CN109350555A - 一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球及其制备方法,使用壳单元模拟蜂窝铝;重复有限元蜂窝铝组成前防撞蜂窝铝吸能块与后主体蜂窝铝吸能块;在蜂窝铝中建立空气囊单元模拟空气的流动;建立安装板模型与蜂窝铝表面蒙皮有限元模型;将上述结构通过胶水单元黏合形成壁障模型;建立可移动壁障的车架模型;通过安装板将壁障模型固定在车架模型上,定义蜂窝铝吸能块内部及外部的接触关系和各接触面的摩擦系数;将实际碰撞测试工况中使用的壁障参数代入模型,建立所需壁障模型,加入整车模型,利用所述壁障进行相应工况的碰撞有限元仿真分析。本发明所提供的壁障的有限元建模方法,能极大的提高壁障的有限元模型的精确度,优化了壁障工况的计算精度和效率。
Description
技术领域
本发明涉及到化妆品领域,特别是涉及到一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球及其制备方法。
背景技术
青少年面部痤疮,修复不良时,易形成痘坑,结节,严重时给人造成心理压力。擦伤、烫伤在面部时,也需要良好的修复质量和快速的修复速度。
随着生物技术的发展,新的生物制品如重组人源胶原蛋白、表皮生长因子大量涌现在化妆品中。重组人源胶原蛋白,是基于III型胶原蛋白a1链胶原域Gly-X-Y的三肽重复序列特征,通过基因重组技术,使毕赤酵母基因工程菌发酵获得,细胞外分泌型目的蛋白,具有以下特性 :
(1)低免疫原性 :根据人胶原蛋白序列构建,并替换掉已引起免疫反应的色氨酸等。(2)无病毒隐患 :动物源胶原蛋白有携带禽流感病毒、疯牛病病毒、***病毒等隐患。该重组胶原蛋白来自酵母发酵,因此获得的蛋白不会携带有外源性病毒。(3)水溶性好、易吸收。(4)易吸收,通过X射线微衍射技术检测到重组人源胶原蛋白易穿透过角质层。(5)帮助修复,细胞试验证明,能够促进角质细胞迁移,有助于修复。同时通过X射线微衍射技术检测,发现重组人源胶原蛋白对角质层的脂质晶型化排列、有序化排列有明显促进作用,对表皮皮修复美观性存在积极意义。离体皮肤试验显示,可以增加皮肤内胶原蛋白含量,重组人源胶原蛋白内化为皮肤材料,对修复后质量有明显改善。
但是重组人源胶原蛋白在液体制剂中,活性容易消失,需要合理保存。因此亟需一种冻干制剂,能够很好保持生物产品的活性。
发明内容
本发明的目的要解决上述技术问题,提供一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球及其制备方法。
本发明的目的是这样实现的:一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球,其特征在于,按照重量百分比计,配方包括以下组分:重组人源胶原蛋白25-35%、透明质酸5-10%、海藻糖3-5%、甘露糖醇10-15%、出芽短梗霉多糖45-55%、寡肽-1(1000-1500U/颗)、寡肽-5(1000-1500U/颗)。
作为优选的技术方案:所述的重组人源胶原蛋白冻干球是由 SEQ ID NO :1 所示的氨基酸序列组成,含有599个氨基酸,分子量为55.0KDa。
作为优选的技术方案:所述的透明质酸为中分子量的透明质酸(20-40万分子量)。
作为优选的技术方案:所述的寡肽-1、寡肽-5为不含有甘油等不易冻干成分,不含吸湿性盐分。
作为优选的技术方案:所述的重组人源胶原蛋白冻干球置于溶媒中溶解后使用。
作为优选的技术方案:所述的溶媒包括甘油3%、丁二醇 4%、透明质酸(130-210万分子量)0.1%、尿囊素0.1%、水溶性红没药醇1%,O-伞花烃-5醇0.5%,烟酰胺2%、,BHC 1.0% 、EDTA-2Na 0.05%,水补足至100%。
一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1:称取透明质酸、甘露糖醇、海藻糖、出芽短梗霉多糖均质加速溶解,80 ℃保温15min。步骤2:待上述溶液均匀透明后,冷却至30 ℃以下,然后加入重组人源胶原蛋白、寡肽-1、寡肽-5,调节pH为5-8。步骤3:在 GMP 生产环境条件下进行0.22um无菌过滤、造型至直径为1.2cm的胶原球后,冻干至水分≤10%。步骤4:将所得的重组人源胶原蛋白冻干球送检,按QB/T2660标准检验合格后,在湿度环境50%以下灌装。
本发明的技术效果在于:
(1)重组人源胶原蛋白冻干球相比于液体制剂能够有效地保持重组人源胶原蛋白的活性,保证对于肌肤的修复效果。
(2)将重组人源胶原蛋白冻干球置于溶媒中溶解,溶解速度快且效率高,并且溶媒对于肌肤同样具有修复美白作用;溶媒中的BHC为辛酰羟戊酸和己二醇为复配的抑菌体系;甘油、丁二醇、透明质酸为溶剂和保湿成分;尿囊素、水溶性红没药醇为舒缓抗敏成分;O-伞花烃-5醇为杀菌剂;烟酰胺为美白和促进角质新生成分。
