CN1091149C

CN1091149C - 东北虫草的培养方法及其制品

Info

Publication number: CN1091149C
Application number: CN93117581A
Authority: CN
Inventors: 赵凤英
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1993-09-24
Filing date: 1993-09-24
Publication date: 2002-09-18
Anticipated expiration: 2013-09-24
Also published as: CN1100754A

Abstract

本发明涉及一种东北虫草新菌株以及该菌株的培养方法和用该菌株培养富锌、锗、硒型东北虫草，并从所培养的东北虫草中制得提取液，与雄蚕蛾、蝮蛇等配制成天王宝营养品。

Description

东北虫草的培养方法及其制品

本发明属东北虫草(Cordyceps militaris(L.ex.Fr)Linkmandshurcum)DBC-888菌株的培育及其提取液加工及用该提取液配制滋补液，口服液领域。

目前已有很多以食用真菌为原料制作的营养品，如太阳神猴头茹口服液，食用菌经糖酸酶法发酵制成的营养液(CN88103922)，北虫草口服液(CN92109862.6)，其中CN92109862.6是提取北虫草中的活性物质，制成口服液，但其所用的北虫草产率很低。效果还不甚理想。

东北虫草产于中国东北，与冬虫夏草同属。

本发明人对东北虫草的研究已有数年，在高产菌株的筛选，东北虫草的大棚生产等方面取得了突破性进展，对东北虫草的应用，保健品的配制方面也有独到之处。

本发明的目的在于提供培养的东北虫草新菌株。

本发明的另一目的在于提供培养所述新菌株的方法。

本发明的目的之一是提供用特殊方法培养出来的富硒、富锗、富锌型东北虫草为主要原料配以雄蚕蛾、蝮蛇等中药制成的具有抗癌防衰作用的天王宝高级补养液等保健品。

本发明的另一目的在于提供配制上述东北虫草保健品的方法。

野生的东北虫草产于东北，寄生于鳞翅目昆虫的幼虫或蛹上，夏秋季生长出一个或多个子实体(子座)。子实体头部呈棒状，叶形，有纵沟，橙黄色，为可孕部分。柄部稍细，颜色也较淡，子实体全长15-80mm，直径为2-4mm，子实体上部(上2/3处)生有椭园形的子囊壳，壳内有子囊孢子，成熟时从囊中放出。

众所周知，有机锌，锗、硒在抗癌、防衰、提高人体免疫力方面有显著的效果，而无机锌、硒、锗不能为人体吸收，或者即使吸收其转化率也很低。本发明人经研究后，培养出比野生东北虫草产量高，而且营养成份的含量也高于野生东北虫草的新菌株。

一.DBC-888菌株

新菌株(Cordyceps militaris(L.ex.Fr)Link.mandshurcumDBC-888)是经过野生状态的优选，菌种分离、复壮、定向培育优选出来的，它在蚕蛹上生长出多个子实体，子实体呈棒状，上端膨大，为橙黄色，下端稍细，颜色较淡。子实体高50-100mm，直径3-5mm，在含有特殊营养的米饭培养基上培养，每个罐头瓶生长20-30株，子实体高60-130mm，直径5-9mm，整个子实体呈桔红色，基部颜色稍淡。子实体的3/5处开始膨大，头部园纯，略有下垂。

DBC-888菌株的特点为：

1.产量高，每个罐头瓶平均产量为20-35克(一般菌株，每罐头瓶平均产量为5-10克)。

2.抗污染能力强，在大规模生产中(每批几万瓶)污染率为10-25％，一般菌株的污染率为30-50％。

3.适应性强，耐温范围广。菌丝与子实体在30℃至-20℃均不死亡。

4.变异性好：通过改变培养基的成份，向培养基中添加不同浓度的微量元素(锌、锗、硒)，可得富锌、锗、硒型虫草。而这种富锌、锗、硒作用不是机械吸附而是一种生理化学变化，即通过菌丝体，子实体吸收，转化并富集于细胞的脂化物，蛋白质，儿丁质，多糖和核酸中，即将无机元素变成有机物，使之易于为人体吸收。

