CN108997446A - 小分子褐藻糖胶的提取工艺及在化妆品中的应用 - Google Patents

小分子褐藻糖胶的提取工艺及在化妆品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了小分子褐藻糖胶的提取工艺及在化妆品中的应用。本发明将海带制成海带破壁浆液后，先利用壳聚糖醋酸溶液并辅以过硼酸钠沉降多糖，用蒸馏水分散后，再利用溶菌酶结合三氟乙酸进行降解，最后通过反复冻融处理实现小分子褐藻糖胶的分离，所得产品分子量低(200～300Da)，纯度高，并且具有适当良好的流动性，可用于制备化妆品。

Description

小分子褐藻糖胶的提取工艺及在化妆品中的应用
技术领域
本发明涉及天然产物提取技术领域，特别是涉及小分子褐藻糖胶的提取工艺及在化妆品中的应用。
背景技术
1913年，瑞典科学家Kylin在乌普萨拉大学实验室发现了褐藻中的粘稠成分——褐藻糖胶。随着科学技术的进步，人们认识到褐藻糖胶是褐藻类植物中的一种“细胞间多糖”，这种多糖主要存在于褐藻类植物中的细胞壁中，含量很少。
褐藻糖胶是一种天然的复合多糖，在分子链末端含有天然的硫酸基，使其表现出优良、明显的生理活性。现代科学证明，褐藻糖胶并非一种单一结构的化合物，而是具有不同化学组分的一族化合物。通常的褐藻糖胶分子量约为20000Da，具有抗病毒、调节免疫和抗癌等作用。海带中褐藻糖胶含量约为1～2％。
近年来，小分子褐藻糖胶受到了人们的热烈关注，特别是分子量500Da左右的产品，活性比通常的褐藻糖胶高了40％以上。目前已经证实小分子褐藻糖胶在预防医学、免疫、肿瘤抑制和改善癌症恶病质等方面的功效、安全性等。另外，还有报道小分子褐藻糖胶可用于医美领域，活化纤维母细胞之生长，促进内生性胶原蛋白合成，调节MMP对皮肤伤害，高抗氧能力，调节发炎及过敏反应、促进伤口愈合等。
但是受制于提取技术，现在生产的褐藻糖胶大多为大分子的杂多糖，成分复杂，结构不清，限制了褐藻糖胶研究和市场开发进展。专利CN106866834B中公开了一种制备褐藻糖胶产品的方法，通过该方法制备的褐藻糖胶分子量低，但是其分子量范围在2000～10000Da，分子量仍然偏高，而且产品的流动性欠佳，不利于后续应用。
发明内容
本发明的目的就是要提供小分子褐藻糖胶的提取工艺及在化妆品中的应用，分子量低，且具有适当良好的流动性。
为实现上述目的，本发明是通过如下方案实现的：
小分子褐藻糖胶的提取工艺，具体步骤如下：
(1)海带洗净、微波辐照烘干、粉碎，得到海带粉末；
(2)将海带粉末加入10～15倍重量的蒸馏水中，搅拌，高压均质，得到海带破壁浆液；
(3)向海带破壁浆液中加入壳聚糖醋酸溶液，两者体积比为6～8:1，搅拌10～15分钟，加入0.08～0.1倍海带粉末重量的过硼酸钠，继续搅拌20～30分钟，离心，收集沉淀；
(4)边搅拌边将步骤(3)所得沉淀加入6～8倍重量的蒸馏水中，超声波振荡30分钟，得分散液；
(5)向步骤(4)中所得分散液中加入0.02～0.03倍海带粉末重量的溶菌酶，35～45℃水解3～5小时，接着加入0.01～0.02倍海带粉末重量的三氟乙酸，升温至90～100℃，密闭条件下水解20～30分钟并灭酶，真空回收三氟乙酸，得到提取液；
(6)步骤(5)所得提取液于-40～-50℃冷冻，冷冻完全后，室温(25℃)条件下缓慢融化，0～4℃离心，取上清液，重复冷冻、融化和离心过程，直至无沉淀产生为止，所得上清液冷冻干燥，得到小分子褐藻糖胶。
