CN109200011A - 一种护肤品及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物护肤品领域，具体而言，涉及一种护肤品及其制备方法。一种护肤品，各组分的重量份如下：组分A：聚乙二醇二硬脂酸酯3±0.2份，三压硬脂酸11±0.5份，矿物油2±0.2份，卵磷脂1.3±0.2份，Tween‑60 3.7±0.5份，Span‑60 0.1±0.05份，尼泊金丙酯2±0.2份，透明质酸2±0.2份，丝蛋白2±0.2份；组分B：甘油18±1份，尼泊金甲酯0.2±0.05份，纯净水54‑55份；组分C：外泌体冻干粉1×10^‑9～7×10^‑8份。本发明提供的护肤品，各组分协同配合，得到的护肤品性能稳定，并且其中的营养组分配合，具有更好的去除皱纹，增加皮肤弹性的效果。

Description

一种护肤品及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物护肤品领域，具体而言，涉及一种护肤品及其制备方法。

背景技术

皮肤由构造致密的多层组织与细胞相叠而成，主要分为表皮、真皮和皮下组织。皮肤的老化是生理因素和外在因素共同作用的结果，生理因素如年龄、内分泌及免疫功能等，外在因素如紫外线、风吹等。真皮层的老化是皮肤老化的主要原因，真皮层直接与含有透明质酸、复合蛋白糖等多种物质的基质相连，这些基质是各种水溶性物质、电解质等代谢转化的场所，与皮肤老化有最直接的关系。延缓真皮层基质的老化，延缓基质微血管量的降低，能够有效缓解衰老过程。日光紫外线长期反复照射是环境中影响皮肤衰老最重要的因素，能够导致皮肤粗糙、皱纹加深、色素沉着、血管扩张、真皮弹性纤维变性等。

护肤品的发展历程中，第一代是单纯物理保护的油脂类化妆品，如绵羊油等，第二代则是合成的脂肪族化合物，如硬脂酸钠等，第三代的主要成分是天然植物的提取物。***生物技术护肤品，采用生物技术提取制造与人体自身结构相仿且具有高亲和力的生物精华物质，脐带间充质干细胞外泌体就是其中一类，外泌体所携带的各种因子能够将皮肤护理转向细胞水平，从根本上实现皮肤状态的年轻化。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种护肤品，各组分配合，具有更好的护肤效果。

本发明的第二目的在于提供所述的护肤品的制备方法，整个温度较低，操作便利，得到的护肤品各组分分散均一，具有更好的护肤效果。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种护肤品，各组分的重量份如下：

组分A：聚乙二醇二硬脂酸酯3±0.2份，三压硬脂酸11±0.5份，矿物油2±0.2份，卵磷脂1.3±0.2份，Tween-60 3.7±0.5份，Span-60 0.1±0.05份，尼泊金丙酯2±0.2份，透明质酸2±0.2份，丝蛋白2±0.2份；

组分B：甘油18±1份，尼泊金甲酯0.2±0.05份，纯净水54-55份；

组分C：外泌体冻干粉1×10^-9～7×10^-8份。

本发明提供的护肤品，各组分协同配合，得到的护肤品性能稳定，并且其中的营养组分配合，具有更好的去除皱纹，增加皮肤弹性的效果。

进一步地，所述外泌体冻干粉采用以下方法制备：

间充质干细胞外泌体用PBS重悬，加入黄原胶混合，然后经真空冷冻干燥法得到所述间充质干细胞外泌体冻干粉；

所述黄原胶的添加量为所述间充质干细胞外泌体重量的15％-20％。

本发明采用黄原胶制备外泌体干粉，相比于海藻糖，黄原胶具有更好的保护外泌体中的有效成分的活性的作用，达到更长的护肤时间，使用本发明提供的护肤品后，护肤时间持久，15个小时以上不具有皮肤发干的感受。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是中胚层来源的、具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞。事实上，MSC广泛存在于全身多种组织中，几乎来源于机体所有的组织器官，如骨髓、骨膜、脂肪组织、牙髓、滑膜、脐带、胎盘、羊水及胎儿组织等。不同来源的间充质干细胞具有相似的形态，表达相同的表面标记，具有相似的生物学特性方面，如可在体外培养扩增，并能在特定条件下分化为包括神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞在内的多组织***的细胞。MSC除了具有多向组织细胞分化能力之外，还在造血、免疫炎症反应、血管新生等人体重要功能中起重要调节作用。