本发明培养的东北虫草DBC-888含有18种氨基酸，80多种有益的微量元素(如锌、硒、锗、锰、铁、钙、磷、钾等)虫草素、甘露醇、虫草多糖、SOD、多种维生素、油酸、亚油酸、胡萝卜素等。

二.本发明培养东北虫草DBC-888的方法：

(一)种子培养

1.一级菌种培养。

原菌种：本发明人从本溪、沈阳地区采集野生东北虫草，并将其分离、优选定种而得之。

一级菌种培养基的配方(按100％重量计算)：山药汁10％、硝酸钾0.5％、磷酸二氢钾0.8％、维生素液0.5-2％、硫酸亚铁0.05％、硫酸镁0.6％、葡萄糖2％、硫酸锌0.01％、核苷酸1％、琼脂2％、牛奶0.5％，其余为水。

将上述配制的培养基装于试管内装入量占试管体积的1/5，塞上棉塞，经高压灭菌(1Kg/cm²压力)30分钟后，取出摆成斜面，在无菌条件下，用接种环刮取少量DBC-888一级菌种的菌丝于斜面上，于22℃恒温箱中培养4天左右，菌丝长满斜面。此菌种的特征是：菌丝纯白，粗壮浓密，生长迅速，后期分泌黄色色素。

2.二级液体菌种：用往复式摇床，90次/分钟，振幅75mm。

培养基含(按100％重量计)：大麦芽汁2％、磷酸二氢钾1％、土壤浸出液2％、硫酸镁0.6％、硫酸锌0.01％、硫酸亚铁0.03％、复合氨基酸(市售)0.5％、其余为水。

将上述培养基装于500-1000ml三角瓶中，盖上8层纱布，外面套上聚酯塑料扎紧，进行高压灭菌(1Kg/cm²)30分钟，冷却后，将DBC-888一级菌种，无菌条件下，接种到三角瓶中，1支试管一级菌种接5-10个三角瓶，盖好瓶盖(去掉上述塑料外膜)，放在摇床(往复式摇床，90次/分钟，振幅75mm)上，在20℃条件下，培养5天，三角瓶内有大量白色菌球形成，培养液清亮，为好的二级菌液。(供培养富锌、富硒、富锗东北虫草用)。

(二).DBC-888虫草子实体的培育：

1.人工培养富锌型东北虫草：培养基含：(按100％重量计)：磷酸二氢钾1％、硫酸镁0.5％、小米泔水2％、动物血1％、白瓜籽粉0.1-1％、淫羊藿0.01-0.05％，其余为豆浆。上述配方简称营养液。取大米40-50克，装入干净的罐头瓶内加，上述营养液35-55克。将360-900μg锌添加剂溶于水中，加到罐头瓶中，用聚酯薄膜做盖，扎紧。于高压锅内(1.2Kg/cm²)灭菌30分钟，温度下降到20℃左右时接种。

接种与培养：将长好的DBC-888二级液体菌种，用特制的玻璃管接种器，吸取10ml，在无菌条件下，接到上述罐头瓶中，重新盖好聚酯薄膜放至15-20℃培养室中培养。经一周左右在罐头瓶的培养基上长满白色菌丝，15-20天在白色菌丝表面，罐头瓶壁上有金黄色的液体分泌物。一个月左右长出子实体原基，一般40-60天就会长出桔红色的子实体。子实体成熟后，在无菌条件下，用镊子采下。盖好盖放回培养室，经过二十天左右又会长出第二茬。富锌虫草的含锌量为90-290μg/g(干重)比普通人工培养的虫草锌的含量(30-80μg(干重))提高3-10倍。

2.富硒型东北虫草的培育：

培养基(营养液)(按100％重量计)。磷酸二氢钾1％、硫酸镁0.5-2％、VB1 0.5-2％、动物血1％、其余为豆浆。

取大米35-40克、黄芪0.5-3克装入干净罐头瓶内，加营养液35-45克，再将360-900μg的硒添加剂溶于水后也加到罐头瓶里，盖好盖，高压灭菌、接种、培养(40-50天长出子座)、采收方法同富锌虫草。该虫草的含硒量为3-200μg/g，比普通人工培养的虫草含硒量(0.02-1μg/g)(干重)高几倍至百倍。