优选的，步骤(1)中，微波辐照烘干的条件为：300～450W微波间歇辐照处理，每次处理时间为5～10s，间隔30s后继续，累计处理时间为3～4分钟。
优选的，步骤(2)中，搅拌的工艺条件是：以500～800转/分钟的转速搅拌3～4小时。
优选的，步骤(2)中，利用高压微射流均质机高压均质，工艺条件是：压力100～120MPa，温度45～48℃，时间5～8分钟。
优选的，步骤(3)中，所述壳聚糖醋酸溶液的制备方法如下：将分子量30～40万，脱乙酰度≥90％的1～2g壳聚糖粉末加入到质量浓度1％的醋酸水溶液中，加热至40℃，搅拌至完全溶解即得。
优选的，步骤(3)中，离心的工艺条件为：转速5000～7000转/分钟，离心时间5～7分钟。
优选的，步骤(4)中，离心的工艺条件为：转速8000～10000转/分钟，离心时间5～7分钟。
优选的，步骤(5)中，三氟乙酸的回收方法为40～60℃下真空回收。
优选的，步骤(6)中，离心的工艺条件为：转速15000～20000转/分钟，离心时间2～3分钟。
优选的，步骤(6)中，冷冻干燥的工艺条件为：-10～-15℃预冷冻为固态，然后转移至真空冷冻干燥机中，温度降至-40～-50℃，抽真空至15～20Pa，接着温度升至20～30℃，继续在当前的真空度条件下处理10～15小时。
利用上述提取工艺得到的小分子褐藻糖胶，其分子量为200～300Da。红外光谱分析，在3420cm-1处有强吸收，表示有-OH和O-H键的伸缩振动；在3000-2800cm-1间较弱的峰为-CH2或-CH3的C-H吸收峰，1200-1100cm-1间不太尖的峰是C-H的变角振动，这两组峰是糖类的特征吸收峰；1200-1100cm-1间比较大的吸收峰是由两种C-O伸缩振动引起的，其中一种是属于C-O-H的，另一种是糖环的C-O-C的伸缩振动；1610-1620cm-1处的吸收是糖醛酸的特征吸收峰；1250cm-1、850cm-1、820cm-1左右的峰为硫酸基的特征吸收峰。产品具有褐藻糖胶的各个特征峰，可确定为褐藻糖胶。
上述小分子褐藻糖胶在化妆品中的应用，优选为保湿或抗氧化化妆品。本发明的有益效果是：
1、本发明将海带制成海带破壁浆液后，先利用壳聚糖醋酸溶液并辅以过硼酸钠沉降多糖，用蒸馏水分散后，再利用溶菌酶结合三氟乙酸进行降解，最后通过反复冻融处理实现小分子褐藻糖胶的分离，所得产品分子量低(200～300Da)，纯度高，并且具有适当良好的流动性，可用于制备化妆品，赋予化妆品具有以下功效：活化纤维母细胞之生长，促进内生性胶原蛋白合成，调节MMP(基质金属蛋白酶)对皮肤伤害，高抗氧能力，调节发炎及过敏反应、促进伤口愈合等。
2、将海带制成海带破壁浆液有利于海带内部成分释放，使得后续步骤中更容易沉降出多糖成分。
3、与常见的乙醇水溶液沉降相比，本发明利用壳聚糖醋酸溶液辅以过硼酸钠沉降多糖(同时发生了少量降解)，保证了多糖类成分的充分沉降。也不需要添加另外氯化钙即可抑制褐藻酸钠遇水膨胀，这是因为少量过硼酸钠具有降解作用，结合壳聚糖分子的缠绕作用，便抑制了膨胀。
4、与常见的乙醇水溶液提取相比，本发明利用溶菌酶结合三氟乙酸降解多糖，一方面促进多糖降解为较低的分子量，另一方面有效避免了多糖降解为单糖，导致产率低。
5、本发明最后通过反复冻融处理实现小分子褐藻糖胶的分离，保证了产品的高纯度，同时，使得产品具有适当良好的流动性。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
