CN108912142A

CN108912142A - 吡咯并苯并恶嗪酮类化合物及其注射剂和在抗血栓中的用途

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Publication number: CN108912142A
Application number: CN201810898705.8A
Authority: CN
Inventors: 吕烨
Original assignee: Individual
Current assignee: Yanbian University
Priority date: 2018-08-08
Filing date: 2018-08-08
Publication date: 2018-11-30
Anticipated expiration: 2038-08-08
Also published as: CN108912142B

Abstract

本发明公开了如化合物1所示的吡咯并苯并恶嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐，。通过对所述化合物的体外血小板聚集实验、对小鼠尾出血时间的影响及对大鼠右颈动‑静脉旁路血栓形成实验，发现本发明所述化合物可以通过胶原、腺苷二磷酸及凝血酶途径抑制血小板聚集，抑制血栓形成。

Description

吡咯并苯并恶嗪酮类化合物及其注射剂和在抗血栓中的用途

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及吡咯并苯并恶嗪酮类化合物及其注射剂和在抗血栓中的用途。

背景技术

心脑血管疾病是心脏血管和脑血管疾病的统称，泛指由于高脂血症、血液黏稠、动脉粥样硬化、高血压等所导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病。心脑血管疾病是一种严重威胁人类，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，具有高患病率、高致残率和高死亡率的特点，即使应用目前最先进、完善的治疗手段，仍可有50%以上的脑血管意外幸存者生活不能完全自理，全世界每年死于心脑血管疾病的人数高达1500万人，居各种死因首位。

血栓是导致心脑血管疾病的最大诱因。健康人的血液是溶胶状态（呈液体状态），在心脏搏动的作用下，血液可以在整个循环***中流动不息。一旦血管内形成了血栓，血液循环自然会受阻，被栓塞的组织或器官就会因为缺血、缺氧而发生功能和器质性病变。冠状动脉有血栓形成时，可能出现心肌梗死；颈内动脉形成血栓，则可能发生中风；股动脉有血栓形成，可能会导致四肢坏死；深部静脉血栓脱落可能会导致肺栓塞；广泛的小血管栓塞会导致多个脏器功能衰竭。

目前临床上抗血栓药可分为抗凝血药、抗血小板聚集药和溶血栓药三大类：（1）抗凝血药(anticoagulants）有维生素K拮抗剂（华法林）；肝素；直接凝血酶抑制剂（达比加群酯）；凝血因子X抑制剂（阿哌沙班、利伐沙班）。（2）抗血小板聚集代表药有环氧酶抑制剂阿司匹林；二磷酸腺苷P2Y12受体阻断剂氯吡格雷；磷酸二酯酶抑制剂双嘧达莫；整合素受体阻断剂替罗非班。（3）溶血栓有尿激酶、链激酶、阿替普酶、瑞替普酶等，它们通过纤溶酶的作用促进纤维蛋白溶解而溶解血栓。

随着社会人口老龄化的加剧，血栓性疾病的发生率日渐增高，患病人数越来越多。由于传统的抗凝药物多需要注射或者监测，其实际应用中遭到了不同程度的限制。因此，寻找新的抗血栓药物，尤其是针对血小板聚集的药物具有重要意义，而关于本发明提到的吡咯并苯并恶嗪酮类化合物在抗血栓方面的研究至今还没有报道。

发明内容

本发明提供了一种吡咯并苯并恶嗪酮类化合物，其化学结构式为：

；

。

所述化合物1、化合物2及化合物3的结构数据及其合成方法参见实施例部分。

本发明还提供了所述化合物的体外对血小板聚集的影响实验、对小鼠尾出血时间的影响及对大鼠右颈动-静脉旁路血栓形成实验。

本发明所述吡咯并苯并恶嗪酮类化合物注射剂处方的组成为：所述吡咯并苯并恶嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐1-20份，增溶剂40-500份，等渗调节剂1-100份，注射用溶剂0-200份。其中起增溶剂作用的辅料为吐温80、吐温40、聚氧乙烯蓖麻油、脱氧胆酸钠中的一种或几种。其中起等渗调节剂作用的辅料为氯化钠、葡萄糖、甘露醇、乳糖、木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、甘油中的一种或几种。其中注射用溶剂为水、乙醇、甘油、聚乙二醇300、聚乙二醇400中的一种或几种。还可选择其他具有增溶作用的增溶剂、其他具有等渗调节作用的等渗调节剂和其他注射用溶剂在本发明中应用。

