-S(O)2N(Rxa)2、-(C1-C6亚烷基)-C(O)Rxa、-(C1-C6亚烷基)-C(O)ORxa、-(C1-C6亚烷基)-C(O)N(Rxa)2、-(C1-C6亚烷基)-C(O)N(Rxa)S(O)2Rxz、-(C1-C6亚烷基)-N(Rxa)2、-(C1-C6亚烷基)-N(Rxa)C(O)Rxz、-(C1-C6亚烷基)-N(Rxa)S(O)2Rxz、-(C1-C6亚烷基)-N(Rxa)C(O)O(Rxz)、-(C1-C6亚烷基)-N(Rxa)C(O)N(Rxa)2、或-(C1-C6亚烷基)-N(Rxa)S(O)2N(Rxa)2；其中Rxa每次出现时独立地是氢、芳基、环烷基、杂环基、杂芳基、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基；并且Rxz在每次出现时独立地是芳基、环烷基、杂环基、杂芳基、C1-C6烷基或C1-C6卤代烷基。
在本文的一些实施例中，通过参考包括取代基的结构式描述了各种ADC、合成子和包含ADC和/或合成子的Bcl-xL抑制剂。应理解，包含取代基的各种基团可以以化合价和稳定性允许的方式组合。本披露所设想的取代基和变量的组合仅是导致形成稳定化合物的那些。如本文所用，术语“稳定的”是指具有足以允许制造的稳定性并且将化合物的完整性保持足够长的时间以用于本文详述的目的的化合物。
如本文使用的，以下术语旨在具有以下含义：
术语“烷氧基”是指式-ORxa的基团，其中Rxa`是烷基基团。代表性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等等。
术语“烷氧基烷基”是指被烷氧基取代的烷基，并且可以由通式-RbORxa表示，其中Rb是亚烷基基团并且Rxa是烷基基团。
术语“烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指饱和或不饱和的支链、直-链或环状单价烃基，其通过从母链烷、烯或炔的单个碳原子上除去一个氢原子而得到。典型的烷基包括但不限于甲基；乙基，(如乙烷基、乙烯基、乙炔基)；丙基(如丙-1-基、丙-2-基、环丙-1-基、丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基、环丙-1-烯-1-基；环丙-2-烯-1-基、丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等)；丁基(如丁-1-基、丁-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基、环丁-1-基、丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1,3-二烯-1-基、丁-1,3-二烯-2-基、环丁-1-烯-1-基、环丁-1-烯-3-基、环丁-1,3-二烯-1-基、丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等；等。在预期具体的饱和水平的情况下，使用术语“链烷基”、“烯基”和/或“炔基”，如下所定义。术语“低级烷基”是指具有1至6个碳的烷基。
术语“链烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指通过从母烷烃的单个碳原子上除去一个氢原子而得到的饱和支链、直-链或环状烷基。典型的链烷基包括但不限于甲基；乙烷基；丙烷基(如丙-1-基、丙-2-基(异丙基)、环丙-1-基)，等；丁烷基(如丁-1-基、丁-2-基(仲丁基)、2-甲基-丙-1-基(异丁基)、2-甲基-丙-2-基(t-丁基)、环丁-1-基等；等。
术语“烯基”本身或作为另一取代基的一部分是指具有至少一-个碳碳双键的不饱和支链，直链或-环状烷基，其通过从母体烯烃的单个碳原子上除去一个氢原子而得到。典型的烯基包括但不限于乙烯基；丙烯基(如丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基、丙-2-烯-2-基、环丙-1-烯-1-基)；环丙-2-烯-1-基；丁烯基(丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1,3-二烯-1-基、丁-1,3-二烯-2-基、环丁-1-烯-1-基、环丁-1-烯-3-基、环丁-1,3-二烯-1-基等)；等。
术语“炔基”本身或作为另一取代基的一部分是指具有至少一-个碳碳三键的不饱和支链，直链或-环状烷基，其通过从母体炔烃的单个碳原子上除去一个氢原子而得到。典型的炔基包括但不限于乙炔基；丙炔基(如丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等)；丁炔基(如丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等)；等。
术语“烷基胺”是指式-NHRxa的基团，并且“二烷基胺”是指式-NRxaRxa的基团，其中每个Rxa独立地是烷基。
术语“亚烷基”是指具有两个末端单价基团中心的烷烃，烯烃或炔烃基团，其通过从两个末端碳原子中的每一个中除去一个氢原子而得到。典型的亚烷基包括但不限于亚甲基；饱和或不饱和亚乙基；亚丙基；亚丁基；等。术语“低级亚烷基”是指具有1至6个碳的亚烷基。
术语“杂亚烷基”是指具有一个或多个—CH2—基团的二价的亚烷基，该—CH2—基团被硫、氧基、或—NRx3—(Rx3选自氢、低级烷基和低级杂烷基)替换。杂亚烷基可以是直链、支链、环状、双环或其组合，并且可以包括多达10个碳原子和多达4个杂原子。术语“低级杂亚烷基”是指具有1至4个碳原子和1至3个杂原子的亚烷基。
术语“芳基”是指含有6至14个碳环原子的芳族碳环基。芳基可以是单环或多环的(即，可以含有多于一个环)。在多环芳族环的情况下，仅需要多环***中的一个环是芳族的，而剩余的一个或多个环可以是饱和的、部分饱和的或不饱和的。芳基的实例包括苯基、萘基、茚基、茚满基、和四氢萘基。
术语“亚芳基”是指具有两个单价基团中心的芳基基团，该单价基团中心通过从两个环碳中的每个中去除一个氢原子而得到。示例性的亚芳基是亚苯基。
烷基可以被“羰基”取代，这意味着来自单个亚烷基碳原子的两个氢原子被除去并被双键取代成氧原子。
前缀“卤代”表示包括前缀的取代基被一个或多个独立选择的卤素基团取代。例如，卤代烷基意指其中至少一个氢基被卤素基团替换的烷基取代基。典型的卤素基包括氯、氟、溴和碘。卤代烷基的实例包括氯甲基、1-溴乙基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基以及1,1,1-三氟乙基。应该认识到，如果取代基被一个以上的卤素基团取代，则那些卤素基团可以相同或不同(除非另有说明)。
术语卤代烷氧基是指式-ORc的基团，其中Rc是卤代烷基。
术语杂烷基、杂链烷基、杂烯基、杂炔基和杂亚烷基分别指烷基、链烷基、链烯基、炔基和亚烷基，其中一个或多个碳原子，例如，1、2或3个碳原子，各自独立地被相同或不同的杂原子或杂原子基团取代。可以替代碳原子的典型杂原子和/或杂原子基团包括但不限于-O-、-S-、-S-O-、-NRc-、-PH、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)NRc-、-S(O)2NRc-等，包括其组合，其中每个Rc独立地是氢或C1-C6烷基。术语“低级杂烷基”是指在1和4个之间的碳原子和在1和3个之间的杂原子。
术语“环烷基”和“杂环基”分别指“烷基”和“杂烷基”的环状形式。对于杂环基，杂原子可以占据与分子其余部分附接的位置。环烷基或杂环基环可以是单环(单环的)或具有两个或更多个环(双环的或多环的)。
单环环烷基和杂环基基团将典型地含有从3至7个环原子、更典型地从3至6个环原子、以及甚至更典型地5至6个环原子。环烷基基团的实例包括但不限于环丙基；环丁基(如环丁基和环丁烯基)；环戊基(如环戊烷基和环戊烯基)；环己基(如环己基和环己烯基)；等。单环杂环基的实例包括但不限于氧杂环丁烷、呋喃基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻吩基(硫呋喃基)、二氢噻吩基、四氢噻吩基、吡咯基、吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑基、吡唑啉基、吡唑烷基、***基、四唑基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑烷基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻唑啉基、异噻唑啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基、硫二唑基、噁二唑基(包括1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基(呋咱基),或1,3,4-噁二唑基)、氧杂***基(包括1,2,3,4-氧杂***基或1,2,3,5-氧杂***基)、二噁唑基(包括1,2,3-二噁唑基、1,2,4-二噁唑基、1,3,2-二噁唑基,或1,3,4-二噁唑基)、1,4-二噁烷基、二氧代硫吗啉基、氧杂噻唑基、氧杂硫醇基、氧硫杂环戊烷基、吡喃基、二氢吡喃基、硫吡喃基、四氢硫吡喃基、吡啶基(嗪基)、哌啶基、二嗪基(包括哒嗪基(1,2-二嗪基)、嘧啶基(1,3-二嗪基)、或吡嗪基(1,4-二嗪基))、哌嗪基、三嗪基(包括1,3,5-三嗪基、1,2,4-三嗪基、和1,2,3-三嗪基))、噁嗪基(包括1,2-噁嗪基、1,3-噁嗪基,或1,4-噁嗪基))、氧杂三嗪基(包括1,2,3-氧杂三嗪基、1,2,4-氧杂三嗪基、1,2,5-氧杂三嗪基,或1,2,6-氧杂三嗪基))、氧杂二嗪基(包括1,2,3-氧杂二嗪基、1,2,4-氧杂二嗪基、1,4,2-氧杂二嗪基、或1,3,5-氧杂二嗪基))、吗啉基、氮杂基、氧杂基、硫杂基、二氮杂基、吡啶酮基(包括吡啶-2(1H)-酮基和吡啶-4(1H)-酮基)、呋喃-2(5H)-酮基、嘧啶酮基(包括嘧啶-2(1H)-酮基和嘧啶-4(3H)-酮基)、噁唑-2(3H)-酮基、1H-咪唑-2(3H)-酮基、哒嗪-3(2H)-酮基、和吡嗪-2(1H)-酮基。
多环环烷基和杂环基含有一个以上的环，并且双环环烷基和杂环基含有两个环。环可以处于桥联、稠合或螺旋方向。多环环烷基和杂环基可包括桥环、稠合环和/或螺环的组合。在螺环环烷基或杂环基中，一个原子是两个不同环所共有的。螺环烷基的实例是螺[4.5]癸烷并且螺杂环基的实例是螺吡唑啉。
在桥联的环烷基或杂环基中，环共有至少两个共同的不相邻的原子。桥联环烷基的实例包括但不限于金刚烷基和降莰烷基环。桥联杂环的实例包括但不限于2-氧杂三环[3.3.1.13,7]癸基。
在稠环环烷基或杂环基中，两个或更多个环稠合在一起，使得两个环共享一个共同键。稠环环烷基的实例包括十氢化萘、亚萘基、四氢化萘、和蒽。含有两个或三个环的稠环杂环基的实例包括咪唑并吡嗪基(包括咪唑并[1,2-a]吡嗪基)、咪唑并吡啶基(包括咪唑并[1,2-a]吡啶基)、咪唑并哒嗪基(包括咪唑并[1,2-b]哒嗪基)、噻唑并吡啶基(包括噻唑并[5,4-c]吡啶基、噻唑并[5,4-b]吡啶基、噻唑并[4,5-b]吡啶基、和噻唑并[4,5-c]吡啶基)、吲嗪基、吡喃吡咯基、4H-喹嗪基、嘌呤基、萘啶基、吡啶并吡啶基(包括吡啶并[3,4-b]-吡啶基、吡啶并[3,2-b]-吡啶基、或吡啶并[4,3-b]-吡啶基)和蝶啶基。稠环杂环基的其他实例包括苯并-稠合杂环基(如，二氢苯并吡喃基、四氢异喹啉基、吲哚基、异吲哚基(异苯并吡咯基、假异吲哚基)、假吲哚基(假吲哚基础)、异吲唑基(苯吡唑基)、苯嗪基(包括喹啉基(1-苯嗪基)或异喹啉基(2-苯嗪基))、酞嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基、苯并二嗪基(包括噌啉基(1,2-苯并二嗪基)或喹唑啉基(1,3-苯并二嗪基))、苯并吡喃基(包括色满基或异色满基)、苯并噁嗪基(包括1,3,2-苯并噁嗪基、1,4,2-苯并噁嗪基、2,3,1-苯并噁嗪基、或3,1,4-苯并噁嗪基)、苯并[d]噻唑基、和苯异噁嗪基(包括1,2-苯异噁嗪基或1,4-苯异噁嗪基))。
术语“杂芳基”是指含有5至14个环原子的芳族杂环基。杂芳基可以是单环或2或3个稠环。杂芳基的实例包括6元环(如吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基和1,3,5-、1,2,4-或1,2,3-三嗪基)；5元环取代基(如***基、吡咯基、咪唑基(imidazyl)、呋喃基、噻吩基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、1,2,3-、1,2,4-、1,2,5-、或1,3,4-噁二唑基和异噻唑基)；6/5-元稠环取代基如咪唑并吡嗪基(包括咪唑并[1,2-a]吡嗪基)、咪唑并吡啶基(包括咪唑并[1,2-a]吡啶基)、咪唑并哒嗪基(包括咪唑并[1,2-b]哒嗪基)、噻唑并吡啶基(包括噻唑并[5,4-c]吡啶基、噻唑并[5,4-b]吡啶基、噻唑并[4,5-b]吡啶基、和噻唑并[4,5-c]吡啶基)、苯并[d]噻唑基、苯并硫呋喃基、苯异噁唑基、苯噁唑基、嘌呤基、和氨茴基；和6/6-元稠环(如苯并吡喃基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹唑啉基和苯并噁嗪基)。杂芳基也可以是具有芳族(4N+2π电子)共振贡献剂的杂环(如，吡啶酮(包括吡啶-2(1H)-酮基和吡啶-4(1H)-酮基)、嘧啶酮(包括嘧啶-2(1H)-酮基和嘧啶-4(3H)-酮基)、哒嗪-3(2H)-酮基和吡嗪-2(1H)-酮基))。
本文所用的术语“磺酸化物”是指磺酸的盐或酯。
如本文使用的，术语“甲基磺酸酯”意指磺酸基团的甲基酯。
本文所用的术语“羧酸化物”是指羧酸的盐或酯。
如本文所用，术语“多元醇”是指独立地或作为单体单元的一部分含有多于两个羟基的基团。多元醇包括但不限于还原的C2-C6碳水化合物、乙二醇和甘油。
当在G1的背景下使用时，术语“糖”包括单糖和二糖类的O-糖苷、N-糖苷、S-糖苷和C-糖苷(C-糖基)碳水化合物衍生物，并且可以源自天然来源或可能是合成的。例如，当在“G1”的上下文中使用时，“糖”包括衍生物，例如但不限于衍生自葡糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖和葡萄糖等的衍生物。合适的糖取代包括但不限于羟基、胺、羧酸、磺酸、膦酸、酯和醚。
术语“NHS酯”是指羧酸的N-羟基琥珀酰亚胺酯衍生物。
术语“胺”包括伯、仲和叔脂族胺(包括环状胺)。
当在“或其盐”的上下文中使用时，术语盐包括盐，其通常用于形成碱金属盐和形成游离酸或游离碱的加成盐。通常，这些盐通常可以通过常规方法通过使例如适当的酸或碱与本发明化合物反应来制备。
当打算向患者给予盐时(例如，与在体外相反的环境中使用)，盐优选是药学上可接受的和/或生理学相容的。术语“药学上可接受的”在本专利申请中以形容词的形式使用，意指修饰的名词适合用作药物产品或作为药物产品的一部分。术语“药学上可接受的盐”包括盐，其通常用于形成碱金属盐和形成游离酸或游离碱的加成盐。通常，这些盐通常可以通过常规方法通过使例如适当的酸或碱与本发明化合物反应来制备。
术语“药物与抗体比率”或“DAR”是指药物的数量，例如，与ADC的抗体附接的Bcl-xL抑制剂。ADC的DAR可以在1到8的范围内，但是取决于抗体上的连接位点的数量，更高的负载(例如20)也是可能的。提及负载到单个抗体上的药物的数量时，或可替代地，提及一组ADC的平均或均值DAR时，可以使用术语DAR。
如本文使用的，术语“不希望的ADC种类”是指任何载药种类，其将与具有不同药物负载的ADC种类分离。在一个实施例中，术语不希望的ADC种类可以指6或更高的载药种类，即，DAR为6或更高的ADC，包括DAR6、DAR7、DAR8和DAR大于8(即载药种类为6、7、8或大于8)。在一个独立的实施例中，术语不希望的ADC种类可以指8或更高的载药种类，即，DAR为8或更高的ADC，包括DAR8和DAR大于8(即载药种类为8或大于8)。
如本文使用的，术语“ADC混合物”是指包含ADC的异质DAR分布的组合物。在一个实施例中，ADC混合物含有具有1至8的DAR的分布的ADC，例如，2、4、6、和8(即，2、4、6、和8的载药种类)。值得注意的是，可以产生降解产物，使得混合物中也可以包含1、3、5和7的DAR。此外，混合物中的ADC也可具有大于8的DAR。ADC混合物由链间二硫化物还原然后偶联产生。在一个实施例中，ADC混合物包含如下两者：DAR为4或更低(即，载药种类为4或更低)的ADC以及DAR为6或更高(即，载药种类为6或更高)的ADC。
术语“癌症”意指或意在描述哺乳动物的生理状态，其典型特征是细胞生长失控。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。此类癌症的更具体的实例包括胶质母细胞瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺癌、结肠癌、结肠直肠癌、头颈癌、乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌)、胰腺癌、鳞状细胞肿瘤、鳞状细胞上皮癌(例如，鳞状细胞肺癌或鳞状细胞头颈癌)、***癌、皮肤癌、外阴癌、多发性骨髓瘤、急性髓性白血病。在一个实施例中，将本发明的抗体或ADC给予患有一种或多种肿瘤的患者，所述肿瘤含有CD98基因的扩增。在一个实施例中，将本发明的抗体或ADC给予至患有实体瘤的患者，该患者可能过表达CD98。在一个实施例中，将本发明的抗体或ADC给予患有鳞状细胞非小细胞肺癌(NSCLC)的患者。在一个实施例中，将本发明的抗体或ADC给予患有小细胞肺癌的患者。在另一个实施例中，将本发明的抗体或ADC给予患有乳腺癌的患者。在另一个实施例中，将本发明的抗体或ADC给予患有卵巢癌的患者。在另一个实施例中，将本发明的抗体或ADC给予患有多发性骨髓瘤的患者。在另一个实施例中，将本发明的抗体或ADC给予患有急性髓性白血病的患者。在一个实施例中，将本发明的抗体或ADC给予患有实体瘤(包括晚期实体瘤)的患者。在某些实施例中，将本发明的抗体或ADC给予患有癌症的患者，该癌症的特征在于具有EGFR过表达。在其他实施例中，将本发明的抗体或ADC给予患有癌症的患者，所述癌症的特征在于具有激活性EGFR突变，例如，激活EGFR信号传导通路的一个或多个突变和/或导致EGFR蛋白过表达的一个或多个突变。在特定的示例性实施例中，激活性EGFR突变可能是EGFR基因的突变。在特定实施例中，激活性EGFR突变是外显子19缺失突变、外显子21中的单点取代突变L858R、T790M点突变、和/或其组合。
如本文所用，术语“表达CD98的肿瘤”是指表达CD98蛋白的肿瘤。在一个实施例中，使用肿瘤细胞膜的免疫组织化学染色测定肿瘤中的CD98表达，其中肿瘤样品中高于背景水平的任何免疫组织化学染色表明肿瘤是表达CD98的肿瘤。检测肿瘤中CD98表达的方法是本领域已知的，例如，CD98 pharmDxTM试剂盒(Dako公司)。相反，“CD98阴性肿瘤”定义为通过免疫组织化学技术测定的在肿瘤样品中缺乏高于背景的CD98膜染色的肿瘤。
术语“过表达(overexpress)”、“过表达(overexpression)”或“过表达的(overexpressed)”可互换地指一种基因，与正常细胞相比，其通常在癌细胞中以可检测到的更高水平的转录或翻译。因此，过表达指的是蛋白质和RNA的过表达(由于增加的转录，转录后加工，翻译，翻译后加工，改变的稳定性和改变的蛋白质降解)，以及蛋白质运输模式改变导致的局部过表达(核定位增加)和增强的功能活性，例如，如增加底物的酶水解。因此，过表达指蛋白质或RNA水平。与正常细胞或比较细胞相比，过表达也可以是50％、60％、70％、80％、90％或更多。在某些实施例中，本发明的抗CD98抗体或ADC用于治疗可能过表达CD98的实体瘤。
如本文所用，术语“基因扩增”是指细胞过程，其特征在于产生任何特定DNA片段的多个拷贝。例如，肿瘤细胞可以扩增或复制染色体片段，作为细胞信号和有时环境事件的结果。基因扩增过程导致另外的基因拷贝的产生。在一个实施例中，该基因是CD98，即“CD98扩增”。在一个实施例中，本文公开的组合物和方法用于治疗患有CD98扩增的癌症的受试者。
如本文所用的术语“给予”意指递送物质(例如，抗CD98抗体或ADC)以实现治疗目的(例如，治疗CD98相关失调)。给予方式可以是非经肠、肠内和局部。非经肠给予通常通过注射，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管内、皮下、表皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。
如本文所用，术语组合疗法是指给予两种或更多种治疗物质，例如抗CD98抗体或ADC和额外的治疗剂。额外的治疗剂可以与抗CD98抗体或ADC同时给予、在其之前给予或在其之后给予。
如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指药物(例如，抗体或ADC)的量，其足以减少或改善失调(例如，癌症或其一种或多种症状)的严重性和/或持续时间；预防失调进展；引起失调消退；预防与失调相关的一种或多种症状复发、发展、发作或进展；检测失调；或增强或改善另一疗法(例如预防剂或治疗剂)的预防或治疗效果。例如，抗体或ADC的有效量可以抑制肿瘤生长(例如，抑制肿瘤体积的增加)；减少肿瘤生长(例如，减小肿瘤体积)；减少癌细胞的数量；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。例如，有效量可以改善无病生存(DFS)、改善总体存活(OS)或降低复发的可能性。
如本文使用的，术语“异种移植测定”是指人肿瘤异种移植测定，其中将人肿瘤细胞移植到不排斥人细胞的免疫受损小鼠中(移植到皮肤下或肿瘤起源的器官类型中)。
在以下小节中更详细地描述了本发明的各个方面。
II.抗CD98抗体
本发明至少部分基于人源化抗CD98抗体的鉴定。在一个实施例中，本发明提供鼠抗CD98抗体或其抗原结合部分。在另一个实施例中，本发明提供嵌合抗CD98抗体或其抗原结合部分。在又另一个实施例中，本发明提供了人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分。在本发明的另一方面，特征在于抗体药物偶联物(ADC)，其包含本文所述的抗CD98抗体和至少一种药物，例如但不限于Bcl-xL抑制剂。本发明的抗体或ADC具有包括但不限于与体外野生型CD98结合、与表达CD98的肿瘤细胞上的野生型CD98结合、以及减少或抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长的特征。
本发明的一个方面的特征在于抗人CD98(抗hCD98)抗体药物偶联物(ADC)，其包含通过接头与药物偶联的抗hCD98抗体，其中所述药物是Bcl-xL抑制剂。可用于本文所述ADC的示例性抗CD98抗体(及其序列)。
本文所述的抗CD98抗体为本发明的ADC提供了结合CD98的能力，使得附着于抗体的细胞毒性Bcl-xL药物可以被递送至表达CD98的细胞，特别是表达CD98的癌细胞。
尽管始终使用术语抗体，但应注意抗体片段(即，抗CD98抗体的抗原结合部分)也包括在本发明中，并且可包括在全篇所述的实施例(方法和组合物)中。例如，抗CD98抗体片段可以与本文所述的Bcl-xL抑制剂偶联。在某些实施例中，抗CD98抗体结合部分是Fab、Fab'、F(ab’)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、单结构域抗体或双抗体。
II.A.抗CD98嵌合抗体
嵌合抗体为抗体的不同部分衍生自不同动物物种的分子，诸如具有衍生自鼠单克隆抗体的可变区及人类免疫球蛋白恒定区的抗体。用于制造嵌合抗体的方法为本领域中已知的。参见，例如：Morrison,Science[科学]229:1202(1985)；Oi等人,BioTechniques[生物技术]4:214(1986)；Gillies等人,(1989)J.Immunol.Methods[免疫学方法期刊]125:191-202；美国专利号5,807,715；4,816,567；和4,816,397，其通过引用整体并入本文。另外，可以使用通过将来自具有适当抗原特异性的小鼠抗体分子的基因与来自具有适当生物活性的人抗体分子的基因剪接而用于产生“嵌合抗体”的技术(Morrison等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.[美国国家科学院院刊]81:851-855；Neuberger等人，1984，Nature[自然]312:604-608；Takeda等人，1985，Nature[自然]314:452-454，全部通过引用整体并入本文)。
如实施例3中所述，鉴定了15种抗hCD98鼠抗体，即Ab1-Ab15(小鼠抗体Ab1、Ab2、Ab3、Ab4和Ab5和大鼠抗体Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14和Ab15)。如实施例5中所述，对来自这些抗体的可变区进行测序并与人IgG1序列组合以形成嵌合抗体。
产生对应于鼠抗体Ab1、Ab2、Ab3、Ab4和Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13、Ab14和Ab15的重组抗CD98嵌合抗体，其包括人IgG1重链和κ轻链恒定区(下文在实施例5中描述)。这些嵌合抗体在表5中鉴定为chAb1、chAb2、chAb3、chAb4和chAb5、chAb6、chAb7、chAb8、chAb9、chAb10、chAb11、chAb12、chAb13、chAb14和chAb15。表6和7提供了嵌合抗体chAb1、chAb2、chAb3、chAb4和chAb5、chAb6、chAb7、chAb8、chAb9、chAb10、chAb11、chAb12、chAb13、chAb14和chAb15的CDR、VH和VL区的氨基酸序列。
因此，一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有包含SEQ ID NO:1、9、15、20、23、28、35、39、47、52、56、60、63、70或78所示的氨基酸序列的重链可变区。和/或包含SEQ ID NO:5、12、18、22、26、32、38、43、49、55、58、62、67、74或82中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:1中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:5中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:6所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQID NO:8所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:13所示的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:15中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:18中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:16所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:13所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQID NO:19所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:13所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQID NO:8所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:23中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:26中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:24所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:25所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:13所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQID NO:27所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:28中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:32中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:30所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:31所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:33所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQID NO:34所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:35中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:38中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:36所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:33所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQID NO:34所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:39中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:43中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:40所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:42所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:44所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:47中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:49中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:48所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:30所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:50所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQID NO:51所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:52中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:55中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:40所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:54所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:44所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:56中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:58中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:40所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:57所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:42所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:59所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:60中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:62中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:40所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:44所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:67中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:64所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:66所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:68所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQID NO:69所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:70中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:74中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:71所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:72所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:73所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:75所示的的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:76所示的的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:77所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:78中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:82中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:80所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:81所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:83所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:84所示氨基酸序列的CDR3。
II.B.人源化抗CD98抗体
在产生嵌合抗体chAb1、chAb2、chAb3、chAb4和chAb5、chAb6、chAb7、chAb8、chAb9、chAb10、chAb11、chAb12、chAb13、chAb14和chAb15之后，选择抗体chAb3和chAb15用于人源化(在下文中描述)实施例12)，导致人源化抗体huAb3和huAb15的产生。
huAb3的重链可变序列在SEQ ID NO:85中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:16、11和17中描述。huAb3的轻链可变序列在SEQ ID NO:88中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:13、7和19中描述。
huAb15的重链可变序列在SEQ ID NO:122中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:79、80和81中描述。huAb15的轻链可变序列在SEQ ID NO:123中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:83、45和84中描述。
如实施例12中所述，修饰huAb3和huAb15以除去可变区中包含的特定氨基酸，以除去可能降低抗体的亲和力、效力、稳定性和/或同质性的翻译后修饰。产生huAb3和huAb15的变体，其在每个鉴定的氨基酸处包含点突变，包括除M、C、N、D、G、S或P之外的所有可能的氨基酸。具体地，基于chAb3产生两种不同的人源化抗体并且在本文中称为huAb3v1、huAb3v2，并且基于chAb15产生七种不同的人源化抗体并且在本文中称为huAb15v1、huAb15v2、huAb15v3、huAb15v4、huAb15v5、huAb15v6和huAb15v7(参见实施例10和11)。表14中列出了保持与人CD98结合的人源化抗体huAb3v1、huAb3v2、huAb15v1、huAb15v2、huAb15v3、huAb15v4、huAb15v5、huAb15v6和huAb15v7。表15中列出了huAb3v1、huAb3v2、huAb15v1、huAb15v2、huAb15v3、huAb15v4、huAb15v5、huAb15v6和huAb15v7mAb的CDR、VH和VL氨基酸序列。
因此，一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有包含SEQ ID NO:83、85、89、91、96、99、103、或122所示的氨基酸序列的重链可变区；和/或包括SEQ ID NO:88、94、98、101或123中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:85中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:88中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:16所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:13所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQID NO:19所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:122中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:123中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:80所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:81所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:83所示的的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示的的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:84所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:83中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:88中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:16所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:87所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:13所示的的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示的的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:89中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:88中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:16所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:90所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:13所示的的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示的的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:91中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:94中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:93所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:83所示的的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示的的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:95所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:96中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:94中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:97所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:83所示的的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示的的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:95所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:96中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:98中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:97所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ IDNO:83所示的的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示的的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:105所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:99中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:94中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:100所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:97所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQID NO:83所示的的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示的的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:95所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:99中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:101中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:100所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:97所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQID NO:83所示的的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示的的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:102所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:103中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:101中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:104所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:97所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQID NO:83所示的的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示的的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:102所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明针对抗CD98抗体、或其抗原结合部分，其具有重链可变区(包括如SEQ ID NO:103中所示氨基酸序列)、和轻链可变区(包括SEQ ID NO:98中所示氨基酸序列)。
另一方面，本发明涉及抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:104所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:97所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQID NO:83所示的的氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示的的氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:105所示氨基酸序列的CDR3。
使用可替代的框架区重新设计人源化抗体huAb3v1、huAb3v2、huAb15v1、huAb15v2和huAb15v6，以提高偶联效率(如下文实施例14中所述)。保持与人CD98结合的十种人源化框架工程化抗体在表18中列为huAb101、huAb102、huAb103、huAb104、huAb105、huAb106、huAb107、huAb108、huAb109和huAb110。表19中列出了huAb101、huAb102、huAb103、huAb104、huAb105、huAb106、huAb107、huAb108、huAb109和huAb110mAb的CDR、VH和VL氨基酸序列。
huAb101的重链可变序列在SEQ ID NO:106中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:16、87和17中描述。huAb101的轻链可变序列在SEQ ID NO:107中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:13、7和19中描述。
huAb102的重链可变序列在SEQ ID NO:108中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:16、87和17中描述。huAb102的轻链可变序列在SEQ ID NO:107中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:13、7和19中描述。
huAb103的重链可变序列在SEQ ID NO:109中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:16、90和17中描述。huAb103的轻链可变序列在SEQ ID NO:107中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:13、7和19中描述。
huAb104的重链可变序列在SEQ ID NO:110中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:16、90和17中描述。huAb104的轻链可变序列在SEQ ID NO:107中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:13、7和19中描述。
huAb105的重链可变序列在SEQ ID NO:111中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:79、92和93中描述。huAb105的轻链可变序列在SEQ ID NO:112中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:83、45和95中描述。
huAb106的重链可变序列在SEQ ID NO:113中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:79、92和93中描述。huAb106的轻链可变序列在SEQ ID NO:112中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:83、45和95中描述。
huAb107的重链可变序列在SEQ ID NO:114中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:79、92和97中描述。huAb107的轻链可变序列在SEQ ID NO:112中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:83、45和95中描述。
huAb108的重链可变序列在SEQ ID NO:115中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:79、92和97中描述。huAb108的轻链可变序列在SEQ ID NO:112中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:83、45和95中描述。
huAb109的重链可变序列在SEQ ID NO:116中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:79、104和97中描述。huAb109的轻链可变序列在SEQ ID NO:117中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:83、45和102中描述。
huAb110的重链可变序列在SEQ ID NO:118中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:79、104和97中描述。huAb110的轻链可变序列在SEQ ID NO:117中提供，其中CDR1，CDR2和CDR3序列分别在SEQ ID NO:83、45和102中描述。
因此，在一个方面，本发明提供了包含来自chAb3或chAb15的人源化抗体的可变和/或CDR序列的抗体。如下文实例所描述，在一个实施例中，本发明的特征在于衍生自Ab3的抗CD98抗体具有改善的特征，例如改善的对分离的CD98蛋白的结合亲和力，并改善的与CD98表达细胞的结合。这些新型抗体在本文中统称为“chAb3变体抗体”或“chAb15变体抗体”。通常，chAb3变体抗体保留与chAb3相同的表位特异性，并且chAb15变体抗体保留与chAb15相同的表位特异性。在各种实施例中，本发明的抗CD98抗体或其抗原结合片段能够调节CD98的生物学功能。
因此，一方面，本发明涉及人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有包含SEQID NO:106、108、109、110、111、113、114、115、116、或118所示的氨基酸序列的重链可变区；和/或包括SEQ ID NO:107、112或117中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
另一方面，本发明涉及本发明的人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含：重链可变区，所述重链可变区包含：包含SEQ ID NO:16或79所示的氨基酸序列的CDR1结构域；包含SEQ ID NO:87、90、92或104所示的氨基酸序列的CDR2结构域；和包含SEQ ID NO:17,93或97所示的氨基酸序列的CDR3结构域；和轻链可变区，所述轻链可变区包含：包含SEQ IDNO:13或83所示的氨基酸序列的CDR1结构域；包含SEQ ID NO:7或45所示的氨基酸序列的CDR2结构域；和包含SEQ ID NO:19、95或102所示的氨基酸序列的CDR3结构域。
另一方面，本发明涉及人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有包含SEQ IDNO:106或108所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:107所示的氨基酸序列的轻链可变区。
另一方面，本发明涉及人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:16所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:87所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ ID NO:13所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明涉及人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有包含SEQ IDNO:109或110所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:107所示的氨基酸序列的轻链可变区。
另一方面，本发明涉及人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:16所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:90所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ ID NO:13所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明涉及人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有包含SEQ IDNO:111或113所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列的轻链可变区。
另一方面，本发明涉及人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:93所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ ID NO:83所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:95所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明涉及人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有包含SEQ IDNO:114或115所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列的轻链可变区。
另一方面，本发明涉及人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:97所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ ID NO:83所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:95所示氨基酸序列的CDR3。
另一方面，本发明涉及人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有包含SEQ IDNO:116或118所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:117所示的氨基酸序列的轻链可变区。
另一方面，本发明涉及人源化抗CD98抗体或其抗原结合部分，其具有：重链可变域区，包括(a)具有SEQ ID NO:79所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:104所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:97所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包括(a)具有SEQ ID NO:83所示氨基酸序列的CDR1；(b)具有SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的CDR2；和(c)具有SEQ ID NO:102所示氨基酸序列的CDR3。
如实施例16中描述，在十种人源化抗体huAb101、huAb102、huAb103、huAb104、huAb105、huAb106、huAb107、huAb108、huAb109和huAb110中，选择四种(huAb102、huAb104、huAb108和hAb110)与各种Bcl-xL抑制剂偶联。这些偶联物的体外效力列于表23中。
另一方面，本发明提供了抗CD98抗体、或其抗原结合片段，其与本文描述的抗CD98抗体、或其片段特异性竞争，其中所述竞争可以使用所述抗体、人CD98多肽、和抗CD98抗体或其片段在竞争性结合测定中来检测。在特定实施例中，竞争抗体或其抗原结合部分是与huAb102、huAb104、huAb108和hAb110竞争的抗体或其抗原结合部分。
在一个实施例中，如表面等离子体共振所确定，本发明的抗CD98抗体或其抗原结合部分与CD98(SEQ ID NO:124)结合，解离常数(Kd)为约1×10-6M或更低。可替代地，如表面等离子体共振所确定，抗体或其抗原结合部分与CD98(SEQ ID NO:124)结合，KD在约1×10- 6M和约1×10-11M之间。在另一个替代方案中，如表面等离子体共振所确定，抗体或其抗原结合部分与CD98(SEQ ID NO:124)结合，KD在约1×10-6M和约1×10-10M之间。可替代地，抗体或其抗原结合部分与CD98(SEQ ID NO:124)结合，其中如表面等离子体共振所测定的，KD在约1×10-6M和约5×10-10M之间；KD在约1×10-6M和约1×10-9M之间；Kd在约1×10-6M和约5×10- 9M之间；KD在约1×10-6M和约1×10-8M之间；KD在约1×10-6M和约5×10-8M之间；KD在约5.9×10-7M和约1.7×10-9M之间；KD在约5.9×10-7M和约2.2×10-7M之间。
应注意，具有上述特征的组合的抗CD98抗体或其抗原结合部分也被认为是本发明的实施例。例如，如表面等离子体共振所确定，本发明的抗体与CD98(SEQ ID NO:124)结合，解离常数(KD)为约1×10-6M或更低。
在一个实施例中，本发明的特征在于抗CD98抗体或其抗原结合部分，其是抗体huAb102。huAb102抗体包含重链可变区(所述重链可变区包含：含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR3结构域、含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:17所述氨基酸序列的CDR1结构域)和轻链可变区(所述轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:13所述氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:7所述氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:19所述氨基酸序列的CDR1结构域)。在进一步的实施例中，本发明提供了抗体，其包含：包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施例中，本发明的特征在于抗CD98抗体或其抗原结合部分，其是抗体huAb104。huAb104抗体包含重链可变区(所述重链可变区包含：含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR3结构域、含有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:17所述氨基酸序列的CDR1结构域)和轻链可变区(所述轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:13所述氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:7所述氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:19所述氨基酸序列的CDR1结构域)。在进一步的实施例中，本发明提供了抗体，其包含：包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施例中，本发明的特征在于抗CD98抗体或其抗原结合部分，其是抗体huAb108。huAb108抗体包含重链可变区(所述重链可变区包含：含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的CDR3结构域、含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:97所述氨基酸序列的CDR1结构域)和轻链可变区(所述轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:83所述氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:45所述氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:95所述氨基酸序列的CDR1结构域)。在进一步的实施例中，本发明提供了抗体，其包含：包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施例中，本发明的特征在于抗CD98抗体或其抗原结合部分，其是抗体huAb110。huAb110抗体包含重链可变区(所述重链可变区包含：含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的CDR3结构域、含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:97所述氨基酸序列的CDR1结构域)和轻链可变区(所述轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:83所述氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:45所述氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:102所述氨基酸序列的CDR1结构域)。在进一步的实施例中，本发明提供了抗体，其包含：包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含重链可变区(所述重链可变区包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：106、108、109、110、111、113、114、115、116和118)；和轻链可变区(所述轻链可变区包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：107、112和117)。
在进一步的实施例中，本发明的抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：重链可变区，其包含：包含SEQ ID NO:17、93或97所示的氨基酸序列的CDR3结构域；包含SEQ ID NO:87、90、92或104所示的氨基酸序列的CDR2结构域；和包含SEQ ID NO:16、或79所示的氨基酸序列的CDR1结构域；和轻链可变区，其包含：包含SEQ ID NO:19、95或102所示的氨基酸序列的CDR3结构域；包含SEQ ID NO:7或45所示的氨基酸序列的CDR2结构域；和包含SEQ ID NO:13或83所示的氨基酸序列的CDR1结构域。
前述抗CD98抗体CDR序列建立了根据本发明分离的新的CD98结合蛋白家族，并且包含抗原结合多肽，其包括表6、7、15和19中以及序列摘要中列出的CDR序列。
本文提供的抗CD98抗体可包含：含有CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含有CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中一个或多个这些CDR序列包含基于本文所述抗体(例如，huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其保守修饰的特定氨基酸序列，并且其中所述抗体保留了本文所述抗CD98抗体的所需功能特性。因此，抗CD98抗体或其抗原结合部分可包含：包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和含有CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中：(a)重链可变区CDR3序列包含SEQ ID NO:17或97及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代；(b)轻链可变区CDR3序列包含SEQ ID NO:19、95或102及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代；(c)抗体特异性结合CD98，和(d)抗体表现出本文所述的1、2、3、4、5、6或全部以下功能特性，例如与人CD98的结合。在一个实施例中，重链可变区CDR2序列包含SEQ ID NO:87、90、92或104及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代；轻链可变区CDR2序列包含SEQID NO:7或45及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代。在一个实施例中，重链可变区CDR1序列包含SEQ ID NO:16或79及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代；轻链可变区CDR1序列包含SEQ ID NO:13或83及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代。
还可以在除了CDR之外或者不同于CDR的抗体部分中进行保守氨基酸取代。例如，可以在框架区或Fc区中进行保守氨基酸修饰。相对于本文提供的抗CD98抗体序列，可变区或重链或轻链可包含1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4、1-5、1-10、1-15、1-20、1-25或1-50个保守氨基酸取代。在某些实施例中，抗CD98抗体包含保守和非保守氨基酸修饰的组合。在一个实施例中，抗CD98抗体包含重链可变区(所述重链可变区包含SEQ ID NO:108、110、115或118及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代)；和轻链可变区(所述轻链可变区包含SEQ ID NO:107、112或117及其保守修饰，例如1、2、3、4、5、1-2、1-3、1-4或1-5个保守氨基酸取代)。
为了产生和选择对hCD98具有优选的CD98结合和/或中和活性的CDR，可以使用本领域已知的用于产生抗体或其抗原结合部分，以及评估那些抗体或其抗原结合部分的CD98结合和/或中和特征的标准方法，包括但不限于本文具体描述的那些。
在某些实施例中，抗体包含重链恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区。在某些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含选自人IgG恒定域、人IgM恒定域、人IgE恒定域和人IgA恒定域的重链免疫球蛋白恒定域。在进一步的实施例中，抗体或其抗原结合部分具有IgG1重链恒定区、IgG2重链恒定区、IgG3恒定区或IgG4重链恒定区。优选地，重链恒定区为IgG1重链恒定区或IgG4重链恒定区。此外，抗体可包含轻链恒定区，κ轻链恒定区或λ轻链恒定区。优选地，抗体包含κ轻链恒定区。可替代地，抗体部分可为例如Fab片段或单链Fv片段。
在某些实施例中，抗CD98抗体结合部分是Fab、Fab'、F(ab’)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、单结构域抗体或双抗体。
在某些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分是多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。
在某些实施例中，抗CD98抗体或其抗原结合部分包含：包含SEQ ID NO:108、110、115或118中所示的氨基酸序列的重链恒定区和/或包含SEQ ID NO:107、112或117中所示的氨基酸序列的轻链恒定区，例如huAb102、huAb104、huAB108、或huAb110。
已经描述了Fc部分中氨基酸残基的替换以改变抗体效应子功能(Winter等人美国专利号5,648,260和5,624,821，其通过引入并入本文)。抗体的Fc部分介导若干种重要的效应功能(例如，细胞因子诱导、ADCC、吞噬作用、补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体和抗原-抗体复合物的半衰期/清除率)。在一些情况下，这些效应功能为治疗性抗体所希望的，但在其他情况下，视治疗目标而定，可能为不必要的或甚至有害的。某些人IgG同种型，尤其IgG1及IgG3，分别经由结合至FcγRs及补体C1q来介导ADCC及CDC。新生儿的Fc受体(FcRn)为决定抗体的循环半衰期的关键组分。在另一实施例中，抗体恒定区(例如抗体的Fc区)中的至少一个氨基酸残基被替代，使得抗体的效应功能改变。
本发明的一个实施例包括重组嵌合抗原受体(CAR)，其包含本文所述抗体的结合区，例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110的重链和/或轻链CDR。如本文所述，重组CAR可用于以人白细胞抗原(HLA)依赖性方式将T细胞特异性重定向至抗原。因此，本发明的CAR可用于免疫疗法，以帮助设计人受试者自身免疫细胞识别和攻击受试者肿瘤(例如，参见，美国专利号6,410,319；8,389,282；8,822,647；8,906,682；8,911,993；8,916,381；8,975,071；和美国专利申请公开号US20140322275，其中每个关于CAR技术的部分都通过引用并入本文)。这种类型的免疫疗法称为过继性细胞转移(ACT)，并且可用于治疗有此需要的受试者的癌症。
本发明的抗CD98CAR优选含有对CD98特异的细胞外抗原结合结构域，用于将CAR锚定到T细胞中的跨膜结构域，以及一个或多个细胞内信号传导结构域。在本发明的一个实施例中，CAR包括跨膜结构域，其包含选自下组的蛋白质的跨膜结构域，该组有以下组成：T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。在本发明的一个实施例中，CAR包含共刺激结构域(例如，包含选自下组的蛋白质的功能信号传导结构域的共刺激结构域，该组由以下组成：OX40、CD2、CD27、CD28、CD5、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)和4-1BB(CD137))。在本发明的某些实施例中，CAR包含scFv，所述scFv包含本文所述的CDR或可变区例如来自huAb102、huAb104、huAb108或huAb110抗体的CDR或可变区，跨膜结构域，共刺激结构域(例如，来自CD28或4-1BB的功能性信号传导结构域)，和包含来自CD3(例如，CD3-ζ)的功能性信号传导结构域的信号传导结构域。
在某些实施例中，本发明包括T细胞，其包含CAR(也称为CAR T细胞)，所述CAR包含本文所述抗体的抗原结合区(例如，CDR)或本文所述的scFv。
在本发明的某些实施例中，CAR包含可变重轻链(包含：包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:13所示的氨基酸序列的CDR1结构域)；和重链可变区(包含：包含SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:87所示氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:16所示的氨基酸序列的CDR1结构域)。
在本发明的某些实施例中，CAR包含可变重轻链(包含：包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:13所示的氨基酸序列的CDR1结构域)；和重链可变区(包含：包含SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:90所示氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:16所示的氨基酸序列的CDR1结构域)。
在本发明的某些实施例中，CAR包含可变重轻链(包含：包含SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:83所示的氨基酸序列的CDR1结构域)；和重链可变区(包含：包含SEQ ID NO:97所示氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:92所示氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:79所示的氨基酸序列的CDR1结构域)。
在本发明的某些实施例中，CAR包含可变重轻链(包含：包含SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:83所示的氨基酸序列的CDR1结构域)；和重链可变区(包含：包含SEQ ID NO:97所示氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:104所示氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQID NO:79所示的氨基酸序列的CDR1结构域)。
本发明的一个实施例包括标记的抗CD98抗体或其抗体部分，其中抗体衍生或连接于一种或多种功能分子(例如，另一种肽或蛋白质)。举例而言，经标记抗体可以借由将本发明的抗体或抗体部分(借由化学偶联、基因融合、非共价结合或以其他方式)功能上连接至一种或多种其他分子实体来衍生，该一种或多种其他分子实体诸如另一种抗体(例如双特异性抗体或双功能抗体)、可检测试剂、药物制剂、可以介导抗体或抗体部分与另一种分子(诸如链霉抗生物素蛋白核心区或聚组氨酸标签)的结合的蛋白质或肽和/或选自由以下组成的组的细胞毒性剂或治疗剂：有丝***抑制剂、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂、基因治疗运载体、烷化剂、抗血管生成剂、抗代谢产物、含硼剂、化学保护剂、激素、抗激素剂、皮质类固醇、光敏性治疗剂、寡核苷酸、放射性核素剂、拓扑异构酶抑制剂、激酶抑制剂、放射增敏剂及其组合。
可适用于衍生化抗体或其抗体部分或ADC的可检测试剂包括荧光化合物。例示性荧光可检测剂包括荧光素、异硫氰酸荧光素、若丹明、5-二甲胺-1-萘磺酰氯、藻红素及其类似物。还可用可检测酶，诸如碱性磷酸酶、辣根过氧化酶、葡萄糖氧化酶及其类似者来衍生抗体。当用可检测酶来衍生抗体时，其是通过添加用酶产生可检测反应产物的其他试剂来检测。例如，当存在可检测剂辣根过氧化酶时，添加过氧化氢及二氨基联苯胺产生可检测的着色反应产物。抗体还可用生物素衍生，且经由抗生素蛋白或抗生蛋白链菌素结合的间接量测来检测。
在一个实施例中，本发明的抗体或ADC与显像剂偶联。可用于本文所述组合物和方法的显像剂的实例包括但不限于放射性标记(例如，铟)、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标签和生物素。
在一个实施例中，将抗体或ADC与放射性标记连接，例如但不限于铟(111In)。111铟可用于标记本文所述的抗体和ADC，用于鉴定CD98阳性肿瘤。在某个实施例中，本文所述的抗CD98抗体(或ADC)通过双功能螯合剂用111I标记，所述双功能螯合剂是双功能环己基二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)螯合物(参见美国专利号5,124,471；5,434,287；和5,286,850，其各自通过引用并入本文)。
本发明的另一个实施例提供糖基化的结合蛋白，其中抗CD98抗体或其抗原结合部分包含一个或多个碳水化合物残基。新生儿体内蛋白质产生可以经历称为转译后修饰的进一步加工。具体而言，可以酶促方式(称为糖基化的过程)添加糖(糖基)残基。携带共价连接的寡糖侧链的所得蛋白质称为糖基化蛋白质或糖蛋白。抗体为在Fc域以及可变域中含有一或多个碳水化合物残基的糖蛋白。Fc域中的碳水化合物残基对Fc域的效应功能具有重要影响，且对抗体的抗原结合或半衰期影响极小(R.Jefferis,Biotechnol.Prog.[生物技术进展]21(2005)，第11-16页)。相比之下，可变域的糖基化会对抗体的抗原结合活性产生影响。可变域中的糖基化可能由于位阻而可能对抗体结合亲和力具有不利影响(Co,M.S.等人，Mol.Immunol.[分子免疫学](1993)30:1361-1367)，或造成对抗原的亲和力增加(Wallick,S.C.等人,Exp.Med.[实验医学](1988)168:1099-1109；Wright,A.等人，EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志](1991)10:2717-2723)。
本发明的一个方面涉及产生糖基化位点突变体，其中结合蛋白的O或N连接的糖基化位点已经突变。本领域中的熟练技术人员可以使用标准熟知技术产生此类突变体。保留生物活性，但具有增加或降低的结合活性的糖基化位点突变体为本发明的另一目标。
在另一实施例中，修饰本发明的抗CD98抗体或抗原结合部分的糖基化。例如，可以制备去糖基化的抗体(即，该抗体缺乏糖基化)。可修改糖基化以例如增加抗体对抗原的亲和力。此类碳水化合物修饰可借由例如改变抗体序列内的一或多个糖基化位点来完成。举例而言，可进行一个或多个氨基酸取代，从而消除一个或多个可变区糖基化位点，以借此消除该位点的糖基化。此类去糖基化可增加抗体对抗原的亲和力。此类方法进一步详细描述于PCT公开案WO 2003016466A2及美国专利5,714,350及6,350,861中，其各自以全文引用之方式并入本文中。
另外地或可替代地，可以制备糖基化类型改变的经修饰的本发明抗CD98抗体，诸如具有降低量的海藻糖基残基的低海藻糖基化抗体或具有增加的等分GlcNAc结构的抗体。已证明这些改变的糖基化模式可增加抗体的ADCC能力。此类碳水化合物修饰可借由例如在糖基化机制改变的宿主细胞中表达抗体来实现。糖基化机制改变的细胞在本领域中已有描述且可用作表达本发明的重组抗体以借此产生糖基化改变的抗体的宿主细胞。参见例如Shields,R.L.等人，(2002)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]277:26733-26740；Umana等人(1999)Nat.Biotech.[自然生物技术]17:176-1，以及欧洲专利号：EP 1,176,195；PCT公开WO 03/035835；WO 99/5434280，其各自以全文引用的方式并入本文中。
蛋白质糖基化取决于相关蛋白质的氨基酸序列以及表达蛋白质的宿主细胞。不同生物体可以产生不同糖基化酶(例如，糖基转移酶及醣苷酶)，且具有不同的可用底物(核苷酸糖)。归因于此类因素，蛋白质糖基化模式及糖基残基的组成可以视表达特定蛋白质的宿主***而不同。适用于本发明的糖基残基可以包括但不限于葡萄糖、半乳糖、甘露糖、海藻糖、N-乙酰葡萄糖胺及唾液酸。优选地，糖基化蛋白质包含糖基残基，使得糖基化模式是人。
不同的蛋白质糖基化可能导致不同的蛋白质特征。举例而言，在诸如酵母的微生物宿主中产生且利用酵母内源性路径糖基化的治疗蛋白的功效相比于在诸如CHO细胞系的哺乳动物细胞中表达的相同蛋白质的功效而言会降低。此类糖蛋白还可在人类中具有免疫原性且在给予之后显示降低的活体内半衰期。人及其他动物中的特定受体可以识别特定糖基残基且促进自血流中快速清除蛋白质。其他不良影响可以包括在蛋白质折叠、溶解度、对蛋白酶的易感性、转运、运输、区室化、分泌、由其他蛋白质或因子识别、抗原性或过敏原性方面的改变。因此，医师可能偏爱具有特定组成及糖基化模式的治疗蛋白，例如与在人细胞中或在预期受试者动物的物种特异性细胞中产生的糖基化组成及模式相同或至少类似的糖基化组成及模式。
表达不同于宿主细胞的蛋白质的糖基化蛋白质可借由对宿主细胞进行遗传修饰以表达异源糖基化酶来达成。使用重组体技术，医师可以产生展现人蛋白质糖基化的抗体或其抗原结合部分。举例而言，已对酵母菌株进行遗传修饰以表达非天然存在的糖基化酶，使得在这些酵母菌株中产生的糖基化蛋白质(糖蛋白)展现与动物细胞、尤其人细胞的蛋白质糖基化相同的蛋白质糖基化(美国专利公开案第20040018590号及第20020137134号及PCT公开案WO2005100584 A2)。
抗体可以通过许多技术中的任何一种产生。举例而言，自宿主细胞表达，其中编码重链及轻链的一种或多种表达载体借由标准技术转染至宿主细胞中。术语“转染”的各种形式意欲涵盖常用于引入外源性DNA至原核或真核宿主细胞中的各种技术，例如电穿孔、磷酸钙沈淀、DEAE-聚葡萄糖转染及其类似技术。尽管有可能在原核或真核宿主细胞中表达抗体，但抗体在真核细胞中的表达为优选的，且在哺乳动物宿主细胞中为最优选的，因为此类真核细胞(且尤其哺乳动物细胞)与原核细胞相比更可能组装且分泌经适当折叠且具免疫活性的抗体。
用于表达本发明的重组抗体的优选哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括Urlaub及Chasin,(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]77:4216-4220中所述的dhfr-CHO细胞，其与例如如R.J.Kaufman及P.A.Sharp(1982)Mol.Biol.[分子生物学]159:601-621中所述的DHFR可选择标志物一起使用)、NS0骨髓瘤细胞、COS细胞及SP2细胞。当将编码抗体基因的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞中时，借由培养宿主细胞持续一段足以允许抗体在宿主细胞中表达或更优选地允许抗体分泌至宿主细胞生长的培养基中的时间段产生抗体。可使用标准蛋白质纯化方法自培养基回收抗体。
宿主细胞还可用于产生功能性抗体片段，诸如Fab片段或scFv分子。应了解，以上程序的变化在本发明的范畴内。举例而言，可能希望的是用编码本发明抗体的轻链和/或重链的功能片段的DNA转染宿主细胞。还可使用重组DNA技术来移除并非结合至目标抗原所需的编码轻链及重链中的任一者或两者的一些或所有DNA。本发明抗体还涵盖自此类截短的DNA分子表达的分子。此外，可借由标准化学交联方法使本发明抗体与第二抗体交联而产生双功能抗体，其中一条重链及一条轻链为本发明抗体且另一条重链及轻链对除目标抗原以外的抗原具有特异性。
在用于重组表达抗体或其抗原结合部分的优选***中，借由磷酸钙介导的转染将编码抗体重链及抗体轻链的重组表达运载体引入dhfr-CHO细胞中。在重组表达运载体内，将抗体重链及轻链基因各自可操作地连接至CMV强化子/AdMLP启动子调控原件以驱动高水平的基因转录。重组表达运载体亦携带DHFR基因，其允许使用氨甲蝶呤选择/扩增来选择已经运载体转染的CHO细胞。培养所选转化体宿主细胞以允许表达抗体重链及轻链，且自培养基回收完整抗体。使用标准分子生物学技术来制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞及自培养基回收抗体。再者，本发明提供一种借由在适合培养基中培养宿主细胞直至合成重组抗体来合成本发明的重组抗体的方法。可以使用对应于本文公开的氨基酸序列的核酸分子产生本发明的重组抗体。在一个实施例中，SEQ ID NO:86和/或87中所示的核酸分子用于产生重组抗体。该方法可以进一步包含自培养基分离重组抗体。
由于通常观察到的翻译后修饰，本发明的抗体多肽链的N-和C-末端可能与预期的序列不同。例如，抗体重链中通常缺少C末端赖氨酸残基。Dick等人(2008)Biotechnol.Bioeng[生物技术与生物工程].100:1132。N-末端谷氨酰胺残基和较小程度的谷氨酸残基经常在治疗性抗体的轻链和重链上转化为焦谷氨酸残基。Dick等人(2007)Biotechnol.Bioeng[生物技术与生物工程].97:544；Liu等人(2011)JBC 28611211；Liu等人(2011)J.Biol.Chem[生物化学杂志].286:11211。
III.抗CD98抗体药物偶联物(ADC)
本文所述的抗CD98抗体可与药物部分偶联以形成抗CD98抗体药物偶联物(ADC)。由于ADC能够选择性地将一种或多种药物部分递送至靶组织(例如肿瘤相关抗原，例如，表达CD98的肿瘤)，抗体-药物偶联物(ADC)可以增加抗体在治疗疾病(例如癌症)中的治疗功效。因此，在某些实施例中，本发明提供抗CD98 ADC用作治疗用途(例如，治疗癌症)。
本发明的抗CD98 ADC包含抗CD98抗体，即与一个或多个药物部分连接的特异性结合人CD98的抗体。ADC的特异性由抗体(即抗CD98)的特异性定义。在一个实施例中，该抗CD98抗体与一种或多种细胞毒性药物连接，所述细胞毒性药物内部递送至表达CD98的转化的癌细胞。
以下提供可用于本发明的抗CD98 ADC的药物的实例，以及可用于偶联抗体和一种或多种药物的接头。术语“药物”、“药剂”和“药物部分”在本文中可互换使用。术语“连接的”和“偶联的”在本文中也可互换使用，表明抗体和部分是共价连接的。
在一些实施例中，ADC具有以下式(式I)：
其中Ab是抗体，例如，抗CD98抗体huAb102、huAb104、huAb108或huAb110，并且(D-L-LK)是药物-接头-共价连接。药物接头部分由L-(其为接头)和-D(其具有例如对靶细胞(例如，表达CD98的细胞)具有细胞抑制，细胞毒性或其他治疗活性的药物部分)制成；并且m是从1到20的整数。在一些实施例中，m的范围为从1至8、1至7、1至6、2至6、1至5、1至4、2至4、或1至3。ADC的DAR相当于式I中提到的m。在一个实施例中，ADC式Ab-(LK-L-D)m，其中Ab是抗CD98抗体，例如，huAb102、huAb104、huAb108或huAb110，LK-L是接头，D是药物(例如，Bcl-xL抑制剂)，LK是共价接头(例如，-S-并且m为1至8(或DAR为2-4)。下面描述可以在本发明的ADC中使用的药物(式I的D)和接头(式I的L)的其他细节，以及可替代的ADC结构。
III.A.抗CD98 ADC：Bcl-xL抑制剂、接头、合成子和制备其的方法
调节异常的凋亡途径也与癌症的病理学有关。下调细胞凋亡(更具体地说是Bcl-2蛋白家族)与癌症恶性肿瘤的发病有关的暗示已经揭示了针对这种仍然难以捉摸的疾病的新方法。例如，研究表明，抗凋亡蛋白Bcl 2和Bcl-xL在许多癌细胞类型中过表达。参见Zhang，2002，Nature Reviews/Drug Discovery[自然评论/药物发现]1：101；Kirkin等人，2004，Biochimica Biophysica Acta[生物化学和生物物理学报]1644：229-249；和Amundson等人，2000，Cancer Research[癌症研究]60：6101-6110。这种调节异常的作用是改变的细胞的存活，否则细胞会在正常条件下发生细胞凋亡。与不受调节的增殖相关的这些缺陷的重复被认为是癌症进化的起点。
本披露的内容涉及抗hCD98 ADC，该抗hCD98 ADC包含经由接头与药物偶联的抗hCD98抗体，其中该药物是Bcl-xL抑制剂。在特定的实施例中，ADC是根据以下结构式(I)的化合物、或其药学上可接受的盐，其中Ab代表抗hCD98抗体，D代表Bcl-xL抑制剂药物(即，如以下所示式IIa或IIb的化合物)，L代表接头，LK代表将接头(L)与抗hCD98抗体(Ab)连接的共价键，并且m代表与抗体连接的D-L-LK单元的数量(其是从1至20的整数)。在某些实施例中，m是2、3或4。
各种Bcl-xL抑制剂本身的特定实施例，以及各种Bcl-xL抑制剂(D)、接头(L)和可包含本文所述的ADC的抗CD98抗体(Ab)还有与ADC连接的Bcl-xL抑制剂的数目在下文更详细地描述。
以下提供可用于本发明的抗CD98 ADC的Bcl-xL抑制剂的实例，以及可用于偶联抗体和一种或多种Bcl-xL抑制剂的接头。术语“连接的”和“偶联的”在本文中也可互换使用，表明抗体和部分是共价连接的。
III.A.1.Bcl-xL抑制剂
Bcl-xL抑制剂可以在本文描述的各种方法中用作化合物或盐本身，或者作为ADC的组成部分，例如，作为式(I)中的药物(D)被包括。
示例性Bcl-xl抑制剂描述于国际公开号WO 2016/094517中，其通过引用整体并入本文。
能以非偶联形式使用或可以作为ADC的部分被包括的Bcl-xL抑制剂的特定实施例包括根据结构式(IIa)或(IIb)的化合物。在本发明中，当Bcl-xL抑制剂作为ADC的部分被包括时，下式(IIa)或(IIb)中所示的#代表与接头的附接点，这指示这些抑制剂以单价基团形式
或其盐，其中：
Ar1选自 并且任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基；
Ar2选自 并任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基，其中式(IIb)的#-N(R4)-R13-Z2b-取代基在Ar2的任何能够被取代的原子处附接至Ar2；
Z1选自N、CH、C-卤基和C-CN；
Z2a、Z2b、和Z2c各自彼此独立地选自键、NR6、CR6aR6b、O、S、S(O)、SO2、NR6C(O)、NR6aC(O)NR6b、和NR6C(O)O；
R1选自氢、甲基、卤素、卤代甲基、乙基和氰基；
R2选自氢、甲基、卤基、卤代甲基和氰基；
R3选自氢、低级烷基和低级杂烷基；
R4选自氢、低级烷基、单环环烷基、单环杂环基、低级杂烷基、或与R13的原子一起形成具有3至7个环原子的环烷基或杂环基环，其中该低级烷基、单环环烷基、单环杂环基、低级杂烷基任选地被一个或多个以下基团取代：卤基、氰基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、NHC(O)CR6aR6b、NHS(O)CR6aR6b、NHS(O)2CR6aR6b、S(O)2CR6aR6b或S(O)2NH2基团；
R6、R6a和R6b各自彼此独立地选自氢、低级烷基、低级杂烷基、任选地取代的单环环烷基和单环杂环基，或与来自R13的原子一起形成具有3至7个环原子的环烷基或杂环基环；
R10选自氰基、OR14、SR14、SOR14、SO2R14、SO2NR14aR14b、NR14aR14b、NHC(O)R14和NHSO2R14；
R11a和R11b各自彼此独立地选自氢、卤基、甲基、乙基、卤代甲基、羟基、甲氧基、CN、和SCH3；
R12选自氢、卤基、氰基、低级烷基、低级杂烷基、环烷基、或杂环基，其中该烷基、杂烷基、环烷基、或杂环基任选地被一个或多个以下基团取代：卤基、氰基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、NHC(O)CR6aR6b、NHS(O)CR6aR6b、NHS(O)2CR6aR6b或S(O)2CR6aR6b基团；
R13选自键、任选地取代的低级亚烷基、任选地取代的低级杂亚烷基、任选地取代的环烷基、或任选地取代的杂环基；
R14选自氢、任选地取代的低级烷基和任选地取代的低级杂烷基；
R14a和R14b各自彼此独立地选自氢、任选地取代的低级烷基、任选地取代的低级杂烷基、或与它们所键合的氮原子一起形成单环环烷基或单环杂环基环；
R15选自氢、卤基、C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、和C1-4卤代烷基和C1-4羟烷基，条件是当R15存在时，R4不是C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基或C1-4羟烷基，其中R4C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基和C1-4羟烷基任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：OCH3、OCH2CH2OCH3、和OCH2CH2NHCH3；以及
#代表与接头的附接点或氢原子。
能以非偶联形式使用或可以作为ADC的部分被包括的Bcl-xL抑制剂的特定实施例包括根据结构式(IIa)或(IIb)的化合物。
或其盐，其中：
Ar1选自 并且任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基；
Ar2选自 并任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基，其中式(IIb)的#-N(R4)-R13-Z2b-取代基在Ar2的任何能够被取代的原子处附接至Ar2；
Z1选自N、CH、C-卤基和C-CN；
Z2a、Z2b、和Z2c各自彼此独立地选自键、NR6、CR6aR6b、O、S、S(O)、S(O)2、NR6C(O)、NR6aC(O)NR6b、和NR6C(O)O；
R1选自氢、甲基、卤素、卤代甲基、乙基和氰基；
R2选自氢、甲基、卤基、卤代甲基和氰基；
R3选自氢、低级烷基和低级杂烷基；
R4选自氢、低级烷基、单环环烷基、单环杂环基、和低级杂烷基，或与R13的原子一起形成具有在3与7个环原子之间的环烷基环或杂环基环，其中该低级烷基、单环环烷基、单环杂环基、和低级杂烷基任选地被一个或多个以下基团取代：卤基、氰基、羟基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、C(O)NR6aR6b、S(O)2NR6aR6b、NHC(O)CHR6aR6b、NHS(O)CHR6aR6b、NHS(O)2CHR6aR6b、S(O)2CHR6aR6b或S(O)2NH2基团；
R6、R6a和R6b各自彼此独立地选自氢、低级烷基、低级杂烷基、任选地取代的单环环烷基和单环杂环基，或与来自R13的原子一起形成具有3至7个环原子的环烷基或杂环基环；
R10选自氰基、OR14、SR14、SOR14、SO2R14、SO2NR14aR14b、NR14aR14b、NHC(O)R14和NHSO2R14；
R11a和R11b各自彼此独立地选自氢、卤基、甲基、乙基、卤代甲基、羟基、甲氧基、CN、和SCH3；
R12选自氢、卤基、氰基、低级烷基、低级杂烷基、环烷基、和杂环基，其中该烷基、杂烷基、环烷基、和杂环基任选地被一个或多个以下基团取代：卤基、氰基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、NHC(O)CHR6aR6b、NHS(O)CHR6aR6b、NHS(O)2CHR6aR6b或S(O)2CHR6aR6b基团；
R13选自键、任选地取代的低级亚烷基、任选地取代的低级杂亚烷基、任选地取代的环烷基、或任选地取代的杂环基；
R14选自氢、任选地取代的低级烷基、和任选地取代的低级杂烷基；
R14a和R14b各自彼此独立地选自氢、任选地取代的低级烷基、和任选地取代的低级杂烷基，或与它们所键合的氮原子一起形成任选地取代的单环环烷基环或单环杂环基环；
R15选自氢、卤基、C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、和C1-4卤代烷基和C1-4羟基烷基，其条件是当R15存在时，R4不是C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4环烷基或C1-4羟基烷基，其中该R4C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基和C1-4羟基烷基任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：OCH3、OCH2CH2OCH3、和OCH2CH2NHCH3；以及
#代表与接头的附接点或氢原子。
能以非偶联形式使用或可以作为ADC的部分被包括的Bcl-xL抑制剂的另一个实施例包括根据结构式(IIa)或(IIb)的化合物：
或其盐，其中：
Ar1选自 并且任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基；
Ar2选自 并任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基，其中式(IIb)的#-N(R4)-R13-Z2b-取代基在Ar2的任何能够被取代的原子处附接至Ar2；
Z1选自N、CH、C-卤基和C-CN；
Z2a、Z2b、和Z2c各自彼此独立地选自键、NR6、CR6aR6b、O、S、S(O)、SO2、NR6C(O)、NR6aC(O)NR6b、和NR6C(O)O；
R1选自氢、甲基、卤素、卤代甲基、乙基和氰基；
R2选自氢、甲基、卤基、卤代甲基和氰基；
R3选自氢、低级烷基和低级杂烷基；
R4选自氢、低级烷基、单环环烷基、单环杂环基、低级杂烷基、或与R13的原子一起形成具有3至7个环原子的环烷基或杂环基环，其中该低级烷基、单环环烷基、单环杂环基、低级杂烷基任选地被一个或多个以下基团取代：卤基、氰基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、NHC(O)CR6aR6b、NHS(O)CR6aR6b、NHS(O)2CR6aR6b、S(O)2CR6aR6b或S(O)2NH2基团；
R6、R6a和R6b各自彼此独立地选自氢、低级烷基、低级杂烷基、任选地取代的单环环烷基和单环杂环基，或与来自R13的原子一起形成具有3至7个环原子的环烷基或杂环基环；
R10选自氰基、OR14、SR14、SOR14、SO2R14、SO2NR14aR14b、NR14aR14b、NHC(O)R14和NHSO2R14；
R11a和R11b各自彼此独立地选自氢、卤基、甲基、乙基、卤代甲基、羟基、甲氧基、CN、和SCH3；
R12选自氢、卤基、氰基、低级烷基、低级杂烷基、环烷基、或杂环基，其中该烷基、杂烷基、环烷基、或杂环基任选地被一个或多个以下基团取代：卤基、氰基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、NHC(O)CR6aR6b、NHS(O)CR6aR6b、NHS(O)2CR6aR6b或S(O)2CR6aR6b基团；
R13选自键、任选地取代的低级亚烷基、任选地取代的低级杂亚烷基、任选地取代的环烷基、或任选地取代的杂环基；
R14选自氢、任选地取代的低级烷基、和任选地取代的低级杂烷基；
R14a和R14b各自彼此独立地选自氢、任选地取代的低级烷基、任选地取代的低级杂烷基、或与它们所键合的氮原子一起形成单环环烷基或单环杂环基环；
R15选自氢、卤基、C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、和C1-4卤代烷基和C1-4羟烷基，条件是当R15存在时，R4不是C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基或C1-4羟烷基，其中R4C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基和C1-4羟烷基任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：OCH3、OCH2CH2OCH3、和OCH2CH2NHCH3；以及
#代表与接头的附接点或氢原子。
当具有结构式(IIa)和(IIb)的Bcl-xL抑制剂不是ADC的组分时，式(IIa)和(IIb)中的#代表与氢原子的附接点。当Bcl-xL抑制剂不是ADC的组分时，式(IIa)和(IIb)中的#代表与接头的附接点。当Bcl-xL抑制剂是ADC的组分时，ADC可以包含一种或多种Bcl-xL抑制剂，它们可以相同或不同，但通常是相同的。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar1选自 并任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、氰基、甲基、和卤代甲基。在特定实施例中，Ar1是在具体的实施例中，Ar1是未取代的。
在所有实施例中，式(IIb)的#-N(R4)-R13-Z2b-取代基在Ar2的任何能够被取代的原子处附接至Ar2。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是其在5-位被选自羟基、C1-4烷氧基、和氰基的基团任选地取代；或
Ar2是或
Ar2是或
Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是在某些实施例中，式(IIa)的Ar2是未取代的。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Ar2是其在5-位被选自羟基、C1-4烷氧基、和氰基的基团取代。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的Z1是N。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R1选自甲基和氯。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R2选自氢和甲基。在特定的实施例中，R2是氢。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R4是甲基。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R4是(CH2)2OCH3。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R4是氢。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R4是单环杂环基，其中该单环杂环烷基被一个S(O)2CH3取代。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R4是氢或低级烷基，其中该低级烷基任选地被C1-4烷氧基或C(O)NR6aR6b取代。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R4是低级烷基，其中该低级烷基被C(O)NH2取代。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R4是低级烷基，其中该低级烷基被S(O)2NH2取代。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R4是低级烷基，其中该低级烷基被羟基取代。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R4是低级烷基，其中该低级烷基被C(O)N(CH3)2被取代。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R4是低级烷基，其中该低级烷基被C(O)NHCH3取代。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R11a和R11b是相同的。在特定的实施例中，R11a和R11b各自是甲基。在另一个实施例中，R11a和R11b各自是乙基。在另一个实施例中，R11a和R11b各自是甲氧基。
在某些实施例中，式(IIa)或(IIb)的R11a和R11b独立地选自F、Br和Cl。
在某些实施例中，Z1是N，Z2a是O，R1是甲基或氯，R2是氢，并且Ar2是其中在5-位被选自羟基、C1-4烷氧基、和氰基的基团任选地取代。
某些实施例涉及式(IIa)的化合物。在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是O。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是CH2或O。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是S。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是CH2。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是NR6。在一些此类实施例中，R6是甲基。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是NR6C(O)。在一些此类实施例中，R6是氢。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是O，R13是亚乙基，并且R4是低级烷基。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是O，R13是亚乙基，并且R4是氢或任选地被C1-4烷氧基或C(O)NR6aR6b取代的低级烷基。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是O，R13是亚乙基，并且R4是甲基。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是O，R13是亚乙基，并且R4是氢。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是NR6C(O)，R6是氢，R13是亚甲基，并且R4是氢。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是S，R13是亚乙基，并且R4是氢。
在某些实施例中，式(IIa)的Z2a是CH2，R13是亚乙基，并且R4是氢。
在某些实施例中，式(IIa)中的基团R13是亚乙基。在一些此类实施例中，Z2a是O。
在某些实施例中，式(IIa)中的基团R13是丙烯。在一些此类实施例中，Z2a是O。
在某些实施例中，式(IIa)中的基团R13选自低级亚烷基或低级杂亚烷基。
在某些实施例中，式(IIa)中的基团R13选自(CH2)2O(CH2)2、(CH2)3O(CH2)2、(CH2)2O(CH2)3和(CH2)3O(CH2)3。在一些此类实施例中，Z2a是O。
在某些实施例中，式(IIa)中的基团R13选自(CH2)2(SO2)(CH2)2、(CH2)3(SO2)(CH2)2、(CH2)2(SO2)(CH2)3和(CH2)3(SO2)(CH2)3。在一些此类实施例中，Z2a是O。
在某些实施例中，式(IIa)中的基团R13选自(CH2)2(SO)(CH2)2、(CH2)2(SO)(CH2)3、(CH2)3(SO)(CH2)2和(CH2)3(SO)(CH2)3。在一些此类实施例中，Z2a是O。
在某些实施例中，式(IIa)中的基团R13选自(CH2)2S(CH2)2、(CH2)2S(CH2)3、(CH2)3S(CH2)2和(CH2)3S(CH2)3。在一些此类实施例中，Z2a是O。
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，基团选自
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，式(IIa)中的基团选自
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
在某些实施例中，式(IIa)中的基团是
某些实施例涉及式(IIb)的化合物。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2b是键、O、或NR6，或者并且R13是亚乙基或任选地取代的杂环基。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2b是NR6。在一些此类实施例中，R6是甲基。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2b是NR6，并且R13是亚乙基。在一些此类实施例中，R6是甲基。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2b是O，并且R13是亚乙基。在一些此类实施例中，R4是甲基。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2b是NR6，其中R6与R13的原子一起形成具有在4与6个原子之间的环。在一些此类实施例中，该环是五元环。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2b是亚甲基，并且基团R13是亚甲基。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2b是亚甲基，并且基团R13是键。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2b是氧，并且基团R13选自(CH2)2O(CH2)2、(CH2)3O(CH2)2、(CH2)2O(CH2)3和(CH2)3O(CH2)3。在一些此类实施例中，R4是甲基。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2c是键并且R12是OH。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2c是键并且R12选自F、Cl、Br和I。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2c是键并且R12是低级烷基。在一些此类实施例中，R12是甲基。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2c是O并且R12是低级杂烷基。在一些此类实施例中，R12是O(CH2)2OCH3。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2c是O并且R12是任选地被一个或多个卤基或C1-4烷氧基取代的低级烷基。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2c是O并且R12是低级烷基。在具体的实施例中，R12是甲基。
在某些实施例中，式(IIb)中的基团Z2c是S，并且R12是低级烷基。在一些此类实施例中，R12是甲基。
可以在本文描述的方法中以非偶联形式使用和/或包括在本文描述的ADC中的根据结构式(IIa)-(IIb)的示例性Bcl-xL抑制剂包括以下化合物、和/或其药学上可接受的盐：
显而易见地，当本申请的Bcl-xL抑制剂是偶联的形式时，对应于结构式(IIa)或(IIb)的#位置的氢不存在，形成单价基团。例如，化合物W3.01(实例1.1)是6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸。
当它是非偶联形式时，它具有以下结构：
当如结构式(IIa)或(IIb)中所示的ADC中包含相同化合物时，不存在对应于#位的氢，形成单价基团。
在某些实施例中，Bcl-xL抑制剂选自下组，该组由以下组成：W3.01、W3.02、W3.03、W3.04、W3.05、W3.06、W3.07、W3.08、W3.09、W3.10、W3.11、W3.12、W3.13、W3.14、W3.15、W3.16、W3.17、W3.18、W3.19、W3.20、W3.21、W3.22、W3.23、W3.24、W3.25、W3.26、W3.27、W3.28、W3.29、W3.30、W3.31、W3.32、W3.33、W3.34、W3.35、W3.36、W3.37、W3.38、W3.39、W3.40、W3.41、W3.42、W3.43、及其药学上可接受的盐(参见实例1的化合物)。
在某些实施例中，ADC、或其药学上可接受的盐包含通过接头的方式与抗体连接的药物，其中该药物是选自下组的Bcl-xL抑制剂，该组由以下组成：W3.01、W3.02、W3.03、W3.04、W3.05、W3.06、W3.07、W3.08、W3.09、W3.10、W3.11、W3.12、W3.13、W3.14、W3.15、W3.16、W3.17、W3.18、W3.19、W3.20、W3.21、W3.22、W3.23、W3.24、W3.25、W3.26、W3.27、W3.28、W3.29、W3.30、W3.31、W3.32、W3.33、W3.34、W3.35、W3.36、W3.37、W3.38、W3.39、W3.40、W3.41、W3.42、W3.43。
在某些实施例中，ADC、或其药学上可接受的盐，Bcl-xL抑制剂选自由以下化合物组成的组，对这些化合物的修饰在于：在对应于结构式(IIa)或(IIb)的#位置的氢不存在，从而形成单价基团：
6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-([1,3]噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-([1,3]噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(氧杂环丁烷-3-基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[6-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3,5-二甲基-7-{2-[(2-氨磺酰基乙基)氨基]乙氧基}三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-{甲基[2-(甲氨基)乙基]氨基}-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]吡啶-2-甲酸；
6-[5-氨基-8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-[3-(甲氨基)丙-1-炔-1-基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]吡啶-2-甲酸；
6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-甲基-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3,5-二甲基-7-(2-{[1-(甲磺酰基)哌啶-4-基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3,5-二甲基-7-(2-{[1-(甲磺酰基)氮杂环丁-3-基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲唑-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((2-(N,N-二甲基氨磺酰基)乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(3-羟丙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{[3-(二甲基氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3,5-二甲基-7-(2-{[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙酰氨基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3-[(2-氨乙基)硫烷基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(3-氨基丙基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；以及
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{5-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]喹啉-3-基}吡啶-2-甲酸。
Bcl-xL抑制剂结合并抑制抗凋亡Bcl-xL蛋白，诱导细胞凋亡。根据结构式(IIa)-(IIb)的特异性Bcl-xL抑制剂结合并抑制Bcl-xL活性的能力可以在标准结合和活性测定(包括例如描述在Tao等人,2014,ACS Med.Chem.Lett.[ACS药物化学快报],5:1088-1093中的TR-FRET Bcl-xL结合测定)中证实。
Bcl-xL抑制活性还可以在基于细胞的标准细胞毒性测定(例如描述于Tao等人,2014,ACS Med.Chem.Lett.[ACS药物化学快报],5:1088-1093中的FL5.12细胞和Molt-4细胞毒性测定)中证实。可以用于证实能够渗透细胞膜的特异性Bcl-xL抑制剂的Bcl-xL抑制活性的特异性Molt--4细胞毒性测定在下面的实例5中提供。通常，这种细胞可渗透的Bcl-xL抑制剂在实例5的Molt-4细胞毒性测定中将表现为小于约500nM的EC50，但可显示出显著更低的EC50，例如EC50小于约250、100、50、20、10或甚至5nM。
线粒体外膜透化(MOMP)的过程由Bcl-2家族蛋白控制。具体而言，MOMP由促凋亡Bcl-2家族蛋白Bax和Bak促进，其在活化后在线粒体外膜上寡聚化并形成孔，导致细胞色素c(cyt c)的释放。细胞色素c的释放触发了凋亡小体的形成，其反过来导致胱天蛋白酶活化和使细胞经历程序性细胞死亡的其他事件(参见，Goldstein等人,2005,Cell Death andDifferentiation[细胞死亡与分化]12:453-462)。Bax和Bak的寡聚化作用被抗凋亡Bcl-2家族成员(包括Bcl-2和Bcl-xL)拮抗。在依赖Bcl-xL存活的细胞中，Bcl-xL抑制剂可以引起Bax和/或Bak、MOMP的激活，细胞色素c的释放并导致细胞凋亡的下游事件。细胞色素c释放的过程可以通过细胞中细胞色素c的线粒体和胞质两部分的蛋白质印迹来评估，并用作细胞凋亡的代表性测量值。