由于不同区域打捞海带的褐藻糖胶含量不尽相同，本发明涉及的海带源于同一区域同一时间打捞，以便于进行提取效果的比较。由于海带不同部位的褐藻糖胶含量不同，为方便比较，本发明采用新鲜海带全株。
实施例1
小分子褐藻糖胶的提取工艺，具体步骤如下：
(1)海带洗净、微波辐照烘干、粉碎，得到海带粉末；
(2)将海带粉末加入10倍重量的蒸馏水中，搅拌，高压均质，得到海带破壁浆液；
(3)向海带破壁浆液中加入壳聚糖醋酸溶液，两者体积比为6:1，搅拌10分钟，加入0.08倍海带粉末重量的过硼酸钠，继续搅拌20分钟，离心，收集沉淀；
(4)边搅拌边将步骤(3)所得沉淀加入6倍重量的蒸馏水中，超声波振荡30分钟，得分散液；
(5)向步骤(4)中所得分散液中加入0.02倍海带粉末重量的溶菌酶，35℃水解3小时，接着加入0.01倍海带粉末重量的三氟乙酸，升温至90℃，密闭条件下水解20分钟并灭酶，真空回收三氟乙酸，得到提取液；
(6)步骤(5)所得提取液于-40℃冷冻，冷冻完全后，室温(25℃)条件下缓慢融化，0℃离心，取上清液，重复冷冻、融化和离心过程，直至无沉淀产生为止，所得上清液冷冻干燥，得到小分子褐藻糖胶。
其中，步骤(1)中，微波辐照烘干的条件为：300W微波间歇辐照处理，每次处理时间为5s，间隔30s后继续，累计处理时间为3分钟。
步骤(2)中，搅拌的工艺条件是：以500转/分钟的转速搅拌3小时。
步骤(2)中，利用高压微射流均质机高压均质，工艺条件是：压力100MPa，温度45℃，时间5分钟。
步骤(3)中，所述壳聚糖醋酸溶液的制备方法如下：将分子量30万，脱乙酰度≥90％的1g壳聚糖粉末加入到质量浓度1％的醋酸水溶液中，加热至40℃，搅拌至完全溶解即得。
步骤(3)中，离心的工艺条件为：转速5000转/分钟，离心时间5分钟。
步骤(4)中，离心的工艺条件为：转速8000转/分钟，离心时间5分钟。
步骤(5)中，三氟乙酸的回收方法为40℃下真空回收。
步骤(6)中，离心的工艺条件为：转速15000转/分钟，离心时间2分钟。
步骤(6)中，冷冻干燥的工艺条件为：-10℃预冷冻为固态，然后转移至真空冷冻干燥机中，温度降至-40℃，抽真空至15Pa，接着温度升至20℃，继续在当前的真空度条件下处理10小时。
利用上述提取工艺得到的小分子褐藻糖胶，平均分子量为270Da。
实施例2
小分子褐藻糖胶的提取工艺，具体步骤如下：
(1)海带洗净、微波辐照烘干、粉碎，得到海带粉末；
(2)将海带粉末加入15倍重量的蒸馏水中，搅拌，高压均质，得到海带破壁浆液；
(3)向海带破壁浆液中加入壳聚糖醋酸溶液，两者体积比为8:1，搅拌15分钟，加入0.1倍海带粉末重量的过硼酸钠，继续搅拌30分钟，离心，收集沉淀；
(4)边搅拌边将步骤(3)所得沉淀加入8倍重量的蒸馏水中，超声波振荡30分钟，得分散液；
(5)向步骤(4)中所得分散液中加入0.03倍海带粉末重量的溶菌酶，45℃水解5小时，接着加入0.02倍海带粉末重量的三氟乙酸，升温至100℃，密闭条件下水解30分钟并灭酶，真空回收三氟乙酸，得到提取液；
(6)步骤(5)所得提取液于-50℃冷冻，冷冻完全后，室温(25℃)条件下缓慢融化，4℃离心，取上清液，重复冷冻、融化和离心过程，直至无沉淀产生为止，所得上清液冷冻干燥，得到小分子褐藻糖胶。
其中，步骤(1)中，微波辐照烘干的条件为：450W微波间歇辐照处理，每次处理时间为10s，间隔30s后继续，累计处理时间为4分钟。
步骤(2)中，搅拌的工艺条件是：以800转/分钟的转速搅拌4小时。
步骤(2)中，利用高压微射流均质机高压均质，工艺条件是：压力120MPa，温度48℃，时间8分钟。