脐带间充质干细胞(UC-MSC)是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞。脐带间充质是一类低免疫原性细胞，且具有很强的免疫调节功能。脐带间充质干细胞拥有MSC的全部特性，并且含量丰富，易于分离培养。

与其他来源的MSC相比，UC-MSC更原始，是介于胚胎干细胞和成体干细胞之间的干细胞，其增殖和分化能力比胚胎干细胞低，但明显高于成体干细胞。

脐带间充质干细胞具有多分化潜能，在特定的诱导条件下，UC-MSC不仅能分化为骨、软骨、脂肪、肌腱等中胚层细胞，而且能够向内胚层组织细胞(如心肌细胞、肝细胞)和外胚层组织细胞(如神经细胞)分化。UC-MSC不具致瘤性，能在不同的诱导条件及合适的体内生长微环境中，安全地定向分化为不同的组织细胞系，具有修复各种组织和器官的能力。

外泌体(exosomes)是一种脂质分子膜包裹的小囊泡。电镜下观察呈杯状，直径约为40-100nm，密度约为1.13-1.19g/mL。外泌体含有来源细胞的胞质和脂质包膜成分，外泌体内部包含有丰富的mRNA，microRNA和蛋白质成分。

外泌体形成是通过多囊泡胞内体(MVE)的细胞区室向内出芽的形式形成，内囊泡内含有蛋白质、microRNA及mRNA。当MVE与细胞膜融合时，内囊泡就被释放到细胞外成为外泌体，释放出来的外泌体能够运行到距离较远的组织而影响细胞的行为和生理上的改变。

因外泌体携带来源细胞的RNA，microRNA及蛋白成分，参与细胞与细胞间的信息传递，因此在干细胞治疗过程中，干细胞来源的外泌体在组织重建上起到了很重要的作用，尤其是外泌体内所包含的蛋白或RNA成分与受损细胞进行信息交流的功能，可以对靶细胞进行生物学功能的调控，达到修复的目的，也因此外泌体在再生医学方面得到了广泛的实验研究。

由于外泌体及其微小，且与细胞培养组分类似，因此，非常难于分离。现有的分离方法分别是超速离心法、过滤离心法、免疫亲和或分子排阻色谱法、多聚沉淀法和微流控技术。超速离心法是外泌体分离的金标准，能够在实验室通过超速离心机方便快捷分离出外泌体。其他方法均需要购买特定的仪器和分离柱等耗材，成本高，操作复杂，且分离的外泌体纯度没有超速离心法高。

另外，分泌体的获得来源有限，限制了其应用。

进一步地，所述间充质干细胞外泌体通过以下方法制备：

脐带间充质干细胞传代培养8-14h，吸走培养液和未贴壁的细胞，并进行清洗，然后加入外泌体专用完全培养液进行培养；

72-96h后收集培养液到离心管中，得到富含间充质干细胞外泌体的培养液；

所述富含间充质干细胞外泌体的培养液于4±2℃下以2000-2200g离心5-10min，去除死细胞和碎片，然后过滤去除囊泡；

得到的液体于100000-120000g离心4-8h，弃上清，并将离心容器管壁上的液体去除，得到间充质干细胞外泌体；

所述外泌体专用完全培养基以无酚红的α-MEM为基准，添加以下组分：无外泌体FBS体积百分数为10％±2％，200mM谷氨酰胺体积百分数为1％±0.05％，bFGF浓度为20±2ng/mL，EGF浓度为20±2ng/mL。

本发明采用外泌体专用完全培养液对传代后培养一段时间的脐带间充质干细胞进行培养，有效提升外泌体的含量，提升25％以上；通过特定的方法处理脐带间充质干细胞，得到富含间充质干细胞外泌体的培养液，然后对其进行分离，得到浓度较高、纯度较高的间充质干细胞外泌体。

进一步地，所述无外泌体FBS采用以下方法制备：FBS于100000g-120000g的转速离心8-14h；

吸取上层澄清血清，并用0.22μm滤膜过滤，滤液即为无外泌体FBS。

本发明提供的无外泌体FBS的制备方法，采用一定的转速和时间进行离心，然后再进行过滤，滤液即为无外泌体FBS。该方法简便，易于操作得到的无外泌体FBS中，未检出外泌体。

