CN109043122A - 用于发酵木薯渣饲料的液体菌液及其淀粉木薯渣发酵饲料的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了用于发酵木薯渣饲料的液体菌液,及其淀粉木薯渣发酵饲料的制备方法。它是由两种芽孢菌和两种乳酸菌，分别混合发酵增殖，然后组合而成其中芽孢菌与乳酸菌接种比例为1:2（V/V）,接种于淀粉木薯渣，经厌氧发酵将淀粉木薯渣转化为饲料。本发明进一步公开了用于发酵木薯渣饲料的液体菌液在制备改善饲料风味，提高适口性方面的应用。实验结果显示采用本发明的液体菌液发酵的木薯渣饲料益生菌数明显提高。木薯渣饲料经过发酵，乳酸含量明显增加。经过发酵的木薯渣饲料有明显的酸甜气味。

Description

用于发酵木薯渣饲料的液体菌液及其淀粉木薯渣发酵饲料的 制备方法
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，涉及多种微生物液态增殖培养，并用于发酵淀粉木薯渣饲料制备。
背景技术
木薯渣是利用木薯生产淀粉所产生的大宗农副产品，主要由木薯外部的皮，内部的薄壁组织和氰苷类物质组成，含有少量淀粉和大量的粗纤维，但粗蛋白含量较低，木质化程度高，作为饲料适口性很差。粗纤维具有较强的稳定性，动物消化利用率低，直接作为饲料效果较差。木薯淀粉应用广泛，随着市场需求的增加，木薯渣也在不断增加。淀粉木薯渣储存时间越久越会对环境造成污染，暴露在自然中会发生霉变，产生的废水和有毒物质不仅会对土壤造成较大破坏，造成经济损失的同时还会进一步威胁人和动物的健康。如何处理这些淀粉木薯渣，成为制约木薯淀粉加工企业发展的瓶颈。
木薯渣粗纤维含量高，碳水化合物含量高，但是蛋白质含量低，一般认为是一种来源广泛、价格低廉、质量低劣的能量饲料。采用生物处理技术，在芽孢杆菌、乳酸菌等相关微生物的综合作用下，进行一系列的复杂的生物化学作用，改变木薯渣的物理化学性质使木薯渣成为一种有潜力资源，将会有广阔的发展前景。近年来，很多学者研究表明通过微生物本身的特性或产生的酶来利用木薯渣中的营养成分可以提高这类饲料的营养价值、消化率和适口性。利用微生物发酵木薯渣，不但可以做到大量消耗木薯渣，另外也是解决目前国内外市场反刍动物饲料缺乏的一种廉价方法，具有极大的发展潜力。但是目前发酵木薯渣饲料大多采用单一菌种的微生物处理，比如青贮，其营养价值提高不多，实际应用也并不理想。而采取两种以上的混合菌种处理木薯渣的产品为数不多，并且由于菌种组合不佳，菌种存活率不高，在实际生产条件下生产工艺复杂、成本高也会限制木薯渣发酵饲料的大规模生产。因此，继续探讨开发高效、低成本、可实现工厂化生产混合微生物液态增殖，并发酵木薯渣生物饲料的最佳混合菌种及其最佳发酵工艺条件具有重要意义。
发明内容
为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容：
一种用于发酵木薯渣饲料的液体菌液,其特征在于它是由两种芽孢菌和两种乳酸菌组合而成，其中芽孢菌与乳酸菌的体积比为1:2；所述的两种芽孢菌指的是：芽孢菌BI2和芽孢菌BI1，两种芽孢菌的体积比为1:1；
所述的两种乳酸菌指的是：粪肠球菌（Enterococcus faecalis CGMCC No.1.10682 ）,植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum CGMCC No.1.12934）；两种乳酸菌的体积比为1:1；
其中芽孢菌BI2指的是：解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens BI2）CGMCCNo.3413，保藏日期2009年11月6日。保藏地点：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；芽孢菌BI1指的是：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis BI1）CGMCC No.3412保藏日期2009年11月6日，保藏地点：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