本发明的制备方法包括以下内容：

将处方量的增溶剂、吡咯并苯并恶嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐和其他可溶性辅料按照顺序分别溶于注射用溶剂中，经脱色、过滤、灭菌得注射液。

附图说明

图1是本发明化合物对小鼠尾出血时间的影响。

具体实施方式

实施例1：化合物1的合成

反应瓶中加入二甲基2-（2-（4-甲氧基苯基）-2-氧乙基亚乙基）丙二酸二甲酯（0.25mmoL）、（Z）-甲基2-（2-氧代-2H-苯并[b] [1,4]恶嗪-3（4H）-亚甲基）乙酸酯（0.3 mmoL）和二氯乙烷（2 mL），搅拌均匀后加入三氯化铁（0.25 mmoL）。反应液80℃搅拌，TLC监测反应完全后减压浓缩，残余物柱层析纯化，得到化合物1。经结构确证，所合成化合物的¹H-NMR和¹³C-NMR数据与文献（FeCl3-Mediated Domino Reaction of Benzoxazinones withAroylmethylidene Malonates: Synthesis to Functionalized Pyrrolobenzoxazines（J. Org. Chem. 2017, 82, 13617−13625））一致。

实施例2：化合物2的合成

反应瓶中加入2-甲基-2-（2-氧代-2-（噻吩-2-基）亚乙基）丙二酸二甲酯（0.25 mmoL）、（Z）-甲基2-（2-氧代-2H-苯并[b] [1,4]恶嗪-3（4H）-亚甲基）乙酸酯（0.3 mmoL）和二氯乙烷（2 mL），搅拌均匀后加入三氯化铁（0.25 mmoL）。反应液80℃搅拌，TLC监测反应完全后减压浓缩，残余物柱层析纯化，得到化合物2。经结构确证，所合成化合物的¹H-NMR和¹³C-NMR数据与文献（FeCl3-Mediated Domino Reaction of Benzoxazinones withAroylmethylidene Malonates: Synthesis to Functionalized Pyrrolobenzoxazines（J. Org. Chem. 2017, 82, 13617−13625））一致。

实施例3：化合物3的合成

反应瓶中加入2-（2-氧代-2-苯基亚乙基）丙二酸二甲酯（0.25 mmoL）、（（Z）-3-（2-甲氧基-2-氧代亚乙基）-2-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b] [1,4]恶嗪-6-羧酸甲酯（0.3 mmoL）和二氯乙烷（2 mL），搅拌均匀后加入三氯化铁（0.25 mmoL）。反应液80℃搅拌，TLC监测反应完全后减压浓缩，残余物柱层析纯化，得到化合物3。经结构确证，所合成化合物的¹H-NMR和¹³C-NMR数据与文献（FeCl3-Mediated Domino Reaction of Benzoxazinones withAroylmethylidene Malonates: Synthesis to Functionalized Pyrrolobenzoxazines（J. Org. Chem. 2017, 82, 13617−13625））一致。

实施例4：制备200支化合物1注射液（规格5 mL：50 mg）

一、处方

化合物1 10 g、吐温80 200 g、氯化钠1.25 g、注射用水加至1000 mL。

二、制备工艺

将处方量的吐温80溶于处方量80%的新鲜注射用水中，加入化合物1室温搅拌10-20min，使其全部溶解。加入处方量的氯化钠，搅拌溶解后加入注射用水至1000 mL。加入0.1%活性炭60℃保温15 min，放冷后经0.22 μm微孔滤膜过滤。滤液灌封为5 mL注射液，121℃灭菌15 min即得。

实施例5：制备200支化合物2注射液（规格5 mL：50 mg）

一、处方

化合物2 10 g、吐温80 200 g、氯化钠1.25 g、注射用水加至1000 mL。

二、工艺步骤

将处方量的吐温80溶于处方量80%的新鲜注射用水中，加入化合物2室温搅拌10-20min，使其全部溶解。加入处方量的氯化钠，搅拌溶解后加入注射用水至1000 mL。加入0.1%活性炭60℃保温15 min，放冷后经0.22 μm微孔滤膜过滤。滤液灌封为5 mL注射液，121℃灭菌15 min即得。

