CN109266576A - 一种粪肠球菌及其使用方法 - Google Patents

一种粪肠球菌及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种粪肠球菌及其用途，属于微生物技术领域。本发明所述粪肠球菌（Enterococcus faecalis）WJ146分离于60日龄健康仔猪肠道粘膜，对该菌株进行了全面、***的体外和体内益生特性的评价，包括耐受人工胃肠液，对常见畜禽肠道致病菌的抑制活性，在猪小肠上皮细胞上的黏附性，饲喂断奶仔猪后对仔猪的腹泻率、料肉比的影响，对断奶仔猪粪便中可培养微生物菌群的影响，对断奶仔猪的十二指肠和空肠的肠道组织形态的影响以及对不同肠段粘膜和内容物的微生物菌群相对丰度的影响，最终证明该菌株具有优良的益生特性，而且体外评价结果与体内评价结果相对应，表明该菌株非常适合产业化应用。

Description

一种粪肠球菌及其使用方法
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种粪肠球菌，尤其是一种能够降低动物腹泻率、提高生长性能、改善肠道组织形态和调节动物肠道菌群的粪肠球菌及其使用方法。
背景技术
益生菌是一类活的微生物，当其以足够数量存在时能够给宿主带来益生功效（FAO/WHO，2002）。人或动物胃肠道粘膜是分离和筛选新型的有潜在应用价值的益生菌株的重要来源。目前研究的益生菌，大部分属于乳酸菌属和双歧杆菌属，其中乳酸菌属是人和动物肠道的非致病性的共生菌，由于其能够降低人和动物胃肠道的损伤，因此乳酸菌属是最具开发价值的益生菌群。尽管很多研究者提出，菌株的来源是筛选益生菌的一个基本标准，但是FAO/WHO的专家小组提出在保证菌株来源安全的条件下，益生菌的益生特性比菌株的来源更为重要（FAO/WHO，2006）。乳酸菌是动物肠道正常菌群中的优势菌，能够利用可发酵糖产生有机酸，具有调节肠道菌群、降低腹泻率并促进营养吸收等功能，也有不少研究表明乳酸菌提高动物的生长性能、分泌抗菌肽等抑菌物质、产生各种类型免疫调节因子进而提高机体免疫力。乳酸菌作为微生物饲料添加剂在饲料工业中具有广泛的用途，目前，生产上常用的菌株主要包括粪肠球菌、屎肠球菌、植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌等，而屎肠球菌和粪肠球菌由于其在加工和储存上的优势，更利于产业化。
目前，生产上常用的屎肠球菌和粪肠球菌的益生特性并没有得到全面、***地评估，企业更多的是在高密度发酵工艺和后处理保存工艺上做了很多工作，以保证产品的稳定性和质量，但是产品的真实效果却无法得到验证。科研院所对益生菌的益生特性评估也常常只是针对其体外或者体内的部分常规指标进行评价，往往不能对生产实践起到很大的参考作用。本发明对自主分离的一株粪肠球菌进行了全面、***的体外和体内益生特性的评价，最终证明该菌株具有优良的益生特性，而且体外评价结果与体内评价结果相对应，表明该菌株非常适合产业化应用。
发明内容
本发明的目的是利用***、科学的评价方法评价一株自主分离的粪肠球菌（Enterococcus faecalis）WJ146的益生特性，本发明的技术方案如下：
一株粪肠球菌（Enterococcus faecalis）WJ146，分离于60日龄健康仔猪肠道粘膜。
所述粪肠球菌的菌落形态为不透明乳白色，圆形有光泽，边缘整齐，表面较平且湿润。
所述粪肠球菌最适生长温度为35-40℃、最适初始pH值6.5-7.0。
所述粪肠球菌具有如下体外益生功效：
通过体外模拟人工胃液和人工肠液的耐受性评估结果表明，粪肠球菌WJ146在pH3.0的人工胃液中的3 h存活率为98.85%，在胆盐浓度为0.3%的人工肠液中的3 h存活率为99.69%；对大肠杆菌（Escherichia coli CVCC 1570）、产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens CICC 22949）、猪伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium CVCC 3783）和猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种（Salmonella choleraesuis subsp. choleraesuis AS1.1859）的抑菌圈直径分别为16.59 mm，18.54 mm，20.55 mm，21.83 mm；在猪小肠上皮细胞黏附率为84.31%。