作为检测Bcl-xL抑制活性和随后释放的细胞色素c的手段，可以用在血浆而不是线粒体膜中引起选择性孔形成的试剂处理细胞。具体而言，质膜中的胆固醇/磷脂比率比线粒体膜高得多。结果，用低浓度的胆固醇指导的洗涤剂洋地黄皂苷短暂孵育选择性地使质膜透化而不显著影响线粒体膜。该试剂与胆固醇形成不溶性复合物，导致胆固醇从其正常的磷脂结合位点分离。反过来，这种作用导致在脂质双层中形成约宽的孔。一旦质膜透化，能够通过洋地黄皂苷啶形成的孔的细胞溶质成分就会被洗掉，包括细胞凋亡细胞中从线粒体释放到胞质溶胶中的细胞色素C(Campos,2006,Cytometry A[血细胞计数A]69(6):515-523)。
尽管许多具有结构式(IIa)-(IIb)的Bcl-xL抑制剂选择性地或特异性地抑制Bcl-xL而不是其他抗凋亡Bcl-2家族蛋白，但是对Bcl-xL的选择性和/或特异性抑制不是必需的。除抑制Bcl-xL外，Bcl-xL抑制剂和包含所述化合物的ADC还可以抑制一种或多种其他抗凋亡Bcl-2家族蛋白(例如Bcl-2)。在一些实施例中，Bcl-xL抑制剂和/或ADC对Bcl-xL具有选择性和/或特异性。特异性或选择性是指特定Bcl-xL抑制剂和/或ADC在相同的测定条件下比Bcl-2更大程度地结合或抑制Bcl-xL。在具体的实施例中，Bcl-xL抑制剂和/或ADC在结合测定中表现出对Bcl-xL相比于对Bcl-2约10倍，100倍或甚至更高的特异性或选择性。
III.A.2.Bcl-xL接头
在本文描述的ADC中，将Bcl-xL抑制剂(描述于部分III.A)通过接头的方式与抗CD98抗体连接。将Bcl-xL抑制剂与ADC的抗CD98抗体连接的接头可以是短的、长的、疏水的、亲水的、柔性的或刚性的，或者可以由各自独立地具有一种或多种上述性质的区段组成，使得该接头可包括具有不同特性的区段。接头可以是多价的，使得它们将多于一种Bcl-xL抑制剂共价连接至抗体上的单个位点，或是单价的，使得它们共价地将单个Bcl-xL抑制剂连接至抗体上的单个位点。
如技术人员所理解的，接头通过在一个位置与Bcl-xL抑制剂形成共价连接并在另一个位置与抗体形成共价连接来将该Bcl-xL抑制剂与该抗CD98抗体连接。通过接头上的官能团与抑制剂和抗体上的官能团之间的反应形成共价键。如本文所用，表达“接头”旨在包括(i)该接头的非偶联形式，该接头包括能够将接头与Bcl-xL抑制剂共价地连接的官能团、和能够将接头与抗CD98抗体共价地连接的官能团；(ii)该接头的部分偶联形式，其包括能够使该接头与抗CD98抗体共价连接并且与Bcl-xL抑制剂共价连接的官能团，或反之亦然；和(iii)与Bcl-xL抑制剂和抗CD98抗体共价连接的接头的完全偶联形式。在本文所述的中间合成子和ADC的一些具体实施例中，在接头上包含官能团的部分和在接头和抗体之间形成的共价键分别具体地说明为Rx和LK。一个实施例涉及ADC，其在本文所述的合成子共价连接至抗CD98抗体(其连接在肿瘤细胞上表达的细胞表面受体或肿瘤相关抗原)的条件下，通过使该抗体与该合成子接触而形成。一个实施例涉及通过在本文所述的合成子与抗CD98抗体共价连接的条件下接触该合成子而形成的ADC的制备方法。一个实施例涉及抑制表达Bcl-xL的细胞中Bcl-xL活性的方法，该方法包括在ADC结合细胞的条件下使该细胞与本文所述的能够结合该细胞的ADC接触。
例如，可用于将许多Bcl-xL抑制剂与抗体连接的示例性多价接头描述于，美国专利号8,399,512；美国公开申请号2010/0152725；美国专利号8,524,214；美国专利号8,349,308；美国公开申请号2013/189218；美国公开申请号2014/017265；WO 2014/093379；WO2014/093394；WO2014/093640，其内容通过引用整体并入本文。例如，由Mersana等人开发的接头技术有可能使高DAR ADC具有良好的物理化学性质。如下所示，接头技术基于通过一系列酯键将药物分子掺入增溶的聚缩醛主链中。该方法使高负载ADC(DAR高达20)同时保持良好的物理化学性质。该方法可与Bcl-xL抑制剂一起使用，如以下方案中所示。
为了利用上述方案中描述的接头技术，可以在Bcl-xL抑制剂中存在或引入脂族醇。然后将醇部分与丙氨酸部分偶联，然后将其合成地掺入接头中。体外ADC的脂质体加工释放含亲本醇的药物。
树枝状接头的其他实例可以在以下中找到：US 2006/116422；US 2005/271615；deGroot等人,(2003)Angew.Chem.Int.Ed.[德国应用化学]42:4490-4494；Amir等人,(2003)Angew.Chem.Int.Ed.[德国应用化学]42:4494-4499；Shamis等人,(2004)J.Am.Chem.Soc.[美国化学学会杂志]126:1726-1731；Sun等人,(2002)Bioorganic&Medicinal ChemistryLetters[生物有机化学与医药化学通讯]12:2213-2215；Sun等人,(2003)Bioorganic&Medicinal Chemistry[生物有机化学与医药化学]11:1761-1768；King等人,(2002)Tetrahedron Letters[四面体通讯]43:1987-1990。
可以使用的示例性单价接头描述于例如Nolting,2013,Antibody-DrugConjugates[抗体-药物偶联物],Methods in Molecular Biology[分子生物学方法]1045:71-100；Kitson等人,2013,CROs/CMOs-Chemica Oggi-Chemistry Today[今日化学]31(4):30-36；Ducry等人,2010,Bioconjugate Chem.[生物偶联化学]21:5-13；Zhao等人,2011,J.Med.Chem.[药物化学杂志]54:3606-3623；美国专利号7,223,837；美国专利号8,568,728；美国专利号8,535,678；和WO2004010957，其各自的内容通过引用整体并入本文。
作为实例而非限制，下文描述了可包括在本文所述的ADC中的一些可裂解和不可裂解的接头。
可裂解接头
在某些实施例中，所选择的接头在体外或体内是可裂解的。可裂解接头可包括化学或酶促不稳定或可降解的键。可裂解接头通常依赖于细胞内的过程来释放药物，例如细胞质中的还原，溶酶体中暴露于酸性条件，或细胞内特定蛋白酶或其他酶的裂解。可裂解接头通常包含一个或多个化学键，其化学或酶促可裂解，而接头的其余部分是不可裂解的。
在某些实施例中，接头包含化学不稳定基团，例如腙和/或二硫化物基团。包含化学不稳定基团的接头利用血浆和一些细胞质区室之间的差异性质。促进含腙的接头的药物释放的细胞内条件是内体和溶酶体的酸性环境，而含有二硫化物的接头在含有高硫醇浓度例如谷胱甘肽的细胞溶质中被还原。在某些实施例中，可以通过使用化学不稳定基团附近的取代基引入空间位阻来增加包含化学不稳定基团的接头的血浆稳定性。
酸性不稳定基团，如腙，在血液中性pH环境(pH 7.3-7.5)的全身循环过程中保持完整，并在ADC内化进入细胞的轻度酸性内体(pH 5.0-6.5)和溶酶体(pH 4.5-5.0)隔室后进行水解并释放药物。这种pH依赖性释放机制与药物的非特异性释放有关。为了增加接头的腙基团的稳定性，可以通过化学修饰，例如取代改变接头，允许调节以在溶酶体中实现更有效的释放，同时使循环损失最小化。
含腙的接头可含有另外的裂解位点，例如另外的酸不稳定裂解位点和/或酶促不稳定的裂解位点。包括示例性含腙的接头的ADC包括以下结构：
其中D和Ab分别代表药物和Ab，并且n代表与抗CD98抗体连接的药物-接头的数量。在某些接头(如接头(Ig))中，接头包含两个可裂解的基团-二硫化物和腙部分。对于这样的接头，未经修饰的游离药物的有效释放需要酸性pH或二硫化物还原和酸性pH。如(Ih)和(Ii)的接头已经显示出对单个腙裂解位点有效。
可以包括在接头中的其他酸不稳定基团包括含有顺式乌头酰基(cis-Aconityl)的接头。顺式乌头酰基化学过程使用与酰胺键并列的羧酸来加速酰胺在酸性条件下的水解。
可裂解接头也可包括二硫化物基团。二硫化物在生理pH下是热力学稳定的，并且被设计成在细胞中内化后释放药物，其中细胞质提供与细胞外环境相比显著更具还原性的环境。二硫键的断裂通常需要存在细胞质硫醇辅因子，例如(还原的)谷胱甘肽(GSH)，使得含二硫化物的接头在循环中合理稳定，选择性地释放细胞溶质中的药物。细胞内酶蛋白质二硫化物异构酶或能够裂解二硫键的类似酶也可能有助于优先裂解细胞内的二硫键。据报道，GSH在浓度范围为0.5-10mM的细胞中存在，而循环中的GSH或半胱氨酸(最丰富的低分子量硫醇)的浓度显著更低，为约5μM。肿瘤细胞，其中不规则的血流导致缺氧状态，导致还原酶的活性增强，因此甚至更高的谷胱甘肽浓度。在某些实施例中，含二硫化物的接头的体内稳定性可以通过接头的化学修饰来增强，例如，使用与二硫键相邻的空间位阻。
包括示例性含二硫化物的接头的ADC包括以下结构：
其中D和Ab分别代表药物和抗体，n代表与抗CD98抗体连接的药物-接头的数量，并且R在每次出现时独立地选自，例如氢或烷基。在某些实施例中，增加与二硫键相邻的空间位阻增加了接头的稳定性。当一个或多个R基团选自低级烷基如甲基时，诸如(Ij)和(Il)的结构显示出增加的体内稳定性。
可以使用的另一种类型的接头是被酶特异性裂解的接头。在一个实施例中，该接头是可被溶酶体酶裂解的。此类接头通常是基于肽的或包括充当酶的底物的肽区域。与化学不稳定的接头相比，基于肽的接头在血浆和细胞外环境中往往更稳定。肽键通常具有良好的血清稳定性，因为溶酶体蛋白水解酶由于内源性抑制剂与溶酶体相比血液的不利的高pH值而在血液中具有非常低的活性。发生从抗CD98抗体释放药物，特别是由于溶酶体蛋白酶(例如组织蛋白酶和纤溶酶)的作用。这些蛋白酶可以在某些肿瘤组织中以升高的水平存在。在某些实施例中，接头能被溶酶体酶裂解。在某些实施例中，该接头能被溶酶体酶裂解，并且该溶酶体酶是组织蛋白酶B。在某些实施例中，该接头能被溶酶体酶裂解，并且该溶酶体酶是β-葡糖醛酸糖苷酶或β-半乳糖苷酶。在某些实施例中，接头能被溶酶体酶裂解，并且该溶酶体酶是β-葡糖醛酸糖苷酶。在某些实施例中，接头能被溶酶体酶裂解，并且该溶酶体酶是β-半乳糖苷酶。
在示例性实施例中，可裂解的肽选自四肽(例如，Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ ID NO:166)、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO:167))或二肽(例如，Val-Cit、Val-Ala、和Phe-Lys)。在某些实施例中，由于较长肽的疏水性，二肽优于较长的多肽。
已经描述了多种基于二肽的可裂解接头，其用于将诸如阿霉素、丝裂霉素、喜树碱、他利霉素和澳瑞他汀(auristatin/auristatin)家族成员的药物连接到抗体上(参见Dubowchik等人,1998,J.Org.Chem.[有机化学期刊]67:1866-1872；Dubowchik等人,1998,Bioorg.Med.Chem.Lett.[生物有机化学与医药化学]8:3341-3346；Walker等人,2002,Bioorg.Med.Chem.Lett.[生物有机化学与医药化学]12:217-219；Walker等人,2004,Bioorg.Med.Chem.Lett.[生物有机化学与医药化学]14:4323-4327；和Francisco等人,2003,Blood[血液]102:1458-1465，其中每个的内容通过引用并入本文)。所有这些二肽接头或这些二肽接头的修饰形式可用于本文所述的ADC中。可以使用的其他二肽接头包括在以下ADC中发现的那些，例如西雅图遗传本妥昔单抗(Seattle Genetics'Brentuximab)Vendotin SGN-35(Adcetris TM)、西雅图遗传(Seattle Genetics)SGN-75(抗CD-70，MC-单甲基澳瑞他汀F(MMAF)、Celldex Therapeutics glembatumumab(CDX-011)(抗NMB、Val-Cit-单甲基澳瑞他汀E(MMAE)和细胞***素PSMA-ADC(PSMA-ADC-1301)(抗-PSMA，Val-Cit-MMAE)。
酶促可裂解的接头可包括自消式间隔子，以在空间上将药物与酶促裂解位点分开。药物与肽接头的直接附接可导致药物的氨基酸加合物的蛋白水解释放，从而损害其活性。使用自消式的间隔子允许在酰胺键水解后消除完全活性的化学未修饰的药物。
一种自消式间隔子是双功能对位-氨基苄醇基团，其通过氨基与肽连接，形成酰胺键，而含胺的药物可通过氨基甲酸酯官能团连接至接头的苄基羟基(得到p-酰胺基苄基氨基甲酸酯(PABC))。所得前药在蛋白酶介导的裂解后被激活，导致1,6-消除反应，释放未经修饰的药物、二氧化碳和接头基团的剩余物。以下方案描述了p-氨基苄基氨基甲酸酯的片段化和药物的释放：
其中X-D代表未修饰的药物。
还描述了这种自消式基团的杂环变体。参见美国专利号7,989,434。
在某些实施例中，酶促可裂解的接头是基于β-葡糖醛酸的接头。通过溶酶体酶β-葡糖醛酸糖苷酶裂解β-葡糖苷酸糖苷键可以实现药物的轻松释放。该酶大量存在于溶酶体内，并且在一些肿瘤类型中过表达，而细胞外的酶活性低。基于β-葡糖醛酸的接头可用于避免由于β-葡糖苷酸的亲水性而导致ADC发生聚集的趋势。在某些实施例中，基于β-葡糖醛酸的接头优选作为与疏水性药物连接的ADC的接头。以下方案描述了含有基于β-葡萄糖醛酸的接头的药物和ADC的释放：
已经描述了多种可裂解的基于β-葡萄糖醛酸的接头，用于将诸如澳瑞他汀、喜树碱和多柔比星类似物、CBI小沟结合物和普赛博林(psymberin)等药物与抗体连接(参见Jeffrey等人,2006,Bioconjug.Chem.[生物偶联化学]17:831-840；Jeffrey等人,2007,Bioorg.Med.Chem.Lett.[生物有机化学与医药化学]17:2278-2280；和Jiang等人,2005,J.Am.Chem.Soc.[美国化学学会杂志]127:11254-11255，其各自的内容通过引用并入本文)。所有这些基于β-葡糖醛酸的接头均可用于本文所述的ADC中。在某些实施例中，酶促可裂解的接头是基于β-半乳糖苷的接头。β-半乳糖苷大量存在于溶酶体内，而细胞外的酶活性很低。
此外，含有苯酚基团的Bcl-xL抑制剂可以通过酚羟基氧共价地键合至接头。一个此类接头描述在美国专利申请号2009/0318668中)依赖于一种方法，其中二氨基乙烷“空间连接”与传统的基于“PABO”自身免疫基团一起使用以递送酚。下文使用本公开的Bcl-xL抑制剂示意性地描绘了接头的裂解。
可裂解接头可包括不可裂解的部分或区段，和/或可裂解的区段或部分可包含在否则不可裂解的接头中以使其可裂解。仅举例来说，聚乙二醇(PEG)和相关聚合物可包括聚合物主链中的可裂解基团。例如，聚乙二醇或聚合物接头可包括一个或多个可裂解基团，例如二硫化物、腙或二肽。
可以包括在接头中的其他可降解键包括通过PEG羧酸或激活的PEG羧酸与生物活性剂上的醇基反应形成的酯键，其中这些酯基通常在生理条件下水解以释放生物活性剂。可水解降解的键包括但不限于碳酸酯键；由胺和醛反应得到的亚胺键；通过醇与磷酸基团反应形成的磷酸酯键；作为醛和醇的反应产物的缩醛键；作为甲酸酯和醇的反应产物的原酸酯键；和由亚磷酰胺基团(包括但不限于在聚合物末端)和寡核苷酸的5'羟基形成的寡核苷酸键。
在某些实施例中，接头包含酶促可裂解的肽部分，例如，包含结构式(IVa)、(IVb)、(IVc)、或(IVd)的接头：
或其药学上可接受的盐，其中：
肽代表可被溶酶体酶裂解的肽(示例为N→C，其中肽包括氨基和羧基“末端”)；
T代表包含一个或多个乙二醇单元或亚烷基链或其组合的聚合物；
Ra选自氢、C1-6烷基、SO3H和CH2SO3H；
Ry是氢或C1-4烷基-(O)r-(C1-4亚烷基)s-G1或C1-4烷基-(N)-[(C1-4亚烷基)-G1]2；
Rz是C1-4烷基-(O)r-(C1-4亚烷基)s-G2；
G1是SO3H、CO2H、PEG4-32、或糖部分；
G2是SO3H、CO2H、或PEG4-32部分；
r是0或1；
s是0或1；
p是从0至5的整数；
q是0或1；
x是0或1；
y是0或1；
代表该接头与该Bcl-xL抑制剂的附接点；以及
*代表与该接头其余部分的附接点。
在某些实施例中，接头包含酶促可裂解的肽部分，例如，包含结构式(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd)的接头或其药学上可接受的盐。
在某些实施例中，接头L包含根据结构式IVa或IVb的区段或其药学上可接受的盐。
在某些实施例中，肽选自三肽或二肽。在特定实施例中，二肽选自：Val-Cit；Cit-Val；Ala-Ala；Ala-Cit；Cit-Ala；Asn-Cit；Cit-Asn；Cit-Cit；Val-Glu；Glu-Val；Ser-Cit；Cit-Ser；Lys-Cit；Cit-Lys；Asp-Cit；Cit-Asp；Ala-Val；Val-Ala；Phe-Lys；Lys-Phe；Val-Lys；Lys-Val；Ala-Lys；Lys-Ala；Phe-Cit；Cit-Phe；Leu-Cit；Cit-Leu；Ile-Cit；Cit-Ile；Phe-Arg；Arg-Phe；Cit-Trp；和Trp-Cit，或其药学上可接受的盐。
可以包括在本文描述的ADC中的根据结构式(IVa)的接头的示例性实施例包括以下说明的接头(如所示，这些接头包括适合于将接头与抗体共价连接的基团)：
可以包括在本文描述的ADC中的根据结构式(IVb)、(IVc)、或(IVd)的接头的示例性实施例包括以下说明的接头(如所示，这些接头包括适合于将接头与抗体共价连接的基团)：
在某些实施例中，接头包含酶促可裂解的糖部分，例如，包含结构式(Va)、(Vb)、(Vc)、(Vd)、或(Ve)的接头：
或其药学上可接受的盐，其中：
q是0或1；
r是0或1；
X1是CH2、O或NH；
代表该接头与该药物的附接点；以及
*代表与该接头的其余部分的附接点。
可以包括在本文描述的ADC中的根据结构式(Va)的接头的示例性实施例包括以下说明的接头(如所示，这些接头包括适合于将接头与抗CD98抗体共价连接的基团)：
可以包括在本文描述的ADC中的根据结构式(Vb)的接头的示例性实施例包括以下说明的接头(如所示，这些接头包括适合于将接头与抗CD98抗体共价连接的基团)：
可以包括在本文描述的ADC中的根据结构式(Vc)的接头的示例性实施例包括以下说明的接头(如所示，这些接头包括适合于将接头与抗CD98抗体共价连接的基团)：
可以包括在本文描述的ADC中的根据结构式(Vd)的接头的示例性实施例包括以下说明的接头(如所示，这些接头包括适合于将接头与抗CD98抗体共价连接的基团)：
可以包括在本文描述的ADC中的根据结构式(Ve)的接头的示例性实施例包括以下说明的接头(如所示，这些接头包括适合于将接头与抗CD98抗体共价连接的基团)：
不可裂解的接头
尽管可裂解接头可提供某些优点，但包含本文所述ADC的接头不需要是可裂解的。对于不可裂解接头，药物释放不依赖于血浆和一些细胞质区室之间的差异性质。假定在经由抗原介导的胞吞作用将ADC内化并递送至溶酶体隔室后发生药物释放，其中该抗CD98抗体通过细胞内蛋白降解被降解至氨基酸水平。该过程释放药物衍生物，其由接头共价连接的药物、接头和氨基酸残基形成。来自具有不可裂解接头的偶联物的氨基酸药物代谢物更亲水并且通常膜渗透性更低，与具有可裂解接头的偶联物相比，这导致更少的旁观者效应和更低的非特异性毒性。通常，具有不可裂解接头的ADC比具有可裂解接头的ADC具有更高的循环稳定性。不可裂解的接头可以是亚烷基链，或者可以是天然的聚合物，例如基于聚亚烷基二醇聚合物，酰胺聚合物，或可以包括亚烷基链，聚亚烷基二醇和/或酰胺聚合物的区段。在某些实施例中，接头包含具有从1至6个乙二醇单元的聚乙二醇区段。
已经描述了用于将药物与抗体连接的多种不可裂解的接头。(参见Jeffrey等人,2006,Bioconjug.Chem.[生物偶联化学]17；831-840；Jeffrey等人,2007,Bioorg.Med.Chem.Lett.[生物有机化学与医药化学]17:2278-2280；和Jiang等人,2005,J.Am.Chem.Soc.[美国化学学会杂志]127:11254-11255，其内容通过引用并入本文)。所有这些接头可以包括在本文所述的ADC中。
在某些实施例中，接头是体内不可裂解的，例如是根据结构式(VIa)、(VIb)、(VIc)或(VId)的接头(如所示，这些接头包括适合将接头与抗CD98抗体共价连接的基团)：
或其药学上可接受的盐，其中：
Ra选自氢、烷基、磺酸酯和甲基磺酸酯；
Rx是包含能够将接头与抗体共价连接的官能团的部分；以及
代表该接头与该Bcl-xL抑制剂的附接点；
可以包括在本文描述的ADC中的根据结构式(VIa)-(VId)的接头的示例性实施例包括以下所示的接头(如所示，这些接头包括适合于将该接头与抗CD98抗体共价连接的基团，并且代表与Bcl-xL抑制剂的附接点)：
用于将接头附接至抗CD98抗体的基团
附接基团本质上可以是亲电子的，包括：马来酰亚胺基团、激活的二硫化物、活性酯如NHS酯和HOBt酯、卤代甲酸酯、酰卤、烷基和苄基卤化物如卤代乙酰胺。如下所述，还存在与“自稳定”马来酰亚胺和“桥联二硫化物”相关的新兴技术，其可以根据本公开内容使用。
在下面的示意图中描绘了在抗体偶联条件下自发水解以产生具有改善的稳定性的ADC物质的“自稳定”马来酰亚胺基团的一个实例。参见美国申请公开号2013/0309256，国际申请公开号WO2013/173337，Tumey等人,2014,Bioconjugate Chem.[生物共轭化学]25:1871-1880,andLyon等人,2014,Nat.Biotechnol.[自然生物技术]32:1059-1062.因此，马来酰亚胺附接基团与抗体的巯基反应，得到中间体琥珀酰亚胺环。附接基团的水解形式在血浆蛋白质存在下对去偶联具有抗性。
如上所示，接头的马来酰亚胺环可以与抗体Ab反应，形成琥珀酰亚胺(封闭形式)或琥珀酰胺(开放形式)的共价附接。
Polytherics公开了一种桥联一对巯基的方法，这些巯基衍生自天然铰链二硫键的还原。参见，Badescu等人，2014，Bioconjugate Chem.[生物共轭化学]25：1124-1136。该反应描述于下面的示意图中。该方法的一个优点是能够通过完全还原IgG(得到4对巯基)然后与4当量的烷化剂反应来合成均相DAR4ADC。据称含有“桥联二硫化物”的ADC具有增加的稳定性。
类似地，如下所述，已经开发了能够桥联一对巯基的马来酰亚胺衍生物。参见美国公开申请号2013/0224228。
在某些实施例中，附接部分包含结构式(VIIa)、(VIIb)、或(VIIc)：
或其药学上可接受的盐，其中：
Rq是H或-O-(CH2CH2O)11-CH3；
x是0或1；
y是0或1；
G3是-CH2CH2CH2SO3H或-CH2CH2O-(CH2CH2O)11-CH3；
Rw是-O-CH2CH2SO3H或-NH(CO)-CH2CH2O-(CH2CH2O)12-CH3；以及
*代表与该接头的其余部分的附接点。
在某些实施例中，接头包含根据结构式(VIIIa)、(VIIIb)、或(VIIIc)的区段：
或其水解的衍生物或药学上可接受的盐，其中：
Rq是H或-O-(CH2CH2O)11-CH3；
x是0或1；
y是0或1；
G3是-CH2CH2CH2SO3H或-CH2CH2O-(CH2CH2O)11-CH3；
Rw是-O-CH2CH2SO3H或-NH(CO)-CH2CH2O-(CH2CH2O)12-CH3；
*代表与该接头的其余部分的附接点；以及
代表该接头与该抗体的附接点，其中当处于水解形式时，可以位于其旁的羧酸的α位或β位。
可以包括在本文描述的ADC中的根据结构式(VIIa)和(VIIb)的接头的示例性实施例包括以下说明的接头(如所示，这些接头包括适合于将接头与抗体共价连接的基团)：
可以包括在本文描述的ADC中的根据结构式(VIIc)的接头的示例性实施例包括以下说明的接头(如所示，这些接头包括适合于将接头与抗体共价连接的基团)：
在某些实施例中，L选自下组，该组由以下组成：IVa.1-IVa.8、IVb.1-IVb.19、IVc.1-IVc.7、IVd.1-IVd.4、Va.1-Va.12、Vb.1-Vb.10、Vc.1-Vc.11、Vd.1-Vd.6、Ve.1-Ve.2、VIa.1、VIc.1-V1c.2、VId.1-VId.4、VIIa.1-VIIa.4、VIIb.1-VIIb.8、VIIc.1-VIIc.6，以上各项处于封闭或开放形式。
在某些实施例中，L选自下组，该组由以下组成：IVb.2、IVc.5、IVc.6、IVc.7、IVd.4、Vb.9、Vc.11、VIIa.1、VIIa.3、VIIc.1、VIIc.4、和VIIc.5，其中每个接头的马来酰亚胺与抗体Ab反应，形成呈琥珀酰亚胺(封闭形式)或琥珀酰胺(开放形式)的共价附接。
在某些实施例中，接头L选自下组，该组由以下组成：IVb.2、IVc.5、IVc.6、IVd.4、Vc.11、VIIa.1、VIIa.3、VIIc.1、VIIc.4、VIIc.5，其中每个接头的马来酰亚胺与抗体Ab反应，形成呈琥珀酰亚胺(封闭形式)或琥珀酰胺(开放形式)的共价附接。
在某些实施例中，接头L选自下组，该组由以下组成：IVb.2、Vc.11、VIIa.3、IVc.6、和VIIc.1，其中是与药物D的附接点，并且@是与LK的附接点，其中当该接头处于如以下所示的开放形式时，@可以位于其旁的羧酸的α位或β位：
Bcl-xL接头选择注意事项
如本领域技术人员所知，为特定ADC选择的接头可能受多种因素的影响，包括但不限于与抗体附接的位点(例如，lys、cys或其他氨基酸残基)、药物药效团的结构限制和药物的亲脂性。为ADC选择的特异性接头应寻求平衡特定抗体/药物组合的这些不同因素。关于受ADC中接头选择影响的因素的综述，请参见Nolting,第5章“Linker Technology inAntibody-Drug Conjugates[抗体-药物偶联物中的接头技术]”,在:Antibody-DrugConjugates:Methods in Molecular Biology[抗体-药物偶联物：分子生物学方法],第1045卷,第71-100页,Laurent Ducry(编),Springer Science&Business Medica,LLC[施普林格科学与商业医学有限责任公司],2013。
例如，已经观察到ADC影响存在于抗原阳性肿瘤细胞附近的旁观者抗原阴性细胞的杀伤。ADC对旁观者细胞的杀伤机制表明，在ADC的细胞内加工过程中形成的代谢产物可能起作用。通过抗原阳性细胞中的ADC代谢产生的中性细胞毒性代谢物似乎在旁观者细胞杀伤中起作用，同时可以防止带电的代谢物扩散穿过膜进入培养基，因此不会影响旁观者杀伤。在某些实施例中，选择接头以减弱由ADC的细胞代谢物引起的旁观者杀伤作用。在某些实施例中，选择接头以增加旁观者杀伤效果。
接头的性质也可能在使用和/或储存条件下影响ADC的聚集。通常，文献中报道的ADC每个抗体分子含有不超过3-4个药物分子(参见，例如Chari,2008,Acc Chem Res[化学研究报告]41:98-107)。由于ADC的聚集，试图获得更高的药物-抗体比率(“DAR”)经常失败，特别是如果该药物和接头都是疏水的(King等人,2002,J Med Chem[药物化学杂志]45:4336-4343；Hollander等人,2008,Bioconjugate Chem[生物共轭化学]19:358-361；Burke等人,2009Bioconjugate Chem[生物共轭化学]20:1242-1250)。在许多情况下，高于3-4的DAR作为增加效力的手段是有益的。在Bcl-xL抑制剂本质上是疏水的情况下，希望的是选择相对亲水的接头作为减少ADC聚集的手段，尤其是在希望大于3-4的DARS的情况下。因此，在某些实施例中，接头掺入化学部分，其在储存和/或使用期间减少ADC的聚集。接头可以掺入极性或亲水基团，例如带电基团或在生理pH下变为带电的基团，以减少ADC的聚集。例如，接头可以掺入带电基团，例如在生理pH下去离子化的盐或基团例如羧酸盐或质子化，或质子化的盐或基团例如胺。
已报道可产生高达20的DAR的可用于将许多Bcl-xL抑制剂与抗体连接的示例性多价接头描述于美国专利号8,399,512；美国公开申请号2010/0152725；美国专利号8,524,214；美国专利号8,349,308；美国公开申请号2013/189218；美国公开申请号2014/017265；WO 2014/093379；WO 2014/093394；WO2014/093640，其内容通过引用整体并入本文。
在特定实施例中，如通过尺寸排阻色谱(SEC)测定，在储存或使用期间ADC的聚集少于约40％。在特定实施例中，如尺寸排阻色谱(SEC)测定，ADC在储存或使用期间的聚集少于35％、例如少于约30％、例如少于约25％、例如少于约20％、例如少于约15％、例如少于约10％、例如少于约5％、例如少于约4％、或甚至更少。
III.A.3.Bcl-xL ADC合成子
抗体-药物偶联物合成子是用于形成ADC的合成中间体。这些合成子通常是根据结构式(III)的化合物：
(III) D-L-Rx
或其盐，其中D是如先前所述的Bcl-xL抑制剂，L是如先前所述的接头，并且Rx是适合于将该合成子与抗体连接的反应基团。在特定的实施例中，ADC合成子是根据结构式(IIIa)和(IIIb)的化合物或其盐，其中各种取代基分别如先前对结构式(IIa)和(IIb)所定义，并且L和Rx如对结构式(III)所定义：
为了合成ADC，在功能基团Rx与抗体上的“互补”官能团反应的条件下，使根据结构式(III)的中间体合成子或其盐与目标抗体Fx接触，形成共价键。
基团Rx和Fx的同一性将取决于用于将合成子与抗体连接的化学物质。通常，所用的化学物质不应改变抗体的完整性，例如其结合其靶标的能力。优选地，偶联抗体的结合特性与未偶联抗体的结合特性非常相似。用于将分子与生物分子例如抗体偶联的各种化学物质和技术是本领域已知的，本期特别是与抗体偶联，是众所周知的。参见，例如，Amon等人,“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy[用于癌症治疗中药物免疫靶向的单克隆抗体],”在Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy[单克隆抗体和癌症疗法]中,Reisfeld等人编,Alan R.Liss公司,1985；Hellstrom等人,“Antibodies For Drug Delivery[用于药物递送的抗体]”,在Controlled Drug Delivery[控制药物输送]中,Robinson等人编辑,Marcel Dekker公司,第2版.1987；Thorpe,“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review[细胞毒剂在癌症治疗中的抗体载体：综述],”在Monoclonal Antibodies'84:Biological AndClinical Applications[生物和临床应用]，Pinchera等人(编),1985；“放射性标记抗体在癌症治疗中的治疗用途的分析，结果和未来前景(Analysis,Results,and FutureProspective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody In CancerTherapy)”，在：Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy[用于癌症检测和治疗的单克隆抗体],Baldwin等人,编辑,学术出版社(Academic Press),1985；Thorpe等人,1982,Immunol.Rev.[免疫综述]62:119-58；PCT公开号WO 89/12624。这些化学物质中的任何一种都可用于将合成子与抗体连接。
在一个实施例中，Rx包含能够将该合成子与抗体上的氨基基团连接的官能团。在另一个实施例中，Rx包含NHS-酯或异硫氰酸酯。在另一个实施例中，Rx包含能够将该合成子与抗体上的巯基基团连接的官能团。在另一个实施例中，Rx包含卤代乙酰基或马来酰亚胺。在另一个实施例中，L选自IVa或IVb及其盐；并且Rx包含选自下组的功能基团，该组由以下组成：NHS-酯、异硫氰酸酯、卤代乙酰基和马来酰亚胺。
典型地，将合成子连接至抗体的氨基酸残基的侧链，包括例如易接近的赖氨酸残基的伯氨基基团、或易接近的半胱氨酸残基的巯基基团。通过还原链间二硫键可以获得游离的巯基。
在一个实施例中，LK是与在抗hCD98抗体Ab上的氨基基团形成的键。在另一个实施例中，LK是酰胺或硫脲。在另一个实施例中，LK是与在抗hCD98抗体Ab上的巯基基团形成的键。在另一个实施例中，LK是硫醚。
在一个实施例中，LK选自下组，该组由以下组成：酰胺、硫脲和硫醚；并且m是范围从1至8的整数。
许多官能团Rx和用于将合成子与可接近的赖氨酸残基连接的化学物质是已知的，并且包括例如但不限于NHS-酯和异硫氰酸酯。
许多官能团Rx和用于将合成子连接到半胱氨酸残基的可接近的游离巯基上的化学物质是已知的，并且包括例如但不限于卤代乙酰基和马来酰亚胺。
然而，偶联物质不限于可用的侧链基团。通过将适当的小分子与胺连接，可以将侧链如胺类转化为其他有用的基团，例如羟基。该策略可用于通过将多功能小分子与抗体的可接近的氨基酸残基的侧链偶联来增加抗体上可用的连接位点的数量。然后，将合成子与这些“转化的”官能团共价连接的官能团Rx包括在合成子中。
还可以将抗体工程化以包括用于偶联的氨基酸残基。Axup等人,2003,Proc NatlAcad Sci[美国国家科学院院刊]109:16101-16106和Tian等人,2014,Proc Natl Acad Sci[美国国家科学院院刊]111:1776-1771中描述了用于工程化抗体以包括非遗传编码的氨基酸残基(其可用于在ADC的背景下的偶联药物)的方法，也描述了用于将合成子连接到非编码氨基酸的化学过程和官能团。
可用于制备本文所述的ADC的示例性合成子包括但不限于下表5中列出的以下合成子。
表5
在某些实施例中，合成子选自下组，该组由以下组成：合成子实例2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、2.10、2.11、2.12、2.13、2.14、2.15、2.16、2.17、2.18、2.19、2.20、2.21、2.22、2.23、2.24、2.25、2.26、2.27、2.28、2.29、2.30、2.31、2.34、2.35、2.36、2.37、2.38、2.39、2.40、2.41、2.42、2.43、2.44、2.45、2.46、2.47、2.48、2.49、2.50、2.51、2.52、2.53、2.54、2.55、2.56、2.57、2.58、2.59、2.60、2.61、2.62、2.63、2.64、2.65、2.66、2.67、2.68、2.69、2.70、2.71、2.72、及其药学上可接受的盐。这些合成子的对应化合物名称在以下提供：
N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺；
N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺；
N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺；
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.1～3,7～]癸-1-基}氧基)乙基](氧杂环丁烷-3-基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{[({(2E)-3-[4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-3-({3-[({[(2E)-3-(4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-3-[(3-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}丙酰基)氨基]苯基)丙-2-烯-1-基]氧基}羰基)氨基]丙酰基}氨基)苯基]丙-2-烯-1-基}氧基)羰基](2-甲氧基乙基)氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-羧基ic；
4-[({[2-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-(β-D-吡喃葡糖醛酸基氧基)苯氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-3-{1-[(3-{[34-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3-甲基-4,32-二氧代-7,10,13,16,19,22,25,28-八氧杂-3,31-二氮杂三十四-1-基]氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰-N-{5-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-(β-D-吡喃葡糖醛酸基氧基)苯基}-β-丙氨酰胺；
N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰-N-{5-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-(β-D-吡喃葡糖醛酸基氧基)苯基}-β-丙氨酰胺；
N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酰-N-{5-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-(β-D-吡喃葡糖醛酸基氧基)苯基}-β-丙氨酰胺；
N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-β-丙氨酰-N-{5-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-(β-D-吡喃葡糖醛酸基氧基)苯基}-β-丙氨酰胺；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-β-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[3-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)丙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[3-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)丙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[(3S)-1-{8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-2-[6-羧基-5-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基]-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基}吡咯烷-3-基]氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-L-丙氨酰胺；
N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-氨磺酰基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-(3-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}丙氧基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[3-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)丙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-[4-({[{2-[{8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-2-[6-羧基-5-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基]-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基}(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基甲酰基]氧基}甲基)苯基]-L-丙氨酰胺；
N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-L-丙氨酰胺；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-3-(1-{[3-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基](甲基)氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13 ,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-甲基-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-4-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十九烷-1-基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[4-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)丁基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
2-{6-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]-2-甲基-3,3-二氧化-7-氧代-8-氧杂-3λ6-硫杂-2,6-二氮杂壬烷-9-基}-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-4-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苄基]氧基}羰基)[3-(二甲基氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-氨磺酰基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-4-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苄基]氧基}羰基)[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-4-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苄基]氧基}羰基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-5-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
(6S)-2,6-脱水-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-({N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰}氨基)苯基}乙基)-L-古洛糖酸；
(6S)-2,6-脱水-6-[2-(2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{[N-({(3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-[(2-磺基乙氧基)甲基]吡咯烷-1-基}乙酰基)-L-缬氨酰基-L-丙氨酰]氨基}苯基)乙基]-L-古洛糖酸；
8-[2-({[(3-氨基-3-氧丙基){2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}氨基甲酰基]氧基}甲基)-5-{[(2S)-2-({(2S)-2-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基]-3-甲基丁酰基}氨基)丙酰基]氨基}苯基]-2,6-脱水-7,8-双脱氧-L-甘油-L-古洛糖-辛酸；
4-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13 ,7]癸-1-基)氧基]乙基}[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基甲酰基)氧基]甲基}-3-{3-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基]丙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸；
2,6-脱水-8-(2-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基甲酰基)氧基]甲基}-5-{[(2S)-2-({(2S)-2-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基]-3-甲基丁酰基}氨基)丙酰基]氨基}苯基)-7,8-双脱氧-L-甘油-L-古洛糖-辛酸；
2,6-脱水-8-(2-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基甲酰基)氧基]甲基}-5-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(2-{(3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-[(2-磺基乙氧基)甲基]吡咯烷-1-基}乙酰胺基)-3-甲基丁酰基]氨基}丙酰基]氨基}苯基)-7,8-双脱氧-L-甘油-L-古洛糖-辛酸；
6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-3-[1-({3-[2-({[(4-{[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}-3-甲基丁酰基]氨基}戊酰基]氨基}苯基)甲氧基]羰基}氨基)乙酰胺基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；以及
8-[2-({[(3-氨基-3-氧丙基){2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}氨基甲酰基]氧基}甲基)-5-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(2-{(3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-[(2-磺基乙氧基)甲基]吡咯烷-1-基}乙酰胺基)-3-甲基丁酰基]氨基}丙酰基]氨基}苯基]-2,6-脱水-7,8-双脱氧-L-甘油-L-古洛糖-辛酸。
在某些实施例中，ADC或其药学上可接受的盐包含
D是选自由以下化合物组成的组的Bcl-xL抑制剂，对这些化合物的修饰在于：在对应于#位置的氢不存在，从而形成单价基团：
W3.01、W3.02、W3.03、W3.04、W3.05、W3.06、W3.07、W3.08、W3.09、W3.10、W3.11、W3.12、W3.13、W3.14、W3.15、W3.16、W3.17、W3.18、W3.19、W3.20、W3.21、W3.22、W3.23、W3.24、W3.25、W3.26、W3.27、W3.28、W3.29、W3.30、W3.31、W3.32、W3.33、W3.34、W3.35、W3.36、W3.37、W3.38、W3.39、W3.40、W3.41、W3.42、和W3.43，及其药学上可接受的盐；
L选自下组，该组由以下组成：接头IVa.1-IVa.8、IVb.1-IVb.19、IVc.1-IVc.7、IVd.1-IVd.4、Va.1-Va.12、Vb.1-Vb.10、Vc.1-Vc.11、Vd.1-Vd.6、Ve.1-Ve.2、VIa.1、VIc.1-V1c.2、VId.1-VId.4、VIIa.1-VIIa.4、VIIb.1-VIIb.8、和VIIc.1-VIIc.6，其中每个接头已与该抗体Ab反应形成共价附接；
LK是硫醚；以及
m是范围从1至8的整数。
在某些实施例中，ADC或其药学上可接受的盐
D是选自由以下化合物组成的组的Bcl-xL抑制剂，对这些化合物的修饰在于：在对应于#位置的氢不存在，从而形成单价基团：
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
以及其药学上可接受的盐；
L选自下组，该组由以下组成：接头IVb.2、IVc.5、IVc.6、IVc.7、Vc.11、IVd.4、Vb.9、Vc.11、VIIa.1、VIIa.3、VIIc.1、VIIc.4、和VIIc.5(处于封闭或开放形式)，及其药学上可接受的盐；
LK是硫醚；以及
m是范围从2至4的整数。
为了形成ADC，合成子(例如，表5中列出的合成子)的马来酰亚胺环可以与抗体Ab反应，形成呈琥珀酰亚胺(封闭形式)或琥珀酰胺(开放形式)的共价附接。类似地，其他官能团(例如，乙酰卤或乙烯基砜)可与抗体Ab反应，形成共价附接。
在某些实施例中,ADC或其药学上可接受的盐选自由以下组成的组：huAb102-ZT、huAb102-ZZ、huAb102-XW、huAb102-SE、huAb3102-SR、huAb102-YG、huAb102-KZ、huAb104-ZT、huAb104-ZZ、huAb104-XW、huAb104-SE、huAb104-SR、huAb104-YG、huAb104-KZ、huAb108-ZT、huAb108--ZZ、huAb108--XW、huAb108--SE、huAb108--SR、huAb108--YG、huAb108—KZ、huAb110-ZT、hu110-ZZ、huAb110-XW、huAb110-SE、huAb3110-SR、huAb110-YG、and huAb110-KZ，其中ZT、ZZ、XW、SE、SR、和YG是表5中披露的合成子，并且其中这些合成子处于开放或封闭形式。
在某些实施例中，ADC或其药学上可接受的盐是
其中m是从1到6的整数。在特定的实施例中，m是从2至6的整数。
在一个实施例中，ADC或其药学上可接受的盐是
其中m是2，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb102的重链和轻链CDR。
在一个实施例中，ADC或其药学上可接受的盐是
其中m是2，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb104的重链和轻链CDR。
在一个实施例中，ADC或其药学上可接受的盐是
其中m是2，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb108的重链和轻链CDR。
在一个实施例中，ADC或其药学上可接受的盐是
其中m是2，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb110的重链和轻链CDR。
在一个实施例中，ADC或其药学上可接受的盐是
其中m是2，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb102的重链和轻链CDR。
在一个实施例中，ADC或其药学上可接受的盐是
其中m是2，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb104的重链和轻链CDR。
在一个实施例中，ADC或其药学上可接受的盐是
其中m是2，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb108的重链和轻链CDR。
在一个实施例中，ADC或其药学上可接受的盐是
其中m是2，Ab是抗hCD98抗体，其中该抗hCD98抗体包含huAb110的重链和轻链CDR。
III.A.4.Bcl-xL ADC的合成方法
本文所述的Bcl-xL抑制剂和合成子可使用标准的已知有机化学技术合成。下面提供了合成Bcl-xL抑制剂和合成子的一般方案，其可以原样使用或修饰以合成本文所述的全范围的Bcl-xL抑制剂和合成子。在实施例部分中提供了用于合成可用于指导的示例性Bcl-xL抑制剂和合成子的具体方法。
同样可以通过标准方法制备ADC，例如类似方法描述于Hamblett等人.,2004,“Effects of Drug Loading on the Antitumor Activity of a Monoclonal AntibodyDrug Conjugate[载药对单克隆抗体药物偶联物抗肿瘤活性的影响]”,Clin.Cancer Res.[临床癌症研究]10:7063-7070；Doronina等人,2003,“Development of potent andhighly efficacious monoclonal antibody auristatin conjugates for cancertherapy[开发用于癌症治疗的有效且高效的单克隆抗体澳瑞他汀偶联物],”Nat.Biotechnol.[自然生物技术]21(7):778-784；和Francisco等人,2003,“cAClO-vcMMAE,an anti-CD30-monomethylauristatin E conjugate with potent andselective antitumor activity[cAClO-vcMMAE，一种具有强效和选择性抗肿瘤活性的抗CD30-单甲基澳瑞他汀E偶联物],”Blood[血液]102:1458-1465。例如，每个抗体含有四个药物的ADC可以通过以下来制备：用过量的还原剂如DTT或TCEP在37℃下部分还原抗体30分钟，然后用含有在DPBS中的1mM DTPA洗脱通过G-25树脂来交换缓冲液。用另外的DPBS稀释洗脱液，并且可以使用5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)[Ellman试剂]测量抗体的硫醇浓度。在4℃，添加过量(例如5倍)的接头-药物合成子持续1小时，并且该偶联反应可以通过添加大量过量(例如20倍)的半胱氨酸来猝灭。得到的ADC混合物可以在PBS中平衡的SEPHADEX G-25上纯化以除去未反应的合成子，如果需要，脱盐，并通过尺寸排阻色谱纯化。然后可以对所得ADC进行无菌过滤，例如，通过0.2μm过滤器，并冻干(如果对于储存是所需的)。在某些实施例中，所有链间半胱氨酸二硫键被接头-药物偶联物替代。一个实施例涉及制备ADC的方法，该方法包括在本文所述的合成子与抗体共价连接的条件下，使该合成子与抗体接触。
在实施例部分中提供了用于合成可用于合成本文所述的全范围ADC的示例性ADC的具体方法。
III.A.5.合成Bcl-xL抑制剂的通用方法
在以下方案中，各种取代基Ar1、Ar2、Z1、R4、R10、R11a和R11b如具体实施方式部分中所定义。
5.1.1化合物(9)的合成
化合物(9)的合成描述于方案1中。可以用BH3·THF处理化合物(1)以提供化合物(2)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中，在环境温度下进行该反应。可以在氰基亚甲基三丁基磷烷存在下用处理化合物(2)来制备化合物(3)。典型地，在溶剂(例如但不限于甲苯)中，在高温下进行该反应。可以在碱(例如但不限于三乙胺)存在下，用乙烷-1,2-二醇处理化合物(3)来提供化合物(4)。该反应典型地在升高的温度下进行，并且该反应可以在微波条件下进行。可以用强碱(例如但不限于正丁基锂)处理化合物(4)，然后添加碘代甲烷，以提供化合物(5)。该添加和反应典型地在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中、在降低的温度下进行，之后升温至环境温度进行加工。可以用N-碘代丁二酰亚胺处理化合物(5)以提供化合物(6)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。可以通过在碱(例如但不限于三乙胺)的存在下使化合物(6)与甲磺酰氯反应，接着添加NHR4来制备化合物(7)。与甲磺酰氯的反应典型地在低温进行，然后升高与NHR4反应的温度，并且该反应典型地在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中进行。可以在4-二甲基氨基吡啶的存在下使化合物(7)与二-叔丁基二碳酸酯反应以提供化合物(8)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中，在环境温度下进行该反应。可以在本文所述并且在文献中容易获得的条件下硼化化合物(8)以提供化合物(9)。
5.1.2.化合物(12)的合成
方案2
中间体(12)的合成描述于方案2中。可以在ZnCl2·Et2O或N,N'-偶氮异丁腈(AIBN)存在下用三-正-丁基-烯丙基锡烷处理化合物(3)，以提供化合物(10)(Yamamoto等人,1998,Heterocycles[杂环]47:765-780)。典型地，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中，在-78℃进行该反应。可以在本领域已知的用于硼氢化反应/氧化的标准条件下处理化合物(10)以提供化合物(11)。例如，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中用试剂(例如BH3·THF)处理化合物(10)，接着在碱(例如但不限于氢氧化钠)存在下用氧化剂(例如但不限于过氧化氢)处理中间体烷基硼烷加合物将提供化合物(11)(Brown等人,1968,J.Am.Chem.Soc.[美国化学会],86:397)。典型地，在升温至环境温度之前，在低温下进行BH3·THF的添加，然后添加过氧化氢和氢氧化钠以产生醇产物。如先前针对化合物(9)所述，可以根据方案1生成化合物(12)。
5.1.3.化合物(15)的合成
中间体(15)的合成描述于方案3中。化合物(3)可以在乙酸和48％水性HBr溶液的溶剂混合物中在100℃下与硫脲反应，得到中间体，该中间体随后可以在溶剂混合物(例如但不限于，在水中的20％v/v乙醇)中用氢氧化钠处理，以提供化合物(13)。可以在碱(例如但不限于乙醇钠)存在下，使化合物(13)与2-氯乙醇反应以提供化合物(14)。典型地，在溶剂(例如但不限于乙醇)中，在环境或升高的温度下进行该反应。如先前针对化合物(9)所述，可以根据方案1生成化合物(15)。
5.1.4.化合物(22)的合成
化合物(22)的合成描述于方案4中。可以在碱(例如但不限于碳酸钾)存在下，使化合物(16)与碘代甲烷反应以提供化合物(17)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境或升高的温度下进行该反应。化合物(17)可以在光化学条件下与甲苯磺酰氰化物在二苯甲酮存在下反应以提供化合物(18)(参见Kamijo等人,Org.Lett.[有机快报],2011,13:5928-5931)。典型地，使用Riko 100W中压汞灯作为光源，在环境温度下、在溶剂(例如但不限于乙腈或苯)中进行该反应。可以在溶剂***(例如但不限于水和四氢呋喃或水与甲醇的混合物)中，使化合物(18)与氢氧化锂反应以提供化合物(19)。可以用BH3·THF处理化合物(19)以提供化合物(20)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中，在环境温度下进行该反应。可以在氰基亚甲基三丁基磷烷存在下用处理化合物(20)来制备化合物(21)。典型地，在溶剂(例如但不限于甲苯)中，在高温下进行该反应。可以用N-碘代丁二酰亚胺处理化合物(21)以提供化合物(22)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。
5.1.5.化合物(24)的合成
方案5
化合物(24)的合成描述于方案5中。可以用还原剂(例如但不限于氢化铝锂)在溶剂(例如但不限于二***或四氢呋喃)中处理化合物(22)以提供化合物(23)。通常，在升温至环境温度或高温之前，反应在0℃下进行。可以使化合物(23)在本文或文献中所述的标准条件下与二碳酸二叔丁酯反应，以提供化合物(24)。
5.1.6.化合物(24a)的合成
方案6
中间体(24a)的合成描述于方案6中。可以使用文献中描述的条件水解化合物(22a)，以提供化合物(23a)。典型地，该反应是在氢氧化钾存在下，在溶剂(例如但不限于乙二醇)中、在升高的温度下进行(参见Roberts等人,1994,J.Org.Chem.[有机化学杂志],1994,59:6464-6469；Yang等人,2013,Org.Lett.[有机化学通讯],15:690-693)。化合物(24a)可以从化合物(23a)通过库尔修斯(Curtius)重排使用文献中所述的条件制备。例如，化合物(23a)可以在四丁基溴化铵、三氟甲磺酸锌(II)和二碳酸二叔丁酯存在下与叠氮化钠反应，得到化合物(24a)(参见Lebel等人,Org.Lett.[有机快报],2005,7:4107-4110)。典型地，在溶剂(如但不限于四氢呋喃)中，在高温(优选地从40℃-50℃)进行该反应。
5.1.7.化合物(29)的合成
方案7
方案7描述了金刚烷环取代基的官能化。二甲基亚砜可以在碱(例如但不限于三乙胺)的存在下与草酰氯反应，接着添加化合物(25)，以提供化合物(26)。典型地，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中，在低温度进行该反应。化合物(27)可以与化合物(26)反应，接着用硼氢化钠处理，以提供化合物(28)。典型地，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷、甲醇、或其混合物)中，在环境温度进行该反应。在N,N-二甲基吡啶-4-胺的存在下，通过使化合物(28)与二-叔丁基二碳酸酯反应来制备化合物(29)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中，在环境温度下进行该反应。
5.1.8.化合物(35)的合成
方案8
如方案8中所示，化合物(30)可以在本文所述并且在文献中容易获得的铃木偶联条件下与化合物(31)反应，以提供化合物(32)。化合物(34)可以通过在本文所述并且在文献中容易获得的条件下使化合物(32)与化合物(33)反应来制备。可以通过用酸(例如但不限于三氟乙酸)来处理化合物(34)来制备化合物(35)。典型地，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中，在环境温度进行该反应。
5.1.9.化合物(43)的合成
方案9
方案9描述了取代的1,2,3,4-四氢异喹啉中间体的合成。三甲基硅烷甲腈可以用四丁基氟化铵处理并然后与化合物(36)反应，其中X是Br或I，以提供化合物(37)。这些添加通常在溶剂(例如但不限于四氢呋喃、乙腈、或其混合物)中在环境温度进行，然后加热至高温。可以用硼烷处理化合物(37)以提供化合物(38)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中，在环境温度下进行该反应。可以通过在碱(例如但不限于三乙胺)的存在下用三氟乙酸酐处理化合物(38)来制备化合物(39)。最初，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中，在温至环境温度前在低温进行该反应。可以在硫磺酸存在下用多聚甲醛处理化合物(39)，以提供化合物(40)。典型地在环境温度下进行该反应。可以通过使化合物(40)与二氰基锌在催化剂(例如但不限于四(三苯基膦)钯(0))存在下反应来制备化合物(41)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在氮气氛下在高温进行该反应。可以用碳酸钾处理化合物(41)以提供化合物(42)。典型地，在溶剂(例如但不限于甲醇、四氢呋喃、水、或其混合物)中，在环境温度进行该反应。
5.1.10化合物(47)的合成
方案10
如方案10中所示，可以通过使化合物(43)与叔丁基3-溴-6-氟吡啶甲酸酯(44)在碱(例如但不限于N,N-二异丙基乙胺或三乙胺)存在下反应来制备化合物(45)。典型地，在溶剂(例如但不限于二甲基亚砜)中，在高温在惰性气氛下进行该反应。可以使化合物(45)在本文所述的或文献中的硼化条件下与4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(46)反应，以提供化合物(47)。
5.1.11.化合物(53)的合成
方案11
方案11描述了任选地取代的1,2,3,4-四氢异喹啉Bcl-xL抑制剂的合成。可以通过使化合物(45)与频哪醇硼烷在碱(例如但不限于三乙胺)和催化剂(例如但不限于[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II))存在下反应来制备化合物(47)。典型地，在溶剂(例如但不限于乙腈)中，在高温下进行该反应。化合物(50)可以通过在本文所述并且在文献中容易获得的铃木偶联条件下使化合物(47)与化合物(8)反应来制备。可以用氢氧化锂处理化合物(50)以提供化合物(51)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃、甲醇、水、或其混合物)中，在环境温度进行该反应。可以使化合物(51)在本文所述并且在文献中容易获得的酰胺化条件下与化合物(33)反应，以提供化合物(52)。可以通过用酸(例如但不限于三氟乙酸)来处理化合物(52)来制备化合物(53)。典型地，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中，在环境温度进行该反应。
5.1.12.化合物(66)的合成
方案12描述了5-甲氧基1,2,3,4-四氢异喹啉Bcl-xL抑制剂的合成。可以通过用N-溴代丁二酰亚胺处理叔丁基5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯来制备叔丁基8-溴-5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(54)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。可以在碱(例如但不限于碳酸钾)的存在下，用苄基溴(55)处理丁基8-溴-5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(54)以提供叔丁基5-(苄氧基)-8-溴-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(56)。典型地，在溶剂(例如但不限于丙酮)中，在高温下进行该反应。可以在甲醇和碱(例如但不限于三乙胺)以及催化剂(例如但不限于[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II))存在下，用一氧化碳处理叔丁基5-(苄氧基)-8-溴-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(56)以提供2-叔丁基8-甲基5-(苄氧基)-3,4-二氢异喹啉-2,8(1H)-二甲酸酯(57)。典型地，在高温下进行该反应。可以通过用盐酸处理2-叔丁基8-甲基5-(苄氧基)-3,4-二氢异喹啉-2,8(1H)-二甲酸酯(57)来制备甲基5-(苄氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯(58)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃、二噁烷、或其混合物)中，在环境温度进行该反应。可以在碱(例如但不限于三乙胺)存在下使甲基5-(苄氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯(58)与叔丁基3-溴-6-氟吡啶甲酸酯(44)反应以提供甲基5-(苄氧基)-2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯(59)。典型地，在溶剂(例如但不限于二甲基亚砜)中，在高温下进行该反应。甲基5-(苄氧基)-2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯(59)可以在本文所述并且在文献中容易获得的铃木偶联条件下与化合物(60)反应(其中Ad是该披露的化合物(例如，式(IIa)和(IIb)的化合物)的甲基金刚烷部分)以提供化合物(61)。可以在氢氧化钯存在下用氢气处理化合物(61)以提供化合物(62)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中，在高温下进行该反应。可以通过使化合物(62)与(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷反应来制备化合物(63)。典型地，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷、甲醇、二***或其混合物)中，在环境温度进行该反应。可以用氢氧化锂处理化合物(63)以提供化合物(64)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃、甲醇、水、或其混合物)中，在环境温度进行该反应。可以使化合物(64)在本文所述并且在文献中容易获得的酰胺化条件下与化合物(33)反应，以提供化合物(65)。可以通过用盐酸处理化合物(65)来制备化合物(66)。典型地，在溶剂(例如但不限于二噁烷)中，在环境温度进行该反应。
5.2合成合成子的通用方法
在以下方案中，各种取代基Ar1、Ar2、Z1、R4、R11a和R11b如具体实施方式部分中所定义。
如在方案13中所示，可以在本文描述的或文献中容易获得的酰胺化条件下，使式(77)的化合物(其中PG是适当的碱不稳定的保护基团，并且AA(2)是Cit、Ala、或Lys)与4-(氨基苯基)甲醇(78)反应以提供化合物(79)。化合物(80)可以通过使化合物(79)与碱(例如但不限于二乙胺)反应来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。可以在本文描述的或文献中容易获得的酰胺化条件下，使化合物(81)(其中PG是适当的碱或酸不稳定的保护基团，并且AA(1)是Val、或Phe)与化合物(80)反应以提供化合物(82)。化合物(83)可以通过适当地用二乙胺或三氟乙酸处理化合物(82)来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中，在环境温度进行该反应。化合物(84)(其中Sp是间隔子)可以与化合物(83)反应，以提供化合物(85)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。化合物(85)可以在碱(例如但不限于N,N-二异丙基乙胺)存在下与双(4-硝基苯基)碳酸酯(86)反应，以提供化合物(87)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。可以在碱(例如但不限于N,N-二异丙基乙胺)存在下，使化合物(87)与式(88)的化合物反应以提供化合物(89)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。
方案14描述了对二肽合成子的可替代的mAb-接头附接的安装。其中在碱(如但不限于N-乙基-N-异丙基丙-2-胺)的存在下，化合物(88)可以与化合物(90)反应以提供化合物(91)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。可以通过使化合物(91)与二乙胺反应来制备化合物(92)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。可以使化合物(93)(其中X1是Cl、Br、或I)在本文所述或在文献中容易获得的酰胺化条件下与化合物(92)反应，以提供化合物(94)。可以使化合物(92)在本文所述或在文献中容易获得的酰胺化条件下与式(95)的化合物反应，以提供化合物(96)。
方案15描述了乙烯基葡糖苷酸接头中间体和合成子的合成。(2R,3R,4S,5S,6S)-2-溴-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(97)可以用银氧化物处理，然后用4-溴-2-硝基苯酚(98)处理，以提供(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-溴-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(99)。典型地，在溶剂(例如但不限于乙腈)中，在环境温度下进行该反应。在碱(如但不限于碳酸钠)、和催化剂(如但不限于三(二苯亚甲基丙酮)二钯(Pd2(dba)3))的存在下，可以使(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-溴-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(99)与(E)-叔丁基二甲基((3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)烯丙基)氧基)硅烷(100)反应以提供(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((E)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙-1-烯-1-基)-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(101)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中，在高温下进行该反应。在酸(如但不限于盐酸)存在下，(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-氨基-4-((E)-3-羟基丙-1-烯-1-基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(102)可以通过(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((E)-3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙-1-烯-1-基)-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(101)与锌发生反应来制备。典型地，在溶剂(如但不限于四氢呋喃、水或其混合物)中升温至环境温度之间在低温下进行添加。在碱(如但不限于N,N-二异丙基乙胺)存在下，(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-氨基-4-((E)-3-羟基丙-1-烯-1-基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(102)可以与(9H-芴-9-基)甲基(3-氯-3-氧代丙基)氨基甲酸酯(103)反应，以提供(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-((E)-3-羟基丙-1-烯-1-基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(104)。典型地，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中，在温至环境温度前在低温进行添加。在碱(如但不限于N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺)存在下，化合物(88)可以与(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-((E)-3-羟基丙-1-烯-1-基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(104)反应，然后在碱(如但不限于N,N-二异丙基乙胺)存在下进行处理并与化合物(105)反应，以提供化合物(106)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。
5.2.4.化合物(115)的合成
方案16描述了代表性2-醚葡糖苷酸接头中间体和合成子的合成。在碳酸银存在下，(2S,3R,4S,5S,6S)-2-溴-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(97)可以与2,4-二羟基苯甲醛(107)反应，以提供(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-甲酰基-3-羟基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(108)。典型地，在溶剂(例如但不限于乙腈)中，在高温下进行该反应。(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-甲酰基-3-羟基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(108)可以用硼氢化钠处理，以提供(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-羟基-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(109)。典型地，在溶剂(如但不限于四氢呋喃、甲醇或其混合物)中升温至环境温度之间在低温下进行添加。(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-羟基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(110)可以在咪唑存在下使(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-羟基-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(109)与叔-丁基二甲基甲硅烷基氯反应来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中，在低温度进行该反应。在三苯基膦和偶氮二甲酯(例如但不限于二-叔-丁基二氮烯-1,2-二甲酸酯)存在下，(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(111)可以通过(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-羟基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(110)与(9H-芴-9-基)甲基(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基甲酸酯发生反应来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于甲苯)中，在环境温度下进行该反应。(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(111)可以用乙酸处理，以提供(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(112)。典型地，在溶剂(例如但不限于水、四氢呋喃或其混合物)中在环境温度下进行该反应。可以通过在碱(例如但不限于N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺)存在下，使(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(91)与双(4-硝基苯基)碳酸酯反应来制备(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(113)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。在碱(包括但不限于N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺)存在下，(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(113)可以用化合物(88)来处理，然后用氢氧化锂处理，以提供化合物(114)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、甲醇或其混合物)中在环境温度下进行该反应。在碱(例如但不限于N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺)存在下，化合物(115)可以通过化合物(114)与化合物(84)反应来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。
5.2.5.化合物(119)的合成
方案17描述了将第二增溶基团引入糖接头中。可以使化合物(116)在本文所述或在文献中容易获得的酰胺化条件下与(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-磺基丙酸(117)反应，随后用碱(例如但不限于二乙胺)处理，以提供化合物(118)。可以使化合物(118)在本文所述或在文献中容易获得的酰胺化条件下与化合物(84)(其中Sp是间隔子)反应，以提供化合物(119)。
5.2.6.化合物(129)的合成
方案18
方案18描述了4-醚葡糖苷酸接头中间体和合成子的合成。在碱(包括但不限于碳酸钾)存在下，4-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)-2-羟基苯甲醛(122)可以通过2,4-二羟基苯甲醛(120)与1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(121)反应来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于乙腈)中，在高温下进行该反应。4-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)-2-羟基苯甲醛(122)可以用钠叠氮化物处理，以提供4-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-2-羟基苯甲醛(123)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。在氧化银存在下，(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-2-甲酰基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(125)可以通过4-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-2-羟基苯甲醛(123)与(3R,4S,5S,6S)-2-溴-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(124)反应来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于乙腈)中，在环境温度下进行该反应。在Pd/C存在下，氢化(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-2-甲酰基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(125)将提供(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(126)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中，在环境温度下进行该反应。在碱(包括但不限于N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺)存在下，(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-2-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(127)可以通过用(9H-芴-9-基)甲基氯甲酸酯处理(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(126)来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中，在低温度进行该反应。在碱(如但不限于N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺)存在下，化合物(88)可以与(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-2-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(127)反应，然后用氢氧化锂处理，以提供化合物(128)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在低温进行该反应。在碱(例如但不限于N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺)存在下，化合物(129)可以通过化合物(128)与化合物(84)反应来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。
5.2.7.化合物(139)的合成
方案19
方案19描述了氨基甲酸酯葡糖苷酸中间体和合成子的合成。可以用氢化钠处理2-氨基-5-(羟甲基)苯酚(130)，然后与2-(2-叠氮乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(131)反应以提供(4-氨基-3-(2-(2-叠氮乙氧基)乙氧基)苯基)甲醇(132)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在高温进行该反应。在咪唑存在下，2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-4-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯胺(133)可以通过(4-氨基-3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)苯基)甲醇(132)与叔-丁基二甲基氯硅烷反应来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中，在环境温度下进行该反应。在碱(如但不限于三乙胺)的存在下，可以用光气处理2-(2-(2-叠氮乙氧基)乙氧基)-4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯胺(133)，随后在碱(如但不限于三乙胺)的存在下，与(3R,4S,5S,6S)-2-羟基-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(134)反应以提供(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-叠氮乙氧基)乙氧基)-4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)氨基甲酰基)氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(135)。该反应通常在溶剂中进行，例如但不限于甲苯，并且添加通常在低温下进行，然后在光气加入后升温至环境温度并在添加(3R,4S,5S,6S)-2-羟基-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(134)之后在高温下加热。(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-4-(羟甲基)苯基)氨基甲酰基)氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(136)可以通过2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-4-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)氨基甲酰基)氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(135)与p-甲苯磺酸单水合物反应来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于甲醇)中，在环境温度下进行该反应。在碱(如但不限于N,N-二异丙基乙胺)存在下，(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-4-(羟甲基)苯基)氨基甲酰基)氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(136)可以与双(4-硝基苯基)碳酸酯反应，以提供(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基甲酰基)氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(137)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。在碱(如但不限于N,N-二异丙基乙胺)存在下，(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基甲酰基)氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(137)可以与化合物反应，然后用水性氢氧化锂处理，以提供化合物(138)。第一步通常在环境温度下在溶剂中进行，例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺，并且第二步通常在低温下在溶剂中进行，例如但不限于甲醇。化合物(138)可以用三(2-羧乙基)膦盐酸盐处理，然后在碱(例如但不限于N,N-二异丙基乙胺)存在下与化合物(84)反应，以提供化合物(139)。与三(2-羧乙基)膦盐酸盐的反应通常在环境温度下在溶剂中进行，所述溶剂例如但不限于四氢呋喃、水或其混合物，并且与N-琥珀酰亚胺基6-马来酰亚胺基己酸酯的反应通常在环境温度下在溶剂中进行，所述溶剂例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺。
方案20描述了半乳糖苷接头中间体和合成子的合成。可以在乙酸中用HBr处理(2S,3R,4S,5S,6R)-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四基四乙酸酯(140)，以提供(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-溴四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(141)。该反应通常在环境温度和氮气氛下进行。在4-羟基-3-硝基苯甲醛(142)存在下，(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(4-甲酰基-2-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(143)可以通过用氧化银(I)处理(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-溴四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(141)来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于乙腈)中，在环境温度下进行该反应。(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(4-甲酰基-2-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(143)可以用硼氢化钠处理，以提供(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(4-(羟甲基)-2-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(144)。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃、甲醇、或其混合物)中，在低温进行该反应。在盐酸存在下，(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(2-氨基-4-(羟甲基)苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(145)可以通过用锌处理(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(4-(羟甲基)-2-硝基苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(144)来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中，在低温、氮气环境下进行该反应。在碱(包括但不限于N,N-二异丙基乙胺)存在下，(2S,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(146)可以通过(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-(2-氨基-4-(羟甲基)苯氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(145)与(9H-芴-9-基)甲基(3-氯-3-氧代丙基)氨基甲酸酯(103)反应来制备。典型地，在溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中，在低温度进行该反应。在碱(如但不限于N,N-二异丙基乙胺存在下，(2S,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(146)可以与双(4-硝基苯基)碳酸酯反应，以提供(2S,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(147)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在低温进行该反应。在碱(如但不限于N,N-二异丙基乙胺)存在下，(2S,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(147)可以与化合物(88)反应，然后用氢氧化锂处理，以提供化合物(148)。第一步通常在低温下在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中进行，并且第二步通常在环境温度下在溶剂(例如但不限于甲醇)中进行。在碱(例如但不限于N,N-二异丙基乙胺)的存在下，化合物(148)可以用化合物(84)(其中Sp是间隔子)处理，以提供化合物(149)。典型地，在溶剂(例如但不限于N,N-二甲基甲酰胺)中，在环境温度进行该反应。
III.6合成抗CD98 ADC的通用方法
本发明还公开了制备根据结构式(I)的抗CD98 ADC的方法：
其中D、L、LK、Ab和m如具体实施方式中所定义。该方法包括：
将水溶液中的抗体用有效量的二硫化物还原剂在30℃-40℃处理至少15分钟，并且然后将该抗体溶液冷却至20℃-27℃；
向该还原的抗体溶液中添加水/二甲基亚砜溶液，该溶液包含选自2.1至2.31和2.34至2.72的组的合成子(表5)；
将该溶液的pH调节为pH 7.5至8.5；以及
允许该反应运行48至80小时，以形成ADC；
其中如通过电喷雾质谱法测量的，对于琥珀酰亚胺每次水解为琥珀酰胺，质量偏移18±2amu；以及
其中任选地将该ADC通过疏水作用色谱纯化。
在某些实施例中，Ab是CD98抗体，其中该CD98抗体包含huAb102、huAb014、huAb108、或huAb110的重链和轻链CDR；
本发明还涉及通过上述方法制备的抗CD98 ADC。
在一个实施例中，在药物-接头合成子通过如式(IId)或(IIe)中所示马来酰亚胺部分共价连接至抗体(其连接在肿瘤细胞上表达的hCD98细胞表面受体或肿瘤相关抗原)的条件下，通过使该抗体与该药物-接头合成子接触来形成本申请中披露的抗CD98 ADC，
其中D是根据如上所述的结构式(IIa)或(IIb)的Bcl-xL抑制剂药物，并且L1是如下接头的部分，该接头不是由在该合成子与该抗体附接后的马来酰亚胺形成的；并且其中该药物-接头合成子选自下组，该组由以下组成：合成子实例2.1至2.31和2.34至2.72(表5)，或其药学上可接受的盐。
在某些实施例中，接触步骤在使得抗CD98 ADC具有的2、3或4的DAR的条件下进行。
III.B.抗CD98 ADC：用于偶联的其他示例性药物
抗CD98抗体可用于ADC中以将一种或多种药物靶向目标细胞(例如，表达CD98的癌细胞)。本发明的抗CD98 ADC提供靶向治疗，例如当一种或多种药物递送至特定细胞时，其可以减少抗癌疗法中常见的副作用。
奥瑞他汀
本发明的抗CD98抗体，例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110抗体，可以与至少一个澳瑞他汀偶联。澳瑞他汀代表一组多拉司他汀类似物，其通常通过干扰微管动力学和GTP水解从而抑制细胞***来显示具有抗癌活性。例如，澳瑞他汀E(美国专利号5,635,483)是海洋天然产物多拉司他汀10的合成类似物，其是通过与抗癌药物长春新碱结合到微管蛋白上的相同位点来抑制微管蛋白聚合的化合物(G.R.Pettit,Prog.Chem.Org.Nat.Prod[自然产物的有机化学进程],70:1-79(1997))。多拉司他汀10，澳瑞他汀PE和澳瑞他汀E是具有四个氨基酸的线性肽，其中三个氨基酸是多拉司他汀类化合物所独有的。有丝***抑制剂的澳瑞他汀子类的示例性实施例包括但不限于单甲基澳瑞他汀D(MMAD或澳瑞他汀D衍生物)、单甲基澳瑞他汀E(MMAE或澳瑞他汀E衍生物)、单甲基澳瑞他汀F(MMAF或澳瑞他汀F衍生物)、澳瑞他汀F苯二胺(AFP)、澳瑞他汀EB(AEB)、澳瑞他汀EFP(AEFP)和5-苯甲酰基戊酸-AE酯(AEVB)。奥瑞他汀衍生物的合成和结构描述于美国专利申请公开号2003-0083263、2005-0238649和2005-0009751；国际专利公开号WO 04/010957，国际专利公开号WO 02/088172和美国专利号6,323,315；6,239,104；6,034,065；5,780,588；5,665,860；5,663,149；5,635,483；5,599,902；5,554,725；5,530,097；5,521,284；5,504,191；5,410,024；5,138,036；5,076,973；4,986,988；4,978,744；4,879,278；4,816,444；和4,486,414，其每一个都通过引用结合到本文中。
在一个实施例中，本发明的抗CD98抗体例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110与至少一种MMAE(单甲基奥瑞他汀E)偶联。单甲基澳瑞他汀E(MMAE，维多汀(vedotin))通过阻断微管蛋白的聚合来抑制细胞***。然而，由于其超强毒性，澳瑞他汀E本身不能用作药物。澳瑞他汀E可以与识别癌细胞中特定标志物表达的单克隆抗体(mAb)连接，并将MMAE导向癌细胞。在一个实施例中，将MMAE连接至抗CD98抗体的接头在细胞外液(即，即细胞外部的培养基或环境)中是稳定的，但是一旦ADC结合特定癌细胞抗原并进入癌细胞就被组织蛋白酶裂解，从而释放出毒性MMAE并激活有效的抗有丝***机制。
在一个实施例中，本文所述的抗CD98抗体例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110与至少一个MMAF(单甲基尿嘧啶F)偶联。单甲基澳瑞他汀F(MMAF)通过阻断微管蛋白的聚合来抑制细胞***。它具有带电的C-末端苯丙氨酸残基，与其不带电荷的对应物MMAE相比，其细胞毒活性较弱。然而，由于其超强毒性，澳瑞他汀F本身不能用作药物，但可以与将其引导至癌细胞的单克隆抗体(mAb)连接。在一个实施例中，抗CD98抗体的接头在细胞外液中是稳定的，但一旦偶联物进入肿瘤细胞就被组织蛋白酶裂解，从而激活抗有丝***机制。
MMAF和MMAE的结构如下。
图3中还提供了huAb102、huAb104、huAb108或huAb110-vcMMAE的实例。值得注意的是，图3描述了抗体(例如，huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)与单一药物偶联并因此具有1的DAR的情况。在某些实施例中，ADC的DAR为2至8，或者可替代地，2至4。
用于偶联的其他药物
可以在ADC中使用的药物的实例(即可以与本发明的抗CD98抗体偶联的药物)提供如下并且包括有丝***抑制剂、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂、基因治疗载体、烷化剂、抗血管生成剂、抗代谢物、含硼剂、化学保护剂、激素试剂、糖皮质激素、光活性治疗剂、寡核苷酸、放射性同位素、放射增敏剂、拓扑异构酶抑制剂、激酶抑制剂及其组合。
1.有丝***抑制剂
在一个方面，抗CD98抗体可以与一种或多种有丝***抑制剂偶联以形成用于治疗癌症的ADC。如本文所用，术语“有丝***抑制剂”是指阻断有丝***或细胞***(对癌细胞特别重要的生物学过程)的细胞毒性和/或治疗剂。有丝***抑制剂破坏微管，从而通常通过实现微管聚合(例如，抑制微管聚合)或微管解聚(例如，稳定微管细胞骨架以防止解聚)来阻止细胞***。因此，在一个实施例中，本发明的抗CD98抗体与一种或多种有丝***抑制剂偶联，所述有丝***抑制剂通过抑制微管蛋白聚合来破坏微管形成。在另一个实施例中，本发明的抗CD98抗体与一种或多种有丝***抑制剂偶联，所述有丝***抑制剂稳定微管细胞骨架免于解聚。在一个实施例中，本发明的ADC中使用的有丝***抑制剂是依科木普拉(Ixempra)(伊沙匹隆)。以下提供可用于本发明的抗CD98 ADC的有丝***抑制剂的实例。如上所述，澳瑞他汀包括在有丝***抑制剂属类中。
a.多拉司他汀
本发明的抗CD98抗体可与至少一个多拉司他汀偶联以形成ADC。多拉司他汀是从印度洋海兔Dolabella auricularia中分离的短肽化合物(参见Pettit等人.,J.Am.Chem.Soc.[美国化学学会杂志],1976,98,4677)。多拉司他汀的实例包括多拉司他汀10和多拉司他汀15。多拉司他汀15是一种衍生自Dolabella auricularia的七亚基缩酚酸肽，也是一种有效的抗有丝***剂，其结构上与抗微管蛋白剂多拉司他汀10相关，后者是从同一生物获得的五亚基肽。因此，在一个实施例中，本发明的抗CD98 ADC包含如本文所述的抗CD98抗体和至少一个多拉司他汀。如上所述的澳瑞他汀是多拉司他汀10的合成衍生物。
b.美登木素生物碱
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个美登木素生物碱偶联以形成ADC。美登木素生物碱是有效的抗肿瘤剂，其最初分离自高等植物科卫矛科、鼠李科和大戟科以及一些苔藓物种的成员(Kupchan等，J.Am.Chem.Soc.[美国化学学会杂志]94:1354-1356[1972]；Wani等人,J.Chem.Soc.Chem.Commun.化学学会杂志，化学通讯390:[1973]；Powell等人,J.Nat.Prod.[自然产物期刊]46:660-666[1983]；Sakai等人,J.Nat.Prod.[自然产物期刊]51:845-850[1988]；和Suwanborirux等人,Experientia[经验]46:117-120[1990]).有证据表明美登木素生物碱通过抑制微管蛋白质微管蛋白的聚合来抑制有丝***，从而阻止微管的形成(参见例如，美国专利号6,441,163和Remillard等人,Science[科学],189,1002-1005(1975))。使用细胞培养模型已经显示美登木素生物碱可在体外抑制肿瘤细胞生长，而施用实验室动物***，其可在体内抑制肿瘤细胞生长。此外，美登木素生物碱的细胞毒性比常规化学治疗剂(例如甲氨蝶呤，柔红霉素和长春新碱)高1,000倍(参见例如，美国专利号5,208,020)。
美登木素生物碱包括美登素、美登醇、美登醇的C-3酯和其他美登醇类似物和衍生物(参见例如，美国专利号5,208,020和6,441,163，其各自通过引用并入本文)。美登醇的C-3酯可以是天然存在的或合成衍生的。此外，天然存在的和合成的C-3美登醇酯可分为具有简单羧酸的C-3酯、或具有N-甲基-L-丙氨酸衍生物的C-3酯，后者比前者细胞毒性更强。合成的美登木素生物碱类似物描述于例如Kupchan等人,J.Med.Chem.[医学化学期刊],21,31-37(1978)。
适用于本发明ADC的美登木素生物碱可从天然来源分离、合成产生或半合成产生。此外，可以以任何合适的方式修饰美登木素生物碱，只要在最终的偶联物分子中保留足够的细胞毒性即可。在这方面，美登木素生物碱缺乏可与抗体连接的合适的官能团。期望使用连接部分将美登木素生物碱与抗体连接以形成偶联物，并且在下面的接头部分中更详细地描述。以下提供示例性美登木素生物碱美登素(DM1)的结构。
美登木素生物碱的代表性实例包括但不限于DM1(N2'-脱乙酰基-N2'-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素；也称为美坦塞(mertansine)、药物美登木素生物碱1；免疫原公司(ImmunoGen,Inc.)；也参见Chari等人(1992)Cancer Res[癌症研究]52:127)、DM2、DM3(N2'-脱乙酰基-N2'-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素)、DM4(4-甲基-4-巯基-1-氧代戊基)-美登素)、和美登醇(合成的美登木素生物碱类似物)。美登木素生物碱的其他实例描述于美国专利号8,142,784中，其通过引用并入本文。
安丝菌素是一组美登木素生物碱抗生素，已从各种细菌来源中分离出来。这些化合物具有有效的抗肿瘤活性。代表性实例包括但不限于：安丝菌素P1、安丝菌素P2、安丝菌素P3和安丝菌素P4。
在本发明的一个实施例中，抗CD98抗体与至少一个DM1偶联。在一个实施例中，抗CD98抗体与至少一个DM2偶联。在一个实施例中，抗CD98抗体与至少一个DM3偶联。在一个实施例中，抗CD98抗体与至少一个DM4偶联。
d.植物生物碱
本发明的抗CD98抗体可与至少一种植物生物碱例如紫杉烷或长春花生物碱偶联。植物生物碱是由某些类型的植物衍生的化学疗法治疗剂。长春花生物碱由长春花植物(catharanthus rosea)制成，而紫杉烷则由太平洋紫杉树(taxus)的树皮制成。长春花生物碱和紫杉烷也称为抗微管剂，并在下面更详细地描述。
紫杉烷
本文所述的抗CD98抗体可与至少一种紫杉烷偶联。如本文所用的术语“紫杉烷”是指具有微管作用机制并具有包括紫杉烷环结构和细胞抑制活性所需的立体特异性侧链的结构的抗肿瘤剂类。术语“紫杉烷”还包括各种已知的衍生物，包括亲水衍生物和疏水衍生物。紫杉烷衍生物包括但不限于国际专利申请号WO 99/18113中描述的半乳糖和甘露糖衍生物；WO 99/14209中描述的哌嗪基和其他衍生物；WO 99/09021，WO 98/22451和美国专利5,869,680中描述的紫杉烷衍生物；WO 98/28288中描述的6-硫代衍生物；美国专利5,821,263中描述的亚磺酰胺衍生物；和美国专利号5,415,869中描述的紫杉醇衍生物，其每一篇在此引入作为参考。紫杉烷化合物描述于以下专利中，美国专利5,641,803、5,665,671、5,380,751、5,728,687、5,415,869、5,407,683、5,399,363、5,424,073、5,157,049、5,773,464、5,821,263、5,840,929、4,814,470、5,438,072、5,403,858、4,960,790、5,433,364、4,942,184、5,362,831、5,705,503、和5,278,324，所有这些都是明确地通过引用并入。紫杉烷的其他实例包括但不限于多西紫杉醇(多西他赛；赛诺菲-安万特制药公司(SanofiAventis))、紫杉醇(白蛋白结合型紫杉醇或泰素；阿博利斯肿瘤公司(AbraxisOncology))、卡巴他赛、替司他赛(tesetaxel)、紫杉醇聚谷氨酸(opaxio)、拉洛他赛(larotaxel)、塔克普辛(taxoprexin)、BMS-184476、红豆杉A、红豆杉B、和红豆杉C、纳米粒子紫杉醇(ABI-007/Abraxene；阿博利斯科学公司(Abraxis Bioscience))。
在一个实施例中，本发明的抗CD98抗体与至少一个多西紫杉醇分子偶联。在一个实施例中，本发明的抗CD98抗体与至少一个紫杉醇分子偶联。
长春花生物碱
在一个实施例中，抗CD98抗体与至少一种长春花生物碱偶联。长春花生物碱是一类细胞周期特异性药物，其通过作用于微管蛋白并防止微管形成来抑制癌细胞***的能力。可用于本发明的ADC的长春花生物碱的实例包括但不限于硫酸长春地辛，长春新碱，长春碱和长春瑞滨。
2.抗肿瘤抗生素
本发明的抗CD98抗体可以与一种或多种抗肿瘤抗生素偶联，用于治疗癌症。如本文所用，术语“抗肿瘤抗生素”是指通过干扰DNA阻断细胞生长并且由微生物制成的抗肿瘤药物。通常，抗肿瘤抗生素会破坏DNA链或减慢或停止DNA合成。可包括在本发明的抗CD98ADC中的抗肿瘤抗生素的实例包括但不限于放线菌素(例如，吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂)、蒽环素、卡奇霉素和多卡米新(duocarmycins)，详见下文。
a.放线菌素
本发明的抗CD98抗体可以与至少一种放线菌素偶联。放线菌素是从链霉菌属细菌中分离的抗肿瘤抗生素的子类。放线菌素的代表性实例包括但不限于放线菌素D(更生霉素[也称为放线菌素(actinomycin或dactinomycin)、放线菌素IV、放线菌素C1]灵北公司(Lundbeck,Inc.))、安曲霉素、新斯拉霉素A(chicamycin A)、DC-81、甲基胺茴霉素、新茴霉素A、新茴霉素B、泊诺思来辛(porothramycin)、珀斯卡辛B(prothracarcin B)、SG2285、西巴霉素、西伯利亚霉素和茅屋霉素。在一个实施例中，本发明的抗CD98抗体与至少一种吡咯并苯并二氮杂(PBD)偶联。PBD的实例包括但不限于，安曲霉素、奇卡米新A(chicamycinA)、DC-81、甲基胺茴霉素、新斯拉霉素A、新斯拉霉素B、泊诺思来辛(porothramycin)、珀斯卡辛B(prothracarcin B)、SG2000(SJG-136)、SG2202(ZC-207)、SG2285(ZC-423)、西巴霉素、西伯利亚霉素和茅屋霉素。因此，在一个实施例中，本发明的抗CD98抗体与至少一种放线菌素(例如，放线菌素D)或至少一种PBD(例如，吡咯并苯并二氮杂(PBD)二聚体偶联)。
PBD的结构可以在例如美国专利申请公开号2013/0028917和2013/0028919、以及WO2011/130598A1中找到，其每一个均通过引用整体并入本文。下面提供了PBD的通用结构。
PBD在其芳族A环和吡咯C环中的取代基的数量、类型和位置以及C环的饱和度方面都不同。在B环中，在N10-C11位置上通常存在亚胺(N＝C)、甲醇胺(NH-CH(OH))或甲醇胺甲基醚(NH-CH(OMe))，该位置是负责烷化DNA的亲电子中心。所有已知的天然产物在手性C11α位置处具有(S)-构型，当从C环向A环看时，该(S)-构型提供了右旋扭曲。本文提供的PBD实例可以与本发明的抗CD98抗体偶联。可以与本发明的抗CD98抗体偶联的PBD的其他实例可以在例如美国专利申请公开号2013/0028917 A1和2013/0028919 A1，在美国专利号7,741,319 B2和WO2011/130598A1和WO2006/111759A1中找到，其每个都通过引用整体并入本文。
具有下式XXX的代表性PBD二聚体可以与本发明的抗CD98抗体偶联：
其中：
R30式XXXI：
其中A是C5-7芳基基团，X是与选自下组的接头单元偶联的基团，该组由以下组成：—O—、—S—、—C(O)O—、—C(O)—、—NH(C═O)—、和—N(RN)—，其中RN选自下组，该组由以下组成：H、C1-4烷基和(C2H4O)mCH3，其中s是1至3，并且
(i)Q1是单键并且Q2选自下组，该组由以下组成：单键和—Z—(CH2)n—，其中Z选自下组，该组由以下组成：单键、O、S和NH并且n是1至3；或
(ii)Q1是—CH═CH—并且Q2是单键；
R130是C5-10芳基基团，其任选地被一个或多个选自下组的取代基取代，该组由以下组成：卤基、硝基、氰基、C1-12烷氧基、C3-20杂环烷氧基、C5-20芳基氧基、杂芳基氧基、烷基烷氧基、芳基烷氧基、烷基芳基氧基、杂芳基烷氧基、烷基杂芳基氧基、C1-7烷基、C3-7杂环基和双-氧基-C1-3亚烷基；
R31和R33独立地选自下组，该组由以下组成：H、Rx、OH、ORx、SH、SRx、NH2、NHRx、NRxRxx'、硝基、Me3Sn和卤基；
其中R和R'独立地选自下组，该组由以下组成：任选地取代的C1-12烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基基团；
R32选自下组，该组由以下组成：H、Rx、OH、ORx、SH、SRx、NH2、NHRx、NHRxRxx、硝基、Me3Sn和卤基；
或：
(a)R34是H，R11是OH、ORxA，其中RxA是C1-4烷基；
(b)R34和R35在它们所结合的氮和碳原子之间形成氮-碳双键；或
(c)R34是H，R35是SOzM，其中z是2或3；
Rxxx是C3-12亚烷基基团，其链可以被一个或多个选自下组的杂原子中断，该组由以下组成：O、S、NH,和芳族环；
Yx和Yx'选自下组，该组由以下组成：O、S、和NH；
R31'、R32'、R33'分别选自与R31，R32和R33相同的组，并且R34'和R35'与R34和R35相同，并且每个M是单价药学上可接受的阳离子或两个M基团一起是二价药学上可接受的阳离子。
C1-12烷基：本文所用的术语“C1-12烷基”涉及通过从具有1至12个碳原子的烃化合物的碳原子上除去氢原子而获得的单价部分，所述碳原子可以是脂族或脂环族的，并且可以是饱和的或不饱和的(如部分不饱和，完全不饱和)。因此，术语“烷基”包括下面讨论的亚类烯基、炔基、环烷基等。
饱和烷基的实例包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、丙基(C3)、丁基(C4)、戊基(C5)、己基(C6)和庚基(C7)。
饱和直链烷基的实例包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、正丙基(C3)、正丁基(C4)、正戊基(戊基)(C5)、n-己基(C6)和正庚基(C7)。
饱和支链烷基的实例包括异丙基(C3)、异丁基(C4)、仲丁基(C4)、叔丁基(C4)、异戊基(C5)和新戊基(C5)。
C3-20杂环基：如本文所用的术语“C3-20杂环基”涉及通过从杂环化合物的环原子上除去氢原子而获得的单价部分，该部分具有3至20个环原子，其中1至10个是环杂原子。优选地，每个环具有3至7个环原子，其中1至4个是环杂原子。
在这种情况下，无论是碳原子还是杂原子，前缀(例如C3-20、C3-7、C5-6等)表示环原子的数量或环原子数的范围。例如，如本文所用的术语“C5-6杂环基”涉及具有5或6个环原子的杂环基。
单环杂环基的实例包括但不限于衍生自以下的那些：
N1：氮丙啶(C3)、氮杂环丁烷(C4)、吡咯烷(四氢吡咯)(C5)、吡咯啉(如3-吡咯啉，2,5-二氢吡咯)(C5)、2H-吡咯或3H-吡咯(异吡咯，异噁唑)(C5)、哌啶(C6)、二氢吡啶(C6)、四氢吡啶(C6)、氮杂(C7)；O1：环氧乙烷(C3)、氧杂环丁烷(C4)、氧杂环戊烷(四氢呋喃)(C5)、氧杂茂(二氢呋喃)(C5)、噁烷(四氢吡喃)(C6)、二氢吡喃(C6)、吡喃(C6)、氧杂(C7)；S1：环硫乙烷(C3)、硫杂环丁烷(C4)、硫戊环(四氢噻吩)(C5)、硫化环戊烷(四氢硫代吡喃)(C6)、硫杂环庚烷(C7)；O2：二氧戊环(C5)、二噁烷(C6)和二氧杂环庚烷(C7)；O3：三噁烷(C6)；N2：咪唑烷(C5)、吡唑烷(二唑烷)(C5)、咪唑啉(C5)、吡唑啉(二氢吡唑)(C5)、哌嗪(C6)；N1O1：四氢噁唑(C5)、二氢噁唑(C5)、四氢异噁唑(C5)、二氢异噁唑(C5)、吗啉(C6)、四氢噁嗪(C6)、二氢噁嗪(C6)、噁嗪(C6)；N1S1：噻唑啉(C5)、噻唑烷(C5)、硫代吗啉(C6)；N2O1：噁二嗪(C6)；O1S1：氧杂噻吩(C5)和氧杂硫化环戊烷(噻嗯烷)(C6)；和，N1O1S1：氧杂噻嗪(C6)。
取代的单环杂环基的实例包括衍生自环状形式的糖的那些，例如，呋喃糖(C5)、例如***呋喃糖、来苏呋喃糖、呋喃核糖和呋喃木糖、和吡喃糖(C6)、例如吡喃阿洛糖(allopyranose)、吡喃阿卓糖(altropyranose)、吡喃葡萄糖、吡喃甘露糖、吡喃葡萄糖、吡喃茚酮糖、吡喃半乳糖和吡喃塔罗糖。
C5-20芳基：本文所用的术语“C5-20芳基”涉及通过从芳族化合物的芳环原子上除去氢原子而得到的单价部分，该部分具有3至20个环原子。优选地，每个环具有5至7个环原子。
在这种情况下，无论是碳原子还是杂原子，前缀(例如C3-20、C5-7、C5-6等)表示环原子的数量或环原子数的范围。例如，如本文所用的术语“C5-6芳基”属于具有5或6个环原子的芳基。
在一个实施例中，本发明的抗CD98抗体可以与具有下式XXXIa的PBD二聚体偶联：
其中上述结构描述了PBD二聚体SG2202(ZC-207)并通过接头L与本发明的抗CD98抗体偶联。SG2202(ZC-207)公开于，例如，美国专利申请公开号2007/0173497，其全部内容通过引用并入本文。
在另一个实施例中，PBD二聚体SGD-1882通过药物接头与本发明的抗CD98抗体偶联，如图4所示。SGD-1882披露于Sutherland等人(2013)Blood[血液]122(8):1455和美国专利申请公开号2013/0028919中，其全部内容通过引用并入本文。如图4中所述，PBD二聚体SGD-1882可以通过mc-val-ala-二肽接头(在图4中统称为SGD-1910)与抗体偶联。在某个实施例中，如本文所公开的抗CD98抗体与图4中描述的PBD二聚体偶联。因此，在另一个实施例中，本发明包括如本文所公开的抗CD98抗体，其通过mc-val-ala-二肽接头与PBD二聚体偶联，如图4所述。在某些实施例中，本发明包括与PBD偶联的抗CD98抗体，其包含重链可变区(包含：含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3结构域、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2结构域、和含有SEQ ID NO:10所述氨基酸序列的CDR1结构域)和轻链可变区(包含：包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR3结构域、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR2结构域、和包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR1结构域)，包括但不限于图4中描述的PBD二聚体。在某些实施例中，本发明包括抗CD98抗体，其包含：分别如SEQ ID NO:108、110、115或118所示的氨基酸序列所定义的huAb102，huAb104，huAb108或huAb110的重链可变区和包含SEQ ID NO:107(huAb102和huAb04)或SEQ ID NO:112(huAb108和huAb110)的氨基酸序列的轻链可变区，其中抗体与PBD偶联，例如，但是不限于图4的示例性PBD二聚体。