实施例6：制备200支化合物1注射液（规格10 mL：80 mg）

一、处方

化合物1 16 g、吐温80 400 g、葡萄糖13.9 g、注射用水加至2000 mL。

二、工艺步骤

将处方量的吐温80溶于处方量80%的新鲜注射用水中，加入化合物1室温搅拌10-20min，使其全部溶解。加入处方量的葡萄糖，搅拌溶解后加入注射用水至2000 mL。加入0.1%活性炭60℃保温15 min，放冷后经0.22 μm微孔滤膜过滤。滤液灌封为10 mL注射液，121℃灭菌15 min即得。

实施例7：制备200支化合物2注射液（规格10 mL：80 mg）

一、处方

化合物2 16 g、吐温80 400 g、葡萄糖13.9 g、注射用水加至2000 mL。

二、工艺步骤

将处方量的吐温80溶于处方量80%的新鲜注射用水中，加入化合物2室温搅拌10-20min，使其全部溶解。加入处方量的葡萄糖，搅拌溶解后加入注射用水至2000 mL。加入0.1%活性炭60℃保温15 min，放冷后经0.22 μm微孔滤膜过滤。滤液灌封为10 mL注射液，121℃灭菌15 min即得。

实施例8：制备200支化合物1注射液（规格5 mL：100 mg）

一、处方

化合物1 20 g、吐温80 400 g、注射用水加至1000 mL。

二、工艺步骤

将处方量的吐温80溶于处方量80%的新鲜注射用水中，加入化合物1室温搅拌10-20min，搅拌溶解后加入注射用水至1000 mL。加入0.1%活性炭60℃保温15 min，放冷后经0.22μm微孔滤膜过滤。滤液灌封为5 mL注射液，121℃灭菌15 min即得。

实施例9：制备200支化合物2注射液（规格5 mL：100 mg）

一、处方

化合物2 20 g、吐温80 400 g、注射用水加至1000 mL。

二、工艺步骤

将处方量的吐温80溶于处方量80%的新鲜注射用水中，加入化合物2室温搅拌10-20min，搅拌溶解后加入注射用水至1000 mL。加入0.1%活性炭60℃保温15 min，放冷后经0.22μm微孔滤膜过滤。滤液灌封为5 mL注射液，121℃灭菌15 min即得。

实施例10：制备200支阳参氯吡格雷注射液（规格5 mL：100 mg）

一、处方

氯吡格雷20 g、吐温80 400 g、注射用水加至1000 mL。

二、制备工艺

将处方量的吐温80溶于处方量80%的新鲜注射用水中，加入氯吡格雷室温搅拌10-20min，搅拌溶解后加入注射用水至1000 mL。加入0.1%活性炭60℃保温15 min，放冷后经0.22μm微孔滤膜过滤。滤液灌封为5 mL注射液，121℃灭菌15 min即得。

试验例1：化合物1-3对体外血小板聚集的影响

血小板可通过胶原、腺苷二磷酸、凝血酶等途径发生聚集，导致血凝。因此，研究不同途径的血小板聚集对研究药物抗血小板聚集的机制具有重要的意义。

大鼠颈动脉取血，按照常规方法制备富血小板血浆（PRP）和贫血小板血浆（PPP），并以PPP调PRP中血小板数为4.0-6.0×10⁸个/mL，参照Born氏法取PRP 200 μL，分别加入化合物1、化合物2、化合物3和阿司匹林（终浓度均为100 μmol/L），置于智能血小板聚集仪上，37℃预温5 min后，分别加入四种诱聚剂：胶原（终浓度为50 μl/mL）、腺苷二磷酸（终浓度为5 μmol/L）、凝血酶（终浓度为1 U/mL）、花生四烯酸（终浓度为0.5 mmol/L），测定在诱聚剂加入5 min后的血小板聚集率。结果见下表1。

表1 化合物1-3对不同诱聚剂诱导的大鼠血小板聚集率

	胶原诱导（%）	腺苷二磷酸诱导（%）	凝血酶诱导（%）	花生四烯酸诱导（%）
					化合物1	39.5±3.3	23.4±2.1	50.0±5.7	70.3±7.2
化合物2	42.8±3.7	29.2±3.4	52.7±6.0	77.6±8.0
					化合物3	78.1±4.4	65.7±3.8	75.9±6.7	74.5±7.0
阿司匹林	40.9±8.0	71.2±7.7	52.9±6.6	0±0