步骤(3)中，所述壳聚糖醋酸溶液的制备方法如下：将分子量40万，脱乙酰度≥90％的2g壳聚糖粉末加入到质量浓度1％的醋酸水溶液中，加热至40℃，搅拌至完全溶解即得。
步骤(3)中，离心的工艺条件为：转速7000转/分钟，离心时间7分钟。
步骤(4)中，离心的工艺条件为：转速10000转/分钟，离心时间7分钟。
步骤(5)中，三氟乙酸的回收方法为60℃下真空回收。
步骤(6)中，离心的工艺条件为：转速20000转/分钟，离心时间3分钟。
步骤(6)中，冷冻干燥的工艺条件为：-15℃预冷冻为固态，然后转移至真空冷冻干燥机中，温度降至-50℃，抽真空至20Pa，接着温度升至30℃，继续在当前的真空度条件下处理15小时。
利用上述提取工艺得到的小分子褐藻糖胶，平均分子量为280Da。
实施例3
小分子褐藻糖胶的提取工艺，具体步骤如下：
(1)海带洗净、微波辐照烘干、粉碎，得到海带粉末；
(2)将海带粉末加入10倍重量的蒸馏水中，搅拌，高压均质，得到海带破壁浆液；
(3)向海带破壁浆液中加入壳聚糖醋酸溶液，两者体积比为8:1，搅拌10分钟，加入0.1倍海带粉末重量的过硼酸钠，继续搅拌20分钟，离心，收集沉淀；
(4)边搅拌边将步骤(3)所得沉淀加入8倍重量的蒸馏水中，超声波振荡30分钟，得分散液；
(5)向步骤(4)中所得分散液中加入0.02倍海带粉末重量的溶菌酶，45℃水解3小时，接着加入0.02倍海带粉末重量的三氟乙酸，升温至90℃，密闭条件下水解30分钟并灭酶，真空回收三氟乙酸，得到提取液；
(6)步骤(5)所得提取液于-40℃冷冻，冷冻完全后，室温(25℃)条件下缓慢融化，4℃离心，取上清液，重复冷冻、融化和离心过程，直至无沉淀产生为止，所得上清液冷冻干燥，得到小分子褐藻糖胶。
其中，步骤(1)中，微波辐照烘干的条件为：300W微波间歇辐照处理，每次处理时间为10s，间隔30s后继续，累计处理时间为3分钟。
步骤(2)中，搅拌的工艺条件是：以800转/分钟的转速搅拌3小时。
步骤(2)中，利用高压微射流均质机高压均质，工艺条件是：压力120MPa，温度45℃，时间8分钟。
步骤(3)中，所述壳聚糖醋酸溶液的制备方法如下：将分子量30万，脱乙酰度≥90％的2g壳聚糖粉末加入到质量浓度1％的醋酸水溶液中，加热至40℃，搅拌至完全溶解即得。
步骤(3)中，离心的工艺条件为：转速5000转/分钟，离心时间7分钟。
步骤(4)中，离心的工艺条件为：转速8000转/分钟，离心时间7分钟。
步骤(5)中，三氟乙酸的回收方法为40℃下真空回收。
步骤(6)中，离心的工艺条件为：转速20000转/分钟，离心时间2分钟。
步骤(6)中，冷冻干燥的工艺条件为：-15℃预冷冻为固态，然后转移至真空冷冻干燥机中，温度降至-40℃，抽真空至20Pa，接着温度升至20℃，继续在当前的真空度条件下处理15小时。
利用上述提取工艺得到的小分子褐藻糖胶，平均分子量为250Da。
实施例4
小分子褐藻糖胶的提取工艺，具体步骤如下：
(1)海带洗净、微波辐照烘干、粉碎，得到海带粉末；
(2)将海带粉末加入15倍重量的蒸馏水中，搅拌，高压均质，得到海带破壁浆液；
(3)向海带破壁浆液中加入壳聚糖醋酸溶液，两者体积比为6:1，搅拌15分钟，加入0.08倍海带粉末重量的过硼酸钠，继续搅拌30分钟，离心，收集沉淀；
(4)边搅拌边将步骤(3)所得沉淀加入6倍重量的蒸馏水中，超声波振荡30分钟，得分散液；
(5)向步骤(4)中所得分散液中加入0.03倍海带粉末重量的溶菌酶，35℃水解5小时，接着加入0.01倍海带粉末重量的三氟乙酸，升温至100℃，密闭条件下水解20分钟并灭酶，真空回收三氟乙酸，得到提取液；
