CN108992471A - 富硒蛹虫草提取物的制备方法及其在制备抗高尿酸血症和/或抗氧化的药物或食品中的应用 - Google Patents
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本发明涉及一种提取物在药物领域中的应用,尤其涉及一种富硒蛹虫草提取物的提取方法及在制备抗高尿酸血症和/或抗氧化的药物或食品中的应用,包括:富硒蛹虫草菌丝体和/或子实体,加入6‑8倍水或20‑50%无水乙醇,回流提取1‑2小时,浓缩至0.25~0.4g/mL,喷雾干燥。本发明方法制备的富硒蛹虫草提取物具有显著的降尿酸、改善氧化应激效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种提取物在药物领域中的应用,尤其涉及一种富硒蛹虫草提取物在制备抗高尿酸血症和/或抗氧化药物或食品中的应用。
背景技术
随着人们的生活水平不断改善,饮食结构也随着改变,蛋白质与嘌呤类物质过多地摄入。基于此,研究发现,近年来高尿酸血症(Hyperuricemia,HUA)的发病率日益增高。HUA不仅仅是痛风的发病基础,作为独立诱发因素还被认为与糖尿病、高血压、代谢综合征、慢性肾病等的发生发展密切相关。
在人体内,尿酸(Uric Acid,UA)是嘌呤代谢的终产物。生理条件下,UA是一种重要的内源性抗氧化物质,可以在某种程度上清除机体产生的自由基。但是研究也发现,UA升高到一定水平,体内的抗氧化能力并未跟着提升,反而在病理状态下,高浓度的UA还会参与氧化应激反应。目前,通常采用化学药物进行高尿酸血症的治疗,例如别嘌呤醇,其作为一种黄嘌呤氧化酶抑制剂,目前是治疗高尿酸血症的主要药物。然而,其严重的肾脏损伤等不良反应大大地限制了其临床应用。因此,临床上急需一种具有降尿酸作用同时还能提高机体抗氧化作用,而又不对机体器官产生损伤反应的HUA治疗方案。
发明内容
针对以上不足,本发明提供一种富硒蛹虫草提取物在制备抗高尿酸血症和/或抗氧化药物或食品中的应用。
本发明通过以下方案达到上述目的:
硒是人体必需的微量元素,是人体多种酶的活性中心,具有一定的抗氧化功效。而富硒蛹虫草是通过生物发酵手段将纳米硒富集于蛹虫草菌丝体中的发酵产物。国内外至今未见关于富硒蛹虫草在防治高尿酸血症及改善患者抗氧化能力的相关报道。
在第一方面,提供一种富硒蛹虫草提取物的制备方法,包括:富硒蛹虫草菌丝体和/或子实体,加6-8倍水或20-50%无水乙醇,回流提取1-2小时,浓缩至0.25~0.4g/mL,喷雾干燥。
在一个优选的富硒蛹虫草提取物的制备方法实施例中,包括:富硒蛹虫草菌丝体和/或子实体干品,加6-8倍纯水或20-50%无水乙醇,回流提取1-2小时,旋转蒸发至浓缩至0.25~ 0.4g生药/mL,浓缩液喷雾干燥至干粉。
在第二方面,提供一种上述方法制备得到的富硒蛹虫草提取物。
优选的,所述富硒蛹虫草为富硒蛹虫草的菌丝体和/或子实体。
所述富硒蛹虫草提取物为富硒蛹虫草的水或乙醇提取所得的提取物。
在第三方面,提供一种上述富硒蛹虫草提取物在制备抗高尿酸血症、抗氧化中的应用。
优选的,所述高尿酸血症包括痛风。
优选的,所述氧化包括由血尿酸过高引起的氧化应激。
在第四方面,提供一种上述富硒蛹虫草提取物在抗高尿酸血症和/或抗氧化的药物或食品中的应用。
优选的,所述食品包括功能食品或保健食品。
在第五方面,提供一种抗高尿酸血症和/或抗氧化的药物,包括上述富硒蛹虫草提取物和药学上可接受的载体。
在第六方面,提供一种抗高尿酸血症和/或抗氧化的食品,包括上述富硒蛹虫草提取物。
优选的,所述食品包括功能食品或保健食品。
本发明所述的富硒蛹虫草不限于富集纳米硒的蛹虫草还包括其他富集无机硒、有机硒等的富硒蛹虫草。
本发明所述的富硒蛹虫草是富硒蛹虫草的菌丝体和/或子实体部位。
本发明提供了一种富硒蛹虫草提取物具有显著的防治高尿酸血症与抗氧化的新用途。
