CN109511682A - 一种含球孢白僵菌的杀虫组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含球孢白僵菌的杀虫组合物及其制备方法,含球孢白僵菌杀虫组合物的各原料组分按质量百分比为球孢白僵菌孢子粉(1000亿孢子/克)10%‑50%、球孢白僵菌孢子萌发促进物质0.01‑5%、表面活性剂5‑30%,增稠剂0.1‑10%,其余组分为油相载体。该组合物应用于防治稻纵卷叶螟、玉米螟等作物害虫,具有速效性好、防治效果稳定、环境友好等优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物农药杀虫剂领域,具体是一种含球孢白僵菌的生物杀虫组合物及其制备方法。
背景技术
球孢白僵菌Beauveria bassiana(Bals.)Vuillemin是一种广谱性昆虫病原真菌,其致病性强,杀虫范围广,在中国广泛应用于马尾松毛虫Dendrolimus punctatus Walker和亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis Guenée等多种农林害虫的防治。目前国内登记的以球孢白僵菌为有效成分的农药已有22个品种,其中制剂 16个。然而,与化学农药相比,球孢白僵菌生物农药的有效成分为球孢白僵菌孢子,产品在生产、和保存过程中均存在导致孢子死亡或产品使用前萌发的风险因素,从而导致产品防效低、效果不稳定等。球孢白僵菌主要通过接触侵染昆虫,孢子在虫体上萌发、定殖、大量生长,同时分泌各种毒素物质,从而使害虫致死。筛选出生物活性高的球孢白僵菌菌株,研制促进产品施用后球孢白僵菌孢子快速萌发和定殖的技术,是提高球孢白僵菌生物农药速效性并保证防治效果的关键,也是目前活菌类生物农药大面积推广应用的技术瓶颈。
基于作物种子发芽率和发芽势的概念和测定方法,本发明人以测定球孢白僵菌孢子萌发势和萌发率为主要指标,开展球孢白僵菌孢子萌发促进物质的筛选和应用,试验过程中发现,独脚金内酯对球孢白僵菌孢子萌发具有显著的促进作用。独角金内酯最初由由棉花根分泌液中分离出来的,被认为是独脚金属(Striga spp.) 种子萌发的刺激物。研究表明,独角金内酯是作为植物根围与丛枝菌根真菌联接的一种必不可少的化学信号,还可作为一种新型的植物激素有效抑制植物分枝,也可刺激寄生植物种子萌发、促进丛枝菌根真菌菌丝产生分枝。目前该类产品已用于植物生长调节剂的制备,市场上货源丰富、易得。
发明内容
本发明通过广泛的采集样本并通过***筛选,发现了对水稻二化螟、三化螟、稻纵卷叶螟、玉米螟、棉铃虫、斜纹夜蛾等均有较高生物活性的球孢白僵菌菌株,命名为ahzbs-Bb378,保藏号为CGMCC NO.13779;针对本发明筛选到的高效菌株,以提高该球孢白僵菌孢子萌发势和萌发率、促进球孢白僵菌的快速定殖为基本目的,筛选球孢白僵菌孢子萌发促进物质及不影响球孢白僵菌孢子萌发的表面活性剂、油相载体及适宜的其它生物农药助剂,制备成球孢白僵菌孢子油悬浮剂,用于防治水稻螟虫、玉米螟、棉铃虫、斜纹夜蛾等作物虫害。
本发明的技术方案如下:
本发明所述的一种含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物,包含有下述质量百分比的原料:球孢白僵菌孢子粉10%-50%、球孢白僵菌孢子萌发促进物质 0.01-5%、表面活性剂5-30%,增稠剂0.1-10%,其余组分为油相载体。
本发明所述的含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物,各原料优选的质量百分比为:球孢白僵菌孢子粉15%-35%、球孢白僵菌孢子萌发促进物质0.1-1%、表面活性剂8-20%,增稠剂0.5-5%,其余组分为油相载体。
本发明所述的一种含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物中,球孢白僵菌菌株名为ahzbs-Bb378,保藏号为CGMCC NO.13779,其制得的球孢白僵菌孢子粉浓度为1×1011个/g;优选的球孢白僵菌孢子萌发促进物质为独脚金内酯;使用的表面活性剂为脂肪醇与环氧乙烷缩合物、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、蓖麻油与环氧乙烷缩合物、十二烷基苯磺酸钙、木质素磺酸钠中的两种或两种以上的混合;使用的增稠剂为黄原胶、硅酸镁铝中一种或两种的混合;使用的油相载体为菜籽油、环氧大豆油中一种或两种的混合。
本发明所述的一种含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物的制备方法为:将独脚金内酯用少量甲醇溶解混入油相载体,将表面活性剂、孢子萌发促进物质、增稠剂加入油相载体,将固形物研磨至粒径2-3微米的颗粒,在搅拌下加入球孢白僵菌孢子粉,充分搅拌后高速剪切30min,过滤去除残渣,得成品。
本发明所述的一种含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物的使用方法为,将本发明产物“一种含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物用”水稀释10~100倍后采用低容量或超低容量技术喷雾;或用水稀释1000~2000倍后采用常量喷雾,防治水稻螟虫等作物虫害。
