CN109078164B - 灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽作为骨骼发育促进剂和微量元素补充剂的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物制品技术领域，主要涉及灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽在促进骨骼发育方面的应用。实验表明，灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽所含的氨基酸种类丰富，微量元素含量丰富，重金属含量符合国家标准，在正常小鼠发育阶段，能够在一定程度上促进小鼠骨骼发育、增加小鼠骨松质密度，增强小鼠骨髓组织活跃度，并且无毒副作用，为开发一种作为补充人体钙元素及其他微量元素，且促进人体骨骼发育，预防骨质疏松、老化的产品提供了理论基础，本发明发现了灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽在作为促进人体骨骼发育，预防骨质疏松、老化的产品的应用价值，提高了灰星鲨鱼皮加工的附加值。

Description

灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽作为骨骼发育促进剂和微量元素补 充剂的应用

技术领域

本申请涉及生物制品领域，具体地涉及灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽在作为促进骨骼发育、补充人体微量元素、补充钙元素的产品中的应用。

背景技术

胶原蛋白肽富含人体需要的甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸等氨基酸，是一种新型胶原蛋白类产品。它是以胶原蛋白或富含胶原蛋白的物质为原料进行生产的。常见的原料来源有哺乳动物例如猪、牛、羊的骨骼和皮肤以及鱼皮等。由于胶原是大分子，不易被皮肤吸收，水溶性低，但在酸、碱、热、酶的作用下水解，会产生胶原蛋白水解产物—肽。它既具有胶原蛋白的特有氨基酸组成，而且分子量较小，因此可溶于冷水且极易被人体的皮肤所吸收与利用，也容易通过消化道被消化。与大分子胶原相比，水解产物则是胶原更为理想的补充源。

胶原蛋白是人体内重要的一种蛋白质。当胶原蛋白不足时，不仅导致皮肤及骨骼会出现问题，对内脏器官也会产生不利影响。人体吸收是以肽的方式进行的，因此胶原蛋白肽可以被人体主动且无障碍吸收，无需消化，供身体组织充分利用。

根据现在的胶原蛋白的工艺和常规思维定式，技术人员普遍认为，胶原蛋白是具有补充钙元素的蛋白，所以在目前的工艺生产中，主要以提取胶原蛋白为主。由于胶原蛋白的水溶性差，分子量大，较难吸收，又多以提取胶原多肽为主。但如果只一味地提取胶原蛋白，会人为地剔除掉某些可能具有其他功能性的多肽，从而导致胶原蛋白损失了很高的价值，限制了产品的应用。

发明内容

本发明提供了灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽作为骨骼发育促进剂，以及作为预防骨质疏松或老化的组合物的应用。

本发明提供了灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽作为人体微量元素补充剂，尤其是作为钙元素补充剂的应用。

鲨鱼皮含有丰富的胶原蛋白，本发明通过现代酶学的生物技术适当的方法处理后，能获得优质的富含胶原蛋白和其他蛋白的混合型多肽，得到的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的分子量在1KD以下。

胶原蛋白肽不仅在美容方面有很大的应用价值，还可以促进骨的形成，增强低钙水平下的骨胶原结构，从而提高了骨强度，即达到了预防骨质疏松症的作用，因此在日化、食品保健领域具有很好的用途。

本发明以深海鲨鱼皮为原料提取混合型蛋白肽，得到的鲨鱼皮混合型多肽不仅能够获得胶原多肽，而且还能够保留一些可能具有其他功能性的多肽。本发明正是利用了混合型多肽的特点，发掘了它在促进骨骼发育方面的应用潜能，大大地提高了鲨鱼皮的加工开发价值。

实验表明，灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽富含多种氨基酸、人体所需的微量元素，在促进骨骼发育方面有显著效果。在以幼年小鼠建模的骨骼发育实验中，对骨骼发育具有良好的效果。此外，灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽经小鼠亚急性毒理实验证明无毒副作用。

附图说明

图1是提取得到的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽样品。

图2显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，雌性小鼠灌胃前后，左、右股骨重量变化；图中Ctrl为对照组，1、2为其它两种鲨鱼混合型多肽(1为狗鲨鱼肉混合型蛋白多肽；2为狗鲨鱼皮混合型蛋白多肽)，3为本发明的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽。