本发明证明了富硒蛹虫草提取物防治高尿酸血症、抗氧化等方面的效果,尤其采用灌胃次黄嘌呤联合腹腔注射氧嗪酸钾复制高尿酸血症小鼠模型为实验对象,研究了富硒蛹虫草提取物对高尿酸血症模型动物血清尿酸(UA)、肌酐(CREA)、尿素(UREA)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD)水平,血清与肝脏的超氧化物歧化酶(SOD)活性与还原性谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平的影响,提出富硒蛹虫草能够降低高尿酸血症患者的血清尿酸值,并能够改善由于血尿酸过高引起的机体氧化应激情况,降低血清与肝脏的MDA水平,提高血清与肝脏的SOD水平、GSH水平。
本发明方法制备的富硒蛹虫草提取物具有显著的降尿酸、改善氧化应激效果。
附图说明
图1为试验例2的富硒蛹虫草提取物对高尿酸血症小鼠体重的影响。
注:#与正常对照组相比差异显著,##与正常对照组相比差异极显著;*与模型对照组相比差异显著,**与模型对照组相比差异极显著。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
动物
SPF级KM小鼠50只,体质量17-19g,5-7周龄,动物合格证号:No.44007200048943。广东省医学实验动物中心提供,生产许可证编号:SCXK(粤)2013-0002。动物饲养于广东省微生物研究所动物中心SPF级动物房,动物使用许可证编号:SYXK(2016-156)。所用动物适应性检疫观察1周后开始实验。
受试物
实施例1的富硒蛹虫草提物;别嘌呤醇(allpurinol)日本TCI公司。
试剂
次黄嘌呤、氧嗪酸钾美国阿拉丁工业公司;尿酸(uric acid,UA)、肌酐(creatinine, CREA)、尿素(UREA)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)试剂盒深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司;总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、脂质氧化(malondialdehyde,MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)试剂盒上海碧云天生物技术有限公司;黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase,XOD)试剂盒南京建成生物工程研究所。
实施例1:补充富硒蛹虫草提取物的制备方法
富硒蛹虫草菌丝体和/或子实体干品,加6-8倍纯水或20-50%无水乙醇,回流提取1-2小时,旋转蒸发至浓缩至0.25~0.4g生药/mL,浓缩液喷雾干燥至干粉。
试验例1:富硒蛹虫草提取物对高尿酸血症小鼠血尿酸影响
50只KM小鼠适应性检疫观察7d后,按动物体质量区组随机分组,分别设置正常对照组、模型对照组、别嘌呤醇对照组(5mg/(kg·d))、实施例1的富硒蛹虫草提取物低剂量组(100 mg/(kg·d))、实施例1的富硒蛹虫草提取物高剂量组(200mg/(kg·d))。
造模前1小时动物禁食不禁水,除正常对照组,其余各组灌胃次黄嘌呤500mg/(kg·d) 和腹腔注射氧嗪酸钾300mg/(kg·d),连续7d。与此同时,正常对照组动物按10mL/(kg·d) 灌服等体积纯化水以及按10mL/(kg·d)腹腔注射等体积生理盐水。每天造模1小时后,各组动物灌胃给予相应的受试物:正常对照组与模型对照组动物按10mL/kg灌服等体积纯化水;别嘌呤醇组动物按5mg/kg剂量灌胃浓度为0.5mg/mL的别嘌呤醇;富硒蛹虫草提取物低剂量组按100mg/kg剂量灌胃浓度为10.0mg/mL的富硒蛹虫草;富硒蛹虫草提取物低剂量组按200 mg/kg剂量灌胃浓度为20.0mg/mL的富硒蛹虫草。
小鼠灌胃给药1h后,采用眼眶静脉丛采血方法采集小鼠静脉血。血液静置30min后4℃, 3500rpm,离心15min,分离血清备用。并剖开腹腔摘取约0.5g肝脏组织,加入9倍量生理盐水匀浆,然后4℃,4000rpm,离心20min,取上清备用。
根据试剂盒说明书检测血清UA水平。结果如表1所示。