通过体内饲喂评估，粪肠球菌WJ146可以降低断奶仔猪的腹泻率，降低料肉比，提高粪便中乳酸菌的数量，降低大肠菌群和肠杆菌的数量，改善断奶仔猪的十二指肠和空肠的肠道组织形态（绒毛高度、隐窝深度和粘膜厚度均增加），改善不同肠段粘膜和内容物中有益菌群的相对丰度、降低致病菌群的相对丰度。
若想达到上述益生功效，使用粪肠球菌WJ146的剂量为每克基础日粮中的添加量≥106 CFU。
本发明的意义：
本发明的粪肠球菌具有耐人工胃肠液；对大肠杆菌（Escherichia coli CVCC 1570）、产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens CICC 22949）、猪伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium CVCC 3783）和猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种（Salmonella choleraesuis subsp. choleraesuis AS1.1859）具有抑制作用；能够在猪小肠上皮细胞上黏附。此外，用本发明的粪肠球菌制成微生态制剂，可有效的降低断奶仔猪的腹泻率，提高生长性能，定殖于肠道，改善断奶仔猪的十二指肠和空肠的肠道组织形态（绒毛高度、隐窝深度和粘膜厚度），改善肠道有益菌群的相对丰度、降低致病菌群的相对丰度。
附图说明
图1为实验组和对照组的活跃分数。
图2为实验组和对照组的腹泻分数。
图3为实验组和对照组猪各肠段样品微生物物种组成的α多样性指数（Chao指数）。
图4为实验组和对照组猪各肠段样品微生物物种组成（门水平）。
图5为实验组和对照组猪各肠段样品微生物物种组成（属水平）
其中附图3中SC：十二指肠；KC：空肠；HC：回肠；MC：盲肠；JC：结肠；附图4和附图5中CHCM：对照组回肠粘膜；THCM：实验组回肠粘膜；CJCM：对照组结肠粘膜；TJCM：实验组结肠粘膜；CKCM：对照组空肠粘膜；TKCM：实验组空肠粘膜；CMCM：对照组盲肠粘膜；TMCM：实验组盲肠粘膜；CSCM：对照组十二指肠粘膜；TSCM：实验组十二指肠粘膜；CHCN：对照组回肠内容物；THCN：实验组回肠内容物；CJCN：对照组结肠内容物；TJCN：实验组结肠内容物；CKCN：对照组空肠内容物；TKCN：实验组空肠内容物；CMCN：对照组盲肠内容物；TMCN：实验组盲肠内容物；CSCN：对照组十二指肠内容物；TSCN：实验组十二指肠内容物。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何限定。
实施例一、样品采集、菌株分离及筛选
1、样品采集
样品采集于60日龄健康猪肠道粘膜。
采集时间和地点：2016年1月采集于哈尔滨某规模化养殖场，将猪屠宰后于无菌条件下从其回肠、盲肠和结肠刮取粘膜。
2、菌株的分离
取样品10 g，放入盛有90 mL无菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡20 min。采用稀释涂布法将上述样品涂布于含有CaCO3的GYP平板，37℃静置培养48 h，待菌落长出，选取溶钙圈最大的单菌落，反复划线分离至获得纯菌株。
实施例二、粪肠球菌的分子生物学鉴定
用基因组提取试剂盒(TianGEN BioTECH (BeiJing) Co. , Ltd.) 提取目标菌株的基因组DNA，以提取的基因组DNA为模板，细菌通用引物27F (5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-TACCTTGTTACGACTT-3′) 为引物，进行PCR扩增，扩增基因组DNA 中的16S rDNA片段。反应体系：模板1 μL，稀释10倍的Taq DNA聚合酶Buffer(含有Mg2+) 2.5 μL，dNTP(2.5mmol/L)1 μL，引物27F和引物1492R(10 μmol/ L)各0.5 μL，TaqDNA聚合酶(5 U/μL) 0.125μL (宝生物工程（大连）有限公司)，补水至25 μL。反应程序：预变性95℃，5 min；94℃变性1min，55℃退火1 min，72℃延伸1. 5 min，30个循环；72℃延伸10 min。扩增产物直接用引物27F和1492R测序(北京诺赛基因组研究中心有限公司)。测序结果提交于NCBI的Genbank数据库中进行BLAST比对分析。
