CN108925983A

CN108925983A - 一种微生物酵素的制备方法

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Publication number: CN108925983A
Application number: CN201810781956.8A
Authority: CN
Inventors: 包选平; 王清泓
Original assignee: Dajing Biotechnology (dalian) Co Ltd
Current assignee: Dajing Biotechnology (dalian) Co Ltd
Priority date: 2018-07-17
Filing date: 2018-07-17
Publication date: 2018-12-04

Abstract

本发明提供一种微生物酵素的制备方法，所述微生物酵素的制备方法包括以下步骤：配制枯草芽孢杆菌液体培养基、乳酸菌液体培养基和酵母菌液体培养基；将液体培养基灭菌；接入枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌后培养待用；将原料食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾和水置于容器中并灭菌；接入枯草芽孢杆菌液体培养基并培养；接入培养的酵母菌、乳酸菌并培养；将发酵好的微生物酵素用脱脂棉网过滤，再用抽滤漏斗抽滤，进一步去除滤渣得到微生物酵素；将到微生物酵素置于容器中，密封后灭菌121℃，20～40min，置于4℃下保存。本发明微生物酵素的制备方法步骤简单、易行，产率高、受环境影响小，可以规模化生产。

Description

一种微生物酵素的制备方法

技术领域

本发明涉及发酵技术，尤其涉及一种微生物酵素的制备方法。

背景技术

食用菌是一种重要的生物资源，其种源十分丰富。我国是世界上食用菌资源最为丰富的国家，研究表明食用菌含有多种人体所需的营养成分，具有提高人体免疫力、抗肿瘤、增强肝功能、抗氧化等多种功效。使用食用菌液体发酵可以在短时间内获得大量菌丝体及其发酵产物，由于这一过程周期短、产量高、成本较低，因此在食用菌生产中具有广阔的应用前景。

香菇素有山珍之王之称，是高蛋白、低脂肪的营养保健食品。干香菇食用部分占72％，每100g食用部分中含水13g、脂肪1.8g、碳水化合物54g、粗纤维7.8g、灰分4.9g、钙124mg、磷415mg、铁25.3mg、维生素B1 0.07mg、维生素B2 1.13mg、尼克酸18.9mg。香菇多糖能提高辅助性T细胞的活力而增强人体体液免疫功能。大量实践证明，香菇防治癌症的范围广泛，已用于临床治疗。香菇还含有多种维生素、矿物质，对促进人体新陈代谢，提高机体适应力有很大作用。香菇还对糖尿病、肺结核、传染性肝炎、神经炎等起治疗作用，又可用于消化不良、便秘、减肥等。中国不少古籍中记载香菇“益气不饥，治风破血和益胃助食”。民间用来助痘疮、麻疹的诱发，治头痛、头晕。现代研究证明，香菇多糖可调节人体内有免疫功能的T细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力。香菇对癌细胞有强烈的抑制作用，对小白鼠肉瘤180的抑制率为97.5％，对艾氏癌的抑制率为80％。香菇还含有双链核糖核酸，能诱导产生干扰素，具有抗病毒能力。中华传统医学《神农本草经》中就有服饵菌类可以“增智慧”、“益智开心”的记载。现代医学认为，香菇的增智作用在于含有丰富的精氨酸和赖氨酸，常吃可健体益智。

目前食用菌发酵液(微生物酵素)制备方法存在产率低，受环境影响大，难以规模化生产及不同批次间活性成分组成及含量有较大差异等缺点。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于，针对目前微生物酵素产率低，受环境影响大，难以规模化生产的问题，提出一种微生物酵素的制备方法，该方法步骤简单、易行，产率高、受环境影响小，可以规模化生产。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种微生物酵素的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、配制枯草芽孢杆菌液体培养基、乳酸菌液体培养基和酵母菌液体培养基；

步骤2、将分别承装有枯草芽孢杆菌液体培养基、乳酸菌液体培养基和酵母菌液体培养基的容器封口，在高压灭菌锅中121℃灭菌20～40min，待灭菌锅降温到65～80℃时取出放入烘箱中55～65℃烘干；