(3)重组人源胶原蛋白冻干球体积更小,便于运输。
附图说明
图1-图4是本发明用于痘痘修复前后对比图;
图5-图7是本发明用于摔伤旧疤和烫伤旧疤修复前后对比图;
图8是本发明用于新烫伤前后对比图;
图9是本发明用于红血丝修复前后对比图;
图10是本发明实施例4与实施5评分表。
具体实施方式
具体实施时:
对比例1
胶原球配方:重组人源胶原蛋白25%、透明质酸5%(120万分子量)、海藻糖5%、甘露糖醇15%、出芽短梗霉多糖5%、寡肽-1(表皮细胞生长因子,EGF,1000-1500U/颗)、寡肽-5(重组人角质细胞生长因子,FGF,1000-1500U/颗)。重纯化水补足到100%。
称取透明质酸、甘露糖醇、海藻糖,均质加速溶解,80 ℃保温15min,待均匀透明,冷却至30 ℃以下,加入重组人源胶原蛋白、寡肽-1、寡肽-5,调节pH为5-8。在 GMP 生产环境条件下进行0.22um无菌过滤、造型至胶原球直径为1.2cm、冻干至水分≤10%、将所得的物料送检,按QB/T2660标准检验合格后,在湿度环境50%-55%湿度下灌装。灌装至西林瓶中,取1颗胶原球加2ml纯化水溶解,不震荡,需要3min以上仍有小团块不易溶解。
实施例2
胶原球配方:重组人源胶原蛋白25%、透明质酸5%(20-40万分子量)、海藻糖5%、甘露糖醇15%、出芽短梗霉多糖5%、寡肽-1(表皮细胞生长因子,EGF,1000-1500U/颗)、寡肽-5(重组人角质细胞生长因子,FGF,1000-1500U/颗)。重纯化水补足到100%。
称取透明质酸、甘露糖醇、海藻糖,均质加速溶解,80 ℃保温15min,待均匀透明,冷却至30 ℃以下,加入重组人源胶原蛋白、寡肽-1、寡肽-5,调节pH为5-8。在 GMP 生产环境条件下进行0.22um无菌过滤、造型至胶原球直径为1.2cm、冻干至水分≤10%、将所得的物料送检,按QB/T2660标准检验合格后, 在湿度环境50%-55%湿度下灌装。灌装至西林瓶中,取1颗胶原球加2ml纯化水溶解,不震荡,20s即可溶解至透明。40℃保存30天,胶原球直径缩小至0.5cm。
本实施例特殊在于透明质酸采用中分子量(20-40万分子量),结果胶原球溶解速度快。
实施例3
胶原球配方:重组人源胶原蛋白25%、透明质酸5%(20-40万分子量)、海藻糖5%、甘露糖醇15%、出芽短梗霉多糖5%、寡肽-1(表皮细胞生长因子,EGF,1000-1500U/颗)、寡肽-5(重组人角质细胞生长因子,FGF,1000-1500U/颗)。重纯化水补足到100%。
称取透明质酸、甘露糖醇、海藻糖,均质加速溶解,80 ℃保温15min,待均匀透明,冷却至30 ℃以下,加入重组人源胶原蛋白、寡肽-1、寡肽-5,调节pH为5-8。在 GMP 生产环境条件下进行0.22um无菌过滤、造型至胶原球直径为1.2cm、冻干至水分≤10%、将所得的物料送检,按QB/T2660标准检验合格后,在湿度环境35-40%湿度下灌装。溶解迅速。40℃保存30天,胶原球直径1.1-1.2cm,无缩小。
本实施例特殊在于在湿度环境35-40%湿度下灌装。40℃保存30天,胶原球无缩小。
实施例4
胶原球配方:透明质酸5%(20-40万分子量)、海藻糖5%、甘露糖醇15%、出芽短梗霉多糖5%、寡肽-1(表皮细胞生长因子,EGF,1000-1500U/颗)、寡肽-5(重组人角质细胞生长因子,FGF,1000-1500U/颗)。重纯化水补足到100%。
称取透明质酸、甘露糖醇、海藻糖,均质加速溶解,80 ℃保温15min,待均匀透明,冷却至30 ℃以下,加入寡肽-1、寡肽-5,调节pH为5-8。在 GMP 生产环境条件下进行0.22um无菌过滤、造型至胶原球直径为1.2cm、冻干至水分≤10%、将所得的物料送检,按QB/T2660标准检验合格后,在湿度环境35-40%湿度下灌装。溶解迅速,不易缩小。
溶媒配方:甘油3%、丁二醇 4%、透明质酸(130-210万分子量)0.1%、尿囊素0.1%、水溶性红没药醇1%,O-伞花烃-5醇0.5%,烟酰胺2%、,BHC 1.0% 、EDTA-2Na 0.05%,水补足100%。制备工艺为:1、称取甘油、透明质酸、尿囊素、EDTA-2Na,加水至80 ℃保温15min,搅拌溶解至透明。2、冷却至40℃以下,加入用丁二醇预溶的O-伞花烃-5醇、BHC,然后加入烟酰胺、水溶性红没药醇定容即可。
本实施例特殊在于在冻干球中未加重组人源胶原蛋白。
实施例5
胶原球配方:重组人源胶原蛋白25%、透明质酸5%(20-40万分子量)、海藻糖5%、甘露糖醇15%、出芽短梗霉多糖5%、寡肽-1(表皮细胞生长因子,EGF,1000-1500U/颗)、寡肽-5(重组人角质细胞生长因子,FGF,1000-1500U/颗)。重纯化水补足到100%。