结果显示：菌株WJ146的16S rRNA基因序列与粪肠球菌的相似度为99%，故鉴定菌株WJ146是粪肠球菌（Enterococcus faecalis）。
实施例三、粪肠球菌WJ146对人工胃液和人工肠液的耐受性评价
人工胃液：将3 g/L的胃蛋白酶加至0.85%无菌NaCl中，分别调pH至2.0、2.5和3.0。
人工肠液：将1 g/L的胰酶分别加至含有0.3%、0.5%和1.0%胆盐的无菌等渗溶液（Bott and Wilson salts，1.24% K2HPO4，0.76% KH2PO4，0.1% 柠檬酸三钠，0.6% (NH4)2SO4）中，调pH至8.0。
对照菌种：粪肠球菌CICC23215，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）。
取一环新鲜活化粪肠球菌接入MRS液体培养基中，于37℃，静置培养24-48 h，同样条件下传代1次。取9 mL上述传代2次的粪肠球菌培养物，于8000 rpm下离心10 min，收集得到的菌泥，PBS洗涤2次后，取1 mL测定0 h活菌数，剩余菌悬液用等体积的人工胃液或人工肠液重悬，涡旋10 s，平均分装于3个试管中于37℃，静置培养3 h后，测定活菌数，并计算存活率。
存活率=（人工胃液（或人工肠液）处理后的活菌数/0 h的活菌数）×100%
不同菌株对不同pH的人工胃液的耐受性如表1所示，可看出WJ146和对照菌种CICC23215对pH 2.0的人工胃液的耐受性都很低，但WJ146对pH 2.5和pH 3.0的人工胃液的耐受性高于对照菌株CICC23215（P＜0.05）。
不同菌株对不同胆盐浓度的人工肠液的耐受性如表2所示，可看出WJ146对不同浓度胆盐的人工肠液的耐受性均高于对照菌株CICC23215（P＜0.05）。
表1 不同菌株耐人工胃液结果（以活菌数的对数值表示）
同列右肩不标字母表示差异不显著（P＞0.05），不同字母表示差异显著（P＜0.05）
表2不同菌株耐人工肠液结果（以活菌数的对数值表示）
同列右肩不标字母表示差异不显著（P＞0.05），不同字母表示差异显著（P＜0.05）
实施例四、粪肠球菌WJ146的抑菌活性评价
对大肠杆菌（Escherichia coli CVCC 1570）、产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens CICC 22949）、猪伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium CVCC 3783）和猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种（Salmonella choleraesuis subsp. choleraesuis AS1.1859）分别购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）、中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）和中国普通微生物菌种保藏中心（CGMCC）。
测定对大肠杆菌、猪伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种的抑菌活性时，将粪肠球菌在MRS液体培养基中的过夜培养物稀释100倍（活菌数在1×107～5×107 CFU/mL），取100 μL涂布于MRS平板上，于37℃培养24-48 h后，用1 mL枪头打孔；调整病原指示菌的浓度在1×107～5×107 CFU/mL，之后将无菌的棉签在调整后的指示菌液中浸透，涂布于营养琼脂平板上；用无菌牙签挑取已经打孔的待测菌培养物（孔径在7.5 mm）放置于涂布有指示菌的营养琼脂平板上于37℃培养6-8 h，测定抑菌圈的直径。将MRS固体培养基打孔后放置于涂布有指示菌的营养琼脂平板上做阴性对照，每株菌至少3个重复。抑菌圈直径≥9.5 mm认为有抑菌活性。