图3显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，雄性小鼠灌胃前后，左、右股骨重量变化；图中Ctrl为对照组，1、2为其他两种鲨鱼混合型多肽(1为狗鲨鱼肉混合型蛋白多肽；2为狗鲨鱼皮混合型蛋白多肽)，3为本发明的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽。

图2至图3表明灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽对不同性别的小鼠骨骼发育有促进作用。

图4显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，雌性小鼠灌胃后，对照组小鼠和灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组小鼠股骨表面的扫描电镜图，实验组相比于对照组骨膜呈现凹凸不平的增势，表明骨膜下成骨细胞活跃，骨纤维生长活跃(箭头显示骨表面骨膜部分)。左：对照组(♀)；右：实验组(♀)。

图5显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，雄性小鼠灌胃后，对照组小鼠和灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组小鼠股骨表面的扫描电镜图实验组相比于对照组骨膜呈现凹凸不平的增势，表明骨膜下成骨细胞活跃，骨纤维生长活跃(箭头显示骨表面骨膜部分)。左：对照组(♂)；右：实验组(♂)。

图6显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，雌性小鼠灌胃后，对照组小鼠和灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组小鼠股骨骨松质纵切的扫描电镜图，实验显示，实验组相比于对照组，骨松质中骨髓组织和骨小梁部分填充饱满，镂空部位减少，骨髓组织覆盖多(箭头显示骨松质中骨髓组织和骨小梁部分)。左：对照组(♀)；右：实验组(♀)。

图7显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，雄性小鼠灌胃后，对照组小鼠和灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组小鼠股骨骨松质纵切的扫描电镜图，实验显示，实验组相比于对照组，骨松质中骨髓组织和骨小梁部分填充饱满，镂空部位减少，骨髓组织覆盖多(箭头显示骨松质中骨髓组织骨小梁部分)。左：对照组(♂)；右：实验组(♂)。

图8显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，雌性小鼠灌胃后，对照组小鼠和灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组小鼠股骨垢端骨松质横切的扫描电镜图实验显示，实验组相比于对照组，骨松质中骨髓组织和骨小梁部分填充饱满，镂空部位减少，骨髓组织覆盖多(箭头显示骨松质中骨髓组织骨小梁部分)。左：对照组(♀)；右：实验组(♀)。

图9显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，雄性小鼠灌胃后，对照组小鼠和灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组小鼠股骨垢端骨松质横切的扫描电镜图，实验显示，实验组相比于对照组，骨松质中骨髓组织和骨小梁部分填充饱满，镂空部位减少，骨髓组织覆盖多(箭头显示骨松质中骨髓组织骨小梁部分)。左：对照组(♂)；右：实验组(♂)。

图4至图9表明灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽具有明显促进小鼠股骨表面骨膜的发育的效果，实验组相比于对照组骨膜呈现凹凸不平的增势，表明骨膜下成骨细胞活跃，骨纤维生长活跃。骨松质中骨髓组织和骨小梁部分填充饱满，镂空部位减少，骨髓组织覆盖多。促进骨松质的发育，促进骨髓组织的产生，且对不同性别的小鼠的作用没有明显差异。

图10显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，小鼠灌胃后，对照组小鼠股骨纵切的HE病理学染色图(左图箭头所示为骨细胞，右图箭头所示为巨核细胞)。左：对照组(5X)；右：对照组(10X)。

图11显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，小鼠灌胃后，灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组小鼠股骨纵切的HE病理学染色图(左图箭头所示为骨细胞，右图箭头所示为巨核细胞)。左：实验组(5X)；右：实验组(10X)。

图12显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，小鼠灌胃后，对照组小鼠股骨垢端纵切的HE病理学染色图(左图箭头所示为骨小梁，右图箭头所示为脂肪细胞)。左：对照组(5X)；右：对照组(10X)。

图13显示多肽对小鼠骨骼发育影响的实验中，小鼠灌胃后，灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组小鼠股骨垢端纵切的HE病理学染色图(左图箭头所示为骨小梁，右图箭头所示为脂肪细胞)。左：实验组(5X)；右：实验组(10X)。