进一步地，得到的滤液确保无菌状态，封口，备用。

进一步地，培养P3代脐带间充质干细胞，待细胞长至85％±10％融合时进行传代。

该步骤中，P3代脐带间充质干细胞培养以及传代所用的培养基的组分如下：以α-MEM为基准，添加以下组分：FBS体积百分数为10％±2％，200mM谷氨酰胺体积百分数为1％±0.05％，bFGF浓度为20±2ng/mL，EGF浓度为20±2ng/mL。

进一步地，所述传代按照扩培3-5倍的比例进行。也就是说，一瓶细胞传代得到3-5瓶细胞。

进一步地，用PBS小心清洗2-3次。清洗是为了进一步去除未去除的残液以及其他碎片。

进一步地，每个培养瓶中添加4％-6％体积的外泌体专用完全培养液。

如T75细胞培养瓶(250mL)中，加入10-15mL的外泌体专用完全培养液，如T75细胞培养瓶(250mL)中可以为10mL、12mL、15mL等等。

进一步地，过滤去除囊泡所用的滤网的孔径为0.22μm。通过过滤，去除较大囊泡。

分离过程中，低温离心为4±2℃下以2000-2200g离心5-10min。通过该速率进行离心，去除死细胞和碎片。通过超速离心，外泌体沉淀下来。将离心容器管壁上的液体去除，离心容器底部的物质即为间充质干细胞外泌体。通过去除液体，得到更纯净的间充质干细胞外泌体。

离心容器一般为离心管。

进一步地，还包括以下步骤：得到的间充质干细胞外泌体用PBS重悬，保存。如可在-80℃进行保存。

即得到的容器底部的间充质干细胞外泌体加入PBS重悬，保存。

对本发明分离得到的间充质干细胞外泌体进行检测，如电镜下以及表面标记蛋白的检测，均符合间充质干细胞外泌体的特性，说明本发明分离得到的间充质干细胞外泌体是稳定可靠的。

进一步地，所述组分还包括香精。

进一步地，按重量份计，香精0.00005-0.00015份。

本发明还提供了所述的护肤品的制备方法，包括以下步骤：

卵磷脂溶解于60±5℃的矿物油中，在搅拌下加入组分A其余组分，加热至70±5℃；

加入组分B，均质乳化，搅拌冷却至40±5℃；

逐步加入组分C，冷却至室温即形成软霜；

若含有香精，则与组分C一起加入。

本发明提供的护肤品的制备方法，整个操作温度较低，操作更安全简便，制得的护肤品效果稳定，可靠。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明提供的护肤品，各组分协同配合，得到的护肤品性能稳定，并且其中的营养组分配合，具有更好的去除皱纹，增加皮肤弹性的效果。

(2)本发明提供的外泌体专用完全培养基，有效提高脐带间充质干细胞培养过程中外泌体的含量25％以上。

(3)本发明提供的无外泌体FBS的制备方法，方法简便易行，易于产业化生产。

(4)本发明提供的间充质干细胞外泌体的分离方法，方法简便易行，分离得到的间充质干细胞外泌体稳定可靠。

(5)本发明提供的护肤品的制备方法，整个操作温度较低，操作更安全简便，制得的护肤品效果稳定，可靠。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为本发明实验例1中对间充质干细胞外泌体的电镜观察图；

图2为本发明实验例1中对间充质干细胞外泌体的表面标记蛋白CD9的检测图；

图3为本发明实验例1中对间充质干细胞外泌体的表面标记蛋白CD63的检测图；

图4为本发明实验例2中本发明提供的护肤品治疗的对照图；

图5为本发明实验例2中本发明提供的护肤品治疗的另一个对照图；

图6为本发明实验例2中本发明提供的护肤品治疗的另一个对照图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

1.1脐带间充质干细胞外泌体分离方法

1)无外泌体FBS制备：无菌条件下将FBS倒入专用超离离心管中，每管38.6mL，4管，确认配平后，放入超速离心机中，120000g，离心12h。

2)第二天，小心吸取上层澄清血清到新的无菌离心管中，0.22μm滤膜过滤至另一离心管中，确保血清的无菌状态，封口，备用。

1.2脐带间充质干细胞培养基

1)普通完全培养基

以α-MEM为基准，添加以下组分：FBS体积百分数为10％，200mM谷氨酰胺体积百分数为1％，bFGF浓度为20ng/mL，EGF浓度为20ng/mL。

2)外泌体专用完全培养基

以无酚红的α-MEM为基准，添加以下组分：无外泌体FBS体积百分数为10％，200mM谷氨酰胺体积百分数为1％，bFGF浓度为20ng/mL，EGF20浓度为20ng/mL。