(6)步骤(5)所得提取液于-50℃冷冻，冷冻完全后，室温(25℃)条件下缓慢融化，0℃离心，取上清液，重复冷冻、融化和离心过程，直至无沉淀产生为止，所得上清液冷冻干燥，得到小分子褐藻糖胶。
其中，步骤(1)中，微波辐照烘干的条件为：450W微波间歇辐照处理，每次处理时间为5s，间隔30s后继续，累计处理时间为4分钟。
步骤(2)中，搅拌的工艺条件是：以500转/分钟的转速搅拌4小时。
步骤(2)中，利用高压微射流均质机高压均质，工艺条件是：压力100MPa，温度48℃，时间5分钟。
步骤(3)中，所述壳聚糖醋酸溶液的制备方法如下：将分子量40万，脱乙酰度≥90％的1g壳聚糖粉末加入到质量浓度1％的醋酸水溶液中，加热至40℃，搅拌至完全溶解即得。
步骤(3)中，离心的工艺条件为：转速7000转/分钟，离心时间5分钟。
步骤(4)中，离心的工艺条件为：转速10000转/分钟，离心时间5分钟。
步骤(5)中，三氟乙酸的回收方法为60℃下真空回收。
步骤(6)中，离心的工艺条件为：转速15000转/分钟，离心时间3分钟。
步骤(6)中，冷冻干燥的工艺条件为：-10℃预冷冻为固态，然后转移至真空冷冻干燥机中，温度降至-50℃，抽真空至15Pa，接着温度升至30℃，继续在当前的真空度条件下处理10小时。
利用上述提取工艺得到的小分子褐藻糖胶，平均分子量为250Da。
实施例5
小分子褐藻糖胶的提取工艺，具体步骤如下：
(1)海带洗净、微波辐照烘干、粉碎，得到海带粉末；
(2)将海带粉末加入12倍重量的蒸馏水中，搅拌，高压均质，得到海带破壁浆液；
(3)向海带破壁浆液中加入壳聚糖醋酸溶液，两者体积比为7:1，搅拌12分钟，加入0.09倍海带粉末重量的过硼酸钠，继续搅拌25分钟，离心，收集沉淀；
(4)边搅拌边将步骤(3)所得沉淀加入7倍重量的蒸馏水中，超声波振荡30分钟，得分散液；
(5)向步骤(4)中所得分散液中加入0.025倍海带粉末重量的溶菌酶，40℃水解4小时，接着加入0.015倍海带粉末重量的三氟乙酸，升温至95℃，密闭条件下水解25分钟并灭酶，真空回收三氟乙酸，得到提取液；
(6)步骤(5)所得提取液于-45℃冷冻，冷冻完全后，室温(25℃)条件下缓慢融化，2℃离心，取上清液，重复冷冻、融化和离心过程，直至无沉淀产生为止，所得上清液冷冻干燥，得到小分子褐藻糖胶。
其中，步骤(1)中，微波辐照烘干的条件为：300W微波间歇辐照处理，每次处理时间为8s，间隔30s后继续，累计处理时间为4分钟。
步骤(2)中，搅拌的工艺条件是：以600转/分钟的转速搅拌3小时。
步骤(2)中，利用高压微射流均质机高压均质，工艺条件是：压力110MPa，温度46℃，时间7分钟。
步骤(3)中，所述壳聚糖醋酸溶液的制备方法如下：将分子量35万，脱乙酰度≥90％的1.5g壳聚糖粉末加入到质量浓度1％的醋酸水溶液中，加热至40℃，搅拌至完全溶解即得。
步骤(3)中，离心的工艺条件为：转速6000转/分钟，离心时间6分钟。
步骤(4)中，离心的工艺条件为：转速9000转/分钟，离心时间6分钟。
步骤(5)中，三氟乙酸的回收方法为50℃下真空回收。
步骤(6)中，离心的工艺条件为：转速18000转/分钟，离心时间3分钟。
步骤(6)中，冷冻干燥的工艺条件为：-12℃预冷冻为固态，然后转移至真空冷冻干燥机中，温度降至-45℃，抽真空至18Pa，接着温度升至25℃，继续在当前的真空度条件下处理12小时。