3.富锗型东北虫草的培育：

营养液(按100％重量计算)磷酸二氢钾1％、硫酸镁0.5％、VB1 0.5-2％、动物血1％、其余为豆浆。

取大米35-40克加灵芝粉或白参粉0.2-1克，加营养液35-50克于罐头瓶中再取锗添加剂360-900μg/g溶于水后加入罐头瓶中，盖好盖。高压灭菌、接种、培养(40-60天长出子实体)、采收方法同富锌虫草。这种富锗虫草含锗量为1-160μg/g(干重)比普通人工培养虫草，含锗量0.015-2μg/g(干重)高几十倍。

4.在蚕蛹上培养富锌、富锗、富硒型东北虫草的方法：

将体表消毒好的蚕蛹放到灭菌后的罐头瓶中，每瓶装5-10个蛹，在无菌条件下用接种针扎几个孔(3-5个)，然后将二级液体菌种5ml倒入盛有蚕蛹的罐头瓶中，盖好聚酯膜，摇匀。置于18-22℃，漫光下培养，待子实体原基形成时，用注射器，抽取3ml，事先配制好的硒、锗。锌水溶液(浓度为4000ppm)喷向长有子实体原基的蚕蛹上，经15天左右子实体长成。用这种方法培育虫草，其含锌、锗、硒量比一般方法培育的虫草提3-15倍，且产量提高6-30％。

5.在大棚中培养富锌、锗、硒型东北虫草

由于DBC-888菌株适应能力和抗感染能力强，可以进行大面积培养。其方法如下：在无菌条件下，取DBC-888二级菌液0.2ml注射到体表消毒好的蚕蛹(柞蚕、桑蚕)体内，将接过种的蚕蛹放人灭过菌的罐头瓶内，装入量为罐头瓶的三分之二，用聚酯薄膜封口，把罐头瓶置于20-25℃下培养7天。再将长好菌丝的蛹放入温室大棚的培养土中，上面盖上树叶，蛹的间距为50-70mm。大棚的温度控制在17-22℃，相对湿度90-95％，定时通风换气。经过15-25天长出与野生东北虫草相似的子座。当子座刚出土时用配制好的4000ppm锗、锌、硒水溶液喷向子座，再过10-15天，子座成熟，及时采收。

还可以将配好营养液的大米装入聚酯或聚丙稀塑料袋中，经高压灭菌，接种DBC-888后，置于20-25℃下培养半个月，大米长满菌丝，置于上述条件温室大棚的培养土中，25-40天也长出与野生东北虫相似的子座。当子座刚出土时用配好的4000ppm锗、锌、硒水溶液喷向子座，再过10-15天，子座成熟，及时采收。也可以选择适宜的山坡密林的土壤中，用上述方法培养。

三.DBC-888东北虫草中的有效成份提取方法：

对于东北虫草的提取方法，当前还是一个正在研究的课题，一般都采取常规的乙醇浸泡提取，热水浸泡提取方法。本发明是将东北虫草的新鲜子实体，磨碎，用框板过滤器进行压滤，滤液放入在冰箱中保存，滤渣再用乙醇，热水浸泡提取滤液，将此滤液与冰箱中之滤液混合成虫草提取液，此提取液可制成各种剂型的保健品。也可以与其它中草药配合制成保健酒、口服液、粉剂、保健茶等。

四.东北虫草制品及其工艺

本发明中的天王宝高级补养液就是东北虫草的提取液加中草药制成的。天王宝高级补养液是根据祖国医学宝库，延年益寿，补肾壮阳的秘方，配以一种特殊培育的新鲜DBC-888虫草为主要原料，采用现代生物工程技术精制而成。本品集滋补、保健、治疗于一体，功在于滋阴壮阳、消除疲劳、提高人体的免疫功能，清除自由基，提高机体抗哀老能力。