1.3脐带间充质干细胞外泌体分离方法，步骤如下：

T75细胞培养瓶，普通完全培养基培养P3代脐带间充质干细胞，待细胞长至95％融合时，按照1:5进行传代。

第二天，用无外泌体FBS配制外泌体专用完全培养基。小心吸走普通完全培养基和未贴壁的细胞，用PBS小心清洗3次，每瓶加入10mL外泌体专用完全培养基。

72h后收集培养基到离心管中，即得到富含间充质干细胞外泌体的培养基。

提前打开普通低温离心机和超速离心机，预冷至4℃左右。

2000g，离心7min，去除死细胞和碎片。

0.22μm滤膜过滤去除较大囊泡。

上清转至超速离心管中，用PBS配平，100000g，离心4h。

弃去上清，用无菌滤纸小心吸走管壁残留液体，管底即为间充质干细胞外泌体。

用1mL PBS将各管外泌体重悬，混合，-80℃保存。

实施例2

1.1脐带间充质干细胞外泌体分离方法

1)无外泌体FBS制备：无菌条件下将FBS倒入专用超离离心管中，每管38.6mL，4管，确认配平后，放入超速离心机中，100000g，离心14h。

2)第二天，小心吸取上层澄清血清到新的无菌离心管中，0.22μm滤膜过滤至另一离心管中，确保血清的无菌状态，封口，备用。

1.2脐带间充质干细胞培养基

1)普通完全培养基

以α-MEM为基准，添加以下组分：FBS体积百分数为10％，200mM谷氨酰胺体积百分数为1％，bFGF浓度为20ng/mL，EGF浓度为20ng/mL。

2)外泌体专用完全培养基

以无酚红的α-MEM为基准，添加以下组分：无外泌体FBS体积百分数为10％，200mM谷氨酰胺体积百分数为1％，bFGF浓度为20ng/mL，EGF浓度为20ng/mL。

1.3脐带间充质干细胞外泌体分离方法，步骤如下：

T75细胞培养瓶，普通完全培养基培养P3代脐带间充质干细胞，待细胞长至90％融合时，按照1:4进行传代。

第二天，用无外泌体FBS配制外泌体专用完全培养基。小心吸走普通完全培养基和未贴壁的细胞，用PBS小心清洗3次，每瓶加入10mL外泌体专用完全培养基。

80h后收集培养基到离心管中，即得到富含间充质干细胞外泌体的培养基。

提前打开普通低温离心机和超速离心机，预冷至4℃。

2000g，离心10min，去除死细胞和碎片。

0.22μm滤膜过滤去除较大囊泡。

上清转至超速离心管中，用PBS配平，120000g，离心5h。

弃去上清，用无菌滤纸小心吸走管壁残留液体，管底即为间充质干细胞外泌体。

用1mLPBS将各管外泌体重悬，混合，保存。

实施例3

1.1脐带间充质干细胞外泌体分离方法

1)无外泌体FBS制备：无菌条件下将FBS倒入专用超离离心管中，每管38.6mL，4管，确认配平后，放入超速离心机中，120000g，离心8h。

2)第二天，小心吸取上层澄清血清到新的无菌离心管中，0.22μm滤膜过滤至另一离心管中，确保血清的无菌状态，封口，备用。

1.2脐带间充质干细胞培养基

1)普通完全培养基

以α-MEM为基准，添加以下组分：FBS体积百分数为10％，200mM谷氨酰胺体积百分数为1％，bFGF浓度为20ng/mL，EGF浓度为20ng/mL。

2)外泌体专用完全培养基

以无酚红的α-MEM为基准，添加以下组分：无外泌体FBS体积百分数为10％，200mM谷氨酰胺体积百分数为1％，bFGF浓度为20ng/mL，EGF20浓度为20ng/mL。