步骤3、将紫外超净台灭菌20～40min后，分别用接种环接入枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌；

步骤4、接菌后将枯草芽孢杆菌液体培养基、乳酸菌液体培养基置于37℃摇床，180r/min分别培养24～48h后取出；将酵母菌液体培养基置于30℃摇床，180r/min培养48h后取出，低温保存待用；

步骤5、将原料食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾和水置于容器中，所述食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾的质量比为3～4：1～2:0.2～0.3，所述食用菌粉与水的用量比(g/ml)为3～4:100～120；

步骤6、将步骤5所述容器放入高压灭菌121℃灭菌20～40min，待灭菌锅降温到65～80℃时取出放入烘箱中55～65℃烘干；

步骤7、将紫外超净台灭菌20～40min后，接入枯草芽孢杆菌液体培养基，所述食用菌粉与枯草芽孢杆菌液体培养基的用量比(g/ml)为3.5～3.7:1.5～2.5；

步骤8、接菌后将发酵液密封并放入37℃摇床中，在160r/min条件下摇5～7d；

步骤9、将紫外超净台灭菌30min，接入培养的乳酸菌液体培养基和酵母菌液体培养基，所述食用菌粉与酵母菌的用量比(g/ml)为3.5～3.7:1.5～2.5；所述食用菌粉与乳酸菌的用量比(g/ml)为3.5～3.7:1.5～2.5，将容器密封并放置37℃摇床中，在160r/min条件下摇6～7d后取出发酵好的微生物酵素；

步骤10、将发酵好的微生物酵素过滤得到微生物酵素，所述过滤为用离心机过滤或用脱脂棉网过滤，再用抽滤漏斗抽滤，进一步去除滤渣；将到微生物酵素置于容器中，密封后灭菌121℃，20～40min，置于4℃下保存。

进一步地，所述食用菌为香菇、杏鲍菇、金针菇、猴头、云芝、鸡腿菇、双孢蘑菇、茶树菇、樟芝、木耳、虫草菌、高大环柄菇、长根菇、草菇、平菇、凤尾菇、花菇、鲍鱼菇、红平菇、小平菇和松茸中的一种或多种。

进一步地，所述香菇为金良香菇。

进一步地，所述微生物酵素的制备方法，包括以下步骤：

步骤2、将分别承装有枯草芽孢杆菌液体培养基、乳酸菌液体培养基和酵母菌液体培养基的容器封口，在高压灭菌锅中121℃灭菌30min，待灭菌锅降温到70℃时取出放入烘箱中60℃烘干；

步骤3、将紫外超净台灭菌30min后，分别用接种环接入枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌；

步骤4、接菌后将枯草芽孢杆菌液体培养基、乳酸菌液体培养基置于37℃摇床，180r/min分别培养24～48h后取出，将酵母菌液体培养基置于30℃摇床，180r/min培养48h后取出，低温保存待用；

步骤5、将原料食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾和水置于容器中，所述食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾的质量比为3.6：1.188:0.2376，所述食用菌粉与水的用量比(g/ml)为3.6:110。

步骤6、将步骤5所述容器放入高压灭菌121℃灭菌30min，待灭菌锅降温到70℃时取出放入烘箱中60℃烘干；

步骤7、将紫外超净台灭菌30min后，接入枯草芽孢杆菌液体培养基，所述食用菌粉与枯草芽孢杆菌液体培养基的用量比(g/ml)为3.6:2；

步骤8、接菌后将发酵液密封并放入37℃摇床中，在160r/min条件下摇6d；

步骤9、将紫外超净台灭菌30min，接入培养的乳酸菌液体培养基和酵母菌液体培养基，所述食用菌粉与酵母菌的用量比(g/ml)为3.6:2；所述食用菌粉与乳酸菌的用量比(g/ml)为3.6:2，将容器密封在放置37℃摇床中，在160r/min条件下摇6～7d后取出发酵好的微生物酵素；