本发明进一步公开了用于发酵木薯渣饲料的液体菌液的制备方法,其特征在于按如下的步骤进行：
1）芽孢菌BI1和BI2 的混合培养增殖，增殖培养基组成：玉米液化液60%（V/V），酵母粉1(W/V)，豆粕2(W/V)，尿素1.5(W/V), 培养条件为温度37℃、接种量4%、pH 7.0, 发酵时间18~20小时；1吨发酵罐，装液量75%（V/V），转速120/分钟,罐压0.05Kpa,通气量0.06 V/Wm3/m3.h；
2）粪肠球菌和植物乳杆菌混合培养增殖，增殖培养基成分为玉米液化液40%（V/V），酵母粉0.5%(W/V)，豆粕2%(W/V)，尿素1%(W/V)，混合增殖培养条件混合培养条件为温度40℃、pH 6.5、接种量2%、培养时间24h；1吨发酵罐，装液量80%（V/V），转速90~100/分钟,罐压0.02Kpa；
3）发酵饲料的原料配比为：木薯渣70%~80%、玉米粉5%~10%、棕榈籽粕5%~10%、盐1%、尿素1.5%~2.5%、按照该配比准备饲料原料，将步骤1) 、2）中得到的混合芽孢菌增殖液和混合乳酸菌增殖液按1:2（V/V）的比例混合，并按饲料原料干重的6%(V/W)接种于木薯渣原料中并在搅拌机里搅拌均匀，之后分装在带有呼吸阀的发酵袋中发酵，将发酵饲料置于37℃的恒温室中发酵4天。所制备的液体菌液可以保持质量稳定40~50天。本发明所述木薯渣指的是木薯提取淀粉后的副产品，主要由木薯外部褐色的皮，内部的薄壁组织和氰苷类物质组成；棕榈籽粕是指油棕树上的棕果经机械榨取棕榈油后的副产品。
本发明更进一步公开了用于发酵木薯渣饲料的液体菌液在改善饲料风味，提高适口性方面的应用。实验结果显示：
（1）采用本发明所述的混合液体增殖微生物发酵的木薯渣饲料益生菌数明显提高。
（2）木薯渣饲料经过发酵，乳酸含量明显增加。
（3）经过发酵的木薯渣饲料有明显的酸甜气味。
为达到上述的技术效果，本发明主要做了如下的工作：
（1）确定发酵原料配比
为最大程度消耗利用木薯渣，木薯渣添加比例在80%。由于水分过高，原料成分不稳定且含杂菌过多，需要添加一些成分相对稳定并利于微生物附着的基质，改良后发酵饲料的原料配比为木薯渣80%、玉米粉10%、棕榈籽粕10%、盐1%、尿素2%。
（2）发酵菌种的筛选
本研究用到的菌株共26株，菌种按类别可分为芽孢菌16株，分别是纳豆芽孢杆菌、K37、BI2、B10-3-2、B10-9、TL-4、淀粉抑菌、B10-5、淀粉枯草3、B10-7、B10-2、WL-BA-1、F22、F4、B10-6、NK98。乳酸菌10株,分别是凝结、凝结8、发酵乳杆菌、粪肠球菌、纤维二糖、植物乳杆菌、豆粕乳杆菌、RS1、RS2、RS3。
2.1 芽孢菌菌株的筛选
通过产淀粉酶实验和产纤维素酶实验从16株芽孢菌中筛选出高产淀粉酶和高产纤维素酶的菌株。
各取16株芽孢菌菌种一环接到装液量50mL的250mL的三角烧瓶中，37℃培养12h，液体培养基为：蛋白胨1%、酵母粉0.5%、NaCl 1%，pH 7.2。
将活化好的芽孢菌分别点接到淀粉培养基平板上，然后放入37℃恒温生化培养箱中培养，观察菌株周围是否有透明圈产生，挑取产生透明圈的菌株再次活化，稀释涂布到平板上，使之产生单菌落，观察产生透明圈的大小，挑取透明圈大的菌株纯化保存，分别是BI1、淀粉抑菌、WL-BA-1、BI2。
将活化好的芽孢菌分别点接到刚果红CMC培养基平板上，然后放入37℃恒温生化培养箱中培养，观察菌株周围是否有透明圈产生，挑取产生透明圈的菌株再次活化，稀释涂布到平板上，使之产生单菌落，观察产生透明圈的大小，挑取透明圈大的菌株纯化保存，分别是BI1、淀粉枯草3、B10-7、WL-BA-1、F4、BI2。