试验结果表明，化合物1和化合物2对胶原、腺苷二磷酸、凝血酶诱导的血小板聚集均有一定的抑制作用，但对花生四烯酸诱导的血小板聚集抑制能力差；化合物1对胶原、腺苷二磷酸、凝血酶诱导的血小板聚集抑制能力好于化合物2。化合物3对四种聚剂诱导的大鼠血小板聚集抑制能力均弱。

试验例2：化合物1-3对小鼠尾出血时间的影响

1、分组及剂量：

将70只雄性小鼠随机分为7组，分别为空白对照组（等量生理盐水）、化合物1组（80 mg/kg、120 mg/kg）、化合物2组（80 mg/kg、120 mg/kg）、阳参氯吡格雷组（80 mg/kg、120 mg/kg）。

2、实验方法：

灌胃给药、每天1次，连续3天，于末次给药后1.5 h，将小鼠固定，尾垂直、距尾尖1.5 mm处剪断尾部后，将尾部置入37℃生理盐水中，记录每组每只鼠出血时间：即剪断尾尖开始至血停止流出为止。出血时间超过10 min者以10 min计算。

试验结果如图1所示。化合物1与化合物2均能延长实验鼠断尾的出血时间。在80mg/kg剂量下，化合物1的出血时间>氯吡格雷>化合物2；在120 mg/kg剂量下，化合物1的出血时间最长。化合物1的80 mg/kg与120 mg/kg剂量相比较，高剂量出血时间更长。

试验例3：实施例8、实施例9与实施例10注射剂对大鼠右颈动-静脉旁路血栓形成实验

1、实验药品：

生理盐水、实施例8注射液、实施例9注射液、实施例10阳参氯吡格雷注射液。

2、分组及剂量：

Wistar大鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，每组10只。空白对照组（等量生理盐水），实施例8注射液组（120 mg/kg），实施例9注射液组（120 mg/kg），实施例10阳参氯吡格雷注射液（120 mg/kg）。

3、实验方法：

各组动物按上述剂量腹腔给药，空白对照组给予等量生理盐水，每日1次，连续5 d，于末次给药后30 min以水合氯醛(350 mg/kg)麻醉，仰卧位固定，分离气管，***一塑料套管，并分离出右颈动脉及左颈外静脉。在聚乙烯管中段放入一根长6 cm已称重丝线。以肝素(50U/mL)充满聚乙烯管。管的一端***左颈静脉，另一端注入肝素(50 U/kg)抗凝，***右颈动脉。打开动脉夹，血液由右颈动脉流经聚乙烯管返回左颈静脉。开放血流15 min，中断血流，迅速取出丝线称重，总重减线重即得血栓湿重。测定结果见表3。

表3 对大鼠动-静脉旁路血栓形成的影响

分组	血栓湿重（mg）
		空白对照组	55.19±4.02
实施例8组	29.86±3.05
		实施例9组	44.27±3.22
实施例10（阳参氯吡格雷）组	38.01±3.37

实验结果显示，与空白对照组相比，实施例8、实施例9均能降低血栓湿重。与阳参氯吡格雷相比，实施例8抑制血栓形成的能力更强。

Claims

1.吡咯并苯并恶嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐，其化学结构式为：

；

。

2.如权利要求1所述的吡咯并苯并恶嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐作为抗血栓的应用。

3.如权利要求1所述的吡咯并苯并恶嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐作为抗血栓的应用，尤其是针对血小板聚集。

4.如权利要求1所述的的注射剂，含有吡咯并苯并恶嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐的活性成分、增溶剂、等渗调节剂、注射用溶剂。

5.如权利要求4所述的注射剂，其特征是所述吡咯并苯并恶嗪酮类化合物或其药学上可接受的盐的处方配比为1-20份。

6.如权利要求4所述的注射剂，其特征是所述增溶剂选自吐温80、吐温40、聚氧乙烯蓖麻油、脱氧胆酸钠中的一种或几种，所述增溶剂处方配比为40-500份。

7.如权利要求4所述的注射剂，其特征是所述等渗调节剂选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇、乳糖、木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、甘油中的一种或几种，所述等渗调节剂处方配比为1-100份。

8.如权利要求4所述的注射剂，其特征是所述注射用溶剂选自水、乙醇、甘油、聚乙二醇300、聚乙二醇400中的一种或几种，所述的注射用溶剂处方配比为0-200份。