CN109254159A - 一种血清淀粉样蛋白a定量检测试剂盒 - Google Patents

一种血清淀粉样蛋白a定量检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN109254159A
CN109254159A CN201811317973.2A CN201811317973A CN109254159A CN 109254159 A CN109254159 A CN 109254159A CN 201811317973 A CN201811317973 A CN 201811317973A CN 109254159 A CN109254159 A CN 109254159A
Authority
CN
China
Prior art keywords
protein
magnetic particle
quantitative detection
serum amyloid
detection reagent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201811317973.2A
Other languages
English (en)
Inventor
董亚玲
李双法
于林
李奎
刘功成
付光宇
吴学炜
苗拥军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Autobio Diagnostics Co Ltd
Original Assignee
Autobio Diagnostics Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Autobio Diagnostics Co Ltd filed Critical Autobio Diagnostics Co Ltd
Priority to CN201811317973.2A priority Critical patent/CN109254159A/zh
Publication of CN109254159A publication Critical patent/CN109254159A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，包括磁微粒复合物试剂，酶结合物溶液，样本稀释液，SAA校准品以及发光底物；所述磁微粒复合物试剂中的磁微粒偶联有鼠抗人SAA单克隆抗体；所述酶结合物溶液为辣根过氧化物酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液或碱性磷酸酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液。本发明制备的试剂盒可以搭配全自动免疫检测仪，操作简便，结果更准确，线性更宽，灵敏度更高，并且可以直接检测全血。与比浊法相比，降低了血脂样本的干扰，能够更加准确地检测人血清、血浆、全血中的SAA；搭载自动化***操作简单，通量大；采用磁微粒平台，使用面较广，成本低且受众广。