测定对产气荚膜梭菌的抑菌活性时，2%的素琼脂，临用时加热熔化，在水浴中冷却至45-55℃左右时，按照每平皿10 mL倾倒在无菌平皿中，待凝固后，用无菌镊子取9个无菌牛津杯放在倒有素琼脂的平皿上；按照指示菌的最终浓度在1×107～5×107 CFU/mL的添加量将指示菌的培养液加入至熔化的营养琼脂，充分混匀后，在事先放置牛津杯的平板上倾倒12 mL的含有指示菌的营养琼脂，待凝固后，拔出牛津杯；往牛津杯拔后留下的孔里加入20 μL的粪肠球菌发酵上清液，于37℃培养6-8 h，测定抑菌圈的直径。孔中加入MRS液体培养基做阴性对照，每株菌至少3个重复。抑菌圈直径≥10 mm认为有抑菌活性。
两株粪肠球菌对不同病原指示菌的抑菌活性见表3所示，菌株WJ146对大肠杆菌的抑菌活性与对照菌株CICC23215相差不多（P＞0.05），但对猪伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种和产气荚膜梭菌的抑菌活性明显优于对照菌株CICC23215（P＜0.05）。
表3 两株粪肠球菌对不同病原指示菌的抑菌活性
同列右肩不标字母表示差异不显著（P＞0.05），不同字母表示差异显著（P＜0.05）
实施例五、粪肠球菌WJ146在猪小肠上皮细胞IPEC-J2上的黏附性评价
猪小肠上皮细胞IPEC-J2采用含10%胎牛血清（Gibco）和1%双抗（100 U/mL 青霉素和100 mg/mL 链霉素）的DMEM培养液，37℃、5%CO2的二氧化碳培养箱中培养。黏附性实验时，将长满单层的IPEC-J2用0.1%胰酶-EDTA（Gibco）消化传代至6孔细胞培养板，每孔加2×105~4×105个细胞，培养液中除不含双抗外，其余成分同传代细胞培养液，37℃、5% CO2的二氧化碳培养箱中培养2 d，使细胞长满单层，隔1天换1次培养液，并且在黏附实验的前1 h再次更换细胞培养液；斜面活化的新鲜待测粪肠球菌接入到MRS 液体培养基中，37℃培养16 h，7000 g离心10 min，收集菌体，并用pH 7.4的PBS洗涤2次，最终用不含双抗的细胞培养液重悬，并测定活菌数；取1 mL菌悬液加入到长满单层IPEC-J2的6孔细胞培养板，37℃、5% CO2的二氧化碳培养箱中培养2 h，用PBS缓冲液洗涤3次，除去未黏附的细菌，加入1 mL 0.1%的曲拉通 X-100，37℃处理10 min，使细胞完全裂解，黏附的粪肠球菌从IPEC-J2上释放出来，梯度稀释，计算黏附的粪肠球菌数和黏附率。每株菌做3个平行。
黏附率=（黏附的粪肠球菌数/加入的菌悬液的粪肠球菌数）×100%。
两株粪肠球菌在猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）上的黏附性如表4所示，WJ146的黏附率可达到84%以上，高于对照菌株CICC23215（P＜0.05）。
表4 两株粪肠球菌在IPEC-J2上的黏附性（以lg（CFU/mL）计算）
菌株 0 h活菌数 黏附后活菌数 黏附率（%）
CICC23215 8.75 6.15±0.04<sup>a</sup> 70.22±0.48
WJ146 8.68 7.31±0.10<sup>b</sup> 84.31±1.13
同列右肩不标字母表示差异不显著（P＞0.05），不同字母表示差异显著（P＜0.05）
实施例六、粪肠球菌WJ146的体内益生特性评价
1、试验动物和设计
试验场地位于哈尔滨某规模养殖场。试验采用单因子完全随机试验设计，选择体况相近、健康、平均体重为(7.24±1.13) kg的25日龄断奶仔猪181头，根据体重相近，公母比例一致的原则，随机分为2组：对照组饲喂基础饲粮，实验组饲喂每克基础日粮添加1×106CFU粪肠球菌WJ146的试验日粮，每组6个重复，每个重复（19±3）头仔猪，试验期为39d。饲料配方营养要求不低于NRC推荐的最低标准。
2、饲养管理与数据采集
猪舍使用前，进行彻底清洗和消毒。每天添料2次，不断料、自由采食、饮水充足。以栏为单位，每天记录采食量。
