CN108949583A - 一株棘孢木霉菌株三炬-19及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株棘孢木霉(Trichoderma asperellum)菌株三炬‑19，其已于2018年6月14日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为：CGMCC)，保藏号为CGMCC No.15870，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株对疮痂病链霉菌、酸疮痂链霉菌、微白黄链霉菌能抑制其生长，对马铃薯疮痂病起到有效的防治和治疗作用。

Description

一株棘孢木霉菌株三炬-19及其应用
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及棘孢木霉用于防治马铃薯疮痂病菌剂中的应用。
背景技术
马铃薯疮痂病，是一种危害马铃署块茎植物病害。表现为块茎表面出现近圆形至不定形木栓化疮痂状淡褐色病斑或斑块，手摸质感粗糙。一般分为两种发病症状，分别是网纹状病斑和裂口状病斑。通常病斑虽然仅限于皮层，但被害薯块质量和产量仍可降低，不耐贮藏，且病薯外观不雅，商品品级大为下降，招致一定的经济损失。以前在我国境内由于发病率不高，为害面积不大，所以没有引起人们的重视。但近些年来，在内蒙、河北、山东等地区的发病面积越来越大，引起的经济损失也非常可观。因此，迫切需要对这种病害进行科学防治。
根据人们长期对病原微生物的分离鉴定研究，已经确定引起马铃薯疮痂病的病原菌主要为疮痂链霉菌等。并且这些致病菌属于条件致病菌，即在土壤环境偏碱性条件下容易生长和引起马铃薯病害，而在偏酸性土壤环境中则很少出现。
防治方法主要有以下几种：(1)、选用无病种薯；(2)、多施有机肥或绿肥，可部分抑制发病；(3)、与葫芦科、豆科、百合科蔬菜进行5年以上轮作；(4)选择保水好的菜地种植，结薯期遇干旱应及时浇水；(5)、化学预防：一些化学农药可以用来防治疮痂病；(6)生物防治法：筛选对疮痂病病原菌有良好抑制效果且定植能力强的微生物，在生产种薯过程中及农田种植过程中施用，达到抑制病原菌生长的效果。
发明内容
为了有效防治马铃薯疮痂病，本发明第一目的提供了一株棘孢木霉(Trichodermaasperellum)菌株三炬-19，其已于2018年6月14日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为：CGMCC)，保藏号为：CGMCC No.15870，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明的第二目的是提供一种微生物菌剂，其活性成分为棘孢木霉菌株三炬-19。
本发明的第三目的是提供一种制备微生物菌剂的方法，
本发明的第四目的是提供菌株三炬-19和其菌剂的应用，对疮痂病链霉菌(Streptomyces scabiei)、酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)、微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)能抑制其生长，对马铃薯疮痂病起到有效的防治和治疗作用。
附图说明：
图1菌株三炬-19对疮痂病链霉菌4.0076的抑菌效果图。
图2菌株三炬-19对疮痂病链霉菌4.1765的抑菌效果图。
图3菌株三炬-19对酸疮痂链霉菌4.1789的抑菌效果图。
图4菌株三炬-19对微白黄链霉菌4.3598的抑菌效果图。
图5菌株三炬-19对疮痂病链霉菌4.0076、酸疮痂链霉菌4.1789、微白黄链霉菌4.3598三种混合菌株的抑菌效果图。
图6菌株三炬-19和疮痂病链霉菌4.0076、酸疮痂链霉菌4.1789、微白黄链霉菌4.3598三种混合菌株共培养过程中的抑菌效果图。
图7菌株三炬-19生长示意图。
具体实施方式：
1、菌株的获得、分离、鉴定
菌种从福建香蕉病土采集土样，分离鉴定而得。
菌落形态：在麦芽汁培养基中生长快，25℃黑暗条件下培养5天，菌落直径60-65mm，白色，后期因产孢呈浅灰绿色，絮状；背面浅褐色，无水溶性色素。分生孢子大量产生，产孢区分布均匀。分生孢子梗高大，壁光滑或略粗糙，通常在相对位置产生分枝，宽2.5-5.0um；产孢瓶梗少，数个簇生于孢梗或其分枝上，烧瓶形颈部弯曲，5.0-16.7*2.5-3.5um；分生孢子宽椭圆形或近球形，壁平滑或稍粗糙，2.1-4.5um；厚垣孢子多见。
分子鉴定方法：ITS1/5.8SrRNA、ITS2的全序列及28S区序列片段分析，鉴定为棘孢木霉(Trichoderma asperellum)。
2、真菌培养方法：
棘孢木霉菌株三炬-19在马铃薯固体培养基上活化3次。然后取1环于马铃薯固体平板培养基，28℃，摇床培养5天。
3、菌种用途和效果：
(1)疮痂病拮抗菌筛选材料与方法：
试验病原为疮痂病链霉菌(Streptomyces scabiei)4.0076和4.1765、酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)4.1789、微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)4.3598四种。
土豆汁培养基(g/L)：马铃薯浸取液1L，葡萄糖20g，KH2PO4 3g，MgSO4.7H2O 1.5g，维生素B1微量，PH6.0，固体培养基加入15g琼脂。
病原菌培养方法：四种病原菌分别在马铃薯培养基上培养4－5天，28℃；用0.2ml无菌水刮取孢子和菌丝体，制成一定浓度的病原体悬液；要求100ul体积涂布平板时菌丝生长后可以铺满平板表面。
(2)抑菌试验方法：