步骤10、将发酵好的微生物酵素过滤得到微生物酵素，所述过滤为用离心机过滤或用脱脂棉网过滤，再用抽滤漏斗抽滤，进一步去除滤渣；将到微生物酵素置于容器中，密封后灭菌121℃，30min，置于4℃下保存。

进一步地，所述枯草芽孢杆菌液体培养基包括重量百分比如下的各组分：酵母粉0.2～4％，牛肉膏0.2～4％，蛋白胨0.9～1.1％，NaC10～11％，葡萄糖0.8～1.1％，其余为去离子水。

进一步地，所述枯草芽孢杆菌液体培养基包括重量百分比如下的各组分：酵母粉0.3％，牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，NaCl 0.5％，葡萄糖1％，其余为去离子水。

进一步地，所述乳酸菌为MRS培养基。

进一步地，所述酵母菌为YPD液体培养基。

进一步地，步骤5所述原料为食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾和水，所述食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾的质量比为3.6：1.188:0.2376，所述食用菌粉与水的用量比(g/ml)为3.6:110。

本发明的另一个目的还公开了一种微生物酵素，采用上述方法制备而成。

本发明一种微生物酵素配方科学、合理，其制备方法简单、易行，与现有技术相比较具有以下优点：

1)本发明微生物酵素制备方法简单、易行，产率高、受环境影响小，可以规模化生产。

2)采用乙酸乙酯和正丁醇萃取香菇(lentinus edodes)发酵液中的活性物质，进行抗菌试验。采用滤纸片法测定萃取物对大肠杆菌、烟草青枯菌、白色念球菌的抗菌活性，结果发现香菇发酵液乙酸乙酯相和正丁醇相对大肠杆菌、烟草青枯菌和白色念球菌的生长都有较好的抑制作用，乙酸乙酯萃取相(0.1g/mL)对这三种菌的平均抑菌圈分别为15.52mm、16.75mm和16.38mm：正丁醇相(0.2g/mL)对这三种菌的平均抑菌圈分别为16.72mm、19.01mm和17.89mm。

3)对微生物酵素进行了急性毒性实验、蓄积毒性和致突变实验、亚慢性毒性实验等三阶段毒理学实验，结果表明，菌丝体和上清液均无毒性，长期食用是安全可靠地。香菇发酵液所具有的多种营养、保健成分和安全可靠的毒理学评价，为研制香菇发酵液下游产品提供了可靠依据。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明进一步说明：

实施例1

本实施例公开了一种香菇发酵液的制备方法，包括以下步骤：

1、配枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌的液体培养基。

注：枯草芽孢杆菌液体培养基：酵母粉0.3％，牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，NaCl0.5％，葡萄糖1％，去离子水50ml。

乳酸菌：MRS培养基。

酵母菌：YPD液体培养基。

2、配置完成后封口，在高压灭菌锅中121℃灭菌30min，待灭菌锅降温到70℃左右时取出放入烘箱中60℃烘干。

3、紫外超净台灭菌30min后，分别用接种环接入枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌。

4、接菌后将枯草芽孢杆菌、乳酸菌液体培养基置于37℃摇床，180r/min分别培养24、48h后取出，酵母菌液体培养基置于30℃摇床，180r/min培养48h后取出，不用时低温保存。

5、原料各称取8份置于250ml锥形瓶中：3.6g香菇粉，1.188g无水葡萄糖、0.2376g磷酸二氢钾，再加入110ml去离子水。

6、将步骤5的锥形瓶放入高压灭菌锅121℃灭菌30min。待灭菌锅降温到70℃左右时取出放入烘箱中60℃烘干。

7、紫外超净台灭菌30min后，接入培养枯草芽孢杆菌的液体培养基，每个锥形瓶各2ml。

8、接菌后将发酵液密封好放入37℃摇床中，在160r/min条件下摇6d。

9、6d后，在紫外超净台灭菌30min后，接入提前培养好的乳酸菌液体培养基和酵母菌液体培养基，分别加入2ml，后密封在放置37℃摇床中，在160r/min条件下摇6～7d后取出发酵好的发酵液。