b.蒽环素
本发明的抗CD98抗体可以与至少一种蒽环素偶联。蒽环素是从链霉菌属细菌中分离的抗肿瘤抗生素的子类。代表性实例包括但不限于柔红霉素(道诺霉素(Cerubidine)，贝德福德实验室(Bedford Laboratories))、多柔比星(阿霉素，贝德福德实验室(BedfordLaboratories)；也称为盐酸多柔比星、羟基柔红霉素和如比克(Rubex))、表柔比星(表阿霉素(Ellence)，美国辉瑞公司(Pfizer))和伊达比星(善唯达；美国辉瑞公司(Pfizer))。因此，在一个实施例中，本发明的抗CD98抗体与至少一个蒽环霉素(例如多柔比星)偶联。
c.卡奇霉素
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个卡奇霉素偶联。卡奇霉素是来自土壤生物小单孢菌(Micromonospora echinospora)。卡奇霉素结合DNA的小沟并诱导双链DNA断裂，比其他化学治疗剂增加100倍地导致细胞死亡(Damle等人(2003)Curr Opin Pharmacol[当代药学观点]3:386)。已经描述了可以在本发明中用作药物偶联物的卡奇霉素的制备，参见美国专利5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001、和5,877,296。可以使用的卡奇霉素的结构类似物包括但不限于γ1 I、α2 I、α3 I、N-乙酰基-γ1 I、PSAG和θI 1(Hinman等人,Cancer Research[癌症研究]53:3336-3342(1993)、Lode等人,Cancer Research[癌症研究]58:2925-2928(1998)和前述美国专利5,712,374；5,714,586；5,739,116；5,767,285；5,770,701；5,770,710；5,773,001；和5,877,296)。因此，在一个实施例中，本发明的抗CD98抗体与至少一个卡奇霉素偶联。
d.多卡米新
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个多卡米新偶联。多卡米新是从链霉菌属细菌中分离的抗肿瘤抗生素的子类。(参见Nagamura和Saito(1998)Chemistry ofHeterocyclic Compounds[杂环化合物的化学],Vol.34,No.12)。多卡米新与DNA的小沟结合并在N3位置烷基化核碱基腺嘌呤(Boger(1993)Pure andAppl Chem[理论化学与应用化学]65(6)：1123；和Boger and Johnson(1995)PNAS USA[美国国家科学院院刊]92:3642)。多卡米新的合成类似物包括但不限于阿多来新(adozelesin)、比折来新(bizelesin)和卡折来新(carzelesin)。因此，在一个实施例中，本发明的抗CD98抗体与至少一个多卡米新偶联。
e.其他抗肿瘤抗生素
除上述之外，可用于本发明的抗CD98 ADC的另外的抗肿瘤抗生素包括博来霉素(Blenoxane，百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb))，丝裂霉素和普卡霉素(plicamycin)(也称为光神霉素)。
3.免疫调节剂
在一个方面，本发明的抗CD98抗体可以与至少一个免疫调节剂偶联。如本文所用，术语“免疫调节剂”是指可以刺激或修饰免疫应答的药剂。在一个实施例中，免疫调节剂是增强受试者免疫应答的免疫刺激剂。在另一个实施例中，免疫调节剂是预防或降低受试者免疫应答的免疫抑制剂。免疫调节剂可以调节骨髓细胞(单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、巨核细胞和粒细胞)或淋巴细胞(T细胞、B细胞和自然杀伤(NK)细胞)及其任何进一步分化的细胞。代表性实例包括但不限于卡介苗(BCG)和左旋咪唑(Ergamisol)。可用于本发明的ADC的免疫调节剂的其他实例包括但不限于癌症疫苗、细胞因子和免疫调节基因治疗。
a.癌症疫苗
本发明的抗CD98抗体可以与癌症疫苗偶联。如本文所用，术语癌症疫苗是指引发肿瘤特异性免疫应答的组合物(例如，肿瘤抗原和细胞因子)。通过给予癌症疫苗，或者在本发明的情况下，给予包含抗CD98抗体和癌症疫苗的ADC，从受试者自身的免疫***中引发应答。在优选的实施例中，免疫应答导致体内肿瘤细胞的根除(例如，原发性或转移性肿瘤细胞)。癌症疫苗的使用通常涉及给予特定抗原或抗原组，所述抗原或抗原组例如存在于特定癌细胞的表面上，或存在于显示促进癌症形成的特定感染因子的表面上。在一些实施例中，癌症疫苗的使用是出于预防目的，而在其他实施例中，其用于治疗目的。可用于本发明的抗CD98 ADC的癌症疫苗的非限制性实例包括重组二价人***瘤病毒(HPV)疫苗16型和18型疫苗(希瑞适(Cervarix)，葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))，重组四价人***瘤病毒(HPV)6型、11型、16型和18型疫苗(加德西(Gardasil)，默克公司(Merck&Company))和西普鲁塞-T(sipuleucel-T)(普罗文奇(Provenge)，丹德里昂公司(Dendreon))。因此，在一个实施例中，本发明的抗CD98抗体与至少一个癌症疫苗偶联，所述癌症疫苗是免疫刺激剂或免疫抑制剂。
b.细胞因子
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个细胞因子偶联。术语“细胞因子”通常是指由一个细胞群释放的蛋白质，其作为细胞间介质作用于另一个细胞。细胞因子直接刺激肿瘤部位的免疫效应细胞和基质细胞，并通过细胞毒性效应细胞增强肿瘤细胞识别(Lee和Margolin(2011)Cancer[癌症]3:3856)。许多动物肿瘤模型研究已经证明细胞因子具有广泛的抗肿瘤活性，并且已经转化为许多基于细胞因子的癌症疗法(Lee和Margoli，同上)。近年来已经发现许多细胞因子，包括GM-CSF、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18和IL-21进入晚期癌症患者的临床试验(Lee和Margoli，同上)。
可用于本发明的ADC的细胞因子的实例包括但不限于甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素，如促卵泡激素(FSH)，促甲状腺激素(TSH)和***(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；催乳素；胎盘催乳素；肿瘤坏死因子；苗勒抑制物质(mullerian-inhibiting substance)；小鼠***相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整合素；血小板生成素(TPO)；神经生长因子如NGF；血小板生长因子；转化生长因子(TGFs)；***-I和-II；***(EPO)；骨诱导因子；干扰素(如干扰素α、β和γ)，集落刺激因子(CSF)；粒细胞-巨噬细胞-C-SF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白细胞介素(IL)(如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-11、IL-12)；肿瘤坏死因子；和其他多肽因子(包括LIF和试剂盒配体(KL))。如本文所用，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列细胞因子的生物活性等同物。因此，在一个实施例中，本发明提供了包含本文所述的抗CD98抗体和细胞因子的ADC。
c.集落刺激因子(CSF)
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个集落刺激因子(CSF)偶联。集落刺激因子(CSF)是帮助骨髓制造白细胞的生长因子。一些癌症治疗(例如，化疗)可以影响白细胞(有助于抵抗感染)；因此，可引入集落刺激因子来帮助支持白细胞水平并增强免疫***。骨髓移植后也可以使用集落刺激因子来帮助新骨髓开始产生白细胞。可用于本发明的抗CD98ADC的CSF的代表性实例包括但不限于***(Epoetin)，非格司亭(Neopogen)(也称为粒细胞集落刺激因子(G-CSF)；安进公司(Amgen,Inc.)、沙格司亭(sargramostim)(沙格司亭(leukine)(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和GM-CSF)；健赞公司(GenzymeCorporation))、普美加泊亭(promegapoietin)和奥普瑞白介素(重组IL-11；辉瑞公司(Pfizer，Inc.))。因此，在一个实施例中，本发明提供了包含本文所述的抗CD98抗体和CSF的ADC。
4.基因治疗
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个核酸(直接或通过载体间接)偶联用于基因治疗。基因治疗通常是指将遗传物质引入细胞，由此遗传物质被设计用于治疗疾病。由于它涉及免疫调节剂，基因治疗用于刺激受试者抑制癌细胞增殖或杀死癌细胞的天然能力。在一个实施例中，本发明的抗CD98 ADC包含编码功能性治疗基因的核酸，其用于替换与癌症相关的突变或其他功能失调(例如截短的)基因。在其他实施例中，本发明的抗CD98 ADC包含编码治疗癌症的治疗性蛋白质的核酸或以其他方式提供治疗癌症的治疗性蛋白质的产生。编码治疗基因的核酸可以直接与抗CD98抗体偶联，或者可替代地可以通过载体与抗CD98抗体偶联。可用于递送核酸用于基因治疗的载体的实例包括但不限于病毒载体或脂质体。
5.烷化剂
本发明的抗CD98抗体可以与一个或多个烷化剂偶联。烷化剂是一类将烷基连接到DNA上的抗肿瘤化合物。可用于本发明的ADC的烷化剂的实例包括但不限于烷基磺酸盐、乙烯亚胺、甲胺衍生物、环氧化物、氮芥、亚硝基脲、三嗪和肼。
a.烷基磺酸酯
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个烷基磺酸酯偶联。烷基磺酸酯是烷化剂的一个子类，通式如下：R-SO2-O-R1，其中R和R1通常是烷基或芳基。烷基磺酸酯的代表性实例包括但不限于白消安(马勒兰(Myleran)，葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline)；白舒非IV(Busulfex IV)，PDL生物制药有限公司(PDL BioPharma，Inc.))。
b.氮芥
本发明的抗CD98抗体可与至少一个氮芥偶联。该抗癌化合物子类的代表性实例包括但不限于苯丁酸氮芥(Leukeran，葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))、环磷酰胺(癌得星，百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb))；诺色(Neosar)，辉瑞公司(Pfizer，Inc.))、雌莫司汀(雌莫司汀磷酸盐)钠或Estracyt，辉瑞公司(Pfizer，Inc.))，异环磷酰胺(Ifex，百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb))、二氯甲基二乙胺(Mustargen，隆倍科公司(LundbeckInc.))和美法仑(爱克兰(Alkeran)或L-Pam或苯丙氨酸芥末；葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))。
c.亚硝基脲
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个亚硝基脲偶联。亚硝基脲是脂溶性的烷化剂的子类。代表性实例包括但不限于卡莫司汀(BCNU[也称为双CNU、N,N-双(2-氯乙基)-N-亚硝基脲、或1,3-双(2-氯乙基)-l-亚硝基脲]、百时美施贵宝(Bristol-Myers Squibb))、福莫司汀(也称为武活龙(Muphoran)、洛莫司汀(CCNU或1-(2-氯-乙基)-3-环己基-1-亚硝基脲、百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb))、尼莫司汀(也称为ACNU)和链脲佐菌素(扎诺萨(Zanosar)，梯瓦制药公司(TevaPharmaceuticals))。
d.三嗪和肼
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个三嗪和肼偶联。三嗪和肼是含氮烷化剂的子类。在一些实施例中，这些化合物自发分解或可以代谢产生烷基重氮中间体，其促进烷基转移至核酸、肽和/或多肽，从而引起诱变、致癌或细胞毒性作用。代表性实例包括但不限于达卡巴嗪(DTIC-Dome，拜耳保健制药有限公司(Bayer Healthcare PharmaceuticalsInc.))，丙卡巴肼(木塔伦(Mutalane)、希格玛托制药有限公司(Sigma-TauPharmaceuticals Inc.))和替莫唑胺(Temodar，加拿大先灵葆雅公司(ScheringPlough))。
e.其他烷化剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个乙烯亚胺、甲胺衍生物或环氧化物偶联。乙烯亚胺是烷化剂的子类，其通常含有至少一个氮丙啶环。环氧化物代表烷化剂的子类，其特征在于仅具有三个环原子的环醚。
乙烯亚胺的代表性实例包括但不限于硫喷妥钠(思伯雷(Thioplex)，安进公司(Amgen))、二喹吖嗪(也称为氮丙啶基苯醌(AZQ))和丝裂霉素C。丝裂霉素C是含有氮丙啶环的天然产物，并且似乎通过交联DNA诱导细胞毒性(Dorr RT等人，Cancer Res[研究].1985；45:3510；Kennedy KA等人，Cancer Res.[癌症研究]1985；45:3541)。甲胺衍生物及其类似物的代表性实例包括但不限于澳促瑞民(altreremine)(克瘤灵，MGI制药公司(MGIPharma,Inc.))，其也称为六甲胺和六甲密胺。这类抗癌化合物的环氧化物的代表性实例包括但不限于二脱水半乳糖醇。二脱水半乳糖醇(1,2:5,6-二脱水卫茅醇)与氮丙啶化学相关，并且通常通过如上所述的类似机制促进烷基的转移。二溴卫茅醇水解成二脱水半乳糖醇，因此是环氧化物的前药(Sellei C等人Cancer ChemotherRep.[癌症化疗报告]1969；53:377)。
6.抗血管生成剂
在一个方面，本文所述的抗CD98抗体与至少一个抗血管生成剂偶联。抗血管生成剂抑制新血管的生长。抗血管生成剂以多种方式发挥作用。在一些实施例中，这些药剂干扰生长因子达到其靶标的能力。例如，血管内皮生长因子(VEGF)是通过与细胞表面上的特定受体结合而参与启动血管生成的主要蛋白质之一。因此，某些阻止VEGF与其同源受体相互作用的抗血管生成剂阻止VEGF启动血管生成。在其他实施例中，这些药剂干扰细胞内信号传导级联。例如，一旦细胞表面上的特定受体被触发，就会启动一系列其他化学信号以促进血管的生长。因此，已知促进有助于例如细胞增殖的细胞内信号级联的某些酶(例如一些酪氨酸激酶)是癌症治疗的靶标。在其他实施例中，这些药剂干扰细胞间信号传导级联。然而，在其他实施例中，这些药剂可以禁用激活和促进细胞生长的特定靶标或直接干扰血管细胞生长。已经在超过300种具有许多直接和间接抑制作用的物质中发现了血管生成抑制特性。
可用于本发明的ADC的抗血管生成剂的代表性实例包括但不限于血管抑制素、ABXEGF、C1-1033、PKI-166、EGF疫苗、EKB-569、GW2016、ICR-62、EMD 55900、CP358、PD153035、AG1478、IMC-C225(Erbitux，ZD1839(易瑞沙)、OSI-774、厄洛替尼(得舒缓(tarceva))、血管抑制素、抑制蛋白、内皮抑素、BAY 12-9566和w/氟尿嘧啶或多柔比星、血管能抑素、羧基酰胺***和紫杉醇、EMD121974、S-24、维生素B、二甲基吨酮乙酸、IM862、白细胞介素-12、白细胞介素-2、NM-3、HuMV833、PTK787、RhuMab、血管酶(核酶)、IMC-1C11、癌立消、马瑞斯塔(marimstat)、普马司他，BMS-275291、COL-3、MM1270、SU101、SU6668、SU11248、SU5416、含紫杉醇、吉西他滨和顺铂、伊立替康和顺铂、辐射、替可加兰、替莫唑胺和PEG干扰素α2b、四硫代钼酸盐、TNP-470、沙利度胺、CC-5013和多西他赛、肿瘤抑素、2-甲氧基***、VEGF陷阱、mTOR抑制剂(雷帕霉素、依维莫司(癌伏妥，诺华制药集团(Novartis PharmaceuticalCorporation))和替西罗莫司(Torisel，辉瑞公司(Pfizer，Inc.))、激酶抑制剂(例如厄洛替尼(得舒缓(Tarceva)，遗传技术公司(Genentech,Inc.))、伊马替尼(格列卫(Gleevec)，诺华制药集团(Novartis Pharmaceutical Corporation))、吉非替尼(易瑞沙，阿斯利康制药(AstraZeneca Pharmaceuticals))、达沙替尼(施达赛(Sprycel)，百时美施贵宝(Bristol-Myers Squibb))、舒尼替尼(舒癌特(Sutent)，辉瑞公司(Pfizer，Inc.))、尼罗替尼(泰息安，诺华制药集团(Novartis Pharmaceutical Corporation))、拉帕替尼(泰克博(Tykerb)，葛兰素史克制药公司(GlaxoSmithKline Pharmaceuticals))、索拉非尼(尼卡瓦(Nexavar)，拜耳和欧尼克斯制药公司(Bayer and Onyx))、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、奥斯替尼(Osimertinib)、考比替尼(Cobimetinib)、曲美替尼(Trametinib)、达拉菲尼(Dabrafenib)、狄纳西比(Dinaciclib)。
7.抗代谢物
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个抗代谢物偶联。抗代谢药是一类化学疗法治疗剂，与细胞内的正常物质非常相似。当细胞将抗代谢物掺入细胞代谢中时，结果对细胞是负面的，例如，细胞不能***。抗代谢物根据它们干扰的物质进行分类。可用于本发明的ADC的抗代谢物的实例包括但不限于如下文更详细描述的叶酸拮抗剂(例如，甲氨蝶呤)、嘧啶拮抗剂(例如，5-氟尿嘧啶、福达华(Fludara)、阿糖胞苷、卡培他滨)和吉西他滨(Gemcitabine)、嘌呤拮抗剂(例如，6-巯基嘌呤和6-硫鸟嘌呤)和腺苷脱氨酶抑制剂(例如，克拉屈滨、氟达拉滨、奈拉滨(Nelarabine)和喷司他汀)。
a.抗叶酸剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个抗叶酸剂偶联。抗叶酸剂是抗代谢物的子类，其在结构上类似于叶酸。代表性实例包括但不限于甲氨蝶呤、4-氨基叶酸(也称为氨基蝶呤和4-氨基蝶呤)、洛美沙星(LMTX)、培美曲塞(艾琳塔(Alimpta)，美国礼来公司(EliLilly and Company))和三甲氧喋呤(纽簇克新(Neutrexin)，本位实验室公司(Ben VenueLaboratories，Inc.))
b.嘌呤拮抗剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个嘌呤拮抗剂偶联。嘌呤类似物是抗代谢物的子类，其在结构上类似于已知为嘌呤的化合物组。嘌呤拮抗剂的代表性实例包括但不限于硫唑嘌呤(安杂萨(Azasan)，萨利克(Salix)；咪唑硫嘌呤(Imuran)、葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))、克拉屈滨(克拉屈滨注射液[也称为2-CdA]、詹森生物技术公司(Janssen Biotech，Inc.))、巯基嘌呤(普因索(Purinethol)[也称为6-巯基乙醇]，葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))、氟达拉滨、(福达华(Fludara)，健赞公司(GenzymeCorporation))、喷司他汀(尼喷他(Nipent)，也称为2'-脱氧同型霉素(DCF))，6-硫鸟嘌呤(兰快舒[也称为thioguanine]，葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))。
c.嘧啶拮抗剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个嘧啶拮抗剂偶联。嘧啶拮抗剂是抗代谢物的子类，其在结构上类似于已知为嘌呤的化合物组。嘧啶拮抗剂的代表性实例包括但不限于阿扎胞苷(维达扎(Vidaza)，新基生物制药公司(Celgene Corporation))、卡培他滨(希罗达(Xeloda)，罗氏实验室公司(Roche Laboratories))、阿糖胞苷(也称为胞嘧啶***糖苷和***糖基胞嘧啶，贝德福德实验室(Bedford Laboratories))、地西他滨(达克金(Dacogen)，卫材制药公司(Eisai Pharmaceuticals))、5-氟尿嘧啶(Adrucil，梯瓦制药公司(Teva Pharmaceuticals)；Efudex，万兰特制药公司(Valeant Pharmaceuticals，Inc))，5-氟-2'-脱氧尿苷5'-磷酸(FdUMP)，5-氟尿苷三磷酸和吉西他滨(健择(Gemzar)，美国礼来公司(Eli Lilly and Company))。
8.含硼剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个含硼剂偶联。含硼剂包括一类干扰细胞增殖的癌症治疗化合物。含硼剂的代表性实例包括但不限于硼磷蛋白和硼替佐米(万珂(Velcade)，千年制药公司(Millenium Pharmaceuticals))。
9.化学保护剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个化学保护剂偶联。化学保护药物是一类化合物，其有助于保护身体免受化疗的特定毒性作用。化学保护剂可以与各种化学疗法一起给予，以保护健康细胞免受化疗药物的毒性作用，同时允许癌细胞被给予的化学治疗剂治疗。代表性的化学保护剂包括但不限于氨磷汀(阿米福汀(Ethyol)，医学免疫公司(Medimmune,Inc.))(其用于降低与累积剂量的顺铂、右丙亚胺相关的肾毒性)，用于治疗由给予蒽环霉素引起的外渗，以及用于治疗由抗肿瘤抗生素多柔比星(Zinecard)和美司纳(mesna)(美司纳(Mesnex)，百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb))(其用于预防用ifocfamide化疗治疗期间的***)给药引起的心脏相关并发症。
10.激素剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个激素剂偶联。激素剂(包括合成激素)是一种干扰内源性***内源性产生的激素的产生或活性的化合物。在一些实施例中，这些化合物干扰细胞生长或产生细胞毒性作用。非限制性实例包括雄激素，***，醋酸甲羟孕酮(甲孕酮(Provera)，辉瑞公司(Pfizer，Inc.))和孕激素。
11.抗激素剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个抗激素剂偶联。“抗激素”剂是抑制某些内源激素的产生和/或阻止某些内源激素功能的试剂。在一个实施例中，抗激素剂干扰选自雄激素、***、***和***释放激素的激素的活性，从而干扰各种癌细胞的生长。抗激素剂的代表性实例包括但不限于氨基乙酰亚胺，阿那曲唑(安美达锭，阿斯利康制药(AstraZeneca Pharmaceuticals))、比卡鲁胺(康士得，阿斯利康制药(AstraZenecaPharmaceuticals))、醋酸环丙孕酮(Cyprostat，拜耳制药公司(Bayer PLC))、地加瑞克(Firmagon，辉凌制药公司(Ferring Pharmaceuticals))、依西美坦(阿诺新，辉瑞公司(Pfizer，Inc.))、氟他胺(Drogenil，先灵葆雅公司(Schering-Plough Ltd))，氟维司群(法洛德，阿斯利康制药(AstraZeneca Pharmaceuticals))、戈舍瑞林(Zolodex，阿斯利康制药(AstraZeneca Pharmaceuticals))、来曲唑(弗隆，诺华制药集团(NovartisPharmaceutical Corporation))、亮丙瑞林(Prostap)、醋酸亮丙瑞林、醋酸甲羟孕酮(甲孕酮(Provera)，辉瑞公司(Pfizer，Inc.))、醋酸甲地孕酮(美可治，百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb)Company)、他莫昔芬(Nolvadex，阿斯利康制药(AstraZenecaPharmaceuticals))和曲普瑞林(Decapetyl，辉凌制药公司)。
12.皮质类固醇
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个皮质类固醇偶联。皮质类固醇可用于本发明的ADC中以减少炎症。皮质类固醇的实例包括但不限于糖皮质激素，例如***(Deltasone，法玛西亚&安琼公司(Pharmacia&Upjohn Company)(辉瑞公司(Pfizer，Inc.)的分部))。
13.光活性治疗剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个光活性治疗剂偶联。光活性治疗剂包括可以用于在暴露于特定波长的电磁辐射后杀死处理过的细胞的化合物。治疗相关化合物吸收穿透组织的波长的电磁辐射。在优选的实施例中，化合物以无毒形式给药，其充分激活后能够产生对细胞或组织的毒性。在其他优选的实施例中，这些化合物被癌组织保留并且容易从正常组织中清除。非限制性实例包括各种发色团和染料。
14.寡核苷酸
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个寡核苷酸偶联。寡核苷酸由短核酸链组成，其通过干扰遗传信息的处理而起作用。在一些实施例中，用于ADC的寡核苷酸是未修饰的单链和/或双链DNA或RNA分子，而在其他实施例中，这些治疗性寡核苷酸是化学修饰的单链和/或双链DNA或RNA分子。在一个实施例中，ADC中使用的寡核苷酸相对较短(19-25个核苷酸)并与细胞中存在的核酸靶标总库中的独特核酸序列杂交。一些重要的寡核苷酸技术包括反义寡核苷酸(包括RNA干扰(RNAi))、适体、CpG寡核苷酸和核酶。
a.反义寡核苷酸
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个反义寡核苷酸偶联。设计反义寡核苷酸以通过沃森-克里克杂交与RNA结合。在一些实施例中，反义寡核苷酸与编码CD98的区域、结构域、部分或区段的核苷酸互补。在一些实施例中，反义寡核苷酸包含约5至约100个核苷酸，约10至约50个核苷酸，约12至约35个核苷酸和约18至约25个核苷酸。在一些实施例中，寡核苷酸与CD98基因的区域、部分、结构域或区段具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，至少99％或至少100％同源性。在一些实施例中，在CD98基因的至少15、20、25、30、35、40、50或100个连续核苷酸上存在实质性的序列同源性。在优选的实施例中，这些反义寡核苷酸的大小长度为12至25个核苷酸，大多数反义寡核苷酸的长度为18至21个核苷酸。一旦寡核苷酸与靶RNA结合，就可以利用多种机制来抑制RNA的功能(Crooke ST.(1999).Biochim.Biophys.Acta[生物化学及生物物理学报],1489,30-42)。最佳表征的反义机制导致内源细胞核酸酶(例如RNase H或与RNA干扰机制相关的核酸酶)裂解靶向的RNA。然而，通过非催化机制(例如剪接或翻译停滞的调节)抑制靶基因表达的寡核苷酸也可以是基因功能的有效和选择性调节剂。
最近受到关注的另一种RNase依赖性反义机制是RNAi(Fire等人,(1998).Nature[自然],391,806-811.；Zamore PD.(2002).Science[科学],296,1265-1269.)。RNA干扰(RNAi)是转录后过程，其中双链RNA以序列特异性方式抑制基因表达。在一些实施例中，通过引入相对较长的双链RNA(dsRNA)实现RNAi效应，而在优选的实施例中，通过引入较短的双链RNA(例如小干扰RNA(siRNA)和/或微小RNA(miRNA))实现该RNAi效应。在另一个实施例中，RNAi也可以通过引入产生与靶基因互补的dsRNA的质粒来实现。在每个前述实施例中，设计双链RNA以干扰细胞内特定靶序列的基因表达。通常，该机制涉及将dsRNA转化为短RNA，其将核糖核酸酶引导至同源mRNA靶标(汇总的,Ruvkun,Science[科学]2294:797(2001))，然后降解相应的内源mRNA，从而导致基因表达的调节。值得注意的是，据报道dsRNA具有抗增殖特性，这使得也可以设想治疗应用(Aubel等人,Proc.Natl.Acad.Sci.[美国国家科学院院刊],USA 88:906(1991))。例如，已经显示合成的dsRNA抑制小鼠中的肿瘤生长(Levy等人，Proc.Nat.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]，62：357-361(1969))，在白血病小鼠的治疗中具有活性(Zeleznick“等人，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.[实验性的生物与医学刊物]130:126-128(1969))，并抑制小鼠皮肤中化学诱导的肿瘤发生(Gelboin等人,Science[科学]167:205-207(1970))。因此，在优选的实施例中，本发明提供了在ADC中用于治疗乳腺癌的反义寡核苷酸的用途。在其他实施例中，本发明提供了用于启动反义寡核苷酸治疗的组合物和方法，其中dsRNA在mRNA水平上干扰CD98的靶细胞表达。如上所用，dsRNA是指天然存在的RNA，部分纯化的RNA，重组产生的RNA，合成RNA，以及通过包含非标准核苷酸、非核苷酸材料、核苷酸类似物(例如锁核酸(LNA))、脱氧核糖核苷酸而与天然存在的RNA不同的改变的RNA及其任何组合。本发明的RNA仅需要与天然RNA足够相似，以使其具有介导本文所述的基于反义寡核苷酸的调节的能力。
b.适体
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个适体偶联。适体是基于其结合其他分子的能力从随机库中选择的核酸分子。与抗体一样，适体可以以优异的亲和力和特异性结合靶分子。在许多实施例中，适体呈现复杂的，序列依赖性的三维形状，其允许它们与靶蛋白相互作用，产生类似于抗体-抗原相互作用的紧密结合的复合物，从而干扰所述蛋白的功能。适体与其靶蛋白紧密并且特异结合的特定能力强调了它们作为靶向分子治疗剂的潜力。
c.CpG寡核苷酸
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个CpG寡核苷酸偶联。已知细菌和病毒DNA是人内在和特异性免疫的强激活剂。这些免疫学特征与细菌DNA中发现的未甲基化的CpG二核苷酸基序有关。由于这些基序在人中是罕见的，人类免疫***已经进化出将这些基序识别为感染的早期指示并随后引发免疫应答的能力。因此，可以利用含有该CpG基序的寡核苷酸来启动抗肿瘤免疫应答。
d.核酶
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个核酶偶联。核酶是催化性RNA分子，长度范围为约40至155个核苷酸。核酶识别和裂解特定RNA分子的能力使它们成为治疗剂的潜在候选者。代表性实例包括血管酶(angiozyme)。
15.放射性核素剂(放射性同位素)
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个放射性核素剂偶联。放射性核素剂包括以不稳定的核为特征的试剂，其能够发生放射性衰变。成功放射性核素治疗的基础取决于癌细胞的放射性核素的足够浓度和长期保留。其他需要考虑的因素包括放射性核素半衰期，发射粒子的能量以及发射粒子可以传播的最大范围。在优选的实施例中，治疗剂是选自下组的放射性核素，该组由以下组成：111In、177Lu、212Bi、213Bi、211At、62Cu、64Cu、67Cu、90Y、I25I、I31I、32P、33P、47Sc、111Ag、67Ga、142Pr、153Sm、161Tb、166Dy、166Ho、186Re、188Re、189Re、212Pb、223Ra、225Ac、59Fe、75Se、77As、89Sr、99Mo、105Rh、I09Pd、143Pr、149Pm、169Er、194Ir、198Au、199Au、和211Pb。还优选的是放射性核素，其基本上用发射俄歇的颗粒衰变。例如，Co-58、Ga-67、Br-80m、Tc-99m、Rh-103m、Pt-109、In-1111、Sb-119、I-125、Ho-161、Os-189m和Ir-192。有用的β粒子发射核素的衰变能量优选为Dy-152、At-211、Bi-212、Ra-223、Rn-219、Po-215、Bi-211、Ac-225、Fr-221、At-217、Bi-213和Fm-255。有用的α粒子发射放射性核素的衰变能量优选为2,000keV-10,000keV，更优选为3,000keV-8,000keV，最优选为4,000keV-7,000keV。所用的另外的可能放射性同位素包括11C、13N、150、75Br、198Au、224Ac、126I、133I、77Br、113mIn、95Ru、97Ru、I03Ru、105Ru、107Hg、203Hg、121mTe,122mTe、125mTe、165Tm、I67Tm、168Tm、197Pt、109Pd、105Rh、142Pr、143Pr、161Tb、！66Ho、199Au、57Co、58Co、51Cr、59Fe、75Se、201Tl、225Ac、76Br、I69Yb等。
16.放射增敏剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个放射增敏剂偶联。如本文所用，术语“放射增敏剂”定义为以治疗有效量给予动物的分子，优选低分子量分子，以增加待放射增敏的细胞对电磁辐射的敏感性和/或促进可用电磁辐射治疗的疾病的治疗。放射增敏剂是使癌细胞对放射疗法更敏感同时通常对正常细胞的影响小得多的药剂。因此，放射增敏剂可以与放射性标记的抗体或ADC组合使用。与单独用放射性标记的抗体或抗体片段处理相比时，添加放射增敏剂可以提高效力。放射增敏剂描述于D.M.Goldberg(ed.),Cancer Therapy withRadiolabeled Antibodies[采用放射性激光抗体的癌症疗法],CRC出版社(1995)。放射增敏剂的实例包括吉西他滨、5-氟尿嘧啶、紫杉烷和顺铂。
放射增敏剂可以通过X射线的电磁辐射激活。X射线激活的放射增敏剂的代表性实例包括但不限于以下：甲硝唑、咪唑、去甲基咪唑、噻菌唑、乙炔唑、尼莫拉唑、丝裂霉素C、RSU 1069、SR4233、E09、RB 6145、烟酰胺、5-溴脱氧尿苷(BUdR)、5-碘脱氧尿苷(IUdR)、溴脱氧胞苷、氟脱氧尿苷(FUdR)、羟基脲、顺铂、及其治疗有效的类似物和衍生物。或者，可以使用光动力疗法(PDT)激活放射增敏剂。光动力放射增敏剂的代表性实例包括但不限于血卟啉衍生物、光卟啉(r)、苯并卟啉衍生物、NPe6、锡初卟啉(SnET2)、福波必德a(pheoborbidea)、细菌叶绿素a、萘酞菁、酞菁、锌酞菁和治疗有效的类似物和其衍生物。
16.拓扑异构酶抑制剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个拓扑异构酶抑制剂偶联。拓扑异构酶抑制剂是设计用于干扰拓扑异构酶(拓扑异构酶I和II)作用的化学治疗剂，拓扑异构酶是通过在正常细胞周期中催化然后破坏和重新连接DNA链的磷酸二酯骨架来控制DNA结构变化的酶。DNA拓扑异构酶I抑制剂的代表性实例包括但不限于喜树碱及其衍生物伊立替康(CPT-11、伊立替康，辉瑞公司(Pfizer，Inc.))和托泊替康(美新(Hycamtin)、葛兰素史克制药公司(GlaxoSmithKline Pharmaceuticals))。DNA拓扑异构酶II抑制剂的代表性实例包括但不限于安吖啶、柔红霉素、多柔比星、表鬼臼毒素、玫瑰树碱、表柔比星、依托泊苷、丙亚胺和替尼泊苷。
17.激酶抑制剂
本发明的抗CD98抗体可以与至少一个激酶抑制剂偶联。通过阻断蛋白激酶起作用的能力，抑制肿瘤生长。可用于本发明的ADC的激酶抑制剂的实例包括但不限于阿西替尼、博舒替尼、西地尼布、达沙替尼、埃罗替尼、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、来他替尼、尼罗替尼、司马沙尼、舒尼替尼、奥斯替尼、考比替尼、曲美替尼，达拉菲尼，迪那西利(dinaciclib)和凡德他尼。
18.其他药剂
可用于本发明的ADC的其他药剂的实例包括但不限于红豆因(例如红豆因A链)、α毒素、油桐蛋白(Aleurites fordii proteins)、鹅膏毒素、巴豆毒素、麻疯树毒蛋白、香石竹毒蛋白、白喉毒素(例如，白喉A链和非结合的白喉毒素活性片段)、脱氧核糖核酸酶(Dnase)、白树毒素、***素(mitogellin)、莫迪素A链(modeccin A chain)、苦瓜苦参碱抑制剂、新霉素、豹蛙酶、酚霉素、美洲商陆蛋白(Phytolaca americana protein)(PAPI、PAPII和PAP-S)、商陆抗病毒蛋白、假单胞菌内毒素、假单胞菌外毒素(例如外毒素A链(来自铜绿假单胞菌))、限制素、蓖麻毒素A链、核糖核酸酶(Rnase)、肥阜草抑制剂、皂草素、α-八叠球菌、葡萄球菌肠毒素-A、破伤风毒素、顺铂、卡铂和奥沙利铂(乐沙定，赛诺菲-安万特制药公司(Sanofi Aventis))、蛋白酶体抑制剂(例如PS-341[硼替佐米或万珂])、HDAC抑制剂(伏立诺他(左林扎(Zolinza)，默克公司(Merck&Company)))、贝利司他、恩替诺特、莫塞汀司他(mocetinostat)和帕比司他)、COX-2抑制剂、取代的脲、热休克蛋白抑制剂(例如格尔德霉素及其众多类似物)、肾上腺皮质抑制剂、和三萜。(参见，例如，WO 93/21232)。其他药剂还包括天冬酰胺酶(Espar，灵北公司(Lundbeck Inc.))、羟基脲，左旋咪唑，米托坦(Lysodren，百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb))和维甲酸(Renova，万兰特制药公司(Valeant Pharmaceuticals Inc.))。
III.C.抗CD98 ADC：其他示例性接头
除了上述接头外，其他示例性接头包括但不限于6-马来酰亚胺基己酰基，马来酰亚胺丙酰基(“MP”)、缬氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)、丙氨酸-苯丙氨酸(“ala-phe”)、对氨基苄氧基羰基(“PAB”)、N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶硫基)戊酸酯(“SPP”)和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1甲酸酯(“MCC”)。
在一个方面，抗CD98抗体通过包含马来酰亚胺己酰基(mc)、缬氨酸瓜氨酸(val-cit或vc)和PABA的接头(称为mc-vc-PABA链接头)与药物(例如澳瑞他汀，例如MMAE)偶联。马来酰亚胺己酰基充当抗CD98抗体的接头并且不可裂解。Val-cit是一种二肽，它是接头的氨基酸单元，并且允许通过蛋白酶特别是蛋白酶组织蛋白酶B裂解接头。因此，接头的val-cit组分提供了暴露在细胞内环境后从ADC释放澳瑞他汀的手段。在接头内，对氨基苄醇(PABA)充当间隔子并且是自消式的，其允许释放MMAE。mc-vc-PABA-MMAE接头的结构如图3所示。
如上所述，合适的接头包括例如可裂解和不可裂解的接头。接头可以是“可裂解的接头”，促进药物的释放。非限制性示例性可裂解接头包括酸不稳定接头(例如，包含腙)、蛋白酶敏感性(例如，肽酶敏感性)接头、光不稳定接头或含二硫化物的接头(Chari等人，CancerResearch[癌症研究]52：127-131(1992)；美国专利号5,208,020)。可裂解的接头通常易于在细胞内条件下裂解。合适的可裂解接头包括，例如，可被细胞内蛋白酶例如溶酶体蛋白酶或内体蛋白酶裂解的肽接头。在示例性实施例中，接头可以是二肽接头，例如缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)或苯丙氨酸-赖氨酸(phe-lys)接头。
接头优选以足够地治疗上有效的方式在细胞外稳定。在运输或递送到细胞中之前，ADC优选是稳定的并且保持完整，即抗体保持与药物部分偶联。一旦在细胞内，在靶细胞外稳定的接头可以以某一有效速率裂解。因此，有效的接头将：(i)维持抗体的特异性结合特性；(ii)允许药物部分的例如细胞内递送；(iii)保持药物部分的治疗效果，例如细胞毒性作用。
在一个实施例中，接头在细胞内条件下是可裂解的，使得接头的裂解在细胞内环境中从抗体中充分释放药物以治疗上有效。在一些实施例中，可裂解接头是pH敏感的，即，在某些pH值下对水解敏感。通常，pH敏感性接头在酸性条件下是可水解的。例如，可以使用在溶酶体中可水解的酸不稳定性接头(例如，腙、缩氨基脲、缩氨基硫脲、顺-乌头酰胺、原酸酯、乙缩醛、缩酮等)。(参见，例如，美国专利号5,122,368；5,824,805；5,622,929；Dubowchik和Walker,1999,Pharm.Therapeutics[药物治疗]83:67-123；Neville等人,1989,Biol.Chem.[生物化学]264:14653-14661。)这样的接头在中性pH条件(如在血液中的那些)下相对稳定，但在低于pH 5.5或5.0(其与溶酶体的pH值近似)时不稳定。在某些实施例中，可水解的接头是硫醚接头(例如，通过酰腙键与治疗剂连接的硫醚)(参见，例如，美国专利号5,622,929)。
在其他实施例中，该接头在还原条件下为可裂解的(例如，二硫化物接头)。本领域中已知多种二硫化物接头，包括例如，可以使用SATA(N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基硫代乙酸酯)、SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)、SPDB(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯)及SMPT(N-琥珀酰亚胺基-氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫代)甲苯)、SPDB和SMPT形成的那些。(参见例如，Thorpe等人,1987,Cancer Res.[癌症研究]47:5924-5931；Wawrzynczak等人,In Immunoconjugates:Antibody Conjugates inRadioimagery and Therapy of Cancer[在免疫偶联物中：放射成像和癌症治疗中的抗体偶联物](C.W.Vogel编,Oxford U.Press,1987.还参见美国专利号4,880,935)。
在一些实施例中，接头可被裂解剂(例如酶)裂解，所述裂解剂存在于细胞内环境中(例如，在溶酶体或内体或细胞膜穴样内陷内)。该接头可以为一种肽基接头，它被细胞内的肽酶或蛋白酶(包括但不限于，溶酶体或核内体蛋白酶)裂解。在一些实施例中，该肽基接头为至少两个氨基酸长或至少三个氨基酸长。裂解剂可以包括组织蛋白酶B和D及纤溶酶，已知它们都水解二肽药物衍生物，在靶细胞内部引起活性药物的释放(例如，参见Dubowchik和Walker,1999,Pharm.Therapeutics[药学疗法]83:67-123)。最典型的是肽基接头，其可被存在于表达CD98的细胞中的酶裂解。这种接头的实例描述于例如在美国专利号6,214,345中，其全部内容并入本文作为参考。在特定实施例中，可由细胞内的蛋白酶裂解的肽基接头为Val-Cit接头或Phe-Lys接头(参见，例如美国专利号6,214,345，其描述了具有val-cit接头的多柔比星)。使用治疗剂的细胞内蛋白水解释放的一个优点是当偶联时药剂典型地减弱，并且偶联物的血清稳定性通常很高。
在其他实施例中，该接头是丙二酸酯接头(Johnson等人，1995，Anticancer Res.[抗癌研究]15:1387-93)、马来酰亚胺苯甲酰基接头(Lau等人，1995,Bioorg-Med-Chem.[生物有机化学与医药化学]3(10):1299-1304)、或3'-N-酰胺类似物(Lau等人，1995，Bioorg-Med-Chem.[生物有机化学与医药化学]3(10):1305-12)。
在其他实施例中，接头单元不可裂解，并且例如通过抗体降解释放药物。参见美国公开号20050238649，其全部内容通过引用并入本文。可以设计包含不可裂解的接头的ADC，使得ADC基本上保持在细胞外并与靶细胞表面上的某些受体相互作用，使得ADC的结合启动(或阻止)特定的细胞信号传导途径。
在一些实施例中，接头是基本上亲水的接头(例如，PEG4Mal和sulfo-SPDB)。亲水性接头可用于降低药物通过MDR(多重耐药性)或功能相似的转运蛋白从抗性癌细胞中泵出的程度。
在其他实施例中，在裂解后，接头起到直接或间接抑制细胞生长和/或细胞增殖的作用。例如，在一些实施例中，接头在裂解后可以起嵌入剂的作用，从而抑制大分子生物合成(例如DNA复制，RNA转录和/或蛋白质合成)。
在其他实施例中，接头被设计为通过接头-药物和/或药物单独扩散到相邻细胞来促进旁观者杀伤(杀伤相邻细胞)。在其他实施例中，接头促进细胞内化。
空间位阻二硫化物的存在可以增加特定二硫键的稳定性，增强ADC的效力。因此，在一个实施例中，接头包括空间位阻的二硫键。空间位阻二硫化物是指存在于特定分子环境中的二硫键，其中环境的特征在于通常在同一分子或化合物内的原子的特定空间排列或取向，其防止或至少部分地抑制二硫键的还原。因此，邻近二硫键的大体积(或空间阻碍)化学部分和/或大体积氨基酸侧链的存在防止或至少部分地抑制二硫键的可能导致二硫键还原的相互作用。
值得注意的是，上述接头类型不是互斥的。例如，在一个实施例中，本文所述的抗CD98 ADC中使用的接头是促进细胞内化的不可裂解的接头。
在一些实施例中，接头组件包含“抗体单元”，其将抗体与另一个接头组分或药物部分连接。美国专利8,309,093中描述的示例性担架单元(stretcher unit)，在此引入作为参考。在某些实施例中，担架单元通过抗CD98抗体单元的硫原子和担架单元的硫原子之间的二硫键与抗CD98抗体连接。该实施例的代表性担架单元描述于U.S.8,309,093，在此引入作为参考。在其他实施例中，担架含有可与抗体的伯氨基或仲氨基形成键的反应性位点。这些反应位点的实例包括但不限于活化酯，如琥珀酰亚胺酯、4-硝基苯酯、五氟苯酯、四氟苯酯、酸酐、酰氯、磺酰氯化、异氰酸酯和异硫氰酸酯。该实施例的代表性担架单元描述于U.S.8,309,093，在此引入作为参考。
在一些实施例中，担架含有对可以存在于抗体上的修饰的碳水化合物(-CHO)基团具有反应性的反应性位点。例如，使用诸如高碘酸钠的试剂可以温和地氧化碳水化合物，并且所得的氧化碳水化合物的(-CHO)单元可以与包含诸如酰肼、肟、伯或仲胺、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸盐和芳基酰肼(例如Kaneko等人，1991,Bioconjugate Chem.[生物共轭化学]2:133-41中描述的)的官能度的担架缩合。该实施例的代表性担架单元描述于U.S.8,309,093，在此引入作为参考。
在一些实施例中，接头组分包含“氨基酸单元”。在一些这样的实施例中，氨基酸单元允许蛋白酶裂解接头，从而在暴露于细胞内蛋白酶如溶酶体酶后促进药物从免疫偶联物中释放(Doronina等人(2003)Nat.Biotechnol.[自然生物技术]21：778-784)。示例性氨基酸单元包括但不限于二肽，三肽，四肽和五肽。示例性的二肽包括但不限于缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)；苯丙氨酸-赖氨酸(fk或phe-lys)；苯丙氨酸-高赖氨酸(phe-homolys)；和N-甲基-缬氨酸-瓜氨酸(Me-val-cit)。示例性的三肽包括但不限于甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。氨基酸单元可以包含天然存在的氨基酸残基和/或次要氨基酸和/或非天然存在的氨基酸类似物，例如瓜氨酸氨基酸单元可以被设计和优化用于特定酶的酶促裂解，例如，肿瘤相关蛋白酶，组织蛋白酶B、C和D，或纤溶酶蛋白酶。
在一个实施例中，氨基酸单元是缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)。另一方面，氨基酸单元是苯丙氨酸-赖氨酸(即，fk)。在氨基酸单元的另一个方面，氨基酸单元是N-甲基缬氨酸-瓜氨酸。在另一个方面，氨基酸单元是5-氨基戊酸、高苯丙氨酸赖氨酸、四异喹啉羧酸赖氨酸、环己基丙氨酸赖氨酸、异哌啶甲酸赖氨酸、β-丙氨酸赖氨酸、甘氨酸丝氨酸缬氨酸谷氨酰胺和异哌啶酸。
或者，在一些实施例中，氨基酸单元被葡糖苷酸单元替代，如果存在担架和间隔子单元，则该葡糖苷酸单元将担架单元连接到间隔子单元，如果不存在间隔子单元，则该葡糖苷酸单元将担架单元连接到药物部分，和如果不存在担架和间隔子单元，则该葡糖苷酸单元将接头单元与药物连接。葡糖苷酸单元包括可被β-葡糖醛酸糖苷酶裂解的位点(也参见US 2012/0107332，通过引用并入本文)。在一些实施例中，葡糖苷酸单元包含通过糖苷键(-O'-)与如下所示的式的自消式基团(Z)连接的糖部分(Su)(还参见US2012/0107332，并入这里参考)。
糖苷键(-O'-)通常是β-葡糖醛酸糖苷酶裂解位点，例如可由人溶酶体β-葡糖醛酸糖苷酶裂解的键。在葡糖苷酸单元的上下文中，术语“自消式基团”是指二官能或三官能化学部分，其能够将两个或三个间隔开的化学部分(即，糖部分(通过糖苷键)、与药物部分(直接或间接通过间隔子单元)以及在一些实施例中的接头(直接或间接通过担架单元)共价连接到稳定分子中。如果其与糖部分的键被裂解，则自消式基团将自发地与第一化学部分(例如，间隔子或药物单元)分离。
在一些实施例中，糖部分(Su)是环状己糖(例如吡喃糖)或环戊糖(例如呋喃糖)。在一些实施例中，吡喃糖是葡糖苷酸或己糖。糖部分通常呈β-D构象。在一个具体实施例中，吡喃糖是β-D-葡糖苷酸部分(即，即通过可被β-葡糖醛酸糖苷酶裂解的糖苷键与自消式基团-Z-连接的β-D-葡糖醛酸)。在一些实施例中，糖部分是未取代的(例如，天然存在的环状己糖或环戊糖)。在其他实施例中，糖部分可以是取代的β-D-葡糖苷酸(即，被一个或多个基团取代的葡糖醛酸，例如氢、羟基、卤素、硫、氮或低级烷基。在一些实施例中，葡糖苷酸单元具有US 2012/0107332中描述的式之一，其通过引用并入本文。
在一些实施方案中，接头包含间隔单元(-Y-)，当存在氨基酸单元(或葡糖苷酸单元，也参见US2012/0107332，通过引用并入本文)时，其存在时将氨基酸单元连接至药物部分。或者，当氨基酸单元不存在时，间隔子单元将担架单元连接到药物部分。当氨基酸单元和担架单元都不存在时，间隔子单元还可以将药物单元连接到抗体单元。
间隔子单元有两种通用类型：非自消式或自消式。非自消式间隔子单元是其中部分或全部间隔子单元在从抗体-药物偶联物裂解(特别是酶促)氨基酸单元(或葡糖苷酸单元)后保持与药物部分结合的单元。非自消式间隔子单元的实例包括但不限于(甘氨酸-甘氨酸)间隔子单元和甘氨酸间隔子单元(参见US 8,309,093，在此引入作为参考))。自消式间隔子的其他实例包括，但不限于与PAB基团电子相似的芳族化合物，例如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物(Hay等人，1999，Bioorg.Med.Chem.Lett.[生物组织化学通讯]9:2237)和邻-或对-氨基苄基乙缩醛。可以使用在酰胺键水解后进行环化的间隔子，例如取代和未取代的4-氨基丁酸酰胺(Rodrigues等人,1995,Chemistry Biology[化学生物学]2:223)、适当取代的双环[2.2.1]和双环[2.2.2]环***(Storm等人,1972,J.Amer.Chem.Soc.[美国化学学会杂志]94:5815)和2-氨基苯基丙酸酰胺(Amsberry等人，1990，J.Org.化学。55：5867)。消除在甘氨酸的α-位取代的含胺药物(Kingsbury等人,1984,J.Med.Chem.[医学化学期刊]27:1447)也是自消式间隔子的实例。。
自消式间隔子的其他实例包括但不限于与PAB基团电子地相似的芳族化合物，例如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物(参见例如，Hay等人,1999,Bioorg.Med.Chem.Lett.[生物组织医学化学通讯]9:2237)和邻-或对-氨基苄基乙缩醛。可以使用在酰胺键水解后进行环化的间隔子，例如取代和未取代的4-氨基丁酸酰胺(参见例如，Rodrigues等人,1995,Chemistry Biology[化学生物学]2:223)、适当取代的双环[2.2.1]和双环[2.2.2]环***(例如，参见Storm等人,1972,J.Amer.Chem.Soc.[美国化学学会杂志]94:5815)和2-氨基苯基丙酸酰胺(例如参见，Amsberry等人,1990,J.Org.Chem.[有机化学期刊]55:5867)。消除在甘氨酸的α-位取代的含胺药物(参见例如，Kingsbury等人，1984，J.Med.Chem.[医学化学期刊]27:1447)也是自消式间隔子的实例。
其他合适的间隔子单元公开在公开的美国专利申请号2005-0238649中，其公开内容通过引用结合在此。
产生ADC的另一种方法涉及使用异双功能交联剂，其将抗CD98抗体与药物部分连接。可以使用的交联剂的实例包括N-琥珀酰亚胺基4-(5-硝基-2-吡啶基二硫)-戊酸酯或高度水溶性的类似物N-磺基琥珀酰亚胺基4-(5-硝基-2-吡啶基二硫)-戊酸酯、N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫)丁酸酯(SPDB)、N-琥珀酰亚胺基-4-(5-硝基-2-吡啶基二硫)丁酸酯(SNPB)、和N-磺基琥珀酰亚胺基-4-(5-硝基-2-吡啶基二硫)丁酸酯(SSNPB)、N-琥珀酰亚胺基-4-甲基-4-(5-硝基-2-吡啶基二硫)戊酸酯(SMNP)、N-琥珀酰亚胺基-4-(5-N,N-二甲基羧氨基-2-吡啶基二硫)丁酸酯(SCPB)或N-磺基琥珀酰亚胺基4-(5-N,N-二甲基羧氨基-2-吡啶基二硫)丁酸酯(SSCPB))。可以用交联剂(N-琥珀酰亚胺基4-(5-硝基-2-吡啶基二硫)-戊酸酯、N-磺基琥珀酰亚胺基4-(5-硝基-2-吡啶基二硫)-戊酸酯、SPDB、SNPB、SSNPB、SMNP、SCPB、或SSCPB)修饰本发明的抗体，然后可以与少量过量的含有硫醇部分的特定药物反应，以产生极好的ADC产率。优选地，交联剂是如美国专利号6,913,748中所描述的式的化合物，其通过引用并入本文。
在一个实施例中，带电荷的接头(也称为前带电荷接头)用于将抗CD98抗体与药物偶联以形成ADC。带电接头包括在细胞处理后变为带电的接头。在特定ADC的接头中或在细胞处理后的药物上存在带电基团提供了若干优点，例如(i)ADC的水溶性更高，(ii)在水溶液中更高浓度下操作的能力，(iii)每个抗体连接更多药物分子的能力，可能导致更高的效力，(iv)带电的偶联物种类保留在靶细胞内的潜力，导致更高的效力，和(v)提高了多药耐药细胞的敏感性，这种细胞不能从细胞中输出带电荷的药物。一些合适的带电荷或前带电荷的交联剂及其合成的实例示于美国专利号8,236,319的图1至10中，并通过引用结合到本文中。优选地，带电荷或前带电荷的交联剂是含有磺酸盐，磷酸盐，羧基或季胺取代基的那些，其显著增加了ADC的溶解度，特别是对于具有2-20个偶联药物的ADC。在偶联物在细胞中代谢后，由含有前带电荷部分的接头制备的偶联物将产生一个或多个带电荷的部分。
可与组合物和方法一起使用的接头的其他实例包括缬氨酸-瓜氨酸；马来酰亚胺基己酰基；氨基苯甲酸；p-氨基苄基氨基甲酰基(PAB)；溶酶体酶-可裂解接头；马来酰亚胺基己酰基-聚乙二醇(MC(PEG)6-OH)；N-甲基-缬氨酸瓜氨酸；N-琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)；N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基二硫)丁酸酯(SPDB)；和N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基硫)戊酸酯(SPP)(也参见US 2011/0076232)。用于本发明中使用的另一种接头包括抗生物素蛋白-生物素键，以提供含抗生物素蛋白-生物素的ADC(还参见美国专利号4,676,980，PCT公开号WO1992/022332A2、WO1994/016729A1、WO1995/015770A1、WO1997/031655A2、WO1998/035704A1、WO1999/019500A1、WO2001/09785A2、WO2001/090198A1、WO2003/093793A2、WO2004/050016A2、WO2005/081898A2、WO2006/083562A2、WO2006/089668A1、WO2007/150020A1、WO2008/135237A1、WO2010/111198A1、WO2011/057216A1、WO2011/058321A1、WO2012/027494A1、和EP77671B1)，其中一些这样的接头对生物素酶裂解具有抗性。可以在本发明中使用的另外的接头包括一个黏合/对接因子对(cohesin/dockerin pair)，以提供含黏合-对接因子-ADC(参见PCT公开号WO2008/097866A2，WO2008/097870A2，WO2008/103947A2，和WO2008/103953A2)。
用于本发明的另外的接头可含有非肽聚合物(实例包括但不限于聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯***、PLA(聚(乳酸))、PLGA(聚(乳酸-乙醇酸))及其组合，其中优选的聚合物是聚乙二醇(也参见PCT公开号WO2011/000370)。另外的接头还描述于WO 2004-010957，美国公开号20060074008，美国公开号20050238649和美国公开号20060024317中，其各自通过引用整体并入本文。
对于包含美登木素生物碱的ADC，美登木素生物碱上的许多位置可用作化学连接连接部分的位置。在一个实施例中，美登木素生物碱包含含有反应性化学基团的连接部分，其是美登醇及其类似物的C-3酯，其中连接部分含有二硫键，并且化学反应性基团包含N-琥珀酰亚胺基或N-磺基琥珀酰亚胺酯。例如，具有羟基的C-3位，用羟甲基修饰的C-14位，用羟基修饰的C-15位和具有羟基的C-20位都是有用的。连接部分最优选与美登醇的C-3位连接。
通过接头将药物与抗体偶联可以通过本领域已知的任何技术完成。许多不同的反应可用于药物和接头与抗体的共价连接。这可以通过抗体的氨基酸残基的反应来实现，包括赖氨酸的胺基团，谷氨酸和天冬氨酸的游离羧酸基团，半胱氨酸的巯基和芳族氨基酸的各种部分。最常用的共价附接的非特异性方法之一是碳二亚胺反应，以将化合物的羧基(或氨基)连接到抗体的氨基(或羧基)基团。另外，已经使用双功能药剂如二醛或亚氨酸酯将化合物的氨基与抗体的氨基连接。席夫碱反应也可用于将药物附接到抗体上。该方法涉及含有二醇或羟基的药物的高碘酸盐氧化，从而形成醛，然后醛与粘合剂反应。通过形成具有抗体氨基的席夫碱而发生附接。异硫氰酸酯也可用作偶联剂以将药物共价附接至抗体。其他技术是本领域技术人员已知的并且在本发明的范围内。
在某些实施例中，作为接头前体的中间体在适当条件下与药物反应。在某些实施例中，反应性基团用于药物或中间体。随后在适当条件下使药物与中间体或衍生化药物之间的反应产物与抗CD98抗体反应。美国专利申请公开号20030083263、20050238649和20050009751中描述了示例性接头、担架单元、氨基酸单元、自消式间隔子单元的合成和结构，各自通过引用并入本文。
ADC的稳定性可以通过标准分析技术测量，例如质谱，HPLC和分离/分析技术LC/MS。
IV.抗CD98 ADC的纯化
可以以收集具有某些DAR的ADC的方式实现ADC的纯化。例如，HIC树脂可用于从具有最佳药物/抗体比率(DAR)(例如DAR为4或更低)的ADC中分离高载药量的ADC。在一个实施例中，将疏水性树脂加入到ADC混合物中，使得不希望的ADC，即较高载药的ADC与树脂结合，并且可以从混合物中选择性地除去。在某些实施例中，ADC的分离可以通过使ADC混合物(例如，包含4或更低的ADC的载药种类和6或更高的ADC的载药种类的混合物)与疏水性树脂接触来实现，其中树脂的量足以结合从ADC混合物中去除的载药种类。将树脂和ADC混合物混合在一起，使得被去除的ADC种类(例如，6或更高的载药种类)与树脂结合并且可以与ADC混合物中的其他ADC种类分离。该方法中使用的树脂的量基于待去除的物质与树脂之间的重量比，其中所用树脂的量不允许所希望的载药种类的大量结合。因此，可以使用方法将平均DAR减小到小于4。此外，本文所述的纯化方法可用于分离具有任何所期望载药种类范围的ADC，例如载药种类为4或更低，载药种类为3或更低，载药种类为2或更低，载药种类为1或更低。
某些种类的一种或多种分子基于这些种类与疏水性树脂之间的疏水相互作用而结合到表面。在一个实施例中，本发明的方法是指依赖于疏水性树脂和ADC混合物的混合的纯化方法，其中加入混合物中的树脂的量决定了将结合哪个种类(例如，具有6或更高的DAR的ADC)。在从表达***(例如，哺乳动物表达***)产生和纯化抗体后，抗体被还原并通过偶联反应与药物偶联。得到的ADC混合物通常包含具有一定范围内DAR的ADC，例如1至8。在一个实施例中，ADC混合物包含4或更低的载药种类以及6或更高的载药种类。根据本发明的方法，ADC混合物可以使用工艺纯化，例如但不限于分批工艺，从而选择具有4或更低载药种类的ADC并将其与具有更高药物负荷的ADC(例如，具有6或更高的载药种类的ADC)分离。值得注意的是，本文所述的纯化方法可用于分离具有任何所需DAR范围的ADC，例如，DAR为4或更低，DAR为3或更低，DAR为2或更低。
因此，在一个实施例中，包含4或更低的载药种类以及6或更高的载药种类的ADC混合物可以与疏水性树脂接触以形成树脂混合物，其中与ADC混合物接触的疏水性树脂的量足以使6或更高的载药种类与树脂结合，但不允许4或更低的载药种类的大量结合；并且从ADC混合物中去除疏水性树脂，从而获得包含ADC的组合物，其中所述组合物包含少于15％的6或更高的载药种类，并且其中ADC包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗体。在单独的实施例中，本发明的方法包括使包含4或更低的载药种类以及6或更高的载药种类的ADC混合物与疏水性树脂接触以形成树脂混合物，其中与ADC混合物接触的疏水性树脂的量足以使6或更高的载药种类与树脂结合，但不允许4或更低的载药种类的大量结合；并且从ADC混合物中去除疏水性树脂，从而获得包含ADC的组合物，其中所述组合物包含少于15％的6或更高的载药种类，并且其中ADC包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗体，其中疏水性树脂的重量是ADC混合物中6或更高的载药种类重量的3至12倍。
本文描述的ADC分离方法可以使用分批纯化方法进行。分批纯化方法通常包括将ADC混合物加入容器中的疏水性树脂中，混合，随后将树脂与上清液分离。例如，在分批纯化的情况下，疏水性树脂可以在所需的平衡缓冲液中制备或平衡。由此可以获得疏水性树脂的浆料。然后可使ADC混合物与浆料接触以吸附有待通过疏水性树脂分离的特定种类的ADC。然后可以将包含不与疏水性树脂材料结合的所需ADC的溶液与浆料分离，例如通过过滤或通过使浆料沉降并除去上清液。可以对所得浆料进行一个或多个洗涤步骤。为了洗脱结合的ADC，可以降低盐浓度。在一个实施例中，本发明中使用的方法包括不超过50g的疏水性树脂。
因此，分批方法可用于使包含4或更低的载药种类以及6或更高的载药种类的ADC混合物与疏水性树脂接触以形成树脂混合物，其中与ADC混合物接触的疏水性树脂的量足以使6或更高的载药种类与树脂结合，但不允许4或更低的载药种类的大量结合；并且从ADC混合物中去除疏水性树脂，从而获得包含ADC的组合物，其中所述组合物包含少于15％的6或更高的载药种类，并且其中ADC包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗体。在单独的实施例中，分批方法用于使包含4或更低的载药种类以及6或更高的载药种类的ADC混合物与疏水性树脂接触以形成树脂混合物，其中与ADC混合物接触的疏水性树脂的量足以使6或更高的载药种类与树脂结合，但不允许4或更低的载药种类的大量结合；并且从ADC混合物中去除疏水性树脂，从而获得包含ADC的组合物，其中所述组合物包含少于15％的6或更高的载药种类，并且其中ADC包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗体，其中疏水性树脂的重量是ADC混合物中6或更高的载药种类重量的3至12倍。
或者，在单独的实施例中，可以使用循环过程进行纯化，由此将树脂包装在容器中并使ADC混合物通过疏水性树脂床，直到已经除去待分离的特定种类的一种或多种ADC。然后将上清液(含有所需的ADC物质)从容器中泵出，并且可以对树脂床进行洗涤步骤。
循环工艺可用于使包含4或更低的载药种类以及6或更高的载药种类的ADC混合物与疏水性树脂接触以形成树脂混合物，其中与ADC混合物接触的疏水性树脂的量足以使6或更高的载药种类与树脂结合，但不允许4或更低的载药种类的大量结合；并且从ADC混合物中去除疏水性树脂，从而获得包含ADC的组合物，其中所述组合物包含少于15％的6或更高的载药种类，并且其中ADC包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗体。在单独的实施例中，循环工艺用于使包含4或更低的载药种类以及6或更高的载药种类的ADC混合物与疏水性树脂接触以形成树脂混合物，其中与ADC混合物接触的疏水性树脂的量足以使6或更高的载药种类与树脂结合，但不允许4或更低的载药种类的大量结合；并且从ADC混合物中去除疏水性树脂，从而获得包含ADC的组合物，其中所述组合物包含少于15％的6或更高的载药种类，并且其中ADC包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗体，其中疏水性树脂的重量是ADC混合物中6或更高的载药种类重量的3至12倍。
或者，流通过程可用于纯化ADC混合物以得到包含大多数具有特定所期望的DAR的ADC的组合物。在流通过程中，将树脂填充在容器中，例如柱，并使ADC混合物通过填充树脂，使得所期望的ADC种类基本上不与树脂结合并流通过树脂，并且不期望的ADC种类与树脂结合。流通过程可以以单程模式(其中目标ADC种类作为单次通过容器的树脂的结果而获得)或以多次通过模式(其中目标ADC种类是作为多次通过容器的树脂的结果而获得)。执行流通过程，使得所选树脂的重量与不期望的ADC群结合，并且所期望的ADC(例如，DAR 2-4)流过树脂并在一次或多次通过后收集在流过的流中。
流通过程可用于使包含4或更低的载药种类以及6或更高的载药种类的ADC混合物与疏水性树脂接触，其中与ADC混合物接触的疏水性树脂的量足以使6或更高的载药种类与树脂结合，但不允许4或更低的载药种类的大量结合；其中4或更低的载药种类流经树脂且随后在一个或多个流过之后收集，从而获得包含所希望的ADC(例如DAR 2-4)的组合物，其中所述组合物包含少于15％的6或更高的载药种类，并且其中ADC包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗体。在单独的实施例中，流通过程用于通过使ADC混合物流经树脂使包含4或更低的载药种类以及6或更高的载药种类的ADC混合物与疏水性树脂接触，其中与ADC混合物接触的疏水性树脂的量足以使6或更高的载药种类与树脂结合，但不允许4或更低的载药种类的大量结合；其中4或更低的载药种类流经树脂且随后收集，从而获得包含ADC的组合物，其中所述组合物包含少于15％的6或更高的载药种类，并且其中ADC包含与Bcl-xL抑制剂偶联的抗体，其中疏水性树脂的量是ADC混合物中6或更高的载药种类重量的3至12倍。
在流通过程之后，可以用一次或多次洗涤来洗涤树脂，以进一步回收具有所期望DAR范围的ADC(在洗涤滤液中发现)。例如，可以使用具有降低的导电性的多个洗涤来进一步回收具有目标DAR的ADC。随后将从洗涤树脂获得的洗脱材料与流通过程产生的滤液合并，以改善具有目标DAR的ADC的回收。
上述分批，循环和流通过程纯化方法基于使用疏水性树脂来分离ADC的高载药种类和低载药种类。疏水性树脂包含疏水基团，其与ADC的疏水性质相互作用。ADC上的疏水基团与疏水性树脂内的疏水基团相互作用。蛋白质越疏水，它与疏水性树脂相互作用越强。
疏水性树脂通常包含与疏水性配体(例如烷基或芳基)偶联的基础基质(例如，交联的琼脂糖或合成的共聚物材料)。许多疏水性树脂可商购获得。实例包括但不限于具有低或高取代度的苯基琼脂糖TM(Phenyl SepharoseTM)6快速流(法玛西亚LKB生物技术(Pharmacia LKB Biotechnology)，AB，瑞典)；苯基琼脂糖TM(Phenyl SepharoseTM)高效(法玛西亚LKB生物技术(Pharmacia LKB Biotechnology)，AB，瑞典)；辛基琼脂糖TM(OctylSepharoseTM)高效(法玛西亚LKB生物技术(Pharmacia LKB Biotechnology)，AB，瑞典)；FractogelTMEMD丙基或FractogelTMEMD苯基柱(E.默克公司(Merck)，德国)；Macro-PrepTM甲基或Macro-PrepTM.叔丁基支持物(美国伯乐公司(Bio-Rad)、加利福尼亚州)；WP HI-丙基(C3)TM(贝克公司(J.T.Baker)、新泽西州)；和ToyopearlTM醚，己基，苯基或丁基(涂索哈斯(TosoHaas)、PA)。在一个实施例中，疏水性树脂是丁基疏水性树脂。在另一个实施例中，疏水性树脂是苯基疏水性树脂。在另一个实施例中，疏水性树脂是己基疏水树脂，辛基疏水树脂或癸基疏水树脂。在一个实施例中，疏水性树脂是具有正丁基配体的甲基丙烯酸聚合物(例如丁基-600M)。
用于纯化ADC混合物以获得具有所期望DAR的组合物的其它方法描述于美国申请号14/210,602(美国专利申请公开号US2014/0286968)中，其全部内容通过引用并入本文。
在本发明的某些实施例中，本文描述的具有DAR2的ADC从具有更高或更低DAR的ADC中纯化。这种纯化的DAR2ADC在本文中称为“E2”。
在本发明的某些实施例中，本文描述的具有DAR2的ADC从具有更高或更低DAR的ADC中纯化。这种纯化的DAR2ADC在本文中称为“E2”。在一个实施例中，本发明提供了包含ADC混合物的组合物，其中至少75％的ADC是具有DAR2的抗CD98 ADC(如本文所述的那些)。在另一个实施例中，本发明提供了包含ADC混合物的组合物，其中至少80％的ADC是具有DAR2的抗CD98 ADC(如本文所述的那些)。在另一个实施例中，本发明提供了包含ADC混合物的组合物，其中至少85％的ADC是具有DAR2的抗CD98 ADC(如本文所述的那些)。在另一个实施例中，本发明提供了包含ADC混合物的组合物，其中至少90％的ADC是具有DAR2的抗CD98ADC(如本文所述的那些)。
V.抗CD98抗体和抗CD98 ADC的用途
本发明的抗体和抗体部分(和ADC)优选能够体内中和人CD98活性。因此，本发明的此类抗体和抗体部分可用于抑制hCD98活性，例如在含有hCD98的细胞培养物中，在人受试者或具有本发明的抗体与之交叉反应的CD98的其他哺乳动物受试者中。在一个实施例中，本发明提供抑制hCD98活性的方法，其包括使hCD98与本发明的抗体或抗体部分接触，从而抑制hCD98活性。例如，在含有或怀疑含有hCD98的细胞培养物中，可以将本发明的抗体或抗体部分添加到培养基中以抑制培养物中的hCD98活性。
在本发明的另一个实施例中是一种用于降低受试者中hCD98活性的方法，所述受试者有利地来自患有CD98活性有害的疾病或失调的受试者。本发明提供了降低患有这种疾病或失调的受试者中CD98活性的方法，该方法包括向受试者给予本发明的抗体或抗体部分，使得受试者中的CD98活性降低。优选地，CD98是人CD98，并且受试者是人受试者。或者，受试者可以是表达本发明的抗体能够结合的CD98的哺乳动物。此外，受试者可以是已经引入CD98的哺乳动物(例如，通过给予CD98或通过表达CD98转基因)。可以将本发明的抗体给予人受试者用于治疗目的。此外，本发明的抗体可以给予表达CD98的非人哺乳动物，该抗体能够与该CD98结合用于兽医目的或作为人疾病的动物模型。关于后者，这种动物模型可用于评估本发明抗体的治疗功效(例如，剂量测试和给药时间过程)。
如本文所用，术语“CD98活性有害的失调”旨在包括疾病和其他失调，其中患有该失调的受试者中CD98的存在已经显示或怀疑对失调的病理生理学负责或是导致失调恶化的因素。因此，CD98活性有害的失调是预期CD98活性降低可减轻失调的症状和/或进展的失调。此类失调可例如由患有该失调的受试者的生物流体中CD98的浓度增加(例如，受试者的肿瘤、血清、血浆、滑液等中CD98的浓度增加)证明，其可以例如使用如上所述的抗CD98抗体检测。可以用本发明的抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合片段治疗的失调的非限制性实例包括下面讨论的那些失调。例如，合适的失调包括但不限于多种癌症，包括但不限于乳腺癌、肺癌、神经胶质瘤、***癌、胰腺癌、结肠癌、头颈癌和肾癌。可使用本文披露的组合物和方法治疗的癌症的其他实例包括鳞状细胞癌(例如鳞状肺癌或鳞状头颈癌)、三阴性乳腺癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌、和间皮瘤。在一个实施例中，将本文披露的抗体和ADC用于治疗实体瘤，例如，抑制实体瘤的生长或减少实体瘤的尺寸、过表达CD98或是CD98阳性。在一个实施例中，本发明涉及CD98扩增的鳞状肺癌的治疗。在一个实施例中，本文公开的抗体和ADC用于治疗CD98扩增的鳞状头颈癌。在另一个实施例中，本文公开的抗体和ADC用于治疗三阴性乳腺癌(TNBC)。本文所述的疾病和失调可以通过本发明的抗CD98抗体或ADC以及包含此类抗CD98抗体或ADC的药物组合物来治疗。
在某些实施例中，将本文披露的抗体和ADC给予至对其有需要的受试者，以治疗可能展现出升高水平的CD98的晚期实体瘤类型。此类肿瘤的实例包括但不限于头颈鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、三阴性乳腺癌、结肠直肠癌和多形性胶质母细胞瘤。
在某些实施例中，本发明包括在具有实体瘤的受试者中抑制或减少实体瘤生长的方法，所述方法包括向患有实体瘤的受试者给予本文所述的抗CD98抗体或ADC，使得实体瘤生长受到抑制或减少。在某些实施例中，实体瘤是非小细胞肺癌或胶质母细胞瘤。在进一步的实施例中，实体瘤是CD98阳性肿瘤或表达CD98的实体瘤。在进一步的实施例中，实体瘤是CD98扩增的实体瘤或CD98过表达的实体瘤。在某些实施例中，将本文描述的抗CD98抗体或ADC单独或与额外的药剂(例如，辐射和/或替莫唑胺)组合给予至患有多形性胶质母细胞瘤的受试者。
在某些实施例中，本发明包括在具有实体瘤的受试者中抑制或减少实体瘤生长的方法，所述实体瘤被鉴定为表达CD98或过表达CD98的肿瘤，所述方法包括向具有实体瘤的受试者给予如本文所述的抗CD98抗体或ADC，使得实体肿瘤生长受到抑制或降低。用于鉴定表达CD98的肿瘤(例如，CD98过表达肿瘤)的方法是本领域已知的，并且包括FDA批准的测试和验证测定。此外，基于PCR的测定也可用于鉴定CD98过表达肿瘤。随后可以使用本领域已知的标准方法，例如通过凝胶电泳分析扩增的PCR产物，以确定PCR产物的大小。此类测试可用于鉴定可用本文所述的方法和组合物治疗的肿瘤。
根据本发明，可以使用本领域可用的任何基因治疗。关于基因治疗的方法的一般综述，参见Goldspiel等人,1993,Clinical Pharmacy[临床药学]12:488-505；Wu及Wu,1991,Biotherapy[生物疗法]3:87-95；Tolstoshev,1993,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.[药理学和毒理学综述年鉴]32:573-596；Mulligan,Science[科学]260:926-932(1993)；以及Morgan和Anderson,1993,Ann.Rev.Biochem.[生物化学综述年鉴]62:191-217；1993年5月,TIBTECH 11(5):155-215。重组DNA技术领域通常已知的可用方法描述于Ausubel等人(编),Current Protocols in Molecular Biology[当代分子生物学协议],约翰威利出版社(John Wiley&Sons),纽约(1993)；及Kriegler,基因转移和表达(Gene Transfer andExpression),A Laboratory Manual[实验室手册],斯托克顿出版社(Stockton Press),纽约(1990)中。基因治疗的各种方法的详细说明提供于US20050042664A1中，其以引用的方式并入本文中。
在另一方面中，本申请的特征在于一种治疗(例如，治愈、阻抑、改善、延迟或预防发作或预防再现或复发)或预防受试者中CD98相关失调的方法。该方法包括：以足以治疗或预防CD98相关障碍的量向受试者施用CD98结合剂(特别是拮抗剂)，例如，如本文所述的抗CD98抗体或其片段。CD98拮抗剂(例如抗CD98抗体或其片段)可以单独或与本文所述的其他治疗方式组合给予于受试者。
本发明的抗体或ADC或其抗原结合部分可以单独使用或组合使用以治疗这些疾病。应当理解，本发明的抗体或其抗原结合部分可以单独使用或与额外的药剂例如治疗剂组合使用，所述额外的药剂由技术人员选择用于其预期目的。例如，额外的药剂可以是本领域公认的治疗剂，其可用于治疗由本发明的抗体治疗的疾病或病症。额外的药剂也可以是赋予治疗组合物有益属性的药剂，例如，影响组合物粘度的药剂。
应进一步了解，将包括在本发明内的组合为适用于其既定目的的那些组合。以下阐述的药剂是出于说明性目的且不意欲受限制的。作为本发明一部分的组合可以是本发明的抗体和至少一种选自下列列表的其他药剂。如果组合使得形成的组合物可以执行其预期的功能，则该组合还可以包括一种以上的额外的药剂，例如，两种或三种额外的药剂。
组合疗法可以包括一种或多种CD98拮抗剂，例如抗CD98抗体或其片段，与一种或多种额外治疗剂一起配制和/或共给予，该一种或多种额外治疗剂例如一种或多种细胞因子及生长因子抑制剂、免疫抑制剂、消炎剂(例如全身性消炎剂)、抗纤维化剂、代谢抑制剂、酶抑制剂和/或细胞毒性或细胞生长抑制剂、有丝***抑制剂、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂、基因治疗运载体、烷化剂、抗血管生成剂、抗代谢物、含硼剂、化学保护剂、激素、抗激素剂、皮质类固醇、光敏性治疗剂、寡核苷酸、放射性核素剂、拓扑异构酶(topoisomerase)抑制剂、激酶抑制剂或放射增敏剂，如本文详细描述。
在一个具体实施例中，本文所述的抗CD98结合蛋白，例如抗CD98抗体，与抗癌剂或抗肿瘤剂组合使用。术语“抗癌剂”和“抗肿瘤剂”是指用于治疗恶性肿瘤的药物，例如癌性生长。药物治疗可以单独使用，或与其他治疗如手术或放射疗法联合使用。根据所涉及器官的性质，可以在癌症治疗中使用若干类药物。例如，乳腺癌通常由***刺激，并且可以用使性激素失活的药物治疗。类似地，***癌可以用使雄激素(雄性激素)失活的药物治疗。可以与本发明的抗CD98抗体或ADC一起使用的抗癌剂包括以下药剂：
除了上述抗癌剂之外，本文所述的抗CD98抗体和ADC可以与本文所述的药剂组合给予。此外，上述抗癌剂也可用于本发明的ADC中。
在特定的实施例中，抗CD98抗体或ADC可以单独给予或与另一种抗癌剂一起给予，所述抗癌剂与抗体结合或协同作用以治疗与CD98活性相关的疾病。这些抗癌剂包括，例如本领域熟知的药剂(例如，细胞毒素、化学治疗剂、小分子和放射)。抗癌剂的实例包括但不限于Panorex(葛兰素威康公司(Glaxo-Welcome))、利妥昔单抗(IDEC公司/遗传技术公司(Genentech)/霍夫曼la罗氏公司(Hoffman laRoche))、吉妥单抗(惠氏公司(Wyeth))、阿仑单抗(Millennium公司)、替伊莫单抗(IDEC公司和先灵葆雅公司(Schering AG)))、托西莫单抗(Corixa公司/葛兰素史克公司(GSK))、西妥昔单抗(英克隆公司(Imclone)/BMS公司)、阿瓦斯汀(遗传技术公司(Genentech))和赫塞汀(遗传技术公司(Genentech)/霍夫曼la罗氏公司(Hoffman laRoche))。其他抗癌剂包括但不限于美国专利号7,598,028和国际公开号WO2008/100624中公开的那些，其内容通过引用并入本文。可以在给予本发明的抗体或其抗原结合部分的同时或之前或之后给予一种或多种抗癌剂。
在本发明的具体实施例中，本文所述的抗CD98抗体或ADC可用于与凋亡剂(例如Bcl-xL抑制剂或Bcl-2(B细胞淋巴瘤2)抑制剂(例如，“ABT-199(维奈托克(venetoclax)))的组合疗法用于治疗受试者中的癌症，例如白血病。在一个实施例中，本文所述的抗CD98抗体或ADC可用于与Bcl-xL抑制剂的组合疗法中以治疗癌症。在一个实施例中，本文所述的抗CD98抗体或ADC可用于与维奈托克(venetoclax)的组合疗法中以治疗癌症。
在本发明的具体实施例中，本文所述的抗CD98抗体或ADC可用于与NAMPT抑制剂的组合疗法(参见US 2013/0303509中的抑制剂艾伯维公司(AbbVie,Inc.)的实例，其通过引用并入本文)中用于治疗有此需要的受试者。NAMPT(也称为前B细胞集落增强因子(PBEF)和内脏脂肪素)是催化烟酰胺的磷酸核糖基化的酶，并且是挽救NAD的两种途径之一中的限速酶。在本发明的一个实施例中，本文所述的抗CD98抗体和ADC与NAMPT抑制剂组合给予，用于治疗受试者的癌症。
在本发明的具体实施例中，本文所述的抗CD98抗体或ADC可以用在于SN-38的组合疗法中，SN-38是拓扑异构酶抑制剂伊立替康的活性代谢物。
在本发明的其他实施例中，本文所述的抗CD98抗体或ADC可用在与PARP(聚ADP核糖聚合酶)抑制剂(例如，维利帕尼(veliparib))的组合疗法中，以治疗癌症(包括乳腺癌、卵巢癌和非-小细胞肺癌)。
可以与本文所述的抗CD98抗体或抗CD98 ADC共同给予和/或配制的另外治疗剂的其他实例包括但不限于以下一种或多种：吸入型类固醇；β-激动剂，例如，短效或长效β-激动剂；白三烯或白三烯受体的拮抗剂；组合药物例如ADVAIR；IgE抑制剂，例如，抗IgE抗体(例如，奥马珠单抗)；磷酸二酯酶抑制剂(例如，PDE4抑制剂)；黄嘌呤；抗胆碱能药物；肥大细胞稳定剂，如色甘酸；IL-4抑制剂；IL-5抑制剂；嗜酸性粒细胞趋化因子/CCR3抑制剂；组胺或其受体(包括H1、H2、H3和H4)的拮抗剂，以及***素D或其受体(DP1和CRTH2)的拮抗剂。这种组合可用于治疗例如哮喘和其他呼吸疾病。可以与本文所述的抗CD98抗体或抗CD98 ADC共同给予和/或配制的另外治疗剂的其他实例包括但不限于替莫唑胺、依鲁替尼、杜维司(duvelisib)和艾代拉里斯(idelalisib)中的一种或多种。可以与一种或多种抗CD98抗体或其片段共同给予和/或配制的治疗剂的另外实例包括以下一种或多种：TNF拮抗剂(例如，TNF受体的可溶性片段，例如，p55或p75人TNF受体或其衍生物，例如，75kD TNFR-IgG(75kD TNF受体-IgG融合蛋白、恩博(ENBREL))；TNF酶拮抗剂，例如，TNF转化酶(TACE)抑制剂；毒蕈碱受体拮抗剂；TGF-β拮抗剂；干扰素γ；吡非尼酮(perfenidone)；化学治疗剂，例如甲氨蝶呤，来氟米特或西罗莫司(雷帕霉素)或其类似物，例如CCI-779；COX2和cPLA2抑制剂；NSAID；免疫调节剂；p38抑制剂、TPL-2、MK-2和NFkB抑制剂等。
其他优选组合为一种或多种细胞因子抑制型消炎药(CSAID)；其他人类细胞因子或生长因子以及这些细胞因子及生长因子的受体的抗体或拮抗剂，此类细胞因子及生长因子例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、IL-21、IL-31、干扰素、EMAP-II、GM-CSF、FGF、EGF、PDGF及内皮素-1。本发明的抗体或其抗原结合部分可与针对细胞表面分子(诸如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90、CTLA、CTLA-4、PD-1)或其配体(包括CD154(gp39或CD40L))的抗体组合。
优选的治疗剂组合可以干扰炎症级联中的不同点；优选的实例包括TNF拮抗剂，如嵌合、人源化或人TNF抗体，阿达木单抗(HUMIRA；D2E7；PCT公开号WO 97/29131和美国专利号6,090,382，通过引用并入本文)，CA2(REMICADE)，CDP 571，及其可溶性p55或p75TNF受体、衍生物，p75TNFR1gG(ENBREL)或p55TNFR1gG(来那西普)，以及TNF转化酶(TACE)抑制剂；类似地，IL-1抑制剂(白细胞介素-1转换酶抑制剂，IL-1RA等)可由于同样的原因而有效。其他优选的组合包括白细胞介素4。
本发明的药物组合物可包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明的抗体或抗体部分。“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间段内有效实现所期望治疗结果的量。抗体或抗体部分的治疗有效量可由本领域中的熟练技术人员确定且可视以下因素而变化：诸如个体的疾病状态、年龄、性别及体重以及抗体或抗体部分在个体中引起所期望应答的能力。治疗有效量还为抗体或抗体部分的治疗有益作用超过任何毒性或有害作用的量。“预防有效量”是指在必要的剂量和时间段内有效实现所期望预防结果的量。通常，由于预防剂量是在疾病之前或在疾病早期用于受试者，因此预防有效量将小于治疗有效量。
可以调整剂量方案以提供最佳的所期望应答(例如，治疗或预防应答)。举例而言，可给予单一大剂量，可随时间给予若干分次剂量，或可依治疗情况的紧急性所指示按比例减少或增加剂量。就易给药性及剂量的均一性而言，将非经肠组合物配制成单位剂型尤其有利。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为待治疗的哺乳动物受试者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单位含有预定量的活性化合物，经计算可与所需的药物载体一起产生所需的治疗效果。本发明的单位剂型的规格由下列情况指定且直接视下列情况而定：(a)活性化合物的独特特征及欲达成的特定治疗或预防效果，及(b)混合此类活性化合物以治疗个体敏感性的技术中的固有限制。
治疗或预防有效量的本发明的ADC，抗体或抗体部分的示例性，非限制性范围是0.1mg/kg-20mg/kg，更优选1mg/kg-10mg/kg。在一个实施例中，本文所述的抗体和ADC的剂量为1mg/kg至6mg/kg、包括其中所述的个体剂量，例如，1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg和6mg/kg。在另一个实施例中，本文所述的抗体和ADC的剂量为1μg/kg至200μg/kg，包括其中列举的各个剂量，例如，1μg/kg、2μg/kg、3μg/kg、4μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg、40μg/kg、50μg/kg、60μg/kg、80μg/kg、100μg/kg、120μg/kg、140μg/kg、160μg/kg、180μg/kg和200μg/kg。应注意，剂量值可随欲缓解的病状的类型及严重程度变化。此外应了解，对任何特定受试者而言，特定给药方案应根据受试者需要及给予组合物或监督组合物给予的人员的专业判断而随时调整，且本文所阐述的剂量范围仅为例示性的，且不意欲限制所要求的组合物的范畴或实践。
在一个实施例中，将本文所述的抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为0.1mg/kg至30mg/kg的ADC给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为1mg/kg至15mg/kg的ADC的给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为1mg/kg至10mg/kg的ADC的给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为2mg/kg至3mg/kg的ADC的给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将抗CD98抗体(例如HuAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)作为ADC的剂量为1至4mg/kg。
在一个实施例中，将本文所述的抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为1μg/kg至200μg/kg的ADC给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为5μg/kg至150μg/kg的ADC的给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为5μg/kg至100μg/kg的ADC的给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为5μg/kg至90μg/kg的ADC的给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为5μg/kg至80μg/kg的ADC的给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为5μg/kg至70μg/kg的ADC的给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为5μg/kg至60μg/kg的ADC的给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将抗CD98抗体(例如huAb102、huAb104、huAb108或huAb110)或其抗原结合部分作为剂量为10μg/kg至80μg/kg的ADC的给予有需要的受试者(例如，患有癌症的受试者)。
在一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC(例如huAb102-、huAb104-、huAb108-或huAb110-vc-MMAE以剂量0.1mg/kg至6mg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC(例如huAb102-、huAb104-、huAb108-或huAb110-vc-MMAE)以剂量0.5mg/kg至4mg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC(例如huAb102-、huAb104-、huAb108-或huAb110-vc-MMAE)以剂量为1.8mg/kg至2.4mg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC(例如huAb102-、huAb104-、huAb108-或huAb110-vc-MMAE以剂量1mg/kg至4mg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC(例如huAb102-、huAb104-、huAb108-或huAb110-vc-MMAE)以剂量约1mg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC(例如huAb102-、huAb104-、huAb108-或huAb110-vc-MMAE)以剂量3mg/kg至6mg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC(例如huAb102-、huAb104-、huAb108-或huAb110-vc-MMAE以剂量3mg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC(例如huAb102-、huAb104-、huAb108-或huAb110-vc-MMAE以剂量2mg/kg至3mg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC(例如huAb102-、huAb104-、huAb108-或huAb110-vc-MMAE)以剂量6mg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。
在另一个实施例中，将本文所述的与药物(例如PBD(ADC))偶联的抗CD98抗体以剂量1μg/kg至200μg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC以剂量0.5μg/kg至100μg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC以剂量5μg/kg至90μg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC以剂量5μg/kg至80μg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC以剂量5μg/kg至70μg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。在另一个实施例中，将本文所述的抗CD98 ADC以剂量5μg/kg至60μg/kg给予需要其的受试者(例如，患有癌症的受试者)。
上述剂量可用于给予本文公开的抗CD98 ADC或抗体。
在另一方面中，本申请提供一种用于体外检测样品(例如，生物样品，诸如血清、血浆、组织、活检)中CD98的存在情况的方法。本发明方法可用于诊断失调，例如癌症。该方法包括：(i)使样品或对照样品与本文所述的抗CD98抗体或其片段接触；(ii)检测在抗CD98抗体或其片段与样品或对照样品之间的复合物形成情况，其中相对于对照样品在样品中复合物形成方面的统计学显著变化指示样品中CD98的存在。
鉴于它们结合人CD98的能力，本发明的抗人CD98抗体或其部分(及其ADC)可用于使用常规免疫分析，诸如酶联免疫吸附分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)或组织免疫组织化学来检测人CD98(例如，在生物样品中，诸如血清或血浆)。一方面，本发明提供一种用于检测生物样品中的人CD98的方法，其包含使生物样品与本发明的抗体或抗体部分接触且检测结合至人CD98的抗体(或抗体部分)或未结合抗体(或抗体部分)，从而检测生物样品中的人CD98。可用可检测物质直接或间接标记抗体以促进已结合或未结合抗体的检测。适合的可检测物质包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料及放射性材料。合适的酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基配合物的实例包括链霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合适的荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的实例包括鲁米诺；合适的放射性材料的实例包括3H、14C、35S、90Y，99Tc，111In，125I，131I，177Lu，166Ho或153Sm。
代替对抗体进行标记，可以借由竞争免疫分析，利用经可检测物质标记的rhCD98标准品及未标记的抗人CD98抗体，分析生物流体中的人CD98。在此分析中，将生物样品、经标记的rhCD98标准品及抗人CD98抗体合并且测定结合至未标记的抗体的经标记的rhCD98标准品的量。生物样品中人CD98的量与结合抗CD98抗体的标记的rhCD98标准品的量成反比。类似地，还可借由竞争免疫分析，利用经可检测物质标记的rhCD98标准品及未标记的抗人CD98抗体，分析生物流体中的人CD98。
在又另一方面中，本申请提供一种用于检测活体内CD98的存在的方法(例如，在受试者中活体内成像)。本方法可用于诊断失调，例如，CD98相关失调。该方法包括：(i)在允许抗体或片段与CD98结合的条件下，将本文所述的抗CD98抗体或其片段给予受试者或对照受试者；(ii)检测在抗体或片段与CD98之间的复合物形成，其中相对于对照受试者，受试者中复合物形成的统计学显著变化表明存在CD98。
VI.药物组合物
本发明还提供了药物组合物，其包含本发明的抗体或其抗原结合部分，或ADC和药学上可接受的载体。包含本发明抗体或ADC的药物组合物是用于但不限于诊断、检测或监控失调；预防、治疗、管理或改善失调或其一种或多种症状；和/或用于研究。在特定实施例中，组合物包含一种或多种本发明抗体。在另一实施例中，药物组合物包含一种或多种本发明抗体或ADC及一种或多种除本发明抗体或ADC以外的用于治疗CD98活性有害的失调的预防剂或治疗剂。优选地，预防剂或治疗剂已知有用于或已用于或当前正用于预防、治疗、管理或改善失调或其一种或多种症状。根据这些实施例，组合物可进一步包含载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的抗体和抗体部分或ADC可以掺入适合给予受试者的药物组合物中。通常，药物组合物包含本发明的抗体或抗体部分及药学上可接受的载体。如本文所用，“药学上可接受的载体”包括生理学上兼容的任何及所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及抗真菌剂、等张剂及吸收延迟剂及其类似物。药学上可接受的载体的实例包括水、生理食盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇及其类似物中的一种或多种以及其组合。在许多情况下，在组合物中包括等张剂，例如糖、多元醇(诸如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化钠将为优选的。药学上可接受的载体可进一步包含极少量的辅助物质，诸如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其可增加抗体或抗体部分或ADC的存放期或有效性。
各种传递***是已知的且其可用于给予一种或多种本发明抗体或ADC或一种或多种本发明抗体与有用于预防、管理、治疗或改善失调或其一或多种症状的预防剂或治疗剂的组合，例如囊封于脂质体、微粒、微胶囊、能够表达抗体或抗体片段的重组细胞中；受体介导的内饮作用(参见例如Wu及Wu,J.Biol.Chem[生物化学杂志].262:4429-4432(1987))；将核酸构建为反转录病毒或其他载体之一部分；等等；给予本发明的预防剂或治疗剂的方法包括但不限于非经肠给予(例如，皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内和皮下)、硬膜外给予、瘤内给予和粘膜给予(例如，鼻内和口服途径)。另外，还可使用肺部给药，例如使用吸入器或喷雾器，及用气雾剂配制。参见，例如，美国专利号6,019,968、5,985、320、5,985,309、5,934、272、5,874,064、5,855,913、5,290、540、和4,880,078；和PCT公开号WO 92/19244、WO 97/32572、WO 97/44013、WO 98/31346、和WO 99/66903，它们各自通过引用整体并入本文。在一个实施例中，本发明抗体、组合疗法或本发明组合物使用Alkermes经肺药物递送技术(阿尔凯默斯公司(Alkermes,Inc.),剑桥,麻省)给药。在一个特定实施例中，本发明的预防剂或治疗剂是肌肉内、静脉内、瘤内、经口、鼻内、经肺或皮下给药。预防剂或治疗剂可借由任何便利途径给药，例如借由输注或弹丸式注射，借由经上皮或黏膜皮肤衬层(例如口腔黏膜、直肠及肠黏膜等)吸收，且可与其他生物活性剂一起给药。给药可为全身性或局部的。
在一个特定实施例中，可能期望的是将本发明的预防剂或治疗剂局部给予至需要治疗的区域；此可借由例如但不限于局部输注、注射或借助于植入物来达成，所述植入物为多孔或无孔材料，包括膜及基质，诸如硅橡胶膜(silastic membrane)、聚合物、纤维基质(例如)或胶原蛋白基质。在一个实施例中，将有效量的一种或多种本发明抗体拮抗剂局部投与至受试者的受侵袭区域，从而预防、治疗、管理和/或改善病症或其症状。在另一实施例中，将有效量的一种或多种本发明抗体与有效量的一种或多种除本发明抗体以外的疗法(例如，一种或多种预防剂或治疗剂)组合局部给予至受试者的受影响区域，从而预防、治疗、管理和/或改善失调或其一种或多种症状。
在另一实施例中，本发明的预防剂或治疗剂可以在受控释放或持续释放***中递送。在一个实施例中，泵可用于实现受控释放或持续释放(参见Langer,同上；Sefton,1987,CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.[生物医学工程评论]14:20；Buchwald等人,1980,Surgery[外科]88:507；Saudek等人,1989,N.Engl.J.Med.[新英格兰医学期刊]321:574)。在另一个实施例中，聚合物材料可用于实现本发明治疗剂的受控释放或持续释放(参见，例如，MedicalApplications of Controlled Release[控释的医学应用],Langer和Wise(编),CRCPres.,Boca Raton,Fla.(1974)；Controlled Drug Bioavailability[控制药物生物利用度],Drug Product Design and Performance[药物产品设计和性能],Smolen和Ball(编),Wiley,New York(1984)；Ranger和Peppas,1983,J.,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.[大分子化学科技评论]23:61；还参见Levy等人,1985,Science[科学]228:190；During等人,1989,Ann.Neurol.[神经学年鉴]25:351；Howard等人,1989,J.Neurosurg.[神经外科杂志]71:105)；美国专利号5,679,377；美国专利号5,916,597；美国专利号5,912,015；美国专利号5,989,463；美国专利号5,128,326；PCT公开号WO 99/15154；和PCT公开号WO 99/20253。用于持续释放配制品的聚合物的实例包括但不限于聚(2-羟基乙基甲基丙烯酸酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯吡咯啶酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚丙交脂(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)及聚原酸酯。在一个优选实施例中，用于持续释放配制品中的聚合物为惰性，不含可滤出杂质，储存稳定，无菌且生物可降解。在另一个实施例中，可以将受控释放或持续释放***置于预防或治疗靶标附近，因此仅需要全身剂量的一小部分(参见例如，Goodson,受控释放的医疗应用(Medical Applications of ControlledRelease)，同上，第2卷，第115-138页(1984))。
受控释放***在Langer的综述(1990,Science[科学]249:1527-1533)中有所论述。本领域中的熟练技术人员已知的任何技术皆可用于制造包含一种或多种本发明治疗剂的持续释放配制品。参见，例如美国专利号4,526,938、PCT公开号WO 91/05548、PCT公开号WO 96/20698、Ning等人,1996,“使用持续释放凝胶的人结肠癌异种移植物的瘤内放射免疫治疗(Intratumoral Radioimmunotheraphy ofa Human Colon Cancer Xenograft Usinga Sustained-Release Gel),”Radiotherapy&Oncology[放射治疗和肿瘤学]39:179-189、Song等人,1995,“抗体介导的肺部靶向长循环乳液(Antibody Mediated Lung Targetingof Long-Circulating Emulsions),”PDA Journal of Pharmaceutical Science&Technology[PDA药学科技]50:372-397、Cleek等人,1997,“可生物降解的聚合物载体用于心血管应用的bFGF抗体(Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody forCardiovascular Application),”Pro.Int'l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.[控制释放生物活动国际研讨会记录]24:853-854、和Lam等人,1997,“用于局部递送的重组人源化单克隆抗体的微囊化(Microencapsulation of Recombinant Humanized MonoclonalAntibody for Local Delivery),”Proc.Int'l.Symp.Control Rel.Bioact.Mater.[控制释放生物活动国际研讨会记录]24:759-760，其各自全部内容通过引用并入本文。
在本发明组合物是编码预防剂或治疗剂的核酸的特定实施例中，可体内给予该核酸以促进其所编码的预防剂或治疗剂的表达，这是通过将其构建为适当核酸表达载体的一部分且将其给予，使得其变成细胞内，例如通过使用反转录病毒载体(参见美国专利第4,980,286号)，或通过直接注射，或通过使用微粒轰击(例如，基因枪；生物射弹(Biolistic),杜邦公司(Dupont))，或用脂质或细胞表面受体或转染剂包覆包衣，或通过将其与已知进入细胞核的同源盒样肽进行连接一起给药(参见，例如Joliot等人,1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]88:1864-1868)。可替代地，核酸可通过同源重组引入细胞内且并入宿主细胞DNA内用于表达。
将本发明的药物组合物配制成与其预期给予途径兼容。给予途径的实例包括但不限于非经肠，例如静脉内、皮内、皮下、经口、鼻内(例如吸入)、经皮(例如局部)、经黏膜及经直肠给予。在一个特定实施例中，组合物根据常规程序配制为适合于静脉内、皮下、肌肉内、经口、鼻内或局部给予人的药物组合物。通常，用于静脉内给予的组合物为于无菌等张水性缓冲剂中的溶液。必要时，组合物还可包括增溶剂及诸如利多卡因(lignocaine)的局部麻醉剂以减轻注射位点的疼痛。
若本发明方法包含鼻内给药组合物，则该组合物可配制成气雾剂形式、喷雾剂、薄雾或滴液形式。具体而言，根据本发明使用的预防剂或治疗剂可以借助于使用适合推进剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适合气体)，以气雾剂喷雾呈现形式从加压包装或喷雾器传递。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供可递送计量的量的阀来决定。可配制含有化合物与诸如乳糖或淀粉的适合粉末基质的粉末混合物的胶囊及药筒(例如，由明胶构成)用于吸入器或吹入器中。
若本发明方法包含经口给予，则组合物可配制为锭剂、胶囊、扁囊剂、软胶囊、溶液、悬浮液及其类似者的口服形式。锭剂或胶囊可借由常规手段用药学上可接受的赋形剂制备，此类赋形剂诸如黏合剂(例如，预胶凝化玉米淀粉、聚乙烯吡咯啶酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或乙醇酸淀粉钠)；或湿润剂(例如，月桂基硫酸钠)。片剂可借由本领域中熟知的方法包衣。用于经口给予的液体制剂可呈但不限于溶液、糖浆或悬浮液形式，或其可呈现为干燥产品，在使用之前用水或其他适合媒剂重构。此类液体制剂可借由常规手段用药学上可接受的添加剂制备，此类添加剂诸如悬浮剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或***胶(acacia))；非水性媒剂(例如杏仁油、油性酯、乙醇或分馏植物油)；及防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)。此类制剂还可酌情含有缓冲盐、调味剂、着色剂及甜味剂。用于经口给予的制剂可经适当配制以缓慢释放、受控释放或持续释放预防剂或治疗剂。
本发明方法可包含与气雾剂一起配制的组合物的经肺给予，例如借由使用吸入器或喷雾器。参见，例如，美国专利号6,019、968、5,985、320、5、985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540、和4,880,078；和PCT公开号WO 92/19244、WO 97/32572、WO 97/44013、WO 98/31346、和WO 99/66903，它们各自通过引用整体并入本文。在一个特定实施例中，本发明抗体、组合疗法和/或本发明组合物使用Alkermes 经肺药物递送技术(阿尔凯默斯公司(Alkermes,Inc.),剑桥,麻省.)给予。
本发明方法可包含针对借由注射(例如借由弹丸式注射或连续输注)非经肠给予而配制的组合物的给予。用于注射的配制品可以以具有添加的防腐剂的单位剂型而存在(例如在安瓿中或在多剂量容器中)。组合物可采用诸如于油性或水性媒剂中的悬浮液、溶液或乳液的形式且可含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂的配制剂。可替代地，该活性成分可处于粉末形式以在使用前与合适的媒剂(例如无菌无热原质水)重构。
本发明方法可另外包含给予配制为储剂的组合物。此类长效配制品可借由植入(例如，皮下或肌肉内)或借由肌肉内注射来给予。因此，举例而言，组合物可用适合的聚合或疏水性物质(例如，如于可接受的油中的乳液)或离子交换树脂或微溶衍生物(例如，微溶盐)配制。
本发明方法涵盖给予配制为中性或盐形式的组合物。药学上可接受的盐包括与阴离子形成的盐，诸如衍生自盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的盐；及与阳离子形成的盐，诸如衍生自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙基氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因(procaine)等的盐。
一般而言，组合物的成分分开提供或以单位剂型混合在一起，例如在标明活性剂的量的气密密封式容器(诸如安瓿或药囊)中的干燥冻干粉末或无水浓缩物形式。当给予模式为输注时，组合物可用含有无菌药物级水或生理盐水的输注瓶分配。当给予模式为注射时，可提供一安瓿注射用无菌水或生理盐水以使得可在给予之前混合成分。
具体而言，本发明还提供，本发明的一种或多种预防剂或治疗剂或者药物组合物是包装于标明药剂的量的气密密封式容器(诸如安瓿或药囊)中。在一个实施例中，本发明的一种或多种预防剂或治疗剂或者药物组合物是以干燥无菌冻干粉末或无水浓缩物形式提供于气密密封式容器中且其可重构(例如用水或生理盐水)至适当浓度以向受试者给予。优选地，本发明的一种或多种预防剂或治疗剂或药物组合物是以至少5mg、至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg、至少75mg或至少100mg的单位剂量以干燥无菌冻干粉末形式提供于气密密封式容器中。本发明的冻干预防剂或治疗剂或药物组合物应在2℃至8℃下储存在其初始容器中，且本发明的预防剂或治疗剂或药物组合物应在重构后1周内、5天内、72小时内、48小时内、24小时内、12小时内、6小时内、5小时内、3小时内或1小时内给予。在一个替代实施例中，本发明的一种或多种预防剂或治疗剂或药物组合物是以液体形式提供于标明药剂的数量及浓度的气密密封式容器中。优选地，液体形式的所给予的组合物以至少0.25mg/ml、至少0.5mg/ml、至少1mg/ml、至少2.5mg/ml、至少5mg/ml、至少8mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/kg、至少25mg/ml、至少50mg/ml、至少75mg/ml或至少100mg/ml提供于气密密封式容器中。液体形式应在2℃至8℃下储存在其初始容器中。
本发明的抗体及抗体部分可并入适用于非经肠给予的药物组合物中。抗体或抗体部分优选将制备为含有0.1mg/ml-250mg/ml抗体的可注射溶液。可注射溶液可由燧石小瓶或琥珀小瓶、安瓿或预填充注射器中的液体或冻干剂型构成。缓冲剂可为L-组氨酸(1-50mM)，最优选地5mM-10mM，pH 5.0至7.0(最优选pH 6.0)。其他适合缓冲剂包括但不限于琥珀酸钠、柠檬酸钠、磷酸钠或磷酸钾。可使用浓度为0mM-300mM(对于液体剂型，最优选为150mM)的氯化钠来修饰溶液的毒性。对于冻干剂型，可包括低温保护剂，主要为0％-10％蔗糖(最优选为0.5％-1.0％)。其他适合的低温保护剂包括海藻糖及乳糖。对于冻干剂型，可包括膨胀剂，主要为1％-10％甘露糖醇(最优选为2％-4％)。液体及冻干剂型中均可使用稳定剂，主要为1mM-50mM L-甲硫氨酸(最优选为5mM-10mM)。其他适合的膨胀剂包括甘氨酸、精氨酸，可以0-0.05％聚山梨醇酯80(最优选为0.005％-0.01％)形式包括。其他界面活性剂包括但不限于聚山梨醇酯20及BRIJ界面活性剂。按用于非经肠给予的可注射溶液制备的包含本发明的抗体及抗体部分的药物组合物可以进一步包含适用作佐剂的试剂，诸如用于增大治疗蛋白(例如抗体)的吸收或分散的试剂。特别适用的佐剂为是透明质酸酶，例如(重组人透明质酸酶)。在可注射溶液中添加透明质酸酶改善非经肠给予、尤其皮下给予后的人生物可用性。其还允许伴随较少疼痛及不适的较大注射部位体积(即大于1ml)，且注射部位反应的发生率极小。(参见WO2004078140、US2006104968，其以引用的方式并入本文中)。
本发明的组合物可呈多种形式。这些形式包括(例如)液体、半固体及固体剂型，诸如液体溶液(例如，可注射溶液及可输注溶液)、分散液或悬浮液、锭剂、丸剂、散剂、脂质体及栓剂。优选形式视预期给予模式及治疗应用而定。典型的优选组合物呈可注射或可输注溶液的形式，诸如与用于使用其他抗体对人进行被动免疫的那些类似的组合物。优选给予模式为非经肠(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)。在一个优选实施例中，借由静脉内输注或注射给予抗体。在另一优选实施例中，借由肌肉内或皮下注射给予抗体。
治疗组合物通常必须无菌且在制造及储存条件下稳定。组合物可配制为溶液、微乳液、分散液、脂质体或适合于高药物浓度的其他有序结构。无菌可注射溶液可借由将所需量的活性化合物(即，抗体或抗体部分)与以上所列成分中的一者或组合一起并入适当溶剂中、随后视需要过滤灭菌来制备。一般而言，分散液是通过将活性化合物并入含有基础分散介质及来自以上所列的所需其他成分的无菌媒剂中来制备。在用于制备无菌可注射溶液的无菌冻干粉末的情况下，优选制备方法为真空干燥及喷雾干燥，其得到活性成分加上来自先前经无菌过滤的任何其他所需成分溶液的任何其他所需成分的粉末。溶液的适当流动性可例如借由使用诸如卵磷脂的包衣、在分散液的情况下借由维持所需粒度及借由使用界面活性剂来维持。可注射组合物的延长吸收可借由在组合物中包括例如单硬脂酸盐及明胶的延迟吸收剂来达成。
本发明的抗体及抗体部分或ADC可借由本领域中已知的各种方法给予，但对于许多治疗应用，优选给予途径/模式为皮下注射、静脉内注射或输注。如本领域中的熟练技术人员应了解，给予途径和/或模式将视所期望的结果而变化。在某些实施例中，活性化合物可用将保护化合物不会快速释放的载体制备，诸如受控释放配制品，包括植入物、经皮贴片及微囊封递送***。可使用生物可降解的生物兼容性聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。许多用于制备此类配制物的方法已获得专利或为本领域中的熟练技术人员所熟知。参见例如Sustained and Controlled ReleaseDrug Delivery Systems[持续和控释药物递送***],J.R.Robinson,ed.,马塞尔·德克公司(Marcel Dekker,Inc.),纽约,1978。
在某些实施例中，本发明的抗体或抗体部分或ADC可与例如惰性稀释剂或可同化的可食用载体一起经口给予。该化合物(及视需要选用的其他成分)还可密封于硬壳或软壳明胶胶囊中，压缩成片剂，或直接并入受试者的饮食中。对于经口治疗性给予，可将化合物与赋形剂合并且以可摄取片剂、经颊片剂、糖锭、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、粉片(wafers)及其类似者的形式使用。为借由除非经肠给予以外的形式给予本发明的化合物，可能需要将该化合物用防止其失活的材料包衣或与防止其失活的材料共给予。
在其他实施例中，本发明的抗体或抗体部分或ADC可结合至基于聚合物的物质，使得该基于聚合物的物质可以赋予本发明的该抗体或抗体部分足够的大小，使得本发明的该抗体或抗体部分可得益于增强的渗透及滞留效应(EPR效应)(还参见PCT公开号WO 2006/042146A2及美国公开号2004/0028687A1、2009/0285757A1和2011/0217363A1及美国专利号7,695,719(其各自出于所有目的以全文引用的方式并入本文中))。
还可将补充活性化合物并入组合物中。在某些实施例中，本发明的抗体或抗体部分或ADC是与一种或多种适用于治疗CD98活性有害的病症的另外治疗剂一起配制和/或共给予。例如，本发明的抗hCD98抗体或抗体部分或ADC可与一种或多种结合其他靶标的额外抗体(例如，结合细胞因子或结合细胞表面分子的抗体)一起配制和/或共给予。此外，本发明的一种或多种抗体可与以上治疗剂中的两者或两者以上组合使用。此类组合疗法宜采用较低的治疗剂给予剂量，从而避免与各种单一疗法相关的可能毒性或并发症。
在某些实施例中，针对CD98或其片段的抗体或ADC是与本领域中已知的延长半衰期的媒剂相关。此类媒剂包括但不限于Fc结构域、聚乙二醇及聚葡萄糖。此类媒剂描述于例如美国申请系列号09/428,082和公布的PCT申请号WO 99/25044中，其出于任何目的以引用的方式并入本文中。
本领域中的熟练技术人员将易于了解，本文所述的本发明方法的其他适合修改及改编显而易见且可在不脱离本发明或其中所揭示的实施例的范畴的情况下使用适合的等效物进行。尽管本发明目前已得到详细描述，但通过参考下述实例将更清楚地理解本发明，所述实例被包括在内，仅用于举例说明性目的且不希望限制本发明。
实例
实例1.示例性Bcl-xL抑制剂的合成
