CN109212238B - 一种糖化白蛋白测定试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种糖化白蛋白检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包含试剂R1、R2和校准品。通过在试剂R2中加入由MgCl2、谷胱甘肽、EDTA三种成分组成的酶激活剂，有效的提高了试剂盒的分析灵敏度，且试剂的准确度高，稳定性好，有利于在市场中进一步的推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种糖化白蛋白检测试剂盒。
背景技术
糖化白蛋白是一种重要的糖基化产物，是血清白蛋白与葡萄糖发生反应形成的非酶促糖基化产物，其形成的量与血糖水平有关。糖基化反应分为两个阶段即早期糖基化反应和晚期糖基化反应。早期糖基化反应包括蛋白质的氨基与还原糖( 如葡萄糖) 形成席夫碱，然后通过 Amadori 重排，形成一个稳定的 Amadori 复合物。早期糖基化产物经过脱氢或氧化形成终末糖基化产物。
蛋白质的糖基化是人体内一个连续性过程，糖尿病患者体内糖化蛋白质的水平与血糖水平密切相关。目前，糖化血红蛋白仍是血糖监测指标的金标准。而糖化血红蛋白作为一个血糖监测指标，有它的局限性，红细胞的寿命长达120d，糖化血红蛋白可反映2～3个月的平均血糖水平。对于血糖水平快速变化、相应药物的治疗效果，糖化血红蛋白均不能准确反映。对于一些血红蛋白异常的疾病，如缺铁性贫血、妊娠、人类免疫缺陷病毒感染、肝硬化等，糖化血红蛋白不能准确反映其血糖水平，而糖化白蛋白已被用来作为另外一个临床参数来规避糖化血红蛋白的局限性。相比较血红蛋白而言，血清中白蛋白的半衰期约为21d，所以糖化白蛋白反映2～3周的平均血糖水平，另外，研究发现，糖化白蛋白对不同水平的葡萄糖亲和力比糖化血红蛋白更强，变化早于糖化血红蛋白，对于不稳定的血糖变化，糖化白蛋白能及时监测，在了解短期内血糖水平时，糖化白蛋白更具有优势。这也使糖化白蛋白可及时反映血糖的动态变化以及糖尿病的治疗效果。而且糖化白蛋白可在普通的自动生化分析仪上使用，检测较糖化血红蛋白更简便、价格低廉。
糖化白蛋白检测试剂盒（过氧化物酶法）检测原理为在样本中加入对白蛋白有特异性的蛋白酶，分解糖化白蛋白，生成糖化氨基酸，然后糖化氨基酸在特异性糖化氨基酸氧化酶的作用下变成葡萄糖醛酮、氨基酸和过氧化氢，在过氧化物酶的作用下，过氧化氢与4-AAP和HTIB发生Trinder反应，生成红色醌亚胺，测定其吸光度变化，得到样本中糖化白蛋白的浓度。
糖化白蛋白检测试剂盒（过氧化物酶法）是一种无需预处理样本、技术和设备要求不高、而精密度和特异性更高的分析方法，由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。本发明在不改变其它性能指标的前提下加强了试剂的分析灵敏度。
发明内容
本发明提供了一种糖化白蛋白检测试剂盒。该试剂盒与常规的试剂盒相比，准确度、线性范围、稳定性等性能指标一致，而分析灵敏度有所提高，有利于试剂在临床上的推广应用。
本发明是通过以下措施实现的：
一种糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、R2和校准品，其中试剂R1组成为：
Tris-HCL缓冲液（pH8.0） 0.1mol/L
蛋白酶 500KU/L
3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸（HTIB） 10mmol/L
4-Proclin300 3ml/L
试剂R2组成为：
Tris-HCL缓冲液(pH7.0 ) 0.1mol/ L
糖化氨基酸氧化酶 500KU/L
4-氨基安替比林(4-AAP) 10mmol/L
Proclin300 3ml/L
MgCl2 1g/L
谷胱甘肽 1-2g/L
EDTA 2-4g/L。
所述样本和试剂R在使用时的体积比例为体积比例为S：R1：R2=3µL：160µL：40µL。
本实施例描述的糖化白蛋白检测试剂盒（过氧化物酶法），在使用时，其测定方法是采用自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪，具体操作方法为：
加入生理盐水、样本或校准品3μl，之后再加入R1试剂160μl孵育5min，在546nm波长下记录吸光度值A1，加入R2试剂40μl，孵育5分钟后在546nm波长下记录吸光度值A2，计算ΔA。本发明所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
本发明的有益效果：
本发明提供的糖化白蛋白检测试剂盒，通过在试剂中加入了由MgCl2、谷胱甘肽、EDTA三种成分组成的酶激活剂，各组分协同作用提高了酶的活性，从而提高了试剂盒的分析灵敏度，却不会对试剂的准确度、线性和稳定性产生影响，有利于该试剂在市场中进一步的推广。
附图说明
图1 实施例2准确度验证实验检测结果与实施例1检测结果相关性；
图2 实施例3准确度验证实验检测结果与实施例1检测结果相关性；
图3 实施例1-3试剂稳定性验证实验检测结果；
图4 实施例1-3试剂分析灵敏度验证实验检测结果。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。
实施例1
市场上获得认可的一种准确度优异的糖化白蛋白试剂盒，包括试剂R1、试剂R2，具体组成成分如下：
试剂R1组成为：
Tris-HCL缓冲液（pH8.0） 0.1mol/L
蛋白酶 500KU/L
5-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸（HTIB） 10mmol/L
6-Proclin300 3ml/L
试剂R2组成为：