10、将发酵好的发酵液用脱脂棉网过滤，再用抽滤漏斗抽滤，进一步去除滤渣。

11、取粗滤过的液体，放入蓝盖瓶，密封好后灭菌121℃，30min，置于4℃下保存。

本发明香菇发酵液中含有18种氨基酸，测试表明，菌丝体的氨基酸含量为9800mg/100g，上清液的氨基酸含量为460mg/100ml。

本实施例还对香菇发酵液进行了急性毒性实验、蓄积毒性和致突变实验、亚慢性毒性实验等三阶段毒理学实验，结果表明，菌丝体和上清液均无毒性，长期食用是安全可靠地。香菇发酵液所具有的多种营养、保健成分和安全可靠的毒理学评价，为研制香菇发酵液下游产品提供了可靠依据。

实施例2

本实施例公开了一种杏鲍菇发酵液的制备方法，包括以下步骤：

1、配枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌的液体培养基。

乳酸菌：MRS培养基。

酵母菌：YPD液体培养基。

2、配置完成后封口，在高压灭菌锅中121℃灭菌40min，待灭菌锅降温到70℃左右时取出放入烘箱中60℃烘干。

5、原料各称取8份置于250ml锥形瓶中：3.7g杏鲍菇粉，1.2g无水葡萄糖、0.22g磷酸二氢钾，再加入110ml去离子水。

6、将步骤5的锥形瓶放入高压灭菌锅121℃灭菌40min。待灭菌锅降温到70℃左右时取出放入烘箱中60℃烘干。

7、紫外超净台灭菌40min后，接入培养枯草芽孢杆菌的液体培养基，每个锥形瓶各2ml。

9、6d后，在紫外超净台灭菌40min后，接入提前培养好的乳酸菌液体培养基和酵母菌液体培养基，分别加入2ml，后密封在放置37℃摇床中，在160r/min条件下摇6～7d后取出发酵好的发酵液。

11、取粗滤过的液体，放入蓝盖瓶，密封好后灭菌121℃，40min，置于4℃下保存。

本实施例还对杏鲍菇发酵液进行了急性毒性实验、蓄积毒性和致突变实验、亚慢性毒性实验等三阶段毒理学实验，结果表明，菌丝体和上清液均无毒性，长期食用是安全可靠地。杏鲍菇发酵液所具有的多种营养、保健成分和安全可靠的毒理学评价，为研制杏鲍菇发酵液下游产品提供了可靠依据。

实施例3

本实施例公开了一种平菇发酵液的制备方法，包括以下步骤：

1、配枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌的液体培养基。

乳酸菌：MRS培养基。

酵母菌：YPD液体培养基。

2、配置完成后封口，在高压灭菌锅中121℃灭菌35min，待灭菌锅降温到70℃左右时取出放入烘箱中60℃烘干。

5、原料各称取8份置于250ml锥形瓶中：3.5g平菇粉，1.5g无水葡萄糖、0.3g磷酸二氢钾，再加入110ml去离子水。

6、将步骤5的锥形瓶放入高压灭菌锅121℃灭菌35min。待灭菌锅降温到70℃左右时取出放入烘箱中60℃烘干。

7、紫外超净台灭菌35min后，接入培养枯草芽孢杆菌的液体培养基，每个锥形瓶各2ml。

9、6d后，在紫外超净台灭菌35min后，接入提前培养好的乳酸菌液体培养基和酵母菌液体培养基，分别加入2ml，后密封在放置37℃摇床中，在160r/min条件下摇6～7d后取出发酵好的发酵液。

10、将发酵好的发酵液用用离心机过滤，进一步去除滤渣。

11、取粗滤过的液体，放入蓝盖瓶，密封好后灭菌121℃，35min，置于4℃下保存。

本实施例还对平菇发酵液进行了急性毒性实验、蓄积毒性和致突变实验、亚慢性毒性实验等三阶段毒理学实验，结果表明，菌丝体和上清液均无毒性，长期食用是安全可靠地。平菇发酵液所具有的多种营养、保健成分和安全可靠的毒理学评价，为研制平菇发酵液下游产品提供了可靠依据。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims

1.一种微生物酵素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤5、将原料食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾和水置于容器中，所述食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾的质量比为3～4：1～2:0.2～0.3，所述食用菌粉与水的用量比为3～4:100～120；

步骤7、将紫外超净台灭菌20～40min后，接入枯草芽孢杆菌液体培养基，所述食用菌粉与枯草芽孢杆菌液体培养基的用量比为3.5～3.7:1.5～2.5；

步骤9、将紫外超净台灭菌30min，接入培养的乳酸菌液体培养基和酵母菌液体培养基，所述食用菌粉与酵母菌的用量比为3.5～3.7:1.5～2.5；所述食用菌粉与乳酸菌的用量比为3.5～3.7:1.5～2.5，将容器密封并放置37℃摇床中，在160r/min条件下摇6～7d后取出发酵好的微生物酵素；

步骤10、将发酵好的微生物酵素用脱脂棉网过滤，再用抽滤漏斗抽滤，进一步去除滤渣得到微生物酵素；将到微生物酵素置于容器中，密封后灭菌121℃，20～40min，置于4℃下保存。

2.根据权利要求1所述微生物酵素的制备方法，其特征在于，所述食用菌为香菇、杏鲍菇、金针菇、猴头、云芝、鸡腿菇、双孢蘑菇、茶树菇、樟芝、木耳、虫草菌、高大环柄菇、长根菇、草菇、平菇、凤尾菇、花菇、鲍鱼菇、红平菇、小平菇和松茸中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述微生物酵素的制备方法，其特征在于，所述香菇为金良香菇。

4.根据权利要求1所述微生物酵素的制备方法，其特征在于，所述微生物酵素的制备方法，包括以下步骤：

步骤5、将原料食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾和水置于容器中，所述食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾的质量比为3.6：1.188:0.2376，所述食用菌粉与水的用量比为3.6:110。

步骤7、将紫外超净台灭菌30min后，接入枯草芽孢杆菌液体培养基，所述食用菌粉与枯草芽孢杆菌液体培养基的用量比为3.6:2；

步骤9、将紫外超净台灭菌30min，接入培养的乳酸菌液体培养基和酵母菌液体培养基，所述食用菌粉与酵母菌的用量比为3.6:2；所述食用菌粉与乳酸菌的用量比为3.6:2，将容器密封在放置37℃摇床中，在160r/min条件下摇6～7d后取出发酵好的微生物酵素；

步骤10、将发酵好的微生物酵素用脱脂棉网过滤，再用抽滤漏斗抽滤，进一步去除滤渣得到微生物酵素；将到微生物酵素置于容器中，密封后灭菌121℃，30min，置于4℃下保存。

5.根据权利要求1所述微生物酵素的制备方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌液体培养基包括重量百分比如下的各组分：酵母粉0.2～4％，牛肉膏0.2～4％，蛋白胨0.9～1.1％，NaC10～11％，葡萄糖0.8～1.1％，其余为去离子水。

6.根据权利要求1所述微生物酵素的制备方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌液体培养基包括重量百分比如下的各组分：酵母粉0.3％，牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，NaCl 0.5％，葡萄糖1％，其余为去离子水。

7.根据权利要求1所述微生物酵素的制备方法，其特征在于，所述乳酸菌为MRS培养基。

8.根据权利要求1所述微生物酵素的制备方法，其特征在于，所述酵母菌为YPD液体培养基。

9.根据权利要求1所述微生物酵素的制备方法，其特征在于，步骤5所述原料为食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾和水，所述食用菌粉、无水葡萄糖、磷酸二氢钾的质量比为3.6：1.188:0.2376，所述食用菌粉与水的用量比为3.6:110。

10.一种微生物酵素，其特征在于，采用权利要求1～9任意一项所述方法制备而成。