该实例提供了示例性Bcl-xL抑制性化合物W3.01-W3.42的合成方法。Bcl-xL抑制剂(W3.01-W3.43)和合成子(实施例2.1-2.72)使用以下进行命名：ACD/名称2012发布(架构版56084(Build 56084)，2012年4月5日，Advanced Chemistry Development Inc.(先进化学研发公司)，多伦多(Toronto)，安大略省(Ontario))，ACD/名称2014年发布(架构版66687(Build 66687)，2013年10月25日，Advanced Chemistry Development Inc.(先进化学研发公司)，多伦多(Toronto)，安大略省(Ontario))，Ver.9.0.7(剑桥软件公司(CambridgeSoft),剑桥(Cambridge),马萨诸塞州(MA))，Ultra Ver.12.0(剑桥软件公司(CambridgeSoft),剑桥(Cambridge),马萨诸塞州(MA))，或Professional Ver.15.0.0.106。Bcl-xL抑制剂和合成子中间体使用以下进行命名：ACD/名称2012发布(架构版56084(Build 56084)，2012年4月5日，Advanced ChemistryDevelopment Inc.(先进化学研发公司)，多伦多(Toronto)，安大略省(Ontario))，ACD/名称2014年发布(架构版66687(Build 66687)，2013年10月25日，Advanced ChemistryDevelopment Inc.(先进化学研发公司)，多伦多(Toronto)，安大略省(Ontario))，Ver.9.0.7(剑桥软件公司(CambridgeSoft),剑桥(Cambridge),马萨诸塞州(MA))，Ultra Ver.12.0(剑桥软件公司(CambridgeSoft),剑桥(Cambridge),马萨诸塞州(MA))，或Professional Ver.15.0.0.106。
1.1.6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.01)的合成
1.1.1.3-溴-5,7-二甲基金刚烷甲酸
在0℃下向50mL圆底烧瓶中加入溴(16mL)。加入铁粉(7g)，并将反应在0℃下搅拌30分钟。然后加入3,5-二甲基金刚烷-1-甲酸(12g)。将混合物然后加温至室温并搅拌3天。将冰/浓HCl混合物倒入反应混合物中。将所得悬浮液用Na2SO3(50g，在200mL水中)处理两次，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机层用1N HCl水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以给出粗标题化合物。
1.1.2.3-溴-5,7-二甲基金刚烷甲醇
向实例1.1.1(15.4g)在四氢呋喃(200mL)中的溶液中加入BH3(在四氢呋喃中1M，150mL)。将混合物在室温下搅拌过夜。然后通过滴加甲醇小心地淬灭反应混合物。然后将混合物真空浓缩，并将残余物在乙酸乙酯(500mL)和2NHCl水溶液(100mL)之间分配。将水层用乙酸乙酯进一步萃取两次，并且合并有机萃取物，并用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到标题化合物。
1.1.3.1-((3-溴-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基)-1H-吡唑
向实例1.1.2(8.0g)在甲苯(60mL)中的溶液中加入1H-吡唑(1.55g)和氰基亚甲基三丁基磷烷(2.0g)。将混合物在90℃下搅拌过夜。然后浓缩反应混合物，并通过硅胶柱色谱(10:1己烷:乙酸乙酯)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 324.2(M+H)+。
1.1.4.2-{[3,5-二甲基-7-(1H-吡唑-1-基甲基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]氧基}乙醇
向实例1.1.3(4.0g)在乙烷-1,2-二醇(12mL)中的溶液中加入三乙胺(3mL)。将混合物在150℃下在微波条件下(Biotage)搅拌45分钟。将混合物倒入水(100mL)中并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到粗标题化合物，将其通过柱色谱(用在己烷中的20％乙酸乙酯然后用在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 305.2(M+H)+。
1.1.5.2-({3,5-二甲基-7-[(5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙醇
向实例1.1.4(6.05g)在四氢呋喃(100mL)中的冷却的(-78℃)溶液中加入n-BuLi(40mL，在己烷中2.5M)。将混合物在-78℃下搅拌1.5小时。然后通过注射器加入碘甲烷(10mL)，并将混合物在-78℃下搅拌3小时。然后将反应混合物用NH4Cl水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机萃取物用水和盐水洗涤。经Na2SO4干燥后，过滤并浓缩溶液，残余物用硅胶柱色谱(在二氯甲烷中的5％甲醇)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e319.5(M+H)+。
1.1.6.1-({3,5-二甲基-7-[2-(羟基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-4-碘-5-甲基-1H-吡唑
向实例1.1.5(3.5g)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(3.2g)。将混合物在室温搅拌1.5小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯(600mL)稀释，并用NaHSO3水溶液、水和盐水洗涤。经Na2SO4干燥后，过滤并浓缩溶液，残余物用硅胶色谱(在二氯甲烷中的20％乙酸乙酯)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 445.3(M+H)+。
1.1.7.2-((3-((4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)氧基)乙基甲磺酸酯
向实例1.1.6(5.45g)在二氯甲烷(100mL)中的冷(0℃)溶液中加入三乙胺(5.13mL)和甲磺酰氯(0.956mL)。将混合物在室温下搅拌1.5小时，用乙酸乙酯(600mL)稀释，并用水(120mL)和盐水(120mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 523.4(M+H)+。
1.1.8.2-((3-((4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)氧基)-N-甲基乙胺
将实例1.1.7(6.41g)在2M甲胺(在乙醇(15mL)中)中的溶液搅拌过夜并浓缩。将残余物用乙酸乙酯稀释，并用NaHCO3水溶液，水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 458.4(M+H)+。
1.1.9.叔-丁基[2-({3-[(4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]甲氨基甲酸酯
向实例1.1.8(2.2g)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(1.26g)和催化量的4-二甲基氨基吡啶。将混合物在室温下搅拌1.5小时，然后用乙酸乙酯(300mL)稀释。将溶液用饱和NaHCO3水溶液、水(60mL)和盐水(60mL)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用在二氯甲烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 558.5(M+H)+。
1.1.10.叔-丁基(2-((3,5-二甲基-7-((5-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)金刚烷-1-基)氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸酯
向实例1.1.9(1.2g)在二噁烷中的溶液中加入双(苄腈)氯化钯(II)(0.04g)、4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(0.937mL)和三乙胺(0.9mL)。将混合物加热回流过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水(60mL)和盐水(60mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 558.5(M+H)+。
1.1.11.叔丁基3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-氯吡啶甲酸酯
向实例1.1.10(100mg)和叔丁基3-溴-6-氯吡啶甲酸酯(52.5mg)的二噁烷(2mL)溶液中加入三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(8.2mg)、K3PO4(114mg)、1,3,5,7-四甲基-8-苯基-2,4,6-三氧杂-8-磷金刚烷(5.24mg)和水(0.8mL)。将混合物在95℃下搅拌4小时，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，浓缩并通过快速色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯并且然后用在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 643.3(M+H)+。
1.1.12.叔-丁基3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)吡啶甲酸酯
将实例1.1.11(480mg)、7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,2,3,4-四氢喹啉(387mg)、二氯双(三苯基膦)-钯(II)(78mg)和CsF(340mg)在二噁烷(12mL)和水(5mL)中的混合物在100℃下加热5小时。此后，将反应混合物冷却至室温，并且然后用乙酸乙酯稀释。将所得混合物用水和盐水洗涤，并将有机层经Na2SO4,干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱(用在庚烷中的50％乙酸乙酯洗脱)进行纯化以提供标题化合物。MS(APCI)m/e 740.4(M+H)+。
1.1.13.叔-丁基6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向苯并[d]噻唑-2-胺(114mg)在乙腈(5mL)中的溶液中加入双(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸酯(194mg)。将混合物搅拌1小时，并添加在乙腈(5mL)中的实例1.1.12(432mg)。将混合物搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，并将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱(用在庚烷中的50％乙酸乙酯洗脱)进行纯化以提供标题化合物。
1.1.14.6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)-3-(1-((3,5-二甲基-7-(2-(甲氨基)乙氧基)金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
将在二氯甲烷(5mL)中的实例1.1.13(200mg)用三氟乙酸(2.5mL)处理过夜。浓缩混合物，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.40(s,1H),8.30(s,2H),8.02(d,1H),7.85(d,1H),7.74-7.83(m,2H),7.42-7.53(m,2H),7.38(t,1H),7.30(d,1H),7.23(t,1H),3.93-4.05(m,2H),3.52-3.62(m,2H),2.97-3.10(m,2H),2.84(t,2H),2.56(t,2H),2.23(s,3H),1.88-2.00(m,2H),1.45(s,2H),1.25-1.39(m,4H),1.12-1.22(m,4H),1.00-1.09(m,2H),0.89(s,6H)。MS(ESI)m/e 760.1(M+H)+。
1.2.6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.02)的合成
1.2.1.叔丁基3-(1-(((--3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)吡啶甲酸酯
向6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪(122mg)在二噁烷(4mL)和水(1mL)中的溶液中加入实例1.1.11(300mg)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)(32.7mg)和CsF(212mg)。将混合物在回流下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，并用水、盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到粗材料，将其通过柱色谱(在己烷中的20％乙酸乙酯然后是在二氯甲烷中的5％甲醇)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e742.4(M+H)+。
1.2.2.6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
向双(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸酯(70.4mg)在乙腈(4mL)中的环境悬浮液中加入苯并[d]噻唑-2-胺(41.3mg)并搅拌混合物一小时。添加实例1.2.1(170mg)在乙腈(1mL)和水(10mL)中的溶液，并剧烈搅拌悬浮液过夜。将混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，并用水、盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到残余物，将其加载到柱上，并用在庚烷中的20％乙酸乙酯、然后用在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱。将所得材料用二氯甲烷中的20％TFA处理过夜。蒸发溶剂后，通过HPLC(吉尔森***，用10％-85％乙腈的0.1％TFA水溶液洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.76(s,1H),8.24-8.46(m,2H),7.97(d,1H),7.70-7.89(m,3H),7.47(s,1H),7.35-7.47(m,2H),7.24(t,1H),7.02(d,1H),4.32-4.42(m,3H),4.14-4.23(m,3H),3.90(s,3H),3.57(t,3H),2.93-3.11(m,2H),2.57(t,3H),2.23(s,3H),1.46(s,2H),1.24-1.39(m,4H),0.98-1.25(m,5H),0.89(s,6H)。MS(ESI)m/e 760.4(M+H)+。
1.3.6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.03)的合成
1.3.1.叔丁基3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基)吡啶甲酸酯
向1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,2,3,4-四氢喹喔啉(140mg)在二噁烷(4mL)和水(1mL)中的溶液中加入实例1.1.11(328mg)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)(35.8mg)和CsF(232mg)。将混合物在回流下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，并用水、盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到粗材料，将其通过柱色谱(用在己烷中的20％乙酸乙酯然后是在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 755.5(M+H)+。
1.3.2.6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
向双(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸酯(307mg)在乙腈(10mL)中的环境悬浮液中加入苯并[d]噻唑-2-胺(180mg)并搅拌混合物一小时。添加实例1.3.1(600mg)在乙腈(3mL)中的溶液，并将悬浮液剧烈搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，并用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到残余物，将其加载到柱上，并用在庚烷(1L)中的20％乙酸乙酯、然后用在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱。将所得材料用二氯甲烷中的20％TFA处理过夜。蒸发溶剂后，残余物在HPLC(吉尔森***，用10％-85％乙腈的0.1％TFA水溶液洗脱)纯化，以给出标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.17-8.44(m,3H),7.90(d,1H),7.68-7.84(m,3H),7.45(s,2H),7.37(t,1H),7.22(t,1H),6.83(d,1H),3.96-4.12(m,2H),3.89(s,3H),3.57(t,2H),3.44(t,2H),2.93-3.09(m,4H),2.56(t,3H),2.21(s,3H),1.45(s,2H),1.25-1.39(m,4H),0.99-1.22(m,7H),0.89(s,6H)。MS(ESI)m/e 760.4(M+H)+。
1.4.3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.04)的合成
1.4.1.2-((3-((4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)氧基)乙胺
将实例1.1.7(4.5g)在7N铵(在甲醇(15mL)中)中的溶液在微波条件下在100℃下搅拌20分钟(Biotage Initiator)。将反应混合物真空浓缩。将残余物用乙酸乙酯(400mL)稀释，并用NaHCO3水溶液、水(60mL)和盐水(60mL)洗涤。将有机层干燥(无水Na2SO4)，将溶液过滤并浓缩，并将残余物不经进一步纯化用于下一反应。MS(ESI)m/e 444.2(M+H)+。
1.4.2.叔-丁基(2-((3-((4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)氧基)乙基)氨基甲酸酯
向实例1.4.1(4.4g)在四氢呋喃(100mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(2.6g)和N,N-二甲基-4-氨基吡啶(100mg)。将混合物搅拌1.5小时。将反应混合物用乙酸乙酯(300mL)稀释，并用NaHCO3水溶液、水(60mL)和盐水(60mL)洗涤。干燥(无水Na2SO4)后，过滤并浓缩溶液，残余物用硅胶柱色谱(在二氯甲烷中的20％乙酸乙酯)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 544.2(M+H)+。
1.4.3.6-氟-3-溴吡啶甲酸
将6-氨基-3-溴吡啶甲酸(25g)在400mL 1:1二氯甲烷/氯仿中的浆料在5℃下经1小时加入到在二氯甲烷(100mL)中的亚硝基鎓四氟硼酸盐(18.2g)中。将所得混合物再搅拌30分钟，温热至35℃并搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温并用NaH2PO4溶液调节至pH4。将所得溶液用二氯甲烷萃取三次，并将合并的萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。
1.4.4.叔-丁基3-溴-6-氟吡啶甲酸酯
在0℃下，将对甲苯磺酰氯(27.6g)加入到实例1.4.3(14.5g)、吡啶(26.7mL)和叔丁醇(80mL)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中。将反应搅拌15分钟，升温至室温，并且搅拌过夜。将溶液浓缩并在乙酸乙酯和Na2CO3溶液之间分配。分离各层，并将水层用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用Na2CO3溶液和盐水冲洗，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。
1.4.5.乙基7-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸酯
将乙基5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸酯盐酸盐(692mg)和实例1.4.4(750mg)溶解在二甲基亚砜(6mL)中。添加N,N-二异丙基乙胺(1.2mL)，并将溶液在50℃加热16小时。将溶液冷却，用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(50mL)萃取。将有机部分用盐水洗涤，并且在无水硫酸钠上干燥。浓缩溶液，静置16小时后，形成固体晶体。用二***洗涤晶体，得到标题化合物。MS(ESI)m/e 451,453(M+H)+,395,397(M-叔-丁基)+。
1.4.6.乙基7-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸酯
通过用实例1.4.5取代实例1.1.10中的实例1.1.9制备标题化合物。MS(ESI)m/e499(M+H)+,443(M-叔-丁基)+,529(M+MeOH-H)-。
1.4.7.乙基7-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸酯
将实例1.4.6(136mg)和实例1.4.2(148mg)溶于1,4-二噁烷(3mL)和水(0.85mL)中。添加磷酸三钾(290mg)，并将溶液脱气并用氮气冲洗三次。添加三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(13mg)和1,3,5,7-四甲基-8-十四烷基-2,4,6-三氧杂-8-磷金刚烷(12mg)。将溶液脱气，用氮气冲洗一次，并加热至70℃保持16小时。将反应冷却并用乙酸乙酯(10mL)和水(3mL)稀释。分离各层，并将有机层用盐水洗涤，并在无水硫酸钠上干燥。过滤后，将滤液浓缩并通过硅胶快速柱色谱(用在乙酸乙酯中的5％甲醇洗脱)纯化。减压除去溶剂，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 760(M+H)+,758(M-H)-。
1.4.8.7-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸
将实例1.4.7(200mg)溶于四氢呋喃(0.7mL)、甲醇(0.35mL)和水(0.35mL)中。添加氢氧化锂一水合物(21mg)，并将溶液在室温下搅拌16小时。添加HCl(1M，0.48mL)，并通过与乙酸乙酯(20mL)共沸两次除去水。减压除去溶剂，并将材料真空干燥。将该材料溶于二氯甲烷(5mL)和乙酸乙酯(1mL)中，并经无水硫酸钠干燥。过滤后，减压除去溶剂，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 760(M+H)+,758(M-H)-。
1.4.9.叔丁基6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
将实例1.4.8(160mg)和苯并[d]噻唑-2-胺(35mg)溶解在二氯甲烷(1.5mL)中。添加1-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]-碳二亚胺盐酸盐(85mg)和4-(二甲基氨基)吡啶(54mg)，并将溶液在室温下搅拌16小时。通过硅胶快速柱色谱(用在乙酸乙酯中的2.5％-5％甲醇洗脱)纯化该物质。减压除去溶剂，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e892(M+H)+,890(M-H)-。
1.4.10.3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸
通过用实例1.4.9取代实例1.1.14中的实例1.1.13制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 11.50(bs,1H),8.21(d,1H),7.98(d,1H),7.93(s,1H),7.76(d,1H),7.66(bs,3H),7.58(d,1H),7.44(t,1H),7.33(s,1H),7.31(t,1H),7.15(d,1H),6.97(d,1H),5.10(s,2H),4.26(m,2H),4.08(t,2H),3.84(s,2H),2.90(m,4H),2.13(s,3H),1.42(s,2H),1.30(q,4H),1.15(m,2H),1.04(q,4H),0.87(s,6H)。MS(ESI)m/e 736(M+H)+,734(M-H)-。
1.5.3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.05)的合成
1.5.1.叔丁基联苯(乙烯基)硅烷
如J Org Chem[有机化学杂志],70(4),1467(2005)中所述制备标题化合物。
1.5.2.2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙醇
将实例1.5.1(8.2g)溶解在四氢呋喃(30mL)中，然后添加9-硼二环[3.3.1]壬烷在四氢呋喃(63mL)中的0.5M溶液，在室温下搅拌反应2.5小时。将反应温热至37℃，然后添加3.0NNaOH水溶液(11mL)，接着非常小心地滴加30％H2O2水溶液(11mL)。一旦完成过氧化物添加，将反应搅拌一小时，并添加水(200mL)和二***(200mL)。用盐水洗涤有机层并经硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，通过硅胶色谱(用庚烷/乙酸乙酯(3/1)洗脱)纯化，给出标题化合物。
1.5.3.5-(2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙氧基)异喹啉
将三苯基膦(262mg)溶解在四氢呋喃(2mL)中。添加实例1.5.2(285mg)、异喹啉-5-醇(121mg)和二异丙基偶氮二甲酸酯(203mg)。将反应在室温下搅拌30分钟，然后添加更多的异喹啉-5-醇(41mg)并将反应搅拌过夜。然后浓缩反应并通过快速色谱(用庚烷/乙酸乙酯(83/17)洗脱)纯化，给出标题化合物。MS(DCI)m/e 412.2(M+H)+。
1.5.4.8-溴-5-(2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙氧基)异喹啉
将实例1.5.3(6.2g)溶解在乙酸(40mL)中，并添加乙酸钠(2.2g)。缓慢添加溴(0.70mL)在乙酸(13mL)中的溶液。将反应在室温下搅拌过夜。将反应小心地加入2MNa2CO3水溶液中并用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机层并经硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，通过硅胶色谱(用庚烷/乙酸乙酯(9/1)洗脱)纯化，给出标题化合物。MS(DCI)m/e 490.1,492.1(M+H)+。
1.5.5.8-溴-5-(2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉
将实例1.5.4(4.46g)溶解在甲醇(45mL)中。添加氰基硼氢化钠(2.0g)，然后添加三氟硼烷醚合物(4.0mL，31.6mmol)。将混合物在回流下加热2小时，并且然后冷却至室温。添加另外的氰基硼氢化钠(2.0g)和三氟硼烷醚合物(4.0mL)，并将混合物在回流下再加热两小时。冷却反应，然后加入1/1水/2M Na2CO3水溶液(150mL)中。用二氯甲烷(两次，100mL)萃取混合物。将有机层经硫酸钠干燥。过滤并浓缩，通过标题化合物，将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS(DCI)m/e 494.1,496.1(M+H)+。
1.5.6.叔丁基8-溴-5-(2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯
将实例1.5.5(3.9g)溶解在二氯甲烷(25mL)中，并添加三乙胺(3.3mL)和二碳酸二叔丁酯(1.9g)。将反应混合物在室温下搅拌三小时。然后浓缩反应并通过快速色谱(用庚烷/乙酸乙酯(96/4)洗脱)纯化，以提供标题化合物。
1.5.7.2-叔丁基8-甲基5-(2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2,8(1H)-二甲酸酯
将实例1.5.6(3.6g)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)二氯甲烷(0.025g)置于250mL SS压力瓶中，并且添加甲醇(10mL)和三乙胺(0.469mL)。用氩气将反应器脱气数次后，向烧瓶中加入一氧化碳并在40psi下加热至100℃保持16小时。将反应混合物冷却，浓缩，通过快速硅胶色谱(用庚烷/乙酸乙酯(88/12)洗脱)纯化，以提供标题化合物。
1.5.8.甲基5-(2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.5.7(1.8g)溶于4N HCl在二噁烷中的溶液(25mL)中并在室温下搅拌45分钟。然后浓缩反应，以提供标题化合物，为盐酸盐。MS(DCI)m/e 474.2(M+H)+。
1.5.9.甲基2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-5-(2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例1.5.8(1.6g)和实例1.4.4(1.0g)在二甲基亚砜(6mL)中的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.4mL)。将混合物在50℃下搅拌24小时。然后将混合物用二***稀释，并用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂并用硅胶柱纯化(用在己烷中的5％乙酸乙酯)，给出标题化合物。
1.5.10.1-((3-(2-叠氮乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-4-碘-5-甲基-1H-吡唑
将实例1.1.6(2g)溶解在二氯甲烷(20mL)中，并添加三乙胺(0.84mL)。将反应溶液冷却至5℃后，滴加甲磺酰氯(0.46mL)。移去冷却浴，将反应在室温下搅拌两小时。添加饱和NaHCO3，分离各层，并将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥。过滤并浓缩后，将残余物溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，并且添加叠氮化钠(0.88g)，并将反应加热至80℃保持两小时。然后将反应冷却至室温并倒入二***和水中。将有机层分离并用盐水洗涤并经Na2SO4干燥。过滤并浓缩后，通过硅胶色谱(用庚烷/乙酸乙酯(4/1)洗脱)纯化，给出标题化合物。MS(DCI)m/e 470.0(M+H)+。
1.5.11.甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)-5-(2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.5.9(1.5g)、4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(0.46mL)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)二氯甲烷(86mg)和三乙胺(0.59mL)在氮气氛下溶于乙腈(6.5mL)中，然后将反应加热回流过夜。然后将反应冷却至室温并添加乙酸乙酯和水。将有机层用盐水洗涤并经Na2SO4干燥。过滤并浓缩后，通过硅胶色谱(使用在庚烷中的10％-20％乙酸乙酯的梯度)纯化，给出标题化合物。MS(ESI)m/e 777.1(M+H)+。
1.5.12.甲基2-(5-(1-((3-(2-叠氮乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-5-(2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
在氮气氛下，将实例1.5.11(1.22g)和实例1.5.10(0.74g)溶解在四氢呋喃(16mL)中，并添加磷酸三钾(4.5g)和水(5mL)。然后添加三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(70mg)和1,3,5,7-四甲基-8-十四烷基-2,4,6-三氧杂-8-磷金刚烷(66mg)，在回流下加热反应过夜，并且然后冷却至室温。然后添加乙酸乙酯和水，并且将有机层用盐水洗涤并经Na2SO4干燥。过滤并浓缩后，通过硅胶色谱(用庚烷/乙酸乙酯(7/3)洗脱)纯化粗材料，给出标题化合物。MS(DCI)m/e 992.3(M+H)+。
1.5.13.2-(5-(1-((3-(2-叠氮乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-5-(2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
将实例1.5.12(1.15g)溶解在四氢呋喃(4.5mL)中，并且添加甲醇(2.2mL)、水(2.2mL)和氢氧化锂一水合物(96mg)。将反应混合物在室温下搅拌五天。添加水(20mL)和2NHCl水溶液(1.1mL)。用乙酸乙酯萃取混合物，并且将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥。过滤并浓缩后，通过硅胶色谱(用二氯甲烷/乙酸乙酯(70/30)、然后用二氯甲烷/乙酸乙酯/乙酸(70/30/1)洗脱)纯化，给出标题化合物。
1.5.14.叔丁基3-(1-((3-(2-叠氮乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-(2-(叔-丁基二苯基甲硅烷基)乙氧基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸酯
将实例1.5.13(80mg)和苯并[d]噻唑-2-胺(14mg)溶解在二氯甲烷(1.2mL)中。添加N,N-二甲基吡啶-4-胺(17mg)和N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(27mg)并将反应在室温下搅拌过夜。浓缩反应物，粗残余物通过硅胶色谱(用二氯甲烷/乙酸乙酯(90/10)洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 1110.3(M+H)+。
1.5.15.叔丁基3-(1-((3-(2-叠氮乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸酯
将实例1.5.14(160mg)溶于氟化四丁基铵在95/5四氢呋喃/水(1.15mL)中的1.0M溶液中，并将反应在60℃下加热两天。添加粉末状的分子筛，并将混合物在60℃下再加热一天。将反应冷却，然后浓缩，并且将粗残余物通过硅胶色谱(用70/30/1二氯甲烷/乙酸乙酯/乙酸洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 844.2(M+H)+。
1.5.16.叔丁基3-(1-((3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸酯
将实例1.5.15(70mg)溶解在四氢呋喃(2mL)中，添加10％钯碳(20mg)，并将混合物在氢气球下搅拌过夜。通过硅藻土过滤并蒸发溶剂后，通过反相色谱(C18柱)(用10％-90％乙腈的0.1％TFA水溶液洗脱)纯化粗标题化合物，以提供标题化合物，为三氟乙酸盐。
1.5.17.3-(1-((3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
将实例1.5.16(11mg)溶于4NHCl的二噁烷溶液(0.5mL)中并在室温下搅拌过夜。滤出固体并用二噁烷洗涤，以提供标题化合物，为盐酸盐。1H NMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.60(vbr s,1H),10.40(br s,1H),8.00(d,1H)7.76(d,1H),7.75(br s,3H),7.60(d,1H),7.51(d,1H),7.46(t,1H),7.33(t,1H),7.30(s,1H),6.98(d,1H),6.82(d,1H),4.99(s,2H),3.89(m,2H),3.83(s,2H),3.50(m,2H),2.88(m,2H),2.79(m,2H),2.11(s,3H),1.41(s,2H),1.29(m,4H),1.14(m,4H),1.04(m,2H),0.87(s,6H)。MS(ESI)m/e 762.2(M+H)+。
1.6.6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.06)的合成
1.6.1.叔丁基3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(甲氧基羰基)萘-2-基)吡啶甲酸酯
向甲基7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-萘甲酸酯(2.47g)在二噁烷(40mL)和水(20mL)中的溶液中加入实例1.1.11(4.2g)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)(556mg)和CsF(3.61g)。将混合物在回流下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯(400mL)稀释，并用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，将粗材料通过柱色谱(用在己烷中的20％乙酸乙酯然后是在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 793.4(M+H)+。
1.6.2.7-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1-萘甲酸
向实例1.6.1(500mg)在四氢呋喃(4mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(500mg)。将混合物搅拌3小时。然后将混合物用1NHCl水溶液酸化，并用乙酸乙酯(200mL)稀释。将有机层用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到粗标题化合物，将其不经进一步纯化用于下一反应。MS(ESI)m/e 779.4(M+H)+。
1.6.3.6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
向实例1.6.2(79mg)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入苯并[d]噻唑-2-胺(23mg)、氟-N,N,N',N'-四甲基甲脒鎓六氟磷酸盐(41mg)和N,N-二异丙基乙胺(150mg)。将混合物在60℃下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，并用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到粗中间体，将其溶于二氯甲烷/TFA(1:1，6mL)中并静置过夜。蒸发溶剂，给出残余物，将其溶解在二甲基亚砜/甲醇(1:1，9mL)中，并通过HPLC(吉尔森***，用10％-85％乙腈的0.1％TFA水溶液洗脱)纯化，以给出纯标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.11(s,1H),9.02(s,1H),8.38(dd,1H),8.26-8.34(m,2H),8.13-8.27(m,3H),8.07(d,1H),8.02(d,1H),7.93(d,1H),,7.82(d,1H),7.67-7.75(m,1H),,7.44-7.53(m,2H),7.30-7.41(m,1H),3.90(s,3H),2.94-3.12(m,3H),2.53-2.60(m,4H),2.20-2.31(m,3H),1.45(s,2H),1.25-1.39(m,4H),0.99-1.23(m,4H),0.89(s,6H)。MS(ESI)m/e 755.4(M+H)+。
1.7.3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-([1,3]噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.07)的合成
通过用噻唑并[5,4-b]吡啶-2-胺取代实施1.6.3中的苯并[d]噻唑-2-胺制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.25(s,1H),9.02(s,1H),,8.54(dd,1H),8.39(dd,1H),8.14-8.35(m,6H),8.04(d,1H),7.93(d,1H),7.66-7.75(m,1H),7.55(dd,1H),7.49(s,1H),3.57(t,3H),2.95-3.10(m,2H),2.51-2.62(m,3H),2.19-2.28(m,3H),1.45(s,2H),1.24-1.38(m,4H),0.98-1.24(m,6H),0.89(s,6H)。MS(ESI)m/e756.3(M+H)+。
1.8.3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-([1,3]噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.08)的合成
通过用噻唑并[4,5-c]吡啶-2-胺取代实施1.6.3中的苯并[d]噻唑-2-胺制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.40(s,1H),9.04(s,1H),8.62(dd,1H),8.56(dd,1H),8.39(dd,1H),8.13-8.34(m,5H),8.06(d,1H),7.94(d,1H),7.68-7.79(m,1H),7.45-7.54(m,1H),7.39(dd,1H),3.90(s,3H),3.54-3.60(m,3H),2.94-3.08(m,2H),2.51-2.60(m,4H),2.18-2.31(m,3H),1.46(s,2H),1.24-1.40(m,4H),1.01-1.21(m,6H),0.83-0.89(m,5H)。MS(ESI)m/e 756.3(M+H)+。
1.9.6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.09)的合成
1.9.1.叔-丁基8-溴-5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯
向叔丁基5-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(9g)在N,N-二甲基甲酰胺(150mL)中的溶液中加入N-溴代丁二酰亚胺(6.43g)。将混合物搅拌过夜，并用水(200mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，并用水和盐水洗涤，并经硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂，得到粗标题化合物，将其不经进一步纯化用于下一反应。MS(ESI)m/e329.2(M+H)+。
1.9.2.叔-丁基5-(苄氧基)-8-溴-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯向实例1.9.1(11.8g)在丙酮(200mL)中的溶液中加入苄基溴(7.42g)和K2CO3(5g)。将混合物在回流下搅拌过夜。浓缩混合物并将残余物在乙酸乙酯(600mL)和水(200mL)之间分配。将有机层用水和盐水洗涤，并经硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂，给出粗标题化合物，将其在硅胶柱上纯化，并用在庚烷中的10％乙酸乙酯洗脱，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 418.1(M+H)+。
1.9.3.2-叔-丁基8-甲基5-(苄氧基)-3,4-二氢异喹啉-2,8(1H)-二甲酸酯
将甲醇(100mL)和三乙胺(9.15mL)加入到在500mL不锈钢压力反应器中的实例1.9.2(10.8g)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(0.48g)中。将容器用氩气喷射数次。用一氧化碳对反应器加压，并在100℃，60psi的一氧化碳下搅拌2小时。冷却后，将粗反应混合物真空浓缩。将残余物在乙酸乙酯(500mL)和水(200mL)之间分配。将有机层进一步用水和盐水洗涤，并经硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残余物在330g硅胶柱上(用在庚烷中的10％-20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 398.1(M+H)+。
1.9.4.甲基5-(苄氧基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯盐酸盐
向实例1.9.3(3.78g)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中加入4N HCl的二噁烷(20mL)溶液。将混合物搅拌过夜，并将混合物真空浓缩，并且粗标题化合物无需进一步纯化即可用于下一反应。MS(ESI)m/e 298.1(M+H)+。
1.9.5.甲基5-(苄氧基)-2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例1.9.4(3.03g)在二甲基亚砜(50mL)中的溶液中加入实例1.4.4(2.52g)和三乙胺(3.8mL)。将混合物在60℃下在氮气下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，并用水和盐水洗涤，并经硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂后，将粗材料在硅胶柱上(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 553.1(M+H)+。
1.9.6.甲基5-(苄氧基)-2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例1.9.5(2.58g)在四氢呋喃(40mL)和水(20mL)中的溶液中加入实例1.1.10(2.66g)、1,3,5,7-四甲基-6-苯基--2,4,8-三氧杂--6-磷杂金刚烷(341mg)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(214mg)和K3PO4(4.95g)。将混合物在回流下搅拌4小时。将混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，并用水和盐水洗涤，并经硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂后，将粗材料在硅胶柱上(用在二氯甲烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 904.5(M+H)+。
1.9.7.甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-5-羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.9.6(3.0g)在四氢呋喃(60mL)中的溶液加入到250mL SS压力瓶中的Pd(OH)2(0.6g，De gussa#E101NE/W，在碳上20％，49％水含量)中。将混合物在30psi的氢气下在50℃下搅拌16小时。然后将混合物通过尼龙膜过滤，并真空浓缩溶剂，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 815.1(M+H)+。
1.9.8.甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-5-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.9.7(170mg)溶于二氯甲烷(0.8mL)和甲醇(0.2mL)中。向该混合物中加入(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷在二***(0.17mL)中的2.0M溶液，并将反应在室温下搅拌过夜。添加另外的(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷在二***(0.10mL)中的2.0M溶液，并将反应搅拌24小时。然后浓缩反应混合物，并使用标题化合物而无需进一步纯化。MS(ESI)m/e 828.2(M+H)+。
1.9.9.2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-5-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
通过用实例1.9.8取代实施1.5.13中的实例1.5.12制备标题化合物。MS(ESI)m/e814.1(M+H)+。
1.9.10.叔丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯通过用实例1.9.9取代实施1.5.14中的实例1.5.13制备标题化合物。MS(ESI)m/e 946.1(M+H)+。
1.9.11.6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3,5-二甲基-7-(2-(甲氨基)乙氧基)金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
通过用实例1.9.10取代实施1.5.17中的实例1.5.16制备标题化合物。1H NMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.74(br s,2H),8.02(d,1H)7.77(m,2H),7.54(d,1H),7.47(t,1H),7.34(m,2H),7.01(d,2H),5.01(s,2H),3.90(m,2H),3.89(s,3H),3.85(s,2H),3.58(m,2H),3.57(s,3H),2.98(m,2H),2.82(m,2H),2.12(s,3H),1.41(s,2H),1.30(m,4H),1.14(m,4H),1.04(m,2H),0.87(s,6H)。MS(ESI)m/e 790.2(M+H)+。
1.10.6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.10)的合成
1.10.1.3-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)喹啉-5-甲酸
将3-溴喹啉-5-甲酸(300mg)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(363mg)和乙酸钾(350mg)在二噁烷(5mL)中的混合物用氮气吹扫5分钟，并且添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(58.3mg)。将混合物在100℃加热过夜并冷却。向该混合物中加入实例1.1.11(510mg)、二氯双(三苯基膦)-钯(II)(83mg)、CsF(362mg)和水(3mL)。将所得混合物在100℃加热过夜，并通过硅藻土过滤。浓缩滤液，并将残余物溶于二甲基亚砜中，加载C18柱(300g)上，并用50％-100％乙腈的0.1％TFA/水溶液的梯度洗脱，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 780.5(M+H)+。
1.10.2.叔丁基6-(5-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向实例1.10.1(120mg)、苯并[d]噻唑-2-胺(46.2mg)和O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU，117mg)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(134μL)。将混合物搅拌过夜，并加载到C18柱(300g)上，用50％-100％乙腈的0.1％TFA/水溶液的梯度洗脱，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 913.4(M+H)+。
1.10.3.6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
将实例1.10.2(50mg)在二氯甲烷(3mL)中的溶液用三氟乙酸(2mL)处理过夜并浓缩。将残余物溶于二甲基亚砜(5mL)的混合物中，加载到C18柱(300g)上，并且用10％-70％乙腈的0.1％TFA水溶液的梯度洗脱，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.22(s,1H),9.73(d,1H),9.41(s,1H),8.34(dd,2H),8.27(s,3H),8.18(d,1H),8.08(d,1H),8.02-7.93(m,2H),7.82(d,1H),7.55-7.46(m,2H),7.38(t,1H),3.91(s,2H),3.03(p,2H),2.59-2.53(m,4H),2.25(s,3H),1.46(s,2H),1.38-1.25(m,4H),1.18(s,4H),1.11-1.01(m,2H),0.89(s,6H)。MS(ESI)m/e 756.2(M+H)+。
1.11.6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.11)的合成
1.11.1.乙基6-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)喹啉-4-甲酸酯
如实例1.10.1所述用乙基6-溴喹啉-4-甲酸酯代替3-溴喹啉-5-甲酸制备标题化合物。MS(ESI)m/e 808.4(M+H)+。
1.11.2.6-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)喹啉-4-甲酸
向实例1.11.1(100mg)在二甲基亚砜(2mL)中的溶液中加入甲醇(2mL)和1M氢氧化锂(248μL)。将混合物搅拌30分钟，用10％HCl酸化至pH 4，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 780.4(M+H)+。
1.11.3.叔丁基6-(4-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
如实例1.10.2所述用实例1.11.2代替实例1.10.1制备标题化合物。MS(ESI)m/e912.3(M+H)+。
1.11.4.6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
如实例1.10.3所述用实例1.11.3代替实例1.10.2制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.34(s,2H),9.14(d,1H),8.94(s,1H),8.63(dd,1H),8.27(dd,4H),8.09(d,1H),8.00-7.90(m,2H),7.83(d,1H),7.50(d,2H),7.40(t,1H),3.90(s,2H),3.03(p,2H),2.56(t,4H),2.23(s,3H),1.45(s,2H),1.32(d,3H),1.18(s,4H),1.11-0.98(m,2H),0.89(s,6H)。MS(ESI)m/e 756.2(M+H)+。
1.12.6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸(化合物W3.12)的合成
1.12.1.甲基5-(苄氧基)-2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
通过用实例1.9.5取代实施1.5.11中的实例1.5.9制备标题化合物。MS(DCI)m/e601.0(M+H)+。
1.12.2.2-((3-((4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)氧基)乙醛
将二甲基亚砜(4.8mL)溶解在二氯甲烷(150mL)中。将混合物冷却至-75℃，并且滴加草酰氯(2.6mL)。将反应混合物在-75℃下搅拌45分钟，并且滴加实例1.1.6(7.1g)在二氯甲烷(45mL)中的溶液。将反应混合物在-75℃下搅拌30分钟，并添加三乙胺(5.0mL)。将反应温热至室温，倒入水中，并用二***萃取。将有机层用盐水洗涤并经Na2SO4干燥。过滤并浓缩后，通过硅胶色谱(用二氯甲烷/乙酸乙酯(85/15)洗脱)纯化，给出标题化合物。MS(DCI)m/e443.0(M+H)+。
1.12.3.2-((3-((4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)氧基)-N-(2-甲氧基乙基)乙胺
将实例1.12.2(4.0g)和2-甲氧基乙胺(0.90mL)溶解在二氯甲烷(40mL)中并将混合物在室温下搅拌2小时。添加硼氢化钠(500mg)在甲醇(7mL)中的悬浮液并将所得混合物搅拌45分钟。然后将反应加入到饱和NaHCO3水溶液中，并且用乙酸乙酯萃取所得混合物。将有机层用盐水洗涤并经Na2SO4干燥。过滤并浓缩后得到标题化合物，无需纯化即可使用。MS(DCI)m/e 502.1(M+H)+。
1.12.4.叔丁基(2-((3-((4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)氧基)乙基)(2-甲氧基乙基)氨基甲酸酯
将实例1.12.3(4.4g)溶解在四氢呋喃(60mL)中，并且添加二碳酸二叔丁酯(3.0g)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.15g)。将反应在室温下搅拌过夜。然后浓缩反应并通过快速色谱(用二氯甲烷/乙酸乙酯(3/1)洗脱)纯化，以提供标题化合物。
1.12.5.甲基5-(苄氧基)-2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
如下制备标题化合物：在实例1.5.12中用实例1.12.1取代实例1.5.11，并用实例1.12.4取代实例1.5.10。MS(ESI)m/e 948.2(M+H)+。
1.12.6.甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-5-羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.12.5(5.2g)溶解在四氢呋喃(100mL)中。然后添加20％氢氧化钯/活性炭(1.0g)，并将反应混合物在Parr反应器上在30psi的氢气氛以及50℃下搅拌3小时。过滤并浓缩后，通过硅胶色谱(用庚烷/乙酸乙酯(2/3)洗脱)纯化，给出标题化合物。MS(ESI)m/e858.1(M+H)+。
1.12.7.甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-5-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
通过用实例1.12.6取代实施1.9.8中的实例1.9.7制备标题化合物。MS(ESI)m/e872.2(M+H)+。
1.12.8.2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-5-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
通过用实例1.12.7取代实施1.5.13中的实例1.5.12制备标题化合物。MS(ESI)m/e858.1(M+H)+。
1.12.9.叔丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
通过用实例1.12.8取代实施1.5.14中的实例1.5.13制备标题化合物。MS(ESI)m/e990.1(M+H)+。
1.12.10.6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
将实例1.12.9(2.6g)溶解在二噁烷(20mL)中，然后添加4N HCl的二噁烷(100mL)溶液，并将反应在室温下搅拌过夜。使沉淀物沉降并取出上清液。通过反相色谱(C18柱)(用在0.1％TFA/水中的10％-90％乙腈洗脱)纯化剩余的固体，以提供标题化合物，为三氟乙酸盐。1H NMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.41(vbr s,2H),8.01(d,1H)7.77(m,2H),7.50(d,1H),7.47(m,1H),7.34(t,1H),7.29(s,1H),7.01(dd,2H),5.00(s,2H),3.90(m,2H),3.89(s,3H),3.83(s,2H),3.56(m,4H),3.29(s,3H),3.12(m,2H),3.05(m,2H),2.81(m,2H),2.11(s,3H),1.41(s,2H),1.30(m,4H),1.14(m,4H),1.04(m,2H),0.87(s,6H)。MS(ESI)m/e834.3(M+H)+。
1.13.3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.13)的合成
1.13.1.4-溴-3-氰基甲基-苯甲酸甲酯
将三甲基硅烷甲腈(3.59mL)加入到四氢呋喃(6mL)中。经30分钟滴加1M四丁基氟化铵(26.8mL)。然后将溶液在室温下搅拌30分钟。将甲基4-溴-3-(溴甲基)苯甲酸酯(7.50g)溶解在乙腈(30mL)中，并经30分钟将所产生的溶液滴加到第一溶液中。然后将溶液加热至80℃保持30分钟，并且然后冷却至室温。将溶液减压浓缩，并通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的20％-30％乙酸乙酯洗脱)纯化。减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。
1.13.2.3-(2-氨基乙基)-4-溴苯甲酸甲酯
将实例1.13.1(5.69g)溶解在四氢呋喃(135mL)中，并添加1M硼烷(在四氢呋喃中，24.6mL)。将溶液在室温下搅拌16小时，并且然后用甲醇和1M HCl缓慢淬灭。添加4M HCl(150mL)，并且将溶液在室温下搅拌16小时。减压浓缩混合物，并使用固体碳酸钾将pH调节至11-12。然后用二氯甲烷(3x 100mL)萃取溶液。合并有机萃取物，并经无水硫酸钠干燥。将溶液过滤并减压浓缩，并通过硅胶快速柱色谱(用在二氯甲烷中的10％-20％甲醇洗脱)纯化该材料。减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 258,260(M+H)+。
1.13.3.4-溴-3-[2-(2,2,2-三氟乙酰基氨基)-乙基]-苯甲酸甲酯
将实例1.13.2(3.21g)溶解在二氯甲烷(60mL)中。将溶液冷却至0℃，并添加三乙胺(2.1mL)。然后逐滴添加三氟乙酸酐(2.6mL)。将溶液在0℃下搅拌十分钟，并且然后温热至室温，同时搅拌一小时。添加水(50mL)并将溶液用乙酸乙酯(100mL)稀释。添加1M HCl(50mL)，并且将有机层分离，用1M HCl洗涤，并且然后用盐水洗涤。然后将有机层在无水硫酸钠上干燥。过滤后，减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 371,373(M+H)+。
1.13.4.5-溴-2-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸甲酯
将实例1.13.3(4.40g)和多聚甲醛(1.865g)置于烧瓶中并添加浓硫酸(32mL)。将溶液在室温下搅拌1小时。添加冷水(120mL)。将溶液用乙酸乙酯(3x 100mL)萃取。合并萃取物，用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)洗涤，用水(100mL)洗涤，并经无水硫酸钠干燥。减压浓缩溶液，并通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的20％-30％乙酸乙酯洗脱)纯化该材料。减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 366,368(M+H)+。
1.13.5.5-氰基-2-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸甲基酯
将实例1.13.4(500mg)和二氰基锌(88mg)加入到N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中。将溶液脱气并用氮气冲洗三次。添加四(三苯基膦)钯(0)(79mg)，并将溶液脱气并用氮气冲洗一次。然后将溶液在80℃下搅拌16小时。将溶液冷却，用在庚烷(20mL)中的50％乙酸乙酯稀释，并用1M盐酸(15mL)洗涤两次。将有机层用盐水洗涤，并且经无水硫酸钠干燥。将溶液过滤并且减压浓缩，并通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的20％-30％乙酸乙酯洗脱)纯化该材料。减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。
1.13.6.5-氰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸甲基酯
将实例1.13.5(2.00g)溶于甲醇(18mL)和四氢呋喃(18mL)中。添加水(9mL)，然后添加碳酸钾(1.064g)。将反应在室温下搅拌135分钟，并且然后用乙酸乙酯(100mL)稀释。将溶液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，并在无水硫酸钠上干燥。将溶剂过滤并减压蒸发，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 217(M+H)+。
1.13.7.2-(5-溴-6-叔-丁氧基羰基吡啶-2-基)-5-氰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸甲基酯
将实例1.13.6(1.424g)和实例1.4.4(1.827g)溶解在二甲基亚砜(13mL)中。添加N,N-二异丙基乙胺(1.73mL)，并将溶液加热至50℃持续16小时。添加另外的实例1.4.4(0.600g)，并将溶液在50℃下再加热16小时。将溶液冷却至室温，用乙酸乙酯(50mL)稀释，用水(25mL)洗涤两次，用盐水洗涤，然后在无水硫酸钠上干燥。将溶液过滤并且减压浓缩，并通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的20％-50％乙酸乙酯洗脱)纯化该材料。减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 472,474(M+H)+。
1.13.8.2-[6-叔-丁氧基羰基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡啶-2-基]-5-氰基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸甲基酯
将实例1.13.7(2.267g)和三乙胺(1.34mL)加入到乙腈(15mL)中。将溶液脱气并用氮气冲洗三次。添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.05mL)，然后添加二氯[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(196mg)。将溶液脱气并用氮气冲洗一次并加热至回流16小时。将溶液冷却，用乙酸乙酯(50mL)稀释，用水(10mL)洗涤，用盐水洗涤，并在无水硫酸钠上干燥。减压浓缩溶液，并通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的20％-30％乙酸乙酯洗脱)纯化该材料。减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 520(M+H)+。
1.13.9.2-(6-叔-丁氧基羰基-5-{1-[5-(2-叔-丁氧基羰基氨基-乙氧基)-3,7-二甲基-金刚烷-1-基甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-吡啶-2-基)-5-氰基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-8-甲酸甲基酯
将实例1.13.8(140mg)和实例1.4.2(146mg)溶解在四氢呋喃(3mL)中。添加磷酸钾(286mg)和水(0.85mL)。将溶液脱气并用氮气冲洗三次。添加(1S,3R,5R,7S)-1,3,5,7-四甲基-8-十四烷基-2,4,6-三氧杂-8-磷金刚烷(11mg)和三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(12mg)，并将溶液脱气并用氮气冲洗一次。将溶液加热至62℃保持16小时。将溶液冷却，并且然后用水(5mL)和乙酸乙酯(25mL)稀释。分离有机层并用盐水洗涤并在无水硫酸钠上干燥。将溶液过滤并且减压浓缩，并通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的30％-50％乙酸乙酯洗脱)纯化该材料。减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e809(M+H)+。
1.13.10.2-(6-叔-丁氧基羰基-5-{1-[5-(2-叔-丁氧基羰基氨基-乙氧基)-3,7-二甲基-金刚烷-1-基甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-吡啶-2-基)-5-氰基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-8-甲酸
将实例1.13.9(114mg)溶于四氢呋喃(0.7mL)和甲醇(0.35mL)中。添加水(0.35mL)，然后添加氢氧化锂一水合物(11mg)。将溶液在室温下搅拌16小时，并添加1M盐酸(0.27mL)。添加水(1mL)，并且用乙酸乙酯(5mL)萃取溶液三次。合并萃取物，在无水硫酸钠上干燥并过滤。减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 795(M+H)+。
1.13.11.6-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-3-{1-[5-(2-叔-丁氧基羰基氨基-乙氧基)-3,7-二甲基-金刚烷-1-基甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-吡啶-2-甲酸叔丁基酯
将实例1.13.10(89mg)和苯并[d]噻唑-2-胺(18mg)溶解在二氯甲烷(1.2mL)中。加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(39mg)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(25mg)，并且将溶液在室温下搅拌16小时。通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的50％乙酸乙酯洗脱)纯化该材料。减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e927(M+H)+。
1.13.12.3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸
将实例1.13.11(44mg)溶解在二氯甲烷(1mL)中。添加三氟乙酸(0.144mL)，并且将溶液在室温下搅拌16小时。然后减压蒸发溶剂，将残余物溶于二氯甲烷(1mL)中，并且减压除去溶剂。添加二***(2mL)并减压除去。再次添加二***(2mL)并减压除去，以提供标题化合物，为三氟乙酸盐。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.52(bs,1H),8.05(d,1H),7.92(d,1H),7.82-7.75(m,2H),7.63(m,2H),7.50(dd,2H),7.42-7.28(m,3H),7.16(t,1H),7.04(d,1H),4.98(s,2H),3.96(t,2H),3.83(s,2H),3.49(t,2H),3.15(t,2H),2.90(q,2H),2.10(s,3H),1.41(s,2H),1.35-1.22(m,4H),1.18-0.99(m,6H),0.87(bs,6H)。MS(ESI)m/e 771(M+H)+。
1.14.6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸(化合物W3.14)的合成
1.14.1.2-((3,5-二甲基-7-((5-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)金刚烷-1-基)氧基)乙醇
向实例1.1.6(4.45g)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(409mg)在乙腈(60mL)中的溶液中加入三乙胺(5mL)和频哪醇硼烷(6.4mL)。将混合物回流过夜。将该混合物直接用于下一步而无需后处理。MS(ESI)m/e 444.80(M+H)+。
1.14.2.叔-丁基6-氯-3-(1-((3-(2-羟基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向叔丁基3-溴-6-氯吡啶甲酸酯(3.06g)在四氢呋喃(50mL)和水(20mL)中的溶液中加入实例1.14.1(4.45g)、1,3,5,7-四甲基-8-十四烷基-2,4,6-三氧杂-8-磷金刚烷(0.732g)、Pd2(dba)3(0.479g)和K3PO4(11g)。将混合物在回流下搅拌过夜并浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯(500mL)中并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥、过滤、并浓缩。通过快速色谱(用在二氯甲烷中的20％-40％乙酸乙酯的梯度洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e530.23(M+H)+。
1.14.3.叔-丁基6-氯-3-(1-((3,5-二甲基-7-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向实例1.14.2(3.88g)在二氯甲烷(30mL)和三乙胺(6mL)中的冷(0℃)的搅拌溶液中加入甲磺酰氯(2.52g)。将混合物在室温下搅拌4小时，用乙酸乙酯(400mL)稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到标题化合物。MS(ESI)m/e608.20(M+H)+。
1.14.4.叔-丁基3-(1-((3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-氯吡啶甲酸酯
将实例1.14.3(2.2g)在7N铵(在CH3OH(20mL)中)中的溶液在100℃下在微波条件下(Biotage Initiator)加热45分钟并浓缩至干。将残余物溶于乙酸乙酯中并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 529.33(M+H)+。
1.14.5.叔丁基6-氯-3-(1-((3,5-二甲基-7-(2-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基磺酰胺基)乙氧基)金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向实例1.14.4(3.0g)在二氯甲烷(30mL)中的冷(0℃)溶液中添加三乙胺(3mL)，然后添加2-(三甲基甲硅烷基)乙磺酰基氯(2.3g)。将混合物在室温下搅拌3小时并且浓缩至干。将残余物溶于乙酸乙酯(400mL)中并用NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。将残余物经Na2SO4干燥，过滤，浓缩，并通过快速色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 693.04(M+H)+。
1.14.6.叔丁基6-氯-3-(1-((3-(2-(N-(2-甲氧基乙基)-2-(三甲基甲硅烷基)乙基磺酰胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向实例1.14.5(415mg)在甲苯(15mL)中的溶液中加入2-甲氧基乙醇(91mg)，然后加入氰基亚甲基三丁基磷烷(289mg)。将混合物在70℃下搅拌3小时并浓缩至干。将残余物通过快速色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)进行纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 751.04(M+H)+。
1.14.7.叔丁基3-(1-((3-(2-(N-(2-甲氧基乙基)-2-(三甲基甲硅烷基)乙基磺酰胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)吡啶甲酸酯
向7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,2,3,4-四氢喹啉(172mg)在二噁烷(10mL)和水(5mL)中的溶液中加入实例1.14.6(500mg)、(Ph3P)2PdCl2(45.6mg)和CsF(296mg)。将混合物在微波条件下(Biotage Initiator)在120℃下搅拌30分钟，用乙酸乙酯(200mL)稀释并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥、过滤、并浓缩。将残余物通过快速色谱(用在二氯甲烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 848.09(M+H)+。
1.14.8.叔丁基6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)-3-(1-((3-(2-(N-(2-甲氧基乙基)-2-(三甲基甲硅烷基)乙基磺酰胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向双(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸酯(63mg)在乙腈(10mL)中的悬浮液中加入苯并[d]噻唑-2-胺(37.2mg)。将混合物搅拌1小时。添加实例1.14.7(210mg)在乙腈(2mL)中的溶液，并将悬浮液剧烈搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 1024.50(M+H)+。
1.14.9.6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸
向实例1.14.8(230mg)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中加入四丁基氟化铵(TBAF10mL，在四氢呋喃中1M)。将混合物在室温下搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥、过滤、并浓缩。将残余物溶于二氯甲烷(5mL)中并用三氟乙酸(5mL)处理过夜。将混合物浓缩，并通过反向HPLC(吉尔森)(用在0.1％TFA/水中的10％-85％乙腈洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.40(d,3H),8.00(d,1H),7.90-7.72(m,3H),7.46(s,1H),7.40-7.32(m,1H),7.28(d,1H),7.24-7.17(m,1H),3.95(d,3H),3.88(s,16H),3.56(dt,5H),3.28(s,3H),3.18-2.96(m,5H),2.82(t,2H),2.21(s,3H),1.93(p,2H),1.43(s,2H),1.30(q,5H),1.21-0.97(m,7H),0.86(s,6H)MS(ESI)m/e 804.3(M+H)+。
1.15.6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸(化合物W3.15)的合成
1.15.1.7-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-(N-(2-甲氧基乙基)-2-(三甲基甲硅烷基)乙基磺酰胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1-萘甲酸
向甲基7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-萘甲酸酯(208mg)在二噁烷(10mL)和水(5mL)中的溶液中加入实例1.14.6(500mg)、(Ph3P)2PdCl2(45.6mg)和CsF(296mg)。将混合物在微波条件下(Biotage Initiator)在120℃下搅拌30分钟，用乙酸乙酯稀释并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥、过滤、并浓缩。将残余物通过快速色谱(用在二氯甲烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出酯中间体。将酯溶于四氢呋喃(10mL)、甲醇(5mL)和H2O(5mL)的混合物中，并用氢氧化锂一水合物(200mg)处理。将混合物在室温下搅拌4小时，用1N HCl水溶液酸化并用乙酸乙酯(300mL)稀释。用水和盐水洗涤后，将有机层经Na2SO4干燥。过滤后，蒸发溶剂，得到标题化合物。MS(ESI)m/e 888.20(M+H)+。
1.15.2.6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸
向实例1.15.1(500mg)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入苯并[d]噻唑-2-胺(85mg)、1-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]-碳二亚胺盐酸盐(216mg)和4-(二甲基氨基)吡啶(138mg)。将混合物在室温下搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。然后将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并浓缩至干。将残余物溶于四氢呋喃(10mL)中，并用四丁基氟化铵(10mL，在四氢呋喃中1M)处理过夜。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并浓缩至干。将残余物溶于二氯甲烷(5mL)中并用三氟乙酸(5mL)处理过夜。然后将混合物浓缩并通过反向HPLC(吉尔森)(用10％-85％乙腈的0.1％TFA水溶液洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm13.11(s,1H),9.00(s,1H),8.60-8.29(m,3H),8.26-8.13(m,3H),8.03(ddd,2H),7.92(d,1H),7.80(d,1H),7.74-7.62(m,1H),7.51-7.42(m,2H),7.36(td,1H),3.88(s,2H),3.61-3.52(m,2H),3.27(s,3H),3.17-2.95(m,4H),2.22(s,3H),1.43(s,2H),1.30(q,4H),1.23-0.96(m,6H),0.86(s,6H)。MS(ESI)m/e 799.2(M+H)+。
1.16.6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(氧杂环丁烷-3-基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(化合物W3.16)的合成
1.16.1.甲基2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向甲基1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯盐酸盐(12.37g)和实例1.4.4(15g)在二甲基亚砜(100mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(12mL)。将混合物在50℃下搅拌24小时。将混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，通过硅胶柱色谱(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化粗材料，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 448.4(M+H)+。
1.16.2.甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例1.16.1(2.25g)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(205mg)在乙腈(30mL)中的溶液中加入三乙胺(3mL)和频哪醇硼烷(2mL)。将混合物在回流下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤，蒸发溶剂，并进行硅胶色谱(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)，给出标题化合物。MS(ESI)m/e 495.4(M+H)+。
1.16.3.甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例1.16.2(4.94g)在四氢呋喃(60mL)和水(20mL)中的溶液中加入实例1.4.2(5.57g)、1,3,5,7-四甲基-8-十四烷基-2,4,6-三氧杂-8-磷金刚烷(412mg)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(457mg)，和K3PO4(11g)。将混合物在回流下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，通过柱色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化粗物质，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 784.4(M+H)+。
1.16.4.2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
向实例1.16.3(10g)在四氢呋喃(60mL)、甲醇(30mL)和水(30mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(1.2g)。将混合物在室温搅拌24小时。将反应混合物用2％HCl水溶液中和，并在真空下浓缩。将残余物用乙酸乙酯(800mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到标题化合物。MS(ESI)m/e 770.4(M+H)+。
1.16.5.叔丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向实例1.16.4(3.69g)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中加入苯并[d]噻唑-2-胺(1.1g)、氟-N,N,N',N'-四甲基甲脒鎓六氟磷酸盐(1.9g)和N,N-二异丙基乙胺(1.86g)。将混合物在60℃下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤，蒸发溶剂，并且柱纯化(在庚烷中的20％乙酸乙酯)，给出标题化合物。MS(ESI)m/e 902.2(M+H)+。
1.16.6.3-(1-((3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
将实例1.16.5(2g)溶于50％TFA的二氯甲烷(20mL)溶液中并搅拌过夜。真空除去溶剂，并将残余物加载到反相柱上，并且用在水(0.1％TFA)中的20％-80％乙腈洗脱，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 746.3(M+H)+。
1.16.7.6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(氧杂环丁烷-3-基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
在室温下，将实例1.16.6(0.050g)，氧杂环丁烷-3-酮(5mg)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.018g)的溶液在二氯甲烷(1mL)中一起搅拌。搅拌1小时后，添加另外的氧杂环丁烷-3-酮(5mg)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.018g)，并且将反应搅拌过夜。浓缩反应，溶解在二甲基亚砜/甲醇(2mL)的1:1混合物中，并使用吉尔森***通过HPLC(含有0.1％v/v三氟乙酸的20％-60％乙腈水溶液)纯化。合并所需的级分并冷冻干燥，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.95(s,1H),9.26(s,2H),8.12(d,1H),7.88(d,1H),7.71(d,1H),7.63-7.50(m,3H),7.50-7.41(m,2H),7.38(s,1H),7.05(d,1H),5.05(s,2H),4.79(t,2H),4.68(dd,2H),4.54-4.41(m,1H),3.98(t,2H),3.92(s,2H),3.63(t,2H),3.16-3.04(m,4H),2.20(s,3H),1.52(s,2H),1.47-1.06(m,10H),0.96(s,6H)。MS(ESI)m/e 802.2(M+H)+。
1.17.6-[6-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸(化合物W3.17)的合成
1.17.1.4-碘-1-((3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑
将实例1.1.6(3.00g)溶解在1,4-二噁烷(40mL)中，并且添加氢化钠(在矿物油中60％，568mg)。将溶液在室温下混合15分钟，并添加甲基碘(1.64mL)。将溶液在室温下搅拌3天，并且然后添加0.01M HCl水溶液(50mL)。将溶液用二***萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，并在无水硫酸钠上干燥。过滤后，减压除去溶剂，并且然后在高真空下除去，得到标题化合物。MS(ESI)m/e 459(M+H)+。
1.17.2.苄基4-氧代戊-2-炔酸酯
将苄基4-羟基戊-2-炔酸酯(40.5g)和戴斯-马丁(Dess-Martin)氧化剂(93.0g)在二氯甲烷(500mL)中的溶液在0℃下搅拌1小时。将溶液倒入二***(1L)中，并将合并的有机物用1M NaOH水溶液和盐水洗涤三次，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的5％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。
1.17.3.(S)-苄基6-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-基)-2-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将1-(2,2,2-三氟乙酰基)哌啶-4-酮(6.29g)、(S)-叔丁基吡咯烷-3-基氨基甲酸酯(6.0g)和对甲苯磺酸一水合物(0.613g)在乙醇(80mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。然后添加实例1.17.2(6.51g)并将反应在室温下搅拌24小时，并加热至45℃保持3天。然后将反应冷却并倒入二***(600mL)中。将所得溶液用水和盐水洗涤两次，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的5％-50％乙酸乙酯洗脱，以给出产物。
1.17.4.(S)-苄基6-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.17.3(3.1g)和碳酸钾(1.8g)在四氢呋喃(30mL)、甲醇(10mL)和水(25mL)的混合物中的溶液在45℃下搅拌48小时。然后将反应冷却并用二氯甲烷(300mL)稀释。分离各层，并将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并浓缩，以给出标题化合物。
1.17.5.(S)-苄基2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-6-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.17.4(1.6g)、实例1.4.4(1.08g)和三乙胺(0.59mL)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液加热至50℃保持24小时。将反应冷却并倒入乙酸乙酯(400mL)中。将所得溶液用水和盐水洗涤三次，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的5％-50％乙酸乙酯洗脱，以给出产物。
1.17.6.(S)-苄基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)-6-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.17.5(500mg)、4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(136mg)和三乙胺(0.200mL)在乙腈(5mL)中的溶液加热至75℃持续24小时。使反应冷却至室温并浓缩至干。然后通过柱色谱(用在庚烷中的5％-50％乙酸乙酯洗脱)纯化粗材料，以给出标题化合物。
1.17.7.苄基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-6-((S)-3-((叔-丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.17.6(240mg)、实例1.17.1(146mg)、1,3,5,7-四甲基-8-十四烷基-2,4,6-三氧杂-8-磷金刚烷(13mg)、乙酸钯(II)(14.6mg)和磷酸三钾(270mg)在二噁烷(7mL)和水(3mL)中溶液加热至70℃保持24小时。使反应冷却至室温并浓缩至干。然后通过柱色谱(用在庚烷中的5％-25％乙酸乙酯洗脱)纯化粗材料，以给出标题化合物。
1.17.8.2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-6-((S)-3-((叔-丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
将实例1.17.7(1.6g)和氢氧化锂一水合物(5mg)在四氢呋喃/甲醇/水(10mL)的3:1:1混合物中的溶液搅拌4天。将反应用1M HCl水溶液酸化，并倒入乙酸乙酯(150mL)中。将所得溶液用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以给出标题化合物。
1.17.9.叔丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-((S)-3-((叔-丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
将实例1.17.8(78mg)、苯并[d]噻唑-2-胺(16mg)、O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(48mg)和二异丙基乙胺(0.024mL)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液加热至50℃保持48小时。然后将反应冷却并倒入乙酸乙酯(100mL)中。将所得溶液用水和盐水洗涤三次，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱(用在庚烷中的20％-100％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。
1.17.10.6-[6-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸
将在二氯甲烷(3mL)中的实例1.17.9(40mg)用三氟乙酸(2mL)处理过夜。浓缩混合物，以提供标题化合物，为TFA盐。MS(ESI)m/e 845.7(M+H)+。
1.18.6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3,5-二甲基-7-{2-[(2-氨磺酰基乙基)氨基]乙氧基}三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸(化合物W3.18)的合成
1.18.1.3-溴-5,7-二甲基金刚烷甲酸
在0℃下向50mL圆底烧瓶中加入溴(16mL)。加入铁粉(7g)，并将反应在0℃下搅拌30分钟。加入3,5-二甲基金刚烷-1-甲酸(12g)。将混合物加温至室温并搅拌3天。将冰和浓HCl的混合物倒入反应混合物中。将所得悬浮液用Na2SO3(50g，在200mL水中)处理两次，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机物用1N HCl水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以给出标题化合物。
1.18.2.3-溴-5,7-二甲基金刚烷甲醇
向实例1.18.1(15.4g)的四氢呋喃(200mL)溶液中加入BH3(在四氢呋喃中1M，150mL)，并且将混合物在室温下搅拌过夜。然后通过滴加甲醇小心地淬灭反应混合物。然后将混合物真空浓缩，并将残余物在乙酸乙酯(500mL)和2N HCl水溶液(100mL)之间平衡。将水层用乙酸乙酯进一步萃取两次，并将合并的有机萃取液用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并过滤。蒸发溶剂，得到标题化合物。
1.18.3.1-((3-溴-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基)-1H-吡唑
向实例1.18.2(8.0g)在甲苯(60mL)中的溶液中加入1H-吡唑(1.55g)和氰基亚甲基三丁基磷烷(2.0g)，并将混合物在90℃下搅拌过夜。浓缩反应混合物，并通过硅胶柱色谱(10:1庚烷:乙酸乙酯)纯化残余物，得到标题化合物。MS(ESI)m/e 324.2(M+H)+。
1.18.4.2-{[3,5-二甲基-7-(1H-吡唑-1-基甲基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]氧基}乙醇
向实例1.18.3(4.0g)在乙烷-1,2-二醇(12mL)中的溶液中加入三乙胺(3mL)。将混合物在150℃下在微波条件下(Biotage Initiator)搅拌45分钟。将混合物倒入水(100mL)中并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并过滤。蒸发溶剂得到残余物，将其通过硅胶色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱，然后用在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 305.2(M+H)+。
1.18.5.2-({3,5-二甲基-7-[(5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙醇
向实例1.18.4(6.05g)在四氢呋喃(100mL)中的冷却的(-78℃)溶液中加入n-BuLi(40mL，在己烷中2.5M)，并将混合物在-78℃下搅拌1.5小时。通过注射器加入碘甲烷(10mL)，并将混合物在-78℃下搅拌3小时。然后将反应混合物用NH4Cl水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机萃取物用水和盐水洗涤。用硫酸钠干燥后，过滤并浓缩溶液，残余物用硅胶柱色谱(用在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 319.5(M+H)+。
1.18.6.1-({3,5-二甲基-7-[2-(羟基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-4-碘-5-甲基-1H-吡唑
向实例1.18.5(3.5g)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中加入N-碘代琥珀酰亚胺(3.2g)，并将混合物在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物用乙酸乙酯(600mL)稀释，并用NaHSO3水溶液、水和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用在二氯甲烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e445.3(M+H)+。
1.18.7.1-((3-(2-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-4-碘-5-甲基-1H-吡唑
在-40℃下，将叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(5.34mL)加入到实例1.18.6(8.6g)和2,6-二甲基吡啶(3.16mL)在二氯甲烷(125mL)中溶液中，并且允许反应温热至室温过夜。将混合物浓缩，并通过硅胶色谱(用在庚烷中的5％-20％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 523.4(M+H)+。
1.18.8.1-((3-(2-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑
在-78℃下，将正丁基锂(8.42mL，在己烷中2.5M)加入到在120mL四氢呋喃中的实例1.18.7(9.8g)中，并将反应搅拌1分钟。加入硼酸三甲酯(3.92mL)，并将反应搅拌5分钟。加入频哪醇(6.22g)，使反应温热至室温并搅拌2小时。用pH 7缓冲液淬灭反应，并将混合物倒入醚中。分离各层，并将有机层减压浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷中的1％-25％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。
1.18.9.6-氟-3-溴吡啶甲酸
将6-氨基-3-溴吡啶甲酸(25g)在400mL 1:1二氯甲烷/氯仿中的浆料在5℃下经1小时加入到在二氯甲烷(100mL)中的亚硝基鎓四氟硼酸盐(18.2g)中。将所得混合物再搅拌30分钟，然后温热至35℃并搅拌过夜。将反应冷却至室温，并且然后用NaH2PO4水溶液调节至pH4。将所得溶液用二氯甲烷萃取三次，并将合并的萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。
1.18.10.叔-丁基3-溴-6-氟吡啶甲酸酯
在0℃下，将对甲苯磺酰氯(27.6g)加入到实例1.18.9(14.5g)和吡啶(26.7mL)在二氯甲烷(100mL)和叔丁醇(80mL)中的溶液中。将反应搅拌15分钟，并且然后升温至室温，并且搅拌过夜。将溶液浓缩并在乙酸乙酯和Na2CO3水溶液之间分配。分离各层，并且将水层用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用Na2CO3水溶液和盐水冲洗，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。
1.18.11.甲基2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯盐酸盐(12.37g)和实例1.18.10(15g)在二甲基亚砜(100mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(12mL)，并将混合物在50℃下搅拌24小时。然后将混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 448.4(M+H)+。
1.18.12.甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例1.18.11(2.25g)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(205mg)在乙腈(30mL)中的溶液中加入三乙胺(3mL)和频哪醇硼烷(2mL)，并且将混合物在回流下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)进行纯化，提供标题化合物。
1.18.13.甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-羟基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例1.18.12(2.25g)在四氢呋喃(30mL)和水(10mL)中的溶液中加入实例1.18.6(2.0g)、1,3,5,7-四甲基-6-苯基-2,4,8-三氧杂-6-磷杂金刚烷(329mg)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(206mg)和磷酸三钾(4.78g)。将混合物回流过夜，冷却并用乙酸乙酯(500mL)稀释。将所得混合物用水和盐水洗涤，并将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯然后在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱)进行纯化，以提供标题化合物。
1.18.14.甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3,5-二甲基-7-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
在冰浴中向实例1.18.13(3.32g)在二氯甲烷(100mL)中的***液中依次加入三乙胺(3mL)和甲磺酰氯(1.1g)。将反应混合物在室温下搅拌1.5小时，并用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。
1.18.15.甲基2-(5-(1-((3-(2-叠氮基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例1.18.14(16.5g)在N,N-二甲基甲酰胺(120mL)中的溶液中加入叠氮化钠(4.22g)。将混合物在80℃加热3小时，冷却，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)进行纯化，以提供标题化合物。
1.18.16.2-(5-(1-((3-(2-叠氮基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
向实例1.18.15(10g)在四氢呋喃(60mL)、甲醇(30mL)和水(30mL)的混合物中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(1.2g)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用2％HCl水溶液中和。浓缩所得混合物，并将残余物溶于乙酸乙酯(800mL)中，并用盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。
1.18.17.叔-丁基3-(1-((3-(2-叠氮基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸酯
将实例1.18.16(10g)，苯并[d]噻唑-2-胺(3.24g)、氟-N,N,N',N'-四甲基甲脒鎓六氟磷酸盐(5.69g)和N,N-二异丙基乙胺(5.57g)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的混合物在60℃下加热3小时，冷却并用乙酸乙酯稀释。将所得混合物用水和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱(用在二氯甲烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出标题化合物。
1.18.18.叔丁基3-(1-(((3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸酯
向实例1.18.17(2.0g)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中加入Pd/C(10％，200mg)。将混合物在氢气氛下搅拌过夜。滤出不溶物质，并且浓缩滤液，以提供标题化合物。
1.18.19.3-(1-((3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
将在二氯甲烷(2.5mL)中的实例1.18.18(200mg)用三氟乙酸(2.5mL)处理过夜。将反应混合物浓缩，并通过反相色谱(C18柱)(用含有0.1％v/v三氟乙酸的20％-60％乙腈水溶液洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 746.2(M+H)+。
1.18.20.6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3,5-二甲基-7-{2-[(2-氨磺酰基乙基)氨基]乙氧基}三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸
将实例1.18.19(18mg)和乙烯磺酰胺(5.2mg)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)和水(0.3mL)中的混合物搅拌一周。通过反相色谱(C18柱)(用含有0.1％v/v三氟乙酸的20％-60％乙腈水溶液洗脱)纯化混合物，以提供标题化合物。1H NMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.03(d,1H),7.79(d,1H),7.61(d,1H),7.45-7.50(m,1H),7.41-7.44(m,1H),7.33-7.39(m,3H),7.23(s,1H),6.73(d,1H),4.87(s,2H),3.89(t,2H),3.79(s,2H),3.12-3.20(m,2H),2.99(t,2H),2.85(s,2H),2.09(s,3H),1.32(dd,4H),1.08-1.19(m,5H),1.04(d,4H),0.86(s,6H)。MS(ESI)m/e 853.2(M+H)+。
1.193-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基]吡啶-2-甲酸(W3.19)的合成
1.19.1.6,7-二氢-4H-噻吩并[3,2-c]吡啶-3,5-二甲酸5-叔丁基酯3-甲基酯
将叔丁基3-溴-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-甲酸酯(1000mg)和二氯[1,1’-双二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(69mg)置于50mL压力瓶中，并添加甲醇(20mL)，然后添加三甲胺(636mg)。将溶液脱气并用氩气冲洗三次。然后将溶液脱气并用一氧化碳冲洗并在60psi的一氧化碳下加热至100℃持续18小时。减压除去溶剂，并且将残余物通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的50％乙酸乙酯洗脱)纯化。减压除去溶剂，得到标题化合物。
1.19.2.4,5,6,7-四氢-噻吩并[3,2-c]吡啶-3-甲酸甲基酯
将实例1.19.1(940mg)溶解在二氯甲烷(12mL)中。添加三氟乙酸(2220mg)，并将溶液搅拌三小时。减压除去溶剂，得到标题化合物，为三氟乙酸盐，其不经进一步纯化即可使用。
1.19.3.5-(5-溴-6-叔-丁氧基羰基-吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-噻吩并[3,2-c]吡啶-3-甲酸甲基酯
标题化合物如下制备：用实例1.19.2取代实施1.4.5中乙基5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸酯盐酸盐。MS(ESI)m/e 452,450(M+H)+。
1.19.4 5-[6-叔-丁氧基羰基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡啶-2-基]-4,5,6,7-四氢-噻吩并[3,2-c]吡啶-3-甲酸甲基酯
通过用实例1.19.3取代实施1.1.10中的实例1.1.9制备标题化合物。MS(ESI)m/e500(M+H)+,531(M+CH3OH-H)-。
1.19.5 5-(6-叔-丁氧基羰基-5-{1-[5-(2-叔-丁氧基羰基氨基-乙氧基)-3,7-二甲基-金刚烷-1-基甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-噻吩并[3,2-c]吡啶-3-甲酸甲基酯
通过用实例1.19.4取代实施1.4.7中的实例1.4.6制备标题化合物。
1.19.6 5-(6-叔-丁氧基羰基-5-{1-[5-(2-叔-丁氧基羰基氨基-乙氧基)-3,7-二甲基-金刚烷-1-基甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-噻吩并[3,2-c]吡啶-3-甲酸
通过用实例1.19.5取代实施1.4.8中的实例1.4.7制备标题化合物。MS(ESI)m/e776(M+H)+,774(M-H)-。
1.19.7 6-[3-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6,7-二氢-4H-噻吩并[3,2-c]吡啶-5-基]-3-{1-[5-(2-叔-丁氧基羰基氨基-乙氧基)-3,7-二甲基-金刚烷-1-基甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-吡啶-2-甲酸叔丁基酯
通过用实例1.19.6取代实施1.4.9中的实例1.4.8制备标题化合物。MS(ESI)m/e892(M+H)+,890(M-H)-。
1.19.8 3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基]吡啶-2-甲酸
通过用实例1.19.7取代实施1.1.14中的实例1.1.13制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.11(bs,1H),8.00(d,1H),7.77(d,1H),7.68(bs,3H),7.53(d,1H),7.47(t,1H),7.36-7.31(m,2H),7.14(d,1H),4.71(s,2H),3.99(t,2H),3.85(s,2H),3.52(m,2H),3.00(t,2H),2.91(q,2H),2.13(s,3H),1.44(s,2H),1.31(q,4H),1.16(m,4H),1.05(q,2H),0.88(s,6H)。MS(ESI)m/e 752(M+H)+,750(M-H)-。