2.2 乳酸菌菌株的筛选
通过乳酸菌产乳酸性能实验从10株乳酸菌中筛选出产酸高的乳酸菌。
将活化好的乳酸菌菌液分别按照4%的比例接种于饲料中，然后搅拌饲料使之充分混匀，装入发酵袋置于37℃环境中发酵3d后进行检测。检测时称取5g发酵饲料放入三角瓶中，加入蒸馏水振荡，然后离心取上清液，稀释10倍后用生物传感分析仪测定其乳酸含量，选取乳酸含量高的株菌株纯化保存，分别是纤维二糖、凝结芽孢杆菌8#、凝结芽孢杆菌、粪肠球菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、豆粕乳杆菌。
2.3 适合固态发酵菌株的筛选
通过单菌发酵试验首先确定饲料发酵乳酸菌，将活化后乳酸菌按照的4%接种量分别接入发酵料中，3天后检测乳酸菌数和乳酸含量，最终选出菌数多，乳酸含量高的粪肠球菌和植物乳，随后将两株乳酸菌分别和其中一株芽孢菌接入发酵料中，发酵结束后检测芽孢菌数，乳酸含量，最终确定芽孢菌为BI1和BI2。
（3）发酵条件的优化
3.1 芽孢菌与乳酸菌混合比例的优化
将筛选出的2株芽孢菌和2株乳酸菌活化2代，接入预先混合好的发酵料中，接种量为6%，芽孢菌与乳酸菌接种比例分别1:2，1:1，2:1，3:1，3:2，32℃室温发酵3d后，检测其中的乳酸含量和益生菌数等指标。
表1 不同菌种混合比例发酵后乳酸含量与益生菌数
由表1可以看出，当芽孢菌和乳酸菌的混合比例为1:2时，乳酸和乳酸菌数达到最高，分别为2.1%和6.7×106。因此，芽孢菌与乳酸菌的混合比例选择是1:2。
3.2 发酵饲料接种量的优化
将芽孢菌和乳酸菌活化2代，接入预先混合好的发酵料中，芽孢菌与乳酸菌接种比例为1:2，总接种量分别为2%、4%、6%、8%、10%，37℃恒温室中发酵3d后，检测其中的乳酸含量和益生菌数等指标。
表2 不同接种量发酵后乳酸含量与益生菌数
由表2可以看出，随着接种量的增加，乳酸含量也在增加，在到达3%时维持稳定，乳酸菌数在接种量为6%时最高，为7.2×106，随后逐渐降低，说明乳酸含量过高会抑制菌体的生长。因此，接种量为6%时发酵效果最好。
（4）两株芽孢混合液态增殖培养基及培养条件的优化
4.1 芽孢菌培养基成分正交实验
该培养基的成分为玉米液化液（还原糖含量为6%）、酵母粉、豆粕、尿素，通过单因素实验得出玉米液化液添加量50%（V/V）、酵母粉1%（W/V）、豆粕2%（W/V）、尿素1%（W/V）。以单因素优化的条件进行正交实验，采用L9(34)型三水平四因素正交实验对芽孢菌培养基成分玉米液、酵母粉、豆粕、尿素进行分析。在37℃恒温摇床200r/min培养14h后，用平板稀释涂布的方法进行活菌计数，以芽孢菌活菌数作为指标，选取芽孢菌活菌数最高的作为培养基成分。
按照表3成分进行3次重复实验，正交实验分析结果见表4。
从正交实验结果直观分析值可知，影响试验结果的因素依次为A﹥B﹥D﹥C，即对芽孢菌活菌数影响因素依次为玉米液、酵母粉、尿素、豆粕。从K值可以看出，A3B2C2D3培养基芽孢菌数最高，即芽孢菌BI1和BI2混合培养基成分为玉米液化液60%，酵母粉1%，豆粕2%，尿素1.5%。
4.2 芽孢菌培养条件正交实验
把以上优化后的玉米液化液60%（即还原糖含量为4%），酵母粉1%，豆粕2%，尿素1.5%为培养基成分，对芽孢菌BI1和BI2 的混合培养条件进行优化。通过单因素实验得出培养温度为37℃、接种量2%、pH 7.0、装液量50mL。以单因素优化的条件进行正交实验，采用L9(34)型三水平四因素正交实验对芽孢菌培养条件进行分析。培养14h后用平板稀释涂布的方法进行活菌计数，以芽孢菌活菌数作为指标，选取芽孢菌活菌数最高的作为培养条件。
按照表5培养条件进行3次重复实验，正交实验分析结果见表6。
从正交实验结果直观分析值可知，影响试验结果的因素依次为B﹥C﹥A﹥D，即对芽孢菌数影响因素依次为接种量、pH、温度、装液量。