表1富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠血清UA水平的影响
组别 | 血清UA/(μmol/L) |
正常对照组 | 94.46±30.83** |
模型对照组 | 616.27±252.66## |
别嘌呤醇组 | 365.78±105.87** |
富硒蛹虫草低剂量组 | 384.00±152.08** |
富硒蛹虫草高剂量组 | 363.32±158.71** |
注:#与正常对照组相比差异显著,##与正常对照组相比差异极显著;*与模型对照组相比差异显著,**与模型对照组相比差异极显著。
如表1所示,经次黄嘌呤灌胃结合氧嗪酸钾腹腔注射处理7天后,模型对照组动物与正常对照组动物相比血清UA显著升高,差异有统计学意义(p<0.01),显示模型成功;富硒蛹虫草提取物的高、低剂量组的血清UA与模型组的相比均显著降低(p<0.05)。说明,本发明实施例1制备的富硒蛹虫草提取物具有显著的降低尿素的效果,效果与别嘌呤醇效果相当。
试验例2:富硒蛹虫草提取物对高尿酸血症小鼠体重影响
采用试验例1的方法进行试验,对各组的小鼠体重进行称量,结果如图1所示。
如图1所示,与正常对照组比较,在1周的实验周期内模型对照组动物体重没有显著差异(p>0.05);与模型对照组比较,富硒蛹虫草低、高剂量组动物体重没有显著差异(p>0.05),但别嘌呤组动物从给药第二天开始体重开始逐渐下降,第四天开始体重显著低于正常对照组或者模型对照组的,差异有统计学意义(p<0.01)。
试验例3:富硒蛹虫草提取物对高尿酸血症小鼠的肝脏毒性和肾脏毒性影响
采用试验例1的方法进行试验,对各组进行小鼠血清的ALT、AST、CREA和UREA测定,结果如表2所示。
表2富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠血清ALT、AST、CREA和UREA水平的影响
注:#与正常对照组相比差异显著,##与正常对照组相比差异极显著;*与模型对照组相比差异显著,**与模型对照组相比差异极显著。
如表2所示,与正常对照组比较,别嘌呤醇组动物的ALT与AST均显著升高,差异有统计学意义(p<0.05);而富硒蛹虫草提取物的高、低剂量组动物的ALT与AST与正常对照组的比较均无统计学意义(p>0.05),说明别嘌呤醇对动物肝脏有一定的毒性作用,但富硒蛹虫草提取物未发现有肝脏毒性作用。
如表2所示,与正常对照组比较,别嘌呤醇组动物的CREA与UREA均显著升高,差异有统计学意义(p<0.01);而富硒蛹虫草提取物的高、低剂量组动物的CREA与UREA与正常对照组的比较均无统计学意义(p>0.05),说明,别嘌呤醇对动物肾脏有一定的毒性作用,但富硒蛹虫草提取物未发现有肾脏毒性作用。
试验例4:富硒蛹虫草提取物对高尿酸血症小鼠抗氧化的影响
采用试验例1的方法进行试验,对各组进行小鼠血清的GSH、SOD与MDA测定,结果如表3所示,对各组进行小鼠肝脏GSH、SOD与MDA测定,结果如表4所示。
表3富硒蛹虫草提取物对高尿酸血症小鼠血清GSH、SOD与MDA水平的影响
组别 | 血清GSH/(μmol//L) | 血清SOD/(Units) | 血清MDA/(μmol/L) |
正常对照组 | 17.43±3.68 | 0.59±0.09 | 10.50±1.79* |
模型对照组 | 17.48±0.76 | 0.48±0.15 | 12.73±2.56# |
别嘌呤醇组 | 17.32±2.12 | 0.19±0.11** | 13.81±2.87 |
富硒蛹虫草低剂量组 | 17.17±0.74 | 0.63±0.03* | 9.57±1.64** |
富硒蛹虫草高剂量组 | 16.31±1.40 | 0.64±0.05* | 10.22±1.26* |
注:#与正常对照组相比差异显著,##与正常对照组相比差异极显著;*与模型对照组相比差异显著,**与模型对照组相比差异极显著。
