CN109207550A - 一种牡丹籽多肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种牡丹籽多肽的制备方法,属于多肽制备技术领域,所述方法包括以下步骤:1)将牡丹籽粕粉与水混合溶解后,调节pH值为8~10,搅拌40~80min获得碱性料液;2)将步骤1)中获得的碱性料液固液分离获得碱性清液,调节所述碱性清液的pH值为2~4,搅拌15~25min,获得酸性料液;3)将所述酸性料液固液分离后,收集固相组分获得牡丹籽蛋白;4)将所述牡丹籽蛋白与水混合灭菌后,接入菌种20~40℃发酵60~80h,固液分离,收集液相组分为牡丹籽多肽。本发明所述方法制备获得的牡丹籽多肽水溶性好(溶解度为50mg/mL)、氨基酸含量大于等于10%,所含的常见氨基酸的种类在15种以上。
Description
技术领域
本发明属于多肽制备技术领域,尤其涉及一种牡丹籽多肽的制备方法。
背景技术
牡丹属于芍药科芍药属,为多年生落叶小灌木,是一种经济价值和营养价值都很高的植物。牡丹籽可用于榨油,其籽油富含α-亚麻酸,具有降血压、降血脂等多种保健功能;牡丹根皮中含有丰富的丹皮,可用于生产中药;牡丹的花、蕾、芽可用于制作保健茶;牡丹籽饼粕富含膳食纤维,可用于发酵生产酵素,调节胃肠道健康。
目前牡丹籽油作为新资源食品,种植面积急剧扩大,牡丹籽产量逐年提高,对牡丹的研究也越来越多、越来越深入。油脂提取后产生的牡丹籽饼粕主要作为饲料原料或食用菌培养基基料,综合开发利用水平低;牡丹籽粕蛋白含量大约在30%,目前,对牡丹籽蛋白提取和利用的研究还很缺乏,尚没有一种有效的提取和利用牡丹籽蛋白的方法。
发明内容
有鉴于此,本发明的内容在于提供一种牡丹籽多肽的制备方法,所述方法利用碱溶酸沉法提取牡丹籽蛋白,然后接入菌种对所述牡丹籽蛋白进行发酵,将牡丹籽蛋白转化为多肽形式,更有利于人体的吸收,达到保健作用,提高牡丹籽粕的营养价值。
为了实现上述发明目的,本发明提供了以下技术方案:
一种牡丹籽多肽的制备方法,包括以下步骤:
1)将牡丹籽粕粉与水混合溶解后,调节pH值为8~10,搅拌40~80min获得碱性料液;
2)将步骤1)中获得的碱性料液固液分离获得碱性清液,调节所述碱性清液的pH值为2~4,搅拌15~25min,获得酸性料液;
3)将所述酸性料液固液分离后,收集固相组分获得牡丹籽蛋白;
4)将所述牡丹籽蛋白与水混合灭菌后,接入菌种20~40℃发酵60~80h,固液分离,收集液相组分为牡丹籽多肽。
优选的,步骤1)中所述牡丹籽粕粉与水的质量比为1:(10~40)。
优选的,步骤1)中所述混合溶解的温度为45~65℃。
优选的,步骤2)、步骤3)和步骤4)中所述固液分离为离心。
优选的,步骤1)中所述搅拌的转速为50~200rpm。
优选的,步骤4)中所述牡丹籽蛋白与水的质量比为1:2~8。
优选的,步骤4)中所述菌种为乳酸乳球菌乳亚种、嗜热链球菌、纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母中的一种。
优选的,步骤4)中所述发酵的过程中伴随震荡,所述震荡的转速为30~100rpm。
优选的,步骤4)在获得所述牡丹籽多肽后,还包括对所述牡丹籽多肽进行干燥获得牡丹籽多肽粉。
优选的,所述干燥为冷冻干燥,所述冷冻干燥的温度为-80~-60℃;所述冷冻干燥的时间为75~85h。
本发明的有益效果:本发明提供的牡丹籽多肽的制备方法,首先利用碱溶酸沉法提取牡丹籽粕中的牡丹籽蛋白,然后接入菌种对所述牡丹籽蛋白进行发酵,将牡丹籽蛋白转化为多肽形式,更有利于人体的吸收,无任何毒副作用,达到保健作用,提高了牡丹籽粕的营养价值。本发明所述方法制备获得的牡丹籽多肽水溶性好(溶解度为50mg/mL)、成本低、氨基酸含量高,种类丰富,所含的常见氨基酸的种类在15种以上。