本发明的有益效果在于:
1.本发明的含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物中加入了独脚金内酯,能有效促进球孢白僵菌孢子萌发,提高球孢白僵菌孢子萌发势,在24h内萌发率达到 50%以上,48h内达到80%以上;同时本发明筛选出了高效球孢白僵菌菌株 ahzbs-Bb378(保藏号为CGMCCNO.13779),对多种作物害虫效果显著,从而有效提高了产品的速效性。
2.本发明的含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物,以孢子萌发率为主要指标优选油相载体和助剂,有效保证了产品在有效期内的活菌量,同时提高产品施用时在靶标上的润湿性能粘附性能,提高球孢白僵菌孢子孢子在植物叶片或防治靶标害虫上的附着率,从而提高防治效果。
具体实施方式
球孢白僵菌高效菌株的筛选和鉴定
采用高通量筛选办法,从采集的样品中分离白僵菌菌株,采用《农药室内生物测定试验准则杀虫剂第6部分:杀虫剂试验浸虫法》(NYT-1154.6-2006) 中的方法进行生物活性测定,筛选出高生物活性菌株ahzbs-Bb378,其生物活性测定结果如表1。
表1菌株ahzbs-Bb378不同浓度孢子悬浮液对5种供试害虫3龄幼虫的侵染率(%)
分离出的高生物活性球孢白僵菌菌株ahzbs-Bb378测序结果为:
CTGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTTCAACTCCCTAACCCTTCTGTGAA CCTACCTATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCAGCCCGGACGCGGACTGGA CCAGCGGCCCGCCGGGGACCTCAAACTCTTGTATTCCAGCATCTTCTGAAT ACGCCGCAAGGCAAAACAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTT GGCTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAACGCGATAAGTAATGTGAATT GCAGAATCCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGC ATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCGACCTCCCCTT GGGGAGGTCGGCGTTGGGGACCGGCAGCACACCGCCGGCCCTGAAATGG AGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCG GGACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACACCCAACTTCTGAACGTTGACC TCGAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAA
该菌株已保藏,保藏号为CGMCC NO.13779。
独脚金内酯促进球孢白僵菌孢子萌发的效果测定
将球孢白僵菌菌株ahzbs-Bb378转接到SDAY平板上,在(25±1)℃、光周期16L:8D的人工气候箱中培养12d,然后用0.05%吐温-80无菌水洗脱平板培养物上的分生孢子,过滤,除去菌丝和杂质,镜检计数浓度,用无菌水稀释成1.0×107孢子/mL悬浮液。将独脚金内酯用甲醇溶解,用无菌水按0.05、0.1、 0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8ppm浓度制备药液。取球孢白僵菌1.0×107孢子/mL悬浮液,用制备的不同浓度的独脚金内酯药液制备球孢白僵菌1.0×105孢子/mL悬浮液,定期调查孢子萌发率。结果见表2和表3。从表2和表3可以看出,独脚金内酯对球孢白僵菌孢子萌发具有明显的促进作用,各处理48h内孢子萌发率均达到80%以上,明显高于空白对照(萌发率70.1%),孢子萌发率均提升16.5%以上。
表2不同浓度独脚金内酯处理下球孢白僵菌孢子萌发率
表3不同浓度独脚金内酯处理对球孢白僵菌孢子萌发的促进作用
注:孢子萌发提升率=(处理孢子萌发率处理-对照孢子萌发率)/对照孢子萌发率×100%
具体实施例
下述实施例是对于本发明内容的进一步说明以作为对本发明技术内容的阐释,但本发明的实质内容并不仅限于下述实施例所述,本领域的普通技术人员可以且应当知晓任何基于本发明实质精神的简单变化或替换均应属于本发明所要求的保护范围。
实施例1
本发明的专用增效剂原料配方,按下述质量百分比:
制备方法:将独脚金内酯用少量甲醇溶解混入油相载体,将表面活性剂、孢子萌发促进物质、增稠剂加入油相载体,将固形物研磨至粒径2-3微米的颗粒,在搅拌下加入球孢白僵菌孢子粉,充分搅拌后高速剪切30min,过滤去除残渣,得成品。
实施例2
本发明的专用增效剂原料配方,按下述质量百分比:
制备方法同实施例1。
实施例3
本发明的专用增效剂原料配方,按下述质量百分比:
制备方法同实施例1。
实施例4
本发明的专用增效剂原料配方,按下述质量百分比:
制备方法同实施例1。
实施例5
本发明的专用增效剂原料配方,按下述质量百分比:
制备方法同实施例1。
实施例6
本发明的专用增效剂原料配方,按下述质量百分比:
制备方法同实施例1。
实施例7
本发明的专用增效剂原料配方,按下述质量百分比:
制备方法同实施例1。
对照例1(未添加独脚金)
本对照的原料配方,按下述质量百分比:
制备方法同实施例1。
应用例1
孢子在玉米植株内定殖效果和玉米螟防治效果试验。将本发明实施例1~7 和对照例1所制成的球孢白僵菌类杀虫组合物稀释成2000倍液,另用清水作为对照,对玉米进行喷雾处理;每处理40平方米,三次重复,喷雾3天后测定球孢白僵菌在玉米植株内的定殖效果,14天后调查田间防效采用5点调查法,每点调查12株,结果见表4。从表4可以看出,实施例处理后,玉米植株内均能检测出供试球孢白僵菌,检出率在(2.2-16.7)%之间,防治效果在(70.3-84.6)%之间,均明显高于对照例。
表4球孢白僵菌杀虫组合物田间应用效果
应用例2
孢子在水稻植株内定殖效果及防治水稻稻纵卷叶螟试验。将本发明实施例 1~7和对照例1所制成的球孢白僵菌类杀虫组合物稀释成2000倍液,另用清水作为对照,对水稻进行喷雾处理;每处理40平方米,三次重复,喷雾3天后测定球孢白僵菌在水稻植株内的定殖效果,14天后调查田间防效。采用5点调查法,每点连续调查5丛,结果见表5。从表5可以看出,实施例处理后,水稻植株内球孢白僵菌检出率在(5.8-12.4)%之间,防治效果在(72.6-85.4)%之间,也均明显高于对照例。
表5球孢白僵菌杀虫组合物田间应用效果
应用例3
孢子在棉花植株内定殖效果及防治棉铃虫试验。将本发明实施例1~7和对照例1所制成的球孢白僵菌类杀虫组合物稀释成2000倍液,另用清水作为对照,对棉花盆栽苗进行喷雾处理;每处理三次重复,每重复10株盆栽苗,喷雾3天后测定球孢白僵菌在棉花植株内的定殖效果,14天后调查防效。结果见表5。从表5可以看出,实施例处理后,棉花植株内球孢白僵菌检出率在(1.8-15.4)%之间,防治效果在(61.2-76.0)%之间,也均明显高于对照例。
表6球孢白僵菌杀虫组合物田间应用效果
从应用例1、应用例2、应用例3中实施例3、实例4、实例5、实施例6、实施例7和对照例的试验结果可以看出,组合物中添加适量的独脚金内酯能有效提高植株体内球孢白僵菌检出率及对靶标的防效。
Claims (9)
1.一种含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物,包含有下述质量百分比的原料:球孢白僵菌孢子粉10%-50%、球孢白僵菌孢子萌发促进物质0.01-5%、表面活性剂5-30%,增稠剂0.1-10%,其余组分为油相载体。
2.如权利要求1所述的含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物,其特征在于,各原料质量百分比为:球孢白僵菌孢子粉15%-35%、球孢白僵菌孢子萌发促进物质0.1-1%、表面活性剂8-20%,增稠剂0.5-5%,其余组分为油相载体。
3.如权利要求1或2所述的含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物,其特征在于,所述的球孢白僵菌,菌株名为ahzbs-Bb378,保藏号为CGMCC NO.13779;所述的球孢白僵菌孢子粉为母药,其孢子浓度为1×1011个/g。
4.如权利要求1至3所述的含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物,其特征在于,所述的球孢白僵菌孢子萌发促进物质为独脚金内酯。
5.如权利要求1至4所述的含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物,其特征在于,所述的表面活性剂为脂肪醇与环氧乙烷缩合物、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、蓖麻油与环氧乙烷缩合物、十二烷基苯磺酸钙、木质素磺酸钠中的两种或两种以上的混合。
6.如权利要求1至5所述的含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物,其特征在于,所述的增稠剂为黄原胶、硅酸镁铝中一种或两种的混合。
7.如权利要求1至6所述的含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物,其特征在于,所述的油相载体为菜籽油、环氧大豆油中一种或两种的混合。
8.权利要求1-7任一项所述的含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物的制备方法,其特征在于,将表面活性剂、孢子萌发促进物质、增稠剂加入油相载体,将固形物研磨至粒径2-3微米的颗粒,在搅拌下加入球孢白僵菌孢子粉,充分搅拌后高速剪切30min,过滤去除残渣,得成品。
9.权利要求1-8所述含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物的应用,其特征在于,将所述含球孢白僵菌孢子的生物杀虫组合物用水稀释10~100倍后采用低容量或超低容量技术喷雾;或用水稀释1000~2000 倍后采用常量喷雾,防治水稻螟虫、玉米螟、棉铃虫、斜纹夜蛾等作物虫害。
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