图10至图13表明灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽对小鼠的股骨发育无病变影响，股骨结构完整，有明显促进小鼠骨细胞增多，促进骨骼骨密质发育，促进骨小梁增多，促进骨松质的发育，促进巨核细胞增值，减少脂肪细胞堆积，促进骨髓组织的产生，增强骨髓组织活跃度。

图14显示本申请的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的Q Exactive HPLC-MS/MS图谱。

图15显示本申请的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的Q Exactive HPLC-MS/MS图谱。

图16显示本申请的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的Q Exactive HPLC-MS/MS图谱。

图17显示本申请的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的Q Exactive HPLC-MS/MS图谱。

图18显示本申请的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的Q Exactive HPLC-MS/MS图谱。

图14至图18表明灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽分子量普遍在1KD以下。

图19显示雌性小鼠灌胃前后的体重增长情况，结果显示小鼠灌胃前后的体重增值正常；图中Ctrl为对照组，1、2为其他两种鲨鱼混合型多肽(1为狗鲨鱼肉混合型蛋白多肽；2为狗鲨鱼皮混合型蛋白多肽)，3为本发明的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽。

图20显示雄性小鼠灌胃前后的体重增长情况，结果显示小鼠灌胃前后的体重增值正常；图中Ctrl为对照组，1、2为其他两种鲨鱼混合型多肽(1为狗鲨鱼肉混合型蛋白多肽；2为狗鲨鱼皮混合型蛋白多肽)，3为本发明的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽。

图21显示小鼠灌胃后的体长情况，结果显示小鼠灌胃后的体长生长正常；图中Ctrl为对照组，1、2为其他两种鲨鱼混合型多肽(1为狗鲨鱼肉混合型蛋白多肽；2为狗鲨鱼皮混合型蛋白多肽)，3为本发明的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽。

图19至图21表明灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验，小鼠生长发育并没有出现病变。

图22显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中，雌性小鼠对照组和实验组的心、肝、脾、肺、肾的脏器系数图；图中Ctrl为对照组，1、2为其他两种鲨鱼混合型多肽(1为狗鲨鱼肉混合型蛋白多肽；2为狗鲨鱼皮混合型蛋白多肽)，3为本发明的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽。

图23显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中，雄性小鼠对照组和实验组的心、肝、脾、肺、肾的脏器系数图；图中Ctrl为对照组，1、2为其他两种鲨鱼混合型多肽(1为狗鲨鱼肉混合型蛋白多肽；2为狗鲨鱼皮混合型蛋白多肽)，3为本发明的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽。

图24显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中，雌性小鼠对照组和实验组的心、肝、脾、肺、肾的结果。从上到下依次为心、肝、脾、肺、肾。左：对照组(♀)；右：实验组(♀)。

图25显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中，雄性小鼠对照组和实验组的心、肝、脾、肺、肾的结果。从上到下依次为心、肝、脾、肺、肾。左：对照组(♂)；右：实验组(♂)。

图26显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中对照组病理学心脏切片的显微照片。

图27显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组病理学心脏切片的显微照片。

图28显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中对照组病理学肝脏切片的显微照片。

图29显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组病理学肝脏切片显微照片；

图30显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中对照组病理学脾脏切片的显微照片。

图31显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组病理学脾脏切片显微照片。

图32显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中对照组病理学肺脏切片显微照片。

图33显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组病理学肺脏切片显微照片；

图34灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中对照组病理学肾脏切片显微照片。

图35显示灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽组病理学肾脏切片显微照片。

图22至图35表明，在灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽亚急性毒理实验中，各脏器(心、肝、脾、肺、肾)病理学切片并没有病变现象；灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的亚急性毒理实验中各脏器(心、肝、脾、肺、肾)脏器系数正常。

具体实施方式

灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的平均分子量测定方法

利用高效液相色谱-质谱联用技术，以体积比为50％乙腈(CAN)为溶剂配制质量分数为0.1％三氟乙酸(TFA)的溶液，取1mL超声重溶肽粉。吸取1μL重溶的灰星鲨鱼皮混合多肽溶液和1μLα-氰基-4-羟基肉桂酸(α-HCCA)基质溶液混匀点于质谱仪样品靶上，待样品基质挥发结晶后，用基质辅助激光分析电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)进行上机分析。如图14至图18所示，灰星鲨鱼皮多肽的平均分子量小于1KDa。

灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的微量元素分析方法

通过国标GB 5009.241-2017方法，用火焰原子吸收光谱法测定镁元素含量。

通过国标GB 5009.90-2016方法，用火焰原子吸收光谱法测定铁元素含量。

通过国标GB 5009.91-2017方法，用火焰原子吸收光谱法测定钾、钠元素含量。

通过国标GB 5009.92-2016方法，用火焰原子吸收光谱法测定钙元素含量

通过国标GB 5009.93-2017方法，用氢化物原子荧光光谱法测定硒元素含量。

通过国标GB 5009.13-2017方法，用火焰原子吸收光谱法测定铜元素含量。

通过国标GB 5009.14-2017方法，用火焰原子吸收光谱法测定锌元素含量。

灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的氨基酸组分分析方法

通过国标GB 5009.124-2016方法，用氨基酸分析仪测定样品中的氨基酸组分。

实施例1

灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的基本理化性质

取适量新鲜或冻存解冻后的灰星鲨鱼皮，用超滤水冲洗干净，剪成1cm×1cm左右的小块，用10wt％乙醇(异丙醇、正丁醇)浸泡以去除脂肪，浸泡时间为48h，温度为4℃，间隔12h换液一次；其中所述10wt％乙醇(异丙醇、正丁醇)的量与所述灰星鲨鱼皮重量(湿重)的比例为1L/(50±5)g。

将去除脂肪的灰星鲨鱼皮在超滤水沸水浴中处理。处理时间是35±5分钟。所加超滤水的量与灰星鲨鱼皮重量(湿重)的比例为1L/(50±5)g。经沸水处理后，待其冷却室温，匀浆搅碎。调节pH5.0±0.5，按照加入4±0.5％木瓜蛋白酶，在50±0.5℃的温度下水解3.5±0.3h左右，期间不定时搅拌。沸水浴处理10分钟使酶灭活。降至室温，8000～12000rpm离心20min。取上清液用300目滤网过滤，冷冻干燥得到灰星鲨鱼皮混合型多肽。

取样进行MALDI-TOF MS分析，分析结果见图14至图18所示的MALDI-TOF MS图谱。图14至图18显示，由实施例1得到的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的分子量小于1.0KDa。分子量较小，说明酶解充分。

表1显示实施例1得到的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的氨基酸组分、微量元素和金属元素分析。

表1

由表1可知，本申请的灰星鲨鱼皮混合多肽的氨基酸含量相对于胶原蛋白的氨基酸含量有了大幅度的提高，微量元素种类更加丰富且含量高，而且重金属含量也符合国家标准(GB 16740-2014)。本申请的灰星鲨鱼皮混合多肽可以用作人体微量元素的补充剂。特别地，对于需要补充钙元素的人群，本申请的灰星鲨鱼皮混合多肽是一种优良的选择。

实施例2

本申请的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽促进小鼠骨骼发育实验。

选取4周龄大的C57BL6小鼠，按重量随机分成实验组和对照组，每组20只，雌雄各10只。实验组通过灌胃给予灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽，每次灌胃量1g/kg，间隔一天灌胃一次，累积灌胃时间4周，累积灌胃剂量15g/kg。对照组小鼠给予相同剂量超滤水灌胃。同时平行测试其它两种鲨鱼多肽(狗鲨鱼肉混合型蛋白多肽；狗鲨鱼皮混合型蛋白多肽)作为比较。

小鼠灌胃后，通过1×PBS和2％PFA心脏灌流致死，取小鼠左右后肢股骨，110℃烘干，称重，结果参见图2至图3。图2至图3表明灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽对不同性别的小鼠骨骼发育具有促进作用。

小鼠灌胃后，通过1×PBS和2％PFA心脏灌流致死，取小鼠左右后肢股骨，110℃烘干，做扫描电镜，结果参见图4至图9。图4至图9表明灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽有明显促进小鼠股骨表面骨膜的发育，骨表面呈现凹凸不平的增长趋势，促进骨松质的发育，促进骨髓组织的产生。