1.20 3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸(W3.20)的合成
1.20.1.7-(5-溴-6-叔-丁氧基羰基-吡啶-2-基)-3-三氟甲基-5,6,7,8-四氢-咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸甲基酯
如下制备标题化合物：用甲基3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸酯取代实施1.4.5中的乙基5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸酯盐酸盐。MS(ESI)m/e 449(M-tBu+H)+,503(M-H)-。
1.20.2 7-[6-叔-丁氧基羰基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡啶-2-基]-3-三氟甲基-5,6,7,8-四氢-咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸甲基酯
通过用实例1.20.1取代实施1.1.10中的实例1.1.9制备标题化合物。MS(ESI)m/e553(M+H)+。
1.20.3二-叔丁基[2-({3-[(4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]-2-酰亚胺二碳酸酯
将实例1.1.6(5.000g)溶解在二氯甲烷(50mL)中。添加三乙胺(1.543g)，并将溶液在冰浴上冷却。滴加甲磺酰氯(1.691g)。将溶液温热至室温并搅拌30分钟。添加饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)。分离各层，并将有机层用盐水(50mL)洗涤。然后合并含水部分并用二氯甲烷(50mL)反萃取。合并有机部分，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物溶于乙腈(50mL)中。添加亚氨基二甲酸二叔丁酯(2.689g)和碳酸铯(7.332g)，并将溶液回流16小时。将溶液冷却并加入二***(100mL)和水(100mL)中。将各层分离。将有机部分用盐水(50mL)洗涤。然后合并含水部分并用二***(100mL)反萃取。合并有机部分，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化该材料。减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 666(M+Na)+。
1.20.4甲基7-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-(二-(叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸酯
如下制备标题化合物：在实例1.4.7中用实例1.20.2取代实例1.4.6，并用实例1.20.3取代实例1.4.2。MS(ESI)m/e 964(M+Na)+,940(M-H)-。
1.20.5 7-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-(二-(叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸
通过用实例1.20.4取代实施1.4.8中的实例1.4.7制备标题化合物。MS(ESI)m/e828(M+H)+,826(M-H)-。
1.20.6叔丁基6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-3-(1-((3-(2-(二-(叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
通过用实例1.20.5取代实施1.4.9中的实例1.4.8制备标题化合物。MS(ESI)m/e1058(M-H)-。
1.20.7 3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸
通过用实例1.20.6取代实施1.1.14中的实例1.1.13制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 11.99(bs,1H),8.00(d,1H),7.79(d,1H),7.66(bs,3H),7.61(d,1H),7.47(t,1H),7.35(t,2H),7.19(d,1H),5.20(s,2H),4.37(t,2H),4.16(t,2H),3.86(s,2H),3.51(t,2H),2.91(q,2H),2.14(s,3H),1.44(s,2H),1.36-1.24(m,4H),1.19-1.02(m,6H),0.88(s,6H)。MS(ESI)m/e 804(M+H)+,802(M-H)-。
1.216-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-{甲基[2-(甲氨基)乙基]氨基}-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸(W3.21)的合成
1.21.1.甲基3-溴-5-(溴甲基)苯甲酸酯
将AIBN(2,2’-偶氮双(2-甲基丙腈))(1.79g)加入到甲基3-溴-5-甲基苯甲酸酯(50g)和N-溴代丁二酰亚胺(44.7g)的350mL乙腈溶液中，并将混合物回流过夜。再添加另外的11g N-溴代丁二酰亚胺和0.5g AIBN(2,2’-偶氮双(2-甲基丙腈))，并继续回流3小时。浓缩混合物，并且然后溶于500mL醚中，并且搅拌30分钟。然后过滤混合物，并浓缩所得溶液。将粗产物在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的10％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。
1.21.2.甲基3-溴-5-(氰基甲基)苯甲酸酯
将四丁基氰化铵(50g)加入到实例1.21.1(67.1g)在300mL乙腈中的溶液中，并将混合物加热至70℃保持过夜。冷却混合物，倒入二***中，并用水和盐水冲洗。将混合物浓缩并在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的2％-20％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。
1.21.3.甲基3-(2-氨基乙基)-5-溴苯甲酸酯
将硼烷-四氢呋喃(126mL，1M溶液)加入到实例1.21.2(16g)在200mL四氢呋喃中的溶液中，并将混合物搅拌过夜。小心地用甲醇(50mL)淬灭反应，并且然后浓缩至50mL体积。然后将混合物溶于120mL甲醇/120mL 4M HCl/120mL二噁烷中，并搅拌过夜。减压蒸发除去有机物，并将残余物用二***(2×)萃取。弃去有机萃取物。将水层用固体K2CO3碱化，并且然后用乙酸乙酯和二氯甲烷(2x)萃取。合并萃取物，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以给出标题化合物。
1.21.4.甲基3-溴-5-(2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙基)苯甲酸酯
在0℃下，将三氟乙酸酐(9.52mL)滴加到实例1.21.3(14.5g)和三乙胺(11.74mL)在200mL二氯甲烷中的混合物中。添加后，将混合物温热至室温并搅拌3天。将混合物倒入二***中，并用NaHCO3溶液和盐水洗涤。将混合物浓缩并在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的5％-30％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。
1.21.5甲基6-溴-2-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例1.21.4(10g)中加入硫酸直至其进入溶液(40mL)，此时添加多聚甲醛(4.24g)并将混合物搅拌2小时。然后将溶液倒入400mL冰中，并搅拌10分钟。然后将其用乙酸乙酯(3x)萃取，并将合并的萃取物用NaHCO3溶液和盐水洗涤，并且然后浓缩。将粗产物在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的2％-15％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。
1.21.6甲基6-((2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.21.5(2.25g)、叔丁基甲基(2-(甲氨基)乙基)氨基甲酸酯(1.27g)、乙酸钯(II)(0.083g)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基夹氧杂蒽(0.213g)和碳酸铯(4.00g)在40mL二噁烷中于80℃搅拌过夜。将混合物浓缩并在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的5％-50％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。
1.21.7.甲基2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-6-((2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.21.6(3g)和碳酸钾(2.63g)在30mL四氢呋喃、20mL甲醇和25mL水中搅拌过夜。浓缩混合物并添加60mLN,N-二甲基甲酰胺。然后向其中加入实例1.4.4(1.08g)和三乙胺(0.6mL)，并将反应在50℃搅拌过夜。将混合物冷却至室温并倒入乙酸乙酯(200mL)中。将溶液用水(3x)和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的5％-50％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 635(M+H)+。
1.21.8甲基6-((2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
通过用实例1.21.7取代实施1.1.10中的实例1.1.9制备标题化合物。
1.21.9甲基6-((2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
如下制备标题化合物：在实例1.5.12中用实例1.21.8取代实例1.5.11，并用实例1.17.1取代实例1.5.10。MS(ESI)m/e 885.6(M+H)+。
1.21.10 6-((2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
通过用实例1.21.9取代实施1.4.8中的实例1.4.7制备标题化合物。
1.21.11叔丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-((2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基)(甲基)氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
通过用实例1.21.10取代实施1.4.9中的实例1.4.8制备标题化合物。MS(ESI)m/e1003.6(M+H)+。
1.21.12 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-{甲基[2-(甲氨基)乙基]氨基}-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸
将实例1.21.11(40mg)在2mL三氟乙酸和3mL二氯甲烷中搅拌过夜。蒸发溶剂后，残余物在HPLC(吉尔森***，用10％-85％乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液洗脱)纯化，以给出标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.75(bs,1H),12.50(br s,1H),8.40(m,2H),8.01(d,1H),7.76(d,1H),7.45(m,2H),7.32(t,1H),7.24(s,1H),6.99(d,1H),6.86(d,1H),6,78(d,1H),4.72(m,2H),3.98(m,2H),3.80(m,4H),3.76(s,2H),3.55(m,2H),3.29(d,3H),3.20(s,3H),3.15(m,2H),2.90(s,3H),2.58(t,2H),2.05(s,3H),1.30(s,2H),1.21(m,4H),1.08(m,4H),0.98(m,2H),0.85(s,6H)。MS(ESI)m/e 847.5(M+H)+。
1.22 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(W3.22)的合成
1.22.1.甲基6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-2-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.21.5(4.5g)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(3.75g)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)二氯甲烷(0.4g)和乙酸钾(3.62g)的混合物在60mL二噁烷中于70℃搅拌24小时。然后将混合物用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水冲洗。将混合物浓缩并在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的5％-50％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。
1.22.2甲基6-羟基-2-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将过氧化氢(30％，1.1mL)加入到实例1.22.1(4g)和1MNaOH水溶液(9.86mL)在40mL四氢呋喃和40mL水中的混合物中，并将混合物搅拌90分钟。将溶液用浓HCl酸化，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的萃取物用盐水洗涤。然后将混合物浓缩并在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的5％-50％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 304.2(M+H)+。
1.22.3甲基6-甲氧基-2-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2.6mL，在二***中2M)加入到实例1.22.2(800mg)的10mL甲醇溶液中，并将反应搅拌24小时。然后将混合物浓缩并在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的5％-25％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 318.2(M+H)+。
1.22.4甲基2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
通过用实例1.22.3取代实施1.21.7中的实例1.21.6制备标题化合物。MS(ESI)m/e479.1(M+H)+。
1.22.5甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯通过用实例1.22.4取代实施1.1.10中的实例1.1.9制备标题化合物。MS(ESI)m/e 525.1(M+H)+。
1.22.6甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
如下制备标题化合物：在实例1.5.12中用实例1.22.5取代实例1.5.11，并用实例1.1.9取代实例1.5.10。MS(ESI)m/e 829.6(M+H)+。
1.22.7 2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
通过用实例1.22.6取代实施1.4.8中的实例1.4.7制备标题化合物。MS(ESI)m/e814.6(M+H)+。
1.22.8叔丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯通过用实例1.22.7取代实施1.4.9中的实例1.4.8制备标题化合物。MS(ESI)m/e 946.5(M+H)+。
1.22.9 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
通过用实例1.22.8取代实施1.21.12中的实例1.21.11制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.75(bs,1H),12.50(br s,1H),8.21(m,2H),8.01(d,1H),7.76(d,1H),7.44(m,2H),7.32(t,1H),7.25(s,1H),7.20(d,1H),6.99(d,1H),6.90(d,1H),4.72(m,2H),3.80(m,4H),3.55(s,3H),3.50(d,3H),2.98(m,4H),2.51(t,2H),2.05(s,3H),1.35(s,2H),1.26(m,4H),1.10(m,4H),1.00(m,2H),0.85(s,6H)。MS(ESI)m/e 790.4(M+H)+。
1.23 3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]吡啶-2-甲酸(W3.23)的合成
1.23.1乙基6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)喹啉-4-甲酸酯
向乙基6-溴喹啉-4-甲酸酯(140mg)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)二氯甲烷(20mg)、乙酸钾(147mg)和双(频哪醇合)二硼(190mg)。将混合物在60℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温并直接用于下一反应。MS(ESI)m/e 328.1(M+H)+。
1.23.2二-叔丁基{2-[(3,5-二甲基-7-{[5-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]甲基}三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}-2-酰亚胺二碳酸酯
向实例1.20.3(13g)在二噁烷(100mL)中的溶液中加入二环己基(2',6'-二甲氧基-[1,1'-联苯基]-2-基)膦(S-Phos)(1.0g)和双(苯甲腈)氯化钯(II)(0.23g)，并且用若干次室内真空/N2再填充物吹扫反应。添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(8.8mL)和三乙胺(8.4mL)，然后再进行数次室内真空/氮气再填充，并且然后将反应在氮气下加热至85℃持续90分钟。将反应冷却，通过硅藻土过滤并用甲基叔丁基醚冲洗。然后将溶液浓缩并在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的25％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。
1.23.3叔丁基3-{1-[(3-{2-[双(叔-丁氧基羰基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-氯吡啶-2-甲酸酯
向实例1.23.2(12.3g)和叔丁基3-溴-6-氯吡啶甲酸酯(5.9g)在二噁烷(50mL)中的溶液中加入(1S,3R,5R,7S)-1,3,5,7-四甲基-8-苯基-2,4,6-三氧杂-8-磷金刚烷(CyTop)(0.52g)和双(二苯亚甲基丙酮)钯(0)(0.66g)。在若干次室内真空/氮气再填充后，添加磷酸钾(4.06g)和水(25mL)并将反应在氮气下在80℃加热30分钟。冷却反应，并且然后添加水和乙酸乙酯。分离有机层并用盐水洗涤。将合并的水层用乙酸乙酯萃取，并经硫酸钠干燥。然后将溶液过滤，浓缩并在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的33％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。
1.23.4乙基6-[5-{1-[(3-{2-[双(叔-丁氧基羰基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基]喹啉-4-甲酸酯
向实例1.23.1(164mg)在1,4-二噁烷(10mL)和水(5mL)中的溶液中加入实例1.23.3(365mg)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)(35mg)和CsF(228mg)。在微波条件下(BiotageInitiator)将混合物在120℃下搅拌30分钟。将混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，并且用水和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂，得到残余物，将其通过硅胶色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 894.3(M+H)+。
1.23.5 6-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)喹啉-4-甲酸
向实例1.23.4(3.1g)在四氢呋喃(20mL)、甲醇(10mL)和水(10mL)中的溶液中加入LiOH H2O(240mg)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用2N HCl水溶液酸化，用乙酸乙酯(400mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂，得到标题化合物，其无需进一步纯化即可使用。MS(ESI)m/e766.3(M+H)+。
1.23.6 3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]吡啶-2-甲酸
向实例1.23.5(4.2g)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入苯并[d]噻唑-2-胺(728mg)、1-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]-碳二亚胺盐酸盐(1.40g)和4-(二甲基氨基)吡啶(890mg)。将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物溶于二氯甲烷和三氟乙酸(10mL，1:1)中并搅拌过夜。减压除去溶剂。将残余物用N,N-二甲基甲酰胺(2mL)稀释，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以给出标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.12(dd,1H),8.92(s,1H),8.61(dt,1H),8.35-8.16(m,2H),8.07(d,1H),7.97-7.87(m,2H),7.81(d,1H),7.66(s,3H),7.53-7.44(m,2H),7.38(t,1H),3.88(s,2H),3.49(t,2H),2.89(q,2H),2.22(s,4H),1.43(s,2H),1.29(q,4H),1.15(s,4H),1.09-0.96(m,2H),0.86(s,7H)。MS(ESI)m/e 742.2(M+H)+。
1.24 6-[5-氨基-8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(W3.24)的合成
1.24.1 5-叔-丁氧基羰基氨基-2-(2,2,2-三氟-乙酰基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-8-甲酸甲基酯
将实例1.13.4(5000mg)、氨基甲酸叔丁酯(1920mg)和碳酸铯(6674mg)加入到1,4-二噁烷(80mL)中。将溶液脱气并用氮气冲洗三次。添加二乙酰氧基钯(307mg)和(9,9-二甲基-9H-夹氧杂葸-4,5-二基)双(二苯基膦)(1580mg)，并将溶液脱气并用氮气冲洗一次。将溶液加热至80℃保持16小时。冷却溶液，并添加1M HCl水溶液(150mL)。用在庚烷中的50％乙酸乙酯萃取该溶液。将有机部分用盐水洗涤，并且在无水硫酸钠上干燥。将溶液过滤，浓缩并通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的30％乙酸乙酯洗脱)纯化。减压除去溶剂，得到标题化合物。MS(ESI)m/e 420(M+NH4)+,401(M-H)-。
1.24.2 5-叔-丁氧基羰基氨基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-8-甲酸甲基酯
通过用实例1.24.1取代实施1.13.6中的实例1.13.5制备标题化合物。MS(ESI)m/e307(M+H)+,305(M-H)-。
1.24.3 2-(5-溴-6-叔-丁氧基羰基-吡啶-2-基)-5-叔-丁氧基羰基氨基-1,2,3,4-四氢-异喹啉-8-甲酸甲基酯
通过用实例1.24.2取代实施1.13.7中的实例1.13.6制备标题化合物。MS(ESI)m/e562,560(M+H)+,560,558(M-H)-。
1.24.4 5-叔-丁氧基羰基氨基-2-[6-叔-丁氧基羰基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡啶-2-基]-1,2,3,4-四氢-异喹啉-8-甲酸甲基酯
通过用实例1.24.3取代实施1.13.8中的实例1.13.7制备标题化合物。MS(ESI)m/e610(M+H)+,608(M-H)-。
1.24.5甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-5-((叔-丁氧基羰基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
如下制备标题化合物：在实例1.13.9中，用实例1.24.4取代实施1.13.8，并用实例1.1.9取代实施1.4.2。MS(ESI)m/e 913(M+H)+,911(M-H)-。
1.24.6 2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-5-((叔-丁氧基羰基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
通过用实例1.24.5取代实施1.13.10中的实例1.13.9制备标题化合物。MS(ESI)m/e 899(M+H)+,897(M-H)-。
1.24.7叔丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-((叔-丁氧基羰基)氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
通过用实例1.24.6取代实施1.13.11中的实例1.13.10制备标题化合物。MS(ESI)m/e 1031(M+H)+,1029(M-H)-。
1.24.8 6-[5-氨基-8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
通过用实例1.24.7取代实施1.13.12中的实例1.13.11制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 11.42(s,1H),7.98(d,1H),7.75(d,1H),7.55(d,1H),7.44(t,2H),7.31(t,1H),7.27(s,1H),6.92(d,1H),6.58(d,1H),5.74(s,2H),4.99(s,2H),3.93(t,2H),3.82(s,2H),3.57(s,3H),,3.54(m,2H),3.09(q,2H),2.98(bs,2H),2.11(s,3H),1.35-1.04(m,12H),0.87(s,6H)。MS(ESI)m/e 775(M+H)+。
1.25 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-[3-(甲氨基)丙-1-炔-1-基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸(W3.25)的合成
1.25.1甲基6-(3-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙-1-炔-1-基)-2-(2,2,2-三氟乙酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
将实例1.21.5(1.97g)、叔丁基甲基(丙-2-炔-1-基)氨基甲酸酯(1g)、双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(0.19g)、CuI(0.041g)和三乙胺(2.25mL)在20mL二噁烷中的溶液在50℃下搅拌过夜。然后将混合物浓缩并在硅胶上进行色谱分离，用在庚烷中的10％-50％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。
1.25.2甲基2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-6-(3-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙-1-炔-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
通过用实例1.25.1取代实施1.21.7中的实例1.21.6制备标题化合物。MS(ESI)m/e616(M+H)+。
1.25.3甲基6-(3-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙-1-炔-1-基)-2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
通过用实例1.25.2取代实施1.1.10中的实例1.1.9制备标题化合物。MS(ESI)m/e662.3(M+H)+。
1.25.4甲基6-(3-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙-1-炔-1-基)-2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
如下制备标题化合物：在实例1.5.12中用实例1.25.3取代实例1.5.11，并用实例1.17.1取代实例1.5.10。
1.25.5 6-(3-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙-1-炔-1-基)-2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
通过用实例1.25.4取代实施1.4.8中的实例1.4.7制备标题化合物。
1.25.6叔丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-(3-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙-1-炔-1-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
通过用实例1.25.5取代实施1.4.9中的实例1.4.8制备标题化合物。
1.25.7 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-[3-(甲氨基)丙-1-炔-1-基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸
通过用实例1.25.6取代实施1.21.12中的实例1.21.11制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.95(bs,1H),8.70(m,1H),8.02(d,1H),7.77(d,1H),7.74(m,1H),7.47(m,2H),7.34(m,2H),7.24(s,1H),6.95(m,1H),6.78(m,1H),4.92(s,2H),4.28(t,2H),3.95(t,2H),3.40(s,3H),3.30(m,2H),3.20(s,3H),3.00(m,2H),2.57(t,2H),2.07(s,3H),1.85(m,2H),1.29(d,2H),1.10-1.24(m,10H),0.85(s,6H)。
1.26 6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(W3.26)的合成
1.26.1甲基2-(3-溴苯基)-2-氰基乙酸酯
在23℃下，向2-(3-溴苯基)乙腈(5g)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中分批加入氢化钠(3.00g)。将混合物加热至50℃保持20分钟。滴加碳酸二甲酯(8.60mL)。将混合物加热回流2小时。将混合物倒入冷的微酸性水中。用乙酸乙酯(2×200mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，通过布氏漏斗过滤并浓缩，以给出残余物，将其通过硅胶柱色谱(用0％-25％二氯甲烷/石油醚洗脱)纯化，得到标题化合物。MS(LC-MS)m/e 256.0(M+H)+
1.26.2甲基3-氨基-2-(3-溴苯基)丙酸酯
在-20℃下，将硼氢化钠(14.89g，394mmol)分批加入到实例1.26.1(10g)和氯化钴(II)六水合物(18.73g)在甲醇(200mL)中的溶液中。将混合物搅拌1小时，并用2NHCl水溶液将pH调节至3。将混合物浓缩。将残余物用2M氢氧化钠水溶液碱化，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。MS(LC-MS)m/e 260.0(M+H)+。
1.26.3甲基2-(3-溴苯基)-3-甲酰胺丙酸酯
将实例1.26.2(3.6g)在甲酸乙酯(54mL)中的溶液在80℃加热5小时。除去溶剂，并将残余物通过硅胶柱色谱(用石油/乙酸乙酯(2:1-1:2)洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(LC-MS)m/e 288.0(M+H)+。
1.26.4甲基8-溴-2,3-二氧代-3,5,6,10b-四氢-2H-噁唑并[2,3-a]异喹啉e-6-甲酸酯
将草酰氯(1.901mL)缓慢加入到实例1.26.3(5.65g)在二氯甲烷(190mL)中的溶液中。将所得混合物在20℃C下搅拌2小时。将混合物冷却至-20℃，并添加氯化铁(III)(3.84g)。将所得混合物在20℃下搅拌3小时。一次性添加盐酸水溶液(2M，45mL)，并将得到的两相混合物在室温下剧烈搅拌0.5小时。将两相混合物倒入分液漏斗中，并分离各相。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥并过滤。减压蒸发溶剂，以提供标题化合物。粗产物无需纯化直接用于后续步骤。MS(LC-MS)m/e 342.0(M+H)+。
1.26.5甲基6-溴-3,4-二氢异喹啉-4-甲酸酯
将在甲醇(345mL)和硫酸(23mL)中的实例1.26.4(13.0g)在80℃下加热16小时。浓缩混合物，并将残余物用水稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱(用石油醚/乙酸乙酯(2:1-1:2)洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(LC-MS)m/e 268.0(M+H)+。
1.26.6甲基6-溴异喹啉-4-甲酸酯
在60℃下，向实例1.26.5(5.25g)在1,4-二噁烷(200mL)中的溶液中加入二氧化锰(IV)(8.5g)。将混合物加热至110℃保持3小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并用二氯甲烷和乙酸乙酯洗涤。将滤液浓缩至干。将粗材料吸附在硅胶上，并通过硅胶色谱(用在二氯甲烷中的5％-30％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(LC-MS)m/e 267.9(M+H)+。
1.26.7甲基6-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)异喹啉-4-甲酸酯
将在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的实例1.26.6(229mg)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(328mg)和乙酸钾(253mg)用N2吹扫5分钟，并添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)二氯甲烷(42.2mg)。将混合物在100℃加热过夜并冷却。向该混合物中加入实例1.1.11(0.369g)、二氯双(三苯基膦)钯(II)(0.060g)、氟化铯(0.261g)和水(2mL)。将所得混合物在100℃下加热10小时并过滤。将滤液浓缩。将残余物溶于二甲基亚砜中，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 794.5(M+H)+。
1.26.8 6-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)异喹啉-4-甲酸
将在四氢呋喃-甲醇中的实例1.26.7(220mg)用1M氢氧化钠水溶液(1.66mL)处理2天。将混合物用乙酸中和并浓缩。将残余物溶于二甲基亚砜中，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 780.5(M+H)+。
1.26.9叔-丁基6-(4-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向实例1.26.8(122mg)、苯并[d]噻唑-2-胺(47.0mg)、O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(119mg)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(273μL)。将混合物搅拌过夜，并加载到80g硅胶柱上，用在乙酸乙酯中的5％-100％庚烷洗脱，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 912.5(M+H)+。
1.26.10 6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
将在二氯甲烷(4mL)中的实例1.26.9(100mg)用三氟乙酸(2mL)处理3小时，并浓缩混合物。将残余物溶于二甲基亚砜(5mL)中，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以给出标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.27(s,1H),9.58(s,1H),9.03(d,2H),8.53(dd,1H),8.42(d,1H),8.25(t,3H),8.06(d,1H),7.97(d,1H),7.81(d,1H),7.56-7.45(m,2H),7.37(t,1H),3.89(s,2H),3.55(t,2H),3.01(t,2H),2.54(t,4H),2.23(s,3H),1.44(s,2H),1.36-1.23(m,4H),1.16(s,4H),0.87(s,6H)。MS(ESI)m/e 756.1(M+H)+。
1.27 6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(W3.27)的合成
1.27.1甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1H-吲哚-7-甲酸酯
向甲基2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲哚-7-甲酸酯(370mg)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(30mg)、1,2,3,4,5-戊苯基-1'-(二-叔丁基膦基)二茂铁(30mg)和磷酸钾(550mg)在四氢呋喃(2mL)中的搅拌溶液中加入实例1.1.11(735mg)。将混合物用氮气吹扫并在70℃下搅拌3小时。将反应用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。用乙酸乙酯反萃取水层。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷中的0-20％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 780.4(M-H)-。
1.27.2 2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1H-吲哚-7-甲酸
如实例1.4.8所述用实例1.27.1代替实例1.4.7制备标题化合物。MS(ESI)m/e766.4(M-H)-。
1.27.3叔丁基6-(7-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
如实例1.4.9所述用实例1.27.2代替实例1.4.8制备标题化合物。MS(ESI)m/e898.4(M-H)\-。
1.27.4 6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
通过用实例1.27.3取代实施1.1.14中的实例1.1.13制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.01(s,1H),11.19(s,1H),8.27(dd,4H),8.04(d,1H),7.99(d,1H),7.91(d,1H),7.53-7.45(m,3H),7.36(t,1H),7.27(t,1H),3.91(s,2H),3.57(t,3H),3.03(t,3H),2.58-2.54(m,4H),2.24(s,3H),1.46(s,2H),1.38-1.27(m,4H),1.24-1.01(m,6H),0.89(s,6H)。MS(ESI)m/e 744.2(M+H)+。
1.28 3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]吡啶-2-甲酸(W3.28)的合成
1.28.1甲基2-[5-{1-[(3-{2-[双(叔-丁氧基羰基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基]-1H-吲哚-7-甲酸酯
通过用实例1.23.3取代实施1.27.1中的实例1.1.11制备标题化合物。MS(ESI)m/e866.3(M-H)-。
1.28.2 2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1H-吲哚-7-甲酸
如实例1.4.8所述用实例1.28.1代替实例1.4.7制备标题化合物。MS(ESI)m/e754.4(M+H)+。
1.28.3叔-丁基6-(7-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
如实例1.4.9所述用实例1.28.2代替实例1.4.8制备标题化合物。MS(ESI)m/e886.5(M+H)+。
1.28.4 3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]吡啶-2-甲酸
通过用实例1.28.3取代实施1.1.14中的实例1.1.13制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.00(s,1H),11.19(s,1H),8.29(d,1H),8.23(d,1H),8.03(d,1H),7.98(d,1H),7.90(d,1H),7.80(s,1H),7.63(s,3H),7.50(s,1H),7.49-7.44(m,2H),7.39-7.32(m,1H),7.25(t,1H),3.90(s,2H),2.90(q,2H),2.23(s,3H),1.45(s,2H),1.31(q,4H),1.23-1.00(m,7H),0.88(s,6H)。MS(ESI)m/e 730.2(M+H)+。
1.29 6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-甲基-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(W3.29)的合成
1.29.1甲基3-甲基-1H-吲哚-7-甲酸酯
向在50mL压力瓶中的7-溴-3-甲基-1H-吲哚(1g)、二氯[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(0.070g)中加入甲醇(20mL)和三甲胺(1.327mL)。用惰性气体吹扫反应器，然后用一氧化碳吹扫。将反应在60psi下加热至100℃保持20小时。将溶液过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷中的5％-30％乙酸乙酯的梯度洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 189.9(M+H)+。
1.29.2甲基2-溴-3-甲基-1H-吲哚-7-甲酸酯
向实例1.29.1(70mg)和70mg硅胶在二氯甲烷(2mL)中的搅拌悬浮液中加入1-溴吡咯烷-2,5-二酮(70mg)。用铝箔将混合物避光，并在室温下在氮气下搅拌30分钟。将反应混合物过滤，用二氯甲烷洗涤，并且通过硅胶色谱(用在庚烷中的10％-50％乙酸乙酯洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 267.6(M+H)+。
1.29.3甲基3-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲哚-7-甲酸酯
向实例1.29.2(398mg)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.2g)和乙酸钾(450mg)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌悬浮液中加入双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(55mg)。将混合物用氮气吹扫并在微波条件(Biotage Initiator)下在115℃下加热3小时。将反应用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。用乙酸乙酯反萃取水层。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷中的5％-50％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 315.9(M+H)+。
1.29.4甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-吲哚-7-甲酸酯
如下制备实例1.29.4：用实例1.29.3取代实施1.27.1中的甲基2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲哚-7-甲酸酯。MS(ESI)m/e 794.4(M-H)-。
1.29.5 2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-吲哚-7-甲酸
通过用实例1.29.4取代实例1.4.8中的实例1.4.7来制备实例1.29.5。MS(ESI)m/e780.4(M-H)-。
1.29.6叔丁基6-(7-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-甲基-1H-吲哚-2-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
通过用实例1.29.5取代实例1.4.9中的实例1.4.8来制备实例1.29.6。MS(ESI)m/e912.4(M-H)-。
1.29.7 6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-甲基-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
通过用实例1.29.6取代实施1.1.14中的实例1.1.13制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.97(s,1H),11.04(s,1H),8.34-8.23(m,3H),8.06(d,1H),8.02(dd,2H),7.93(d,1H),7.79(d,1H),7.51(s,1H),7.48(ddd,1H),7.38-7.32(m,1H),7.25(t,1H),3.91(s,2H),3.56(t,2H),3.03(p,2H),2.67(s,3H),2.56(t,3H),2.25(s,3H),1.46(s,2H),1.38-1.26(m,4H),1.24-1.13(m,4H),1.06(q,2H),0.89(s,6H)。MS(ESI)m/e 758.2(M+H)+。
1.30 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3,5-二甲基-7-(2-{[1-(甲磺酰基)哌啶-4-基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸(W3.30)的合成
1.30.1叔丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-(((1r,7r)-3,5-二甲基-7-(2-((1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)氨基)乙氧基)金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
在室温下，将实例1.18.18(0.060g)、1-(甲磺酰基)哌啶-4-酮(0.015g)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.024g)的溶液在二氯甲烷(0.5mL)中搅拌。30分钟后，浓缩反应混合物。将粗材料溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)和水(0.5mL)中，并在吉尔森2020***上通过制备型反相HPLC(使用5％至85％乙腈/水的梯度)进行纯化。将含有产物的级分冻干，以给出标题化合物，为三氟乙酸盐。MS(ESI)m/e 963.9(M+H)+。
1.30.2 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3,5-二甲基-7-(2-{[1-(甲磺酰基)哌啶-4-基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸
将实例1.30.1(0.060g)的溶液溶解在二氯甲烷(0.5mL)中并用三氟乙酸(0.5mL)处理过夜。将反应混合物浓缩。将残余物溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)和水(0.5mL)中，并在吉尔森2020***上通过制备型反相HPLC(使用5％至85％乙腈/水的梯度)进行纯化。将含产物的级分冻干，以给出标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.90(s,1H),8.53(d,2H),8.08(d,1H),7.84(d,1H),7.66(d,1H),7.58-7.45(m,4H),7.41(td,2H),7.33(s,1H),7.00(d,1H),5.00(s,2H),3.93(s,2H),3.88(s,2H),3.62(d,4H),3.22(h,2H),3.12,3.06(s,2H),2.93(s,3H),2.79(d,2H),2.15(s,3H),2.11(s,1H),1.61(qd,2H),1.48(s,2H),1.37(s,2H),1.19(s,4H),1.10(s,2H),0.91(s,8H)。MS(ESI)m/e 907.2(M+H)+。
1.31 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3,5-二甲基-7-(2-{[1-(甲磺酰基)氮杂环丁-3-基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸(W3.31)的合成
在室温下，将实例1.18.18(0.050g)、1-(甲磺酰基)氮杂环丁-3-酮(0.014g)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.020g)的溶液在二氯甲烷(0.50mL)中搅拌。30分钟后，添加乙酸(5.35μL)并在室温下继续搅拌过夜。将三氟乙酸(0.5mL)加入到反应中并继续搅拌过夜。将反应混合物浓缩。将残余物溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)和水(0.5mL)的混合物中，并在吉尔森2020***上通过制备型反相HPLC(使用5％至70％乙腈/水的梯度)进行纯化。将含产物的级分冻干，以给出标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.86(s,1H),9.13(s,2H),8.03(d,1H),7.79(d,1H),7.62(d,1H),7.54-7.41(m,3H),7.36(td,2H),7.29(s,1H),6.96(d,1H),4.96(s,2H),4.09(s,2H),4.08(s,1H),3.98(s,2H),3.89(s,2H),3.84(s,2H),3.56(s,2H),3.05(s,3H),3.03(s,2H),3.02(s,1H),2.11(s,2H),1.44(s,2H),1.31(q,4H),1.14(s,4H),1.06(s,2H),0.87(s,6H)。MS(ESI)m/e 879.7(M+H)+。
1.32 3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸(W3.32)的合成
1.32.1叔丁基3-(1-((3-(2-((3-氨基-3-氧丙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸酯
将实例1.18.18(245mg)和丙烯酰胺(217mg)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物在50℃下加热3天，并通过反相HPLC(用30％-80乙腈的0.1％三氟乙酸水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.83(s,1H),8.30(s,2H),8.00(dd,1H),7.76(d,1H),7.57(d,2H),7.44(ddd,3H),7.39-7.29(m,2H),7.21(s,1H),7.13(s,1H),6.91(d,1H),4.95(s,2H),3.81(d,4H),3.53(t,2H),3.05(dq,6H),2.06(s,3H),1.43(s,2H),1.27(q,4H),1.13(d,15H),0.82(s,6H)。MS(ESI)m/e 873.8(M+H)+。
1.32.2 3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸
使用实例1.26.10中的程序用实例1.32.1代替实例1.26.9制备标题化合物。1HNMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.29(s,2H),8.00(dd,1H),7.76(d,1H),7.63-7.52(m,2H),7.49-7.38(m,3H),7.37-7.29(m,2H),7.25(s,1H),7.11(s,1H),6.92(d,1H),4.92(s,2H),3.53(t,2H),3.04(ddt,6H),2.07(s,3H),1.39(s,2H),1.26(q,4H),1.16-0.93(m,6H),0.83(s,6H)。MS(ESI)m/e 817.2(M+H)+。
1.33 6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲唑-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(W3.33)
1.33.1 5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲唑-3-甲酸乙基酯
将乙基5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑-3-甲酸酯(1000mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中。添加氢化钠(在矿物油中60％，83mg)，并将溶液在室温下搅拌20分钟。添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(580mg)，并将溶液在室温下搅拌90分钟。用饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭反应，并用水(90mL)稀释。将溶液用在庚烷(50mL)中的70％乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机部分用水(25mL)洗涤，然后用盐水(25mL)洗涤。将溶液经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的10％-30％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物。减压除去溶剂，得到标题化合物。MS(ESI)m/e447(M+H)+。
1.33.2乙基5-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-3-甲酸酯
将实例1.33.1(335mg)和实例1.1.11(483mg)溶解在1,4-二噁烷(3mL)中。添加2M碳酸钠水溶液(1.13mL)，并将溶液脱气并用氮气冲洗三次。添加二氯[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(61mg)，并将溶液脱气并用氮气冲洗一次。将溶液在75℃下加热16小时。冷却溶液，添加0.1M HCl水溶液(25mL)。将溶液用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机部分用盐水(25mL)洗涤并在无水硫酸钠上干燥。将溶液过滤，减压浓缩，并通过硅胶快速柱色谱(用在庚烷中的50％乙酸乙酯洗脱)纯化。减压除去溶剂，得到标题化合物。MS(ESI)m/e927(M+NH4-H2O)+。
1.33.3 5-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-3-甲酸
通过用实例1.33.2取代实施1.13.10中的实例1.13.9制备标题化合物。MS(ESI)m/e 899(M+H)+,897(M-H)-。
1.33.4叔丁基6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
通过用实例1.33.3取代实施1.13.11中的实例1.13.10制备标题化合物。MS(ESI)m/e 1030(M+NH4-H2O)+,1029(M-H)-。
1.33.5 6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲唑-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
将实例1.33.4(83mg)溶解在二氯甲烷(0.5mL)中。添加三氟乙酸(740mg)，并将溶液在室温下搅拌16小时。减压除去溶剂。将残余物溶于1,4-二噁烷(1mL)中并添加1M氢氧化钠水溶液(0.5mL)。将该溶液在室温下搅拌60分钟。用三氟乙酸(0.1mL)淬灭反应，并在配备有柱的Grace 上通过反相HPLC(使用10％-85％乙腈水溶液(w/0.1％三氟乙酸)经30分钟内纯化。C18(2)，100A，150×30mm。合并产物级分，冷冻并冻干，得到标题化合物，为双三氟乙酸盐。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 14.23(s,1H),12.58(bs,1H),8.97(s,1H),8.34-8.29(m,3H),8.22(d,1H),8.04(d,1H),7.91(d,1H),7.87-7.81(m,2H),7.51-7.45(m,2H),7.36(t,1H),3.92(s,3H),3.58(m,2H),3.04(m,2H),2.58-2.56(m,2H),2.26(s,3H),1.47(s,2H),1.34(q,4H),1.22-1.14(m,4H),1.07(q,2H),0.89(m,6H)。MS(ESI)m/e 745(M+H)+,743(M-H)-。
1.34 6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(W3.34)的合成
1.34.1 5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吲哚-3-甲酸甲基酯
如下制备标题化合物：用甲基5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲哚-3-甲酸酯取代实施1.33.1中的乙基5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑-3-甲酸酯。MS(ESI)m/e432(M+H)+。
1.34.2甲基5-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-3-甲酸酯
通过用实例1.34.1取代实施1.33.2中的实例1.33.1制备标题化合物。MS(ESI)m/e912(M+H)+。
1.34.3 5-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-3-甲酸
通过用实例1.34.2取代实施1.13.10中的实例1.13.9制备标题化合物。MS(ESI)m/e 898(M+H)+,896(M-H)-。
1.34.4叔丁基6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-5-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
通过用实例1.34.3取代实施1.13.11中的实例1.13.10制备标题化合物。MS(ESI)m/e 1030(M+H)+,1028(M-H)-。
1.34.5 6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
通过用实例1.34.4取代实施1.33.5中的实例1.33.4制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.47(bs,1H),12.18(s,1H),9.01(s,1H),8.70(d,1H),8.28(bs,3H),8.12(d,1H),8.05(dd,1H),7.99(d,1H),7.86(d,1H),7.76(d,1H),7.64(d,1H),7.50(s,1H),7.46(td,1H),7.32(t,1H),3.92(s,3H),3.58(m,2H),3.04(m,2H),2.57(m,2H),2.26(s,3H),1.47(s,2H),1.34(q,4H),1.24-1.14(m,4H),1.08(m,2H),0.90(s,6H)。MS(ESI)m/e 744(M+H)+,742(M-H)-。
1.35 6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(W3.35)的合成
1.35.1 5-溴-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酸甲基酯
如下制备标题化合物：用甲基5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酸酯取代实施1.33.1中的乙基5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑-3-甲酸酯。MS(ESI)m/e 385,387(M+H)+。
1.35.2 5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酸甲基酯
通过用实例1.35.1取代实施1.13.8中的实例1.13.7制备标题化合物。MS(ESI)m/e433(M+H)+。
1.35.3甲基5-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酸酯
通过用实例1.35.2取代实施1.33.2中的实例1.33.1制备标题化合物。MS(ESI)m/e913(M+H)+。
1.35.4 5-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酸
通过用实例1.35.3取代实施1.13.10中的实例1.13.9制备标题化合物。MS(ESI)m/e 899(M+H)+,897(M-H)-。
1.35.5叔丁基6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
通过用实例1.35.4取代实施1.13.11中的实例1.13.10制备标题化合物。MS(ESI)m/e 1031(M+H)+,1029(M-H)-。
1.35.6 6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
通过用实例1.35.5取代实施1.33.5中的实例1.33.4制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.74(d,1H),12.62(bs,1H),9.26(d,1H),9.13(d,1H),8.83(d,1H),8.28(bs,2H),8.25(d,1H),7.99(d,1H),7.91(d,1H),7.78(d,1H),7.51(s,1H),7.47(t,1H),7.33(t,1H),3.92(s,3H),3.58(t,2H),3.04(m,2H),2.57(t,2H),2.26(s,3H),1.47(s,2H),1.34(q,4H),1.20(t,4H),1.08(q,2H),0.90(s,6H)。MS(ESI)m/e 745(M+H)+,743(M-H)-。
1.36 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((2-(N,N-二甲基氨磺酰基)乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸(W3.36)的合成
向实例1.18.18(69.8mg)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中加入N,N-二甲基乙烯磺酰胺(118mg)、N,N-二异丙基乙胺(0.2mL)和H2O(0.2mL)。将混合物在室温下搅拌4天。将反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。蒸发溶剂后，将残余物溶于二氯甲烷和三氟乙酸(10mL，1:1)中，并将所得溶液搅拌过夜。减压除去溶剂。将残余物用N,N-二甲基甲酰胺(2mL)稀释，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以给出标题化合物。1HNMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.82(s,1H),8.53(s,2H),8.00(dd,1H),7.76(d,1H),7.59(dd,1H),7.53-7.37(m,4H),7.37-7.28(m,2H),7.26(s,1H),6.92(d,1H),4.92(s,2H),3.80(s,2H),3.54(t,2H),3.44-3.34(m,2H),3.30(s,2H),3.11(s,2H),2.98(t,2H),2.77(s,6H),2.07(s,3H),1.39(s,2H),1.27(q,4H),1.11(s,4H),1.06-0.93(m,2H),0.83(s,7H)。MS(ESI)m/e 881.2(M+H)+。
1.37 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(3-羟丙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸(W3.37)的合成
1.37.1 2-((3,5-二甲基-7-((5-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)甲基)金刚烷-1-基)氧基)乙醇
向实例1.1.6(8.9g)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)二氯甲烷(818mg)在乙腈(120mL)中的溶液中加入三乙胺(10mL)和频哪醇硼烷(12.8mL)。将混合物在回流下搅拌过夜。将混合物冷却至室温并直接用于下一反应。MS(ESI)m/e 467.3(M+Na)+。
1.37.2叔-丁基6-氯-3-(1-((3-(2-羟基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向叔丁基3-溴-6-氯吡啶甲酸酯(6.52g)在四氢呋喃(100mL)和水(20mL)中的溶液中加入实例1.37.1(9.90g)、(1S,3R,5R,7S)-1,3,5,7-四甲基-8-十四烷基-2,4,6-三氧杂-8-磷金刚烷(0.732g)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(1.02g)和磷酸钾(23.64g)，并将混合物在回流下搅拌过夜。在真空下除去溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯(500mL)中，用水和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂，得到残余物，将其通过硅胶色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 530.3(M+H)+。
1.37.3叔丁基3-{1-[(3-{2-[双(叔-丁氧基羰基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-氯吡啶-2-甲酸酯叔丁基6-氯-3-(1-((3,5-二甲基-7-(2-((甲磺酰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向实例1.37.2(3.88g)在二氯甲烷(30mL)和三乙胺(6mL)中的冷(0℃)的搅拌溶液中加入甲磺酰氯(2.52g)。将混合物在室温搅拌4小时。将反应混合物用乙酸乙酯(400mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂，得到标题化合物，将其不经进一步纯化用于下一反应。MS(ESI)m/e 608.1(M+H)+。
1.37.4叔丁基3-{1-[(3-{2-[双(叔-丁氧基羰基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-氯吡啶-2-甲酸酯
向实例1.37.3(151mg)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入亚氨基二甲酸二叔丁酯(54mg)。将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂，得到标题化合物，将其不经进一步纯化用于下一步。MS(ESI)m/e 729.4(M+H)+。
1.37.5 7-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1-萘甲酸
向甲基7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-萘甲酸酯(257mg)在1,4-二噁烷(10mL)和水(5mL)中的溶液中加入实例1.37.4(600mg)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)(57.8mg)和氟化铯(375mg)。在微波条件下(Biotage Initiator)将混合物在120℃下搅拌30分钟。将混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。蒸发溶剂，得到残余物，将其通过硅胶色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出中间体二酯。将残余物溶于四氢呋喃(10mL)、甲醇(5mL)和水(5mL)中，并添加LiOH H2O(500mg)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用2NHCl水溶液酸化，溶于400mL乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂，得到标题化合物。MS(APCI)m/e 765.3(M+H)+。
1.37.6 3-(1-((3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基)吡啶甲酸
向实例1.37.5(500mg)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入苯并[d]噻唑-2-胺(98mg)、1-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]-碳二亚胺盐酸盐(251mg)和4-(二甲基氨基)吡啶(160mg)。将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(400mL)稀释，用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物溶于二氯甲烷和三氟乙酸(10mL，1:1)中，并将溶液搅拌过夜。将溶剂去除，并将残余物溶于N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 741.2(M+H)+。
1.37.7 3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙醛
在-78℃下，向二甲基亚砜(2.5mL)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中加入草酰氯(1.5mL)。将混合物在-78℃下搅拌20分钟，并通过注射器加入(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙-1-醇(1.9g)在二氯甲烷(10mL)中的溶液。1小时后，添加三乙胺(5mL)。移去冷却浴，并将反应搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(300mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂，给出标题化合物。MS(DCI)m/e 206.0(M+NH4)+。
1.37.8 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(3-羟丙基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸
向实例1.37.6(125mg)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入实例1.37.7(32mg)。将该混合物在室温搅拌1小时，并将NaBH(OAc)3(107mg)添加至反应混合物中。将混合物在室温下搅拌过夜。向反应混合物中加入2N氢氧化钠水溶液(5mL)，并将反应搅拌4小时。将混合物用2NHCl水溶液中和，并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将合并的有机层用2％HCl水溶液、水和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂，给出残余物，将其在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以给出固体。将残余物溶于四氢呋喃(6mL)中，并且添加四丁基氟化铵(在四氢呋喃中1M，4mL)。将混合物在室温下搅拌2小时，并在真空下除去溶剂。将残余物溶于二甲基亚砜/甲醇(1:1，12mL)中，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以给出标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.09(s,1H),9.01(s,1H),8.36(dd,1H),8.20(ddd,5H),8.09-8.02(m,1H),8.03-7.95(m,1H),7.92(d,1H),7.80(d,1H),7.69(dd,1H),7.53-7.43(m,2H),7.36(ddd,1H),3.89(s,2H),3.56(t,2H),3.47(t,2H),3.10-2.93(m,4H),2.22(s,3H),1.78-1.68(m,2H),1.44(s,2H),1.30(q,4H),1.20-1.11(m,4H),1.04(q,2H),0.87(s,7H)。MS(ESI)m/e 799.2(M+H)+。
1.38 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{[3-(二甲基氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸(W3.38)的合成
向实例1.18.18(55mg)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中加入N,N-二甲基丙烯酰胺(73.4mg)、N,N-二异丙基乙胺(0.2mL)和水(0.2mL)。将混合物在室温下搅拌4天。将反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残余物溶于二氯甲烷和三氟乙酸(10mL，1:1)中。搅拌16小时后，将混合物减压浓缩。将残余物溶于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以给出标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.84(s,1H),8.22(s,3H),8.02(d,1H),7.78(d,1H),7.60(d,1H),7.55-7.39(m,3H),7.39-7.30(m,2H),7.27(s,1H),6.94(d,1H),4.94(s,2H),3.87(t,2H),3.81(s,2H),3.55(t,2H),3.20-2.95(m,6H),2.92(s,3H),2.82(s,3H),2.69(q,3H),2.09(s,3H),1.40(s,2H),1.28(q,4H),1.14(d,4H),1.07-0.94(m,2H),0.85(s,8H)。MS(ESI)m/e 845.3(M+H)+。
1.39 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3,5-二甲基-7-(2-{[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸(W3.39)的合成
如实例1.38所述通过用N-甲基丙烯酰胺代替N,N-二甲基丙烯酰胺制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.84(s,1H),8.32(s,2H),8.08-7.96(m,2H),7.78(d,1H),7.60(d,1H),7.52-7.40(m,3H),7.39-7.30(m,2H),7.27(s,1H),6.94(d,1H),4.94(s,2H),3.87(t,2H),3.81(s,2H),3.12(p,2H),3.01(dt,4H),2.57(d,3H),2.09(s,3H),1.40(s,2H),1.28(q,5H),1.18-1.07(m,4H),1.02(q,2H),0.85(s,7H)。MS(ESI)m/e831.3(M+H)+。
1.40 3-(1-{[3-(2-氨基乙酰氨基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}吡啶-2-甲酸(W3.40)的合成
1.40.1 1-((3-溴-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑
向实例1.1.3(500mg)在四氢呋喃(30mL)中的冷(-30℃)溶液中加入正丁基锂(9.67mL)，并将混合物在-30℃下搅拌2小时。在-30℃下滴加碘甲烷(1.934mL)。添加完成后，将混合物在-30℃下再搅拌2小时。缓慢添加1NHCl水溶液，使温度保持在0℃以下，直至pH达到6。将混合物在室温下搅拌10分钟，并用冰水(10mL)和乙酸乙酯(20mL)稀释。分离各层，并将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶色谱(用15/1至10/1石油/乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(LC-MS)m/e 337,339(M+H)+。
1.40.2 1-(3,5-二甲基-7-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)金刚烷-1-基)脲
将实例1.40.1(2.7g)和脲(4.81g)混合并在140℃下搅拌16小时。将混合物冷却至室温并悬浮在甲醇(200mL×2)中。过滤除去不溶物。浓缩滤液，以给出标题化合物。MS(LC-MS)m/e 317.3(M+H)+。
1.40.3 3,5-二甲基-7-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)金刚烷-1-胺
向实例1.40.2(2.53g)在20％乙醇水溶液(20mL)中的溶液中加入氢氧化钠(12.79g)。将混合物在120℃下搅拌16小时，并在140℃下再搅拌16小时。添加6NHCl水溶液直至pH达到6。浓缩混合物，并将残余物悬浮在甲醇(200mL)中。滤出不溶物质。浓缩滤液，以给出标题化合物，为HCl盐。MS(LC-MS)m/e 273.9(M+H)+。
1.40.4叔-丁基(2-((3,5-二甲基-7-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)金刚烷-1-基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸酯
向实例1.40.3(2.16g)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中加入三乙胺(3.30mL)、2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙酸(1.799g)和O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(3.90g)。将混合物在室温搅拌2小时。添加水(40mL)，并将混合物用乙酸乙酯(70mL×2)萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用3/1至2/1石油/乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(LC-MS)m/e 430.8(M+H)+。
1.40.5叔-丁基(2-((3-((4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸酯
向实例1.40.4(1.7g)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的环境溶液中分批加入N-碘代琥珀酰亚胺(1.066g)，并将该混合物在室温下搅拌16小时。添加冰水(10mL)和饱和Na2S2O3水溶液(10mL)。用乙酸乙酯(30mL×2)萃取混合物。将合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用3/1至2/1石油/乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(LC-MS)m/e 556.6(M+H)+。
1.40.6甲基2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯盐酸盐(12.37g)和实例1.4.4(15g)在二甲基亚砜(100mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(12mL)，并将混合物在50℃下搅拌24小时。然后将混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 448.4(M+H)+。
1.40.7甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例1.40.6(2.25g)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(205mg)在乙腈(30mL)中的溶液中加入三乙胺(3mL)和频哪醇硼烷(2mL)，并且将混合物在回流下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过快速色谱(用在己烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，提供标题化合物。
1.40.8甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
如下制备标题化合物：使用实例1.4.7中的程序，分别用实例1.40.7和实例1.40.5代替实例1.4.6和实例1.4.2。MS(ESI)m/e 797.4(M+H)+。
1.40.9 2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
使用实例1.26.8中的程序用实例1.40.8代替实例1.26.7制备标题化合物。MS(ESI)m/e 783.4(M+H)+。
1.40.10叔-丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
使用实例1.26.9中的程序用实例1.40.9代替实例1.26.8制备标题化合物。MS(ESI)m/e 915.3(M+H)+。
1.40.11 3-(1-{[3-(2-氨基乙酰氨基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}吡啶-2-甲酸
使用实例1.26.10中的程序用实例1.40.10代替实例1.26.9制备标题化合物。1HNMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.82(s,1H),8.00(dd,1H),7.90-7.79(m,4H),7.76(d,1H),7.59(dd,1H),7.49-7.38(m,3H),7.37-7.29(m,2H),7.25(s,1H),6.92(d,1H),4.92(s,2H),3.85(t,2H),3.77(s,2H),3.40(q,2H),2.98(t,2H),2.07(s,3H),1.63(s,2H),1.57-1.38(m,4H),1.15-0.93(m,6H),0.80(s,6H)。MS(ESI)m/e 759.2(M+H)+。
1.41 3-[1-({3-[(2-氨乙基)硫烷基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸(W3.41)的合成
1.41.1 3-溴-5,7-二甲基金刚烷-1-甲酸
在0℃下向溴(18.75mL)溶液中加入铁(10.19g)，并将混合物搅拌30分钟。将3,5-二甲基金刚烷-1-甲酸(19g)分批加入上述混合物中。将混合物在室温搅拌36小时。添加冰水(50mL)和6NHCl水溶液(100mL)后，将混合物用Na2SO3(100g，溶于500mL水中)处理。用二氯甲烷(300mL×4)萃取水层。将合并的有机层用1NHCl水溶液(300mL)和盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，以给出标题化合物，将其不经另外纯化用于下一步骤。1H NMR:(400MHz,CDCl3)δppm 2.23(s,2H),2.01-1.74(m,4H),1.61-1.47(m,6H),0.93(s,6H)。LC-MS(ESI)m/e 285.0(M+H)+。
1.41.2 3-溴-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲醇
向实例1.41.1(10g)在四氢呋喃(20mL)中溶液中加入BH3.THF(69.6mL)。将混合物在室温搅拌16小时。反应完成后，滴加甲醇(20mL)，并将所得混合物搅拌30分钟。将该混合物在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱(用石油醚/乙酸乙酯(从8/1至5/1)洗脱)纯化，以给出标题化合物。1H NMR:(400MHz,CDCl3)δppm 3.28(s,2H),1.98-1.95(m,6H),1.38-1.18(m,7H),0.93(s,6H)。
1.41.3 1-((3-溴-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-1H-吡唑
将2-(三丁基亚磷烷基)乙腈(919mg)、1H-吡唑(259mg)和实例1.41.2(800mg)在甲苯(8mL)中的混合物在90℃下搅拌16小时。浓缩混合物，并将残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释。将混合物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用石油醚/乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。LC-MS(ESI)m/e325.1(M+H)+。
1.41.4 3-((1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-硫醇
将实例1.41.3(2.8g)和硫脲(15.82g)在33％(w/w)HBr的乙酸(50mL)溶液中的混合物在110℃下搅拌16小时，并在减压下浓缩，得到残余物。将残余物溶于20％乙醇水溶液(v/v：200mL)中，并添加氢氧化钠(19.06g)。将所得溶液在室温下搅拌16小时并浓缩。将残余物溶于水(60mL)中，并用6N HCl水溶液酸化至pH 5-pH 6。用乙酸乙酯(200mL×2)萃取混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 319.1(M+H)+。
1.41.5 2-((-3-((1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)硫)乙醇
向实例1.41.4(3.3g)在乙醇(120mL)中的溶液中加入乙醇钠(2.437g)。将混合物搅拌10分钟，并且滴加2-氯乙醇(1.80mL)。将混合物在室温下搅拌6小时，并用1N HCl水溶液中和至pH 7。浓缩混合物，并且将残余物用乙酸乙酯(200mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱(用6/1至2/1的石油醚/乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 321.2(M+H)+。
1.41.6 2-((-3,5-二甲基-7-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)金刚烷-1-基)硫)乙醇
在-20℃下，在氮气下，向实例1.41.5(2.3g)在四氢呋喃(60mL)中的溶液中滴加正丁基锂(14.35mL，在己烷中2M)。将混合物搅拌2小时。在-20℃下将甲基碘(4.49mL)加入到所得混合物中，并将混合物在-20℃下搅拌2小时。通过在-20℃下滴加饱和的NH4Cl水溶液淬灭反应。将所得混合物搅拌10分钟并用1N HCl水溶液酸化至pH 5。将混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 335.3(M+H)+。
1.41.7 2-((-3-((4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)硫)乙醇
向实例1.41.6(3.65g)在N,N-二甲基甲酰胺(90mL)中的溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(3.68g)。将混合物在室温搅拌16小时。通过添加冰水(8mL)和饱和NaS2O3水溶液(8mL)淬灭反应。将混合物再搅拌10分钟，并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用石油醚/乙酸乙酯(6/1至3/1)洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 461.2(M+H)+。
1.41.8二-叔丁基[2-({3-[(4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}硫烷基)乙基]-2-酰亚胺二碳酸酯
向实例1.41.7(3g)在二氯甲烷(100mL)中的***液(0℃浴)中加入三乙胺(1.181mL)和甲磺酰氯(0.559mL)。将混合物在室温下搅拌4小时，并通过添加冰水(30mL)淬灭反应。将混合物再搅拌10分钟，并用二氯甲烷(50mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物溶于乙腈(100mL)中，并且添加NH(Boc)2(1.695g)和Cs2CO3(4.24g)。将混合物在85℃下搅拌16小时，并通过添加水(20mL)淬灭反应。将混合物搅拌10分钟并用乙酸乙酯(40mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用10/1至6/1的石油醚/乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 660.1(M+H)+。
1.41.9甲基2-[5-(1-{[3-({2-[双(叔-丁氧基羰基)氨基]乙基}硫烷基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基]-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
如下制备标题化合物：使用实例1.4.7中的程序，分别用实例1.40.7和实例1.41.8代替实例1.4.6和实例1.4.2。LC-MS(ESI)m/e900.6(M+H)+。
1.41.10 2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-((2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)硫)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
将氢氧化锂(553mg)在水(4.03mL)和甲醇(4mL)中的浆液冷却至15℃。缓慢添加实例1.41.9(800mg)在四氢呋喃(3.23mL)和甲醇(4mL)中的溶液，并在室温下搅拌反应。18小时后，将反应在冰浴中冷却，并添加1.8g磷酸的水(4mL)溶液。将两相混合物转移到分液漏斗中，并用乙酸乙酯萃取，以给出标题化合物。LC-MS(ESI)m/e 786.2(M+H)+。
1.41.11叔-丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-((2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)硫)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
向含有实例1.41.10(699mg)的4mL琥珀色小瓶中加入乙酸乙酯(5mL)和1,1-羰基二咪唑(231mg)，并在室温下搅拌7小时。添加苯并[d]噻唑-2-胺(227mg)和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.228mL)在乙腈(3mL)中的溶液，并将反应加热至70℃。搅拌18小时后，通过添加10mL 1N HCl水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取，以给出标题化合物，将其不经进一步纯化用于后续步骤。MS(ESI)m/e 818.2(M+H)+。
1.41.12 3-[1-({3-[(2-氨乙基)硫烷基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸
向实例1.41.11(510mg)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三氟乙酸(10mL)，并将反应在室温下搅拌30分钟。将反应用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用二氯甲烷萃取。将产物在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的5％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以给出标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm12.86(bs,1H),8.03(d,1H),7.76(m,2H),7.62(d,1H),7.39(m,6H),6.95(t,1H),5.07(s,1H),4.96(s,1H),3.85(m,4H),3.01(t,2H),2.97(t,2H),2.90(m,2H),2.69(m,2H),2.11(s,3H),1.54(s,2H),1.36,(m,4H),1.17(m,4H),1.08(m,2H),0.84(s,6H)。MS(ESI)m/e 762.2(M+H)+。
1.42 3-(1-{[3-(3-氨基丙基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸(W3.42)的合成
1.42.1 1-((3-烯丙基-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-1H-吡唑
向实例1.41.3(0.825g)在甲苯(5mL)中的溶液中加入N,N’-偶氮异丁腈(AIBN，0.419g)和烯丙基三丁基锡烷(2.039mL)。将混合物用N2流吹扫15分钟，在80℃下加热8小时并浓缩。通过硅胶色谱(用在石油醚中的5％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 285.2(M+H)+。
1.42.2 1-((3-烯丙基-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑
在-78℃在N2下，向实例1.42.1(200mg)在四氢呋喃(5mL)中的溶液中加入正丁基锂(2.81mL，在己烷中2.5M)。将混合物搅拌2小时，同时将温度升至-20℃，然后在-20℃下搅拌1小时。添加碘甲烷(0.659mL)，并将所得混合物在-20℃下搅拌0.5小时。用饱和的NH4Cl水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取两次。用盐水洗涤有机层，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 299.2(M+H)+。
1.42.3 3-(3,5-二甲基-7-((5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)金刚烷-1-基)丙-1-醇
在氮气氛下，将实例1.42.2(2.175g，7.29mmol)在无水四氢呋喃(42.5mL)中溶液冷却至0℃。滴加BH3THF(15.30mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时并冷却至0℃。向反应混合物中滴加10N NaOH水溶液(5.03mL)，然后添加30％H2O2(16.52mL)水溶液。将所得混合物温热至室温并搅拌90分钟。用10％盐酸水溶液(35mL)淬灭反应。分离有机层，并将水层用乙酸乙酯(2×60mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×60mL)洗涤并在冰浴中冷却。小心地添加饱和的亚硫酸钠水溶液(15mL)并将混合物搅拌几分钟。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。通过硅胶色谱(用石油醚/乙酸乙酯(3:1至1:1)洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e317.3(M+H)+。
1.42.4 3-(3-((4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)丙-1-醇
将实例1.42.3(1.19g)和1-碘吡咯烷-2,5-二酮(1.015g)在N,N-二甲基甲酰胺(7.5mL)中的混合物在室温下搅拌16小时。用饱和Na2SO3水溶液淬灭反应。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和Na2SO3水溶液、饱和Na2CO3水溶液、水和盐水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用石油醚/乙酸乙酯(3:1至1:1)洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 443.1(M+H)+。
1.42.5 3-(3-((4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)丙基甲磺酸酯
在0℃下，向实例1.42.4(1.55g，3.50mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中缓慢加入三乙胺(0.693mL)和甲磺酰氯(0.374mL)。将混合物在20℃下搅拌3.5小时，并用二氯甲烷稀释。用饱和的NH4Cl水溶液、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机层。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 521.1(M+H)+。
1.42.6二-叔丁基(3-{3-[(4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}丙基)-2-酰亚胺二碳酸酯
在20℃下，向实例1.42.5(1.92g)在乙腈(40mL)中的溶液中加入亚氨基二碳酸二叔丁酯(0.962g)和Cs2CO3(2.404g)。将混合物在80℃下搅拌16小时，并用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用石油醚/乙酸乙酯(10:1)洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 642.3(M+H)+。
1.42.7甲基2-[5-{1-[(3-{3-[双(叔-丁氧基羰基)氨基]丙基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基]-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
如下制备标题化合物：使用实例1.4.7中的程序，分别用实例1.40.7和实例1.42.6代替实例1.4.6和实例1.4.2。LC-MS(ESI)m/e 882.6(M+H)+。
1.42.8 2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)丙基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
使用实例1.41.10中的程序用实例1.42.7取代实施1.41.9制备标题化合物。LC-MS(ESI)m/e 468.5(M+H)+。
1.42.9叔-丁基6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)丙基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸酯
使用实例1.41.11中的程序用实例1.42.8取代实施1.41.10制备标题化合物。
1.42.10 3-(1-{[3-(3-氨基丙基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸
使用实例1.41.12中的程序用实例1.42.9取代实施1.41.11制备标题化合物。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.86(s,1H),8.03(d,1H),7.79(d,1H),7.62(d,4H),7.47(dt,3H),7.36(q,2H),7.27(s,1H),6.95(d,1H),4.95(s,2H),3.77(s,2H),3.01(t,2H),2.72(q,2H),2.09(s,3H),1.45(t,2H),1.18-1.05(m,9H),1.00(d,6H),0.80(s,6H)。MS(ESI)m/e468.5(M+H)+。
1.43 3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{5-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]喹啉-3-基}吡啶-2-甲酸(W3.43)的合成
1.43.1甲基3-溴喹啉-5-甲酸酯
向3-溴喹啉-5-甲酸(2g)在甲醇(30mL)中的溶液中加入浓H2SO4(5mL)。将溶液在回流下搅拌过夜。将该混合物在减压下浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯(300mL)中并用Na2CO3水溶液、水和盐水洗涤。经无水硫酸钠干燥后，过滤并蒸发溶剂，得到标题产物。MS(ESI)m/e266(M+H)+。
1.43.2甲基3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)喹啉-5-甲酸酯
向实例1.43.1(356mg)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(55mg)、乙酸钾(197mg)和双(频哪醇合)二硼(510mg)。将混合物在60℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温并用于下一反应，无需进一步后处理。MS(ESI)m/e 339.2(M+Na)+。
1.43.3甲基3-[5-{1-[(3-{2-[双(叔-丁氧基羰基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基]喹啉-5-甲酸酯
向实例1.43.2(626mg)在1,4-二噁烷(10mL)和水(5mL)中的溶液中加入实例1.23.3(1.46g)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)(140mg)和CsF(911mg)。在微波条件下(Biotage Initiator)将混合物在120℃下搅拌30分钟。将混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷(1L)中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题产物。MS(ESI)m/e 880.3(M+H)+。
1.43.4 3-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)喹啉-5-甲酸
向实例1.43.3(1.34g)在四氢呋喃(10mL)、甲醇(5mL)和水(5mL)中的溶液中加入LiOH H2O(120mg)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用2NHCl水溶液酸化，用乙酸乙酯(400mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。过滤并蒸发溶剂，给出标题产物。MS(APCI)m/e 766.3(M+H)+。
1.43.5 3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{5-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]喹啉-3-基}吡啶-2-甲酸
向实例1.43.4(200mg)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入苯并[d]噻唑-2-胺(39.2mg)、1-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]-碳二亚胺盐酸盐(50mg)和4-二甲基氨基吡啶(32mg)。将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物溶于二氯甲烷和三氟乙酸(10mL，1:1)中，并将反应搅拌过夜。浓缩混合物，并将残余物溶于N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以给出标题产物。MS(ESI)m/e 742.1(M+H)+。
1.44 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3,5-二甲基-7-{2-[(2-磺乙基)氨基]乙氧基}三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸(W3.44)的合成
1.44.1叔丁基6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[(2,2,7,7-四甲基-10,10-二氧化-3,3-联苯-4,9-二氧杂-10λ6-硫杂-13-氮杂-3-硅杂十五烷-15-基)氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸酯
向实例1.18.18(500mg)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的溶液中加入4-((叔-丁基联苯甲硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丁基乙烯磺酸酯(334mg)。将反应在室温下搅拌过夜，并且添加甲胺(0.3mL)以淬灭反应。将所得混合物搅拌20分钟，并使用Analogix***(C18柱)通过反相色谱(用含有0.1％v/v三氟乙酸的50％-100％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。
1.44.2 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3,5-二甲基-7-{2-[(2-磺乙基)氨基]乙氧基}三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸
将在二氯甲烷(5mL)中的实例1.44.1(200mg)用三氟乙酸(2.5mL)处理过夜。将反应混合物浓缩并通过反相色谱(C18柱)(用含有0.1％v/v三氟乙酸的20％-60％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。1H NMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.86(s,1H),8.32(s,2H),8.02(d,1H),7.78(d,1H),7.60(d,1H),7.51(d,1H),7.40-7.49(m,2H),7.31-7.39(m,2H),7.27(s,1H),6.95(d,1H),4.94(s,2H),3.87(t,2H),3.81(s,2H),3.15-3.25(m,2H),3.03-3.13(m,2H),3.00(t,2H),2.79(t,2H),2.09(s,3H),1.39(s,2H),1.22-1.34(m,4H),0.94-1.18(m,6H),0.85(s,6H)。MS(ESI)m/e 854.1(M+H)+。
实例2.示例性合成子的合成
该示例提供了用于更多制作ADC的示例性合成子的合成方法。
2.1 N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺(合成子BS)的合成
将在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的实例1.1.14(72mg)和4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰胺基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯(91mg)在水-冰浴中冷却，并且添加N,N-二异丙基乙胺(0.12mL)。将混合物在0℃下搅拌2小时并添加乙酸(0.057mL)。浓缩溶剂后，通过HPLC(在0.1％TFA/水中的20％-80％乙腈)纯化残余物，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm9.98(s,1H),8.40(s,1H),8.06(d,1H),8.00(d,1H),7.74-7.89(m,4H),7.59(d,2H),7.46(s,2H),7.37(t,1H),7.18-7.32(m,4H),6.99(s,2H),6.01(s,1H),4.98(s,3H),4.38(d,2H),3.47(d,2H),3.36(t,2H),3.28(t,2H),2.91-3.10(m,2H),2.79-2.91(m,4H),2.19-2.25(m,3H),2.06-2.20(m,2H),1.89-2.02(m,3H),1.53-1.74(m,2H),1.30-1.55(m,8H),1.06-1.29(m,10H),0.91-1.06(m,2H),0.76-0.89(m,12H)。MS(ESI)m/e 1356.3(M+H)+。
2.2 N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺(合成子DK)的合成
向4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰胺基)苄基4-硝基苯基碳酸酯(57mg)和实例1.2.2(57mg)在N,N-二异丙基乙胺(6mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.5mL)。将混合物搅拌过夜。将混合物真空浓缩，并将残余物用甲醇(3mL)和乙酸(0.3mL)稀释，加载到300g反相柱上，用在0.1％TFA水溶液中的30％-70％乙腈洗脱，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.97(s,1H),,8.73(d,1H),8.07(d,1H),7.90-7.98(m,1H),,7.71-7.87(m,4H),7.54-7.63(m,2H),,7.45(d,1H),7.32-7.42(m,2H),7.17-7.31(m,3H),6.92-7.03(m,3H),5.88-6.08(m,1H),4.97(s,3H),4.29-4.46(m,4H),4.12-4.26(m,4H),3.86(s,3H),3.21-3.41(m,8H),2.78-3.10(m,6H),2.20(s,3H),1.90-2.18(m,3H),0.92-1.77(m,24H),0.75-0.88(m,6H)。MS(ESI)m/e 1360.2(M+H)+。
2.3 N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺(合成子DQ)的合成
通过用实例1.3.2取代实例2.2中的实例1.2.2来制备标题化合物。1H NMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.99(s,1H),8.17-8.35(m,1H),8.07(d,1H),7.89(d,1H),7.71-7.84(m,4H),7.55-7.65(m,2H),7.43(s,1H),7.36(t,1H),7.28(d,2H),7.21(t,1H),6.99(s,2H),6.83(d,1H),5.97(s,1H),5.28-5.51(m,2H),4.98(s,2H),4.32-4.44(m,1H),4.19(dd,1H),3.97-4.13(m,2H),3.85(s,2H),3.29(d,3H),3.00(s,3H),2.80-2.98(m,4H),2.18-2.26(m,3H),1.88-2.17(m,3H),0.91-1.73(m,23H),0.74-0.92(m,12H)。MS(ESI)m/e1373.3(M+H)+。
2.4 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子DJ)的合成
2.4.1(E)-叔-丁基二甲基((3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)烯丙基)氧基)硅烷