Tris-HCL缓冲液(pH7.0 ) 0.1mol/ L
糖化氨基酸氧化酶 500KU/L
4-氨基安替比林(4-AAP) 10mmol/L
Proclin300 3ml/L。
本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用自动生化分析仪，如日立7180自动分析仪，操作如下：
加入生理盐水、样本或校准品3μl，之后再加入试剂1为160μl孵育5min ，在546nm波长下记录吸光度值A1，加入试剂2为40μl，孵育5分钟后在546nm波长下记录吸光度值A2，计算ΔA。
本实施例所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
实施例2
根据本发明试剂组分配置一种糖化白蛋白检测试剂盒，具体组成成分如下：
试剂R1组成为：
Tris-HCL缓冲液（pH8.0） 0.1mol/L
蛋白酶 500KU/L
7-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸（HTIB） 10mmol/L
8-Proclin300 3ml/L
试剂R2组成为：
Tris-HCL缓冲液(pH7.0 ) 0.1mol/ L
糖化氨基酸氧化酶 500KU/L
4-氨基安替比林(4-AAP) 10mmol/L
Proclin300 3ml/L
MgCl2 1g/L
谷胱甘肽 1g/L
EDTA 2g/L。
具体测定方法同实施例1。
实施例3
根据本发明试剂组分配置一种糖化白蛋白检测试剂盒，具体组成成分如下：
Tris-HCL缓冲液（pH8.0） 0.1mol/L
蛋白酶 500KU/L
9-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸（HTIB） 10mmol/L
10-Proclin300 3ml/L
试剂R2组成为：
Tris-HCL缓冲液(pH7.0 ) 0.1mol/ L
糖化氨基酸氧化酶 500KU/L
4-氨基安替比林(4-AAP) 10mmol/L
Proclin300 3ml/L
MgCl2 1g/L
谷胱甘肽 2g/L
EDTA 4g/L。
具体测定方法同实施例1。
对上述实施例中制得的试剂盒进行性能实验验证。
准确度验证实验：
将实施例2、3的试剂盒作为实验组，实施例1中试剂盒作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测结果如图1-图2。
通过图1-图2的检测数据可知，实施例2、3检测试剂盒与实施例1试剂盒的检测结果线性相关系数r分别为0.9983、0.9982，相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的具有优异准确度的糖化白蛋白检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
稳定性验证实验：
在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测实施例1-3试剂的稳定性。三种试剂每月选取同一样本测定三次，取平均值，与新鲜的实施例1试剂检测结果进行比对，从而确定试剂的稳定时间。检测数据如图3。
实验结果显示，三组试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定，证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其稳定性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的稳定性。
分析灵敏度验证实验：
用糖化白蛋白试剂（盒）测试已知浓度在14g/L的样本，记录吸光度变化率（ΔA/min）。分别利用实施例1-3试剂进行检测。检测结果如图4。
通过检测数据可知，实施例2、3试剂盒的吸光度差值均比实施例1的高，说明在试剂中加入由MgCl2、谷胱甘肽、EDTA三种成分组成的酶激活剂能有效的提高糖化白蛋白检测试剂盒的分析灵敏度。
综合以上分析，本发明提供的糖化白蛋白检测试剂盒，在试剂R2中通过加入酶激活剂能够有效提高试剂盒的分析灵敏度，试剂的准确度和稳定性也较好。因此，本发明提供的糖化白蛋白检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。
Claims (3)
1.一种糖化白蛋白测定试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、R2和校准品，其中试剂R1组成为：
Tris-HCL缓冲液pH8.0 0.1mol/L
蛋白酶 500KU/L
3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸（HTIB） 10mmol/L
4-Proclin300 3ml/L
试剂R2组成为：
Tris-HCL缓冲液pH7.0 0.1mol/ L
糖化氨基酸氧化酶 500KU/L
4-氨基安替比林(4-AAP) 10mmol/L
Proclin300 3ml/L
MgCl2 1g/L
谷胱甘肽 1-2g/L
EDTA 2-4g/L。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，样本和试剂在使用时的体积比例为S：R1：R2=3µL：160µL：40µL。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R2组分中加入了由MgCl2、谷胱甘肽、EDTA三种成分组成的酶激活剂，增加了试剂的分析灵敏度。
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