如表3所示,各组动物血清GSH含量两两间比较均无统计学意义(p>0.05);然而,模型对照组动物与正常对照组动物相比较,血清SOD活性有降低趋势,但差异没有统计学意义 (p>0.05);而血清MDA含量显著升高,差异有统计学意义(p<0.05)。该结果显示,本研究实验条件下建立的高尿酸血症小鼠有一定氧化过激。与模型对照组动物相比较,别嘌呤醇组动物的血清SOD活性显著降低,差异有统计学意义(p<0.01);血清MDA含量有一定的升高趋势,差异没有统计学意义(p>0.05),但是与正常对照组的比较,显著升高,差异有统计学意义(p<0.05)。结果表明,别嘌呤醇对高尿酸血症有治疗作用,但对机体抗氧化能力没有促进作用,反而会导致机体脂质过氧化损伤。然而,富硒蛹虫草提取物高、低剂量组动物与模型动物相比较,血清SOD活性均显著升高,血清MDA含量均显著降低,差异有统计学意义(p<0.05或p<0.01),且与正常对照组的比较均无显著差异(p>0.05)。这说明,本发明实施例的富硒蛹虫草提取物具有抗氧化应激效果。
表4富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠肝脏GSH、SOD与MDA水平的影响
注:#与正常对照组相比差异显著,##与正常对照组相比差异极显著;*与模型对照组相比差异显著,**与模型对照组相比差异极显著。
如表4所示,模型对照组动物与正常对照组动物比较,肝脏GSH含量没有显著的变化(p >0.05);但富硒蛹虫草高剂量组与模型对照组或者正常对照组相比较,肝脏GSH含量均显著升高,差异有统计学意义(p<0.05)。模型对照组的肝脏SOD活性与正常对照组的比较没有显著性差异(p>0.05);与模型对照组比较,别嘌呤醇组的肝脏SOD活性显著降低(p< 0.05),而富硒蛹虫草低剂量组的没有显著变化(p>0.05),高剂量组的显著升高,差异有统计学意义(p<0.05)。模型对照组的肝脏MDA含量与正常对照组的比较显著升高,差异有统计学意义(p<0.05);与模型对照组比较,别嘌呤醇组的肝脏MDA含量没有明显变化(p> 0.05),富硒蛹虫草低剂量组的肝脏MDA含量显著降低,差异有统计学意义(p<0.05)。结果表明,富硒蛹虫草降尿酸的同时还具有增强机体抗氧化能力。
综上所述,富硒蛹虫草能够有效地控制次黄嘌呤+氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠的血尿酸,并且能够显著的提升动物机体的抗氧化能力,减少脂质过氧化反应,增加清除氧自由基的能力。
以上所述,仅为本发明的较佳的具体实施例,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种富硒蛹虫草提取物的制备方法,其特征在于,包括:富硒蛹虫草菌丝体和/或子实体,加入6-8倍水或20-50%无水乙醇,回流提取1-2小时,浓缩至0.25~0.4g/mL,喷雾干燥。
2.一种权利要求1所述的方法制备得到的富硒蛹虫草提取物。
3.一种权利要求2所述的富硒蛹虫草提取物在抗高尿酸血症和/或抗氧化的药物或食品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述高尿酸血症包括痛风。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述氧化包括由血尿酸过高引起的氧化应激。
6.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述食品包括功能食品或保健食品。
7.一种抗高尿酸血症和/或抗氧化的药物,其特征在于,包括权利要求2所述的富硒蛹虫草提取物和药学上可接受的载体。
8.一种抗高尿酸血症和/或抗氧化的食品,其特征在于,包括权利要求2所述的富硒蛹虫草提取物。
9.根据权利要求1的方法,其特征在于,所述富硒蛹虫草包括富集纳米硒的蛹虫草、富集无机硒、有机硒的富硒蛹虫草。
10.根据权利要求1的方法,其特征在于,所述富硒蛹虫草包括富硒蛹虫草的全菌体、菌丝体或者子实体部位。
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