祖国医学认为：肾为先天之本、肾藏精、肾精是人体发育生殖的基本物质，被称为人体生命之本，生命的盛衰往往与肾的功能强弱有直接关系。而天王宝高级补养液正是以滋补治本。

天王宝高级补养液的特点：

(1)天王宝高级补养液与其它补肾***物之不同之处是配方中选用的药材均为珍贵的滋补性中药属纯生物制品，不含任何副作用的中药，不含化学药品和人工色素及麻醉品，对人体无任何毒副作用及不良反映，是无毒安全可靠的滋补保健品，经沈阳市防设站毒理试验证明对人体是安全可靠的。

(2)原料来源方便易得。

(3)配方中动物性营养与植物性营养搭配合理，科学，起到了优势互补的良好作用。

(4)天王宝高级补养液的最大特点是配方中所用的东北虫草是用特殊方法培育的鲜虫草。

(5)天王宝高级补养液营养成份丰富且含量高，是一般保健品所不能比拟的。其中含18种氨基酸，使身体消除疲劳的天门冬氨酸含量达526mg/L，增加脑细胞活力的谷氨酸含量为397mg/L，有提高性功能的精氨酸，锌、锗、硒等。有抗癌、防癌的虫草素、虫草多糖、硒、锗等，有抗衰老作用的SOD、胡萝卜素、VE、锌等，有治疗、保健心血管***的Vpp、油酸、亚油酸。其含量样见化验单。从营养含量上看，是中外驰名的长寿长乐补酒的2-30倍。(祥见化验单)。

实施例1：高级补养液组成及配制工艺：

组成：

人参 1.5-6％虫草提取液0.5-5％

黄芪 2-5％蝮蛇0.5-2％

淫羊藿 3-6％雄蚕蛾1-5％

当归 1-4％动物鞭(驴、狗、鹿鞭)0.5-2％

杜仲 1-5％鹿茸0.3-1％

枸杞 2-5％苁蓉0.5-2％

何首乌 1-5％锁阳1-5％(可用巴戟天代)

按上述(1)所组成的十四味中药(除东北虫草提取液外)用60度白酒浸泡3-6个月后，进行过滤再向滤液中加东北虫草提取液0.5-5％，加冰糖8％，加调味剂1％即成补养液。

实施例2：天王宝口服液的配制工艺

按上述实施例1中的十四味中药(除东北虫草提取液外)用60度白酒，浸泡3-6个月后，进行过滤，滤液经蒸馏浓缩除掉乙醇后，加一定量泉水(水量与除掉的乙醇量相当)再加东北虫草的提取液0.5-5％、冰糖8％，即成天王宝口服液。

检验：

配制好天王宝高级补养液、口服液、各项指标：氨基酸、维生素、微量元素、虫草素、80D、虫草多糖、油酸、亚油酸、葫萝卜素等营养成份经化验符合企业标准验收合格。

分装与消毒：

产品合格后，在无菌条件下，将口服液、补养液，分装于干净的不同规格的瓶中。进行灭菌处理(用巴斯德灭菌器消毒，75-80℃条件下20分钟)进行菌检，合格后贴标。

贮存：口服液在低温下保存期半年

高级补养液常温下保存期二年。

东北虫草DBC-888菌种已于1993年9月23日保藏于北京中关村中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏号：CGMCC NO.0200。

Claims

1、一种培养富锌型东北虫草DBC-888的方法，其特征在于：

(1)培养基或称营养液含(按100％重量计)：磷酸二氢钾1％，硫酸镁0.5％，小米泔水2％、动物血1％，其余为豆浆；

(2)、取大米40-50g，白瓜籽粉0.1-1％，淫羊藿0.1-0.05％，放人干净的罐头瓶内，再加上述营养液35-55g，装入罐头瓶内，将360-900mg锌添加剂溶于水后，也加入罐头瓶中，用聚脂薄膜做盖，扎紧，高压灭菌(1.2kg/cm2)30分钟，温度降到20℃时接种；