1.3脐带间充质干细胞外泌体分离方法，步骤如下：

T75细胞培养瓶，普通完全培养基培养P3代脐带间充质干细胞，待细胞长至85％融合时，按照1:3进行传代。

第二天，用无外泌体FBS配制外泌体专用完全培养基。小心吸走普通完全培养基和未贴壁的细胞，用PBS小心清洗2次，每瓶加入15mL外泌体专用完全培养基。

96h后收集培养基到离心管中，即得到富含间充质干细胞外泌体的培养基。

提前打开普通低温离心机和超速离心机，预冷至4℃左右。

2200g，离心5min，去除死细胞和碎片。

0.22μm滤膜过滤去除较大囊泡。

上清转至超速离心管中，用PBS配平，120000g，离心8h。

弃去上清，用无菌滤纸小心吸走管壁残留液体，管底即为间充质干细胞外泌体。

用1mLPBS将各管外泌体重悬，混合，保存。

对比例1

与实施例2不同的是，普通完全培养基中的α-MEM替换为DMEM，外泌体专用完全培养基中的无酚红的α-MEM替换为无酚红的DMEM，其他均相同。

对比例2

与实施例2不同的是，普通完全培养基中的α-MEM替换为RPMI1640，外泌体专用完全培养基中的无酚红的α-MEM替换为无酚红的RPMI 1640，其他均相同。

对比例3

与实施例2不同的是，普通完全培养基中的α-MEM替换为DMEM/F12，外泌体专用完全培养基中的无酚红的α-MEM替换为无酚红的DMEM/F12，其他均相同。

对比例4

与实施例2不同的是，外泌体专用完全培养基替换为以下组分的培养基：以无酚红的α-MEM为基准，添加以下组分：PDGF-BB的浓度为30ng/mL，EPO的浓度为2U/mL。

需要说明的是，本发明中未提及的培养条件，均视为在37℃，5％的CO₂饱和湿度条件下培养。

实验例1

使用BCA蛋白浓度测定试剂盒进行测定：

1)配制蛋白标准溶液：将0.8mL蛋白标准配制液加入到20mg BSA中，使其充分溶解后进一步稀释至终浓度为0.5mg/mL。

2)BCA工作液的配置：BCA试剂A：试剂B＝50:1，根据样品数加标准品数配制适量体积BCA工作液。

3)取96孔板，分别将0，1，2，4，8，12，16，20μL蛋白标准品(0.5mg/mL)及待测样品适量，用标准品稀释液PBS将各孔体积补足至20μL。

4)以上每孔各加入200μL BCA工作液，37℃放置20-30min。

5)酶标仪上选择波长562nm，测定标准曲线并根据标准曲线计算各组别制得的外泌体浓度。并推算为按细胞数量计算外泌体浓度，结果如表1所示。

表1不同组别中制得的外泌体浓度

组别	外泌体浓度(μg/1×10<sup>7</sup>cells)
		实施例1	95.1±1.7
实施例2	96.3±1.2
		实施例3	95.4±1.8
对比例1	76.3±1.7
		对比例2	55.5±1.2
对比例3	75.2±1.3
		对比例4	67.4±1.6

从上述内容可知，相对于对比例，本发明提供的方法，得到的间充质干细胞外泌体含量至少提升25％以上。

本发明提供的方法所提取的外泌体浓度很高，具有明显提升的得率。

另外，检测外泌体纯度，不同组别均在80％-90％之间，实施例与对比例没有明显差别。

此外，对本发明分离得到的间充质干细胞外泌体进行检测，如电镜下以及表面标记蛋白的检测，均符合间充质干细胞外泌体的特性，其中，电镜图如图1所示，表面标记蛋白检测图如图2和图3所示。说明本发明分离得到的间充质干细胞外泌体是稳定可靠的。

实施例4

外泌体冻干粉：

实施例2制得的外泌体加入黄原胶，然后经真空冷冻干燥法得到所述间充质干细胞外泌体冻干粉；

黄原胶的添加量为间充质干细胞外泌体重量的15％-20％。

一种护肤品，按表2所示的重量份取各组分备用：

表2各组分

按以下步骤制备：

卵磷脂溶解于60℃的矿物油中，在搅拌下加入组分A其余组分，加热至70℃；

加入组分B，均质乳化，搅拌冷却至40℃左右；

逐步加入组分C，冷却至室温即形成软霜。

对比例5

与实施例4不同的是，不添加丝蛋白、透明质酸和卵磷脂。

对比例6

与实施例4不同的是，外泌体冻干粉制备时，以海藻糖替换黄原胶。

实验例2

将实施例1以及对比例5和对比例6制得的软霜进行皮肤刺激试验，均未观察到皮肤刺激反应，表明这些软霜具有使用安全性。

招募20名中国女性受试者，年龄40～60岁。每位受试者均被告知整个研究过程，并签署知情同意书。其中，实施例4制得的软膏由10人使用，对比例5和6各有5人使用，使用方法：涂抹面部皮肤，每天早晚涂抹，不再使用其他化妆品，清洁皮肤均采用温和的洗面奶，统一配发，连续使用28d后，每周同一时间将受试者的涂抹部位洗净，由测试者检测采用美国Canfield公司的Visia皮肤测试仪测试，得到皱纹和弹性的数据。结果如表3-5所示。