100ul四种病原菌分别涂布于不同平板上(PDA)，在平板局部点接木霉孢子。28℃培养。3天以后观察。通过对疮痂病链霉菌(Streptomyces scabiei)4.0076和4.1765、酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)4.1789、微白黄链霉菌(Streptomycesalbidoflavus)4.3598四种试验，发现真菌在生长过程中能有效抑制这些病原微生物生长。结果：真菌对4种病原菌都有效果(图1，图2，图3，图4)
抑制混合菌生长试验：疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)4.0076、4.1765、酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)4.1789、微白黄链霉菌(Streptomycesalbidoflavus)4.3598各100ul涂布于同一PDA平板上，在平板局部点接10ul棘孢木霉。28℃培养。2天以后观察。(图5)结果：棘孢木霉对混合病原菌具有抑制效果。
共培养抑菌试验方法：疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)4.0076、4.1765、酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)4.1789、微白黄链霉菌(Streptomycesalbidoflavus)4.3598各100ul和10ul棘孢木霉混合涂布于PDA平板，28℃培养。2天以后观察。结果：棘孢木霉和四种病原菌在共生过程中，能够优先生长，其它四种菌生长受到明显抑制(图6)。
4、微生物菌剂的制备方法：
1)马铃薯液体培养基(g/L)制备：马铃薯浸取液1L，葡萄糖20g；固体培养基加入15g琼脂；
2)棘孢木霉菌株三炬-19在马铃薯固体培养基上活化3次；
3)取1环于50ml马铃薯液体培养基，28℃，摇床培养2天；
4)发酵液经12,000r/min离心1min钟后，弃上清，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，制备细胞悬液。
序列表
<110> 福建三炬生物科技股份有限公司
<120> 一株棘孢木霉菌株三炬-19及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 600
<212> DNA
<213> 棘孢木霉(Trichoderma asperellum)
<400> 1
ccttcggggt ggctcctaaa ggttacctca ccgacttcgg gtgttacaaa ctctcgtggt 60
gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcggcatgct gatccgcgat 120
tactagcgat tccagcttca cgcagtcgag ttgcagactg cgatccgaac tgagaacaga 180
tttgtgggat tggcttaacc tcgcggtttc gctgcccttt gttctgtcca ttgtagcacg 240
tgtgtagccc aggtcataag gggcatgatg atttgacgtc atccccacct tcctccggtt 300
tgtcaccggc agtcacctta gagtgcccaa ctgaatgctg gcaactaaga tcaagggttg 360
cgctcgttgc gggacttaac ccaacatctc acgacacgag ctgacgacaa ccatgcacca 420
cctgtcactc tgcccccgaa ggggacgtcc tatctctagg attgtcagag gatgtcaaga 480
cctggtaagg ttcttcgcgt tgcttcgaat taaaccacat gctccaccgc ttgtgcgggc 540
ccccgtcaat tcctttgagt ttcagtcttg cgaccgtact ccccaggcgg agtgcttaat 600

Claims (8)

1.一株棘孢木霉（Trichoderma asperellum）菌株三炬-19，其保藏编号为CGMCC No.15870。
2.一种微生物菌剂，其特征在于，其活性成分为棘孢木霉菌株三炬-19。
3.一种制备微生物菌剂的方法，其特征在于：
1）棘孢木霉菌株三炬-19在马铃薯固体培养基上活化3次；
2）取1环于50ml马铃薯液体培养基，28℃，摇床培养2天；
3）发酵液经12,000r/min离心1min钟后，分别收集上清和沉淀，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，制备细胞悬液。
4.一种微生物菌剂在防治马铃薯疮痂病药物中的应用。
5.一种棘孢木霉菌株三炬-19在防治马铃薯疮痂病药物中应用。
6.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述的马铃薯疮痂病是由疮痂病链霉菌引起。
7.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述的马铃薯疮痂病是由酸疮痂链霉菌引起。
8.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述的马铃薯疮痂病是微白黄链霉菌引起。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN111727963A (zh) * 2019-03-20 2020-10-02 宁夏大学 一种防控疮痂病的载体菌剂复合物及其制备方法
CN113604364A (zh) * 2021-09-01 2021-11-05 贵州省茶叶研究所 一种棘孢木霉菌株及其应用

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