利用上述提取工艺得到的小分子褐藻糖胶，平均分子量为220Da。
对比例1
一种褐藻糖胶的提取工艺，具体步骤如下：
(1)海带洗净、微波辐照烘干、粉碎，得到海带粉末；
(2)将海带粉末加入12倍重量的蒸馏水中，搅拌，高压均质，得到海带破壁浆液；
(3)向海带破壁浆液中加入壳聚糖醋酸溶液，两者体积比为7:1，搅拌37分钟，离心，收集沉淀；
(4)边搅拌边将步骤(3)所得沉淀加入7倍重量的蒸馏水中，超声波振荡30分钟，得分散液；
(5)向步骤(4)中所得分散液中加入0.025倍海带粉末重量的溶菌酶，40℃水解4小时，接着加入0.015倍海带粉末重量的三氟乙酸，升温至95℃，密闭条件下水解25分钟并灭酶，真空回收三氟乙酸，得到提取液；
(6)步骤(5)所得提取液于-45℃冷冻，冷冻完全后，室温(25℃)条件下缓慢融化，2℃离心，取上清液，重复冷冻、融化和离心过程，直至无沉淀产生为止，所得上清液冷冻干燥，得到小分子褐藻糖胶。
其中，步骤(1)中，微波辐照烘干的条件为：300W微波间歇辐照处理，每次处理时间为8s，间隔30s后继续，累计处理时间为4分钟。
步骤(2)中，搅拌的工艺条件是：以600转/分钟的转速搅拌3小时。
步骤(2)中，利用高压微射流均质机高压均质，工艺条件是：压力110MPa，温度46℃，时间7分钟。
步骤(3)中，所述壳聚糖醋酸溶液的制备方法如下：将分子量35万，脱乙酰度≥90％的1.5g壳聚糖粉末加入到质量浓度1％的醋酸水溶液中，加热至40℃，搅拌至完全溶解即得。
步骤(3)中，离心的工艺条件为：转速6000转/分钟，离心时间6分钟。
步骤(4)中，离心的工艺条件为：转速9000转/分钟，离心时间6分钟。
步骤(5)中，三氟乙酸的回收方法为50℃下真空回收。
步骤(6)中，离心的工艺条件为：转速18000转/分钟，离心时间3分钟。
步骤(6)中，冷冻干燥的工艺条件为：-12℃预冷冻为固态，然后转移至真空冷冻干燥机中，温度降至-45℃，抽真空至18Pa，接着温度升至25℃，继续在当前的真空度条件下处理12小时。
利用上述提取工艺得到的一种褐藻糖胶，平均分子量为2100Da。
对比例2
一种褐藻糖胶的提取工艺，具体步骤如下：
(1)海带洗净、微波辐照烘干、粉碎，得到海带粉末；
(2)将海带粉末加入12倍重量的蒸馏水中，搅拌，高压均质，得到海带破壁浆液；
(3)向海带破壁浆液中加入壳聚糖醋酸溶液，两者体积比为7:1，搅拌12分钟，加入0.09倍海带粉末重量的过硼酸钠，继续搅拌25分钟，离心，收集沉淀；
(4)边搅拌边将步骤(3)所得沉淀加入7倍重量的蒸馏水中，超声波振荡30分钟，得分散液；
(5)向步骤(4)中所得分散液中加入0.025倍海带粉末重量的溶菌酶，40℃水解4小时，升温至95℃，灭酶，得到提取液；
(6)步骤(5)所得提取液于-45℃冷冻，冷冻完全后，室温(25℃)条件下缓慢融化，2℃离心，取上清液，重复冷冻、融化和离心过程，直至无沉淀产生为止，所得上清液冷冻干燥，得到小分子褐藻糖胶。
其中，步骤(1)中，微波辐照烘干的条件为：300W微波间歇辐照处理，每次处理时间为8s，间隔30s后继续，累计处理时间为4分钟。
步骤(2)中，搅拌的工艺条件是：以600转/分钟的转速搅拌3小时。
步骤(2)中，利用高压微射流均质机高压均质，工艺条件是：压力110MPa，温度46℃，时间7分钟。
步骤(3)中，所述壳聚糖醋酸溶液的制备方法如下：将分子量35万，脱乙酰度≥90％的1.5g壳聚糖粉末加入到质量浓度1％的醋酸水溶液中，加热至40℃，搅拌至完全溶解即得。