3、测定指标及结果
（1）对整体活跃状态和腹泻分数的影响
试验期间，每天10:00和16:00，分别记录保育猪的活跃状态（AS；三标度法：1-懒，移动缓慢；2-中间状态；3-活跃移动并寻找）、抽搐、流涎、嗜睡、粪便稠度及腹泻情况（1-水样粪便；2-稀便；3-粥状粪便；4-正常稠度粪便）和有无死亡等。
整体活跃状态的结果见图1，对照组和实验组的活跃分数分别是2.3和2.35，活跃状态均处于中间状态和活跃觅食之间。实验组和对照组在活跃状态上无显著性差异（P&gt;0.05），且对照组和实验组均未发生死亡或疾病。
对腹泻分数的影响见图2，实验组和对照组均在试验第5、10和38天腹泻分数有显著性差异（P&lt;0.05）；饲喂全期，实验组的腹泻分数低于对照组（P＜0.05），并且在试验第38天时，实验组的腹泻分数降为0，对照组腹泻分数在0.6左右，说明粪肠球菌WJ146能够降低断奶仔猪腹泻。
（2）生长性能分析
试验开始和结束后，以重复为单位称重；试验结束收集每个重复中料槽剩余的饲料并称重；并计算初始均重、结束均重、日增重、日采食量、料肉比等生长指标。
日粮中添加粪肠球菌WJ146对断奶仔猪生产性能的影响见表5，实验组的日增重与对照组相比提高了12.39%，日采食量降低了5.25，料肉比比对照组低16.67%，虽无显著性差异（P＞0.05），但可以认为菌株WJ146有利于断奶仔猪的生长性能的提高。
表5 粪肠球菌WJ146对断奶仔猪生长性能的影响
注：对于同一批次的试验，同列，不同字母表示差异显著（P＜0.05），没有标注表示差异不显著（P＞0.05）。
（3）对粪便菌群的影响
在饲喂的第3、18和36 d以重复为单位，在不同的位置采集粪便样品，并保藏于-20℃以备分析粪便菌群变化。每组试验的6个重复各采集1份，20 g左右。每份粪便样品各取10 g加至90 mL无菌生理盐水，于均质机，混1 min后，再倒入三角瓶中，37℃，200 rpm摇匀20 min后，取1 mL梯度稀释，各取-4、-5、-6和-7梯度的稀释液100 μL，分别涂布于MRS培养基、肠球菌和肠杆菌的选择培养基上，于37℃培养48 h；各取-3、-4和-5梯度的稀释液100 μL，分别涂布于麦康凯培养基上，于37℃培养48 h。
不同种类菌的判定：肠球菌在Slanetz and Bartley 培养基上的菌落颜色是酱紫色；肠杆菌在Vilet Red Bile Glucose培养基上的菌落颜色是桃红色；大肠杆菌在麦康凯培养基的菌落颜色是桃红色。
粪肠球菌WJ146对不同饲喂时间段粪便中不同菌群的影响结果见表6。实验组和对照组的乳酸菌群从饲喂的第3 d至第18 d数量呈下降趋势，但实验组的数量比对照组高（P＜0.05），在饲喂第36 d，实验组和对照组的乳酸菌数达到最高，且实验组高于对照组（P＜0.05）；实验组和对照组的肠球菌群数随着饲喂时间呈逐渐下降的趋势，在饲喂的第18和36d，实验组高于对照组；实验组的大肠菌群和肠杆菌群随饲喂时间的延长，数量呈下降趋势，而对照组无明显下降规律，且实验组菌数始终低于对照组（P＜0.05）。总之，饲喂WJ146有利于肠道中乳酸菌数的提高，并能够降低大肠菌群和肠杆菌群的数量。
表6 粪肠球菌WJ146对饲喂不同时间段粪便菌群的影响
同列右肩不标字母表示差异不显著（P＞0.05），不同字母表示差异显著（P＜0.05）。
（4）对肠道组织形态的影响
饲喂结束，每组试验的每个重复各选择1头猪（选择体重与该重复平均体重接近的），放血致死，解剖，结扎胃肠段后，于十二指肠和空肠的近端分别截取2 cm长肠段，浸于10%甲醛固定，用梯度乙醇逐级脱水，二甲苯洗涤，石蜡包埋，分别在十二指肠和空肠肠段的3~6个位点，连续切取3~6个肠环横断面，制备6 μm厚石蜡切片，苏木精-伊红（HE）染色，光学显微镜下观察肠组织和各脏器的基本形态和病理学改变，并用图像采集***采集相应组织图像。采用MIAS软件测定十二指肠和空肠的绒毛高度、隐窝深度和粘膜厚度，每个样品至少测定10根完整绒毛。
对十二指肠和空肠组织形态的影响见表7所示，无论是十二指肠还是空肠，实验组的绒毛高度、隐窝深度和粘膜厚度均高于对照组，虽无显著性差异（P＞0.05），但可以说明饲喂粪肠球菌WJ146有利于肠绒毛的增长，进而增加营养物质的吸收面积，提高饲料利用率。