Description

一种血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒
技术领域
本发明涉及体外检测技术，尤其是涉及一种血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒。
背景技术
血清淀粉样蛋白A（SAA）属于急性时相反应蛋白，炎症或感染急性期在48-72h内迅速升高，并在疾病的恢复期下降。目前在细菌、病毒感染，动脉粥样硬化，冠心病，急性移植排斥反应，肿瘤等疾病中均能检测到血清SAA升高。特别在某些疾病中，如病毒感染、移植排斥反应、冠心病等，SAA的敏感性高于CRP，故SAA的定量检测可为临床提供更好的参考价值。
血清淀粉样蛋白A定量检测包含多种方法和平台，主要包括免疫比浊法、胶体金渗滤法、酶联免疫吸附法以及荧光免疫层析法。免疫比浊法由于对仪器要求高，以及在原理上存在缺陷，造成免疫比浊法的检测结果线性短，检测结果不准确，易受血脂的影响，并且不能检测全血；胶体金渗滤法适用于床旁检验，并且可以检测全血，但是该方法操作过程过于复杂，不利于工作人员大量处理；酶联免疫吸附法(ELISA)进行测定具有较高的灵敏度，但是操作过程繁琐，每次测值均需要绘制标准曲线，准确度误差大，测定时间较长，仪器昂贵且需要经过一定专业培训的人员进行操作，因此不符合临床快速检测的要求；荧光免疫层析法由于层析平台本身的局限性，精密性问题始终不能得到解决，并且成本相对较高，目前市场上已较少出现。
发明内容
本发明的目的在于针对上述现有技术所存在的缺陷，提供一种检测结果更准确，线性更宽，灵敏度更高的血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒。
为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：
本发明所述的血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，包括磁微粒复合物试剂，酶结合物溶液，样本稀释液，SAA校准品以及发光底物；所述磁微粒复合物试剂中的磁微粒偶联有鼠抗人SAA单克隆抗体；所述酶结合物溶液为辣根过氧化物酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液或碱性磷酸酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液。
所述磁微粒的粒径为0.5um-20um，其表面修饰有~COOH、~NH2、苯甲磺酰基或~SH基团。
所述样本稀释液为Tris-HCl、Tris-NaCl、PBS缓冲液或者生理盐水。
所述样本稀释液中包含有牛血清白蛋白或Casein蛋白质。
所述发光底物包括A液和B液，其中A液的主要成分为双氧水，B液的主要成分为鲁米诺或者鲁米诺衍生物，使用时按照1:1混匀。
所述发光底物也可以为AP发光底物或辣根过氧化物酶发光底物，如Lumi-Phos530、AMPPD等。
本发明通过磁微粒化学发光方法，设计定量检测人血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，其主要原理为：通过磁微粒包被鼠抗人单克隆抗体，结合人血清、血浆、全血中的血清淀粉样蛋白A，再与辣根过氧化物酶（HRP）或者碱性磷酸酶（AP）标记的另一株鼠抗人单抗形成双抗体夹心法，辣根过氧化物酶在底物存在的情况下，催化底物发光，通过光检测***进行定量检测。
本发明制备的试剂盒可以搭配全自动免疫检测仪，操作简便，结果更准确，线性更宽，灵敏度更高，并且可以直接检测全血。与比浊法相比，降低了血脂样本的干扰，能够更加准确地检测人血清、血浆、全血中的SAA；搭载自动化***操作简单，通量大；采用磁微粒平台，使用面较广，成本低且受众广。
附图说明
图1为本发明试剂盒的线性关系图。
图2本发明试剂盒的高值HOOK图。
图3是本发明试剂盒与西门子试剂盒临床数据相关性对比图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做更加详细的说明，以便于本领域技术人员的理解。如无特殊说明，本发明所用的试剂和实验仪器均为市售产品，采用的方法为本领域常规方法。
实施例1 制备血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒
1、配制磁微粒复合物试剂
取磁珠缓冲液30ul，反复吹打磁珠（粒径约1um），置于磁珠分离器上，吸取上清后，添加碳二亚胺活化液，室温反应30min~1h；然后加入鼠抗人SAA捕获抗体进行偶联2h或者过夜；偶联结束后，至于磁珠分离器上吸取上清，加入乙醇胺溶液进行封闭30min；磁珠也置于分离器上，吸取上清后，加入封保液（主要成分为Tris-Nacl缓冲液，BSA以及EDTA），混匀，置于磁珠分离器，弃上清，重复3-5次后，封保液定容至3ml。
2、配制酶结合物溶液
取适量的酶标记抗体，按1:2000的稀释比例加入到酶稀释液中，配制成酶结合物溶液；所用的酶稀释液为0.02MPBS缓冲液（pH7.4），其中含有2%BSA，0.2%Prolin-300。
3、配制样本稀释液
采用0.02MPBS缓冲液（pH7.4）作为样本稀释液，其中含有2%BSA,0.2%Prolin-300;使用时将样本进行200倍稀释。
4、配制SAA校准品
采用0.02MPBS缓冲液（pH7.4，其中含有2%BSA,0.2%Prolin-300）作为校准品稀释液，将重组抗原稀释至校准品中，目标浓度分别是200mg/l、100mg/l、50mg/l、25mg/l、5mg/l以及0mg/l。
5、制备发光底物
A液：主要成分为双氧水。
B液：主要成分为鲁米诺或者鲁米诺衍生物。
实施例2 本发明试剂盒的检测方法
1、取20ul样本稀释200倍；
2、取20ul稀释后的样本，加入20ul的磁微粒复合物试剂，吹打混匀，再加入100ul的酶结合物溶液，37℃孵育10min；
3、在以上混合液中加入0.02M PBS洗液，清洗5次，加入底物（A液、B液各50ul）然后在安图全自动免疫化学发光仪A2000进行检测。
实施例3 本发明试剂盒的性能检测
1、线性范围：
将高值样本（230mg/l）进行梯度稀释，结果见下表和图1：
结论：根据上表和图1，本试剂盒的线性范围满足3mg/l-200mg/l。
2、检验本发明试剂盒的 HOOK风险
将抗原高值进行梯度稀释，结果如下表和图2所示：
结论：根据上表和图2，本试剂盒的可以做到3600mg/l且无明显“钩状”，HOOK拐点可至115200mg/l。
3、本发明试剂盒的相关性试验
将本发明试剂盒检测西门子试剂临床定值样本，其临床数据相关性如图3所示，结果表明，本发明试剂盒与西门子的临床相关性r>0.99以上。

Claims (6)

1.一种血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，其特征在于：包括磁微粒复合物试剂，酶结合物溶液，样本稀释液，SAA校准品以及发光底物；所述磁微粒复合物试剂中的磁微粒偶联有鼠抗人SAA单克隆抗体；所述酶结合物溶液为辣根过氧化物酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液或碱性磷酸酶标记的鼠抗人SAA抗体溶液。
2.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，其特征在于：所述磁微粒的粒径为0.5um-20um，其表面修饰有~COOH、~NH2、苯甲磺酰基或~SH基团。
3.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，其特征在于：所述样本稀释液为Tris-HCl、Tris-NaCl、PBS缓冲液或者生理盐水。
4.根据权利要求3所述的血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，其特征在于：所述样本稀释液中包含有牛血清白蛋白或Casein蛋白质。
5.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，其特征在于：所述发光底物包括A液和B液，其中A液的主要成分为双氧水，B液的主要成分为鲁米诺或者鲁米诺衍生物。
6.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A定量检测试剂盒，其特征在于：所述发光底物为AP发光底物或辣根过氧化物酶发光底物。
CN201811317973.2A 2018-11-07 2018-11-07 一种血清淀粉样蛋白a定量检测试剂盒 Withdrawn CN109254159A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811317973.2A CN109254159A (zh) 2018-11-07 2018-11-07 一种血清淀粉样蛋白a定量检测试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811317973.2A CN109254159A (zh) 2018-11-07 2018-11-07 一种血清淀粉样蛋白a定量检测试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109254159A true CN109254159A (zh) 2019-01-22