本发明所书方法采用的牡丹籽粕为提取牡丹籽油的剩余物,对其进行利用能够有效提高生产剩余物价值;本发明所述方法操作简便、成本低廉、易于产业化生产;本发明所述方法为国家牡丹籽粕的开发与高值化利用提供了技术基础。
具体实施方式
本发明提供了一种牡丹籽多肽的制备方法,包括以下步骤:1)将牡丹籽粕粉与水混合溶解后,调节pH值为8~10,搅拌40~80min获得碱性料液;2)将步骤1)中获得的碱性料液固液分离获得碱性清液,调节所述碱性清液的pH值为2~4,搅拌15~25min,获得酸性料液;3)将所述酸性料液固液分离后,收集固相组分获得牡丹籽蛋白;4)将所述牡丹籽蛋白与水混合灭菌后,接入菌种20~40℃发酵60~80h,固液分离,收集液相组分为牡丹籽多肽。
本发明将牡丹籽粕粉与水混合溶解。在本发明中所述牡丹籽粕粉的粒度优选为0.5~2mm,更优选为1~1.5mm。本发明中所述牡丹籽粕粉是由牡丹籽粕粉碎获得,本发明对所述粉碎的方法没有特殊限定,只要能够实现粉碎后牡丹籽粕粉的粒度在上述范围之内即可;在本发明具体实施过程中,所述粉碎采用粉碎机进行。本发明中,所述牡丹籽粕为牡丹籽提取牡丹籽油后的剩余物,来源广泛,成本低。本发明将所述牡丹籽粕粉与水混合溶解,所述牡丹籽粕粉与水的质量比优选为1:(10~40),更优选为1:(15~35),最优选为1:(20~30);本发明中所述混合溶解的温度优选为45~65℃,更优选为50~60℃,最优选为52~58℃;本发明中所述混合溶解的时间优选为3~8min,更优选为5min;本发明中所述混合溶解的过程中优选的伴随搅拌,所述搅拌的转速优选为80~120rpm,更优选为100rpm。
本发明在所述混合溶解后,调节pH值为8~10,搅拌40~80min获得碱性料液。在本发明中所述调节pH值用的试剂优选为碱性试剂,更优选为强碱,在本发明具体实施过程中,所述调节pH值用的试剂为NaOH溶液,所述NaOH溶液的浓度优选为0.5~1.5mol/L,更优选为1.0mol/L。本发明中,所述pH值优选为8.5~9.5。本发明中,所述搅拌的时间优选为50~70min,更优选为55~65min。
本发明在获得所述碱性料液后,获得的碱性料液固液分离获得碱性清液,调节所述碱性清液的pH值为2~4,搅拌15~25min,获得酸性料液。本发明中,所述固液分离优选为离心,本发明中所述离心的转速优选为3000~8000rpm,更优选为4000~7000rpm;所述离心的时间优选为10~40min,更优选为15~35min;本发明中所述离心后收集上清液为碱性清液。本发明中调节所述碱性清液的pH值的试剂优选为酸性试剂,更优选为盐酸溶液,所述盐酸溶液的的浓度优选为0.5~1.5mol/L,更优选为0.8~1.2mol/L,本发明中,所述pH值优选的调至2.5~3.5,更优选为调节至2.8~3.3。本发明在调节所述碱性清液的pH值后,搅拌15~25min,获得酸性料液;所述搅拌的时间优选为18~22min,更优选为20min。
本发明在获得所述酸性料液后,将所述酸性料液固液分离,收集固相组分获得牡丹籽蛋白。本发明中,所述固液分离优选为离心,本发明中所述离心的转速优选为3000~8000rpm,更优选为4000~7000rpm;所述离心的时间优选为10~40min,更优选为15~35min。
