CN109021127B - 一种马齿苋多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种马齿苋多糖的提取方法。所述方法包括以下步骤:(1)马齿苋原药材粉碎后,采用乙醇或石油醚进行回流提取两次,每次2h,抽滤,烘干得到马齿苋药材粉末备用。(2)马齿苋药材粉末置于高压灭菌锅中进行提取,设定温度范围105‑121℃,提取时间1h。(3)提取出的粗多糖溶液,采用等体积的苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)进行萃取去除蛋白质,留取上清水相溶液,将溶液进行旋蒸,采用无水乙醇沉淀过夜,离心分离获得多糖。采用本发明方法提取的多糖产量比传统水浴法提取的多糖量高出89%‑96%,同时本发明方法所采用的设备简单易获取,纯化多糖的方法简单重复性好,整个过程提取成本低廉,适合大规模工业生产使用。
Description
技术领域
本发明涉及一种马齿苋多糖的提取方法,本发明属于植物有效成分提取技术领域。
背景技术
马齿苋(Portulaca oleracea L.)是一种一年生的药食两用植物。马齿苋起源于印度,现传播到世界各地,野生品种主要分布于墨西哥、欧洲、中国和中东等地,在英国、法国和荷兰等西欧国家发展成了栽培蔬菜。在我国主要有6个品种:马齿苋、毛马齿苋、大花马齿苋、四瓣马齿苋、沙生马齿苋和小琉球马齿苋。马齿苋具有调血脂、抗动脉粥样硬化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、降血糖等功效。马齿苋富含丰富的ω-3脂肪酸,能降低人体血清中的胆固醇和甘油三酯含量,可预防血小板凝聚。此外,马齿苋富含多种微量元素K、Ca、Mg、Zn和Fe等。马齿苋还富含丰富的蛋白质和多糖,其中多糖与其他物质能形成聚合物,低聚糖能促进肠道内益生菌(双歧杆菌)的增殖,改善肠道菌群结构,活性低聚糖可替代或部分替代蔗糖作为甜味剂。多聚糖可进行免疫调节,阻止个体对毒素和放射性元素的吸收,具有降低血压、血脂,延缓衰老的功效。
目前针对马齿苋多糖的提取方法主要有:1)用95%乙醇作挟带剂,采用CO2超临界萃取,萃取物用1,3-丁二醇回收有机相,干燥后进行酶水解,进行水提取过滤并加入活性炭和白土,离心干燥后获得多糖(CN105193876A);2)采用高压脉冲电场低温提取马齿苋多糖(CN103665177A);3)微波辅助提取马齿苋多糖(CN102241785A);4)果胶酶酶解提取马齿苋多糖(CN106117381A)。但现有的马齿苋多糖提取方法涉及的设备昂贵复杂(高电压脉冲、微波和CO2超临界萃取)或处理工序繁琐(果胶酶酶解等),不利于实际应用生产。
发明内容
鉴于目前现有技术中存在的问题,本发明的目的是提供了一种简单高效的提取马齿苋多糖的方法。
为了达到上述目的,本发明所采用的技术方案为:
一种马齿苋多糖的提取方法,其包括以下步骤:
(1)将称取马齿苋药材进行粉碎,药材粉末采用40目的筛子进行筛选,每10g马齿苋粉末加入80~120ml乙醇或石油醚,在60℃回流提取2次,每次2h,回流提取后进行抽滤,烘干得到马齿苋药材粉末备用;
(2)将步骤(1)得到的马齿苋药材粉末,置于三角瓶中,按照每1g马齿苋粉末加入30~50ml的水的量加入水进行混合;将混合物放入高压灭菌锅中,设定温度为105~121℃,时间1h,进行多糖提取;提取结束后,将提取液离心分离,保留上清溶液即为粗多糖溶液;
(3)将粗多糖溶液旋蒸浓缩,使其体积为原体积的1/5~1/3,然后按照体积比1:1加入苯酚:氯仿:异戊醇的混合物,充分震荡混匀,将溶液转入离心瓶静置,离心,保留上层水相溶液,抽提两次;
(4)按照上层水相溶液:乙醇=1:10的体积比加入乙醇,充分混匀,置于4℃冰箱放置12h,将醇沉的多糖溶液转入离心瓶,离心,保留沉淀;
(5)沉淀放入冻干机中冻干,即得马齿苋多糖。
其中,优选的,步骤(1)中每10g马齿苋粉末加入100ml乙醇或石油醚。