步骤(3)中，离心的工艺条件为：转速6000转/分钟，离心时间6分钟。
步骤(4)中，离心的工艺条件为：转速9000转/分钟，离心时间6分钟。
步骤(6)中，离心的工艺条件为：转速18000转/分钟，离心时间3分钟。
步骤(6)中，冷冻干燥的工艺条件为：-12℃预冷冻为固态，然后转移至真空冷冻干燥机中，温度降至-45℃，抽真空至18Pa，接着温度升至25℃，继续在当前的真空度条件下处理12小时。
利用上述提取工艺得到的一种褐藻糖胶，平均分子量为3200Da。
对比例3
一种褐藻糖胶的提取工艺，具体步骤如下：
(1)海带洗净、微波辐照烘干、粉碎，得到海带粉末；
(2)将海带粉末加入12倍重量的蒸馏水中，搅拌，高压均质，得到海带破壁浆液；
(3)向海带破壁浆液中加入壳聚糖醋酸溶液，两者体积比为7:1，搅拌12分钟，加入0.09倍海带粉末重量的过硼酸钠，继续搅拌25分钟，离心，收集沉淀；
(4)边搅拌边将步骤(3)所得沉淀加入7倍重量的蒸馏水中，超声波振荡30分钟，得分散液；
(5)向步骤(4)中所得分散液中加入0.025倍海带粉末重量的溶菌酶，40℃水解4小时，接着加入0.015倍海带粉末重量的三氟乙酸，升温至95℃，密闭条件下水解25分钟并灭酶，真空回收三氟乙酸，得到提取液；
(6)冷冻干燥，得到小分子褐藻糖胶。
其中，步骤(1)中，微波辐照烘干的条件为：300W微波间歇辐照处理，每次处理时间为8s，间隔30s后继续，累计处理时间为4分钟。
步骤(2)中，搅拌的工艺条件是：以600转/分钟的转速搅拌3小时。
步骤(2)中，利用高压微射流均质机高压均质，工艺条件是：压力110MPa，温度46℃，时间7分钟。
步骤(3)中，所述壳聚糖醋酸溶液的制备方法如下：将分子量35万，脱乙酰度≥90％的1.5g壳聚糖粉末加入到质量浓度1％的醋酸水溶液中，加热至40℃，搅拌至完全溶解即得。
步骤(3)中，离心的工艺条件为：转速6000转/分钟，离心时间6分钟。
步骤(4)中，离心的工艺条件为：转速9000转/分钟，离心时间6分钟。
步骤(5)中，三氟乙酸的回收方法为50℃下真空回收。
步骤(6)中，冷冻干燥的工艺条件为：-12℃预冷冻为固态，然后转移至真空冷冻干燥机中，温度降至-45℃，抽真空至18Pa，接着温度升至25℃，继续在当前的真空度条件下处理12小时。
利用上述提取工艺得到的一种褐藻糖胶，平均分子量为220Da。
试验例
统计实施例1～5和对比例1～3的产品收率(以原料海带的重量计算)、纯度和休止角，结果见表1。
表1.提取效果比较
收率(％) 纯度(％) 休止角(°)
实施例1 1.82 99.92 27
实施例2 1.81 99.93 27
实施例3 1.85 99.95 27
实施例4 1.85 99.95 27
实施例5 1.90 99.98 27
对比例1 1.11 99.81 29
对比例2 1.45 99.82 29
对比例3 1.82 90.12 37
从表1可以看出，实施例1～5的提取工艺收率高，纯度高，休止角小，具有良好的流动性。对比例1略去了过硼酸钠，对比例2略去了三氟乙酸，产率明显降低，而且产品的分子量也较大；对比例3将最后的反复冻融步骤替换为冷冻干燥，纯度明显降低，且产品的休止角大，流动性欠佳。
实施例1～5和对比例1～3所得褐藻糖胶各取0.1g，将其加入100mL蒸馏水中，超声波振荡30分钟，以蒸馏水作为对照组，进行抗氧化性和保湿性(面部皮肤使用24小时水分含量检测)检测，结果见表2。
表2.抗氧化性和保湿性检测结果