小鼠灌胃后，通过1×PBS和2％PFA心脏灌流致死，取小鼠左右后肢股骨，4％PFA固定过夜，EDTA脱钙液脱钙至骨表面柔软，石蜡自动脱水脱水处理，石蜡包埋，进行石蜡切片，然后进行HE病理学染色，结果参见图10至图13。图10至图13表明灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽对小鼠的股骨发育无病变影响，股骨结构完整，有明显促进小鼠骨细胞增多，促进骨骼骨密质发育，促进骨小梁增多，促进骨松质的发育，促进巨核细胞增值，减少脂肪细胞堆积，促进骨髓组织的产生，增强骨髓组织活跃度。

实施例3

本申请的灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的亚急性毒理实验

选取4周龄大的C57BL6小鼠，按重量随机分成实验组和对照组，每组20只，雌雄各10只。实验组通过灌胃给予灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽，每次灌胃量1g/kg，间隔一天灌胃一次，累积灌胃时间4周，累积灌胃剂量15g/kg。对照组小鼠给予相同剂量超滤水灌胃。小鼠灌胃前后称重，计算小鼠体重变化，结果参见图19至图20)。图19至图20表明，给予小鼠灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽前后，小鼠体重增长趋势平稳，并无显著降低。测量小鼠体长(结果参见图21)。图21表明，给予小鼠灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽前后，小鼠体重增长趋势平稳，并无显著抑制小鼠发育的影响。同时平行测试其它两种鲨鱼多肽(狗鲨鱼肉混合型蛋白多肽和狗鲨鱼皮混合型蛋白多肽)作为比较。

小鼠在饲养期间毛色正常，饮食、活动和大小便正常，鼻、眼和口腔无异常分泌物，无异常现象。

随后小鼠通过1×PBS和2％PFA心脏灌流致死，取主要功能性脏器(心、肝、脾、肺、肾)。

各功能性脏器(心、肝、脾、肺、肾)无明显肿胀、畸形、坏死、萎缩等现象，脏器颜色光泽一致。

各功能性脏器(心、肝、脾、肺、肾)在2％PFA(pH7.2～7.4)固定6～8h，成长，计算脏器系数。

脏器脱水处理后，做HE染色病理学切片，观察脏器是否病变。

图22至图23显示，各功能性脏器(心、肝、脾、肺、肾)脏器系数稳定，与对照组无明显差异性。

图24至图35显示，各功能性脏器(心、肝、脾、肺、肾)颜色鲜艳，结构完整，表面光滑，病理学切片染色颜色清晰，组织结构完整，未见组织、细胞明显皱缩、病变和坏死。

以上灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的亚急性毒理实验表明，灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽并没有毒副作用。

综上所述，以上仅为本申请的较佳实施例而已，并非用于限定本申请的保护范围，因此，凡在本申请的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (3)

1.灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽在制备骨骼发育促进剂中的应用，其中所述灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽通过如下方法制备：

将去除脂肪的灰星鲨鱼皮在超滤水沸水浴中处理，处理时间是35±5分钟，所加超滤水的量与灰星鲨鱼皮湿重的比例为1L/(50±5)g，经沸水处理后，待其冷却室温，匀浆搅碎；

调节pH5.0±0.5，按照加入4±0.5％木瓜蛋白酶，在50±0.5℃的温度下水解3.5±0.3h，期间不定时搅拌；

沸水浴处理10分钟使酶灭活，降至室温，8000～12000rpm离心20min，取上清液用300目滤网过滤，冷冻干燥得到所述灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽。

2.灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽在制备预防骨质疏松或老化的组合物中的应用，其中所述灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽通过如下方法制备：

将去除脂肪的灰星鲨鱼皮在超滤水沸水浴中处理，处理时间是35±5分钟，所加超滤水的量与灰星鲨鱼皮湿重的比例为1L/(50±5)g，经沸水处理后，待其冷却室温，匀浆搅碎；

调节pH5.0±0.5，按照加入4±0.5％木瓜蛋白酶，在50±0.5℃的温度下水解3.5±0.3h，期间不定时搅拌；

沸水浴处理10分钟使酶灭活，降至室温，8000～12000rpm离心20min，取上清液用300目滤网过滤，冷冻干燥得到所述灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，灰星鲨鱼皮混合型蛋白肽的分子量在1KD以下。

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