从K值可以看出，A2B1C2D3培养基芽孢菌数最高，即芽孢菌BI1和BI2混合培养条件为温度37℃、接种量4%、pH 7.0、装液量30mL。
（5）两株乳酸菌液态种子培养基及培养条件优化
5.1 两株乳酸菌培养基成分正交实验
该培养基的成分为玉米液化液（还原糖含量为6%）、酵母粉、豆粕、尿素，通过单因素实验得出玉米液化液添加量50%（V/V）、酵母粉1%(W/V)、豆粕3%(W/V)、尿素1%(W/V)。以单因素优化的条件进行正交实验，采用L9(34)型三水平四因素正交实验对两株乳酸菌：粪肠球菌和植物乳杆菌混合培养基成分玉米液、酵母粉、豆粕、尿素进行分析。在40℃恒温培养箱培养24h后，用平板稀释涂布的方法进行活菌计数，以乳酸菌活菌数作为指标，选取乳酸菌活菌数最高的作为培养基成分。
按照表7成分进行3次重复实验，正交实验分析结果见表8。
从正交实验结果直观分析值可知，影响试验结果的因素依次为B﹥A﹥C﹥D，即对乳酸菌数影响因素依次为酵母粉、玉米液、豆粕、尿素。
从K值可以看出，A1B1C1D2培养基乳酸菌数最高，即乳酸菌：粪肠球菌和植物乳杆菌混合培养，培养基成分为玉米液化液40%（V/V），酵母粉0.5%(W/V)，豆粕2%(W/V)，尿素1%(W/V)。
5.2 乳酸菌培养条件正交实验
把以上优化后的玉米液化液40%（V/V），酵母粉0.5%(W/V)，豆粕2%(W/V)，尿素1%(W/V)为培养基成分，对乳酸菌：粪肠球菌和植物乳杆菌混合培养,培养条件进行优化。通过单因素实验得出培养温度为43℃、接种量2%、pH 6.0、培养时间20h。以单因素优化的条件进行正交实验，采用L9(34)型三水平四因素正交实验对乳酸菌培养条件进行分析。培养完成后用平板稀释涂布的方法进行活菌计数，以乳酸菌含量作为指标，选取乳酸菌含量最高的作为培养条件。
按照表9培养条件进行3次重复实验，正交实验分析结果见表10。
表10 正交实验极差分析
从正交实验结果直观分析值可知，影响试验结果的因素依次为A﹥C﹥B﹥D，即对乳酸菌数影响因素依次为温度、接种量、pH、培养时间。
从K值可以看出，A1B1C1D1培养基乳酸菌数最高，即乳酸菌：粪肠球菌和植物乳杆菌混合培养条件为温度40℃、pH 6.5、接种量2%、培养时间24h。
（6）木薯渣发酵固态饲料的制备方法
木薯渣发酵固态饲料的制备方法如下：
1）芽孢菌BI1和BI2 的混合培养增殖，增殖培养基组成：玉米液化液60%（V/V），酵母粉1(W/V)，豆粕2(W/V)，尿素1.5(W/V), 培养条件为温度37℃、接种量4%、pH 7.0, 发酵时间18~20小时。1吨发酵罐，装液量75%（V/V），转速120/分钟,罐压0.05Kpa,通气量0.06 V/Wm3/m3.h
2）粪肠球菌和植物乳杆菌混合培养增殖，增殖培养基成分为玉米液化液40%（V/V），酵母粉0.5%(W/V)，豆粕2%(W/V)，尿素1%(W/V)，混合增殖培养条件混合培养条件为温度40℃、pH 6.5、接种量2%、培养时间24h。1吨发酵罐，装液量80%（V/V），转速90~100/分钟,罐压0.02Kpa。
3）发酵饲料的原料配比为木薯渣80%、玉米粉10%、棕榈籽粕10%、盐1%、尿素2%、按照该配比准备饲料原料，将1）2）中得到的混合芽孢菌增殖液和混合乳酸菌增殖液按1:2（V/V）的比例混合，并按饲料原料干重的6%(V/W)接种于饲料原料中并在搅拌机里搅拌均匀，之后分装在带有呼吸阀的发酵袋中发酵。将发酵饲料置于37℃的恒温室中发酵。
4）分别在4d、7d、10d、15d、30d、40d、50d、90d测定发酵饲料中的乳酸、水分、pH、粗蛋白、芽孢菌数、乳酸菌数、大肠杆菌数。得出结果如下表11所示：
表11 袋装发酵饲料保质实验
由表11可知，袋装发酵饲料在30d之后乳酸、芽孢菌数、乳酸菌数均开始降低，往后时间越长益生菌存活率越低，因此判断袋装发酵饲料的保质时间大约在40d~50d。