在氮气氛下向装有叔-丁基二甲基(丙-2-炔-1-基氧基)硅烷(5g)和二氯甲烷(14.7mL)的烧瓶中滴加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(3.94g)。将混合物在室温下搅拌1分钟，然后通过套管转移到含有Cp2ZrClH(氯化双(η5-环戊二烯基)氢化锆(Schwartz试剂)(379mg)的氮气喷射烧瓶中。将得到的反应混合物在室温下搅拌16小时。小心地用水(15mL)淬灭混合物，并且然后用二***(3×30mL)萃取。将合并的有机相用水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓缩并通过硅胶色谱(用0-8％乙酸乙酯/庚烷的梯度洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/z 316.0(M+NH4)+。
2.4.2(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-溴-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将(2R,3R,4S,5S,6S)-2-溴-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(5g)溶解在乙腈(100mL)中。将A g2O(2.92g)加入到溶液中并将反应在室温下搅拌5分钟。添加4-溴-2-硝基苯酚(2.74g)并将反应混合物在室温下搅拌4小时。通过硅藻土过滤银盐残余物并将滤液减压浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷中的10％-70％乙酸乙酯的梯度洗脱)纯化残余物以提供标题化合物。MS(ESI+)m/z 550.9(M+NH4)+。
2.4.3(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((E)-3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙-1-烯-1-基)-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.4.2(1g)、碳酸钠(0.595g)，三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3)(0.086g)和1,3,5,7-四甲基-6-苯基-2,4,8-三氧杂-6-磷杂金刚烷(0.055g)在装有回流冷凝器的3颈50mL圆底烧瓶中合并，并将***用氮气脱气。单独地，将实例2.4.1(0.726g)在四氢呋喃(15mL)中的溶液用氮气脱气30分钟。将后一种溶液通过套管转移到含有固体试剂的烧瓶中，然后通过注射器添加脱气的水(3mL)。将反应加热至60℃并保持2小时。将反应混合物在乙酸乙酯(3×30mL)和水(30mL)之间分配。将合并的有机相干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用0-35％乙酸乙酯/庚烷洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI+)m/z643.1(M+NH4)+。
2.4.4(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-氨基-4-((E)-3-羟基丙-1-烯-1-基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向装有压力平衡加料漏斗的500mL三颈氮气冲洗烧瓶中加入锌粉(8.77g)。通过套管添加实例2.4.3(8.39g)在四氢呋喃(67mL)中的脱气溶液。将所得悬浮液在冰浴中冷却，并且然后通过加料漏斗滴加6NHCl水溶液(22.3mL)，其加入速率使反应的内部温度不超过35℃。加完后，将反应混合物在室温下搅拌2小时，并且然后通过硅藻土垫过滤，用水和乙酸乙酯冲洗。将滤液用饱和NaHCO3水溶液处理直至水层不再呈酸性，并且过滤混合物以除去所得固体。将滤液转移到分液漏斗中并分离各层。将水层用乙酸乙酯(3×75mL)萃取，并将合并的有机层用水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物用二***研磨，并过滤收集固体，以给出标题化合物。MS(ESI+)m/z 482.0(M+H)+。
2.4.5(9H-芴-9-基)甲基(3-氯-3-氧丙基)氨基甲酸酯
向3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酸(5.0g)在二氯甲烷(53.5mL)中的溶液中加入亚硫酰二氯(0.703mL)。将混合物在60℃下搅拌1小时。将混合物冷却并浓缩，以提供标题化合物，将其不经进一步纯化用于下一步。
2.4.6(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-((E)-3-羟基丙-1-烯-1-基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.4.4(6.78g)溶解在二氯甲烷(50mL)中并将溶液在冰浴中冷却至0℃。添加N,N-二异丙基乙胺(3.64g)，然后滴加实例2.4.5(4.88g)在二氯甲烷(50mL)中的溶液。搅拌反应16小时，使冰浴达到室温。添加饱和NaHCO3水溶液(100mL)并分离各层。用二氯甲烷(2x 50mL)进一步萃取水层。将萃取物经Na2SO4干燥，过滤，浓缩并且然后通过硅胶色谱(用5％-95％乙酸乙酯/庚烷的梯度洗脱)纯化，以给出起始苯胺和所需标题化合物的不可分离的混合物。将该混合物在1N HCl水溶液(40mL)和二***与乙酸乙酯(40mL)的1:1混合物之间分配，并且然后用乙酸乙酯(2×25mL)进一步萃取水相。合并有机相，用水(2×25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以给出标题化合物。MS(ESI+)m/z 774.9(M+H)+。
2.4.7(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-((E)-3-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)丙-1-烯-1-基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.4.6(3.57g)溶解在二氯甲烷(45mL)中，并添加双(4-硝基苯基)碳酸酯(2.80g)，然后滴加N,N-二异丙基乙胺(0.896g)。将反应在室温下搅拌2小时。然后将硅胶(20g)加入到反应溶液中，并将混合物在减压下浓缩至干，保持浴温为25℃或低于25℃。将二氧化硅残余物加载到柱顶，并通过硅胶色谱(用0-100％乙酸乙酯-庚烷的梯度洗脱)纯化粗材料，提供部分纯化的被硝基苯酚污染的标题化合物。将该材料用甲基叔丁基醚(250mL)研磨并将所得浆料静置1小时。过滤收集标题化合物。以类似方式收集三个连续产物，以给出标题化合物。MS(ESI+)m/z 939.8(M+H)+。
2.4.83-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)吡啶甲酸
在0℃下，向在N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中的实例1.1.14(31mg)和实例2.4.7(33.3mg)中加入N，N-二异丙基乙胺(25μL)。将混合物搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，并且用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥、过滤、并浓缩。将残余物溶于甲醇(2mL)和四氢呋喃(1mL)中，冷却至0℃，并调节3M氢氧化锂水溶液(0.35mL)。将混合物在0℃搅拌4小时，浓缩并通过吉尔森HPLC***(C18柱)(用在0.1％TFA/水中的0-60％乙腈洗脱)纯化，以提供标题化合物。
2.4.94-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
在0℃下，向实例2.4.8(19mg)中在N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中的溶液中加入2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(10mg)和N，N-二异丙基乙胺(11.08μL)。将混合物在0℃下搅拌15分钟并调节数滴乙酸。将混合物通过吉尔森HPLC***(C18柱)(用在0.1％TFA/水中的20％-60％乙腈洗脱)纯化，以提供标题化合物。1HNMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm9.03(s,1H),8.40(s,1H),8.25(d,1H),8.00(d,1H),7.73-7.91(m,4H),7.46(s,2H),7.37(t,1H),7.29(d,1H),7.22(t,1H),7.08-7.13(m,1H),7.04(d,1H),6.98(s,2H),6.56(d,1H),6.10-6.25(m,1H),4.86(s,1H),4.64(d,2H),3.95(d,2H),3.86(d,4H),3.24-3.41(m,4H),2.79-2.96(m,6H),2.54(t,2H),2.21(s,3H),2.03(t,2H),1.90-1.98(m,2H),1.34-1.52(m,6H),1.20-1.30(m,5H),0.89-1.20(m,8H),0.82(d,6H)。MS(ESI)m/e 1391.2(M+H)+。
2.5 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子DO)的合成
2.5.13-(1-((3-(2-((E)-4-(3-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)-N-甲基丁-3-烯酰胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(4-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基)吡啶甲酸
向实例2.4.7(98mg)和实例1.3.2(91mg)的冷(0℃)混合物中加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.054mL)。将反应缓慢温热至室温并搅拌过夜。添加水和乙酸乙酯淬灭反应。分离各层，并将水层用另外的乙酸乙酯(2x)萃取。将合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物不经进一步纯化用于后续步骤。MS(ESI)m/e1576.8(M+H)+。
2.5.23-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(4-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基)吡啶甲酸
向实例2.5.1(158mg)在四氢呋喃/甲醇/水(2:1:1，4mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(20mg)。将反应混合物搅拌过夜。将混合物真空浓缩，用TFA酸化，并溶于二甲基亚砜/甲醇(9mL)中，并加载到HPLC(吉尔森***，用10％-85％乙腈的0.1％TFA水溶液洗脱)上纯化，以给出纯标题化合物。MS(ESI)m/e 1228.2(M+NH4)+。
2.5.34-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1,2,3,4-四氢喹喔啉-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
向实例2.5.2(20mg)和2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(6.5mg)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.054mL)。将反应搅拌过夜。将反应混合物用甲醇(2mL)稀释，并用TFA酸化。浓缩混合物并在HPLC上纯化(吉尔森***，用10％-85％乙腈的0.1％TFA水溶液洗脱)，以给出纯标题化合物。1H NMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.03(s,1H),8.25(s,2H),7.85-7.95(m,2H),7.72-7.83(m,3H),7.43(s,2H),7.32-7.37(m,1H),7.17-7.25(m,1H),7.08-7.14(m,1H),7.04(d,1H),6.98(s,2H),6.82(d,1H),6.56(d,1H),6.08-6.25(m,1H),4.82-4.92(m,1H),4.64(d,3H),4.00-4.11(m,4H),3.81-3.94(m,6H),3.27-3.50(m,17H),3.00(s,3H),2.83-2.96(m,3H),2.53-2.59(m,2H),2.20(s,3H),2.03(t,2H),1.37-1.55(m,4H),0.90-1.29(m,10H),0.82(d,6H)。MS(ESI)m/e 1406.2(M+H)+。
2.6 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子DP)的合成
2.6.13-(1-((3-(2-((E)-4-(3-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙酰氧基-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)-N-甲基丁-3-烯酰胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(4-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)吡啶甲酸
向实例2.4.7(98mg)和实例1.2.2(91mg)的冷(0℃)混合物中加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.054mL)。将反应缓慢温热至室温并搅拌过夜。添加水和乙酸乙酯淬灭反应。分离各层，并将水层用另外的乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物不经进一步纯化用于后续步骤。MS(ESI)m/e1547.7(M+H)+。
2.6.23-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(4-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)吡啶甲酸
通过用实例2.6.1取代实施2.5.2中的实例2.5.1制备标题化合物。MS(ESI)m/e1200.1(M+NH4)+。
2.6.34-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.6.2取代实施2.5.3中的实例2.5.2制备标题化合物。1H NMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.04(s,1H),,8.74(s,1H),8.26(s,1H),,7.96(d,1H),7.71-7.92(m,4H),7.35-7.48(m,3H),7.23(t,1H),7.11(d,1H),6.96-7.07(m,4H),6.57(d,1H),6.11-6.24(m,1H),4.81-4.93(m,1H),4.65(d,2H),4.32-4.40(m,2H),4.17(s,3H),3.23-3.51(m,14H),2.83-2.98(m,3H),2.54(t,2H),2.21(s,3H),2.03(t,2H),1.34-1.55(m,6H),0.92-1.31(m,13H),0.82(d,6H)。MS(ESI)m/e1415.2(M+Na)+。
2.7 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子HO)的合成
2.7.13-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基)吡啶甲酸
向实例2.4.7(22mg)和实例1.6.3(20mg)的冷(0℃)混合物中加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.054mL)。将反应缓慢温热至室温并搅拌过夜。添加水和乙酸乙酯淬灭反应。分离各层，并将水层用另外的乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机物用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，以给出粗标题化合物，将其溶于四氢呋喃/甲醇/水(2:1:1,4mL)中。调节氢氧化锂一水合物(40mg)，并将反应混合物搅拌过夜。然后将混合物真空浓缩，用TFA酸化，溶于二甲基亚砜/甲醇中，并在HPLC(吉尔森***，用10％-85％乙腈的0.1％TFA水溶液洗脱)上纯化，以给出标题化合物。
2.7.24-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.7.1取代实施2.5.3中的实例2.5.2制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.09(s,1H),9.02(s,2H),8.37(d,1H),8.12-8.29(m,4H),8.06(s,1H),8.02(d,1H),7.93(d,1H),7.76-7.89(m,2H),7.70(t,1H),7.43-7.54(m,2H),7.37(t,1H),7.00-7.13(m,2H),6.98(s,2H),6.56(d,1H),6.08-6.25(m,1H),4.86(s,1H),4.64(d,2H),3.81-3.94(m,6H),3.18-3.51(m,12H),2.78-2.96(m,4H),2.49-2.59(m,2H),2.22(s,3H),,2.03(t,2H),1.33-1.54(m,6H),0.93-1.30(m,12H),0.82(d,6H)。MS(ESI)m/e1408.3(M+Na)+。
2.8 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.1～3,7～]癸-1-基}氧基)乙基](氧杂环丁烷-3-基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子IT)的合成
2.8.13-(1-(((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(氧杂环丁烷-3-基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸,三氟乙酸
向实例1.16.7(0.039g)和实施例2.4.7(0.048g)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.037mL)，并在室温下搅拌反应2天。浓缩反应，并将残余物重新溶于甲醇(0.5mL)和四氢呋喃(0.5mL)的混合物中，并用氢氧化锂一水合物(0.027g)的水(0.5mL)溶液处理，并在室温下搅拌溶液。搅拌1小时后，将反应用三氟乙酸(0.066mL)淬灭，用N，N-二甲基甲酰胺(1mL)稀释，并使用吉尔森***通过HPLC(用含有0.1％v/v三氟乙酸的10％-60％乙腈水溶液洗脱)纯化。合并所需的级分并冷冻干燥，以提供标题化合物。
2.8.24-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](氧杂环丁烷-3-基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
向实例2.8.1(0.024g)和2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(8.95mg)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.017mL)，并在室温下搅拌反应2小时。将反应用N，N-二甲基甲酰胺(1mL)和水(1mL)稀释，并使用吉尔森***通过HPLC(用含有0.1％v/v三氟乙酸的10％-60％乙腈水溶液洗脱)纯化。合并所需的级分并冷冻干燥，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.83(s,1H),9.02(s,1H),8.22(d,1H),8.02(d,1H),7.86(t,1H),7.78(d,1H),7.60(d,1H),7.56-7.39(m,3H),7.39-7.30(m,2H),7.27(s,1H),7.14-6.89(m,5H),6.56(d,1H),4.94(s,2H),4.83(t,1H),4.63(t,2H),4.54(t,1H),3.93-3.83(m,6H),3.83-3.75(m,4H),3.33(dt,10H),2.99(t,2H),2.54(d,2H),2.08(d,3H),2.02(t,2H),1.54-0.72(m,26H)。MS(ESI)m/e 1433.3(M+H)+。
2.9 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子KA)的合成
2.9.13-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
将实例1.12.10(150mg)溶解在N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，并添加实例2.4.7(190mg)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.30mL)。将反应在室温下搅拌过夜。调节另外的实例2.4.7(70mg)和N，N-二异丙基乙胺(0.10mL)并将反应再搅拌一天。然后浓缩反应，并将残余物溶于四氢呋喃(2mL)和甲醇(2mL)中，然后添加1.94N氢氧化锂一水合物(1.0mL)，并将混合物在室温下搅拌一小时。通过反相色谱(C18柱)(用在0.1％TFA/水中的10％-90％乙腈洗脱)纯化，提供标题化合物，为三氟乙酸盐。MS(ESI)m/e 1270.4(M-H)-。
2.9.26-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3-(3-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)丙酰胺基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
将实例2.9.1(16mg)溶于N，N-二甲基甲酰胺(0.3mL)中，然后添加2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(5mg)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(11μL)。将反应混合物在室温下搅拌三小时，并通过反相色谱(C18柱)(用在0.1％TFA/水中10％-90％乙腈洗脱)纯化，提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.71(v br s,1H),9.03(s,1H),8.25(s,1H),8.01(d,1H),7.87(br m,1H),7.76(t,2H),7.50(d,1H),7.46(t,1H),7.33(t,1H),7.28(s,1H),7.08(d,1H),7.03(m,2H),6.98(s,2H),6.56(d,1H),6.17(m,1H),5.00(s,2H),4.86(br m,1H),4.64(d,2H),3.88(m,6H),3.79(br m,2H),3.43,3.35(m,m,总共16H),3.22(s,3H),2.80(m,2H),2.54(m,2H),2.09(s,3H),2.03(t,2H),1.45(m,6H),1.37(br m,2H),1.28-0.90(m,10H),0.77-0.82(m,6H)。MS(ESI)m/e1463.5(M-H)-。
2.10 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子KB)
将实例2.9.1(16mg)溶于N，N-二甲基甲酰胺(0.3mL)中，然后添加2,5-二氧代吡咯烷-1-基2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸酯(4mg)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(11μL)。将反应混合物在室温下搅拌三小时，并通过反相色谱(C18柱)(用在0.1％TFA/水中10％-90％乙腈洗脱)纯化，提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.06(s,1H),8.25(br m,2H),8.01(d,1H),7.76(t,2H),7.49(d,1H),7.47(t,1H),7.33(t,1H),7.28(s,1H),7.11(d,1H),7.08(s,2H),7.03(m,2H),6.56(d,1H),6.17(m,1H),5.00(s,2H),4.86(br m,1H),4.64(d,2H),4.02(s,2H),3.88(m,6H),3.79(br m,2H),3.43,3.35(m,m,总共14H),3.22(s,3H),2.80(m,2H),2.57(m,2H),2.09(s,3H),1.37(br m,2H),1.28-0.90(m,10H),0.77-0.82(m,6H)。MS(ESI)m/e 1407.4(M-1)-。
2.11 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子KT)的合成
2.11.1(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-甲酰基-3-羟基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将2,4-二羟基苯甲醛(15g)和(2S,3R,4S,5S,6S)-2-溴-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(10g)溶解在乙腈中，然后添加碳酸银(10g)并将反应加热至49℃。搅拌4小时后，将反应冷却，过滤并浓缩。将粗标题化合物悬浮在二氯甲烷中，并通过硅藻土过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用乙酸乙酯/庚烷洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。
2.11.2(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-羟基-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.11.1(16.12g)在四氢呋喃(200mL)和甲醇(200mL)中的溶液冷却至0℃，并分批添加硼氢化钠(1.476g)。将反应搅拌20分钟，并用水:饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)的1:1混合物淬灭。滤出所得固体并用乙酸乙酯冲洗。分离各相，并将水层用乙酸乙酯萃取四次。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用庚烷/乙酸乙酯洗脱)纯化粗标题化合物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 473.9(M+NH4)+。
2.11.3(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-羟基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
在-5℃下向实例2.11.2(7.66g)和叔-丁基二甲基甲硅烷基氯(2.78g)的二氯甲烷(168mL)溶液中加入咪唑(2.63g)并将反应搅拌过夜，使反应内部温度升至12℃。将反应混合物倒入饱和氯化铵水溶液中并用二氯甲烷萃取四次。将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用庚烷/乙酸乙酯洗脱)纯化粗标题化合物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 593.0(M+Na)+。
2.11.4(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向实例2.11.3(5.03g)和三苯基膦(4.62g)的甲苯(88mL)溶液中加入二-叔丁基-偶氮二甲酸酯(4.06g)并将反应搅拌30分钟。添加(9H-芴-9-基)甲基(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基甲酸酯并另外搅拌反应1.5小时。将反应直接加载到硅胶上，并用庚烷/乙酸乙酯洗脱，以提供标题化合物。
2.11.5(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.11.4(4.29g)在乙酸:水:四氢呋喃(100mL)的3:1:1溶液中搅拌过夜。将反应倒入饱和碳酸氢钠水溶液中并用乙酸乙酯萃取。将有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用庚烷/乙酸乙酯洗脱)纯化粗标题化合物，以提供标题化合物。
2.11.6(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向实例2.11.5(0.595g)和双(4-硝基苯基)碳酸酯(0.492g)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.212mL)。1.5小时后，将反应在高真空下浓缩。将反应直接加载到硅胶上，并用庚烷/乙酸乙酯洗脱，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e922.9(M+Na)+。
2.11.7 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
将实例1.12.10(150mg)溶解在二甲基甲酰胺(0.5mL)中。添加实例2.11.6(190mg)和N，N-二异丙基乙胺(0.30mL)。将反应在室温下搅拌过夜。然后添加更多实例2.11.6(70mg)和更多N，N-二异丙基乙胺(0.10mL)并将反应再搅拌24小时。然后浓缩反应，并将残余物溶于四氢呋喃(2mL)和甲醇(2mL)中，然后添加1.94N氢氧化锂一水合物(1.0mL)，并将混合物在室温下搅拌一小时。通过反相色谱(C18柱)(用在0.1％TFA/水中的10％-90％乙腈洗脱)纯化，提供标题化合物，为三氟乙酸盐。MS(ESI)m/e 1261.4(M-H)-。
2.11.8 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2-(2-(2-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)乙氧基)乙氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
将实例2.11.7(19mg)溶于二甲基甲酰胺(0.3mL)中，然后添加2,5-二氧代吡咯烷-1-基3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸酯(6mg)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(13μL)。将反应在室温下搅拌三小时，然后通过反相色谱(C18柱)(用在0.1％TFA/水中10％-90％乙腈洗脱)纯化，提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.70(vbr s,1H),8.00(m,2H),7.76(t,2H),7.50(d,1H),7.46(t,1H),7.34(t,1H),7.28(s,1H),7.19(d,1H),7.00(m,2H),6.97(s,2H),6.66(d,1H),6.60(dd,1H),5.06(br m,1H),5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.09(m,2H),3.88(m,6H),3.80(br m,3H),3.71(m,2H),3.59(t,2H),3.44,3.38(两者皆m,总共8H),3.28(m,4H),3.18(m,4H),2.82(br m,2H),2.33(t,2H),2.09(s,3H),1.33(br m,2H),1.28-0.90(m,10H),0.82(m,6H)。MS(ESI)m/e 1412.4(M-H)-。
2.12 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{[({(2E)-3-[4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-3-({3-[({[(2E)-3-(4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-3-[(3-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}丙酰基)氨基]苯基)丙-2-烯-1-基]氧基}羰基)氨基]丙酰基}氨基)苯基]丙-2-烯-1-基}氧基)羰基](2-甲氧基乙基)氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸(合成子KU)的合成
2.12.1 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-(((((E)-3-(3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
在实例2.9.1的合成过程中分离出作为副产物的标题化合物。MS(ESI)m/e 1708.5(M-H)-。
2.12.2 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3-(3-(((((E)-3-(4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3-(3-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
通过用实例2.12.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.99(s,1H),8.97(s,1H),8.17(br s,2H),8.00(br t,1H),7.94(d,1H),7.70(dd,2H),7.41(m,2H),7.27(t,1H),7.04(br d,2H),6.97(d,2H),6.93(m,2H),6.89(s,2H),6.52(d,1H),6.49(d,1H),6.11(m,2H),4.93(s,2H),4.80(m,2H),4.56(m,4H),3.83(m,7H),3.72(br d,2H),3.53(m,2H),3.45-3.28(m,28H),3.15(s,3H),2.74(m,2H),2.48(m,4H),2.26(t,2H),2.02(s,3H),1.28(br d,2H),1.17(m,4H),1.02(m,4H),0.89(m,2H),0.2(m,6H)。MS(ESI-)m/e 1859.5(M-H)-。
2.13 4-[({[2-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-(β-D-吡喃葡糖醛酸基氧基)苯氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子KV)的合成
2.13.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-((((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
在实例2.11.7的合成过程中分离出作为副产物的标题化合物。MS(ESI)m/e1690.5(M-H)-。
2.13.2 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2-(2-(2-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2-(2-(2-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)乙氧基)乙氧基)苄基)氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
通过用实例2.13.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.00(m,2H),7.76(t,2H),7.50(d,1H),7.46(m,1H),7.34(m,1H),7.28(s,1H),7.19(m,3H),6.99(m,2H),6.97(s,2H),6.66(m,2H),6.60(m,2H),5.07(m,2H)5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.93(s,2H),4.09(m,4H),3.90(m,7H),3.80(br d,4H),3.71(m,4H),3.59(t,2H),3.48,3.44,3.38(所有m,总共14H),3.28(m,7H),3.16(m,7H),2.81(brm,2H),2.33(t,2H),2.09(s,3H),1.35(br d,2H),1.28-0.90(m,10H),0.82(m,6H)。MS(ESI)m/e 1842.5(M-H)-。
2.14 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子KW)的合成
如下制备标题化合物：用2,5-二氧代吡咯烷-1-基2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸酯取代实施2.11.8中的2,5-二氧代吡咯烷-1-基3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸酯。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.73(v br s,1H),8.21(br t,1H),8.01(d,1H),7.76(t,2H),7.50(d,1H),7.46(t,1H),7.34(t,1H),7.28(s,1H),7.19(d,1H),7.07(s,2H),6.99(t,2H),6.66(d,1H),6.60(dd,1H),5.06(br m,1H),5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.09(m,2H),4.02(s,2H),3.88(m,6H),3.80(brm,3H),3.71(m,2H),3.48(t,2H),3.39(m,6H),3.28,3.21(两者皆m,8H),2.82(br m,2H),2.09(s,3H),1.33(br m,2H),1.28-0.90(m,10H),0.831(m,6H)。MS(ESI)m/e 1398.4(M-H)-。
2.15 6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-3-{1-[(3-{[34-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3-甲基-4,32-二氧代-7,10,13,16,19,22,25,28-八氧杂-3,31-二氮杂三十四-1-基]氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸(合成子DC)的合成
在0℃向实例1.1.14(30mg)和2,5-二氧代吡咯烷-1-基1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3-氧代-7,10,13,16,19,22,25,28-八氧杂-4--二氧吡咯烷--31-酸酯(MAL-dPEG8-NHS-酯)(40.8mg)在N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中加入N，N-二异丙基乙胺(48μL)。将混合物在0℃下搅拌20分钟并在室温下搅拌10分钟。添加乙酸(23μL)，并通过反相色谱(C18柱)(用在0.1％TFA/水中的20％-60％乙腈洗脱)纯化混合物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e1332.5(M+H)+。
2.16 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子KZ)的合成
2.16.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
通过用实例1.13.12取代实例2.11.7中的实例1.12.10制备标题化合物。MS(ESI)m/e 1200(M+H)+,1198(M-H)-。
2.16.2 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.16.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.06(bs,2H),8.04(d,1H),8.01(t,1H),7.92(d,1H),7.78(dd,2H),7.53(d,1H),7.48(t,1H),7.37(t,1H),7.29(s,1H),7.19(d,1H),7.06(t,1H),7.03(d,1H),6.98(s,1H),6.65(d,1H),6.59(dd,1H),5.07(d,1H),4.98(s,1H),4.92(1H),4.09(m,2H),3.96(t,2H),3.90(d,2H),3.80(s,2H),3.70(m,6H),3.60(m,6H),3.43(t,2H),3.39(t,2H),3.33(t,1H),3.28(dd,1H),3.16(m,4H),3.03(q,2H),2.33(t,2H),2.09(s,3H),1.37(s,2H),1.25(q,4H),1.11(q,4H),1.00(dd,2H),0.83(s,6H)。MS(ESI)m/e 1351(M+H)+,1349(M-H)-。
2.17 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子LW)的合成
通过用实例2.9.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.03(s,1H),8.25(brm,1H),8.05(br t,1H),8.01(d,1H),7.76(t,2H),7.49(d,1H),7.47(t,1H),7.33(t,1H),7.28(s,1H),7.10(d,1H),7.05(m,1H),7.00(m,2H),6.96(s,2H),6.56(d,1H),6.17(m,1H),5.00(s,2H),4.86(br m,1H),4.64(d,2H),3.88(m,6H),3.79(br m,2H),3.60(t,2H),3.43,3.35(m,m,总共14H),3.22(s,3H),2.80(m,2H),2.53(m,2H),2.33(t,2H),2.09(s,3H),1.37(br m,2H),1.28-0.90(m,10H),0.82,0.77(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e 1421.5(M-H)-。
2.18 N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰-N-{5-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-(β-D-吡喃葡糖醛酸基氧基)苯基}-β-丙氨酰胺(合成子LY)的合成
2.18.1 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
向(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-磺基丙酸(29mg)和2-(3H-[1,2,3]***并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓六氟磷酸盐(V)(28mg)在N，N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.013mL)。搅拌2分钟后，在室温下将反应加入到实例2.9.1(70mg)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.035mL)在N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液中，并搅拌混合物3小时。将二乙胺(0.035mL)加入到反应中并继续搅拌另外2小时。将反应用水(1mL)稀释，并使用吉尔森***通过制备型HPLC(用含有0.1％v/v三氟乙酸的10％-85％乙腈水溶液洗脱)纯化。合并所需的级分并冷冻干燥，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 1421.4(M-H)。
2.18.2 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3-(3-((R)-2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基)-3-磺基丙酰氨基)丙酰胺基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
通过用实例2.18.1取代实例2.10中的实例2.9.1来制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.12(s,1H),8.32(d,1H),8.22(br m,1H),8.01(d,1H),7.97(br t,1H),7.76(t,2H),7.49(d,1H),7.47(t,1H),7.33(t,1H),7.28(s,1H),7.10(d,1H),7.07(s,2H),7.05(m,1H),7.00(m,2H),6.56(d,1H),6.17(m,1H),5.00(s,2H),4.86(brm,1H),4.64(d,2H),4.32(m,1H),4.07(s,2H),3.88(m,6H),3.79(brm,2H),3.43,3.35(m,m,总共14H),3.22(s,3H),2.80(m,4H),2.53(m,2H),2.09(s,3H),1.37(br m,2H),1.28-0.90(m,10H),0.82,0.77(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e 1558.4(M-H)-。
2.19 N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰-N-{5-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-(β-D-吡喃葡糖醛酸基氧基)苯基}-β-丙氨酰胺(合成子LZ)的合成
通过用实例2.18.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.12(s,1H),8.22(brm,1H),8.07(br d,1H),8.01(d,1H),7.89(br t,1H),7.76(t,2H),7.49(d,1H),7.47(t,1H),7.33(t,1H),7.28(s,1H),7.10(d,1H),7.05(m,1H),7.00(m,2H),6.96(s,2H),6.56(d,1H),6.17(m,1H),5.00(s,2H),4.86(brm,1H),4.64(d,2H),4.32(m,1H),3.88(m,6H),3.79(br m,2H),3.60(t,2H),3.43,3.35(m,m,总共14H),3.22(s,3H),2.80(m,4H),2.53(m,2H),2.37(m,2H),2.09(s,3H),1.37(br m,2H),1.28-0.90(m,10H),0.82,0.77(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e 1572.5(M-H)-。
2.20 N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酰-N-{5-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-(β-D-吡喃葡糖醛酸基氧基)苯基}-β-丙氨酰胺(合成子MB)的合成
2.20.1 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-(3-氨基丙酰胺基)丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
如下制备标题化合物：用3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酸替代实例2.18.1中的(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-磺基丙酸。MS(ESI-)m/e1341.5(M-H)-。
2.20.2 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3-(3-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基)丙酰胺基)丙酰胺基)苯基)烯丙基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
通过用实例2.20.1取代实例2.10中的实例2.9.1来制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.06(s,1H),8.25(brm,1H),8.14(br t 1H),8.01(d,1H),7.99(br m,1H),7.76(t,2H),7.49(d,1H),7.47(t,1H),7.33(t,1H),7.28(s,1H),7.10(d,1H),7.07(s,2H),7.05(m,1H),7.00(m,2H),6.56(d,1H),6.17(m,1H),5.00(s,2H),4.86(brm,1H),4.64(d,2H),3.99(s,2H),3.88(m,6H),3.79(brm,2H),3.43,3.35(m,m,总共14H),3.25(m,2H),3.22(s,3H),2.80(m,2H),2.55(m,2H),2.23(t,2H),2.09(s,3H),1.37(br m,2H),1.28-0.90(m,10H),0.82,0.77(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e 1478.5(M-H)-。
2.21 N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-β-丙氨酰-N-{5-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)丙-1-烯-1-基]-2-(β-D-吡喃葡糖醛酸基氧基)苯基}-β-丙氨酰胺(合成子MC)的合成
通过用实例2.20.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.06(s,1H),8.25(brm,1H),8.01(d,1H),7.94(brm,2H),7.76(t,2H),7.49(d,1H),7.47(t,1H),7.33(t,1H),7.28(s,1H),7.10(d,1H),7.05(m,1H),7.00(m,2H),6.97(s,2H),6.56(d,1H),6.17(m,1H),5.00(s,2H),4.86(br m,1H),4.64(d,2H),3.88(m,6H),3.79(br m,2H),3.60(t,2H),3.43,3.35(m,m,总共14H),3.22(s,3H),3.18(m,2H),2.80(m,2H),2.55(m,2H),2.29(t,2H),2.20(t,2H),2.09(s,3H),1.37(br m,2H),1.28-0.90(m,10H),0.82,0.77(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e 1492.5(M-H)-。
2.22 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子ME)的合成
2.22.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
通过用实例2.11.7取代实例2.18.1中的实例2.9.1制备标题化合物。MS(ESI-)m/e1412.4(M-H)-。
2.22.2 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2-(2-(2-((R)-2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基)-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
通过用实例2.22.1取代实例2.10中的实例2.9.1来制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.32(d,1H),8.02(d,1H),7.76(m,3H),7.52(d,1H),7.46(t,1H),7.34(t,1H),7.30(s,1H),7.19(d,1H),7.06(s,2H),7.00(m,2H),6.66(d,1H),6.58(dd,1H),5.06(br m,1H),5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.31(m,1H),4.09(m,2H),4.08(s,2H),3.88(m,6H),3.80(br m,4H),3.71(m,2H),3.44,3.38(两者皆m,总共8H),3.28(m,4H),3.18(m,4H),2.82(br m,3H),2.72(m,1H),2.09(s,3H),1.33(br m,2H),1.28-0.90(m,10H),0.84,0.81(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e 1549.5(M-H)-。
2.23 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子MF)的合成
通过用实例2.22.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.70(v br s,1H),8.06(d,1H),8.02(d,1H),7.76(m,3H),7.52(d,1H),7.46(t,1H),7.34(t,1H),7.30(s,1H),7.19(d,1H),7.00(m,2H),6.95(s,2H),6.66(d,1H),6.58(dd,1H),5.06(brm,1H),5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.31(m,1H),4.09(m,2H),3.88(m,6H),3.80(br m,4H),3.71(m,2H),3.59(t,2H),3.44,3.38(两者皆m,总共8H),3.28(m,4H),3.18(m,4H),2.82(br m,3H),2.72(m,1H),2.33(m,2H),2.09(s,3H),1.33(brm,2H),1.28-0.90(m,10H),0.84,0.81(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e 1563.5(M-H)-。
2.24 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-β-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子MH)
2.24.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-(3-氨基丙酰胺基)乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
如下制备标题化合物：在实例2.18.1中，用3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酸代替(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-磺基丙酸并且用实例2.11.7取代实施2.9.1。MS(ESI-)m/e 1332.5(M-H)-。
2.24.2 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2-(2-(2-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基)丙酰胺基)乙氧基)乙氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
通过用实例2.24.1取代实例2.10中的实例2.9.1来制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.70(vbr s,1H),8.14(t,1H),8.02(d,1H),7.92(t,1H),7.76(t,2H),7.52(d,1H),7.46(t,1H),7.34(t,1H),7.28(s,1H),7.19(d,1H),7.06(s,2H),7.00(m,2H),6.66(d,1H),6.58(dd,1H),5.06(br m,1H),5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.09(m,2H),3.98(s,2H),3.88(m,6H),3.80(brm,4H),3.71(m,2H),3.44,3.38(两者皆m,总共8H),3.28(m,4H),3.18(m,6H),2.82(brm,2H),2.24(t,2H),2.09(s,3H),1.33(br m,2H),1.28-0.90(m,10H),0.84,0.81(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e 1469.5(M-H)-。
2.25 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-β-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子MI)的合成
通过用实例2.24.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.70(v br s,1H),8.02(d,1H),7.94(t,1H),7.88(t,1H),7.76(t,2H),7.52(d,1H),7.46(t,1H),7.34(t,1H),7.28(s,1H),7.19(d,1H),7.00(m,2H),6.95(s,2H),6.66(d,1H),6.58(dd,1H),5.06(br m,1H),5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.09(m,2H),3.88(m,6H),3.80(br m,4H),3.71(m,2H),3.59(t,2H),3.44,3.38(两者皆m,总共8H),3.28(m,4H),3.18(m,6H),2.82(brm,2H),2.30(t,2H),2.20(t,2H),2.09(s,3H),1.33(brm,2H),1.28-0.90(m,10H),0.84,0.81(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e 1483.5(M-H)-。
2.26 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子NJ)的合成
2.26.1 4-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)-2-羟基苯甲醛
将2,4-二羟基苯甲醛(1.0g)、1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(3.4g)和碳酸钾(1.0g)的溶液一起在乙腈(30mL)中搅拌并加热至75℃。搅拌2天后，将反应冷却，用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(使用5％-30％乙酸乙酯/庚烷的梯度洗脱)纯化，提供标题化合物。MS(ELSD)m/e 290.4(M+H)+。
2.26.2 4-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-2-羟基苯甲醛
向实例2.26.1(1.26g)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入叠氮化钠(0.43g)并在室温下搅拌反应过夜。将反应用二***(100mL)稀释，用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用5％-30％乙酸乙酯/庚烷的梯度洗脱)纯化，给出标题化合物。MS(ELSD)m/e 251.4(M+H)+。
2.26.3(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-2-甲酰基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.26.2(0.84g)、(3R,4S,5S,6S)-2-溴-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(1.99g)和氧化银(I)(1.16g)的溶液在乙腈(15mL)中一起搅拌。搅拌过夜后，将反应用二氯甲烷(20mL)稀释，添加硅藻土，并且过滤并浓缩反应。通过硅胶色谱(用5％-75％乙酸乙酯/庚烷的梯度洗脱)纯化，给出标题化合物。
2.26.4(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)-2-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.26.3(0.695g)在甲醇(5mL)和四氢呋喃(2mL)中的溶液冷却至0℃。添加硼氢化钠(0.023g)，并将反应升温至室温。搅拌总共1小时后，将反应倒入乙酸乙酯(75mL)和水(25mL)的混合物中，并添加饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)。将有机层分离，用盐水(50mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用5％-85％乙酸乙酯/庚烷的梯度洗脱)纯化，给出标题化合物。MS(ELSD)m/e 551.8(M-H2O)-。
2.26.5(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向在50mL压力瓶中的实例2.26.4(0.465g)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入5％Pd/C(0.1g)，并将混合物在30psi氢气下振荡16小时。然后将反应过滤并浓缩，以给出标题化合物，其无需进一步纯化即可使用。MS(ELSD)m/e 544.1(M+H)+。
2.26.6(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-2-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.26.5(0.443g)在二氯甲烷(8mL)中的溶液冷却至0℃，然后添加N,N-二异丙基乙胺(0.214mL)和(9H-芴-9-基)甲基碳氯甲酸酯(0.190g)。1小时后，浓缩反应并通过柱色谱(用5％-95％乙酸乙酯/庚烷洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ELSD)m/e 748.15(M-OH)-。
2.26.7(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙氧基)乙氧基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向实例2.26.6(0.444g)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.152mL)和双(4-硝基苯基)碳酸酯(0.353g)并在室温下搅拌反映。5小时后，浓缩反应并通过柱色谱(用5％-90％乙酸乙酯/庚烷洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。
2.26.8 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
将实例1.12.10(360mg)溶解在二甲基甲酰胺(2.5mL)中。添加实例2.26.7(450mg)和N，N-二异丙基乙胺(0.35mL)。将反应在室温下搅拌过夜。然后浓缩反应，并将残余物溶于四氢呋喃(2.5mL)和甲醇(2.5mL)中。添加氢氧化锂一水合物(1.94N，2.2mL)，并将该混合物在室温下搅拌1小时。通过反相色谱(C18柱)(用在0.1％TFA/水中的10％-90％乙腈洗脱)纯化，提供标题化合物，为三氟乙酸盐。MS(ESI)m/e 1261.4(M-H)-。
2.26.9 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
通过用实例2.26.8取代实例2.18.1中的实例2.9.1制备标题化合物。MS(ESI-)m/e1412.4(M-H)-。
2.26.10 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((((2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-4-(2-(2-((R)-2-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
通过用实例2.26.9取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.70(v br s,1H),8.06(d,1H),8.02(d,1H),7.76(t,3H),7.52(d,1H),7.46(t,1H),7.34(t,1H),7.30(s,1H),7.19(d,1H),7.00(m,2H),6.95(s,2H),6.70(d,1H),6.58(dd,1H),5.06(brm,1H),5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.31(m,1H),4.09(m,2H),3.88(m,6H),3.80(br m,4H),3.71(m,2H),3.59(t,2H),3.44,3.38(两者皆m,总共8H),3.28(m,4H),3.18(m,4H),2.82(br m,3H),2.72(m,1H),2.33(m,2H),2.09(s,3H),1.33(brm,2H),1.28-0.90(m,10H),0.84,0.81(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e 1563.5(M-H)-。
2.27 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子NK)的合成
通过用实例2.26.9取代实施2.9.2中的实例2.9.1制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.70(v br s,1H),8.06(d,1H),8.02(d,1H),7.76(t,3H),7.52(d,1H),7.46(t,1H),7.34(t,1H),7.30(s,1H),7.19(d,1H),7.00(m,2H),6.95(s,2H),6.70(d,1H),6.58(dd,1H),5.06(brm,1H),5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.31(m,1H),4.09(m,2H),3.88(m,6H),3.80(br m,4H),3.71(m,2H),3.59(t,2H),3.44,3.38(两者皆m,总共8H),3.28(m,4H),3.18(m,4H),2.82(br m,3H),2.72(m,1H),2.33(m,2H),2.09(s,3H),1.46(brm,4H)1.33(br m,2H),1.28-0.90(m,12H),0.84,0.81(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e1605.4(M-H)-。
2.28 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[3-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)丙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子NL)的合成
2.28.1(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙氧基)-4-甲酰基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
在0℃，向(9H-芴-9-基)甲基(3-羟丙基)氨基甲酸酯(0.245g)和三苯基膦(0.216g)在四氢呋喃(2mL)中的溶液中滴加二异丙基偶氮二甲酸酯(0.160mL)。搅拌15分钟后，添加实例2.11.1(0.250g)，除去冰浴，并使反应温热至室温。2小时后，将反应浓缩，加载到硅胶上，并且用5％-70％乙酸乙酯/己烷的梯度洗脱，以给出标题化合物。MS(APCI)m/e512.0(M-FMOC)-。
2.28.2(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙氧基)-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向实例2.28.1(0.233g)在甲醇(3mL)和四氢呋喃(1mL)中的悬浮液中加入硼氢化钠(6mg)。30分钟后，将反应倒入乙酸乙酯(50mL)和水(25mL)中，然后添加碳酸氢钠(5mL)。将有机层分离，用盐水(25mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。硅胶色谱(用5％-80％乙酸乙酯/庚烷的梯度洗脱)纯化，给出标题化合物。MS(APCI)m/e 718.1(M-OH)-。
2.28.3(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙氧基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向实例2.28.2(0.140g)和双(4-硝基苯基)碳酸酯(0.116g)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.050mL)。1.5小时后，将反应在高真空下浓缩，加载到硅胶上，并且用10％-70％乙酸乙酯/庚烷的梯度洗脱，以给出标题化合物。
2.28.4 3-(1-((3-(2-((((2-(3-氨基丙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
通过用实例2.28.3取代实施2.26.8中的实例2.26.7制备标题化合物。MS(ESI-)m/e 1231.3(M-H)-。
2.28.5 3-(1-((3-(2-((((2-(3-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)丙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
通过用实例2.28.4取代实例2.18.1中的实例2.9.1制备标题化合物。MS(ESI-)m/e1382.4(M-H)-。
2.28.6 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2-(3-((R)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-磺基丙酰氨基)丙氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
通过用实例2.28.5取代实施2.9.2中的实例2.9.1制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.01(d,1H),7.85(m,2H),7.76(m,2H),7.52(d,1H),7.46(t,1H),7.34(m,1H),7.30(s,1H),7.16(d,1H),7.00(m,3H),6.97(s,2H),6.64(d,1H),6.56(dd,1H),5.04(br m,1H),5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.28(m,1H),3.97(m,2H),3.88(m,6H),3.80(m,2H),3.71(m,2H),3.37(m,8H),3.27(m,4H),3.17(m,4H),2.90-2.65(m,4H),2.09(s,3H),2.05(t,2H),1.81(m,2H),1.46(br m,4H),1.33(br m,2H),1.28-0.90(m,12H),0.84,0.81(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e 1575.5(M-H)-。
2.29 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[3-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)丙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子NM)的合成
2.29.1 3-(1-((3-(2-((((2-(3-氨基丙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
如下制备标题化合物：在实例2.26.8中，用实施例2.28.3取代实施2.26.7，并用实例1.9.11取代实施1.12.10。MS(ESI-)m/e 1187.4(M-H)-。
2.29.2 3-(1-((3-(2-((((2-(3-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)丙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
通过用实例2.29.1取代实例2.18.1中的实例2.9.1制备标题化合物。MS(ESI-)m/e1338.3(M-H)-。
2.29.3 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((((4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2-(3-((R)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-磺基丙酰氨基)丙氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
通过用实例2.29.2取代实施2.9.2中的实例2.9.1制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.01(d,1H),7.85(m,2H),7.76(m,2H),7.52(d,1H),7.46(t,1H),7.34(m,1H),7.30(s,1H),7.16(d,1H),7.00(m,3H),6.97(s,2H),6.64(d,1H),6.56(dd,1H),5.04(br m,1H),5.00(s,2H),4.96(s,2H),4.28(m,1H),3.97(m,2H),3.88(m,6H),3.80(m,2H),3.44(m,6H),3.28(m,4H),3.17(m,2H),2.90-2.65(m,4H),2.09(s,3H),2.05(t,2H),1.81(m,2H),1.46(br m,4H),1.33(br m,2H),1.28-0.90(m,12H),0.84,0.81(两者皆s,总共6H)。MS(ESI-)m/e1531.5(M-H)-。
2.30 N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[(3S)-1-{8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-2-[6-羧基-5-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基]-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基}吡咯烷-3-基]氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-L-丙氨酰胺(合成子NR)的合成
将实例1.17.10(40mg)溶于二甲基亚砜(0.3mL)中并且添加4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯(31mg)和三乙胺(33μL)。将反应混合物在室温下搅拌72小时，并通过反相色谱(C18柱)(用在0.1％TFA水中10％-90％乙腈洗脱)纯化，提供标题化合物。MS(ESI)m/e1357.4(M+H)+,1355.5(M-H)-。
2.31 N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-氨磺酰基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺(合成子EB)的合成
如先前实例中所述制备标题化合物。1H NMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.85(s,1H),9.98(s,1H),8.00-8.09(m,2H),7.78(t,2H),7.61(t,3H),7.40-7.53(m,3H),7.33-7.39(m,2H),7.25-7.30(m,3H),6.86-7.00(m,5H),5.99(s,1H),4.86-5.10(m,4H),4.38(s,1H),4.10-4.26(m,1H),3.88(t,2H),3.80(d,2H),3.33-3.39(m,2H),3.30(d,2H),3.18-3.26(m,2H),2.88-3.06(m,5H),2.04-2.24(m,5H),1.87-2.00(m,1H),1.28-1.74(m,10H),0.89-1.27(m,12H),0.74-0.87(m,12H)。MS(ESI)m/e 1451.3(M+H)+。
2.32对照合成子4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子H)的合成
2.32.1(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-甲酰基-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向(2R,3R,4S,5S,6S)-2-溴-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(4g)在乙腈(100mL)中的溶液中加入氧化银(I)(10.04g)和4-羟基-3-硝基苯甲醛(1.683g)。将反应混合物在室温下搅拌4小时并过滤。浓缩滤液，并通过硅胶色谱(用在庚烷中的5％-50％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e(M+18)+。
2.32.2(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(羟甲基)-2-硝基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向实例2.32.1(6g)在氯仿(75mL)和异丙醇(18.75mL)中的溶液中加入0.87g硅胶。将所得混合物冷却至0℃，添加NaBH4(0.470g)，并将所得悬浮液在0℃下搅拌45分钟。将反应混合物用二氯甲烷(100mL)稀释，并通过硅藻土过滤。将滤液用水和盐水洗涤并浓缩，得到粗产物，将其不经进一步纯化地使用。MS(ESI)m/e(M+NH4)+:
2.32.3(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-氨基-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.32.2(7g)在乙酸乙酯(81mL)中的搅拌溶液在20℃在1大气压H2下使用10％Pd/C(1.535g)作为催化剂氢化12小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，并减压蒸发溶剂。通过硅胶色谱(用95/5二氯甲烷/甲醇洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。
2.32.4 3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酸
将3-氨基丙酸(4.99g)溶于500mL烧瓶中的10％Na2CO3水溶液(120mL)中并用冰浴冷却。向所得溶液中逐渐加入(9H-芴-9-基)甲基氯甲酸酯(14.5g)的1,4-二噁烷(100mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后添加水(800mL)。将水相层与反应混合物分离并用二***(3×750mL)洗涤。将水层用2NHCl水溶液酸化至pH值为2，并用乙酸乙酯(3×750mL)萃取。合并有机层并浓缩，得到粗产物。将粗产物在乙酸乙酯的以下混合溶剂中重结晶：己烷1:2(300mL)，以给出标题化合物。
2.32.5(9H-芴-9-基)甲基(3-氯-3-氧丙基)氨基甲酸酯
向实例2.32.4在二氯甲烷(160mL)中的溶液中加入二氯化亚硫(50mL)。将混合物在60℃下搅拌1小时。冷却混合物并浓缩，以给出标题化合物。
2.32.6(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向实例2.32.3(6g)在二氯甲烷(480mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(4.60mL)。添加实例2.32.5(5.34g)，并将混合物在室温下搅拌30分钟。将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中并用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取物用水和盐水洗涤，并经硫酸钠干燥。过滤并浓缩，得到残余物，经径向色谱(用在石油醚中的0-100％乙酸乙酯作为流动相)纯化，以给出标题化合物。
2.32.7(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向实例2.32.6(5.1g)在N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中的混合物中加入双(4-硝基苯基)碳酸酯(4.14g)和N,N-二异丙基乙胺(1.784mL)。将混合物在室温下搅拌16小时并减压浓缩。将粗材料溶解在二氯甲烷中，并直接抽吸1mm径向Chromatotron板上，并用在己烷中的50％-100％乙酸乙酯洗脱，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e(M+H)+。
2.32.8 3-溴-5,7-二甲基金刚烷甲酸
在0℃下在50mL圆底烧瓶中加入溴(16mL)。添加铁粉(7g)，并且然后将反应在0℃下搅拌30分钟。然后加入3,5-二甲基金刚烷-1-甲酸(12g)。将混合物加温至室温并搅拌3天。将冰和浓HCl的混合物倒入反应混合物中。将所得悬浮液用Na2SO3(50g，在200mL水中)处理两次以破坏溴，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机物用1NHCl水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以给出粗标题化合物。
2.32.9 3-溴-5,7-二甲基金刚烷甲醇
向实例2.32.8(15.4g)在四氢呋喃(200mL)中的溶液中加入BH3(在四氢呋喃中1M，150mL)。将混合物在室温下搅拌过夜。然后通过滴加甲醇小心地淬灭反应混合物。然后将混合物真空浓缩，并将残余物在乙酸乙酯(500mL)和2N HCl水溶液(100mL)之间平衡。将水层用乙酸乙酯进一步萃取两次，并将合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。蒸发溶剂，得到标题化合物。
2.32.10 1-((3-溴-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基)-1H-吡唑
向实例2.32.9(8.0g)在甲苯(60mL)中的溶液中加入1H-吡唑(1.55g)和氰基亚甲基三丁基磷烷(2.0g)。将混合物在90℃下搅拌过夜。浓缩反应混合物，并且然后通过硅胶柱色谱(10:1庚烷:乙酸乙酯)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 324.2(M+H)+。
2.32.11 2-{[3,5-二甲基-7-(1H-吡唑-1-基甲基)三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]氧基}乙醇
向实例2.32.10(4.0g)在乙烷-1,2-二醇(12mL)中的溶液中加入三乙胺(3mL)。将混合物在150℃下在微波条件下(Biotage Initiator)搅拌45分钟。将混合物倒入水(100mL)中并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并过滤。蒸发溶剂给出粗产物，将其通过硅胶色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯然后用在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 305.2(M+H)+。
2.32.12 2-({3,5-二甲基-7-[(5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙醇
向实例2.32.11(6.05g)在四氢呋喃(100mL)中的冷却的(-78℃)溶液中加入n-BuLi(40mL，在己烷中2.5M)。将混合物在-78℃下搅拌1.5小时。通过注射器添加碘甲烷(10mL)，并将混合物在-78℃下搅拌3小时。然后将反应混合物用NH4Cl水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机萃取物用水和盐水洗涤。经Na2SO4干燥后，过滤并浓缩溶液，并且将残余物通过硅胶柱色谱(用在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 319.5(M+H)+。
2.32.13 1-({3,5-二甲基-7-[2-(羟基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-4-碘-5-甲基-1H-吡唑
向实例2.32.12(3.5g)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(3.2g)。将混合物在室温搅拌1.5小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯(600mL)稀释，并用NaHSO3水溶液、水和盐水洗涤。经Na2SO4干燥后，过滤并浓缩溶液，并将残余物通过硅胶色谱(在二氯甲烷中的20％乙酸乙酯)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 445.3(M+H)+。
2.32.14 2-({3-[(4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基甲磺酸酯
向实例2.32.13(6.16g)在二氯甲烷(100mL)中的冷却溶液中加入三乙胺(4.21g)，随后加入甲磺酰氯(1.6g)。将混合物在室温搅拌1.5小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯(600mL)稀释，并用水和盐水洗涤。经Na2SO4干燥后，过滤并浓缩溶液，并且残余物不经进一步纯化用于下一步反应。MS(ESI)m/e 523.4(M+H)+。
2.32.15 1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-4-碘-5-甲基-1H-吡唑
将实例2.32.14(2.5g)在2M甲胺(在甲醇(15mL)中)中的溶液在微波条件(BiotageInitiator)下在100℃下搅拌20分钟。将反应混合物真空浓缩。然后将残余物用乙酸乙酯(400mL)稀释，并用NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。经Na2SO4干燥后，过滤并浓缩溶液，并且残余物不经进一步纯化用于下一步反应。MS(ESI)m/e 458.4(M+H)+。
2.32.16叔丁基[2-({3-[(4-碘-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]甲氨基甲酸酯
向实例2.32.15(2.2g)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(1.26g)和催化量的4-二甲基氨基吡啶。将混合物在室温下搅拌1.5小时，并用乙酸乙酯(300mL)稀释。将溶液用饱和NaHCO3水溶液、水(60mL)和盐水(60mL)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用在二氯甲烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 558.5(M+H)+。
2.32.17 6-氟-3-溴吡啶甲酸
将6-氨基-3-溴吡啶甲酸(25g)在400mL 1:1二氯甲烷/氯仿中的浆液在5℃下经1小时加入到二氯甲烷(100mL)中的亚硝鎓四氟硼酸盐(18.2g)中，并且将所得混合物再搅拌30分钟，然后温热至35℃，并且搅拌过夜。将反应冷却至室温，并且然后用NaH2PO4水溶液调节至pH4。将所得溶液用二氯甲烷萃取三次，并将合并的萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。
2.32.18叔-丁基3-溴-6-氟吡啶甲酸酯
在0℃下，将对甲苯磺酰氯(27.6g)加入到实例2.32.17(14.5g)和吡啶(26.7mL)在二氯甲烷(100mL)和叔丁醇(80mL)中的溶液中。将反应搅拌15分钟，升温至室温，并且搅拌过夜。将溶液浓缩并在乙酸乙酯和Na2CO3水溶液之间分配。分离各层，并且将水层用乙酸乙酯萃取。将有机层合并，用Na2CO3水溶液和盐水冲洗，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。
2.32.19甲基2-(5-溴-6-(叔-丁氧基羰基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向甲基1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯盐酸盐(12.37g)和实例2.32.18(15g)在二甲基亚砜(100mL)中的溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(12mL)。将混合物在50℃下搅拌24小时。然后将混合物用乙酸乙酯(500mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到残余物，将其通过硅胶色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 448.4(M+H)+。
2.32.20甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例2.32.19(2.25g)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(205mg)在乙腈(30mL)中的溶液中加入三乙胺(3mL)和频哪醇硼烷(2mL)。将混合物在回流下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，并用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤，蒸发溶剂，并进行硅胶色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)，给出标题化合物。MS(ESI)m/e495.4(M+H)+。
2.32.21甲基2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸酯
向实例2.32.20(4.94g)在四氢呋喃(60mL)和水(20mL)中的溶液中加入实例2.32.16(5.57g)、1,3,5,7-四甲基-8-十四烷基-2,4,6-三氧杂-8-磷金刚烷(412mg)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(457mg)、和K3PO4(11g)。将混合物在回流下搅拌24小时。将反应混合物冷却，用乙酸乙酯(500mL)稀释，用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到残余物，将其通过硅胶色谱(用在庚烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 799.1(M+H)+。
2.32.22 2-(6-(叔-丁氧基羰基)-5-(1-((3-(2-((叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-甲酸
向实例2.32.21(10g)在四氢呋喃(60mL)、甲醇(30mL)和水(30mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(1.2g)。将混合物在室温搅拌24小时。将反应混合物用2％HCl水溶液中和，并在真空下浓缩。将残余物用乙酸乙酯(800mL)稀释，并且用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到标题化合物。MS(ESI)m/e785.1(M+H)+。
2.32.23叔丁基6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3-{2-[(叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸酯
向实例2.32.22(10g)在N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中加入苯并[d]噻唑-2-胺(3.24g)、氟-N,N,N',N'-四甲基甲脒鎓六氟磷酸盐(5.69g)和N，N-二异丙基乙胺(5.57g)。将混合物在60℃下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(800mL)稀释，并用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂，得到残余物，将其通过硅胶色谱(用在二氯甲烷中的20％乙酸乙酯洗脱)纯化，以给出标题化合物。MS(ESI)m/e 915.5(M+H)+。
2.32.24 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3,5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸
向实例2.32.23(5g)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三氟乙酸(10mL)。将混合物搅拌过夜。真空蒸发溶剂，并且将残余物溶于二甲基亚砜/甲醇(1:1，10mL)中，并使用Analogix***和C18柱(300g)通过反相进行色谱分离，用10％-85％乙腈和0.1％三氟乙酸水溶液洗脱，以给出标题化合物，为TFA盐。1H NMR(300MHz,二甲基亚砜d6)δppm 12.85(s,1H),8.13-8.30(m,2H),8.03(d,1H),7.79(d,1H),7.62(d,1H),7.32-7.54(m,3H),7.28(d,1H),6.96(d,1H),4.96(dd,1H),3.80-3.92(m,4H),3.48-3.59(m,1H),2.91-3.11(m,2H),2.51-2.59(m,4H),2.03-2.16(m,2H),1.21-1.49(m,6H),0.97-1.20(m,4H),0.87(s,6H)。MS(ESI)m/e 760.4(M+H)+。
2.32.25 3-(1-((3-(2-((((3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
在0℃下，向实例2.32.24(325mg)和实例2.32.7(382mg)在N，N-二甲基甲酰胺(9mL)中的溶液中加入N，N-二异丙胺(49.1mg)。将反应混合物在0℃下搅拌5小时，并添加乙酸(22.8mg)。将得到的混合物用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物溶于四氢呋喃(10mL)和甲醇(5mL)的混合物中。在0℃下向该溶液中加入1M氢氧化锂水溶液(3.8mL)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时，用乙酸酸化并浓缩。将浓缩物冻干，以提供粉末。将粉末溶解在N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，在冰浴中冷却，并添加0℃的哌啶(1mL)。将混合物在0℃下搅拌15分钟并添加1.5mL乙酸。使用吉尔森***通过反相HPLC(用含有0.1％v/v三氟乙酸的30％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化溶液，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 1172.2(M+H)+。
2.32.26 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
在0℃下，向在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的实例2.32.25(200mg)中加入2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(105mg)和N，N-二异丙基乙胺(0.12mL)。将混合物在0℃下搅拌15分钟，温热至室温并在吉尔森***上使用100g C18柱通过反相HPLC(用含有0.1％v/v三氟乙酸的30％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。1H NMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.85(s,2H)9.07(s,1H)8.18(s,1H)8.03(d,1H)7.87(t,1H)7.79(d,1H)7.61(d,1H)7.41-7.53(m,3H)7.36(q,2H)7.28(s,1H)7.03-7.09(m,1H)6.96-7.03(m,3H)6.94(d,1H)4.95(s,4H)4.82(t,1H)3.88(t,3H)3.80(d,2H)3.01(t,2H)2.86(d,3H)2.54(t,2H)2.08(s,3H)2.03(t,2H)1.40-1.53(m,4H)1.34(d,2H)0.90-1.28(m,12H)0.82(d,6H)。MS(ESI)m/e 1365.3(M+H)+。
2.33对照合成子4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-2-({N-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-17-氧代-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂十九烷-1-oyl]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子I)的合成
如下制备标题化合物：使用实例2.32.26中的程序，用2,5-二氧代吡咯烷-1-基1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-3-氧代-7,10,13,16-四氧杂-4-氮杂十九烷-19-酸酯代替2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯。1HNMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.95(s,1H)8.16(s,1H)7.99(d,1H)7.57-7.81(m,4H)7.38-7.50(m,3H)7.34(q,2H)7.27(s,1H)7.10(d,1H)7.00(d,1H)6.88-6.95(m,2H)4.97(d,4H)4.76(d,2H)3.89(t,2H)3.84(d,2H)3.80(s,2H)3.57-3.63(m,4H)3.44-3.50(m,4H)3.32-3.43(m,6H)3.29(t,2H)3.16(q,2H)3.02(t,2H)2.87(s,3H)2.52-2.60(m,2H)2.29-2.39(m,3H)2.09(s,3H)1.37(s,2H)1.20-1.29(m,4H)1.06-1.18(m,4H)0.92-1.05(m,2H)0.83(s,6H)。MS(ESI)m/e 1568.6(M-H)-。
2.34 4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子OG)的合成
2.34.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-4-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)吡啶甲酸
向实例2.11.6(279mg)和实1.14.9(240mg)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的冷(0℃)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.157mL)。将反应缓慢温热至室温并搅拌过夜。向反应中加入水(2mL)和LiOH H2O(50mg)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用三氟乙酸酸化，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 1233.0(M-H)-。
2.34.2 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)吡啶甲酸
向(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-磺基丙酸(45.7mg)在N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中加入O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(45mg)和N，N-二异丙基乙胺(0.02mL)。在室温搅拌混合物10分钟，并且添加实例2.34.1(96mg)和N，N-二异丙基乙胺(0.1mL)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌3小时。向反应混合物中加入二乙胺(0.1mL)，并且将反应在室温下搅拌过夜。将混合物用N，N-二甲基甲酰胺(2mL)稀释，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 1382.2(M-H)-。
2.34.3 4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如实例2.5.3所述用实例2.34.2取代实例2.5.2制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.38(s,1H),7.99(d,1H),7.90-7.70(m,6H),7.44(s,1H),7.35(t,1H),7.28(d,1H),7.24-7.14(m,2H),6.96(s,1H),6.66(s,1H),5.04(s,1H),4.95(s,2H),4.28(q,1H),4.07(d,2H),3.89(dd,3H),3.22(ddd,6H),2.87-2.61(m,4H),2.20(s,3H),2.04(t,2H),1.93(p,2H),1.54-0.90(m,20H),0.83(d,7H)。MS(ESI)m/e 1575.2(M-H)-。
2.35 2-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子OH)的合成
2.35.1 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(5-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基)吡啶甲酸
向实例2.26.7(76mg)和6-(5-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基)-3-(1-((3,5-二甲基-7-(2-(甲氨基)乙氧基)金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸(62mg)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的冷(0℃)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.043mL)。将反应缓慢温热至室温并搅拌过夜。向反应中加入水(2mL)和LiOH H2O(50mg)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用三氟乙酸酸化，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 1183.3(M-H)-。
2.35.2 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(5-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基)吡啶甲酸
向(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-磺基丙酸(22.3mg)在N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中加入O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(22mg)和N，N-二异丙基乙胺(0.02mL)。在室温搅拌混合物10分钟，并且添加实例2.35.1(45mg)和N，N-二异丙基乙胺(0.1mL)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液。将反应在室温下搅拌3小时。向反应混合物中加入二乙胺(0.1mL)，并且将反应在室温下搅拌过夜。将混合物用N，N-二甲基甲酰胺(2mL)稀释，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e1334.5(M-H)-。
2.35.3 2-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如实例2.34.1所述用实例2.35.2取代实施2.5.2制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.72(d,1H),9.43(s,1H),8.32(dd,2H),8.17(d,1H),8.06(d,1H),8.02-7.92(m,2H),7.86(d,1H),7.82-7.71(m,2H),7.52-7.43(m,2H),7.36(t,1H),7.17(d,1H),6.96(s,2H),6.69(d,1H),6.58(dd,1H),5.03(dd,3H),4.28(q,1H),4.02(d,3H),3.93(d,1H),3.47-3.21(m,8H),3.16(p,1H),2.85(d,3H),2.80-2.63(m,2H),2.22(s,3H),2.04(t,2H),1.53-1.30(m,6H),1.32-0.90(m,12H),0.83(d,6H)。MS(ESI)m/e 1527.4(M-H)-。
2.36 2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子ON)
2.36.1 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)吡啶甲酸，三氟乙酸
在0℃向实例1.1.14(157mg)和实例2.26.7(167mg)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(188μL)。将混合物温热至室温，搅拌过夜并浓缩。将残余物溶于甲醇(2mL)和四氢呋喃(3mL)中。将溶液在冰水浴中冷却，并且添加1M氢氧化锂水溶液(1.14mL)。将混合物在室温下在0℃下搅拌2小时并浓缩。将残余物溶于二甲基亚砜中，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。
2.36.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
向实例2.36.1(18mg)和2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(6.39mg)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(24μL)。将所得混合物搅拌1小时，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-75％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.36(s,1H),7.97(d,1H),7.85-7.70(m,4H),7.43(s,1H),7.38-7.30(m,1H),7.26(d,1H),7.23-7.10(m,2H),6.95(s,2H),6.65(d,1H),6.56(dd,1H),5.08-4.94(m,3H),4.02(dd,2H),3.92(dd,3H),3.84(s,2H),3.67(t,2H),3.31-3.20(m,2H),3.16(q,2H),2.91-2.74(m,6H),2.18(s,3H),1.99(t,2H),1.91(p,2H),1.51-1.29(m,5H),1.29-0.88(m,9H),0.81(d,6H)。MS(ESI)m/e1380.2(M-H)-。
2.37 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子OT)的合成
2.37.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基)吡啶甲酸
如下制备标题化合物：在实例2.26.8中，用实施例1.6.3取代实例1.12.10，并用实例2.11.6取代实例2.26.7。MS(ESI)m/e 1182.3(M-H)-。
2.37.2 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基)吡啶甲酸
通过用实例2.37.1取代实例2.18.1中的实例2.9.1制备标题化合物。MS(ESI)m/e1333.3(M-H)-。
2.37.3 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.37.2取代实施2.9.2中的实例2.9.1制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.02(s,1H),8.37(d,1H),8.23(d,1H),8.20(d,1H),8.18(d,1H),,8.06(d,1H),8.01(d,1H),7.94(d,1H),7.87(br d,1H),7.81(d,1H),7.77(br t,1H),7.70(dd,1H),7.48(dd,1H),7.48(s,1H),7.37(dd,1H),7.19(d,1H),6.97(s,2H),6.68(d,1H),6.59(dd,1H),5.06(br m,1H),4.97(s,2H),4.31(m,1H),4.09(m,2H),3.90(m,5H),3.71(m,2H),3.45(m,5H),3.36(m,3H),3.28(m,4H),3.19(m,2H),2.82(br d,2H),2.76(dd,2H),2.23(s,3H),2.06(t,2H),1.52-1.32(m,6H),1.32-0.92(m,10H),0.85(br s,6H)。MS(ESI)m/e1526.4(M-H)-。
2.38 2-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子OP)的合成
2.38.1 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(4-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基)吡啶甲酸
如实例2.36.1所述用实例1.11.4取代实施1.1.14制备标题化合物。
2.38.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如实例2.36.2所述用实例2.38.1取代实例2.36.1制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.12(d,1H),8.93(s,1H),8.60(dd,1H),8.27(d,1H),8.21(d,1H),8.07(d,1H),7.97-7.90(m,2H),7.81(d,2H),7.47(d,2H),7.37(t,1H),7.17(d,1H),6.96(s,2H),6.67(d,1H),6.58(dd,1H),5.11-4.96(m,3H),4.04(dd,2H),3.92(d,1H),3.86(s,2H),3.40(q,5H),3.34(t,2H),3.31-3.22(m,4H),3.17(q,2H),2.85(d,3H),2.20(s,3H),2.00(t,2H),1.51-1.31(m,6H),1.30-0.88(m,13H),0.82(d,6H)。MS(ESI)m/e1400.3(M+Na)+。
2.39 4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子OU)的合成
2.39.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)吡啶甲酸
如下制备标题化合物：在实例2.26.8中，用实施例1.1.14取代实例1.12.10，并用实例2.11.6取代实例2.26.7。MS(ESI-)m/e 1187.2(M-H)-。
2.39.2 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)吡啶甲酸
通过用实例2.39.1取代实例2.18.1中的实例2.9.1制备标题化合物。MS(ESI-)m/e1338.2(M-H)-。
2.39.3 4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.39.2取代实施2.9.2中的实例2.9.1制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.39(br s 1H),8.00(d,1H),7.86(d,2H),7.81(d,1H),7.77(d,2H),7.48(v br s,1H),7.46(s,1H),7.37(t,1H),7.29(d,1H),7.23(d,1H),7.19(d,1H),6.92(s,2H),6.68(d,1H),6.59(dd,1H),5.06(br m,1H),4.97(s,2H),4.31(m,1H),4.09(m,2H),3.96(br t,2H),3.88(br m,2H),3.71(m,2H),3.45(m,5H),3.37(m,3H),3.28(m,4H),3.18(m,2H),2.86(br m,5H),2.75(dd,2H),2.22(s,3H),2.06(t,2H),1.95(m,2H),1.52-1.32(m,6H),1.32-0.92(m,12H),0.85(br s,6H)。MS(ESI-)m/e 1531.2(M-H)-。
2.40 4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-(3-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}丙氧基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子OO)的合成
2.40.1 3-(1-((3-(2-((((2-(3-氨基丙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)吡啶甲酸
如实例2.36.1所述用实例2.28.3取代实施2.26.7制备标题化合物。MS(ESI)m/e1159.2(M+H)+。