称取透明质酸、甘露糖醇、海藻糖,均质加速溶解,80 ℃保温15min,待均匀透明,冷却至30 ℃以下,加入重组人源胶原蛋白、寡肽-1、寡肽-5,调节pH为5-8。在 GMP 生产环境条件下进行0.22um无菌过滤、造型至胶原球直径为1.2cm、冻干至水分≤10%、将所得的物料送检,按QB/T2660标准检验合格后,在湿度环境35-40%湿度下灌装。溶解迅速。40℃保存30天,胶原球直径1.1-1.2cm,无缩小。
溶媒配方:甘油3%、丁二醇 4%、透明质酸(130-210万分子量)0.1%、尿囊素0.1%、水溶性红没药醇1%,O-伞花烃-5醇0.5%,烟酰胺2%、,BHC 1.0% 、EDTA-2Na 0.05%,水补足100%。制备工艺为:1、称取甘油、透明质酸、尿囊素、EDTA-2Na,加水至80 ℃保温15min,搅拌溶解至透明。2、冷却至40℃以下,加入用丁二醇预溶的O-伞花烃-5醇、BHC,然后加入烟酰胺、水溶性红没药醇定容即可。
本实施例特殊在于在冻干球中添加25%重组人源胶原蛋白。
效果例:招募40名志愿者,主要为中度痘痘者或者擦伤、抓伤、小烫伤等。分为2组,每组20人。1组使用实施例4产品,1组使用实施例5产品,每天用溶媒溶解1颗球至3-4ml,早晚各用1次。以保证生物因子的最大活力状态使用。使用5-60天进行拍照及评价打分,分别对修复质量、修复速度进行评分,满分10分。表格见图10
附图:实施例5中效果例代表
图1-图4 ,志愿者痘痘明显减少,修复后无痘坑,整体毛孔变细,肤色细腻,明亮。图5-图7,分别为摔伤旧疤和烫伤旧疤(6-12个月旧疤痕),可以看出疤痕颜色明显变淡,突兀性降低。图8为新烫伤,愈合速度7天掉疤,愈合后有纹理自然,修复质量较满意。图9为红血丝表观明显降低。
本发明的上述实施例,仅仅是清楚地说明本发明所做的举例,但不用来限制本发明的保护范围,所有等同的技术方案也属于本发明的范畴,本发明的专利保护范围应由各项权利要求限定。
Claims (7)
1.一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球,其特征在于,按照重量百分比计,配方包括以下组分:重组人源胶原蛋白25-35%、透明质酸5-10%、海藻糖3-5%、甘露糖醇10-15%、出芽短梗霉多糖45-55%、寡肽-1(1000-1500U/颗)、寡肽-5(1000-1500U/颗)。
2.根据权利要求1所述的一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球,其特征在于:所述的重组人源胶原蛋白冻干球是由 SEQ ID NO :1 所示的氨基酸序列组成,含有599个氨基酸,分子量为55.0KDa。
3.根据权利要求1所述的一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球,其特征在于:所述的透明质酸为中分子量的透明质酸(20-40万分子量)。
4.根据权利要求1所述的一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球,其特征在于:所述的寡肽-1、寡肽-5为不含有甘油等不易冻干成分,不含吸湿性盐分。
5.根据权利要求1所述的一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球,其特征在于:所述的重组人源胶原蛋白冻干球置于溶媒中溶解后使用。
6.根据权利要求5所述的一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球,其特征在于:所述的溶媒包括甘油3%、丁二醇 4%、透明质酸(130-210万分子量)0.1%、尿囊素0.1%、水溶性红没药醇1%,O-伞花烃-5醇0.5%,烟酰胺2%、,BHC 1.0% 、EDTA-2Na 0.05%,水补足100%。
7.一种修复肌肤用重组人源胶原蛋白冻干球的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1:称取透明质酸、甘露糖醇、海藻糖、出芽短梗霉多糖均质加速溶解,80 ℃保温15min;
步骤2:待上述溶液均匀透明后,冷却至30 ℃以下,然后加入重组人源胶原蛋白、寡肽-1、寡肽-5,调节pH为5-8;
步骤3:在 GMP 生产环境条件下进行0.22um无菌过滤、造型至直径为1.2cm的胶原球后,冻干至水分≤10%;
步骤4:将所得的重组人源胶原蛋白冻干球送检,按QB/T2660标准检验合格后,在湿度环境50%以下灌装。
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