本发明利用木薯渣为主要原料发酵生产牛羊饲料，实现了木薯渣、柠檬酸渣低成本、无二次污染的综合利用，生产过程中不产生“三废”，为木薯渣的综合利用开辟了一条新的途径，不但提高了柠檬酸厂的经济效益，还为畜牧业提供了大量的饲料资源，降低了饲养成本，对玉米种植区、畜牧业、饲料行业以及环境可持续发展方面都具有极其重要的意义，具有良好的、十分光明的应用前景对发展环保型、节粮型畜牧业，均具有重大意义。
附图说明
图1淀粉木薯渣发酵饲料制备流程图；
图2高产淀粉酶和纤维素酶菌株筛选。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。本发明所用原料及试剂均有市售。其中所述木薯渣、玉米粉、棕榈籽粕均为工业生产的大宗副产物，木薯渣是新鲜的木薯渣，木薯渣是木薯提取淀粉后的副产物，木薯提取淀粉后得到的木薯渣1-2天内需使用。
实施例1
用于发酵木薯渣饲料的液体菌液,它是由两种芽孢菌和两种乳酸菌组合而成，其中芽孢菌与乳酸菌的体积比为1:2；所述的两种芽孢菌指的是：芽孢菌BI2和芽孢菌BI1，两种芽孢菌的体积比为1:1；
所述的两种乳酸菌指的是：粪肠球菌（Enterococcus faecalis CGMCC No.1.10682 ）,植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum CGMCC No.1.12934）；两种乳酸菌的体积比为1:1；
其中芽孢菌BI2指的是：解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens BI2）CGMCCNo.3413，芽孢菌BI1指的是：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis BI1）CGMCC No.3412。
用于发酵木薯渣饲料的液体菌液的制备方法,按如下的步骤进行：
1）芽孢菌BI1和BI2 的混合培养增殖，增殖培养基组成：玉米液化液60%（V/V），酵母粉1(W/V)，豆粕2(W/V)，尿素1.5(W/V), 培养条件为温度37℃、接种量4%、pH 7.0, 发酵时间18~20小时；1吨发酵罐，装液量75%（V/V），转速120/分钟,罐压0.05Kpa,通气量0.06 V/Wm3/m3.h；
2）粪肠球菌和植物乳杆菌混合培养增殖，增殖培养基成分为玉米液化液40%（V/V），酵母粉0.5%(W/V)，豆粕2%(W/V)，尿素1%(W/V)，混合增殖培养条件混合培养条件为温度40℃、pH 6.5、接种量2%、培养时间24h；1吨发酵罐，装液量80%（V/V），转速90~100/分钟,罐压0.02Kpa；
3）发酵饲料的原料配比为：木薯渣70%0%、玉米粉5%%、棕榈籽粕5%%、盐1%、尿素1.5%%、按照该配比准备饲料原料，将步骤1) 2）中得到的混合芽孢菌增殖液和混合乳酸菌增殖液按1:2（V/V）的比例混合，并按饲料原料干重的6%(V/W)接种于木薯渣原料中并在搅拌机里搅拌均匀，之后分装在带有呼吸阀的发酵袋中发酵，将发酵饲料置于37℃的恒温室中发酵4天。测定发酵饲料中的乳酸2.4%、水分54.9%、pH5、粗蛋白18.6%、芽孢菌数1.4×106cfu/g、乳酸菌数7.9×106 cfu/g、大肠杆菌未检出数。
实施例2
发酵饲料的制作
发酵饲料的原料配比为木薯渣80%、玉米粉10%、棕榈籽粕10%、盐1%、尿素2%、按照该配比准备饲料原料，将芽孢菌二级种子液和乳酸菌二级种子液按1:2的比例混合，其中所述的两种芽孢菌指的是：芽孢菌BI2和芽孢菌BI1，两种芽孢菌的体积比为1:1；