2.40.2 4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-(3-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}丙氧基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如实例2.36.2所述用实例2.40.1取代实例2.36.1制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.38(s,1H),7.98(d,1H),7.87-7.72(m,2H),7.44(s,1H),7.35(t,1H),7.28(d,1H),7.19(dd,2H),6.96(s,2H),6.62(d,1H),6.57(dd,1H),5.03(s,1H),4.95(s,2H),4.03-3.81(m,8H),3.42-3.20(m,7H),3.16(q,2H),2.90-2.75(m,5H),2.20(s,3H),2.01(t,2H),1.97-1.87(m,2H),1.80(t,2H),1.45(td,4H),1.13(d,8H),0.83(d,6H)。MS(ESI)m/e 1350.2(M-H)-。
2.41 4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[3-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)丙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子OQ)的合成
2.41.1 3-(1-((3-(2-((((2-(3-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)丙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)吡啶甲酸
在0℃向(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-磺基丙酸(35.4mg)和O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(29.8mg)在N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(30μL)。将所得混合物搅拌15分钟，并加入到实例2.40.1(70mg)和N，N-二异丙基乙胺(80μL)在N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中。将所得混合物搅拌1小时。添加二乙胺(62.2μL)，并将混合物搅拌1小时。将反应在冰浴中冷却，并添加三氟乙酸(93μL)。将混合物用二甲基亚砜(5.5mL)稀释，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-75％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。
2.41.2 4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[3-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)丙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如实例2.36.2所述用实例2.41.1取代实例2.36.1制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.37(s,1H),7.98(d,1H),7.87-7.72(m,5H),7.44(s,1H),7.35(t,1H),7.27(d,1H),7.20(t,1H),7.16(d,1H),6.96(s,2H),6.63(d,1H),6.55(dd,1H),5.02(s,1H),4.95(s,2H),4.26(q,1H),4.04-3.79(m,8H),3.32-3.08(m,4H),2.89-2.66(m,7H),2.35(q,0H),2.20(s,3H),2.03(t,2H),1.93(p,2H),1.80(t,2H),1.52-1.30(m,6H),1.30-0.89(m,13H),0.83(d,6H)。MS(ESI)m/e1502.2(M-H)-。
2.42 2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子OR)的合成
2.42.1 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基)吡啶甲酸
如实例2.41.1所述用实例2.36.1取代实施2.40.1制备标题化合物。MS(ESI)m/e1338.2(M-H)-。
2.42.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-7-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如实例2.36.2所述用实例2.42.1取代实例2.36.1制备标题化合物。1H NMR(500MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.39(s,1H),8.00(d,1H),7.86(t,2H),7.83-7.73(m,3H),7.45(s,1H),7.40-7.32(m,1H),7.29(d,1H),7.26-7.13(m,2H),6.97(s,2H),6.70(d,1H),6.59(dd,1H),5.11-4.94(m,3H),4.29(dt,1H),4.04(dd,2H),3.99-3.91(m,3H),3.87(d,2H),3.69(t,2H),3.40-3.07(m,7H),2.91-2.74(m,6H),2.69(dd,1H),2.21(s,3H),2.05(t,2H),1.94(p,2H),1.53-1.32(m,5H),1.31-0.90(m,7H),0.84(d,6H)。MS(ESI)m/e 1531.2(M-H)-。
2.43 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子OS)的合成
2.43.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基)吡啶甲酸
如实例2.34.1所述用实例1.15.1取代实施2.5.2制备标题化合物。MS(ESI)m/e1228.1(M-H)-。
2.43.2 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基)吡啶甲酸
如实例2.34.2所述用实例2.43.2取代实例2.34.1制备标题化合物。MS(ESI)m/e1379.1.1(M+H)+。
2.43.3 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如实例2.34所述用实例2.43.2取代实施2.34.2制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.00(s,1H),8.36(d,1H),8.27-8.12(m,3H),8.05(d,1H),8.00(d,1H),7.92(d,1H),7.85(d,1H),7.79(d,1H),7.75(t,1H),7.69(t,1H),7.52-7.43(m,2H),7.35(t,1H),7.24-7.12(m,1H),6.95(s,2H),6.66(s,1H),6.57(d,1H),5.04(d,1H),4.95(s,2H),4.29(q,1H),4.15-4.01(m,2H),3.86(d,3H),3.46-3.11(m,16H),2.84-2.62(m,2H),2.21(d,3H),2.04(t,2H),1.53-1.30(m,6H),1.28-0.89(m,6H),0.82(d,7H)。MS(ESI)m/e 1570.4(M-H)-。
2.44 N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-[4-({[{2-[{8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-2-[6-羧基-5-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基]-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基}(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基甲酰基]氧基}甲基)苯基]-L-丙氨酰胺(合成子OX)的合成
如实例2.30所述用实例1.21.12取代实施1.17.10制备标题化合物。MS(ESI)m/e1359.5(M+H)+,1357.5(M-H)-。
2.45 N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-L-丙氨酰胺(合成子OZ)的合成
如实例2.30所述用实例1.22.9取代实施1.17.10制备标题化合物。MS(ESI)m/e1302.5(M+H)+,1300.5(M-H)-。
2.46 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子PA)的合成
2.46.1 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基)吡啶甲酸
如实例2.43.1所述用实例2.26.7取代实施2.11.6制备标题化合物。MS(ESI)m/e1228.1(M-H)-。
2.46.2 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基)吡啶甲酸
如实例2.34.2所述用实例2.46.1取代实例2.34.1制备标题化合物。MS(ESI)m/e1377.5(M-H)-。
2.46.3 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{2-[2-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如实例2.34所述用实例2.46.2取代实施2.34.2制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.08(s,1H),9.00(s,1H),8.36(d,1H),8.25-8.12(m,3H),8.05(d,1H),8.00(d,1H),7.92(d,1H),7.85(d,1H),7.78(dd,2H),7.72-7.65(m,1H),7.50-7.43(m,2H),7.35(t,1H),7.21-7.14(m,1H),6.96(s,2H),6.69(d,1H),6.58(d,1H),5.13-4.93(m,3H),4.28(q,1H),4.03(dd,2H),3.94(d,1H),3.86(d,2H),3.67(t,2H),3.31-3.08(m,8H),2.83-2.64(m,2H),2.21(d,3H),2.04(t,2H),1.53-1.30(m,5H),1.30-0.89(m,11H),0.89-0.75(m,6H)。MS(ESI)m/e 1570.5(M-H)-。
2.47 2-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子QL)的合成
2.47.1 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(5-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基)吡啶甲酸
如实例2.36.1所述用实例1.10.3取代实施1.1.14制备标题化合物。
2.47.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如实例2.36所述用实例2.47.1取代实施2.36.1制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.17(s,1H),9.70(d,1H),9.39(s,1H),8.31(dd,2H),8.16(d,1H),8.06(dd,1H),8.01-7.90(m,2H),7.83-7.71(m,2H),7.52-7.43(m,2H),7.39-7.31(m,1H),7.18(d,1H),6.96(s,2H),6.65(d,1H),6.58(dd,1H),5.04(s,1H),4.96(s,2H),4.09(dtd,2H),3.87(s,2H),3.70(t,2H),3.40-3.14(m,7H),2.85(d,3H),2.22(s,3H),2.01(t,2H),1.49-1.30(m,6H),1.30-0.90(m,10H),0.90-0.74(m,6H)。MS(ESI)m/e 1400.4(M+Na)+。
2.48 4-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子QM)的合成
2.48.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(5-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基)吡啶甲酸
在0℃向实例1.10.3(208mg)和实例2.11.6(267mg)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(251μL)。将所得混合物在室温下搅拌过夜并浓缩。将残余物溶于甲醇(3mL)和四氢呋喃(5mL)中。将溶液在冰水浴中冷却，并且添加1M氢氧化锂水溶液(2.87mL)。将混合物在0℃下搅拌2小时，并用三氟乙酸酸化。减压浓缩反应混合物。将残余物用二甲基亚砜稀释，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-75％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e1185.1(M+H)+。
2.48.2 4-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如实例2.36.2所述用实例2.48.1取代实例2.36.1制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.18(s,1H),9.70(d,1H),9.39(s,1H),8.31(dd,2H),8.16(d,1H),8.06(d,1H),8.01-7.90(m,2H),7.80(d,2H),7.52-7.43(m,2H),7.39-7.32(m,1H),7.18(d,1H),6.96(s,2H),6.67(d,1H),6.58(dd,1H),5.11-4.90(m,3H),4.03(d,2H),3.95-3.82(m,3H),3.68(t,2H),3.48-3.23(m,10H),3.18(t,2H),2.85(d,3H),2.22(s,3H),2.00(t,2H),1.51-1.31(m,5H),1.19(dd,10H),0.83(d,6H)。MS(ESI)m/e 1376.4(M-H)-。
2.49 6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-3-(1-{[3-(2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基](甲基)氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸(合成子QN)的合成
如实例2.36.2所述用实例1.10.3取代实例2.36.1制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.21(s,1H),9.70(d,1H),9.40(s,1H),8.42-8.27(m,2H),8.16(d,1H),8.06(d,1H),8.04-7.90(m,2H),7.80(d,1H),7.56-7.44(m,2H),7.42-7.31(m,1H),6.95(d,2H),3.87(s,2H),3.55-3.18(m,5H),2.95(s,1H),2.76(s,2H),2.28(t,1H),2.22(s,4H),1.53-1.29(m,6H),1.28-0.91(m,10H),0.84(s,6H)。MS(ESI)m/e 949.1(M+H)+。
2.50 4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子QT)的合成
2.50.1 3-(1-((3-(2-((((3-(3-氨基丙酰胺基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(7-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基)吡啶甲酸
通过用实例1.27.4取代实施2.32.25中的实例2.32.24制备标题化合物。MS(ESI)m/e：1156.6(M+H)+。
2.50.2 4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-β-丙氨酰}氨基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.50.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.00(s,2H)；9.06(s,1H),8.29(dd,1H),8.22(d,1H),8.18(s,1H),8.04(t,2H),7.97(d,1H),7.90(d,1H),7.79(d,1H),7.50-7.43(m,3H),7.35(ddd,1H),7.25(t,1H),7.06(d,1H),7.01(dd,1H),6.94(s,2H),4.96(s,2H),4.81(s,1H),3.33-3.25(m,6H),2.87(d,3H),2.50(d,3H),2.31(dd,2H),2.21(s,3H),1.38(d,2H),1.30-0.77(m,18H)。MS(ESI)m/e 1305.2(M-H)-。
2.51 4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子RF)的合成
2.51.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(7-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基)吡啶甲酸
通过用实例1.27.4取代实例2.11.7中的实例1.12.10制备标题化合物。MS(ESI)m/e：1172.9(M+H)+。
2.51.2 4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.51.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 11.16(s,2H),8.27(d,1H),8.19(d,1H),8.06-7.94(m,3H),7.88(d,1H),7.77(d,1H),7.50-7.39(m,3H),7.33(t,1H),7.26-7.13(m,2H),6.93(s,2H),6.63(d,1H),6.57(dd,1H),5.03(d,1H),4.94(s,2H),4.13-4.00(m,2H),3.86(d,3H),3.14(q,2H),2.83(d,3H),2.29(t,2H),2.20(s,3H),1.36(d,2H),1.28-0.73(m,16H)。MS(ESI)m/e 1322.4(M-H)-。
2.52 4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子RG)的合成
2.52.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(7-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基)吡啶甲酸
通过用实例2.51.1取代实例2.18.1中的实例2.9.1制备标题化合物。MS(ESI)m/e：1325.5(M+H)+。
2.52.2 4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-{2-[2-({N-[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)乙氧基]乙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.52.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 11.17(s,2H),8.27(d,1H),8.20(d,1H),8.03(dd,2H),7.96(d,1H),7.89(d,1H),7.82-7.75(m,2H),7.50(s,1H),7.48-7.41(m,2H),7.34(t,1H),7.24(t,1H),7.18(d,1H),6.93(s,2H),6.66(d,1H),6.58(dd,1H),5.04(d,1H),4.95(s,2H),3.70(t,2H),3.58(t,2H),3.48-3.14(m,11H),2.89-2.79(m,4H),2.73(dd,1H),2.37(m,2H),2.21(s,3H),1.45-0.73(m,19H)。MS(ESI)m/e1473.3(M-H)-。
2.53 4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-甲基-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子SF)的合成
2.53.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(7-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-甲基-1H-吲哚-2-基)吡啶甲酸
通过用实例1.29.7取代实例2.11.7中的实例1.12.10制备标题化合物。MS(ESI)m/e：1187.1(M+H)+。
2.53.2 4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-甲基-1H-吲哚-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.53.1取代实施2.11.8中的实例2.11.7制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 11.01(s,1H),8.28(d,1H),8.06-7.94(m,4H),7.91(d,1H),7.76(d,1H),7.50-7.42(m,2H),7.32(td,1H),7.26-7.15(m,2H),6.93(s,2H),6.64(d,1H),6.58(dd,1H),5.03(d,1H),4.95(s,2H),4.11-3.99(m,2H),3.87(d,3H),3.68(t,2H),3.56(dd,2H),3.47-3.33(m,5H),3.33-3.19(m,4H),3.14(q,2H),2.84(d,3H),2.63(s,3H),2.30(dd,2H),2.21(s,3H),1.42-0.72(m,21H)。MS(ESI)m/e 1336.3(M-H)-。
2.54 N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺(合成子SR)
如实例2.2所述用实例1.26.10取代实施1.3.2制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.28(s,2H),9.96(s,1H),9.59(s,1H),9.03(d,2H),8.53(d,1H),8.42(d,1H),8.25(d,1H),8.05(t,2H),7.97(d,1H),7.78(dd,2H),7.58(d,2H),7.47(d,2H),7.36(t,1H),7.26(d,2H),6.97(s,2H),5.96(s,1H),4.96(s,2H),4.45-4.29(m,1H),4.17(t,1H),3.51-3.18(m,6H),3.07-2.75(m,4H),2.22(s,3H),2.11(dq,1H),2.02-1.82(m,1H),1.76-0.88(m,18H),0.81(dd,14H)。MS(ESI)m/e 1352.4(M-H)-。
2.55 4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子YZ)的合成
2.55.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)吡啶甲酸
通过用实例1.4.10取代实施2.11.7中的实例1.12.10制备标题化合物。MS(ESI)m/e 1165(M+H)+,1163(M-H)-。
2.55.2 4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[2-(2-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.55.1取代实例2.10中的实例2.9.1来制备标题化合物。1H NMR(300MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.22(t,1H),8.05(s,1H),7.99(d,1H),7.76(d,1H),7.61(d,1H),7.46(t,1H),7.35-7.31(m,2H),7.20(d,1H),7.15(d,1H),7.07(s,2H),6.66(d,1H),6.61(dd,1H),5.12(s,2H),5.08(d,1H),4.94(s,2H),4.28(t,2H),4.09(m,4H),4.03(s,2H),3.91(m,3H),3.84(m,4H),3.73(t,2H),3.49(t,2H),3.40(t,2H),3.34(m,2H),3.30(dd,2H),3.26(m,2H),3.06(q,2H),2.13(s,3H),1.39(bs,2H),1.26(q,4H),1.13(q,4H),1.02(q,2H),0.85(s,6H)。MS(ESI)m/e 1302(M+H)+。
2.56 2-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-4-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十九烷-1-基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子QR)的合成
2.56.1 3-(1-((3-(2-((((5-(3-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)-2-(((3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(5-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基)吡啶甲酸
向(3R,4S,5S,6S)-2-(4-(1-(9H-芴-9-基)-3-氧代-2,7,10,13-四氧杂-4-氮杂十六烷-16-基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(56mg)和实例1.43.5(47mg)在N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中的冷(0℃)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.026mL)。将反应缓慢温热至室温并搅拌过夜。向反应中加入水(2mL)和LiOH H2O(50mg)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用三氟乙酸酸化，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。
MS(ESI)m/e 1255.4(M-H)-。
2.56.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-4-[19-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十九烷-1-基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
向实例2.56.1(21mg)中在N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入2-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(5.24mg)和N，N-二异丙基乙胺(0.012mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用N，N-二甲基甲酰胺(2mL)稀释，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.17(s,2H),9.68(d,1H),9.37(s,1H),8.29(dd,2H),8.14(d,1H),8.04(d,1H),8.01-7.88(m,2H),7.82-7.69(m,2H),7.51-7.40(m,2H),7.38-7.29(m,1H),7.17(t,1H),7.13-7.01(m,2H),6.95(s,3H),5.02(s,2H),4.94-4.86(m,1H),3.91-3.79(m,4H),3.33(td,9H),3.29-3.22(m,2H),3.12(q,2H),3.04(d,2H),2.20(s,3H),1.98(t,2H),1.70(p,2H),1.42(dt,7H),1.31-0.89(m,13H),0.82(s,7H)。MS(ESI)m/e 1448.3(M-H)-。
2.57 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[4-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)丁基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子SE)的合成
2.57.1(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-溴-4-甲酰基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将(3R,4S,5S,6S)-2-溴-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(2.67g)、2-溴-4-羟基苯甲醛(0.90g)和氧化银(1.56g)的混合物在室温下在乙腈(20mL)中避光搅拌。3小时后，将反应用二氯甲烷(20mL)稀释，通过硅藻土过滤，用另外的二氯甲烷(40mL)洗涤并浓缩。通过硅胶色谱(用5％至50％己烷/乙酸乙酯的梯度洗脱)经30分钟纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 517.1(M+H)+。
2.57.2(9H-芴-9-基)甲基丁-3-炔-1-基氨基甲酸酯
将丁-3-炔-1-胺盐酸盐(9g)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(44.7mL)的溶液在二氯甲烷(70mL)中搅拌，并将混合物冷却至0℃。添加(9H-芴-9-基)甲基氯甲酸酯(22.06g)在二氯甲烷(35mL)中的溶液，并将反应搅拌2小时。将反应混合物浓缩。将粗材料沉积在硅胶上，加载到硅胶柱上，并且用石油二***/乙酸乙酯(10％-25％)洗脱，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 314(M+Na)+。
2.57.3(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(4-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丁-1-炔-1-基)-4-甲酰基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.57.1(0.389g)、实例2.57.2(0.285g)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.053g)和碘化铜(I)(0.014g)称重放入小瓶中并且将小瓶用氮气流冲洗。添加N，N-二异丙基乙胺(0.263mL)和N，N-二甲基甲酰胺(1.5mL)，并将反应在室温下搅拌过夜。将反应混合物用二***(50mL)稀释，并用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用5％至60％乙酸乙酯/庚烷的梯度洗脱)经30分钟纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 728.4(M+H)+。
2.57.4(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(4-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丁基)-4-甲酰基苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.57.3(262mg)和四氢呋喃(10mL)加入到50mL压力瓶中的10％钯/C(50mg)中，并将混合物在室温下在30psi H2下振荡2小时。过滤反应混合物并浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e732.5(M+H)+。
2.57.5(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(4-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丁基)-4-(羟甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.57.4(0.235g)在四氢呋喃(1.0mL)和甲醇(1.0mL)中的溶液冷却至0℃，并且一次性添加硼氢化钠(6.07mg)。将反应搅拌15分钟并用乙酸乙酯(75mL)和水(50mL)稀释。将有机层分离，用盐水(50mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用10％至70％乙酸乙酯/庚烷的梯度洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 734.5(M+H)+。
2.57.6(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(4-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丁基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向实例2.57.5(0.148g)和双(4-硝基苯基)碳酸酯(0.123g)在N，N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的环境溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.053mL)。3小时后，浓缩反应混合物。通过硅胶色谱(用10％至60％乙酸乙酯/己烷的梯度洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 899.5(M+H)+。
2.57.7 3-(1-((3-(2-((((2-(4-氨基丁基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基)吡啶甲酸
向实例1.6.3(0.101g)和实例2.57.6(0.095g)在N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.055mL)，并在室温下搅拌反应3小时。用2,2,2-三氟乙酸(0.204mL)、水(1mL)和N，N-二甲基甲酰胺(1mL)的混合物淬灭反应，并在吉尔森2020***上通过制备型反相HPLC(使用5％至50％乙腈水的梯度)经30分钟纯化。将含产物的级分冻干，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e1152.7(M+H)+。
2.57.8 3-(1-((3-(2-((((2-(4-((R)-2-氨基-3-磺基丙酰氨基)丁基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基)吡啶甲酸
向(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-磺基丙酸(0.058g)和O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.054g)在N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的搅拌溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.051mL)。搅拌5分钟后，将混合物加入到实例2.57.7(0.113g)和N，N-二异丙基乙胺(0.051mL)在N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的混合物中。搅拌2小时后，添加二乙胺(0.102mL)，并且搅拌反应混合物30分钟。将反应混合物用2,2,2-三氟乙酸(0.189mL)在水(1mL)中的溶液稀释，并在吉尔森2020***上通过制备型反相HPLC(使用5％至85％乙腈水的梯度)经30分钟纯化。将含产物的级分冻干，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 1303.1(M+H)+。
2.57.9 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-3-[4-({N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-3-磺基-L-丙氨酰}氨基)丁基]苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
向实例2.57.8(0.044g)和2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(0.012g)在N,N-二甲基甲酰胺(0.4mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.027mL)，并在室温下搅拌反应混合物2小时。用2,2,2-三氟乙酸(0.060mL)、水(1mL)和N，N-二甲基甲酰胺(1mL)的混合物淬灭反应混合物，并在吉尔森2020***上通过制备型反相HPLC(使用5％至50％乙腈水的梯度)经30分钟纯化。将含产物的级分冻干，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 13.10(s,1H),9.02(s,1H),8.38(dd,1H),8.27-8.14(m,3H),8.07(d,1H),8.02(d,1H),7.94(d,1H),7.82(dd,2H),7.79-7.66(m,2H),7.53-7.44(m,1H),7.48(s,1H),7.37(t,1H),7.23(d,1H),6.98(s,2H),6.88(d,1H),6.82(dd,1H),5.04(d,1H),5.00(s,2H),4.29(q,2H),3.57(s,2H),3.44(s,4H),3.41(d,1H),3.40-3.27(m,3H),3.30-3.21(m,2H),3.03(t,2H),2.85(s,3H),2.79(dd,1H),2.70(dd,1H),2.58(s,2H),2.23(s,3H),2.06(t,2H),1.53-1.41(m,5H),1.42(s,6H),1.26(s,2H),1.25-1.07(m,8H),0.85(s,6H)。MS(ESI)m/e1494.1(M-H)-。
2.58 2-{6-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]-2-甲基-3,3-二氧化-7-氧代-8-氧杂-3λ6-硫杂-2,6-二氮杂壬烷-9-基}-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子UH)的合成
2.58.1(9H-芴-9-基)甲基丁-3-炔-1-基氨基甲酸酯
将丁-3-炔-1-胺盐酸盐(9g)和N,N-二异丙基乙基胺(44.7mL)的溶液在二氯甲烷(70mL)中搅拌，并将混合物冷却至0℃。添加(9H-芴-9-基)甲基氯甲酸酯(22.06g)在二氯甲烷(35mL)中的溶液，并将反应混合物搅拌2小时。浓缩反应混合物，并将残余物通过硅胶色谱(用在乙酸乙酯中的石油醚(10％-25％)洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 314(M+Na)+。
2.58.2(2S,3S,4S,5R,6S)-甲基6-(5-(4-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)丁-1-炔基)-2-甲酰基苯氧基)-3,4,5-三乙酰氧基-四氢-2H-吡喃-2-甲酸酯
将实例2.58.3(2.7g)、实例2.58.1(2.091g)、双(三苯基膦)氯化钯(II)(0.336g)和碘化铜(I)(0.091g)称重放入小瓶中并且用氮气流冲洗。添加三乙胺(2.001mL)和四氢呋喃(45mL)，并将反应在室温下搅拌。搅拌16小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，并用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用在乙酸乙酯中的石油醚(10％-50％)洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e750(M+Na)+。
2.58.3(2S,3S,4S,5R,6S)-甲基6-(5-(4-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)丁基)-2-甲酰基苯氧基)-3,4,5-三乙酰氧基-四氢-2H-吡喃-2-甲酸酯
将实例2.58.2(1.5g)和四氢呋喃(45mL)加入到100mL压力瓶中的10％Pd-C(0.483g)中，并在室温下在1atmH2下搅拌混合物16小时。过滤反应混合物并浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e754(M+Na)+。
2.58.4(2S,3S,4S,5R,6S)-甲基6-(5-(4-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)丁基)-2-(羟甲基)苯氧基)-3,4,5-三乙酰氧基-四氢-2H-吡喃-2-甲酸酯
将实例2.58.3(2.0g)在四氢呋喃(7.00mL)和甲醇(7mL)中的溶液冷却至0℃并一次性添加NaBH4(0.052g)。30分钟后，将反应混合物用乙酸乙酯(150mL)和水(100mL)稀释。分离有机层，用盐水(100mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用在乙酸乙酯中的石油醚(10％-40％)洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 756(M+Na)+。
2.58.5(2S,3S,4S,5R,6S)-甲基6-(5-(4-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)丁基)-2-(((4-硝基苯氧基)羰基氧基)甲基)苯氧基)-3,4,5-三乙酰氧基-四氢-2H-吡喃-2-甲酸酯
在0℃下，向实例2.58.4(3.0g)和双(4-硝基苯基)碳酸酯(2.488g)在干乙腈(70mL)中的溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(1.07mL)。在室温下搅拌16小时后，浓缩反应混合物，以给出残余物，将其通过硅胶色谱(用在乙酸乙酯中的石油醚(10％-50％)溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 921(M+Na)+。
2.58.6 3-(1-((3-(2-((((4-(4-氨基丁基)-2-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-(N,N-二甲基氨磺酰基)乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
向实例2.58.5(40.8mg)和实1.36(40mg)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的冷(0℃)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.026mL)。将反应混合物缓慢温热至室温并搅拌过夜。向反应混合物中加入水(2mL)和LiOH H2O(50mg)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用三氟乙酸酸化，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。
MS(ESI)m/e 1278.7(M-H)-。
2.58.7 2-{6-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]-2-甲基-3,3-二氧化-7-氧代-8-氧杂-3λ6-硫杂-2,6-二氮杂壬烷-9-基}-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
向实例2.58.6(35.1mg)中在N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中加入2,5-二氧代吡咯烷-1-基2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酸酯(6.93mg)和N，N-二异丙基乙胺(0.026mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用N，N-二甲基甲酰胺(2mL)稀释，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.85(s,1H),8.02(dd,2H),7.76(d,1H),7.58(d,1H),7.53-7.37(m,3H),7.32(td,2H),7.24(s,1H),7.16(dd,1H),7.04(s,2H),6.99-6.87(m,2H),6.81(d,1H),5.08(d,2H),4.99(d,1H),4.92(s,2H),3.95(s,2H),3.86(q,3H),3.47-3.14(m,9H),2.99(dt,4H),2.72(s,3H),2.60(s,3H),2.06(s,3H),1.49(p,2H),1.41-1.27(m,4H),1.29-0.86(m,10H),0.80(d,7H)。MS(ESI)m/e1413.4(M-H)-。
2.59 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-4-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苄基]氧基}羰基)[3-(二甲基氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸(合成子UI)的合成
2.59.1 3-(1-((3-(2-((((4-(4-氨基丁基)-2-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(3-(二甲基氨基)-3-氧丙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
如实例2.58.6所述用实例1.38取代实施1.36制备标题化合物。MS(ESI)m/e1243.7(M+H)+。
2.59.2 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-4-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苄基]氧基}羰基)[3-(二甲基氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸
如实例2.58.7所述用实例2.59.1取代实例2.58.6制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.02(dd,2H),7.76(d,1H),7.58(d,1H),7.44(ddd,3H),7.32(td,2H),7.24(s,1H),7.13(dd,1H),7.04(s,2H),6.99-6.86(m,2H),6.81(d,1H),5.06(d,2H),4.98(d,1H),4.92(s,2H),3.95(s,2H),3.85(q,3H),3.77(d,2H),3.39(q,5H),3.27(q,4H),2.99(dt,4H),2.88(s,2H),2.81-2.66(m,5H),2.06(d,3H),1.50(p,2H),1.34(dd,4H),1.27-0.85(m,9H),0.79(d,6H)。MS(ESI)m/e1401.3(M+H)+。
2.60 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-氨磺酰基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子US)的合成
2.60.1 3-(1-((3-(2-((((4-(4-氨基丁基)-2-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(2-氨磺酰基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
如实例2.58.6所述用实例1.18.20取代实施1.36制备标题化合物。MS(ESI)m/e1251.2(M+H)+。
2.60.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-氨磺酰基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如实例2.58.7所述用实例2.60.1取代实例2.58.6制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.84(s,2H),8.04(dd,2H),7.77(d,1H),7.60(d,1H),7.53-7.38(m,3H),7.38-7.30(m,2H),7.26(s,1H),7.16(d,1H),7.05(s,2H),6.96-6.77(m,5H),5.09(s,2H),5.00(d,1H),4.94(s,2H),3.97(s,2H),3.87(q,3H),3.48-3.16(m,5H),3.09-2.94(m,4H),2.07(s,3H),1.50(d,2H),1.36(d,3H),1.29-0.88(m,9H),0.81(d,7H)。MS(ESI)m/e 1385.5(M-H)-。
2.61 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-4-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苄基]氧基}羰基)[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸(合成子UY)的合成
2.61.1 3-(1-((3-(2-((((4-(4-氨基丁基)-2-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(3-(甲氨基)-3-氧丙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
如实例2.58.6所述用实例1.39取代实施1.36制备标题化合物。MS(ESI)m/e1228.8(M+H)+。
2.61.2 6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-4-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苄基]氧基}羰基)[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸
如实例2.58.7所述用实例2.61.1取代实例2.58.6制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.83(s,1H),8.06(s,1H),8.01(dd,1H),7.77(d,1H),7.71(d,0H),7.60(d,1H),7.45(tdd,3H),7.38-7.29(m,2H),7.26(s,1H),7.15(d,1H),7.05(d,1H),6.96-6.90(m,2H),6.82(d,1H),5.07(s,2H),5.01(t,1H),4.94(s,2H),3.97(s,2H),3.87(q,3H),3.79(d,2H),3.28(p,2H),3.09-2.93(m,3H),2.52(d,3H),2.35-2.26(m,2H),2.07(d,2H),1.60-1.44(m,2H),1.34(d,3H),1.29-0.88(m,6H),0.81(d,5H)。MS(ESI)m/e1363.5(M-H)-。
2.62 3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-4-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苄基]氧基}羰基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸(合成子UX)的合成
2.62.1 3-(1-((3-(2-((3-氨基-3-氧丙基)(((4-(4-氨基丁基)-2-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
如实例2.58.6所述用实例1.32.2取代实施1.36制备标题化合物。MS(ESI)m/e1214.6(M+H)+。
2.62.2 3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基]氧基}-4-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苄基]氧基}羰基)氨基]乙氧基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸
如实例2.58.7所述用实例2.62.1取代实例2.58.6制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.83(s,2H),8.06(s,1H),8.01(d,1H),7.77(d,1H),7.60(d,1H),7.53-7.38(m,3H),7.34(q,2H),7.26(s,1H),7.15(d,1H),7.05(s,2H),6.93(d,2H),6.87-6.73(m,2H),5.07(d,2H),5.04-4.97(m,1H),4.94(s,2H),3.97(s,2H),3.87(q,3H),3.79(d,2H),3.29(t,3H),3.10-2.95(m,4H),2.32(p,2H),2.07(d,3H),1.51(dd,2H),1.36(dd,5H),1.30-0.86(m,8H),0.81(d,6H)。MS(ESI)m/e 1349.5(M-H)-。
2.63 2-[({[2-({3-[(4-{6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-5-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子WZ)的合成
2.63.1 3-(1-((3-(2-((((4-(4-氨基丁基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-5-基)吡啶甲酸
如下制备标题化合物：在实例2.11.7中，用实施例1.34.5取代实例1.12.10，并用实例2.58.5取代实例2.11.6。
2.63.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-5-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](甲基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.63.1取代实例2.10中的实例2.9.1来制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.47(bs,1H),12.16(d,1H),9.01(s,1H),8.69(d,1H),8.11-8.04(m,4H),7.99(d,1H),7.76(d,1H),7.64(d,1H),7.48(s,1H),7.45(t,1H),7.31(t,1H),7.19(t,1H),7.07(s,1H),6.94(s,1H),6.86(d,1H),5.10(s,2H),5.03(d,1H),3.99(s,2H),3.90(m,3H),3.48(m,3H),3.28(m,2H),3.05(m,4H),2.93(s,2H),2.88(s,2H),2.54-2.53(m,2H),2.24(s,3H),1.54(m,2H),1.40(m,4H),1.30-1.22(m,6H),1.20-1.14(m,6H),1.11-0.96(m,2H),0.87(d,6H)。MS(ESI)m/e 1300(M+Na)+,1276(M-H)-。
2.64 2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子XO)的合成
2.64.1 3-(1-((3-(2-((((4-(4-氨基丁基)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)吡啶甲酸
如下制备标题化合物：在实例2.11.7中，用实施例1.4.10取代实例1.12.10，并用实例2.58.5取代实例2.11.6。MS(ESI)m/e 1133(M+H)+,1131(M-H)-。
2.64.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-(4-{[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]氨基}丁基)苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
通过用实例2.64.1取代实例2.10中的实例2.9.1来制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 8.08(t,1H),8.01(s,1H),7.99(d,1H),7.76(d,1H),7.61(d,1H),7.46(t,1H),7.34(s,1H),7.33(t,1H),7.17(m,3H),7.08(s,2H),6.92(s,1H),6.84(d,1H),5.12(s,2H),5.05(s,2H),5.02(d,1H),4.27(m,2H),4.10(m,2H),3.99(s,2H),3.91(m,2H),3.84(s,2H),3.70(m,2H),3.42(t,2H),3.35(t,2H),3.30(t,2H),3.06(m,5H),2.53(m,2H),2.14(s,3H),1.53(m,2H),1.43-1.35(m,4H),1.27(m,4H),1.14(q,4H),1.03(dd,2H),0.86(s,6H)。MS(ESI)m/e1270(M+H)+,1268(M-H)-。
2.65(6S)-2,6-脱水-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-({N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰}氨基)苯基}乙基)-L-古洛糖酸(合成子XW)的合成
2.65.1(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-(苄氧基甲基)-四氢吡喃-2-酮
在0℃下向(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-2-醇(75g)在二甲基亚砜(400mL)中的溶液中加入乙酸酐(225mL)。将混合物在室温下搅拌16小时，然后冷却至0℃。添加大量水，并且停止搅拌，并且使反应混合物静置3小时(粗内酯位于烧瓶底部)。除去上清液，并将粗混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤3次，用饱和NaHCO3水溶液中和，并且再用水洗涤2次。然后将有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e561(M+Na)+。
2.65.2(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-(苄氧基甲基)-2-乙炔基-四氢-2H-吡喃-2-醇
向乙炔基三甲基硅烷(18.23g)在四氢呋喃(400mL)中的在氮气下并在干冰/丙酮浴(内部温度-65℃)中冷却的溶液中滴加2.5M BuLi的己烷(55.7mL)溶液，保持温度低于-60℃。将混合物在冷浴中搅拌40分钟，然后冰水浴(内部温度升至0.4℃)40分钟，并且最后再次冷却至-75℃。逐滴添加实例2.55.1(50g)在四氢呋喃(50mL)中的溶液，保持内部温度低于-70℃。将混合物在干冰/丙酮浴中搅拌另外3小时。用饱和NaHCO3水溶液(250mL)淬灭反应混合物。将混合物温热至室温，用乙酸乙酯(3×300mL)萃取，经MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 659(M+Na)+。
2.65.3三甲基(((3S,4R,5R,6R)-3,4,5-三(苄氧基)-6-(苄氧基甲基)-四氢-2H-吡喃-2-基)乙炔基)硅烷
在冰-盐浴中在-15℃下，向实例2.65.2(60g)在乙腈(450mL)和二氯甲烷(150mL)中的混合物中滴加三乙基硅烷(81mL)，然后以内部温度不超过-10℃的速率添加三氟化硼二***络合物(40.6mL)。将混合物在-15℃和-10℃之间搅拌2小时。用饱和水性NaHCO3溶液(275mL)淬灭反应混合物，并在室温下搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯(3×550mL)萃取。将合并的萃取物经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速色谱(用0％至7％乙酸乙酯/石油醚的梯度洗脱)进行纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 643(M+Na)+。
2.65.4(2R,3R,4R,5S)-3,4,5-三(苄氧基)-2-(苄氧基甲基)-6-乙炔基-四氢-2H-吡喃
向实例2.65.3(80g)在二氯甲烷(200mL)和甲醇(1000mL)中的溶液中加入1N NaOH水溶液(258mL)。将混合物在室温搅拌2小时。除去溶剂。然后将残余物在水和二氯甲烷之间分配。将萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e571(M+Na)+。
2.65.5(2R,3R,4R,5S)-2-(乙酰氧基甲基)-6-乙炔基-四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向通过冰/水浴冷却的实例2.65.4(66g)的乙酸酐(500mL)溶液中逐滴加入三氟化硼二***络合物(152mL)。将混合物在室温下搅拌16小时，用冰/水浴冷却并用饱和水性NaHCO3溶液中和。将混合物用乙酸乙酯(3×500mL)萃取，经Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱(用0％至30％乙酸乙酯/石油醚的梯度洗脱)进行纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 357(M+H)+。
2.65.6(3R,4R,5S,6R)-2-乙炔基-6-(羟甲基)-四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇
向实例2.65.5(25g)在甲醇(440mL)中的溶液中加入甲醇钠(2.1g)。将混合物在室温下搅拌2小时，然后用4M HCl的二噁烷中和。除去溶剂，并将残余物吸附在硅胶上，并加载到硅胶柱上。用0至100％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱柱，然后用0％至12％甲醇/乙酸乙酯洗脱，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 211(M+Na)+。
2.65.7(2S,3S,4R,5R)-6-乙炔基-3,4,5-三羟基-四氢-2H-吡喃-2-甲酸
向三颈圆底烧瓶中加入实例2.65.6(6.00g)、KBr(0.30g)、四丁基溴化铵(0.41g)和60mL饱和NaHCO3水溶液。添加在60mL二氯甲烷中的(2,2,6,6-四甲基哌啶-1-基)氧烷基(0.15g)。剧烈搅拌混合物并在冰盐浴中冷却至-2℃的内部温度。逐滴添加盐水(12mL)、NaHCO3水溶液(24mL)和NaOCl(154mL)的溶液，使得内部温度保持低于2℃。通过添加固体Na2CO3将反应混合物的pH保持在8.2-8.4范围内。总共6小时后，将反应冷却至3℃内部温度并滴加乙醇(～20mL)并搅拌～30分钟。将混合物转移到分液漏斗中，并弃去二氯甲烷层。使用1M HCl水溶液将水层的pH调节至2-3。然后将水层浓缩至干。向干燥固体中加入甲醇(100mL)，并搅拌浆料约30分钟。将混合物用硅藻土垫过滤，并将漏斗中的残余物用约100mL甲醇洗涤。减压浓缩滤液，得到标题化合物。
2.65.8(2S,3S,4R,5R)-甲基6-乙炔基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-甲酸酯
向500mL三颈圆底烧瓶中加入实例2.65.7(6.45g)在甲醇(96mL)中的悬浮液，并在冰盐浴中冷却，其中内部温度为-1℃。小心地添加纯亚硫酰氯(2.79mL)。在整个添加过程中内部温度保持上升但不超过10℃。使反应经2.5小时缓慢升温至15℃-20℃。2.5小时后，浓缩反应，以提供标题化合物。
2.65.9(3S,4R,5S,6S)-2-乙炔基-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
向作为在N，N-二甲基甲酰胺(75mL)中的溶液的实例2.65.8(6.9g)中加入4-二甲基氨基吡啶(0.17g)和乙酸酐(36.1mL)。将悬浮液在冰浴中冷却，并经15分钟通过注射器添加吡啶(18.04mL)。使反应温热至室温过夜。添加另外的乙酸酐(12mL)和吡啶(6mL)并继续搅拌另外6小时。将反应在冰浴中冷却，并且添加250mL饱和NaHCO3水溶液并搅拌1小时。添加水(100mL)，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机萃取物用饱和CuSO4溶液洗涤两次，干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱(用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱)进行纯化，以提供标题化合物。1H NMR(500MHz,methanol-d4)δppm5.29(t,1H),5.08(td,2H),4.48(dd,1H),4.23(d,1H),3.71(s,3H),3.04(d,1H),2.03(s,3H),1.99(s,3H),1.98(s,4H)。MS(ESI)m/e 359.9(M+NH4)+。
2.65.10 2-碘-4-硝基苯甲酸
在氮气氛下向装有机械搅拌器、温度探针和加料漏斗的3L全夹套烧瓶中加入2-氨基-4-硝基苯甲酸(69.1g，Combi-Blocks)和硫酸，1.5M水溶液(696mL)。将所得悬浮液冷却至0℃内部温度，并经43分钟滴加亚硝酸钠(28.8g)在水(250mL)中的溶液，同时保持温度低于1℃。将反应混合物在约0℃搅拌1小时。经44分钟滴加碘化钾(107g)在水(250mL)中的溶液，同时保持内部温度低于1℃。(最初添加是放热的并且存在气体逸出)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。将温度升至20℃，并且然后在环境温度下搅拌过夜。反应混合物变成悬浮液。过滤反应混合物，并用水洗涤收集的固体。将湿固体(～108g)在10％亚硫酸钠(350mL，在固体中具有约200mL水用于洗涤)中搅拌30分钟。将悬浮液用浓盐酸(35mL)酸化，并过滤收集固体并用水洗涤。将固体在水(1L)中浆化并重新过滤，并将固体在漏斗中干燥过夜。然后将固体在真空烘箱中在60℃下干燥2小时。将得到的固体用二氯甲烷(500mL)研磨，并过滤悬浮液并用另外的二氯甲烷洗涤。将固体风干，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e291.8(M-H)-。
2.65.11(2-碘-4-硝基苯基)甲醇
向火焰干燥的3L三颈烧瓶中加入实例2.65.10(51.9g)和四氢呋喃(700mL)。将溶液在冰浴中冷却至0.5℃，并经50分钟滴加硼烷-四氢呋喃络合物(443mL，在THF中1M)，达到最终内部温度1.3℃。将反应混合物搅拌15分钟，并除去冰浴。使反应经30分钟达到环境温度。安装加热套，并将反应加热至65.5℃的内部温度3小时，并且然后冷却至室温，同时搅拌过夜。将反应混合物在冰浴中冷却至0℃并通过滴加甲醇(400mL)淬灭。在短暂的孵育期后，温度迅速升高至2.5℃并伴随气体逸出。在经30分钟添加前100mL后，添加不再放热，并且气体逸出停止。移去冰浴，并且将混合物在环境温度下在氮气下搅拌过夜。将混合物浓缩成固体，溶于二氯甲烷/甲醇中并吸附在硅胶(～150g)上。将残余物加载到硅胶塞(3000mL)上，并用二氯甲烷洗脱，以提供标题化合物。MS(DCI)m/e 296.8(M+NH4)+。
2.65.12(4-氨基-2-碘代苯基)甲醇
向装有机械搅拌器、由JKEM温度探针和冷凝器控制的加热套的5L烧瓶中加入实例2.65.11(98.83g)和乙醇(2L)。快速搅拌反应，并添加铁(99g)，然后添加氯化铵(20.84g)在水(500mL)中的溶液。将反应经20分钟时程加热至内部温度80.3℃，在此时开始剧烈回流。放下套直到回流平静。此后，将混合物加热至80℃并保持1.5小时。将反应通过膜过滤器热过滤，并将铁残余物用热的50％乙酸乙酯/甲醇(800mL)洗涤。使洗脱液通过硅藻土垫，并浓缩滤液。将残余物在50％盐水(1500mL)和乙酸乙酯(1500mL)之间分配。分离各层，并将水层用乙酸乙酯(400mL×3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以提供标题化合物，其无需进一步纯化即可使用。MS(DCI)m/e 266.9(M+NH4)+。
2.65.13 4-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-碘苯胺
向带有机械搅拌器的5L烧瓶中加入实例2.65.12(88g)和二氯甲烷(2L)。将悬浮液在冰浴中冷却至内部温度为2.5℃，并经8分钟分批添加叔丁基氯二甲基硅烷(53.3g)。10分钟后，将1H-咪唑(33.7g)分批加入到冷反应中。将反应搅拌90分钟，同时内部温度升至15℃。将反应混合物用水(3L)和二氯甲烷(1L)稀释。分离各层，并将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩成油状物。通过硅胶色谱(1600g硅胶)(用在庚烷中的0-25％乙酸乙酯梯度洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。
2.65.14(S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酸
向(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酸(6.5g)在二甲氧基乙烷(40mL)中的溶液中加入(S)-2-氨基丙酸(1.393g)和碳酸氢钠(1.314g)的水(40mL)溶液。添加四氢呋喃(20mL)以帮助溶解。将所得混合物在室温下搅拌16小时。添加柠檬酸水溶液(15％，75mL)，并将混合物用在乙酸乙酯(2×100mL)中的10％2-丙醇萃取。在有机层中形成沉淀物。将合并的有机层用水(2×150mL)洗涤。减压浓缩有机层，并且然后用二***(80mL)研磨。在短暂超声处理后，通过过滤收集标题化合物。MS(ESI)m/e 411(M+H)+。
2.65.15(9H-芴-9-基)甲基((S)-1-(((S)-1-((4-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-碘代苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸酯
将实例2.65.13(5.44g)和实例2.65.14(6.15g)在二氯甲烷(70mL)和甲醇(35.0mL)的混合物中的溶液中加入乙基2-乙氧基喹啉-1(2H)-甲酸酯(4.08g)，并将反应搅拌过夜。浓缩反应混合物并将残余物加载到硅胶上，用在乙酸乙酯中的10％至95％庚烷梯度洗脱，然后用在二氯甲烷中的5％甲醇洗脱。将含有产物的级分浓缩，溶于在二氯甲烷(50mL)中的0.2％甲醇中，加载到硅胶上，并用在二氯甲烷中的0.2％至2％甲醇梯度洗脱。收集含有产物的级分，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 756.0(M+H)+。
2.65.16(2S,3S,4R,5S,6S)-2-((5-((S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)-2-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙炔基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.65.9(4.500g)、实例2.65.15(6.62g)、碘化亚铜(I)(0.083g)和双(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.308g)的溶液在小瓶中合并并脱气。添加N，N-二甲基甲酰胺(45mL)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(4.55mL)，并将反应容器用氮气冲洗并在室温下搅拌过夜。将反应物在水(100mL)和乙酸乙酯(250mL)之间分配。分离各层，并将有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷中的5％至95％乙酸乙酯的梯度洗脱)纯化残余物。收集含有产物的级分，浓缩并通过硅胶色谱(用在二氯甲烷中的0.25％至2.5％甲醇的梯度洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 970.4(M+H)+。
2.65.17(2S,3S,4R,5S,6S)-2-(5-((S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)-2-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯乙基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.65.16(4.7g)和四氢呋喃(95mL)加入到50mL压力瓶中的5％Pt/C(2.42g，湿)中，并在室温下在50psi氢气下振荡反应90分钟。过滤反应混合物并浓缩，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e974.6(M+H)+。
2.65.18(2S,3S,4R,5S,6S)-2-(5-((S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)-2-(羟甲基)苯乙基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
将实例2.65.17(5.4g)在四氢呋喃(7mL)、水(7mL)和冰醋酸(21mL)中的的溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，并用水(100mL)、饱和NaHCO3水溶液(100mL)、和盐水(100mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用在二氯甲烷中的0.5％至5％甲醇的梯度洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 860.4(M+H)+。
2.65.19(2S,3S,4R,5S,6S)-2-(5-((S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯乙基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯
在室温下向实例2.65.18(4.00g)和双(4-硝基苯基)碳酸酯(2.83g)在乙腈(80mL)中的溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.22mL)。搅拌过夜后，将反应混合物浓缩，溶解在二氯甲烷(250mL)中并用饱和NaHCO3水溶液(4×150mL)洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱(用在己烷中的5％至75％乙酸乙酯的梯度洗脱)纯化所得泡沫，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e1025.5(M+H)+。
2.65.20 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)-2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)苄基)氧基)羰基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(1-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)吡啶甲酸
如下制备标题化合物：在实例2.11.7中，用实施例1.4.10取代实例1.12.10，并用实例2.65.19取代实例2.11.6。MS(ESI)m/e 1257(M-H)-。
2.65.21(6S)-2,6-脱水-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-({N-[(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基]-L-缬氨酰基-L-丙氨酰}氨基)苯基}乙基)-L-古洛糖酸
通过用实例2.65.20取代实例2.10中的实例2.9.1来制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.88(s,1H),8.26(t,2H),8.00(m,2H),7.76(d,1H),7.61(d,1H),7.46(m,2H),7.38-7.30(m,3H),7.21(d,1H),7.15(d,1H),7.07(s,2H),7.04(t,1H),5.12(s,2H),4.97(s,2H),4.39(m,1H),4.28(m,2H),4.22(m,2H),4.12(s,2H),4.09(m,2H),3.84(s,2H),3.58(m,4H),3.33(m,4H),3.18-3.00(m,4H),2.94(t,2H),2.80-2.55(m,2H),2.13(s,3H),2.08-1.91(m,2H),1.56(m,1H),1.39(s,2H),1.30-1.20(m,6H),1.26-0.95(m,6H),0.85(m,12H)。MS(ESI)m/e1395(M-H)-。
2.66(6S)-2,6-脱水-6-[2-(2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{[N-({(3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-[(2-磺基乙氧基)甲基]吡咯烷-1-基}乙酰基)-L-缬氨酰基-L-丙氨酰]氨基}苯基)乙基]-L-古洛糖酸(合成子YG)的合成
2.66.1(3R,7aS)-3-苯基四氢吡咯并[1,2-c]噁唑-5(3H)-酮
将(S)-5-(羟甲基)吡咯烷-2-酮(25g)、苯甲醛(25.5g)和对甲苯磺酸一水合物(0.50g)在甲苯(300mL)中的溶液用迪安-斯达克分水器(Dean-Stark trap)在干燥管下加热至回流16小时。将反应冷却至室温，将溶剂与不溶材料滗析分开。用饱和碳酸氢钠水溶液(2x)和盐水(1x)洗涤有机层。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱(用35/65庚烷/乙酸乙酯洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(DCI)m/e 204.0(M+H)+。
2.66.2(3R,6R,7aS)-6-溴-3-苯基四氢吡咯并[1,2-c]噁唑-5(3H)-酮
经40分钟向实例2.66.1(44.6g)在四氢呋喃(670mL)中的冷(-77℃)溶液中滴加双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(在己烷中1.0M)(250mL)，保持Trxn<-73℃。将反应混合物在-77℃下搅拌2小时，并经20分钟逐滴添加溴(12.5mL)，保持Trxn<-64℃。将反应混合物在-77℃下搅拌75分钟，并通过添加150mL冷的10％硫代硫酸钠水溶液至-77℃反应中进行淬灭。将反应混合物温热至室温并在半饱和氯化铵水溶液和乙酸乙酯之间分配。分离各层，并将有机物用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用80/20、75/25和70/30庚烷/乙酸乙酯的梯度洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(DCI)m/e 299.0and301.0(M+NH3+H)+。
2.66.3(3R,6S,7aS)-6-溴-3-苯基四氢吡咯并[1,2-c]噁唑-5(3H)-酮
在实例2.66.2的合成过程中分离出作为副产物的标题化合物。MS(DCI)m/e299.0and 301.0(M+NH3+H)+。
2.66.4(3R,6S,7aS)-6-叠氮基-3-苯基四氢吡咯并[1,2-c]噁唑-5(3H)-酮
向实例2.66.2(19.3g)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中加入叠氮化钠(13.5g)。将反应混合物加热至60℃保持2.5小时。将反应混合物冷却至室温并通过添加水(500mL)和乙酸乙酯(200mL)淬灭。分离各层，并将有机层用盐水洗涤。将合并的水层用乙酸乙酯(50mL)反萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用78/22庚烷/乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(DCI)m/e 262.0(M+NH3+H)+。
2.66.5(3R,6S,7aS)-6-氨基-3-苯基四氢吡咯并[1,2-c]噁唑-5(3H)-酮
向实例2.66.4(13.5g)在四氢呋喃(500mL)和水(50mL)中的溶液中加入聚合物负载的三苯基膦(55g)。将反应在室温下机械搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯和甲苯洗脱。将溶液减压浓缩，溶于二氯甲烷(100mL)中，用硫酸钠干燥，然后过滤并浓缩，以提供标题化合物，将其不经进一步纯化用于后续步骤。MS(DCI)m/e 219.0(M+H)+。
2.66.6(3R,6S,7aS)-6-(二苄基氨基)-3-苯基四氢吡咯并[1,2-c]噁唑-5(3H)-酮
向实例2.66.5(11.3g)在N，N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中加入碳酸钾(7.0g)、碘化钾(4.2g)和苄基溴(14.5mL)。将反应在室温下搅拌过夜，并通过添加水和乙酸乙酯淬灭。分离各层，并将有机层用盐水洗涤。将合并的水层用乙酸乙酯反萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷中的10％至15％乙酸乙酯梯度洗脱)纯化残余物，以给出固体，将其与庚烷一起研磨，以提供标题化合物。MS(DCI)m/e399.1(M+H)+。
2.66.7(3S,5S)-3-(二苄基氨基)-5-(羟甲基)吡咯烷-2-酮
向实例2.66.6(13g)在四氢呋喃(130mL)中的溶液中加入对-甲苯磺酸一水合物(12.4g)和水(50mL)，并将反应加热至65℃保持6天。将反应混合物冷却至室温并通过添加饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯淬灭。分离各层，并将有机层用盐水洗涤。将合并的水层用乙酸乙酯反萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将蜡状固体用庚烷(150mL)研磨，以提供标题化合物。MS(DCI)m/e311.1(M+H)+。
2.66.8(3S,5S)-5-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-(二苄基氨基)吡咯烷-2-酮
向实例2.66.7(9.3g)和1H-咪唑(2.2g)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中加入叔丁基氯二甲基硅烷(11.2mL，在甲苯中50wt％)，并将反应搅拌过夜。通过添加水和二***淬灭反应混合物。分离各层，并将有机层用盐水洗涤。将合并的水层用二***反萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷中的35％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(DCI)m/e425.1(M+H)+。
2.66.9叔-丁基2-((3S,5S)-5-(((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-(二苄基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸酯
向实例2.66.8(4.5g)在四氢呋喃(45mL)中的冷(0℃)溶液中分两份加入95％氢化钠(320mg)。将***液搅拌40分钟，并添加2-溴乙酸叔丁酯(3.2mL)。将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。添加水和乙酸乙酯淬灭反应混合物。分离各层，并将有机层用盐水洗涤。将合并的水层用乙酸乙酯反萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷中的5％-12％乙酸乙酯的梯度洗脱)纯化残余物以提供标题化合物。MS(DCI)m/e 539.2(M+H)+。
2.66.10叔-丁基2-((3S,5S)-3-(二苄基氨基)-5-(羟甲基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸酯
向实例2.66.9(5.3g)在四氢呋喃(25mL)中的溶液中加入四丁基氟化铵(11mL，1.0M，在95/5四氢呋喃/水中)。将反应混合物在室温下搅拌一小时，并且通过添加饱和氯化铵水溶液、水和乙酸乙酯淬灭反应。分离各层，并将有机层用盐水洗涤。将合并的水层用乙酸乙酯反萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷中的35％乙酸乙酯洗脱)纯化残余物，以提供标题化合物。MS(DCI)m/e 425.1(M+H)+。
2.66.11叔-丁基2-((3S,5S)-5-((2-((4-((叔-丁基联苯甲硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丁氧基)磺酰基)乙氧基)甲基)-3-(二苄基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸酯
向实例2.66.10(4.7g)在二甲基亚砜(14mL)中的溶液中加入4-((叔-丁基联苯甲硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丁基乙烯磺酸酯(14.5g)在二甲基亚砜(14mL)中的溶液。添加碳酸钾(2.6g)和水(28μL)，并将反应在60℃和氮气下加热一天。将反应冷却至室温，并且通过添加盐水溶液、水和二***淬灭反应。分离各层，并将有机层用盐水洗涤。将合并的水层用二***反萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(用在庚烷中的15％-25％乙酸乙酯的梯度洗脱)纯化残余物以提供标题化合物。MS(ESI+)m/e 871.2(M+H)+。
2.66.12叔丁基2-((3S,5S)-3-氨基-5-((2-((4-((叔-丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丁氧基)磺酰基)乙氧基)甲基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸酯
将实例2.66.11(873mg)溶解在乙酸乙酯(5mL)和甲醇(15mL)中，并添加氢氧化钯/碳，20wt％(180mg)。将反应混合物在氢气氛(30psi)和室温下搅拌30小时，然后在50℃下搅拌1小时。将反应冷却至室温，过滤并浓缩，以给出所需产物。MS(ESI+)m/e 691.0(M+H)+。
2.66.13 4-(((3S,5S)-1-(2-(叔-丁氧基)-2-氧乙基)-5-((2-((4-((叔-丁基联苯甲硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丁氧基)磺酰基)乙氧基)甲基)-2-氧代吡咯烷-3-基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸
将马来酸酐(100mg)溶解在二氯甲烷(0.90mL)中，并且滴加实例2.66.12(650mg)在二氯甲烷(0.90mL)中的溶液，并且然后在40℃下加热2小时。将反应混合物通过硅胶色谱(用在含有0.2％乙酸的二氯甲烷中的1.0％-2.5％甲醇的梯度洗脱)直接纯化。浓缩含产物级分后，添加甲苯(10mL)，并再次浓缩混合物，以通过标题化合物。MS(ESI-)m/e 787.3(M-H)-。
2.66.14叔-丁基2-((3S,5S)-5-((2-((4-((叔-丁基联苯甲硅烷基)氧基)-2,2-二甲基丁氧基)磺酰基)乙氧基)甲基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸酯
将实例2.66.13(560mg)在甲苯(7mL)中浆化，并添加三乙胺(220μL)和硫酸钠(525mg)。将反应混合物在氮气氛下加热回流6小时，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。过滤反应，并用乙酸乙酯冲洗固体。将洗脱液减压浓缩，并将残余物通过硅胶色谱(用45/55庚烷/乙酸乙酯，乙酸乙酯洗脱，然后用97.5/2.5/0.2二氯甲烷/甲醇/乙酸洗脱)纯化，以提供标题化合物。
2.66.15 2-((3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-((2-磺基乙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)乙酸
将实例2.66.14(1.2g)溶解在三氟乙酸(15mL)中并在氮气下加热至65℃-70℃过夜。减压除去三氟乙酸。将残余物溶于乙腈(2.5mL)中，并在Luna C18(2)AXIA柱(250×50mm，10μ粒径)上通过制备型反相液相色谱(使用含有0.1％三氟乙酸的5％-75％乙腈水溶液的梯度)经30分钟进行纯化，以提供标题化合物。MS(ESI-)m/e375.2(M-H)-。
2.66.16 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)-2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)苄基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
将实例1.12.10(75mg)和实例2.65.19(100mg)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)中。添加1-羟基苯并***(13mg)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(50μL)，并将反应在室温下搅拌两小时。减压浓缩反应混合物。将残余物溶于四氢呋喃和甲醇(各0.3mL)中，并添加氢氧化锂水合物(55mg)在水(0.6mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌一小时，并通过添加N，N-二甲基甲酰胺/水1/1(1.5mL)和三氟乙酸(0.15mL)淬灭。将溶液用庚烷(1mL)洗涤，然后通过反相色谱(C18柱)(用在0.1％三氟乙酸水中的20％-70％乙腈洗脱)纯化，以提供标题化合物，为三氟乙酸盐。MS(ESI-)m/e 1355.6(M-H)-。
2.66.17(6S)-2,6-脱水-6-[2-(2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-甲氧基乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]-5-{[N-({(3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-[(2-磺基乙氧基)甲基]吡咯烷-1-基}乙酰基)-L-缬氨酰基-L-丙氨酰]氨基}苯基)乙基]-L-古洛糖酸
向实例2.66.15(20mg)在N，N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的溶液中加入O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(20mg)和N，N-二异丙基乙胺(18μL)。将反应混合物在室温下搅拌3分钟，并且然后加入到实例2.66.16(57mg)和N，N-二异丙基乙胺(30μL)在N，N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1小时，并用N，N-二甲基甲酰胺/水1/1(1.0mL)稀释。通过反相色谱(C18柱)(用在0.1％三氟乙酸水中的20％-70％乙腈洗脱)纯化溶液，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm9.84(br d,1H),8.18(br d,1H),8.04(m,1H),8.01(d,1H),7.77(dd,2H),7.50(d,1H),7.46(m,3H),7.34(t,1H),7.29(s,1H),7.21(br d,1H),7.07(s,2H),7.01(d,1H),6.99(d,1H),5.00(s,4H),4.64(t,1H),4.37(m,1H),4.18(m,2H),4.01(d,1H),3.88(s,3H),3.87(m,2H),3.81(br d,2H),3.73(brm,1H),3.63(m,2H),3.55(m,2H),3.49(m,2H),3.36(br m,6H),3.31(m,2H),3.26(br m,2H),3.19(m,2H),3.14(m,1H),3.10(br m,1H),2.94(t,1H),2.81(m,3H),2.74(m,2H),2.60(br m,1H),2.36(m,1H),2.09(s,3H),2.00(m,2H),1.85(m,1H),1.55(brm,1H),1.40-0.92(m,14H),0.88,0.86,0.83,0.79(d,d,s,s,总共12H)。MS(ESI-)m/e 1713.7(M-1)。
2.67 8-[2-({[(3-氨基-3-氧丙基){2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}氨基甲酰基]氧基}甲基)-5-{[(2S)-2-({(2S)-2-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基]-3-甲基丁酰基}氨基)丙酰基]氨基}苯基]-2,6-脱水-7,8-双脱氧-L-甘油-L-古洛糖-辛酸(合成子ZT)的合成
2.67.1 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)-2-(2-((3R,4R,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)苄基)氧基)羰基)(3-氨基-3-氧丙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
向实例2.65.19(66mg)和实例1.32.2(60mg)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的冷(0℃)溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(0.026mL)和1-羟基苯并***水合物(16.23mg)。将反应混合物缓慢温热至室温并搅拌过夜。向反应混合物中加入水(1mL)和LiOH H2O(20mg)。将混合物在室温搅拌3小时。将混合物用三氟乙酸酸化，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e1338.5(M-H)-。
2.67.2 8-[2-({[(3-氨基-3-氧丙基){2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}氨基甲酰基]氧基}甲基)-5-{[(2S)-2-({(2S)-2-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基]-3-甲基丁酰基}氨基)丙酰基]氨基}苯基]-2,6-脱水-7,8-双脱氧-L-甘油-L-古洛糖-辛酸
如实例2.58.7所述用实例2.67.1取代实例2.58.6制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.91(d,1H),8.25(dd,2H),8.03(d,1H),7.79(d,1H),7.61(d,6H),7.55-7.30(m,7H),7.28(s,1H),7.22(d,1H),7.07(s,2H),6.94(d,1H),6.89-6.74(m,1H),5.01(s,3H),4.96(s,2H),4.38(t,1H),4.27-4.17(m,1H),4.12(d,2H),3.88(t,2H),3.79(d,1H),3.41-3.30(m,3H),3.24(s,2H),3.12(dt,2H),3.01(t,2H),2.94(t,1H),2.74(d,1H),2.67-2.56(m,1H),2.29(t,2H),2.08(d,3H),1.99(d,3H),1.55(d,1H),1.42-0.99(m,15H),0.99-0.70(m,12H)。MS(ESI)m/e 1477.2(M+H)+。
2.68 4-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基甲酰基)氧基]甲基}-3-{3-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基]丙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸(合成子AAN)的合成
2.68.1 3-(1-((3-(2-((((2-(3-氨基丙氧基)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苄基)氧基)羰基)(3-(甲氨基)-3-氧丙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
向实例2.28.3(38.7mg)和实例1.39(39.3mg)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的冷(0℃)溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(0.026mL)和1-羟基苯并***水合物(6.58mg)。将反应缓慢温热至室温并搅拌过夜。向反应中加入水(2mL)和LiOH H2O(50mg)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用三氟乙酸酸化，过滤并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)纯化，以提供标题化合物。MS(ESI)m/e1230.2(M-H)-。
2.68.2 4-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基甲酰基)氧基]甲基}-3-{3-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基]丙氧基}苯基β-D-吡喃葡糖苷酸
如在实例2.58.7中描述的，用实例2.68.1取代实例2.58.6来制备标题化合物1HNMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.88(s,2H),9.93(d,1H),8.36-8.22(m,2H),8.04(d,1H),7.80(d,2H),7.76(d,0H),7.62(d,1H),7.56-7.42(m,5H),7.41-7.33(m,3H),7.28(s,1H),7.22(d,1H),7.08(s,2H),6.95(d,1H),5.01(d,3H),4.96(s,2H),4.39(p,1H),4.22(dd,1H),4.12(d,2H),3.89(t,2H),3.80(d,2H),3.34(t,2H),3.22(d,2H),3.13(dt,2H),3.02(t,2H),2.94(t,1H),2.86-2.71(m,1H),2.60(s,2H),2.54(d,4H),2.29(q,2H),2.09(d,3H),2.07-1.90(m,3H),1.60-1.48(m,1H),1.39-1.00(m,17H),0.97-0.74(m,15H)。(ESI)m/e1489.5(M-H)-。
2.69 2,6-脱水-8-(2-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基甲酰基)氧基]甲基}-5-{[(2S)-2-({(2S)-2-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基]-3-甲基丁酰基}氨基)丙酰基]氨基}苯基)-7,8-双脱氧-L-甘油-L-古洛糖-辛酸(合成子AAO)的合成
2.69.1 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)-2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)苄基)氧基)羰基)(3-(甲氨基)-3-氧丙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
如实例2.67.1所述用实例1.39取代实例1.32.2来制备标题化合物。MS(ESI)m/e1352.6(M-H)-。
2.69.2 2,6-脱水-8-(2-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基甲酰基)氧基]甲基}-5-{[(2S)-2-({(2S)-2-[2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基]-3-甲基丁酰基}氨基)丙酰基]氨基}苯基)-7,8-双脱氧-L-甘油-L-古洛糖-辛酸
如实例2.58.7所述用实例2.67.1取代实例2.58.6制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.88(s,2H),9.93(d,1H),8.36-8.22(m,2H),8.04(d,1H),7.80(d,2H),7.76(d,0H),7.62(d,1H),7.56-7.42(m,5H),7.41-7.33(m,3H),7.28(s,1H),7.22(d,1H),7.08(s,2H),6.95(d,1H),5.01(d,3H),4.96(s,2H),4.39(p,1H),4.22(dd,1H),4.12(d,2H),3.89(t,2H),3.80(d,2H),3.34(t,2H),3.22(d,2H),3.13(dt,2H),3.02(t,2H),2.94(t,1H),2.86-2.71(m,1H),2.60(s,2H),2.54(d,4H),2.29(q,2H),2.09(d,3H),2.07-1.90(m,3H),1.60-1.48(m,1H),1.39-1.00(m,17H),0.97-0.74(m,15H)。MS(ESI)m/e 1489.5(M-H)-。
2.70 2,6-脱水-8-(2-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}[3-(甲氨基)-3-氧丙基]氨基甲酰基)氧基]甲基}-5-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(2-{(3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-[(2-磺基乙氧基)甲基]吡咯烷-1-基}乙酰胺基)-3-甲基丁酰基]氨基}丙酰基]氨基}苯基)-7,8-双脱氧-L-甘油-L-古洛糖-辛酸(合成子AAP)的合成
向实例2.66.15(17mg)在N,N-二甲基甲酰胺(320μL)中的溶液中添加O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(19mg)和N,N-二异丙基乙胺(17μL)。将反应混合物搅拌5分钟，并添加实例2.69.1(39mg)和N,N-二异丙基乙胺(36μL)在N,N-二甲基甲酰胺(320μL)中的溶液。将反应混合物搅拌2小时并用N,N-二甲基甲酰胺(2mL)稀释。将溶液过滤，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)进行纯化以提供标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.82(s,1H),8.15(d,1H),8.00(dd,2H),7.75(d,1H),7.58(d,1H),7.44(ddd,5H),7.32(td,2H),7.25(s,1H),7.18(d,1H),7.03(s,2H),6.92(d,1H),6.76(s,1H),4.97(s,2H),4.92(s,2H),4.61(t,1H),4.33(p,1H),4.21-4.08(m,2H),3.98(d,1H),3.84(t,2H),3.40-3.27(m,3H),3.21(s,1H),3.14-3.03(m,2H),2.98(t,2H),2.90(t,1H),2.81-2.50(m,4H),2.38-2.20(m,3H),2.05(s,3H),2.01-1.90(m,2H),1.88-1.74(m,1H),1.60-1.43(m,1H),1.36-0.95(m,14H),0.95-0.62(m,13H)。MS(ESI)m/e 1710.5(M-H)-。
2.71 6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-3-[1-({3-[2-({[(4-{[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]氨基}-3-甲基丁酰基]氨基}戊酰基]氨基}苯基)甲氧基]羰基}氨基)乙酰胺基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸(合成子ABF)的合成
如实例2.2所述用实例1.40.11取代实施1.3.2制备标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.96(s,1H),8.03(dd,2H),7.78(d,2H),7.59(dd,3H),7.53-7.39(m,3H),7.35(q,2H),7.30-7.23(m,3H),7.20(d,1H),6.98(s,2H),6.94(d,1H),4.94(d,4H),4.38(t,1H),4.17(dd,1H),3.87(t,2H),3.78(s,2H),3.35(t,2H),3.00(t,3H),2.94(s,0H),2.16(d,1H),2.09(s,3H),1.95(d,1H),1.74-1.27(m,10H),1.13(dq,5H),0.87-0.71(m,12H)。MS(ESI)m/e 1355.5(M-H)-。
2.72 8-[2-({[(3-氨基-3-氧丙基){2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}氨基甲酰基]氧基}甲基)-5-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(2-{(3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-[(2-磺基乙氧基)甲基]吡咯烷-1-基}乙酰胺基)-3-甲基丁酰基]氨基}丙酰基]氨基}苯基]-2,6-脱水-7,8-双脱氧-L-甘油-L-古洛糖-辛酸(合成子ZZ)的合成
2.72.1 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)-2-(2-((3R,4R,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)苄基)氧基)羰基)(3-氨基-3-氧丙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
向实例2.65.19(66mg)和实例1.32.2(6mL)的冷(0℃)溶液中添加N,N-二异丙胺(0.026mL)和1-羟基苯并***水合物(16.23mg)。将反应混合物缓慢温热至室温并搅拌过夜。向该反应混合物中添加水(1mL)和LiOH H2O(20mg)，并将该混合物在室温搅拌3小时。将混合物用三氟乙酸酸化，过滤，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)进行纯化以提供标题化合物。MS(ESI)m/e 1338.5(M-H)-。
2.72.2 8-[2-({[(3-氨基-3-氧丙基){2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基}-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基]甲基}-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基)氧基]乙基}氨基甲酰基]氧基}甲基)-5-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(2-{(3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-[(2-磺基乙氧基)甲基]吡咯烷-1-基}乙酰胺基)-3-甲基丁酰基]氨基}丙酰基]氨基}苯基]-2,6-脱水-7,8-双脱氧-L-甘油-L-古洛糖-辛酸
向2-((3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-((2-磺基乙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)乙酸(17mg)在N,N-二甲基甲酰胺(320μL)中的溶液中添加O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(19mg)和N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(17μL)。将反应混合物搅拌5分钟，并添加至实例2.72.1(50mg)和N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(36μL)在N,N-二甲基甲酰胺(320μL)中的溶液中。将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物用N,N-二甲基甲酰胺/水(1/1，1mL)稀释，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)进行纯化以提供标题化合物。1H NMR(501MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.82(s,1H),8.15(d,1H),8.00(dd,2H),7.75(d,1H),7.58(d,1H),7.44(ddd,5H),7.32(td,2H),7.25(s,1H),7.18(d,1H),7.03(s,2H),6.92(d,1H),6.76(s,1H),4.97(s,2H),4.92(s,2H),4.61(t,1H),4.33(p,1H),4.21-4.08(m,2H),3.98(d,1H),3.84(t,2H),3.40-3.27(m,3H),3.21(s,1H),3.14-3.03(m,2H),2.98(t,2H),2.90(t,1H),2.81-2.50(m,4H),2.38-2.20(m,3H),2.05(s,3H),2.01-1.90(m,2H),1.88-1.74(m,1H),1.60-1.43(m,1H),1.36-0.95(m,14H),0.95-0.62(m,13H)。MS(ESI)m/e 1697.5(M-H)-。
2.73 N-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-L-缬氨酰基-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-2-羧基吡啶-3-基}-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基]-5,7-二甲基三环[3.3.1.13,7]癸-1-基}氧基)乙基](2-磺乙基)氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-N5-氨基甲酰基-L-鸟氨酰胺(合成子CZ)的合成
将实例1.44.2(100mg)和4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰胺基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯(购自Synchem公司，114mg)在N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中在水-冰浴中冷却，并且添加N,N-二异丙基乙胺(0.15mL)。将混合物在0℃下搅拌30分钟，并且然后在室温下搅拌过夜。使用吉尔森***通过反相HPLC(用含有0.1％v/v三氟乙酸的20％-60％乙腈水溶液洗脱)纯化反应，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 12.85(s,1H),9.99(s,1H),8.04(t,2H),7.75-7.82(m,2H),7.40-7.63(m,6H),7.32-7.39(m,2H),7.24-7.29(m,3H),6.99(s,2H),6.95(d,1H),6.01(s,1H),4.83-5.08(m,4H),4.29-4.48(m,1H),4.19(t,1H),3.84-3.94(m,2H),3.80(d,2H),3.14-3.29(m,2H),2.87-3.06(m,4H),2.57-2.69(m,2H),2.03-2.24(m,5H),1.89-2.02(m,1H),1.53-1.78(m,2H),1.26-1.53(m,8H),0.89-1.27(m,12H),0.75-0.88(m,12H)。MS(ESI)m/e 1452.2(M+H)+。
2.74 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((((2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)-4-((S)-2-((S)-2-(2-((3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-((2-磺基乙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)苄基)氧基)羰基)(2-磺乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸(合成子TX)的合成
2.74.1 3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((R)-2-((R)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)-2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)苄基)氧基)羰基)(2-磺乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸
向实例2.65.19(70mg)和实例1.44.2(58.1mg)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的冷(0℃)溶液中添加N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(0.026mL)。将反应缓慢温热至室温并搅拌过夜。向反应混合物中加入水(1mL)和LiOH H2O(20mg)。将混合物在室温搅拌3小时。将混合物用三氟乙酸酸化，过滤，并在吉尔森***(C18柱)上通过反相HPLC(用含有0.1％三氟乙酸的20％-80％乙腈水溶液洗脱)进行纯化以给出标题产物。
MS(ESI)m/e 1564.4(M-H)-。