表7 饲喂粪肠球菌WJ146对十二指肠和空肠的组织形态影响
注：同一肠段，同列右肩不标字母表示差异不显著（P＞0.05），不同字母表示差异显著（P＜0.05）。
（5）饲喂菌株对猪肠道菌群的影响
每组的每个重复的猪解剖后，再分离回肠、盲肠和结肠，从十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠挤出内容物采集样品；并刮取十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠的粘膜物质。采集的内容物和粘膜样品分别装入离心管并置于-20℃冰箱冷冻保存，用于提取全基因组，采用二代测序技术分析（委托北京新科开源基因科技有限公司完成）各肠道部分的菌群组成。
实验组和对照组各肠段的微生物组成的Chao指数如图3所示，各肠段的α多样性指数由低到高分别是十二指肠＜结肠＜回肠＜空肠＜盲肠。
实验组和对照组猪不同肠段样本在门分类水平上的物种注释如图4所示，各肠段的优势菌群大多属于厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、变形菌门（Proteobacteria）、蓝细菌门（Cyanobactiria）和放线菌门（Actinobacteria）。除了空肠、盲肠和结肠的内容物外，实验组的厚壁菌门（Firmicutes）的相对丰度高于对照组；除了结肠粘膜和盲肠内容物样品外，实验组的变形菌门（Proteobacteria）的相对丰度低高于对照组。蓝细菌门（Cyanobactiria）在十二指肠内容物的相对丰度高于其它肠段样品，对于实验组来说，到盲肠和结肠的内容物后，蓝细菌门（Cyanobactiria）的相对丰度又进一步升高。
实验组和对照组猪不同肠段样本在属分类水平上的物种注释如图5所示，除了回肠和结肠的内容物和粘膜样品外，其余各肠段，无论内容物还是粘膜，实验组的乳杆菌属（Lactobacillus）的相对丰度均高于对照组；实验组的十二指肠和盲肠的粘膜及空肠和结肠的内容物样品中的志贺-埃希氏菌属（Escherichia-Shigella）的相对丰度均低于对照组；实验组的空肠和回肠的内容物样品中的链球菌属（Streptococcus）的相对丰度均低于对照组。
由此可见，无论是门水平还是属水平，实验组的益生菌群的相对丰度明显高于对照组，实验组的条件致病菌群的相对丰度明显低于对照组。

Claims (4)

1.一株粪肠球菌，分离于60日龄健康仔猪肠道粘膜，其特征在于，具有良好的体外益生特性和体内益生特性。
2.根据权利要求1所述的粪肠球菌，其特征在于，所述体外益生特性包括：在pH3.0的人工胃液中的3 h存活率为98.85%；在胆盐浓度为0.3%的人工肠液中的3 h存活率为99.69%；对大肠杆菌（Escherichia coli CVCC 1570）、产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens CICC 22949）、猪伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium CVCC 3783）和猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种（Salmonella choleraesuis subsp. choleraesuis AS1.1859）的抑菌圈直径分别为16.59 mm，18.54 mm，20.55 mm，21.83 mm；在猪小肠上皮细胞黏附率为84.31%。
3.根据权利要求1所述的粪肠球菌，其特征在于，所述体内益生特性包括：可以降低断奶仔猪的腹泻率，降低料肉比，提高粪便中乳酸菌的数量，降低大肠菌群和肠杆菌的数量，改善断奶仔猪的十二指肠和空肠的肠道组织形态（绒毛高度、隐窝深度和粘膜厚度均增加），改善不同肠段粘膜和内容物中有益菌群的相对丰度、降低致病菌群的相对丰度。
4.一株粪肠球菌WJ146在断奶仔猪上的使用方法，粪肠球菌可用于微生态制剂制备，其特征在于，所述粪肠球菌在每克基础日粮中的添加量≥106 CFU。
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