Family

ID=65043239

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811317973.2A Withdrawn CN109254159A (zh) 2018-11-07 2018-11-07 一种血清淀粉样蛋白a定量检测试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109254159A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111289759A (zh) * 2020-03-10 2020-06-16 苏州翊讯生物科技有限公司 Saa检测试剂盒及saa定量检测的方法
CN113933506A (zh) * 2021-10-29 2022-01-14 北京利德曼生化股份有限公司 测定人体壳多糖酶3样蛋白1(chi3l1)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒
CN114539401A (zh) * 2022-04-26 2022-05-27 北京科跃中楷生物技术有限公司 一种磁微粒标记方法及检测试剂盒
CN117825708A (zh) * 2024-03-04 2024-04-05 宁波美康盛德生物科技有限公司 一种sFlt-1检测试剂盒

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108169219A (zh) * 2018-01-15 2018-06-15 浙江艾明德生物科技有限公司 一种定量检测血清淀粉样蛋白a的试剂盒及制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108169219A (zh) * 2018-01-15 2018-06-15 浙江艾明德生物科技有限公司 一种定量检测血清淀粉样蛋白a的试剂盒及制备方法

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111289759A (zh) * 2020-03-10 2020-06-16 苏州翊讯生物科技有限公司 Saa检测试剂盒及saa定量检测的方法
CN111289759B (zh) * 2020-03-10 2023-10-27 苏州翊讯生物科技有限公司 Saa检测试剂盒及saa定量检测的方法
CN113933506A (zh) * 2021-10-29 2022-01-14 北京利德曼生化股份有限公司 测定人体壳多糖酶3样蛋白1(chi3l1)含量的磁微粒化学发光检测试剂盒
CN114539401A (zh) * 2022-04-26 2022-05-27 北京科跃中楷生物技术有限公司 一种磁微粒标记方法及检测试剂盒
CN114539401B (zh) * 2022-04-26 2022-06-24 北京科跃中楷生物技术有限公司 一种磁微粒标记方法及检测试剂盒
CN117825708A (zh) * 2024-03-04 2024-04-05 宁波美康盛德生物科技有限公司 一种sFlt-1检测试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109254159A (zh) 一种血清淀粉样蛋白a定量检测试剂盒
CN105548565B (zh) 一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒及其制备和应用
JP7345002B2 (ja) 腫瘍マーカーの測定方法及び測定試薬
CN106226516B (zh) 一种双曲线定标定量免疫层析检测方法
CN102159591A (zh) 单克隆抗体和使用所述单克隆抗体的免疫测定法
CN102901810B (zh) 包被有***特异性抗原抗体的胶乳颗粒的制备方法及psa胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒
CN105651990A (zh) 一种17α-羟孕酮的化学发光检测试剂盒及其制备方法和应用
CN107817232A (zh) 用于进行过敏症和自身免疫性疾病的诊断测定的自动化免疫分析***
CN112014575B (zh) 一种cyfra21-1测定试剂盒及其制备方法
CN112679605B (zh) 针对新型冠状病毒核衣壳蛋白的抗体或其抗原结合片段及其应用
CN108398550B (zh) 一种组合物、芯片及其制备方法和包含有该芯片的检测装置
CN108519487A (zh) 一种白介素-6的定量检测方法及检测试剂盒
JP2019528438A (ja) ビタミンｄをアッセイするための方法および組成物
CN105277690A (zh) 全自动测定抗蛋白酶3抗体IgG的试剂盒及方法
JP5276924B2 (ja) オクラトキシンに対する抗体、その抗体を用いた親和性カラム、およびオクラトキシンの免疫学的検出用キット
CN113150133B (zh) 针对SARS-CoV-2的单克隆抗体或其抗原结合片段
CN117233378B (zh) 用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条及其制备方法
CN109085358A (zh) 血清淀粉样蛋白a测定试剂盒及制作方法
Warrener et al. Evaluation of a rapid diagnostic test for measles IgM detection; accuracy and the reliability of visual reading using sera from the measles surveillance programme in Brazil, 2015
CN110596380A (zh) 一种排除hook效应的方法及其免疫层析检测卡
CN103558384A (zh) 一种同时检测四种肿瘤标志物的化学发光试剂盒及其制备方法
JP2003107089A (ja) 超迅速超高感度測定法
Gao et al. Highly specific and sensitive immunoassay for the measurement of prostaglandin E2 in biological fluids
CN104749354B (zh) 同时检测四种抑郁症标志物的试剂盒及其制备方法
CN112129933A (zh) 一种免疫分析***中抗生物素干扰的试剂、试剂盒及方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20190122