从表2可知，实施例1～5和对比例1～3所得褐藻糖胶具有良好的抗氧化性和保湿性，具有抗氧化或保湿化妆品的应用前景，远远优于对比例1～3。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (10)

1.小分子褐藻糖胶的提取工艺，其特征在于，具体步骤如下：
(1)海带洗净、微波辐照烘干、粉碎，得到海带粉末；
(2)将海带粉末加入10～15倍重量的蒸馏水中，搅拌，高压均质，得到海带破壁浆液；
(3)向海带破壁浆液中加入壳聚糖醋酸溶液，两者体积比为6～8:1，搅拌10～15分钟，加入0.08～0.1倍海带粉末重量的过硼酸钠，继续搅拌20～30分钟，离心，收集沉淀；
(4)边搅拌边将步骤(3)所得沉淀加入6～8倍重量的蒸馏水中，超声波振荡30分钟，得分散液；
(5)向步骤(4)中所得分散液中加入0.02～0.03倍海带粉末重量的溶菌酶，35～45℃水解3～5小时，接着加入0.01～0.02倍海带粉末重量的三氟乙酸，升温至90～100℃，密闭条件下水解20～30分钟并灭酶，真空回收三氟乙酸，得到提取液；
(6)步骤(5)所得提取液于-40～-50℃冷冻，冷冻完全后，室温条件下缓慢融化，0～4℃离心，取上清液，重复冷冻、融化和离心过程，直至无沉淀产生为止，所得上清液冷冻干燥，得到小分子褐藻糖胶。
2.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(1)中，微波辐照烘干的条件为：300～450W微波间歇辐照处理，每次处理时间为5～10s，间隔30s后继续，累计处理时间为3～4分钟。
3.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(2)中，利用高压微射流均质机高压均质，工艺条件是：压力100～120MPa，温度45～48℃，时间5～8分钟。
4.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(3)中，所述壳聚糖醋酸溶液的制备方法如下：将分子量30～40万，脱乙酰度≥90％的1～2g壳聚糖粉末加入到质量浓度1％的醋酸水溶液中，加热至40℃，搅拌至完全溶解即得。
5.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(3)中，离心的工艺条件为：转速5000～7000转/分钟，离心时间5～7分钟。
6.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(5)中，三氟乙酸的回收方法为40～60℃下真空回收。
7.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(6)中，离心的工艺条件为：转速15000～20000转/分钟，离心时间2～3分钟。
8.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(6)中，冷冻干燥的工艺条件为：-10～-15℃预冷冻为固态，然后转移至真空冷冻干燥机中，温度降至-40～-50℃，抽真空至15～20Pa，接着温度升至20～30℃，继续在当前的真空度条件下处理10～15小时。
9.利用权利要求1～8中任一项所述提取工艺得到的小分子褐藻糖胶，其特征在于，其分子量约为200～300Da。
10.权利要求9所述小分子褐藻糖胶在化妆品中的应用。
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