(3)将长好的东北虫草二级液体菌种用特制的玻璃管接种器吸取10ml，在无菌条件下，接种到上述罐头瓶中，重新盖好聚脂薄膜，放至15-20℃培养室中培养，一般40-60天就会长出桔红色的东北虫草。

东北虫草DBC-888菌种已于1993年9月23日保藏于北京中关村中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO.0200。

2、一种培养富硒型东北虫草DBC-888的方法，其特征在于：

(1)培养基或称营养液含(100％重量计)磷酸二氢钾1％，硫酸镁0.5-2％，VB10.5-2％，动物血1％，其余为豆浆；

(2)取大米35-40g，黄芪粉0.5-3.0g装入干净罐头瓶内，加上述营养液35-45g，装入罐头瓶内，再将360-900mg硒添加剂溶于水后也加到罐头瓶内，用聚脂薄膜封好口，高压灭菌，降至常温；

(3)将长好的东北虫草二级菌种接种于罐头瓶里，置放于17-20℃中培养40-60天，长出子座。

3、一种培养富锗型东北虫草DBC-888的方法，其特征在于：

(1) 培养基或营养液含(按100％重量计)：磷酸二氢钾1％、硫酸镁0.5％、VB10.5-2％、动物血1％，其余为豆浆；

(2)取大米35-40g，加灵芝粉或白参粉0.2-1.0g，并加上述营养液35-50g于罐头瓶中，再取0.015-2mg锗添加剂溶于水后加入罐头瓶中，用聚酯薄膜封好，高压灭菌，降至常温接种；

(3)将长好的东北虫草二级菌种接种于罐头瓶里，置放在17-20OC中，并培养40-60天，长出子实体。

4、如权利要求1、2或3中所述的培养方法，其特征在于：其中的培养基中添加不同浓度的锌、硒或锗添加剂为溶于水的无机锌，无机硒或无机锗，通过菌丝体、子实体吸收转化并富集于细胞的脂化物、蛋白质、儿丁质，多糖和核酸中经生理化学变化，使无机元素变成有机物，使之易于为人体吸收。

5、一种在蚕蛹上培养富锌、富锗、富硒型东北虫草DBC-888的方法，其特征在于：将体表消毒好的蚕蛹放到灭菌后的罐头瓶中，每瓶装5-10个蛹，在无菌条件下，用接种针将蚕踊扎3-5个孔，然后将长好的东北虫草二级液体菌种5ml倒入盛有蚕蛹的罐头瓶中，盖好聚酯膜，摇匀，置于18-22℃，漫光下培养，待子实体原基形成时，用注射器抽取3ml事先配制好的硒、锗、锌水溶液，喷向长有子实体原基的蚕蛹上，经15天左右即长成虫草子实体。

6、一种在温室大棚中培养富锌、富锗、富硒型东北虫草DBC-888的方法，其特征在于：在无菌条件下，取长好的东北虫草二级菌液0.2ml注射到体表消毒好的蚕蛹，如柞蚕、桑蚕体内，将接过种的蚕蛹放入灭过菌的罐头瓶内，装入量为罐头瓶的三分之二，用聚丙烯薄膜封口，把罐头瓶置于20-25℃下培养7天，再将长好菌丝的蛹放入温室大棚的培养土中，上面盖上树叶，蛹的间距为50-70毫米，大棚的温度控制在17-20℃，相对湿度90-95％，定时通风换气，当子座刚出土时，用配好的锌、锗、硒的水溶液喷在子实体原基上，经过15天左右子买体长好。

7、提取东北虫草DBC-888有效成份的方法，其特征在于：将权利要求1-3中的子实体磨碎，用框板过滤器压滤，滤液放在冰箱内保存，滤渣再用乙醇，热水浸泡，提取滤液，然后使其与冰箱中的滤液混合，成为东北虫草提取液；它可以制成各种剂型的保健品，也可以与其他中草药配合制成保健酒，口服液，粉剂或保健茶。