表3实施例4护肤效果

表4对比例5护肤效果

表5对比例6护肤效果

具体地，本申请提供的护肤品治疗的部分效果见图4-6所示，其中，A表示治疗前图片，B表示治疗后图片。

实验中发现，对于去皱纹效果：本发明提供的护肤品对皱纹去除的效果范围为9％-36％，平均降低率为18.7％；而对比例5对皱纹去除的效果范围为4.9％-11％，平均降低率为8.3％；对比例6对皱纹去除的效果范围为4.9％-13.5％，平均降低率为8.4％。

对于增加弹性效果：本发明提供的护肤品对弹性的提升范围为5.7％-15.4％，平均提升率为10.2％；对比例5对弹性的提升范围为3.3％-7.8％，平均提升率为5.5％；对比例6对弹性的提升范围为4.4％-8.2％，平均提升率为5.9％。

上述内容可知，本发明提供的软霜对面部皮肤具有更优越的护肤效果，明显优于其他组别。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种护肤品，其特征在于，各组分的重量份如下：

组分A：聚乙二醇二硬脂酸酯3±0.2份，三压硬脂酸11±0.5份，矿物油2±0.2份，卵磷脂1.3±0.2份，Tween-60 3.7±0.5份，Span-60 0.1±0.05份，尼泊金丙酯2±0.2份，透明质酸2±0.2份，丝蛋白2±0.2份；

组分B：甘油18±1份，尼泊金甲酯0.2±0.05份，纯净水54-55份；

组分C：外泌体冻干粉1×10^-9～7×10^-8份。

2.根据权利要求1所述的护肤品，其特征在于，所述外泌体冻干粉采用以下方法制备：

间充质干细胞外泌体用PBS重悬，加入黄原胶混合，然后经真空冷冻干燥法得到所述间充质干细胞外泌体冻干粉；

所述黄原胶的添加量为所述间充质干细胞外泌体重量的15％-20％。

3.根据权利要求2所述的护肤品，其特征在于，所述间充质干细胞外泌体通过以下方法制备：

脐带间充质干细胞传代培养8-14h，吸走培养液和未贴壁的细胞，并进行清洗，然后加入外泌体专用完全培养液进行培养；

72-96h后收集培养液到离心管中，得到富含间充质干细胞外泌体的培养液；

所述富含间充质干细胞外泌体的培养液于4±2℃下以2000-2200g离心5-10min，去除死细胞和碎片，然后过滤去除囊泡；

得到的液体于100000-120000g离心4-8h，弃上清，并将离心容器管壁上的液体去除，得到间充质干细胞外泌体；

所述外泌体专用完全培养基以无酚红的α-MEM为基准，添加以下组分：无外泌体FBS体积百分数为10％±2％，200mM谷氨酰胺体积百分数为1％±0.05％，bFGF浓度为20±2ng/mL，EGF浓度为20±2ng/mL。

4.根据权利要求3所述的护肤品，其特征在于，所述无外泌体FBS采用以下方法制备：FBS于100000g-120000g的转速离心8-14h；

吸取上层澄清血清，并用0.22μm滤膜过滤，滤液即为无外泌体FBS。

5.根据权利要求3所述的护肤品，其特征在于，培养P3代脐带间充质干细胞，待细胞长至85％±10％融合时进行传代；

进一步地，所述传代按照扩培3-5倍的比例进行。

6.根据权利要求3所述的护肤品，其特征在于，所述清洗用PBS清洗2-3次；

进一步地，每个培养瓶中添加4％-6％体积的外泌体专用完全培养液。

7.根据权利要求3所述的护肤品，其特征在于，过滤去除囊泡所用的滤网的孔径为0.22μm。

8.根据权利要求1-7任一项所述的护肤品，其特征在于，所述组分还包括香精。

9.根据权利要求8所述的护肤品，其特征在于，按重量份计，香精0.00005-0.00015份。

10.权利要求1-9任一项所述的护肤品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

卵磷脂溶解于60±5℃的矿物油中，在搅拌下加入组分A其余组分，加热至70±5℃；

加入组分B，均质乳化，搅拌冷却至40±5℃；

逐步加入组分C，冷却至室温即形成软霜；

若含有香精，则与组分C一起加入。