本发明在获得所述牡丹籽蛋白后,将将所述牡丹籽蛋白与水混合灭菌。在本发明中,所述牡丹籽蛋白与水的质量比优选为1:2~8,更优选为1:(3~7)最优选为1:4。本发明对所述灭菌的方法没有特殊限定,采用本领域常规灭菌方法即可。在本发明具体实施过程中,采用高温湿热灭菌、紫外灭菌和膜过滤除菌均可。本发明在所述灭菌后,接入菌种20~40℃发酵60~80h,固液分离,收集液相组分为牡丹籽多肽。在本发明中,所述菌种为乳酸乳球菌乳亚种、嗜热链球菌、纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母中的一种,本发明对所述菌种的来源没有特殊限定,采用本领域常规上述菌种即可,在本发明具体实施过程中,所述菌种购自北京百欧博伟生物技术有限公司。本发明中,所述发酵的温度根据具体菌种的最适温度而定,选为25~35℃,28~32℃或30℃。本发明中所述发酵的时间优选为65~75h,更优选为72h。本发明中所述菌种为活化后的菌种,本发明对所述菌种的活化方法没有特殊限定,采用常规菌种活化方法即可。本发明中,接入菌种的质量与牡丹籽蛋白的质量比优选为1:(2000~3000),更优选为1:(2200~2800),最优选为1:2500。本发明在所述发酵结束后,进行固液分离,收集液相组分为牡丹籽多肽。本发明中,所述固液分离优选为离心,本发明中所述离心的转速优选为3000~8000rpm,更优选为4000~7000rpm;所述离心的时间优选为10~40min,更优选为15~35min。本发明在获得所述牡丹籽多肽后,还包括对所述牡丹籽多肽进行干燥获得牡丹籽多肽粉,本发明中,所述干燥优选的为冷冻干燥,所述冷冻干燥的温度优选为-80~-60℃,更优选为-75~-65℃,最优选为-70℃;所述冷冻干燥的时间优选为75~85h,更优选为78~82h,最优选为70h。
本发明所述方法制备获得的牡丹籽多肽,水溶性好(溶解度为50mg/mL)、成本低、氨基酸含量高,大于等于10%、所含氨基酸种类丰富,所含的常见氨基酸的种类在15种以上,更有利于人体的吸收。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
称取牡丹籽粕200g,用粉碎机将其粉碎(粒度0.5~2mm),然后加入5000g水中53℃恒温水浴搅拌,搅拌时间为5min,搅拌转速为100rpm,再用1mol/LNaOH溶液调节pH到9.25,搅拌68min,后离心(5000rpm,20min),在向其上清液加入1mol/L HCl溶液调节pH到3.5,搅拌20min后离心(5000rpm,20min),得到沉淀即为粗蛋白50g,向所述粗蛋白加入200g水混合均匀灭菌备用。将纳豆芽孢杆菌在30℃的培养箱中活化72h。再将上述灭菌加水溶解的粗蛋白在超净工作台中接入20mg已活化的纳豆芽孢杆菌发酵72h,发酵温度为30℃,摇床速度为50rpm。发酵后离心(5000rpm,20min)收集上清液进行冻干,冻干温度为-70℃,时间为80h。最后得到38g牡丹籽多肽。
得到的牡丹籽多肽水溶性好(溶解度为50mg/mL)、成本低、氨基酸总含量为12.36%、20种常见氨基酸种类不低于15种。获得的所述牡丹籽多肽中包括:天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、精氨酸和脯氨酸。
实施例2
称取牡丹籽粕10kg,用粉碎机将其粉碎(粒度1mm),然后加入250kg水中53℃恒温水浴夹层搅拌罐中,搅拌时间为5min,搅拌转速为100rpm,再用1mol/L NaOH溶液调节pH到9.25,搅拌68min,后离心(5000rpm,20min),向其上清液加入1mol/L HCl溶液调节pH到3.5,搅拌20min后离心(5000rpm,20min),得到沉淀即为粗蛋白2.5kg,加入10kg水混合均匀灭菌备用。将纳豆芽孢杆菌在30℃的培养箱中活化72h。在将上述灭菌加水溶解的粗蛋白在超净工作台中接入1g已活化的纳豆芽孢杆菌发酵72h,发酵温度为30℃,转速为50rpm。发酵后离心(5000rpm,20min)上清液冻干,冻干温度为-70℃,时间为80h。最后得到1.9kg牡丹籽多肽。得到的牡丹籽多肽水溶性好(溶解度为50g/mL)、成本低、氨基酸总含量为11.71%、20种常见氨基酸种类不低于15种,获得的所述牡丹籽多肽中包括:天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、精氨酸、脯氨酸)。