所述的两种乳酸菌指的是：粪肠球菌（Enterococcus faecalis CGMCC No.1.10682 ）,植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum CGMCC No.1.12934）；两种乳酸菌的体积比为1:1；然后按饲料原料干重的6%(V/V)接种于饲料原料中并在搅拌机里搅拌均匀，之后分装在带有呼吸阀的发酵袋中发酵。将发酵饲料置于37℃的恒温室中发酵40d，测定发酵饲料中的乳酸2.9%、水分53.39%、pH4、粗蛋白22.13%、芽孢菌数5.3×106、乳酸菌数3.7×107、大肠杆菌未检出数。
实施例3
比较试验：
结论：本发明利用木薯渣为主要原料发酵生产牛羊饲料，实现了木薯渣低成本、无二次污染的综合利用，发酵木薯渣饲料具有酸香味，粗蛋白含量高，适口性好，可以替代部分牧草。生产过程中不产生“三废”，为木薯渣的综合利用开辟了一条新的途径，不但提高了柠檬酸厂的经济效益，还为畜牧业提供了大量的饲料资源，降低了饲养成本，对玉米种植区、畜牧业、饲料行业以及环境可持续发展方面都具有极其重要的意义。

Claims (4)

1.一种用于发酵木薯渣饲料的液体菌液,其特征在于它是由两种芽孢菌和两种乳酸菌组合而成，其中芽孢菌与乳酸菌的体积比为1:2；所述的两种芽孢菌指的是：芽孢菌BI2和芽孢菌BI1，两种芽孢菌的体积比为1:1；
所述的两种乳酸菌指的是：粪肠球菌（Enterococcus faecalis CGMCC No.1.10682 ）,植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum CGMCC No.1.12934）；两种乳酸菌的体积比为1:1；
其中芽孢菌BI2指的是：解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens BI2）CGMCCNo.3413，保藏日期2009年11月6日；保藏地点：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；芽孢菌BI1指的是：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis BI1）CGMCC No.3412保藏日期2009年11月6日，保藏地点：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
2.一种采用权利要求1所述用于发酵木薯渣饲料的液体菌液的制备方法,其特征在于按如下的步骤进行：
1）芽孢菌BI1和BI2 的混合培养增殖，增殖培养基组成：玉米液化液60%（V/V），酵母粉1(W/V)，豆粕2(W/V)，尿素1.5(W/V), 培养条件为温度37℃、接种量4%、pH 7.0, 发酵时间18~20小时；1吨发酵罐，装液量75%（V/V），转速120/分钟,罐压0.05Kpa,通气量0.06 V/Wm3/m3.h；
2）粪肠球菌和植物乳杆菌混合培养增殖，增殖培养基成分为玉米液化液40%（V/V），酵母粉0.5%(W/V)，豆粕2%(W/V)，尿素1%(W/V)，混合增殖培养条件混合培养条件为温度40℃、pH 6.5、接种量2%、培养时间24h；1吨发酵罐，装液量80%（V/V），转速90~100/分钟,罐压0.02Kpa；
3）发酵饲料的原料配比为：木薯渣70%~80%、玉米粉5%~10%、棕榈籽粕5%~10%、盐1%、尿素1.5%~2.5%、按照该配比准备饲料原料，将步骤1) 、2）中得到的混合芽孢菌增殖液和混合乳酸菌增殖液按1:2（V/V）的比例混合，并按饲料原料干重的6%(V/W)接种于木薯渣原料中并在搅拌机里搅拌均匀，之后分装在带有呼吸阀的发酵袋中发酵，将发酵饲料置于37℃的恒温室中发酵4天。
3.权利要求2所述的制备方法，其中所制备的液体菌液可以保持质量稳定40~50天。
4.权利要求1所述的用于发酵木薯渣饲料的液体菌液在改善饲料风味，提高适口性方面的应用。
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