2.74.2 6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((((2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-羧基-3,4,5-三羟基四氢-2H-吡喃-2-基)乙基)-4-((S)-2-((S)-2-(2-((3S,5S)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-氧代-5-((2-磺基乙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰胺基)苄基)氧基)羰基)(2-磺乙基)氨基)乙氧基)-5,7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸
通过用实例2.74.1取代实施2.66.17中的实例2.66.16制备标题化合物。1H NMR(400MHz,二甲基亚砜-d6)δppm 9.85(s,1H),8.17(brd,1H),8.01(d,2H),7.77(d,1H),7.59(d,1H),7.53(d,1H),7.43(m,4H),7.34(m,3H),7.19(d,1H),7.06(s,2H),6.96(d,1H),4.99(m,2H),4.95(s,2H),4.63(t,1H),4.36(t,1H),4.19(br m,1H),4.16(d,1H),3.98(d,1H),3.87(brt,2H),3.81(br d,2H),3.73(brm,1H),3.63(t,2H),3.53(m,2H),3.44(m,4H),3.31(t,2H),3.21(br m,2H),3.17(m,2H),3.00(m,2H),2.92(br m,1H),2.75(m,3H),2.65(brm,3H),2.35(br m,1H),2.07(s,3H),1.98(br m,2H),1.85(m,1H),1.55(br m,1H),1.34(brm,1H),1.26(brm,6H),1.09(brm,7H),0.93(brm,1H),0.87,0.83,0.79(所有d,总共12H)。MS(ESI)m/e 1733.4(M-H)-。
实例3：通过鼠杂交瘤技术产生大鼠和小鼠抗CD98单克隆抗体
为了鉴定CD98特异性抗体，使用杂交瘤技术分离鼠单克隆抗CD98抗体。
通过跗关节免疫接种大鼠和小鼠(Kamala等人,Hock immunization:A humanealternative to mouse footpad injections[跗关节免疫接种：鼠标足垫注射的人性化替代品]J Immunol Methods[免疫学方法杂志]2007,328:204-214)。人CD98的重组细胞外结构域(ECD)用作免疫原。通过与重组hCD98-ECD(ELISA)或MCF7细胞(流式细胞术)结合来确定血清滴度。免疫剂量各自含有20μg重组hCD98-ECD(表1)，用于初免和加强免疫。将GerbuMM佐剂(GERBU Biotechnik GmbH Cat#3001.6001)与抗原混合以诱导免疫应答。简而言之，将20μg抗原在PBS中稀释，并通过强力涡旋与等体积的佐剂混合。将体积为20μL-25μL的佐剂-抗原溶液吸入合适的注射器中用于动物注射，并在小鼠腿部跗关节注射。每只动物接受初次免疫接种，然后每三天加强一次，共进行5至6次免疫。
表1用于杂交瘤生成和筛选的人和食蟹猴的重组CD98胞外域(ECD)的氨基酸序列
杂交瘤融合和筛选。
在融合之前培养鼠骨髓瘤细胞系(NS0-小鼠骨髓瘤，PTA-4796)的细胞以达到对数期阶段。从免疫动物中分离***细胞，并使用RoboSep富集IgG产生型细胞。使用电融合技术将富集的细胞与骨髓瘤细胞融合(参见WO2014/093786)。将融合的“杂交细胞”分配到96孔板中并在选择性培养基中培养。在融合后七至十天肉眼观察存活的杂交瘤集落。一旦集落在融合后七至十天达到足够大小，使用重组人和食蟹猴CD98-ECD通过基于ELISA的筛选测试每个孔的上清液(表1)。
将ELISA板用人或食蟹猴CD98-ECD以2μg/ml在碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液中于4℃下包被过夜，在室温下用PBS中的2％牛奶封闭1小时，用PBS+0.05％吐温-20(PBST)洗涤三次。将在PBS+0.1％BSA(牛血清白蛋白)中1:3稀释的杂交瘤上清液加入板中，并在室温下孵育1小时。用PBST洗涤ELISA板三次。在PBST+10％Superblock中以1:5000稀释的与HRP(辣根过氧化物酶)偶联的山羊抗小鼠(或抗大鼠)IgG；将50μL/孔加入板中并在室温下孵育1小时。将板用PBST洗涤三次。在室温下将TMB溶液(英杰公司(InVitrogen))加入到每个孔中，50μL/孔。添加盐酸终止反应。用分光光度计在450nm的波长下读板。
测试来自阳性杂交瘤命中的选定上清液与细胞表面人或食蟹猴CD98的结合。两个细胞系用于基于流式细胞术的筛选：内源性表达人CD98的MCF7细胞和稳定转染以表达食蟹猴CD98的3T12细胞。
将筛选细胞系以1×106细胞/孔分配到96孔(圆底)平板中，并与稀释的杂交瘤上清液在4℃孵育20分钟。然后用FACS缓冲液(PBS+2％FBS)洗涤细胞三次。使用山羊抗小鼠(或抗大鼠)Ig-PE(藻红蛋白)进行检测。将分泌与人或食蟹猴细胞表面CD98结合的抗体的杂交瘤转移至24孔板，并通过单细胞分选亚克隆以确保细胞系的克隆性。使用BDPharmingen大鼠免疫球蛋白同种型ELISA试剂盒(BD Pharmingen Rat ImmunoglobulinIsotyping ELISA Kit，Cat：557081)或Thermo Scientific Pierce快速ELISA小鼠mAb同种型试剂盒(Thermo Scientific Pierce Rapid ELISA Mouse mAb Isotyping Kit，Cat:37503)
测定每种单克隆抗体的同种型。
将产生显示出高特异性结合活性的抗体的杂交瘤克隆亚克隆，扩大并纯化用于进一步表征。总共选择五个小鼠抗CD98杂交瘤mAb(Ab1-Ab5)和十个大鼠抗CD98杂交瘤mAb(Ab6-Ab15)用于进一步研究(表2)。
表2.抗CD98鼠杂交瘤抗体
MW＝在质谱中观察到的分子量；*＝半乳糖基化(G0)重链峰的MW。
实例4.抗CD98鼠杂交瘤单克隆抗体的结合亲和力。
在25℃使用抗Fc捕获测定方法通过在Biacore T100/T200仪器(GE健康护理公司(GE Healthcare)，皮斯卡塔韦(Piscataway)，新泽西州)上进行的基于表面等离子体共振的测量，测定这些纯化的小鼠和大鼠单克隆抗CD98抗体对纯化的重组CD98蛋白(细胞外结构域，ECD)的结合动力学。在测定缓冲液HBS-EP+(10mM Hepes，pH 7.4，150mM NaCl，3mMEDTA，0.05％吐温20)中进行结合动力学测量。例如，使用标准胺偶联试剂盒根据制造商的说明和程序，以25μg/ml将大约8000RU的在10mM乙酸钠(pH 4.5)中稀释的抗-Fc(物种特异性)多克隆抗体(赛默飞科学公司(Thermo Fisher Scientific Inc.)，罗克福德(Rockford)，伊利诺伊州)直接固定在CM5研究级生物传感器芯片上。生物传感器表面上未反应的部分用乙醇胺封闭。将作为配体捕获的测试抗体在运行缓冲液中稀释至～0.5μg/mL，并以10μL/min的流速注射到抗-Fc表面上。在80μL/min的连续流速下观察CD98结合和解离。具有C末端His标签的人和食蟹猴CD98 ECD用于该研究(表3)。在每个循环后，使用pH1.5的10mM甘氨酸-HCl再生抗-Fc捕获表面。在测定期间，所有测量均参考单独的捕获表面(即，没有捕获的测试抗体)，并且使用仅有缓冲液的注射(无抗原)用于双重参考。对于动力学分析，使用Biacore T100/T200评估软件将来自1:1Langmuir结合模型的速率方程同时地、全局地并且具有包括的质量转移项地拟合至多个参考的抗原结合曲线。CD98结合的缔合和解离速率常数，ka(M-1s-1)和kd(s-1)，以及抗体与靶抗原之间相互作用的平衡解离常数KD(M)由以下推导：在3.7nM-900nM的不同抗原浓度(作为3倍稀释系列)下进行动力学结合测量。结果显示在下表4中。
表3.用于结合亲和力测定的重组CD98细胞外结构域(ECD)的氨基酸序列
表4.与人和食蟹猴CD98结合的抗CD98鼠杂交瘤抗体的Biacore动力学
hu＝人；cy＝食蟹猴；ECD＝细胞外结构域；*＝kd手动设定为5E-06s-1，这是测定的检测下限；E+Y＝×10Y；E-Y＝×10-Y
实例5.来自抗CD98鼠杂交瘤单克隆抗体的Bcl-xL抑制剂抗体-药物偶联物(ADC)的体外效力。
Bcl-xL抑制性ADC的偶联
使用如下所述的九种示例性方法之一合成示例性ADC。
材料及方法
方法A.将BOND-BREAKER三(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液(10mM，0.017mL)溶液加入到预热至37℃的抗体(10mg/mL，1mL)溶液中。将反应混合物在37℃下保持1小时。将还原的抗体溶液加入到合成子溶液(3.3mM，0.160mL，在DMSO中)中并轻轻混合30分钟。将反应溶液加载到脱盐柱(PD10，在使用前用DPBS 3x洗涤)，然后是DPBS(1.6mL)并用另外的DPBS(3mL)洗脱。将纯化的ADC溶液通过0.2微米，低蛋白质结合的13mm注射器-过滤器过滤，并在4℃下储存。
方法B.将BOND-BREAKER三(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液(10mM，0.017mL)的溶液添加至预加热至37℃的抗体的溶液(10mg/mL，1mL)中。将反应混合物在37℃保持1小时。通过添加含硼缓冲液(0.05mL，0.5M，pH8)将还原的抗体的溶液调节至pH＝8，添加至合成子(3.3mM，0.160mL于DMSO中)的溶液中，并轻轻混合4小时。将该反应溶液加载至脱盐柱(PD10，使用前用DPBS(3x)洗涤)，随后加载DPBS(1.6mL)并用额外的DPBS(3mL)洗脱。将纯化的ADC溶液通过0.2微米、低蛋白结合13mm注射器式滤器进行过滤并储存在4℃。
方法C.使用PerkinElmer Janus(部件AJL8M01)机器人液体处理***进行结合，该***配备有I235/96吸头ModuLar分配技术(ModuLar Dispense Technology，MDT)，包含夹持器臂(部件7400358)的一次性头部(部件70243540)，和在扩展隔板上的8吸头Varispan移液臂(部分7002357)。PerkinElmer Janus***使用WinPREP版本4.8.3.315软件进行控制。
使用MDT将Pall过滤板5052用100μL 1x DPBS预湿润。将真空施加到过滤板上10秒钟，并且然后进行5秒钟的通气以从过滤板上除去DPBS。将50％的DPBS中的蛋白A树脂(GEMabSelect Sure)浆料倒入配备有磁球的8孔储存器中，并通过使移动磁体通过储存板下方来混合树脂。使用配备有1mL导电吸头的8吸头Varispan臂抽吸树脂(250μL)并转移至96孔过滤板。施加真空2个循环以除去大部分缓冲液。使用MDT，抽吸150μL的1xPBS并分配到保持树脂的96孔滤板中。施加真空，从树脂中除去缓冲液。漂洗/真空循环重复3次。将2mL，96孔收集板安装在Janus隔板上，并且MDT将450μL的5x DPBS转移至收集板以供以后使用。如上文针对条件A所述制备作为(200μL)DPBS中的溶液的还原的抗体(2mg)并预装入96孔板中。将还原的抗体的溶液转移到含有树脂的过滤板孔中，并通过在孔内每次循环重复抽吸/分配100μL体积45秒将混合物用MDT混合。经5分钟的过程重复抽吸/分配循环共5次。对过滤板施加真空2个循环，从而除去过量的抗体。将MDT吸头用水冲洗5个循环(200μL，总体积1mL)。MDT将150μL DPBS抽吸并分配到含有结合树脂的抗体的过滤板孔中，并施加真空两个循环。洗涤和真空顺序再重复两次。在最后一次真空循环后，将100μL的1x DPBS分配到含有结合树脂的抗体的孔中。然后MDT收集每种3.3mM二甲基亚砜的合成子溶液各30μL，以96孔形式铺板，并将其分配到含有在DPBS中的结合树脂的抗体的过滤板中。通过在孔内每次循环重复抽吸/分配100μL体积45秒将含有偶联混合物的孔用MDT混合。经5分钟的过程重复抽吸/分配顺序总共5次。施加真空2个循环以除去过量的合成子废弃。将MDT吸头用水冲洗5个循环(200μL，总体积1mL)。MDT抽吸并分配DPBS(150μL)至偶联混合物，并施加真空两个循环。洗涤和真空顺序再重复两次。然后MDT夹具将过滤板和套环移动到保持站。MDT将含有450μL10x DPBS的2mL收集板置于真空歧管内。MDT通过放置过滤板和套环重新组装真空歧管。将MDT吸头用水冲洗5个循环(200μL，总体积1mL)。MDT抽吸并分配100μL的IgG洗脱缓冲液3.75(Pierce)至偶联混合物中。一分钟后，施加真空2个循环，并将洗脱液捕获在含有450μL 5xDPBS的接收板中。将抽吸/分配顺序再重复3次，以在DPBS中在pH 7.4下递送浓度范围为1.5mg/mL-2.5mg/mL的ADC样品。
方法D.使用PerkinElmer Janus(产品型号AJL8M01)机器人液体处理***进行偶联，该***配备有I235/96尖头ModuLar Dispense Technology(MDT)、包含夹持器臂(产品型号7400358)的一次性头部(产品型号70243540)和在扩展平台上的8-尖头Varispan移液臂(产品型号7002357)。使用WinPREP版本4.8.3.315软件控制PerkinElmer Janus***。
使用MDT将Pall过滤板5052用100μL 1x DPBS预湿润。将真空施加到过滤板上10秒钟，并且然后进行5秒钟的通气以从过滤板上除去DPBS。将50％的DPBS中的蛋白A树脂(GEMabSelect Sure)浆料倒入配备有磁球的8孔储存器中，并通过使移动磁体通过储存板下方来混合树脂。使用配备有1mL导电吸头的8吸头Varispan臂抽吸树脂(250μL)并转移至96孔过滤板。向过滤板施加真空2个循环以除去大部分缓冲液。MDT抽吸并分配150μL DPBS到含有树脂的过滤板孔中。洗涤和真空顺序再重复两次。将2mL，96孔收集板安装在Janus隔板上，并且MDT将450μL的5x DPBS转移至收集板以供以后使用。如上文针对条件A所述制备作为(200μL)DPBS中的溶液的还原的抗体(2mg)并分配入96孔板中。然后MDT收集每种3.3mM二甲基亚砜的合成子溶液各30μL，以96孔形式铺板，并将其分配到加载有在DPBS中的还原的抗体的板中。通过在孔内重复抽吸/分配100μL体积两次将混合物用MDT混合。5分钟后，将偶联反应混合物(230μL)转移到含有树脂的96孔滤板中。通过在孔内每次循环重复抽吸/分配100μL体积45秒将含有偶联混合物和树脂的孔用MDT混合。经5分钟的过程重复抽吸/分配顺序总共5次。施加真空2个循环以除去过量的合成子和蛋白废弃。将MDT吸头用水冲洗5个循环(200μL，总体积1mL)。MDT抽吸并分配DPBS(150μL)至偶联混合物，并施加真空两个循环。洗涤和真空顺序再重复两次。然后MDT夹具将过滤板和套环移动到保持站。MDT将含有450μL10x DPBS的2mL收集板置于真空歧管内。MDT通过放置过滤板和套环重新组装真空歧管。将MDT吸头用水冲洗5个循环(200μL，总体积1mL)。MDT抽吸并分配100μL的IgG洗脱缓冲液3.75(P)至偶联混合物中。一分钟后，施加真空2个循环，并将洗脱液捕获在含有450μL 5x DPBS的接收板中。将抽吸/分配顺序再重复3次，以在DPBS中在pH 7.4下递送浓度范围为1.5mg/mL-2.5mg/mL的ADC样品。
方法E.在室温，将BOND-BREAKER三(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液(10mM，0.017mL)的溶液添加至抗体的溶液(10mg/mL，1mL)中。将反应混合物加热至37℃持续75分钟。将还原的抗体的溶液冷却至室温并添加至合成子的溶液(10mM，0.040mL，于DMSO中)中，随后添加含硼缓冲液(0.1mL，1M，pH 8)。使反应溶液在室温静置3天，加载至脱盐柱(PD10，在使用前用DPBS(3x5mL)洗涤)上，随后加载DPBS(1.6mL)，并用额外的DPBS(3mL)洗脱。将纯化的ADC溶液通过0.2微米、低蛋白结合13mm注射器式滤器进行过滤并储存在4℃。
方法F.使用Tecan Freedom Evo自动化液体处理***进行偶联。将抗体的溶液(10mg/mL)预加热至37℃并等分至加热的96深孔板中，每孔(0.3mL)量为3mg并保持在37℃。将BOND-BREAKER三(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液(1mM，0.051mL/孔)的溶液添加至抗体，并将该反应混合物保持在37℃持续75分钟。将还原的抗体的溶液转移至未加热的96深孔板。将合成子的相应溶液(5mM，0.024mL于DMSO中)添加至具有还原的抗体的孔并处理15分钟。将反应溶液加载至脱盐柱(NAP5，在使用前用DPBS(4x)洗涤)的平台(8×12)上，随后加载DPBS(0.3mL)并用额外的DPBS(0.8mL)洗脱。将纯化的ADC溶液进一步等分用于分析并储存在4℃。
方法G.使用Tecan Freedom Evo机器人液体处理***进行偶联。将抗体溶液(10mg/mL)预热至37℃并以3mg/孔(0.3mL)的量等分至加热的96深孔板上并保持在37C。将BOND-BREAKER三(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液(1mM，0.051mL/孔)的溶液加入到抗体中，并将反应混合物在37℃下保持75分钟。将还原的抗体的溶液转移到未加热的96深孔板中。将合成子的相应溶液(5mM，0.024mL/孔，在DMSO中)加入具有还原的抗体的孔中随后添加硼酸缓冲液(pH＝8，0.03mL/孔)并处理3天。将反应溶液加载到脱盐柱(NAP5，在使用前用DPBS 4x洗涤)的平台上(8×12)，然后是DPBS(0.3mL)并用另外的DPBS(0.8mL)洗脱。将纯化的ADC溶液进一步等分用于分析并储存在4℃。
方法H.将BOND-BREAKER三(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液(10mM，0.17mL)的溶液在室温下加入到抗体溶液(10mg/mL，10mL)中。将反应混合物加热至37℃，保持75分钟。将合成子溶液(10mM，0.40mL，在DMSO中)加入到冷却至室温的还原的抗体的溶液中。将反应溶液在室温下静置30分钟。用饱和硫酸铵溶液(～2-2.5mL)处理ADC溶液，直至形成轻微混浊的溶液。将该溶液加载到用在A相中的30％B相(A相：1.5M硫酸铵，25mM磷酸盐；B相：25mM磷酸盐，25％异丙醇v/v)平衡的丁基琼脂糖柱(5mL丁基琼脂糖凝胶)上。具有DAR2(也称为“E2”)和DAR4(也称为“E4”)的各个级分在应用多大达75％B相的梯度A/B后洗脱。使用离心浓缩器或TFF浓缩每个ADC溶液并切换缓冲液用于更大规模。将纯化的ADC溶液通过0.2微米，低蛋白质结合的13mm注射器-过滤器过滤，并在4℃下储存。
方法I.在室温，将BOND-BREAKER三(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液(10mM，0.17mL)的溶液添加至抗体的溶液(10mg/mL，10mL)中。将反应混合物加热至37℃持续75分钟。将合成子的溶液(10mM，0.40mL，于DMSO中)添加至冷却至室温的还原的抗体的溶液中。使反应溶液在室温静置30分钟。将ADC的溶液用饱和硫酸铵溶液(约2-2.5mL)处理直至形成轻微浑浊的溶液。将此溶液加载在用相A中的30％相B(相A：1.5M硫酸铵、25mM磷酸盐；相B：25mM磷酸盐、25％异丙醇v/v)平衡的丁基琼脂糖柱(5mL的丁基琼脂糖)上。将具有DAR2(也称为“E2”)和DAR4(也称为“E4”)的单个级分在应用梯度A/B升高至75％相B时洗脱。使用离心集中器或TFF将每个ADC溶液浓缩或进行缓冲液转换用于更大规模，将ADC溶液用含硼缓冲液(0.1mL，1M，pH8)处理。将反应溶液在室温静置3天，然后加载至脱盐柱(PD10，在使用前用DPBS(3x5mL)洗涤)上，随后加载DPBS(1.6mL)，并用额外的DPBS(3mL)洗脱。将纯化的ADC溶液通过0.2微米、低蛋白结合13mm注射器式滤器进行过滤并储存在4℃。
如上所述合成的示例性ADC的DAR和聚集百分比分别通过LC-MS和尺寸排阻色谱(SEC)测定。
LC-MS一般方法
使用与Agilent LC/MSD TOF 6220ESI质谱仪接口的Agilent 1100HPLC***进行LC-MS分析。将ADC用5mM(终浓度)BOND-BREAKER TCEP溶液(赛默飞科学公司(ThermoScientific)，罗克福德(Rockford)，伊利诺伊州)还原，加载到蛋白质微型包装(ProteinMicrotrap)(拜客姆生物资源公司(Michrom Bioresorces)，奥本(Auburn)，加利福尼亚州)脱盐盒上，并在环境温度下用0.2分钟内10％B到75％B的梯度洗脱。流动相A为含0.1％甲酸(FA)的H20，流动相B为含0.1％FA的乙腈，流速为0.2ml/min。使用Agilent MassHunter TM采集软件获得共洗脱轻链和重链的电喷雾电离飞行时间质谱。使用MassHunter软件的最大熵特征对提取的强度与m/z光谱进行解卷积，以确定每个还原的抗体片段的质量。通过对轻链和重链的裸峰和修饰峰的强度加和，从解卷积光谱计算DAR，通过将强度乘以所附接药物的数量来归一化。将加和的归一化强度除以强度的总和，并且两条轻链和两条重链的加和结果产生完整ADC的最终平均DAR值。
生物偶联物的硫代琥珀酰亚胺水解可以通过电喷雾质谱法监测，因为向偶联物中加入水导致偶联物的可观察分子量增加18道尔顿。当通过完全还原人IgG1抗体的链间二硫化物并将马来酰亚胺衍生物与每个所得半胱氨酸偶联来制备偶联物时，抗体的每个轻链将包含单个马来酰亚胺修饰，并且每个重链将包含三个马来酰亚胺修饰(见图1)。在所得硫代琥珀酰亚胺完全水解后，轻链的质量将因此增加18道尔顿，而每条重链的质量将增加54道尔顿。这在图2中说明，其中示例性马来酰亚胺药物-接头(合成子TX，分子量X1736Da)与完全还原的抗体huAb108的偶联和随后的水解。重链上存在多个糖基化位点导致观察到的质量的异质性。
尺寸排阻色谱一般方法
使用Shodex KW802.5柱在0.2M磷酸钾pH 6.2中用0.25mM氯化钾和15％IPA以0.75ml/min的流速进行尺寸排阻色谱。通过积分曲线下面积确定每种高分子量和单体洗脱液在280nm处的峰面积吸光度。通过将高分子量洗脱液的280nM的峰面积吸光度除以高分子量和单体洗脱液的280nM的峰面积吸光度之和乘以100％来确定偶联物样品的％聚集体分数。
鼠抗CD98抗体的偶联
如上所述，首先将上述15种纯化的鼠抗CD98mAb与Bcl-xL抑制剂有效负载CZ根据方法A偶联。在生长抑制测定中在表达内源性CD98的三种人癌细胞系中测试这些ADC的活性：HCC38乳腺癌细胞系，Molt-4人急性淋巴细胞白血病细胞系和Jurkat急性T细胞白血病细胞系。简而言之，将每孔3000个细胞接种到96孔板中，并用连续稀释的ADC处理2天(Molt-4细胞)、4天(HCC38细胞)或5天(Jurkat细胞)。按照制造商的说明，通过CellTiter-试剂(Promega G7572)测定活细胞数。使用Graphpad Prism软件分析数据，并且将IC50值作为实现50％的细胞增殖抑制的ADC浓度进行报告(表5)。
表5.与抗CD98鼠杂交瘤抗体偶联的Bcl-xL抑制剂ADC的体外效力。
DAR＝药物/抗体比率；MS＝质谱；SEC＝尺寸排阻色谱；
*MSL109是与巨细胞病毒(CMV)糖蛋白H结合的人源化IgG1抗体。它用作阴性对照mAb。
实例6.来自抗CD98鼠杂交瘤单克隆抗体的Bcl-xL抑制剂抗体-药物偶联物(ADC)的体内效力。
使用Ab3-CZ和Ab5-CZ作为NCI-H146(人小细胞肺癌)异种移植模型中的实例测试抗CD98杂交瘤mAb偶联物的体内功效。根据方法A，将两种抗CD98杂交瘤mAb，Ab3-CZ和Ab5-CZ与Bcl-xL抑制剂合成子CZ偶联。NCI-H146获自美国典型培养物保藏中心(ATCC，马纳萨斯，维吉尼亚州)。将细胞在RPMI-1640培养基(英杰公司，加利福尼亚州卡尔斯巴德)中以单层培养，该培养基补充有10％胎牛血清(FBS，Hyclone公司，犹他州洛根)。为了产生异种移植物，将5×106个(NCI-H146)活细胞皮下接种到免疫缺陷雌性SCID-bg小鼠(CharlesRiver Laboratories[查尔斯河实验室]，马萨诸塞州威尔明顿)的右肋腹中。注射体积为0.2mL，并且由Matrigel(BD，富兰克林湖(Franklin Lakes)，新泽西州)组成。肿瘤尺寸匹配在大约212mm3。将抗体和偶联物配制在pH 7.2的磷酸盐缓冲盐水中并腹膜内注射。注射量不超过200μL。治疗在肿瘤尺寸匹配后24小时内开始。在治疗开始时，小鼠体重大约21g。每周对肿瘤体积进行两到三次评估。通过电子卡尺测量肿瘤的长度(L)和宽度(W)，并根据以下等式计算体积：V＝L×W2/2。当肿瘤体积达到3,000mm3或发生皮肤溃疡时，对小鼠实施安乐死。每笼饲养八只小鼠。食物和水可以随意获得。在开始实验之前使小鼠适应动物设施至少一周的时间段。将动物在12小时光照的光照阶段：12小时的黑暗时间安排(06:00开灯)下测试。抗CD98偶联物(10mg/kg)以腹膜内单剂量(QDx1)给予。使用人IgG对照抗体(MSL109，与巨细胞病毒(CMV)糖蛋白H结合的人源化IgG1抗体)作为阴性对照剂。
为了指治疗剂的功效，使用治疗应答的振幅(TGI最大)，持久性(TGD)和应答频率(CR，PR，OR)的参数。用CD98靶向的ADC抑制NCI-H146异种移植物生长的功效由下表6说明。在表中，为了表示功效，使用治疗应答的振幅参数(TGI最大)和持久性(TGD)。TGI最大是实验过程中最大的肿瘤生长抑制。通过100*(1-Tv/Cv)(其中Tv和Cv分别是治疗组和对照组的平均肿瘤体积)计算肿瘤生长抑制。TGD或肿瘤生长延迟是相对于对照组达到1cm3体积所需的***的延长的时间。通过100*(Tt/Ct-1)(其中Tt和Ct分别是处理组和对照组的达到1cm3的中值时间段)计算TGD。特定组中的应答幅度的分布由完全应答者(CR)，部分应答者(PR)和总体应答者(OR)的频率给出。CR是至少三次测量的肿瘤负荷为25mm3的组内小鼠的百分比。PR是肿瘤负荷大于25mm3但小于治疗开始时体积的一半的组内的小鼠的百分比(至少进行三次测量)。OR是CR和PR的总和。
表6.单剂量的靶向CD98的Bcl-xLi ADC治疗后NCI-H146异种移植肿瘤生长的抑制
实例7.产生重组抗CD98嵌合抗体。
通过逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)从杂交瘤细胞中拯救对应于抗CD98鼠杂交瘤抗体的重链和轻链可变区(VH和VL)。鉴定的可变区分别在人IgG1(L234A，L235A)重链和κ轻链恒定区的背景下作为嵌合抗体在哺乳动物宿主细胞中表达。表7列出了产生的这些抗CD98嵌合体mAb及其相应的杂交瘤来源。这些嵌合体mAb的可变区序列总结于表8和9中。
表7.重组抗CD98嵌合体抗体列表
表8.来自小鼠杂交瘤的嵌合抗CD98抗体的可变区序列
表9.来自大鼠杂交瘤的抗CD98抗体的可变区序列
实例8.重组抗CD98嵌合抗体的体外结合活性。
针对重组CD98细胞外结构域蛋白(ECD)和表达CD98的细胞测量重组抗CD98嵌合mAb的体外结合活性。简言之，如实例4中所述，通过基于表面等离子体共振的测量确定人和食蟹猴CD98 ECD的抗CD98嵌合体mAb的结合动力学。表10报道了CD98结合的缔合和解离速率常数，ka(M-1s-1)和kd(s-1)，以及抗体与靶抗原之间相互作用的平衡解离常数KD(M)。通过流式细胞术针对稳定转染以人CD98的CHO-K1细胞系和稳定转染以表达食蟹猴CD98的3T12细胞系，评估抗CD98嵌合体mAb与细胞表面上的CD98的结合。使用Graphpad Prism软件分析数据，并将EC50值报告为达到对表达CD98的细胞的最大结合的50％的抗体浓度(表10)。
表10.抗CD98嵌合体mAb与人和食蟹猴CD98的结合。
hu＝人；cy＝食蟹猴；ECD＝细胞外结构域；
E+Y＝×10Y；E-Y＝×10-Y。
实例9.来自抗CD98嵌合抗体的Bcl-xL抑制剂ADC的体外效力。
首先将10种选择的抗CD98嵌合mAb以小规模(0.5mg至2mg)与Bcl-xL抑制剂合成子CZ按照方法A偶联，如实例5中所述。在表达内源性CD98，NCI-H146小细胞肺癌细胞系，H2170非小细胞肺癌细胞系和Molt-4人急性淋巴细胞白血病细胞系的三种人癌细胞系中，在生长抑制测定中测试这些ADC的活性。简言之，将每孔3000个细胞接种到96孔板中，并用连续稀释的ADC处理。4天后，按照制造商的说明，通过CellTiter-试剂(Promega G7572)测定活细胞数。使用Graphpad Prism软件分析数据，并且将IC50值作为实现50％的细胞增殖抑制的ADC浓度进行报告(表11)。
表11.来自抗CD98嵌合抗体的偶联的Bcl-xL抑制剂ADC的体外效力。
DAR＝药物/抗体比率；MS＝质谱；SEC＝尺寸排阻色谱
*MSL109是与巨细胞病毒(CMV)糖蛋白H结合的人源化IgG1抗体。它用作阴性对照mAb。
实例10.纯化为含有均质DAR2或DAR4种类的Bcl-xL抑制剂ADC的体外效力
为了评估含有同源DAR2(也称为E2)和DAR4(也称为E4)种类的Bcl-xL抑制剂ADC的效力，将抗CD98嵌合chAb3与Bcl-xL抑制剂有效负载CZ偶联为宽DAR4.1，随后根据表10中记录的方法进行疏水相互作用色谱(HIC)纯化以制备DAR2和DAR4种类。在表达CD98的三种人癌细胞系(EBC-1非小细胞肺癌系，H2170非小细胞肺癌系和Molt-4人急性淋巴细胞白血病细胞系)中，在生长抑制测定中测试这些HIC纯化的DAR种类的活性。3-4天后，按照制造商的说明，通过CellTiter-试剂(Promega G7572)测定活细胞数。使用Graphpad Prism软件分析数据，并且将IC50值作为实现50％的细胞增殖抑制的ADC浓度进行报告(表12)。
表12.来自抗CD98嵌合抗体的偶联的Bcl-xL抑制剂ADC的体外效力。
DAR＝药物/抗体比率；MS＝质谱；SEC＝尺寸排阻色谱
*MSL109是与巨细胞病毒(CMV)糖蛋白H结合的人源化IgG1抗体。它用作阴性对照mAb。
实例11.抗CD98嵌合体mAb ADC的体内功效
然后将抗CD98嵌合体mAb与Bcl-xL抑制剂合成子CZ根据表13中所示的方法偶联，并在实例5中描述，并且在EBC-1(人肺鳞状细胞癌)异种移植模型中评价它们的体内功效。EBC-1获自日本研究生物资源细胞库(Japanese Collection of Research BioresourcesCell Bank)(JCRB，大阪，日本)，并使用含有10％FBS的MEM培养基培养。为了产生异种移植物，将5×106个EBC-1活细胞皮下接种到免疫缺陷雌性SCID-bg小鼠(Charles RiverLaboratories[查尔斯河实验室]，马萨诸塞州威尔明顿)的右肋腹中。注射体积为0.2mL，接种物由1:1的S-MEM和Matrigel混合物组成。肿瘤尺寸匹配在大约200mm3。将抗体和偶联物配制在pH 7.2的磷酸盐缓冲盐水中并腹膜内注射。注射量不超过200μl。治疗在肿瘤尺寸匹配后24小时内开始。在治疗开始时，小鼠体重大约21g-22g。每周对肿瘤体积进行两到三次评估。通过电子卡尺测量肿瘤的长度(L)和宽度(W)，并根据以下等式计算体积：V＝L×W2/2。当肿瘤体积达到3,000mm3或发生皮肤溃疡时，对小鼠实施安乐死。每笼饲养八只小鼠。食物和水可以随意获得。在开始实验之前使小鼠适应动物设施至少一周的时间段。将动物在12小时光照的光照阶段：12小时的黑暗时间安排(06:00开灯)下测试。抗CD98偶联物(10mg/kg)以腹膜内单剂量(QDx1)给予。人IgG对照抗体(AB095，识别破伤风类毒素的人IgG1抗体参见Larrick等，1992，Immunological Reviews[免疫生物学评论]69-85)用作阴性对照剂。
为了指治疗剂的功效，如实例6中所描述使用治疗应答的振幅(TGI最大)，持久性(TGD)和应答频率(CR，PR，OR)的参数。用CD98靶向的ADC抑制EBC-1异种移植物生长的功效由下表13说明。
实例12.ChAb3和ChAb15抗CD98嵌合体mAb的人源化
选择抗体chAb3和chAb15用于人源化和基于其作为Bcl-xL抑制剂偶联物的有利特性的另外修饰。
通过应用CDR移植方法使ChAb3和chAb15人源化。基于chAb3和chAb15的可变重链(VH)及可变轻链(VL)CDR序列产生人源化抗体。具体而言，选择人类种系序列来构建CDR移植的人源化chAb3和chAb15抗体，其中chAb3和chAb15的VH及VL链的CDR域被移植至不同的人重链及轻链受体序列上。
1.chAb3人源化
基于与本发明的单克隆抗体chAb3的VH和VL序列的比对，选择以下已知的人序列：
·IGHV3-49*03和IGHJ1*01，用于构建重链受体序列
·IGHV3-15*01和IGHJ1*01，作为构建重链的备用受体
·IGHV3-72*01和IGHJ1*01，作为构建重链的备用受体
·IGKV4-1*01和IGKJ4*01，用于构建轻链受体序列
·IGKV2-40*01和IGKJ4*01，作为构建轻链的备用受体
通过将chAb3的相应VH和VL CDR移植到相应的受体序列中，制备CDR-移植的、人源化的和修饰的VH和VL序列。另外，为了产生具有潜在框架回复突变的人源化抗体，可以通过从头合成可变域、或诱变寡核苷酸引物和聚合酶链式反应、或均通过本领域已知的方法，鉴定突变或将突变引入CDR移植的抗体序列中。针对CDR移植中的每一者，如下构建回复突变与其他突变的不同组合。这些突变的残基编号是基于Kabat编号***。
对于重链hCL-chAb3VH.1，使以下游标残基及VH/VL介接残基中的一个或多个发生回复突变：Q3-->K，F37-->V，V48-->L，A78-->L。其他突变包括以下：A24-->T，D73-->N。
对于重链hCL-chAb3VH.2，使以下游标残基及VH/VL介接残基中的一个或多个发生回复突变：Q3-->K，V48-->L。其他突变包括以下：A24-->T，D73-->N，N76-->S，T77-->I，T94-->R。
对于重链hCL-chAb3VH.3，使以下游标残基及VH/VL介接残基中的一个或多个发生回复突变：Q3-->K，V48-->L，A93-->T。其他突变包括以下：A24-->T，D73-->N，N76-->S，S77-->I。
对于轻链hCL-chAb3VL.1，使以下游标残基及VH/VL介接残基中的一个或多个发生回复突变：P43-->S
对于轻链hCL-chAb3VL.2，没有残基回复突变。
将鼠单克隆chAb3抗体的以下人源化可变区克隆至IgG表达载体中，用于功能表征(表14)。
表14.chAb3人源化可变区的序列。
*hCL-Ab3VH.1是含有IGHV3-49*03和IGHJ1*01框架序列的CDR-移植的人源化chAb3VH。
*hCL-Ab3VH.1a是基于.1的人源化设计，并且包含5个提出的框架回复突变：A24T、F37V、V48L、D73N、A78L。
*hCL-Ab3VH.1b是在.1和.1a之间的中间设计，并且包含4个提出的框架回复突变：Q3K、F37V、V48L、A78L。
*hCL-Ab3VH.1c是基于.1b的设计，消除了卡特(Carter)残基回复突变。Itcontains 2丙osed frameworkback-突变(s):Q3K,V48L。
*hCL-Ab3VH.2是含有IGHV3-15*01和IGHJ1*01框架序列的CDR-移植的人源化chAb3VH。
*hCL-Ab3VH.2a是基于.2的人源化设计，并且包含6个提出的框架回复突变：A24T、V48L、D73N、N76S、T77I、T94R。
*hCL-Ab3VH.2b是在.2和.2a之间的中间设计，并且包含2个提出的框架回复突变：Q3K、V48L。
*hCL-Ab3VH.3是含有IGHV3-72*01和IGHJ1*01框架序列的CDR-移植的人源化chAb3VH。
*hCL-Ab3VH.3a是基于.3的人源化设计，并且包含6个提出的框架回复突变：A24T、V48L、D73N、N76S、S77I、A93T。
*hCL-Ab3VH.3b是在.3和.3a之间的中间设计，并且包含3个提出的框架回复突变：Q3K、V48L、A93T。
*hCL-Ab3VH.3c是基于.3b的设计，消除了卡特(Carter)残基回复突变。Itcontains 2丙osed frameworkback-突变(s):Q3K,V48L。
*hCL-Ab3VL.1是含有IGKV4-1*01和IGKJ4*01框架序列的CDR-移植的人源化chAb3VL。
*hCL-Ab3VL.1a是基于.1的人源化设计，并且包含1个提出的框架回复向突变：P43S。
*hCL-Ab3VL.2是含有IGKV2-40*01和IGKJ4*01框架序列的CDR-移植的人源化chAb3VL。
2.chAb15人源化
基于与本发明的单克隆抗体chAb15的VH和VL序列的比对，选择以下已知的人序列：
·IGHV3-30*01(0-1)和IGHJ3*01，用于构建重链受体序列
·IGHV3-7*01和IGHJ3*01，作为构建重链的备用受体
·IGHV1-46*01和IGHJ3*01，作为构建重链的备用受体
·IGKV4-1*01和IGKJ2*01，用于构建轻链受体序列
·IGKV2-40*01和IGKJ2*01，作为构建轻链的备用受体
通过将chAb15的相应VH和VL CDR移植到相应的受体序列中，制备CDR-移植的、人源化的和修饰的VH和VL序列。另外，为了产生具有潜在框架回复突变的人源化抗体，可以通过从头合成可变域、或诱变寡核苷酸引物和聚合酶链式反应、或均通过本领域已知的方法，鉴定突变或将突变引入CDR移植的抗体序列中。针对CDR移植中的每一者，如下构建回复突变与其他突变的不同组合。这些突变的残基编号是基于Kabat编号***。
对于重链hCL-Ab15VH.1，使以下游标残基及VH/VL介接残基中的一个或多个发生回复突变：S77-->T
对于重链hCL-Ab15VH.2，使以下游标残基及VH/VL介接残基中的一个或多个发生回复突变：M48-->V、V67-->F、M69-->I、T73-->N、V78-->L。其他突变包括以下：Q1-->E、G49-->A、M80-->L。
对于轻链hCL-Ab15VL.1，使以下游标残基及VH/VL介接残基中的一个或多个发生回复突变：P43-->S、V85-->I
对于轻链hCL-Ab15VL.2，使以下游标残基及VH/VL介接残基中的一个或多个发生回复突变：S22-->N、V85-->I
将鼠单克隆chAb15抗体的以下人源化可变区克隆至IgG表达载体中，用于功能表征(表15)。
表15.chAb15人源化可变区的序列。
*hCLAb15VH.1z是含有IGHV3-30*01(0-1)和IGHJ3*01框架序列的CDR-移植的人源化chAb15VH。
*hCLAb15VH.1基于.1z，其中Q1E改变以防止焦谷氨酸形成。
*hCLAb15VH.1a是基于.1的人源化设计，并且包含1个提出的框架回复向突变：N76S。
*hCL-Ab15VH.2是含有IGHV3-7*01和IGHJ3*01框架序列的CDR-移植的人源化chAb15VH。
*hCL-Ab15VH.2a是基于.1的人源化设计，并且包含1个提出的框架回复向突变：S77T。
*hCL-Ab15VH.3z是含有IGHV1-46*01和IGHJ3*01框架序列的CDR-移植的人源化chAb15VH。
*hCL-Ab15VH.3基于.3z，其中Q1E改变以防止焦谷氨酸形成。
*hCL-Ab15VH.3a是基于.3的人源化设计，并且包含7个提出的框架回复突变：M48V、G49A、V67F、M69I、T73N、V78L、M80L。
*hCL-Ab15VH.3b是在.3和.3a之间的中间设计，并且包含5个提出的框架反向突变：M48V、V67F、M69I、T73N、V78L。
*hCLAb15VL.1是含有IGKV4-1*01和IGKJ2*01框架序列的CDR-移植的人源化chAb15VL。
*hCLAb15VL.1a是基于.1的人源化设计，并且包含3个提出的框架回复向突变：P43S、S76R、V85I。
*hCL-Ab15VL.2是含有IGKV2-40*01和IGKJ2*01框架序列的CDR-移植的人源化chAb15VL。
*hCL-Ab15VL.2a是基于.2的人源化设计，并且包含2个提出的框架回复向突变：S22N，V85I。
人源化chAb3和人源化chAb15在本文中分别称为huAb3和huAb15，并在下表16中列出。
表16.huAb3和huAb15的可变区序列
huAb3和huAb15的另外工程化
进行huAb3和huAb15的进一步工程化以鉴定和去除具有降低抗体的亲和力、效力、稳定性和同质性的潜在的翻译后修饰。这些氨基酸残基在huAb3和huAb15的可变区中通过粗体加下划线表示。通过PCR除去这些残基。产生含有所鉴定氨基酸的点突变的变体，包括除M、C、N、D、G、S或P外的所有可能的氨基酸。所有变体均表达为全长抗体，并评估CD98结合。表17中列出了具有这些潜在不利残基的人源化抗体，其保持与人CD98的结合。
人源化chAb3(huAb3)
VH序列：hCLAb3VH.1a
VL序列：hCLAb3VL.1a
人源化chAb15(huAb15)
VH序列：hCLAb15VH.1a
VL序列：hCLAb15VL.1a
表17.来自嵌合体mAb chAb3和chAb15的人源化克隆
人源化克隆 亲本嵌合体 VH框架 VL框架
huAb3v1 chAb3 IGHV3-49 IGKV4-1
huAb3v2 chAb3 IGHV3-49 IGKV4-1
huAb15v1 chAb15 IGHV3-30 IGKV4-1
huAb15v2 chAb15 IGHV3-30 IGKV4-1
huAb15v3 chAb15 IGHV3-30 IGKV4-1
huAb15v4 chAb15 IGHV3-30 IGKV4-1
huAb15v5 chAb15 IGHV3-30 IGKV4-1
huAb15v6 chAb15 IGHV3-30 IGKV4-1
huAb15v7 chAb15 IGHV3-30 IGKV4-1
这些进一步工程化的人源化抗CD98 mAb的VH和VL序列列于表18中。
表18.人源化和进一步工程化的chAb3和chAb15克隆的可变区序列转化为IgG
用于纯化的重组CD98蛋白(细胞外结构域，ECD)的重组抗CD98嵌合抗体的结合动力学通过基于表面等离子体共振的测量来确定，如实例4中所述。结果显示在表19中。
表19.与人和食蟹猴CD98结合的抗CD98人源化抗体的Biacore动力学。
hu＝人；cy＝食蟹猴；ECD＝细胞外结构域；
E+Y＝×10Y；E-Y＝×10-Y
实例13.Bcl-xL抑制剂与人源化抗CD98单克隆抗体的偶联
如实例5中所述，根据方法A测试上述九种人源化抗CD98 mAb与Bcl-xL抑制剂合成子CZ的偶联。如表20中所示，针对9种抗CD98mAb观察到沉淀。
表20.人源化抗CD98 mAb与Bcl-xL抑制剂CZ负载偶联
实例14.人源化抗CD98 mAb的抗体框架重新工程化以改善与Bcl-xL抑制剂的偶联效率
为了评估不同的抗体框架是否可以影响抗CD98 mAb与Bcl-xL抑制剂合成子的偶联特性，表达了与表14和15中列出的抗体相比使用替代框架的chAb3和chAb15的人源化变体的作为全长IgG的不同迭代，并针对人CD98结合进行评估。保持与人CD98结合的人源化框架工程化抗体列于表21中。
表21.人源化抗CD98 mAb的框架工程化
这些重新工程化的抗CD98 mAb的VH和VL序列列于表22中。
表22.转化为IgG的人源化和框架工程化的chAb3和chAb15克隆的可变区序列
表23.人源化抗CD98抗体的重链和轻链序列
纯化的重组CD98蛋白的重组抗-CD98嵌合抗体的结合动力学(细胞外结构域，ECD；SEQ ID NO:126和127))，如实例3中所述，通过基于表面等离子体共振的测量来确定，结果如表24所示。
表24.与人和食蟹猴CD98结合的抗CD98人源化抗体的Biacore动力学
hu＝人；cyno＝食蟹猴；ECD＝细胞外结构域；
E+Y＝×10Y；E-Y＝×10-Y
实例15.一些框架重新工程化的抗CD98 mAb具有与Bcl-xL抑制剂的改善的偶联特性
根据方法E，测试这些重新工程化的人源化抗CD98 mAb与Bcl-xL抑制剂负载CZ和TX的偶联，如实例5中所示(表25和26)。就通过DAR(药物/抗体比率)反映的偶联效率，基于浓度的估计恢复和通过尺寸排阻色谱测量的低聚集水平而言，huAb108和huAb110在与CZ和TX负载偶联方面表现最佳。以上在实例5中描述了DAR和聚集体百分比测定的程序。
表25.重新工程化的人源化抗CD98单克隆抗体的合成子CZ偶联
表26.重新工程化的人源化抗CD98单克隆抗体的合成子TX偶联
注意，huAb106，huAb108和huAb110的VH区均在残基74(表19)的位置处含有天冬酰胺(N)，其导致这两种mAb的另外N-糖基化。将huAb106、huAb108和huAb110的VH中的该天冬酰胺(N)突变为苏氨酸(T)，分别产生mAb huAbv106v1、huAb108v1和huAb110v1(表22)。根据方法E，huAb108v1和huAb110v1不再是与Bcl-xL抑制剂合成子CZ和TX偶联的最佳选择，如实例5中所述。
实例16.从选择的重新工程化的抗CD98 mAb衍生的Bcl-xL抑制剂ADC的体外效力
如实例5中所述，根据方法G，选择huAb102，huAb104，huAb108，huAb110抗CD98 mAb与若干种Bcl-xL抑制剂合成子偶联。在Molt-4人急性淋巴细胞白血病细胞系中在生长抑制测定中测试这些ADC的活性。简言之，将96孔板中的每孔5000个Molt-4细胞用连续稀释的ADC处理72小时。按照制造商的说明，通过ATPlite 1step试剂(PerkinElmer 6016739)测定活细胞数。使用Graphpad Prism软件分析数据，并且将IC50值作为实现50％的细胞增殖抑制的ADC浓度进行报告(表27)。
表27.从重新工程化的人源化抗CD98 mAb衍生的Bcl-xL抑制剂ADC的体外效力
MSL109是与巨细胞病毒(CMV)糖蛋白H结合的人源化IgG1抗体。它用作阴性对照mAb。
实例17.从选择的重新工程化的抗CD98 mAb衍生的Bcl-xL抑制剂ADC的体内效力
如实例6中所述，在NCI-H146(人小细胞肺癌)异种移植模型中测试所选人源化抗CD98 mAb偶联物的体内抗肿瘤功效。表28中报道肿瘤生长抑制为TGI最大。
表28.单剂量的靶向CD98的Bcl-xLi ADC治疗后NCI-H146异种移植肿瘤生长的抑 制
实例18.从选择的重新工程化的抗CD98 mAb衍生的Bcl-xL抑制剂ADC的体内效力
在异种移植的人肺癌模型A549和NCI-H460中测定根据通用方法E与DAR 2.3制备的偶联至合成子TX的抗CD98 huAb108的体内功效。细胞系A549和NCI-H460获自美国典型培养物保藏中心(ATCC，马纳萨斯，弗吉尼亚州)。将A549细胞系作为侧腹异种移植物在小鼠中进一步传代以改善异种移植肿瘤生长，从而产生A549-FP3细胞系。将细胞在RPMI-1640培养基(英杰公司，加利福尼亚州卡尔斯巴德)中以单层培养，该培养基补充有10％胎牛血清(FBS，Hyclone公司，犹他州洛根)。为了产生异种移植物，将5×106个(A549和NCI-H460)活细胞皮下接种到免疫缺陷雌性SCID-bg小鼠(Charles River Laboratories[查尔斯河实验室]，马萨诸塞州威尔明顿)的右肋腹中。注射体积为0.2ml并且由1:1的S-MEM:MatrigelMatrigel(BD公司，新泽西州富兰克林湖)构成。肿瘤尺寸匹配在大约223mm3。将抗体、偶联物和多西他赛配制在0.9％氯化钠中用于注射。注射量不超过200μl。治疗在肿瘤尺寸匹配后24小时内开始。在治疗开始时，小鼠体重大约21g。每周对肿瘤体积进行两到三次评估。通过电子卡尺测量肿瘤的长度(L)和宽度(W)，并根据以下等式计算体积：V＝L×W2/2。当肿瘤体积达到3,000mm3或发生皮肤溃疡时，对小鼠实施安乐死。每笼饲养八只小鼠。食物和水可以随意获得。在开始实验之前使小鼠适应动物设施至少一周的时间段。将动物在12小时光照的光照阶段：12小时的黑暗时间安排(06:00开灯)下测试。抗CD98偶联物(10mg/kg)以腹膜内单剂量(QDx1)给予。多西他赛(7.5mg/kg)作为单剂量(QDx1)静脉内给予。将人IgG对照抗体(Ab095)用作阴性对照剂。
为了指示治疗剂的效力，使用振幅(TGImax)、持久性(TGD)参数。表29和30说明了用CD98靶向的ADC抑制A549和NCI-H460异种移植物生长的功效。在表中，为了表示功效，使用治疗应答的振幅参数(TGI最大)和持久性(TGD)。TGI最大是实验过程中最大的肿瘤生长抑制。通过100*(1-Tv/Cv)(其中Tv和Cv分别是治疗组和对照组的平均肿瘤体积)计算肿瘤生长抑制。TGD或肿瘤生长延迟是相对于对照组达到1cm3体积所需的***的延长的时间。通过100*(Tt/Ct-1)(其中Tt和Ct分别是处理组和对照组的达到1cm3的中值时间段)计算TGD。
表29.靶向CD98的Bcl-xLi ADC在组合或没有组合多西他赛的情况下对A549 FP3 异种移植肿瘤生长的抑制
表30.靶向CD98的Bcl-xLi ADC在组合或没有组合多西他赛的情况下对NCI-H460 异种移植肿瘤生长的抑制
序列总结
通过引用结合
贯穿本申请引用的所有参考文献、专利、未决专利申请和公开的专利的内容清楚地特此通过引用而结合。
等同物
本领域技术人员仅使用常规实验就将认识到或能够确定本文描述的本发明的具体实施例的许多等同物。此类等同物意在由以下权利要求书涵盖。
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.一种分离的抗CD98抗体，其中该抗体包含
重链可变区，该重链可变区包含
具有SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：79的氨基酸序列的CDR1，
具有SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92或SEQ ID NO：104的氨基酸序列的CDR2，
具有SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：97的氨基酸序列的CDR3；以及
轻链可变区，该轻链可变区包含
具有SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：83的氨基酸序列的CDR1；
具有SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：45的氨基酸序列的CDR2；
具有SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：95、或SEQ ID NO：102的氨基酸序列的CDR3。
2.根据权利要求1所述的抗CD98抗体，其包含重链可变域和轻链可变域，该重链可变域包含SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：118所示的氨基酸序列，该轻链可变域包含SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中该抗体包含人IgG1恒定结构域的重链免疫球蛋白恒定结构域，其中该人IgG1恒定结构域包含SEQ ID NO：154或SEQ ID NO：155的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的抗CD98抗体，其中该抗体包含重链和轻链，该重链包含SEQ IDNO：158、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：162、或SEQ ID NO：164所示的氨基酸序列，该轻链包含SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：163、或SEQ ID NO：165所示的氨基酸序列。
5.一种药物组合物，其包含权利要求1-4中任一项的抗CD98抗体和药学上可接受的载体。
6.一种抗CD98抗体药物偶联物(ADC)，其包含经由接头与药物偶联的如权利要求1-4中任一项所述的抗CD98抗体。
7.如权利要求6所述的ADC，其中该药物是澳瑞他汀或吡咯并苯并二氮杂(PBD)。
8.如权利要求6所述的ADC，其中该药物是Bcl-xL抑制剂。
9.一种抗人CD98(hCD98)抗体药物偶联物(ADC)，其包含经由接头与抗人CD98(hCD98)抗体连接的药物，其中该药物是根据结构式(IIa)或(IIb)的Bcl-xL抑制剂：
(IIa)
(IIb)
其中：
Ar1选自 并且任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基；
Ar2选自 并且任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基，其中式(IIb)的#-N(R4)-R13-Z2b-取代基在Ar2的任何能够被取代的原子处附接至Ar2；
Z1选自N、CH、C-卤基和C-CN；
Z2a、Z2b、和Z2c各自彼此独立地选自键、NR6、CR6aR6b、O、S、S(O)、SO2、NR6C(O)、NR6aC(O)NR6b、和NR6C(O)O；
R1选自氢、甲基、卤基、卤代甲基、乙基和氰基；
R2选自氢、甲基、卤基、卤代甲基和氰基；
R3选自氢、低级烷基和低级杂烷基；
R4选自氢、低级烷基、单环环烷基、单环杂环基和低级杂烷基，或与R13的原子一起形成具有3至7个之间的环原子的环烷基环或杂环基环；其该低级烷基、单环环烷基、单环杂环基和低级杂烷基任选地被一个或多个卤基、氰基、羟基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、C(O)NR6aR6b、S(O)2NR6aR6b、NHC(O)CHR6aR6b、NHS(O)CHR6aR6b、NHS(O)2CHR6aR6b、S(O)2CHR6aR6b或S(O)2NH2基团取代；
R6、R6a和R6b各自彼此独立地选自氢
低级烷基、低级杂烷基、任选地取代的单环环烷基和单环杂环基，或与来自R13的原子一起形成具有3至7个之间的环原子的环烷基环或杂环基环；
R10选自氰基、OR14、SR14、SOR14、SO2R14、SO2NR14aR14b、NR14aR14b、NHC(O)R14和NHSO2R14；
R11a和R11b各自彼此独立地选自氢、卤基、甲基、乙基、卤代甲基、羟基、甲氧基、CN、和SCH3；
R12选自氢、卤基、氰基、低级烷基、低级杂烷基、环烷基、和杂环基，其中该烷基、杂烷基、环烷基、和杂环基任选地被一个或多个卤基、氰基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、NHC(O)CHR6aR6b、NHS(O)CHR6aR6b、NHS(O)2CHR6aR6b或S(O)2CHR6aR6b基团取代；
R13选自键、任选地取代的低级亚烷基、任选地取代的低级杂亚烷基、任选地取代的环烷基或任选地取代的杂环基；
R14选自氢、任选地取代的低级烷基和任选地取代的低级杂烷基；
R14a和R14b各自彼此独立地选自氢、任选地取代的低级烷基、和任选地取代的低级杂烷基，或与它们所键合的氮原子一起形成任选地取代的单环环烷基环或单环杂环基环；
R15选自氢、卤基、C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、和C1-4卤代烷基和C1-4羟基烷基，其条件是当R15存在时，R4不是C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4环烷基或C1-4羟基烷基，其中该R4C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基和C1-4羟基烷基任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：OCH3、OCH2CH2OCH3、和OCH2CH2NHCH3；并且
#代表与接头的附接点。
10.如权利要求9所述的ADC，其是根据结构式(I)的化合物：
(I)
其中：
D是式(IIa)或(IIb)的Bcl-xL抑制剂药物；
L是接头；
Ab是抗hCD98抗体；
LK代表将接头(L)连接至抗hCD98抗体(Ab)的共价键；并且
m是范围从1至20的整数。
11.如权利要求10所述的ADC，其中该Bcl-xL抑制剂选自由以下化合物组成的组，对这些化合物的修饰在于：在对应于结构式(IIa)或(IIb)的#位置的氢不存在，从而形成单价基团：
6-[1-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1，2，3，4-四氢喹啉-7-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-2H-1，4-苯并噁嗪-6-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1，2，3，4-四氢喹喔啉-6-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-羟基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-([1，3]噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-([1，3]噻唑并[4，5-b]吡啶-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[5-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[1-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1，2，3，4-四氢喹啉-7-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(氧杂环丁烷-3-基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[6-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3，5-二甲基-7-{2-[(2-氨磺酰基乙基)氨基]乙氧基}三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[3-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-{甲基[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-甲氧基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]吡啶-2-甲酸；
6-[5-氨基-8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-[3-(甲基氨基)丙-1-炔-1-基]-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[7-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[7-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]吡啶-2-甲酸；
6-[7-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-甲基-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3，5-二甲基-7-(2-{[1-(甲磺酰基)哌啶-4-基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3，5-二甲基-7-(2-{[1-(甲磺酰基)氮杂环丁-3-基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲唑-5-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-5-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((2-(N，N-二甲基氨磺酰基)乙基)氨基)乙氧基)-5，7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(3-羟丙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{[3-(二甲基氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3，5-二甲基-7-(2-{[3-(甲基氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙酰氨基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{8-[(1，3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基}吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3-[(2-氨基乙基)硫烷基]-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(3-氨基丙基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；和
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{5-[(1，3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]喹啉-3-基}吡啶-2-甲酸。
12.如权利要求9-11中任一项所述的ADC，其中该抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：115或SEQ ID NO：118所示的氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：112或SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列。
13.如权利要求9-12中任一项所述的ADC，其中该抗hCD98抗体选自以下组成的组：
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO：17中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：87中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：16中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO：19中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQID NO：7中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：13中所示氨基酸序列的轻链CDRl结构域；
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO：17中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：90中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：16中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO：19中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQID NO：7中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：13中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO：97中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：92中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：79中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO：95中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQID NO：45中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：83中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；以及
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO：97中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：104中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：79中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO：102中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：45中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：83中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域。
14.一种药物组合物，其包含有效量的如权利要求7-13中任一项所述的ADC、和药学上可接受的载体。
15.一种药物组合物，其包含ADC混合物和药学上可接受的载体，该ADC混合物包含如权利要求7-14中任一项所述的ADC中的多种。
16.一种用于治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者给予治疗有效量的如权利要求7-13中任一项所述的ADC。
17.一种用于抑制或减少患有实体瘤的受试者中实体瘤生长的方法，所述方法包括向该患有实体瘤的受试者给予有效量的如权利要求7-13中任一项所述的ADC，使得该实体瘤生长被抑制或减少。
18.如权利要求16-17中任一项所述的方法，其中将该ADC与额外的药剂或额外的治疗组合给予。
19.一种制备根据权利要求10所述的ADC的方法，其中
该CD98抗体包含huAb102、huAb014、huAb108、或huAb110的重链和轻链CDR；
该方法包括：
将水溶液中的抗体用有效量的二硫化物还原剂在30℃-40℃处理至少15分钟，并且然后将该抗体溶液冷却至20℃-27℃；
向所还原的抗体溶液中添加水/二甲基亚砜的溶液，该水/二甲基亚砜的溶液包含选自2.1至2.31和2.34至2.72的组的合成子(表5)；
将该溶液的pH调节为pH 7.5至8.5；
允许该反应运行48至80小时，以形成ADC；
其中如通过电喷雾质谱法测量的，对于琥珀酰亚胺每次水解为琥珀酰胺，质量偏移18±2amu；并且
其中任选地将该ADC通过疏水作用色谱纯化。
20.一种抗CD98抗体药物偶联物(ADC)，其选自由式(i)或(ii)组成的组：
其中m是从1至6的整数，任选地是从2至6；并且
其中Ab是抗CD98抗体，其包含选自下组的重链可变区和轻链可变区，该组由以下组成：
a)含有SEQ ID NO：17中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：87中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：16中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO：19中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：7中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：13中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；
b)含有SEQ ID NO：108中所示氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO：107中所示氨基酸序列的轻链可变区；
c)含有SEQ ID NO：17中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：90中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：16中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO：19中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：7中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：13中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；
d)含有SEQ ID NO：110中所示氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO：107中所示氨基酸序列的轻链可变区；
e)含有SEQ ID NO：97中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：92中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：79中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO：95中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：45中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：83中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；
f)含有SEQ ID NO：115中所示氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO：112中所示氨基酸序列的轻链可变区；
g)含有SEQ ID NO：97中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：104中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：79中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO：102中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：45中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：83中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；以及
h)含有SEQ ID NO：118中所示氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO：117中所示氨基酸序列的轻链可变区。

Claims (128)

1.一种分离的抗体或其抗原结合部分，与人CD98结合，其中该抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列的CDR3，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO：19的氨基酸序列的CDR3。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含具有SEQ ID NO：87的氨基酸序列的CDR2，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR2。
3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含具有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的CDR1，该轻链可变区包含具有任一SEQ ID NO：13的氨基酸序列的CDR1。
4.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含具有SEQ ID NO：90的氨基酸序列的CDR2，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR2。
5.如权利要求1或4所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含具有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的CDR1，该轻链可变区包含具有任一SEQ ID NO：13的氨基酸序列的CDR1。
6.一种分离的抗体或其抗原结合部分，与人CD98结合，其中该抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含具有SEQ ID NO：97的氨基酸序列的CDR3，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO：95的氨基酸序列的CDR3。
7.如权利要求6所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含具有SEQ ID NO：92的氨基酸序列的CDR2，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO：45的氨基酸序列的CDR2。
8.如权利要求6或7所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含具有SEQ ID NO：79的氨基酸序列的CDR1，该轻链可变区包含具有任一SEQ ID NO：83的氨基酸序列的CDR1。
9.一种分离的抗体或其抗原结合部分，与人CD98结合，其中该抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含具有SEQ ID NO：97的氨基酸序列的CDR3，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO：102的氨基酸序列的CDR3。
10.如权利要求9所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含具有SEQ ID NO：104的氨基酸序列的CDR2，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO：45的氨基酸序列的CDR2。
11.如权利要求9或10所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含具有SEQ ID NO：79的氨基酸序列的CDR1，该轻链可变区包含具有任一SEQ ID NO：83的氨基酸序列的CDR1。
12.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分为IgG同种型。
13.如权利要求12所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分是IgG1或IgG4同种型。
14.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中如通过表面等离子体共振测量的，该抗体或其抗原结合部分具有1.5×10-8或更低的KD。
15.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含重链和轻链，该重链包含：包含如SEQID NO：16所示的氨基酸序列的CDR1、包含如SEQ ID NO：87所示的氨基酸序列的CDR2、包含如SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列的CDR3，该轻链包含：包含如SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列的CDR1、包含如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的CDR2、以及包含如SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列的CDR3。
16.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含重链和轻链，该重链包含：包含如SEQID NO：16所示的氨基酸序列的CDR1、包含如SEQ ID NO：90所示的氨基酸序列的CDR2、包含如SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列的CDR3，该轻链包含：包含如SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列的CDR1、包含如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的CDR2、以及包含如SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列的CDR3。
17.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含重链和轻链，该重链包含：包含如SEQID NO：79所示的氨基酸序列的CDR1、包含如SEQ ID NO：92所示的氨基酸序列的CDR2、包含如SEQ ID NO：97所示的氨基酸序列的CDR3，该轻链包含：包含如SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列的CDR1、包含如SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列的CDR2、以及包含如SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列的CDR3。
18.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含重链和轻链，该重链包含：包含如SEQID NO：79所示的氨基酸序列的CDR1、包含如SEQ ID NO：104所示的氨基酸序列的CDR2、包含如SEQ ID NO：97所示的氨基酸序列的CDR3，该轻链包含：包含如SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列的CDR1、包含如SEQ ID NO：45所示的氨基酸序列的CDR2、以及包含如SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列的CDR3。
19.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含含有SEQ ID NO：108所示的氨基酸序列的重链可变域以及含有SEQ ID NO：107所示的氨基酸序列的轻链可变域。
20.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含：包含SEQ ID NO：108中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：108具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或包含SEQ ID NO：107中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：107具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
21.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含含有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列的重链可变域以及含有SEQ ID NO：107所示的氨基酸序列的轻链可变域。
22.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含：包含SEQ ID NO：110中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：110具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或包含SEQ ID NO：107中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：107具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
23.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含含有SEQ ID NO：115所示的氨基酸序列的重链可变域以及含有SEQ ID NO：112所示的氨基酸序列的轻链可变域。
24.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含：包含SEQ IDNO：115中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：115具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或包含SEQ IDNO：112中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：112具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
25.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含含有SEQ ID NO：118所示的氨基酸序列的重链可变域以及含有SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列的轻链可变域。
26.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其包含：包含SEQ ID NO：118中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：118具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或包含SEQ ID NO：117中所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：117具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
27.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分结合食蟹猴CD98。
28.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分与CD98具有选自下组的解离常数(KD)，该组由以下组成：最多约10-7M；最多约10-8M；最多约10-9M；最多约10-10M；最多约10-11M；最多约10-12M；以及最多约10-13M。
29.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分包含人IgM恒定域、人IgG1恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域、人IgG4恒定域、人IgA恒定域或人IgE恒定域的重链免疫球蛋白恒定域。
30.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其是具有四条多肽链的IgG抗体，所述四条多肽链是两条重链和两条轻链。
31.如权利要求29所述的抗体或其抗原结合部分，其中该人IgG1恒定域包含SEQ IDNO：154或SEQ ID NO：155的氨基酸序列。
32.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体或其抗原结合部分进一步包含含有人Igκ恒定域或人Igλ恒定域的轻链免疫球蛋白恒定域。
33.一种抗CD98抗体或其抗原结合部分，其与如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合部分竞争。
34.前述权利要求中任一项所述的抗体，其是单克隆IgG抗体。
35.如权利要求34所述的抗体，其包含κ轻链。
36.一种抗人CD98(hCD98)抗体，其包含：包含SEQ ID NO：158中所示的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO：159中所示的氨基酸序列的轻链。
37.一种抗人CD98(hCD98)抗体，其包含：包含SEQ ID NO：160中所阐述的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO：161中所阐述的氨基酸序列的轻链。
38.一种抗人CD98(hCD98)抗体，其包含：包含SEQ ID NO：162中所阐述的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO：163中所阐述的氨基酸序列的轻链。
39.一种抗人CD98(hCD98)抗体，其包含：包含SEQ ID NO：164中所阐述的氨基酸序列的重链及包含SEQ ID NO：165中所阐述的氨基酸序列的轻链。
40.一种药物组合物，其包含如权利要求1-39中任一项所述的抗CD98抗体或其抗原结合部分，以及药学上可接受的载体。
41.一种抗CD98抗体药物偶联物(ADC)，其包含经由接头与药物偶联的如权利要求或1-39中任一项所述的抗CD98抗体。
42.如权利要求41所述的ADC，其中该药物是澳瑞他汀或吡咯并苯并二氮杂(PBD)。
43.如权利要求41所述的ADC，其中该药物是Bcl-xL抑制剂。
44.如权利要求41-43中任一项所述的ADC，其中该接头是可裂解的接头。
45.如权利要求41-43中任一项所述的ADC，其中该接头是不可裂解的接头。
46.如权利要求41-43中任一项所述的ADC，其中该接头是马来酰亚胺基己酰基、缬氨酸-瓜氨酸、p-氨基苄基醇(mc-vc-PABA)。
47.一种抗人CD98(hCD98)抗体药物偶联物(ADC)，其包含经由接头与抗人CD98(hCD98)抗体连接的药物，其中该药物是根据结构式(IIa)或(IIb)的Bcl-xL抑制剂：
(IIa)
(IIb)
其中：
Ar1选自 并且任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基；
Ar2选自 并且任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤基、羟基、硝基、低级烷基、低级杂烷基、C1-4烷氧基、氨基、氰基和卤代甲基，其中式(IIb)的#-N(R4)-R13-Z2b-取代基在Ar2的任何能够被取代的原子处附接至Ar2；
Z1选自N、CH、C-卤基和C-CN；
Z2a、Z2b、和Z2c各自彼此独立地选自键、NR6、CR6aR6b、O、S、S(O)、SO2、NR6C(O)、NR6aC(O)NR6b、和NR6C(O)O；
R1选自氢、甲基、卤基、卤代甲基、乙基和氰基；
R2选自氢、甲基、卤基、卤代甲基和氰基；
R3选自氢、低级烷基和低级杂烷基；
R4选自氢、低级烷基、单环环烷基、单环杂环基和低级杂烷基，或与R13的原子一起形成具有3至7个之间的环原子的环烷基环或杂环基环；其该低级烷基、单环环烷基、单环杂环基和低级杂烷基任选地被一个或多个卤基、氰基、羟基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、C(O)NR6aR6b、S(O)2NR6aR6b、NHC(O)CHR6aR6b、NHS(O)CHR6aR6b、NHS(O)2CHR6aR6b、S(O)2CHR6aR6b或S(O)2NH2基团取代：
R6、R6a和R6b各自彼此独立地选自氢
低级烷基、低级杂烷基、任选地取代的单环环烷基和单环杂环基，或与来自R13的原子一起形成具有3至7个之间的环原子的环烷基环或杂环基环：
R10选自氰基、OR14、SR14、SOR14、SO2R14、SO2NR14aR14b、NR14aR14b、NHC(O)R14和NHSO2R14；
R11a和R11b各自彼此独立地选自氢、卤基、甲基、乙基、卤代甲基、羟基、甲氧基、CN、和SCH3；
R12选自氢、卤基、氰基、低级烷基、低级杂烷基、环烷基、和杂环基，其中该烷基、杂烷基、环烷基、和杂环基任选地被一个或多个卤基、氰基、C1-4烷氧基、单环环烷基、单环杂环基、NHC(O)CHR6aR6b、NHS(O)CHR6aR6b、NHS(O)2CHR6aR6b或S(O)2CHR6aR6b基团取代；
R13选自键、任选地取代的低级亚烷基、任选地取代的低级杂亚烷基、任选地取代的环烷基或任选地取代的杂环基；
R14选自氢、任选地取代的低级烷基和任选地取代的低级杂烷基；
R14a和R14b各自彼此独立地选自氢、任选地取代的低级烷基、和任选地取代的低级杂烷基，或与它们所键合的氮原子一起形成任选地取代的单环环烷基环或单环杂环基环；
R15选自氢、卤基、C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、和C1-4卤代烷基和C1-4羟基烷基，其条件是当R15存在时，R4不是C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4环烷基或C1-4羟基烷基，其中该R4C1-6链烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基和C1-4羟基烷基任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：OCH3、OCH2CH2OCH3、和OCH2CH2NHCH3；并且
#代表与接头的附接点。
48.如权利要求47所述的ADC，其是根据结构式(I)的化合物：
(I)
其中：
D是式(IIa)或(IIb)的Bcl-xL抑制剂药物；
L是接头；
Ab是抗hCD98抗体；
LK代表将接头(L)连接至抗hCD98抗体(Ab)的共价键；并且m是范围从1至20的整数。
49.如权利要求47或48所述的ADC，其中Ar1是未取代的。
50.如权利要求49所述的ADC，其中Ar1是
51.如权利要求47或48所述的ADC，其中Ar2是未取代的。
52.如权利要求51所述的ADC，其中Ar2是其在5-位被选自羟基、C1-4烷氧基、和氰基的基团任选地取代；或
Ar2是或
Ar2是或
Ar2是
53.如权利要求47或48所述的ADC，其中Z1是N。
54.如权利要求47或48所述的ADC，其中Z2a是O。
55.如权利要求72或48所述的ADC，其中R1是甲基或氯。
56.如权利要求47或48所述的ADC，其中R2是氢或甲基。
57.如权利要求56所述的ADC，其中R2是氢。
58.如权利要求47或48所述的ADC，其中R4是氢或低级烷基，其中该低级烷基任选地被C1-4烷氧基或C(O)NR6aR6b取代。
59.如权利要求51所述的ADC，其中
Z1是N，Z2a是O，R1是甲基或氯，R2是氢，并且Ar2是 其中该在5-位被选自羟基、C1-4烷氧基、和氰基的基团任选地取代。
60.如权利要求59所述的ADC，其中该药物是根据结构式(IIa)的Bcl-xL抑制剂。
61.如权利要求47或48所述的ADC，其中该药物是根据结构式(IIa)的Bcl-xL抑制剂。
62.如权利要求61所述的ADC，其中Z2a是CH2或O。
63.如权利要求61所述的ADC，其中R13选自低级亚烷基或低级杂亚烷基。
64.如权利要求61所述的ADC，其中该基团是
65.如权利要求61所述的ADC，其中该基团是
66.如权利要求61所述的ADC，其中该基团选自
67.如权利要求61所述的ADC，其中该基团是
68.如权利要求60所述的ADC，其中Z2a是氧，R13是CH2CH2，R4是氢或任选地被C1-4烷氧基或C(O)NR6aR6b取代的低级烷基。
69.如权利要求51所述的ADC，该ADC是根据结构式(IIb)的化合物。
70.如权利要求69所述的ADC，其中Z2b是键、O、或NR6，或和R13是亚乙基或任选地取代的杂环基。
71.如权利要求70所述的ADC，其中Z2c是O，并且R12是任选地被一个或多个卤基或C1-4烷氧基取代的低级烷基。
72.如权利要求48所述的ADC，其中该Bcl-xL抑制剂选自由以下化合物组成的组，对这些化合物的修饰在于：在对应于结构式(IIa)或(IIb)的#位置的氢不存在，从而形成单价基团：
6-[1-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1，2，3，4-四氢喹啉-7-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-2H-1，4-苯并噁嗪-6-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1-甲基-1，2，3，4-四氢喹喔啉-6-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-羟基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-([1，3]噻唑并[5，4-b]吡啶-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-([1，3]噻唑并[4，5-b]吡啶-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[5-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-3-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[1-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1，2，3，4-四氢喹啉-7-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(氧杂环丁烷-3-基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[6-(3-氨基吡咯烷-1-基)-8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3，5-二甲基-7-{2-[(2-氨磺酰基乙基)氨基]乙氧基}三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[3-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-{甲基[2-(甲基氨基)乙基]氨基}-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-甲氧基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)喹啉-6-基]吡啶-2-甲酸；
6-[5-氨基-8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-6-[3-(甲基氨基)丙-1-炔-1-基]-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-甲氧基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[7-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[7-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-2-基]吡啶-2-甲酸；
6-[7-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3-甲基-1H-吲哚-2-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3，5-二甲基-7-(2-{[1-(甲磺酰基)哌啶-4-基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3，5-二甲基-7-(2-{[1-(甲磺酰基)氮杂环丁-3-基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲唑-5-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吲哚-5-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[3-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲基氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(1-((3-(2-((2-(N，N-二甲基氨磺酰基)乙基)氨基)乙氧基)-5，7-二甲基金刚烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-{1-[(3-{2-[(3-羟丙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3-(2-{[3-(二甲基氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-(1-{[3，5-二甲基-7-(2-{[3-(甲基氨基)-3-氧丙基]氨基}乙氧基)三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙酰氨基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{8-[(1，3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基}吡啶-2-甲酸；
3-[1-({3-[(2-氨基乙基)硫烷基]-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(3-氨基丙基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；和
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-{5-[(1，3-苯并噻唑-2-基)氨基甲酰基]喹啉-3-基}吡啶-2-甲酸。
73.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中该接头是可被溶酶体酶裂解的。
74.如权利要求73所述的ADC，其中该溶酶体酶是组织蛋白酶B。
75.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中该接头包含根据结构式(IVa)、(IVb)、(IVc)、或(IVd)的区段：
(IVa)
(IVb)
(IVc)
(IVd)
其中：
肽代表可被溶酶体酶裂解的肽(示例为N→C，其中肽包括氨基和羧基“末端”)；
T代表包含一个或多个乙二醇单元或亚烷基链或其组合的聚合物：
Ra选自氢、C1-6烷基、SO3H和CH2SO3H；
Ry是氢或C1-4烷基-(O)r-(C1-4亚烷基)s-G1或C1-4烷基-(N)-[(C1-4亚烷基)-G1]2；
Rz是C1-4烷基-(O)r-(C1-4亚烷基)s-G2；
G1是SO3H、CO2H、PEG 4-32、或糖部分；
G2是SO3H、CO2H、或PEG 4-32部分；
r是0或1；
s是0或1；
p是从0至5的整数；
q是0或1；
x是0或1；
y是0或1；
代表该接头与该Bcl-xL抑制剂的附接点；以及
*代表与该接头其余部分的附接点。
76.如权利要求75所述的ADC，其中肽选自下组，该组由以下组成：Val-Cit；Cit-Val；Ala-Ala；Ala-Cit；Cit-Ala；Asn-Cit；Cit-Asn；Cit-Cit；Val-Glu；Glu-Val；Ser-Cit；Cit-Ser；Lys-Cit；Cit-Lys；Asp-Cit；Cit-Asp；Ala-Val；Val-Ala；Phe-Lys；Lys-Phe；Val-Lys；Lys-Val；Ala-Lys；Lys-Ala；Phe-Cit；Cit-Phe；Leu-Cit；Cit-Leu；Ile-Cit；Cit-Ile；Phe-Arg；Arg-Phe；Cit-Trp；和Trp-Cit。
77.如权利要求73所述的ADC，其中该溶酶体酶是β-葡糖醛酸糖苷酶或β-半乳糖苷酶。
78.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中该接头包含根据结构式(Va)、(Vb)、(Vc)、(Vd)、或(Ve)的区段：
(Va)
(Vb)
(Vc)
(Vd)
(Ve)其中：
q是0或1；
r是0或1；
X1是CH2、O或NH；
代表该接头与该药物的附接点；并且
*代表与该接头的其余部分的附接点。
79.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中该接头包含根据结构式(VIIIa)、(VIIIb)、或(VIIIc)的区段：
(VIIIa)
(VIIIb)
(VIIIc)
或其水解衍生物，其中：
Rq是H或-O-(CH2CH2O)11-CH3；
x是0或1；
y是0或1；
G3是-CH2CH2CH2SO3H或-CH2CH2O-(CH2CH2O)11-CH3；
Rw是-O-CH2CH2SO3H或-NH(CO)-CH2CH2O-(CH2CH2O)12-CH3；
*代表与该接头的其余部分的附接点；并且
代表该接头与该抗体的附接点，其中当处于水解形式时，可以位于其旁的羧酸的α位或β位。
80.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中该接头包含具有从1至6个乙二醇单元的聚乙二醇区段。
81.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中m是2、3或4。
82.如权利要求81所述的ADC，其中接头L包含根据结构式IVa或IVb的区段。
83.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中接头L选自下组，该组由以下组成：处于封闭或开放形式的IVa.1-IVa.8、IVb.1-IVb.19、IVc.1-IVc.7、IVd.1-IVd.4、Va.1-Va.12、Vb.1-Vb.10、Vc.1-Vc.11、Vd.1-Vd.6、Ve.1-Ve.2、VIa.1、VIc.1-V1c.2、VId.1-VId.4、VIIa.1-VIIa.4、VIIb.1-VIIb.8、VIIc.1-VIIc.6。
84.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中该接头L选自下组，该组由以下组成：IVb.2、IVc.5、IVc.6、IVc.7、IVd.4、Vb.9、Vc.11、VIIa.1、VIIa.3、VIIc.1、VIIc.4、和VIIc.5，其中每个接头的马来酰亚胺已与该抗体Ab反应形成呈琥珀酰亚胺(封闭形式)或琥珀酰胺(开放形式)的共价附接。
85.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中该接头L选自下组，该组由以下组成：IVb.2、IVc.5、IVc.6、IVd.4、Vc.11、VIIa.1、VIIa.3、VIIc.1、VIIc.4、VIIc.5，其中每个接头的马来酰亚胺已与该抗体Ab反应形成呈琥珀酰亚胺(封闭形式)或琥珀酰胺(开放形式)的共价附接。
86.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中该接头L选自下组，该组由以下组成：IVb.2、Vc.11、VIIa.3、IVc.6、和VIIc.1，其中是与药物D的附接点，并且@是与LK的附接点，其中当接头处于如以下所示的开放形式时，@可以位于其紧邻的羧酸的α位或β位：
87.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中LK是与该抗hCD98抗体Ab上的氨基基团形成的键。
88.如权利要求87所述的ADC，其中LK是酰胺或硫脲。
89.如权利要求47-72中任一项所述的ADC，其中LK是与该抗hCD98抗体Ab上的巯基基团形成的键。
90.如权利要求89所述的ADC，其中LK是硫醚。
91.如权利要求48-72中任一项所述的ADC，其中：
LK选自下组，该组由以下组成：酰胺、硫脲和硫醚；以及
m是范围从1至8的整数。
92.如权利要求91所述的ADC，其中
D是如在权利要求72中所定义的Bcl-xL抑制剂；
L选自下组，该组由以下组成：接头IVa.1-IVa.8、IVb.1-IVb.19、IVc.1-IVc.7、IVd.1-IVd.4、Va.1-Va.12、Vb.1-Vb.10、Vc.1-Vc.11、Vd.1-Vd.6、Ve.1-Ve.2、VIa.1、VIc.1-V1c.2、VId.1-VId.4、VIIa.1-VIIa.4、VIIb.1-VIIb.8、和VIIc.1-VIIc.6，其中每个接头已与该抗体Ab反应形成共价附接；
LK是硫醚；以及
m是范围从1至8的整数。
93.如权利要求48所述的ADC，其中：
D是选自由以下化合物组成的组的Bcl-xL抑制剂，对这些化合物的修饰在于：对应于结构式(IIa)或(IIb)的#位置的氢不存在，从而形成单价基团：
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[1-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)萘-2-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；
6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-甲氧基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]-3-{1-[(3-{2-[(2-甲氧基乙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}吡啶-2-甲酸；
3-(1-{[3-(2-氨基乙氧基)-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基]甲基}-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-5-氰基-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
6-[4-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)异喹啉-6-基]-3-[1-({3，5-二甲基-7-[2-(甲氨基)乙氧基]三环[3.3.1.13，7]癸-1-基}甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-甲酸；以及
3-{1-[(3-{2-[(3-氨基-3-氧丙基)氨基]乙氧基}-5，7-二甲基三环[3.3.1.13，7]癸-1-基)甲基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-6-[8-(1，3-苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]吡啶-2-甲酸；
L选自下组，该组由以下组成：处于封闭或开放形式的接头IVb.2、IVc.5、IVc.6、IVc.7、IVd.4、Vb.9、Vc.11、VIIa.1、VIIa.3、VIIc.1、VIIc.4、和VIIc.5；
LK是硫醚；以及
m是范围从2至4的整数。
94.如权利要求48所述的ADC，其选自下组，该组有以下组成：huAb102-ZT、huAb102-ZZ、huAb102-XW、huAb102-SE、huAb3102-SR、huAb102-YG、huAb102-KZ、huAb104-ZT、huAb104-ZZ、huAb104-XW、huAb104-SE、huAb104-SR、huAb104-YG、huAb104-KZ、huAb108-ZT、huAb108--ZZ、huAb108--XW、huAb108--SE、huAb108--SR、huAb108--YG、huAb108-KZ、huAb110-ZT、hu110-ZZ、huAb110-XW、huAb110-SE、huAb3110-SR、huAb110-YG、和huAb110-KZ，其中huAb102、huAb104、huAb108、和huAb110是抗hCD98抗体并且KZ、SR、SE、XW、YG、ZT和ZZ是表5中披露的合成子，并且其中这些合成子处于开放或封闭形式。
95.如权利要求48所述的ADC，该ADC选自下组，该组由以下组成：式i-xiv：
其中m是从1到6的整数。
96.如权利要求95所述的ADC，其中m是从2至6的整数。
97.如权利要求47-96中任一项所述的ADC，其中该抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO：108中所示氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO：107中所示氨基酸序列。
98.如权利要求47-96中任一项所述的ADC，其中该抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO：110中所示氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO：107中所示氨基酸序列。
99.如权利要求47-96中任一项所述的ADC，其中该抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO：115中所示氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO：112中所示氨基酸序列。
100.如权利要求47-96中任一项所述的ADC，其中该抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO：118中所示氨基酸序列，该轻链可变区包含SEQ ID NO：117中所示氨基酸序列。
101.如权利要求47-100中任一项所述的ADC，其中该抗体是单克隆IgG1抗体和/或其中该轻链是κ轻链。
102.如权利要求47-100中任一项所述的ADC，其是具有四条多肽链的IgG抗体，所述四条多肽链是两条重链和两条轻链。
103.如权利要求47所述的ADC，其选自下组，该组由以下组成：huAb102-ZT、hu102-ZZ、huAb102-XW、huAb102-SE、huAb3102-SR、huAb102-YG、huAb102-KZ、huAb104-ZT、huAb104-ZZ、huAb104-XW、huAb104-SE、huAb104-SR、huAb104-YG、huAb104-KZ、huAb108-ZT、huAb108--ZZ、huAb108--XW、huAb108--SE、huAb108--SR、huAb108--YG、huAb108一KZ、huAb110-ZT、hu110-ZZ、huAb110-XW、huAb110-SE、huAb3110-SR、huAb110-YG、和huAb110-KZ。
104.如权利要求47-100中任一项所述的ADC，其中该抗hCD98抗体选下组，该组由以下组成：
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO：17中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：87中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：16中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO：19中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQID NO：7中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：13中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO：17中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：90中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：16中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO：19中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQID NO：7中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：13中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO：97中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：92中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：79中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；含有SEQ ID NO：95中所示氨基酸序列的轻链CDR3结构域、含有SEQID NO：45中所示氨基酸序列的轻链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：83中所示氨基酸序列的轻链CDR1结构域；和
抗hCD98抗体，其包含含有SEQ ID NO：97中所示氨基酸序列的重链CDR3结构域、含有SEQ ID NO：104中所示氨基酸序列的重链CDR2结构域、和含有SEQ ID NO：79中所示氨基酸序列的重链CDR1结构域；包含SEQ ID NO：102中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR3结构域，包含SEQ ID NO：45中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR2结构域以及包含SEQ ID NO：83中所阐述的氨基酸序列的轻链CDR1结构域。
105.一种药物组合物，其包含有效量的如权利要求42-104中任一项所述的ADC、和药学上可接受的载体。
106.一种药物组合物，其包含ADC混合物和药学上可接受的载体，该ADC混合物包含多种如权利要求42-105中任一项所述的ADC。
107.如权利要求106所述的药物组合物，其中该ADC混合物具有2至4的平均药物/抗体比率(DAR)。
108.如权利要求106所述的药物组合物，其中该ADC混合物包含多种ADC，每种ADC的DAR为2至8。
109.一种用于治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者给予治疗有效量的如权利要求42-104中任一项所述的ADC。
110.权利要求109所述的方法，其中该癌症是选自下组，该组由以下组成：小细胞肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胶质母细胞瘤、***癌、胰腺癌、结肠癌、头颈癌、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、和急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、慢性白细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、急性髓性白血病和肾癌。
111.如权利要求109所述的方法，其中该癌症是鳞状细胞癌。
112.如权利要求111所述的方法，其中该鳞状细胞癌是鳞状肺癌或鳞状头颈癌。
113.如权利要求109所述的方法，其中该癌症是三阴性乳腺癌。
114.如权利要求109所述的方法，其中该癌症是多发性骨髓瘤。
115.如权利要求109所述的方法，其中该癌症是急性髓性白血病。
116.如权利要求109所述的方法，其中该癌症是非小细胞肺癌。
117.一种用于抑制或减少患有实体瘤的受试者中实体瘤生长的方法，所述方法包括向该患有实体瘤的受试者给予有效量的如权利要求42-104中任一项所述的ADC，使得该实体瘤生长被抑制或减少。
118.如权利要求117所述的方法，其中该实体瘤是非小细胞肺癌。
119.如权利要求108-118中任一项所述的方法，其中将该ADC与额外的药剂或额外的治疗组合给予。
120.如权利要求119所述的方法，其中该额外的药剂选自下组，该组由以下组成：抗PD1抗体(例如派立珠单抗)、抗PD-L1抗体(例如阿特唑单抗)、抗CTLA-4抗体(例如伊匹单抗)、MEK抑制剂(例如曲美替尼)、ERK抑制剂、BRAF抑制剂(例如达拉菲尼)、奥斯替尼、埃罗替尼、吉非替尼、索拉非尼、CDK9抑制剂(例如迪那西利)、MCL-1抑制剂、替莫唑胺、Bcl-xL抑制剂、Bcl-2抑制剂(例如维奈托克)、依鲁替尼、mTOR抑制剂(例如依维莫司)、PI3K抑制剂(例如布帕利昔)、度维利塞、艾代拉里斯、AKT抑制剂、HER2抑制剂(例如拉帕替尼)、紫杉烷(例如多西他赛、紫杉醇、纳米白蛋白结合型紫杉醇)、包含澳瑞他汀的ADC、包含PBD(例如罗武匹妥珠-特西林)的ADC、包含美登木素生物碱(例如TDM1)的ADC、TRAIL激动剂、蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米)、和烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)抑制剂。
121.如权利要求119所述的方法，其中该额外的治疗是放射。
122.如权利要求119所述的方法，其中该额外的药剂是化学治疗剂。
123.如权利要求109-118中任一项所述的方法，其中该癌症或肿瘤的特征在于具有CD98过表达。
124.如权利要求109-118中任一项所述的方法，其中该癌症或肿瘤特征在于具有激活性EGFR突变。
125.如权利要求124所述的方法，其中该激活性EGFR突变选自下组，该组由以下组成：外显子19缺失突变、外显子21中的单点取代突变L858R、T790M点突变、及其组合。
126.一种用于制备根据结构式(I)的ADC的方法：
(I)
其中：
D是式(IIa)或(IIb)的Bcl-xL抑制剂药物；
L是接头；
Ab是CD98抗体，其中该CD98抗体包含huAb102、huAb014、huAb108、或huAb110的重链和轻链CDR；
LK代表将接头L连接至抗体Ab的共价键；以及
m是范围从1至20的整数；
该方法包括：
将水溶液中的抗体用有效量的二硫化物还原剂在30℃-40℃处理至少15分钟，并且然后将该抗体溶液冷却至20℃-27℃；
向所还原的抗体溶液中添加水/二甲基亚砜的溶液，该水/二甲基亚砜的溶液包含选自2.1至2.31和2.34至2.72的组的合成子(表5)；
将该溶液的pH调节为pH 7.5至8.5；
允许该反应运行48至80小时，以形成ADC；
其中如通过电喷雾质谱法测量的，对于琥珀酰亚胺每次水解为琥珀酰胺，质量偏移18±2amu；并且
其中任选地将该ADC通过疏水作用色谱纯化。
127.如权利要求126所述的方法，其中m是2。
128.一种通过如权利要求126或127所述的方法制备的ADC。
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