实施例3
称取牡丹籽粕500g,用粉碎机将其粉碎(粒度1mm),然后加入12500g水中53℃恒温水浴夹层搅拌罐中,搅拌时间为5min,搅拌转速为100rpm,再用1mol/LNaOH溶液调节pH到9.25,搅拌68min,后离心(5000rpm,20min),向其上清液加入1mol/L HCl溶液调节pH到3.5,搅拌20min后离心(5000rpm,20min),得到沉淀即为粗蛋白120kg,加入480g水混合均匀灭菌备用。将酿酒酵母在30℃的培养箱中活化72h。在将上述灭菌加水溶解的粗蛋白在超净工作台中接入0.05g已活化的酿酒酵母发酵72h,发酵温度为30℃,转速为50rpm。发酵后离心(5000rpm,20min)上清液冻干,冻干温度为-70℃,时间为80h。最后得到80g牡丹籽多肽。氨基酸总含量为5.63%。通过上述同样方法:用过嗜热链球菌进行发酵,最后得到71g牡丹籽多肽,氨基酸总含量为7.39%。用过乳酸乳球菌乳亚种进行发酵,最后得到74g牡丹籽多肽,氨基酸总含量为7.86%。
由上述实施例可知,本发明所述方法制备获得的牡丹籽多肽,水溶性好(溶解度为50mg/mL)、成本低、氨基酸含量高,大于等于10%、所含氨基酸种类丰富,所含的常见氨基酸的种类在15种以上,更有利于人体的吸收。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种牡丹籽多肽的制备方法,包括以下步骤:
1)将牡丹籽粕粉与水混合溶解后,调节pH值为8~10,搅拌40~80min获得碱性料液;
2)将步骤1)中获得的碱性料液固液分离获得碱性清液,调节所述碱性清液的pH值为2~4,搅拌15~25min,获得酸性料液;
3)将所述酸性料液固液分离后,收集固相组分获得牡丹籽蛋白;
4)将所述牡丹籽蛋白与水混合灭菌后,接入菌种20~40℃发酵60~80h,固液分离,收集液相组分为牡丹籽多肽。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中所述牡丹籽粕粉与水的质量比为1:(10~40)。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中所述混合溶解的温度为45~65℃。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤2)、步骤3)和步骤4)中所述固液分离为离心。
5.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中所述搅拌的转速为50~200rpm。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤4)中所述牡丹籽蛋白与水的质量比为1:2~8。
7.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤4)中所述菌种为乳酸乳球菌乳亚种、嗜热链球菌、纳豆芽孢杆菌和酿酒酵母中的一种。
8.根据权利要求1或7所述的制备方法,其特征在于,步骤4)中所述发酵的过程中伴随震荡,所述震荡的转速为30~100rpm。
9.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤4)在获得所述牡丹籽多肽后,还包括对所述牡丹籽多肽进行干燥获得牡丹籽多肽粉。
10.根据权利要求9所述的制备方法,其特征在于,所述干燥为冷冻干燥,所述冷冻干燥的温度为-80~-60℃;所述冷冻干燥的时间为75~85h。
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