其中,优选的,步骤(2)中将混合物放入高压灭菌锅中,设定温度为105~121℃,时间1h,进行多糖提取。
其中,优选的,步骤(2)中所述的离心是指20000×g,25℃,离心30min。
其中,优选的,步骤(3)中所述的离心是指12000×g,25℃,离心30min。
其中,优选的,步骤(4)中所述的离心是指20000×g,25℃,离心30min。
其中,优选的,步骤(4)中所述的苯酚:氯仿:异戊醇的混合物中,苯酚:氯仿:异戊醇体积比=25:24:1。
其中,优选的,所述的乙醇均为无水乙醇。
相较于现有技术,本发明的有益效果是:
采用本发明能提高马齿苋多糖的提取率,同时所采用的设备简单易获取,纯化多糖的方法简单重复性好,整个过程提取成本低廉。
以传统的水浴法作为对照组,高压灭菌锅提取法作为方法组,提取时间均为1h。检测结果表明:高压灭菌锅法提取的多糖产量比传统水浴法提取的多糖量高出89%-96%,其中高压灭菌锅提取法条件为121℃,压力为0.12mpa时,从每克马齿苋药材用能提取出0.065g多糖,而水浴提取只能提出0.033g,比水浴提取法多提出0.032g。后续多提取的多糖进行纯化,结果表明采用石油醚或者乙醇脱脂,后续采用苯酚:氯仿:异戊醇进行去蛋白,醇沉后获得的纯化多糖得率优于采用TCA(三氯乙酸)去蛋白,前者处理获得纯化多糖的得率高出后者220%以上。
附图说明
图1为不同提取方法获得马齿苋多糖的质量比较;
图2为不同方法纯化获得的马齿苋多糖。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下,可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1马齿苋多糖的高效提取方法
具体步骤如下:
(1)称取一定质量的马齿苋药材进行粉碎,药材粉末采用40目的筛子进行筛选,按照每10g马齿苋粉末加入100ml无水乙醇的比例(料液比为1:10)加入无水乙醇,在60℃回流提取2次,每次2h,回流提取后进行抽滤,烘干得到马齿苋药材粉末备用;
(2)分别称取1g步骤(1)得到的马齿苋粉末,置于三角瓶中,按照每1g马齿苋粉末加入40ml的水(料液比=1:40)的量加入水进行混合。将混合物放入高压灭菌锅中,设定温度为105~121℃,时间1h,进行多糖提取。提取结束后,将提取液离心分离,20000×g,25℃,离心30min,保留上清溶液即为粗多糖溶液;
(3)将粗多糖溶液旋蒸浓缩,浓缩使其体积在10ml左右,按照体积比1:1加入苯酚:氯仿:异戊醇的混合物(25:24:1),充分震荡混匀,将溶液转入离心瓶静置10min,12000×g,25℃,离心30min,保留上层水相溶液,抽提两次。
(4)按照上层水相溶液:无水乙醇=1:10的体积比加入无水乙醇,充分混匀,置于4℃冰箱放置12h,将醇沉的多糖溶液转入离心瓶,20000×g,25℃,离心30min,保留沉淀。
(5)沉淀放入冻干机中冻干,即得马齿苋多糖。
将冻干物称重,加入适量的纯水,在超声清洗仪的辅助下进行溶解,取1ml进行多糖含量的测定。
实施例2马齿苋多糖的高效提取方法
具体步骤同实施例1,区别仅在于将高压灭菌锅的温度设定为110℃。
实施例3马齿苋多糖的高效提取方法
具体步骤同实施例1,区别仅在于将高压灭菌锅的温度设定为115℃。
实施例4马齿苋多糖的高效提取方法
具体步骤同实施例1,区别仅在于将高压灭菌锅的温度设定为121℃。
实施例5马齿苋多糖的高效提取方法
具体步骤同实施例1,区别仅在于将步骤(1)回流提取中使用的无水乙醇替换为石油醚。
对比例1
具体步骤同实施例1,区别仅在于步骤(2)中将混合物放入水浴锅中,设定温度为100℃,时间1h,进行多糖提取。
对比例2
具体步骤同实施例1,区别仅在于将步骤(3)中的苯酚:氯仿:异戊醇的混合物(25:24:1)替换为TCA。
对比例3
具体步骤同实施例5,区别仅在于将步骤(3)中的苯酚:氯仿:异戊醇的混合物(25:24:1)替换为TCA。
实施例6多糖含量的测定
多糖含量的测定采用苯酚-硫酸法,具体步骤如下:
1)绘制葡萄糖标准曲线:将葡萄糖用冷冻干燥机进行1天的干燥处理,使用天平准确称取葡萄糖50mg,溶解后转入50ml容量瓶中,用水定容至50ml。
2)吸取0、50、100、200、300、400、500μl的葡萄糖标准品母液,向其中分别添加500、450、400、300、200、100、0μl去离子水,则得出浓度值为0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、1.0mg/ml的标准梯度溶液,向标准液中加入0.25ml的苯酚溶液(6%),再加入1.25ml浓H2SO4,置于60℃水浴锅中孵育10min,室温下冷却20min,采用紫外-可见分光光度计测定在490nm的波长处溶液的吸光值,每个浓度重复3次。以吸光度为纵坐标,标准葡萄糖溶液浓度为横坐标,绘制葡萄糖标准曲线。
3)样品的反应条件和步骤同标准曲线,测定吸光值,根据标准曲线公式计算实施例1-5以及对比例1-3中所得到的溶液中多糖的浓度。
结果:
图1为不同提取方法获得马齿苋多糖的质量比较,图1结果表明:采用高压灭菌锅法提取马齿苋粗多糖,均提取1小时,四种不同温度条件所获得的马齿苋粗多糖均极显著高于水浴提取法。高压灭菌锅法提取的多糖产量比传统水浴法提取的多糖量高出89%-96%,其中高压灭菌锅提取法条件为121℃,从每克马齿苋药材用能提取出0.065g多糖,而水浴提取只能提出0.033g,比水浴提取法多提出0.032g,高出水浴法96%以上。
图2为不同方法纯化获得的马齿苋多糖,图2结果表明:采用石油醚或者乙醇脱脂,后续采用苯酚:氯仿:异戊醇进行去蛋白,醇沉后获得的纯化多糖得率优于采用TCA(三氯乙酸)去蛋白,前者处理获得纯化多糖的得率高出后者220%以上。采用石油醚和乙醇进行脱脂,对纯化多糖产量的影响没有显著差异。
Claims (6)
1.一种马齿苋多糖的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将称取马齿苋药材进行粉碎,药材粉末采用40目的筛子进行筛选,每10 g马齿苋粉末加入80~120 ml乙醇或石油醚,在60℃ 回流提取2次,每次2 h,回流提取后进行抽滤,烘干得到马齿苋药材粉末备用;
(2)将步骤(1)得到的马齿苋药材粉末,置于三角瓶中,按照每1 g马齿苋粉末加入30~50 ml的水的量加入水进行混合;将混合物放入高压灭菌锅中,设定温度为121℃,时间1 h,进行多糖提取;提取结束后,将提取液离心分离,保留上清溶液即为粗多糖溶液;
(3)将粗多糖溶液旋蒸浓缩,使其体积为原体积的1/5~1/3,然后按照体积比1:1加入苯酚:氯仿:异戊醇的混合物,充分震荡混匀,将溶液转入离心瓶静置,离心,保留上层水相溶液,抽提两次;所述的苯酚:氯仿:异戊醇的混合物中,苯酚:氯仿:异戊醇体积比=25:24:1;
(4)按照上层水相溶液:乙醇=1:10的体积比加入乙醇,充分混匀,置于4℃ 冰箱放置12h,将醇沉的多糖溶液转入离心瓶,离心,保留沉淀;
(5)沉淀放入冻干机中冻干,即得马齿苋多糖。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中每10 g马齿苋粉末加入100 ml乙醇或石油醚。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中所述的离心是指20000×g,25℃,离心30 min。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中所述的离心是指12000×g,25℃,离心30 min。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中所述的离心是指20000×g,25℃,离心30 min。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的乙醇均为无水乙醇。
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